JP2017071649A - うっ血性心不全を処置するための方法 - Google Patents
うっ血性心不全を処置するための方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017071649A JP2017071649A JP2017010999A JP2017010999A JP2017071649A JP 2017071649 A JP2017071649 A JP 2017071649A JP 2017010999 A JP2017010999 A JP 2017010999A JP 2017010999 A JP2017010999 A JP 2017010999A JP 2017071649 A JP2017071649 A JP 2017071649A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- neuregulin
- erbb2
- heart failure
- erbb4
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1883—Neuregulins, e.g.. p185erbB2 ligands, glial growth factor, heregulin, ARIA, neu differentiation factor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
- A61P25/32—Alcohol-abuse
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
- A61P25/36—Opioid-abuse
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/02—Antidotes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Addiction (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Oncology (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
Abstract
Description
この研究は一部、NIH助成金HL−38189、HL−36141、およびNASA
awardからのサポートを得て行われた。政府はこの発明に関するある一定の権利を有する。
発明の分野は、うっ血性心不全の治療および予防である。
うっ血性心不全は先進国において主要な死因の1つで、心臓に対する負荷の増大とそのポンプ機能が徐々に低下することに起因して起こる。初めに、高血圧、または収縮性組織の損失に起因して心臓への負荷が増大し、代償性心筋肥大と左心室壁の肥厚が誘発され、それによって収縮性を増大させ心機能を維持している。しかしながら、このような状態が継続すると、左心房が拡張し、収縮期のポンプ機能は低下し、心筋細胞はアポトーシス細胞死へと進み、心筋機能は次第に低下する。
本発明者らはニューレグリンが代償的な肥大型の増殖を刺激し、生理的ストレスにさらされている心筋細胞のアポトーシスを阻害するということを見出した。本発明者らの観察からニューレグリン処置が高血圧、虚血性心疾患、心臓毒性などの根底にある因子に起因するうっ血性心不全の予防、症状の進行抑制、回復に有用であることが示される。
本願発明は、例えば以下を提供する。
(項目1) 哺乳動物におけるうっ血性心不全を処置または予防するための方法であって、該方法が、該哺乳動物に対して、上皮増殖因子様(EGF様)ドメインを含むポリペプトイドを投与する工程を包含し、ここで、該EGF様ドメインが、ニューレグリン遺伝子によってコードされ、ここで、該投与工程が、該哺乳動物における心不全を処置または予防するのに有効量である、方法。
(項目2) 項目1に記載の方法であって、ここで、前記ニューレグリン遺伝子が、NRG−1遺伝子である、方法。
(項目3) 項目2に記載の方法であって、ここで、前記ポリペプチドが、NRG−1遺伝子によってコードされる、方法。
(項目4) 項目3に記載の方法であって、ここで、前記ポリペプチドが、組換えヒトGGF2である、方法。
(項目5) 項目1に記載の方法であって、ここで、前記ニューレグリン遺伝子が、NRG−2遺伝子である、方法。
(項目6) 項目5に記載の方法であって、ここで、前記ポリペプチドが、NRG−2遺伝子によってコードされる、方法。
(項目7) 項目1に記載の方法であって、ここで、前記ニューレグリン遺伝子が、NRG−3遺伝子である、方法。
