JP2017171596A - 多血小板血漿の調製方法 - Google Patents

Abstract

【課題】 患者から採血した血液を１０℃未満の冷蔵条件で長時間保存してからでも、回収される血小板数の低下がないか低下があってもわずかである多血小板血漿の調製方法を提供すること。【解決手段】 本発明の多血小板血漿の調製方法は、血小板凝集抑制剤を添加した血液を原料として用いることによるものである。本発明によれば、血液を物品の輸送環境として汎用される冷蔵輸送を利用して長時間輸送してから多血小板血漿を調製しても、回収される血小板数は低下しないか低下してもわずかである。【選択図】 なし

Description

本発明は、多血小板血漿の調製方法に関する。

多血小板血漿（Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｒｉｃｈ Ｐｌａｓｍａ：以下「ＰＲＰ」と略称する）は、血液中に含まれる３種類の血球（赤血球、白血球、血小板）のうちの血小板のみを高濃度に濃縮させたものであり、細胞の再生を促す種々の成分、例えば、ＥＧＦ（表皮増殖因子：Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、ＰＤＧＦ（血小板増殖因子：Ｐｌａｔｅｌｅｔ−Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、ＶＥＧＦ（血管内皮細胞増殖因子：Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、ＩＧＦ（インスリン様成長因子：Ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、ＦＧＦ（線維芽細胞増殖因子：Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、ＨＧＦ（肝細胞増殖因子：Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、ＴＧＦ（トランスフォーミング増殖因子：Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）などの増殖因子などが含まれていることから、骨、血管、皮膚などの再生促進機能を有することが知られており、難治性皮膚潰瘍などの治療に用いられている。ＰＲＰの調製は、例えばＰＲＰを適用する患者から採血した血液を遠心分離することで行われているが（特許文献１）、患者から血液を採血した場所からＰＲＰを調製する場所まで時間をかけて血液を輸送しなければならない場合、輸送の間、血液をいかに保存するかという問題への対処が必要となる。物品の輸送環境は、通常、氷点下での冷凍、１０℃未満での冷蔵（下限温度は概ね１℃）、室温の３種類に大別されるが、冷凍輸送は血球の細胞膜を破壊してしまうため適切でなく、室温輸送は赤血球の比重の変化を招いて遠心分離による血漿成分との分離を困難にするため適切でないことから、選択肢は冷蔵輸送に絞られる。しかしながら、患者から採血した血液を４℃で長時間保存してからＰＲＰを調製すると、回収される血小板数が大きく低下することがわかった。

特開２００６−７８４２８号公報

そこで本発明は、患者から採血した血液を１０℃未満の冷蔵条件で長時間保存してからでも、回収される血小板数の低下がないＰＲＰの調製方法を提供することを目的とする。

上記の点に鑑みてなされた本発明のＰＲＰの調製方法は、請求項１記載の通り、血小板凝集抑制剤を添加した血液を原料として用いることによる。

本発明のＰＲＰの調製方法によれば、患者から採血した血液を１０℃未満の冷蔵条件で長時間保存してからＰＲＰを調製しても、回収される血小板数の低下がないか低下があってもわずかである。

本発明のＰＲＰの調製方法は、血小板凝集抑制剤を添加した血液を原料として用いることによるものである。

本発明において、血液に添加するための血小板凝集抑制剤としては、アルプロスタジル、イブジラスト、ベラプロストナトリウム、アミノフィリンやブクラデシンナトリウムに例示されるｃＡＭＰ増加剤などが挙げられる。血小板凝集抑制剤は、例えば採血に用いるシリンジに予め入れておき、採血することで血液に添加すればよい。血小板凝集抑制剤としてアルプロスタジルを用いる場合には濃度が３０〜３００ｎｇ／ｍｌとなるように、イブジラストを用いる場合には濃度が０．３〜３００ｎｇ／ｍｌとなるように、ベラプロストナトリウムを用いる場合には濃度が１０〜４００ｎｇ／ｍｌとなるように、アミノフィリンを用いる場合には濃度が５〜１０μｇ／ｍｌとなるように、ブクラデシンナトリウムを用いる場合には濃度が５〜５０μｇ／ｍｌとなるように血液に添加すればよい。

血小板凝集抑制剤を添加した血液からＰＲＰを調製する方法は、自体公知の方法であってよく、例えば、血小板凝集抑制剤を添加した血液を、採血に用いたシリンジのままやシリンジからスピッツや真空採血管に移し替えて遠心分離すればよい。容器内で分離したＰＲＰは、シリンジで抜き取り、バイアル瓶に移し替えたり、ＰＲＰを抜き取ったシリンジの先端をルアーキャップなどで密封したりしてから、−１８℃〜−１９６℃で冷凍することで長期保存が可能となる。こうして冷凍された本発明のＰＲＰは、例えば自然解凍してから患者に適用することができる。

本発明によれば、血小板凝集抑制剤を血液に添加しておくことで、血液を１０℃未満の冷蔵条件で７２時間経過してからＰＲＰを調製しても、回収される血小板数の低下がないか低下があってもわずかである。従って、患者から血液を採血した場所からＰＲＰを調製する場所まで例えば３時間以上かけて血液を輸送しなければならないといった場合でも、物品の輸送環境として汎用される冷蔵輸送を利用することができる。

以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定して解釈されるものではない。

実施例１：
抗凝固剤として７００μｌのクエン酸ナトリウム液（扶桑薬品工業株式会社）を３０ｍｌのシリンジ（テルモ株式会社）に分取し、３名の健常者から２８ｍｌの採血を行った。シリンジには、アルプロスタジル（沢井製薬株式会社）を、血液に添加されることで濃度が３３ｎｇ／ｍｌとなるように採血の前に予め入れておいた。それぞれの健常者について、アルプロスタジルを添加した血液３ｍｌを分取した真空採血管（日本ベクトン・ディッキンソン）を４本用意し、４℃で保存した。保存開始時、保存開始から２４、４８、７２時間後に、１本ずつ真空採血管に対して１回遠心分離法（２００Ｇで１５分間）を実施することでＰＲＰを調製し、それぞれのＰＲＰに含まれる血小板数を検査会社に依頼して調べた。保存開始時に調製したＰＲＰに含まれる血小板数を１００とした時の、保存開始から２４、４８、７２時間後に調製したそれぞれのＰＲＰに含まれる血小板数を表１に示す。なお、表１には、アルプロスタジルを血液に添加しないで同様の実験を行った結果をあわせて示す。

表１から明らかなように、アルプロスタジルを血液に添加しなかった場合、いずれの健常者についても、血液を４℃で２４時間保存してからＰＲＰを調製すると、回収される血小板数の顕著な低下が認められた。血小板数の低下の程度は保存時間が長くなっても同じであった。しかしながら、アルプロスタジルを血液に添加した場合、いずれの健常者についても、回収される血小板数の顕著な低下は認められなかった。アルプロスタジルを添加した血液を９℃で２４時間保存してからＰＲＰを調製した場合でも、回収される血小板数の顕著な低下は認められなかった。以上の結果から、アルプロスタジルを血液に添加しておけば、物品の輸送環境として汎用される冷蔵輸送を利用して長時間輸送してからＰＲＰを調製しても、回収される血小板数は低下しないか低下してもわずかであることがわかった。

本発明は、患者から採血した血液を１０℃未満の冷蔵条件で長時間保存してからでも、回収される血小板数の低下がないか低下があってもわずかであるＰＲＰの調製方法を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。

Claims (1)

1. 血小板凝集抑制剤を添加した血液を原料として用いることによる多血小板血漿の調製方法。