JP2017501746A5 - - Google Patents

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Claims (26)

  1. 組換え毒素の生物活性を増加させる方法において、
    (ii)プロ領域、又はそのフラグメント若しくは変異体に結合する(i)毒素配列、又はそのフラグメント若しくは変異体を含む核酸構造体を提供する工程含む、組換え毒素の生物活性を増加させる方法。
  2. 組換え毒素を発現する工程を更に含む、請求項1に記載の方法。
  3. (i)プロ領域、又はそのフラグメント若しくは変異体と、
    (ii)毒素遺伝子配列、又はそのフラグメント若しくは変異体が挿入されており、プロ領域に隣接する部位と、
    を含む核酸構造体。
  4. プロ領域に隣接する部位に挿入された毒素遺伝子配列、又はそのフラグメント若しくは変異体を更に含む、請求項に記載の核酸構造体。
  5. 毒素は、節足動物の毒素である、請求項1又は請求項2に記載の方法。
  6. 毒素は、ω−ACTX−Hv1a、又はそのフラグメント若しくは変異体である、請求項1、2、及び5の何れかに記載の方法
  7. 毒素は、δ−アマウロビトキシン−Pl1a、又はそのフラグメント若しくは変異体である、請求項1、2、及び5の何れかに記載の方法
  8. プロ領域は、シグナルペプチド配列と成熟タンパク質N−末端の間の配列である、請求項1、2、5乃至7の何れかに記載の方法。
  9. ロ領域は、
    その正常な供給源から単離されたタンパク質に関して測定された配列を、それをコード化する遺伝子による予想された配列と比較する工程と、
    最終タンパク質生成物には存在しないN−末端配列を同定する工程と、
    最終タンパク質生成物には存在しないN−末端配列中のシグナルペプチド配列を同定する工程と、
    グナルペプチド配列と成熟タンパク質N−末端の間のプロ領域配列を同定する工程と、
    により同定される請求項に記載の方法
  10. プロ領域配列を同定する工程は、最終タンパク質生成物には存在しないN−末端配列からのシグナルペプチド配列の除去によって、シグナルペプチド配列と成熟タンパク質N−末端の間のプロ領域配列を同定する工程を含む、請求項に記載の方法
  11. プロ領域は、天然起源の配列中の毒素と関連する、請求項1、2、5、6、8乃至10の何れかに記載の方法
  12. プロ領域は、天然起源の配列中の毒素と関連しない、請求項1、2、5乃至10の何れかに記載の方法
  13. プロ領域は、アミノ酸配列EDTRADLQGGEAAEKVFRR、又はそのフラグメント若しくは変異体を含む請求項1、2、5乃至12の何れかに記載の方法
  14. プロ領域は、アミノ酸配列ISYEEGKELFQKER、又はそのフラグメント若しくは変異体を含む、請求項1、2、5乃至12の何れかに記載の方法
  15. 核酸構造体は、キャリアタンパク質の配列、又はそのフラグメント若しくは変異体を更に含む請求項1、2、5乃至14の何れかに記載の方法
  16. キャリアタンパク質は、スノードロップレクチン(GNA)、ニンニクレクチン(Allium sativum)、マメレクチン(Pisum sativum)(P−lec)、ピーナッツレクチン(Arachis hypogaea)、サヤインゲンレクチン(PHA、フィトヘマグルチニン)、又はそのフラグメント若しくは変異体から選択される植物レクチンである、請求項15に記載の方法
  17. 核酸構造体は、キャリアタンパク質の配列、又はそのフラグメント若しくは変異体を更に含む、請求項3又は請求項4に記載の核酸構造体。
  18. キャリアタンパク質は、スノードロップレクチン(GNA)、ニンニクレクチン(Allium sativum)、マメレクチン(Pisum sativum)(P−lec)、ピーナッツレクチン(Arachis hypogaea)、サヤインゲンレクチン(PHA、フィトヘマグルチニン)、又はそのフラグメント若しくは変異体から選択される植物レクチンである、請求項17に記載の核酸構造体。
  19. 核酸構造体は発現コンストラクトである、請求項17又は請求項18に記載核酸構造体
  20. 核酸構造体は、親和性タグをコード化する配列を更に含む、請求項3、4,17乃至19の何れかに記載核酸構造体
  21. 請求項1、2、5乃至16の何れかに記載の方法の1つに従って生成された毒素タンパク質を含む農薬組成物。
  22. 組成物は、毒素タンパク質を、0.001重量%と99重量%の間、好ましくは0.5重量%と98重量%の間、より好ましくは1.0重量%と95重量%の間の量で含む、請求項21に記載の農薬組成物。
  23. 請求項1、2、5乃至16の何れかに記載の方法に従って生成された毒素タンパク質を、1種以上のキャリア、希釈剤、アジュバント、保存剤、分散剤、溶剤、乳化剤と、殺虫に効果のある量で配合することを含む、請求項21又は請求項22に記載の農薬組成物を製造する方法。
  24. 請求項1、2、5乃至16の何れかに記載の方法の1つに従って生成された毒素タンパク質又は請求項21又は請求項22に記載の農薬組成物を、植物又はその成長の座に塗布する工程、或いは、請求項4及び請求項に従属する請求項17乃至20の何れかに記載された核酸構造体を植物に導入する工程とを含む、植物の有害生物感染を予防する又は処置する方法。
  25. 請求項1、2、5乃至16に記載の方法の1つに従って生成された毒素タンパク質、及び/又は、請求項21又は請求項22に記載の農薬組成物を含む、軟体動物駆除餌組成物。
  26. 請求項4及び請求項に従属する請求項17乃至20の何れかに記載の、増加した生物活性を持つ毒素を発現できる核酸構造体を含む、トランスジェニック植物又はその子孫。
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