(項目8) 項目7に記載の方法であって、ここで、前記ポリペプチドが、NRG−3遺伝子によってコードされる、方法。
(項目9) 項目1に記載の方法であって、ここで、前記哺乳動物が、ヒトである、方法。
(項目10) 項目1に記載の方法であって、ここで、前記うっ血性心不全が、高血圧;虚血性心臓疾患;心臓毒性化合物への曝露;心筋炎;甲状腺疾患;ウイルス感染;歯肉炎;薬物濫用;アルコール濫用;心膜炎;アテローム硬化;血管性疾患;肥大型心筋症;急性心筋梗塞;左心室収縮機能不全;冠動脈バイパス手術;飢餓;摂食障害;または遺伝的欠陥から生じる、方法。
(項目11) 項目10に記載の方法であって、ここで、前記哺乳動物が、心筋梗塞を被っている、方法。
(項目12) 項目10に記載の方法であって、ここで、前記心臓毒性化合物が、アントラサイクリン;アルコール;またはコカインである、方法。
(項目13) 項目12に記載の方法であって、ここで、前記アントラサイクリンが、ドキソルビシンまたはダウノマイシンである、方法。
(項目14) 項目13に記載の方法であって、ここで、抗ErbB2抗体または抗HER2抗体が、アントラサイクリンの投与の前、投与の間、または投与の後に前記哺乳動物に投与される、方法。
(項目15) 項目10に記載の方法であって、ここで、前記心臓毒性化合物が、抗ErbB2抗体または抗HER2抗体である、方法。
(項目16) 項目14または15に記載の方法であって、ここで、前記抗ErbB2抗体または抗HER2抗体が、HERCEPTIN(登録商標)である、方法。
(項目17) 項目10に記載の方法であって、ここで、前記ポリペプチドが、前記心臓毒性化合物に曝露される前に投与される、方法。
(項目18) 項目10に記載の方法であって、ここで、前記ポリペプチドが、前記心臓毒性化合物に曝露される間に投与される、方法。
(項目19) 項目10に記載の方法であって、ここで、前記ポリペプチドが、前記心臓毒性化合物に曝露された後に投与される、方法。
(項目20) 項目1に記載の方法であって、ここで、前記ポリペプチドが、前記哺乳動物におけるうっ血性心不全の診断の前に投与される、方法。
(項目21) 項目1に記載の方法であって、ここで、前記ポリペプチドが、前記哺乳動物におけるうっ血性心不全の診断の後に投与される、方法。
(項目22) 項目1に記載の方法であって、ここで、前記ポリペプチドが、代償性心肥大を被る哺乳動物に投与される、方法。
(項目23) 項目1に記載の方法であって、ここで、前記ポリペプチドの投与が、左心室肥大を維持する、方法。
(項目24) 項目1に記載の方法であって、ここで、前記方法が、心筋の薄膜化の進行を妨げる、方法。
(項目25) 項目1に記載の方法であって、ここで、前記ポリペプチドの投与が、心筋細胞アポトーシスを阻害する、方法。
(項目26) 項目1に記載の方法であって、ここで、前記ポリペプチドが、該ポリペプチドをコードする発現ベクターを該哺乳動物に投与する工程によって投与される、方法。
本発明者らは、ニューレグリンが、ErbB2およびErbB4レセプターの活性化を通じて、培養心筋細胞の生存および肥大性増殖を促進することを見いだした。
NRG−1、NRG−2、およびNRG−3遺伝子によってコードされるポリペプチドはEGF様ドメインを有し、これにより、これらはErbBレセプターに結合し、そしてErbBレセプターを活性化することが可能となる。Holmesら(Science 256:1205−1210、1992)は、EGF様ドメインが単独で、p185erbB2レセプターに結合し、そしてこれを活性化するに十分であることを示した。従って、NRG−1、NRG−2、またはNRG−3の遺伝子によってコードされる任意のポリペプチド産物、あるいは任意のニューレグリン様ポリペプチド(例えば、ニューレグリン遺伝子またはcDNAによってコードされるEGF様ドメイン(例えば、米国特許第5,530,109号、米国特許第5,716,930号、および米国特許出願第08/461,097号に記載されるようなNRG−1ペプチドサブドメインC−C/DまたはC−C/D’を含むEGF様ドメイン;またはWO 97/09425に開示のようなEGF様ドメイン)を有するポリペプチド)が、本発明において、うっ血性心不全の予防または処置のために使用され得る。
