JP2017171597A - 血小板濃縮製剤の製造方法 - Google Patents
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Abstract
【課題】 多血小板血漿などの血小板濃縮物に含まれている乃至は含まれている可能性のある白血球の有核細胞としての機能を喪失させた血小板濃縮製剤の製造方法を提供すること。【解決手段】 本発明の血小板濃縮製剤の製造方法は、血小板濃縮物に対し、細胞膜破壊処理を施した後、冷凍することによるものである。本発明によれば、血小板濃縮物に含まれている乃至は含まれている可能性のある白血球の有核細胞としての機能を喪失させた、長期保存が可能な血小板濃縮製剤を製造することができる。【選択図】 なし
Description
本発明は、血小板濃縮製剤の製造方法に関する。
多血小板血漿(Platelet Rich Plasma:以下「PRP」と略称する)は、血液中に含まれる3種類の血球(赤血球、白血球、血小板)のうちの血小板のみを高濃度に濃縮させたものであり、細胞の再生を促す種々の成分、例えば、EGF(表皮増殖因子:Epidermal Growth Factor)、PDGF(血小板増殖因子:Platelet−Derived Growth Factor)、VEGF(血管内皮細胞増殖因子:Vascular Endothelial Growth Factor)、IGF(インスリン様成長因子:Insulin−like Growth Factor)、FGF(線維芽細胞増殖因子:Fibroblast Growth Factor)、HGF(肝細胞増殖因子:Hepatocyte Growth Factor)、TGF(トランスフォーミング増殖因子:Transforming Growth Factor)などの増殖因子などが含まれていることから、骨、血管、皮膚などの再生促進機能を有することが知られており、難治性皮膚潰瘍などの治療に用いられている。PRPの調製は、例えばPRPを適用する患者から採血した血液を遠心分離することで行われているが(特許文献1)、こうした方法で調製されるPRPには、血小板と分離しきれなかった白血球が含まれている場合がある。しかしながら、PRPに白血球が含まれていても、その数はわずかであるので、PRPに含まれている白血球の有核細胞としての機能を喪失させるための措置は行われていない。
そこで本発明は、PRPなどの血小板濃縮物に含まれている乃至は含まれている可能性のある白血球の有核細胞としての機能を喪失させた血小板濃縮製剤の製造方法を提供することを目的とする。
上記の点に鑑みてなされた本発明の血小板濃縮製剤の製造方法は、請求項1記載の通り、血小板濃縮物に対し、細胞膜破壊処理を施した後、冷凍することによるものである。
本発明によれば、PRPなどの血小板濃縮物に対して細胞膜破壊処理を施した後、冷凍することで、血小板濃縮物に含まれている乃至は含まれている可能性のある白血球の有核細胞としての機能を喪失させた、長期保存が可能な血小板濃縮製剤を製造することができる。
本発明の血小板濃縮製剤の製造方法は、血小板濃縮物に対し、細胞膜破壊処理を施した後、冷凍することによるものである。
本発明において、血小板濃縮製剤の原料となる血小板濃縮物としては、例えばPRPが挙げられる。PRPは、例えば、PRPを適用する患者から採血した血液を、採血に用いたシリンジのままやシリンジからスピッツや真空採血管に移し替えて遠心分離することによって調製することができる。遠心分離の条件は公知の条件を採用することができる。また、血小板濃縮製剤の原料となる血小板濃縮物は、iPS細胞やES細胞などの幹細胞由来の血小板を、その取得態様に応じて濃縮したものであってもよい。
血小板濃縮物に対する細胞膜破壊処理としては、超音波破砕による方法や界面活性剤添加による方法などが例示される。血小板濃縮物に対して細胞膜破壊処理を施すことによって白血球の細胞膜を破壊し、白血球の有核細胞としての機能を喪失させることで、機能の発現による不測の事態が起こらないように徹底することが本発明の目的である。超音波破砕による方法は、超音波破砕機や超音波洗浄機などを用いて行うことができる。例えば、超音波破砕機を用いてPRPに対して細胞膜破壊処理を施す場合、調製したPRP(遠心分離機にかけた容器内で分離したPRP)を、シリンジで抜き取ってスピッツや真空採血管に移し替え、氷冷下、連続的または間欠的に、10秒間〜5分間行えばよい。超音波洗浄機を用いる場合、室温下、1分間〜30分間行えばよい。なお、血小板濃縮物に対して細胞膜破壊処理を施すと、血小板の細胞膜も破壊されるが、血小板の細胞膜が破壊されても、血小板に含まれる各種の成分の量などが低下するといったことはない。
細胞膜破壊処理を施した血小板濃縮物は、冷凍することで長期保存が可能となる。細胞膜破壊処理を施した血小板濃縮物の冷凍は、例えば、血小板濃縮物に対して細胞膜破壊処理を施した容器のまま、あるいは、容器内から細胞膜破壊処理を施した血小板濃縮物を抜き取ったシリンジの先端をルアーキャップなどで密封し、−18℃〜−196℃で行えばよい。こうして冷凍された本発明の血小板濃縮製剤は、例えば自然解凍してから患者に適用することができる。
以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定して解釈されるものではない。
実施例1:
抗凝固剤として600μlのクエン酸ナトリウム液(扶桑薬品工業株式会社)を20mlのシリンジ(テルモ株式会社)に分取し、3名の健常者から12mlの採血を行った。それぞれの血液10mlを真空採血管(日本ベクトン・ディッキンソン)に移し、2回遠心分離法を実施して(1回目:200Gで15分間、2回目:1200Gで15分間)、0.5mlのPRPを調製した。調製されたそれぞれのPRP0.4mlに対し、超音波破砕機(東京超音波技研株式会社)を用いて20分間の超音波破砕を行った。超音波破砕の条件は、150W出力、氷冷下、15秒照射と20秒停止のサイクルを7回とした。超音波破砕を行ったPRPに白血球が含まれるかどうかを検査会社に依頼して調べたところ、3名のPRPすべてにおいて、超音波破砕を行う前に認められた白血球の存在が超音波破砕を行った後は認められなかった。また、超音波破砕を行ったPRPを−20℃で冷凍し、7日後、自然解凍し、血小板に含まれている増殖因子の含有量をR&D System社のELISAキットを用いて調べたところ、EGF:1800〜4000pg/ml、PDGF:16300〜24000pg/ml、VEGF:600〜2600pg/ml、IGF:10〜50pg/ml、FGF:200〜400pg/ml、HGF:700〜900pg/ml、TGF:2400〜6000pg/mlであって、超音波破砕を行う前の含有量とほぼ同じであり、PRPに対して超音波破砕を行ったこととその後に冷凍したことによる増殖因子の含有量の低下は認められなかった。
抗凝固剤として600μlのクエン酸ナトリウム液(扶桑薬品工業株式会社)を20mlのシリンジ(テルモ株式会社)に分取し、3名の健常者から12mlの採血を行った。それぞれの血液10mlを真空採血管(日本ベクトン・ディッキンソン)に移し、2回遠心分離法を実施して(1回目:200Gで15分間、2回目:1200Gで15分間)、0.5mlのPRPを調製した。調製されたそれぞれのPRP0.4mlに対し、超音波破砕機(東京超音波技研株式会社)を用いて20分間の超音波破砕を行った。超音波破砕の条件は、150W出力、氷冷下、15秒照射と20秒停止のサイクルを7回とした。超音波破砕を行ったPRPに白血球が含まれるかどうかを検査会社に依頼して調べたところ、3名のPRPすべてにおいて、超音波破砕を行う前に認められた白血球の存在が超音波破砕を行った後は認められなかった。また、超音波破砕を行ったPRPを−20℃で冷凍し、7日後、自然解凍し、血小板に含まれている増殖因子の含有量をR&D System社のELISAキットを用いて調べたところ、EGF:1800〜4000pg/ml、PDGF:16300〜24000pg/ml、VEGF:600〜2600pg/ml、IGF:10〜50pg/ml、FGF:200〜400pg/ml、HGF:700〜900pg/ml、TGF:2400〜6000pg/mlであって、超音波破砕を行う前の含有量とほぼ同じであり、PRPに対して超音波破砕を行ったこととその後に冷凍したことによる増殖因子の含有量の低下は認められなかった。
本発明は、PRPなどの血小板濃縮物に含まれている乃至は含まれている可能性のある白血球の有核細胞としての機能を喪失させた血小板濃縮製剤の製造方法を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。
Claims (1)
- 血小板濃縮物に対し、細胞膜破壊処理を施した後、冷凍することによる血小板濃縮製剤の製造方法。
Priority Applications (1)
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---|---|---|---|
JP2016057725A JP2017171597A (ja) | 2016-03-22 | 2016-03-22 | 血小板濃縮製剤の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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JP2016057725A JP2017171597A (ja) | 2016-03-22 | 2016-03-22 | 血小板濃縮製剤の製造方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017171597A true JP2017171597A (ja) | 2017-09-28 |
Family
ID=59970279
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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JP2016057725A Pending JP2017171597A (ja) | 2016-03-22 | 2016-03-22 | 血小板濃縮製剤の製造方法 |
Country Status (1)
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JP (1) | JP2017171597A (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP7025070B1 (ja) | 2021-05-14 | 2022-02-24 | セルソース株式会社 | 血液由来成長因子含有組成物及びその調製方法 |
JP7175055B1 (ja) * | 2021-05-14 | 2022-11-18 | セルソース株式会社 | 血液由来成長因子含有組成物及びその調製方法 |
WO2023079655A1 (ja) * | 2021-11-04 | 2023-05-11 | 株式会社リバティソリューション | エクソソーム抽出方法 |
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2016
- 2016-03-22 JP JP2016057725A patent/JP2017171597A/ja active Pending
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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JP7025070B1 (ja) | 2021-05-14 | 2022-02-24 | セルソース株式会社 | 血液由来成長因子含有組成物及びその調製方法 |
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