個体のうっ血性心不全を発症する確立を増大させる危険因子は周知である。これには、限定されないが、喫煙、肥満、高血圧、虚血性心疾患、血管疾患、冠状動脈バイパス手術、心筋梗塞、左心室収縮機能不全、心臓毒性化合物(アルコール、コカインのような薬物、ドキソルビシン、およびダウノルビシンのようなアントラサイクリン系抗生物質)に対する曝露、ウイルス感染、心膜炎、心筋炎、歯肉炎、甲状腺疾患、心不全のリスクを高めることが知られている遺伝子欠損(例えば、BachinskiおよびRoberts、Cardiol.Clin.16:603−610、1998;Siuら、Circulation 8:1022−1026、1999;およびArbustiniら、Heart 80:548−558、1998に記載のようなもの)、飢餓、食欲不振および過食症のような摂食障害、心不全の家族歴、および心筋肥大が包含される。
ニューレグリン、およびニューレグリン遺伝子でコードされるEGF様ドメインを含むポリペプチドは、患者または実験動物に、薬学的に受容され得る希釈剤、キャリア、または賦形剤と共に、単位投与形態で投与され得る。従来の薬学実践が、このような組成物を患者または実験動物に投与するための適切な処方または組成物を提供するために使用され得る。静脈内投与が好ましいが、任意の適切な投与経路、例えば、非経口、皮下、筋肉内、頭蓋内、眼窩内、眼、心室内、包内、脊髄内、槽内、腹腔内、鼻腔内、エアーゾル、経口、または局所(例えば、皮膚を透過し得、そして血流に入ることができる処方物を保有する接着性パッチの適用による)投与が使用され得る。治療処方物は、液状の溶液または懸濁液の形態であり得る。経口投与のためには、処方物は錠剤またはカプセル剤の形態であり得る。鼻腔内処方物のためには、散剤、鼻用ドロップ、またはエアーゾルであり得る。上記のいずれの処方物も、持続放出処方物であり得る。
Pharmaceutical Sciences」に見いだされる。非経口投与のための処方物は、例えば、賦形剤、滅菌水、または生理食塩水、ポリエチレングリコールのようなポリアルキレングリコール、植物起源の油、または水素化ナフタレン(napthalene)を含み得る。持続放出性、生体適合性、生分解性のラクチドポリマー、ラクチド/グリコリドコポリマー、またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーを用いて、化合物の放出を制御し得る。本発明の分子を投与するための他の潜在的に有用な非経口送達系は、エチレン−酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透性ポンプ、移植できる灌流系、およびリポソームを包含する。吸入のための処方物は、賦形剤、例えば、ラクトースを含み得、あるいは、例えばポリオキシエチレン−9−ラウリルエーテル、グリココール酸およびデオキシコール酸塩を含む水溶液であり得、あるいは鼻用ドロップの形態、あるいはゲルとして投与するためには油性溶液であり得る。
ニューレグリン、およびニューレグリンEGF様ドメインを含むニューレグリン様ポリペプチドはまた、体細胞遺伝子治療によって投与され得る。ニューレグリン遺伝子治療のための発現ベクター(例えば、プラスミド、人工染色体、またはウイルスベクター、例えば、アデノウイルス、レトロウイルス、ポックスウイルス、またはヘルペスウイルス由来のもの)は、ニューレグリンコード(またはニューレグリン様ポリペプチドコード)DNAを、適切なプロモーターの転写制御下で保有する。プロモーターは、当該分野で公知の任意の非組織特異的プロモーターであり得る(例えば、SV−40またはサイトメガロウイルスプロモーター)。あるいは、プロモーターは、組織特異的プロモーター、例えば、横紋筋特異的、心房または心室の心筋細胞特異的(例えば、Franzら、Cardiovasc.Res.35:560−566、1997に記載のような)、あるいは内皮細胞特異的なプロモーターであり得る。プロモーターは、誘導性プロモーター、例えば、Prenticeら(Cardiovasc.Res.35:567−574、1997)に記載のような虚血誘導性プロモーターであり得る。プロモーターはまた、内在性ニューレグリンプロモーターであり得る。
(心筋細胞および非筋細胞の初代培養物の調製)
新生仔ラット心室筋細胞(NRVM)初代培養物を、以前に記載されたようにして(Springhornら、J.Biol.Chem.267:14360−14365、1992)調製した。筋細胞を選択的に富化するために、解離した細胞を2回、500rpmで5分間遠心分離し、75分間、2回、予備プレーティング(pre−plated)し、そして最後に低密度(0.7〜1×104細胞/cm2)で、7%ウシ胎仔血清(FBS)(Sigma、St.Louis、MO)を補充したダルベッコ改変イーグル(DME)培地(Life Technologies Inc.、Gaithersburg、MD)中にプレーティングした。シトシンアラビノシド(AraC;10μM;Sigma)を、チミジン取込み測定のために用いる培養物以外では、最初の24〜48時間の間に培養物に添加して、非筋細胞の増殖を防いだ。他に指示のない限り、全ての実験は、無血清培地であるDME+ITS(インスリン、トランスフェリン、およびセレン;Sigma)に替えた後、36〜48時間後に行った。この方法を用いて、本発明者らは、自発的収縮の顕微鏡観察によって、そしてモノクローナル抗心臓ミオシン重鎖抗体(抗MHC;Biogenesis、Sandown、NH)を用いた免疫蛍光染色によって評価して、>95%筋細胞を含む初代培養物を慣用的に得た。
ErbBレセプターのC末端の一部をコードするcDNA配列を、以下の合成オリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅した:ErbB2コドン857位から1207位(Bargmannら、Nature 319:226−230、1986)の増幅のためのErbB2A(5’−TGTGCTAGTCAAGAGTCCCAACCAC−3’:センス;配列番号1)およびErbB2B(5’−CCTTCTCTCGGTACTAAGTATTCAG−3’:アンチセンス;配列番号2);ErbB3コドン712位から1085位(Krausら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:9193−9197、1989)の増幅のためのErbB3A(5’−GCTTAAAGTGCTTGGCTCGGGTGTC−3’:センス;配列番号3)およびErbB3B(5’−TCCTACACACTGACACTTTCTCTT−3’:アンチセンス;配列番号4);ErbB4コドン896位から1262位(Plowmanら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:1746−1750、1993)の増幅のためのErbB4A(5’−AATTCACCCATCAGAGTGACGTTTGG−3’:センス;配列番号5)およびErB4B(5’−TCCTGCAGGTAGTCTGGGTGCTG:アンチセンス:配列番号6)。ラット心臓または新たに単離した新生仔ラットおよび成体ラットの心室筋細胞由来のRNA試料(1μg)を逆転写して、第1鎖cDNAを生成した。PCR反応を、およそ50ngの第1鎖cDNAを含む最終容量50μlで、PTC−100TMプログラム式熱コントローラー(Programmable Thermal Controller)(MJ Research,Inc.;Watertown、MA)中で30サイクル行った。各サイクルは、94℃で30秒間、63℃で75秒間、および72℃で120秒間を含んでいた。各反応混合物の30μlのアリコートを1%アガロースゲル中の電気泳動と臭化エチジウム染色によって分析した。PCR産物をTAクローニングベクター(Invitrogen Co.、San Diego、CA)中に直接クローニングし、そして自動DNA配列決定によって確認した。
どのレセプターサブタイプがチロシンリン酸化されるかを分析するために、新生仔および成体の心室の筋細胞を無血清培地中で24から48時間維持し、次いで組換えヒトグリア増殖因子2(rhGGF2)を20ng/ml用いて37℃で5分間処理した。細胞を、氷冷したリン酸緩衝化生理食塩水(PBS)で2回素早くリンスし、1% NP40、50mM Tris−HCl(pH 7.4)、150mM NaCl、1mM エチレングリコール−ビス(β−アミノエチルエーテル)−N,N,N’,N’−四酢酸(EGTA)、1mM エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、0.5% デオキシコール酸ナトリウム、0.1% SDS、1mM オルトバナジウム酸ナトリウム、10mM モリブデン酸ナトリウム、8.8g/L ピロリン酸ナトリウム、4g/L NaFl、1mM フェニルメチルスルホニルフルオリド(PMSF)、10μg/ml アプロチニンおよび20μM ロイペプチンを含んだ冷たい溶解緩衝液に溶解した。溶解産物を12,000×gで4℃で20分間遠心分離し、上清の500μg(新生仔の筋細胞)または2000μg(成体の筋細胞)のアリコートをErbB2またはErbB4(Santa Cruz Biotechnology Inc.,Santa Cruz,CA)に特異的な抗体とともに4℃で一晩インキュベートし、プロテインA−アガロース(Santa Cruz Biotechnology,Inc.)で沈降させた。免疫沈降物を回収し、ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)サンプル緩衝液中で煮沸することにより、遊離させた。サンプルをSDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS−PAGE)によって分画し、ポリビニリデンジフルオリド(PVDF)メンブレン(Biorad Laboratories,Hercules,CA)に転写し、PY20抗ホスホチロシン抗体(Santa Cruz Biotechnology,Inc.)でプローブした。ErbB2の検出については、上清をまた、ビオチン化したRC20抗ホスホチロシン抗体(Upstate Biotechnology,Inc.,Lake Placid,NY)で免疫沈降し、ErbB2(Ab−2;Oncogene Research
Products,Cambridge,MA)に対するモノクローナル抗体でブロットした。
DNA合成の指標として、以前に述べられているように(Berkら、Hypertension 13:305−314,1989)、[3H]チミジンの取り込みを測定した。無血清培地(DME+ITS)で36から48時間インキュベートした後、その細胞を20時間、異なった濃度のrhGGF2(Cambridge NeuroScience Co.,Cambridge,MA)で刺激した。次いで[3H]チミジン(0.7 Ci/mmol;Dupont)を5μCi/mlの濃度でこの培地に加え、その細胞をさらに8時間培養した。細胞をPBSで2回、10% TCAで1回洗浄し、10% TCAを加え、4℃で45分間、タンパク質を沈殿させた。rhGGF2にさらしていない筋細胞の並行培養物を、コントロールと同様の条件下で採取した。沈殿物を95% エタノールで2回洗浄し、0.15N NaOHに再懸濁し、1M HClで飽和させ、次いで、アリコートをシンチレーションカウンターでカウントした。結果を、それぞれの実験でのコントロール細胞の平均cpmに対して正規化した1ディッシュ当りの相対cpmとして表す。抗体をブロックする実験として、rhGGF2またはrhFGF2のどちらかを加える前に、それぞれのニューレグリンレセプター(c−neu Ab−2,Oncogene Research Products;およびErbB3またはErbB4,Santa Cruz Biotechnology)に特異的な抗体(0.5g/ml)とともに細胞を2時間プレインキュベートしたという点を除き、同様の手順を適用した。
核の5−ブロモ−2’−デオキシ−ウリジン(BrdU)の取り込みおよび心筋特異的抗原のミオシン重鎖(MHC)を二重間接免疫蛍光を用いて同時に可視化した。初代NRVM培養物をDME+ITS中で48時間維持し、次いでrhGGF2(40ng/ml)で30時間刺激した。コントロール培養物も同様に、しかし、rhGGF2を除いて調製した。BrdU(10μM)を最後の24時間にわたって加えた。細胞を、pH 2.0の50mMグリシン緩衝液中の70%エタノールの溶液中で−20℃、30分間固定化し、PBS中で再水和し、4N HCl中で20分間インキュベートした。次いで細胞をPBS中で3回洗浄して中和し、1% FBSで15分間インキュベートし、続いてマウスのモノクローナル抗体の抗MHC(1:300;Biogenesis,Sandown,NH)で37℃、60分間処理した。一次抗体を、TRITC結合体化ヤギ抗マウスIgG(1:300,The Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)で検出し、核BrdUの取り込みを、インサイチュ細胞増殖キット(Boehringer Mannheim Co.Indianapolis,IN)からのフルオレセイン結合体化抗BrdU抗体で検出した。カバーグラスをFlu−mount(Fisher Scientific;Pittsburgh,PA)の上に置き、免疫蛍光顕微鏡によって検査した。約500個の筋細胞がそれぞれのカバーグラスにおいてカウントされ、BrdU陽性の筋細胞のパーセンテージを計算した。
細胞の生存率を、3−(4,5−ジメチルチアゾール−2−イル)−2,5−ジフェニルテトラゾリウムブロミド(MTT,Sigma)細胞呼吸アッセイによって決定した。このアッセイは、生細胞のミトコンドリアの活性に依存している(Mosman、J.Immunol.Meth.65:55−63,1983)。無血清培地中で2日後、NRVMの初代培養物を4日間または6日間のいずれかにわたって、異なる濃度のrhGGF2で刺激した。ARVMをACCTT培地中またはACCTT培地+異なった濃度のrhGGF2中で6日間維持した。次いでMTTをこの細胞と3時間、37℃でインキュベートした。ジメチルスルホキシド(DMSO;Sigma)で細胞融解した後、生細胞は、テトラゾリウム環を、570nmで光学密度を読み取ることによって定量され得る暗青色のホルマザン結晶に変化させる。
総細胞RNAをTRIZOL試薬(Life Technologies Inc.,Gaithersburg,MD)を用いて、酸性グアジニウム/チオシアネート−フェノール/クロロホルム抽出法(ChomczynskiおよびSacchi、Anal.Biochem.162:156−159,1987)の改変法によって単離した。RNAをホルムアルデヒドアガロースゲル電気泳動によってサイズ分画し、一晩のキャピラリーブロッティングによって、ナイロンフィルター(Dupont,Boston,MA)に転写し、ランダムプライミング(Life Technologies Inc.)によって[α−32P]dCTPでラベルしたcDNAプローブとハイブリダイズさせた。フィルターをストリンジェント条件下で洗浄し、X線フィルム(Kodak X−Omat AR,Rochester,NY)に曝露した。シグナルの強度を、デンシトメトリー(Ultrascan XL、Pharmacia)によって決定した。次のcDNAプローブを用いた:ラットプレプロ心房性ナトリウム利尿因子(prepro−ANF;心筋細胞の肥大のマーカー)(0.6kbのコード領域)(Seidmanら、Science、225:324−326、1984)およびラット骨格α−アクチン(240bpの3’非翻訳領域)(Shaniら、Nucleic Acids Res.9:579−589,1981)。ラットグリセルアルデヒド−3−リン酸デヒドロゲナーゼ(GADPH;ハウスキーピング遺伝子)cDNAプローブ(240bpのコード領域)(Tsoら、Nucleic Acids Res.13:2485−2502,1985)をローディングおよび転写効率のコントロールとして使用した。
上行大動脈狭窄を、乳離れしたばかりの雄ウィスターラット(体重50〜70g、3〜4週間、Charles River Breeding Laboratories,Wilmington,Massより入手)で以前に記載されたように行った(Schunkertら、Circulation,87:1328−1339,1993;Weinbergら、Circulation,90:1410−1422,1994;Feldmanら、Circ.Res.,73:184−192,1993;Schunkertら、J.Clin.Invest.96:2768−2774,1995;Weinbergら、Circulation,95:1592−1600,1997;Litwinら、Circulation,91:2642−2654;1995)。擬似手術の動物は、年齢が一致したコントロールとして役立った。大動脈狭窄動物および年齢が一致した擬似手術のコントロールを、手術後6および22週間に、65mg/kgの腹腔内ペントバルビタールで麻酔した後に屠殺した(1グループ当りn=20〜29)。このモデルでの血流力学および心エコーの研究は、正常な左心室(LV)腔の大きさおよび収縮指数を伴う代償肥大が結紮の6週間後に存在し、一方、動物は結紮の22週間後までに早期不全を発達させ、この不全は左心室腔の膨大発症、および柏出指数の軽い抑制、ならびに左心室グラム質量当りの圧力増加、の開始によって特徴付けられることを示した。本研究では、以前に記載されたように、屠殺する前にインビボ左心室圧力の測定を行った(Schunkertら、Circulation,87:1328−1339,1993;Weinbergら、Circulation,90:1410−1422,1994;Feldmanら、Circ.Res.,73:184−192,1993;Schunkertら,J.Clin.Invest.96:2768−2774,1995;Weinbergら、Circulation,95:1592−1600,1997;Litwinら、Circulation,91:2642−2654;1995)。また動物を、頻呼吸、腹水および胸水の存在を含む心不全の臨床マーカーについて検査した。体重および左心室の重さの両方を記録した。
動物の部分集合(グループ当りn=10)の中で、心臓を迅速に切除し、大動脈カニューレに付着させた。筋細胞のコラゲナーゼ灌水による解離を以前に記載されたように行った(Kagayaら、Circulation,94:2915−2922,1996;Itoら、J.Clin.Invest.99:125−135,1997;Tajimaら、Circulation,99:127−135,1999)。最終細胞懸濁液中の筋細胞のパーセンテージを評価するために、筋細胞のアリコートを固定し、浸透化し、ブロックした。次いで細胞懸濁液を、筋細胞と内皮細胞との間を区別するために、α−サルコメアアクチンに対する抗体(mAb,Sigma,1:20)およびフォンビルブラント因子に対する抗体(pAb,Sigma,1:200)とともにインキュベートした。テキサスレッド(あるいはオレゴングリーン)結合体とともに二次抗体(ヤギ抗ウサギ、ヤギ抗マウスpAb、Molecular probes、1:400)を検出系として用いた。98%の筋細胞および2%未満の内皮細胞または非染色細胞(線維芽細胞)のフラグメントを慣用的に得た。
全RNAを、TRI Reagent(Sigma)を用いて、コントロールの筋細胞および肥大した筋細胞(それぞれのグループでn=10の心臓)から、ならびに左心室組織(それぞれのグループでn=10の心臓)から単離した。組織および筋細胞のRNAを次のプロトコールに使用した。筋細胞RNAを用い、ノーザンブロットを用いて、GAPDHに対して標準化し、心房性ナトリウム利尿ペプチドのメッセージレベルを評価した(Feldmanら、Circ.Res.73:184−192,1993;Tajimaら、Circulation,99:127−135,1999)。これらの実験を行って、この肥大の分子マーカーを用いて、RNAの筋細胞起源の特異性を確かめた。
左心室組織(1グループ当りn=5の心臓)を、50mmol/L Tris HCl、pH 7.4、1% NP−40、0.1% SDS、0.25% Na−デオキシコール酸塩、150mM NaCl、1mM EDTA、1mM PMSF、1μg/mlアプロチニン、1μg/mlロイペプチン、1μg/mlぺプスタチンおよび1mM Na3PO4を含んだRIPA緩衝液中で迅速にホモジナイズした。タンパク質を、ローリーアッセイキット(Sigma)を用いて定量した。レムリSDSサンプル緩衝液中の50μgのタンパク質を5分間煮沸し、遠心分離した後、10% SDS−PAGEゲルにローディングした。電気泳動の後、タンパク質を100mAで一晩、ニトロセルロースメンブレンに転写した。フィルターを0.05% Tween−20、5%脱脂乳でブロッキングし、次いで、抗ErbB2または抗ErbB4(Santa Cruz Biotechnology、それぞれ1:100、1μg/mlに希釈)とともにインキュベートした。1:2000に希釈したヤギ抗ウサギペルオキシダーゼ結合体化二次抗体とともにインキュベートした後、ブロットを増強化学発光(ECL)検出法(Amersham,Life Science)に供し、その後Kodak MRフィルムに30〜180秒間曝露した。タンパク質レベルを抗β−アクチン(Sigma)を用いて検出されたβ−アクチンのタンパク質レベルに対して標準化した。
左心室組織(n=2コントロールおよび6週間大動脈の狭窄した心臓)の10μm凍結切片をインサイチュハイブリダイゼーションに使用した。アンチセンスRNAプローブおよびセンスRNAプローブを、pBluescript中のcDNAフラグメントから、T7 RNAポリメラ−ゼまたはT3 RNAポリメラ−ゼのいずれかおよびジゴキシゲニン標識のUTP(DIG RNA Labeling Mix、Boehringer Mannheim)を用いて合成した。組織切片を、最初に4%パラホルムアルデヒドで20分間処理し、続いてプロテイナーゼK(10μg/ml)で37℃、30分間消化し、さらに5分間4%パラホルムアルデヒドで固定した。
全ての数値を平均値±SEMで表す。大動脈狭窄症グループ(結紮(banding)してから6週間、22週間)と年齢を合わせた(age−matched)コントロールのグループとの間に見られる差異の統計的な解析を、ANOVA比較によって行った。片側(unpaired)スチューデント検定を用いて、両グループ間で結紮後に同じ年齢での比較を行った。p<0.05のレベルを統計的有意とした。
(心臓におけるニューレグリン受容体の発現)
ラットの心筋においてどのNRG受容体(すなわちErbB2, ErbB3, ErbB4)が発現しているかを決定するために、ラット心臓組織の発生の各段階、および分離したばかりの新生仔および成体の心室筋細胞由来のRNAを、ErbB受容体の可変性C末端に隣接したプライマーを用いてPCRによって逆転写し、そして増幅した。図1Aは心臓発生の間のニューレグリン受容体mRNAレベルの半定量的RT−PCR解析を示す。胎児(E14、E16、E19)、新生仔(Pl)または成体(Ad)のラット心臓、および新生仔ラット心室筋細胞(NRVM)または成体ラット心室筋細胞(ARVM)に由来する総RNAを、cDNAへと逆転写し、受容体アイソフォームに特異的なプライマーを用いて増幅した(方法を参照のこと)。逆転写、PCRによる増幅、およびゲルのローディングの際のコントロールとして、GAPDHを用いた(「M」は、1kbまたは120bpのDNA分子量標準を示す)。RT−PCR産物を、DNA配列決定によって確かめた。
NRVM初代培養物におけるGGF2のDNA合成刺激能を調べるために、二日間無血清培地で維持した筋細胞を、40ng/mlのrhGGF2で30時間続いて処理した。BrdU(図2B)あるいは[3H]チミジン(図3A、3B)いずれかの取り込みを測定することによって、DNA合成をモニタリングした。これらの物質は、各実験が終わる24時間あるいは8時間前に、それぞれ培地に添加した。
似した(図3A)。
発生過程において、機能性の胚性筋細胞数の正味の増加は、筋細胞の増殖能と生存との両方に依存している。それ故に、GGF2が心筋細胞の増殖に加えて生存を促進しうるかどうかを調べることは非常に興味深い。10μMのシトシンアラビノシド(AraC)存在、非存在下、無血清培地で培養したNRVMの初代培養液を4日間、示された濃度のGGF2で処理した。また、MTT細胞呼吸アッセイ(方法を参照のこと)により、代謝活性を有する細胞の相対数を測定した。データはGGFを添加した時を0日とし、三つの培養ディッシュにおいて、筋細胞の平均MTT活性のパーセントで表されている。データは平均±SD(n=3実験;*、コントロールに対してp<0.05)として表されている。本発明者らは、およそ25%の細胞が4日目までに死滅しているのを観察した。これに対し、GGF2の添加により、コントロールに比べてMTT活性が30%上昇した。その効果は0.2ng/mlのEC50を用いたときには濃度依存的であった(図5)。このような生存効果はNRVM初期培養において7日目まで見られた。また、増殖阻害剤であるシトシンアラビノシド(AraC)存在下においても見られた。図5に示すように、GGF2の生存効果はシトシアラビノシドの連続存在下で4日間見られた。このとき、筋細胞の生存能力はコントロールではおよそ70%であったのに対し、50ng/mlのrhGGF2存在下では90%であった。これに対し、筋細胞を欠失した「非筋細胞」リッチな初期単離物の4日目までの生存には重大な効果を示さなかった。
ニューレグリンシグナルが心筋細胞において肥大(増殖)応答を誘導しうるかどうかを調べるために、本発明者らは、新生仔と成体の両方のラットの心室筋細胞初代培養液において、GGFが筋細胞の肥大増殖に誘導に対する効果について調べた。図8Aと8Bは20ng/mlのrhGGF2存在(図8B)および非存在(図8A)下のいずれかで無血清培地で72時間インキュベートしたサブコンフルエントなNRVM初期単離物の顕微鏡写真を示している。その後、細胞を固定し、心臓MHCに対する抗体(赤;TRITC)で染色し、間接免疫蛍光顕微鏡下で観察した。図中のスケールバーは、10μMを表す。20ng/ml(すなわち0.36nM)のrhGGF2存在下、無血清培地で72時間インキュベートした後、新生仔の心筋細胞(NRVM)は、細胞の大きさおよび筋繊維の発達に大きな増加を示した。
(LV肥大および血流力学)
表1に示されるように、左心室(LV)を秤量し、そしてLV/体重比は、年齢を一致させたコントロールと比較して、6週齢および22週齢の大動脈弁狭窄動物において有意に(p<0.05)増加した。インビボLV収縮期圧は、年齢を一致させたコントロールと比較して、6週齢と22週齢の両方の大動脈弁狭窄動物において有意に増加した。インビボLV終端(end)心拡張圧はまた、年齢を一致させたコントロールと比較して、大動脈弁狭窄動物においてより高かった。このモデルにおける先行研究と一致して、1グラムあたりのLV心収縮発生(developed)圧は、年齢を一致させたコントロールと比較して、6週齢大動脈弁狭窄動物で有意に高いが、22週齢の大動脈弁狭窄動物において抑制された。結紮(banding)22週間後、大動脈弁狭窄動物はまた、頬呼吸、小胸水および心嚢貯留液を含む破壊の臨床的マーカーを示した。
(表1。左心室の肥大および血流力学)
RT−PCRを用いることにより、本発明者らは、通常および肥大筋細胞においてならびに、左心室肥大の存在、非存在の成体のオスのラットの心臓由来のLV組織において、ErbB2、ErbB4およびニューレグリンmRNAを検出し得たが、ErbB3 mRNAを検出することがし得なかった。図10Aは6週齢の大動脈狭窄を起こした心臓およびコントロールならびに22週齢の大動脈狭窄を起こした心臓およびコントロールにおけるLV ErbB2およびβ−アクチンmRNAの発現を示す、リボヌクレアーゼプロテクションアッセイの結果を示す。図10Bは6週齢の大動脈狭窄を起こした心臓およびコントロール、ならびに22週齢の大動脈狭窄を起こした心臓およびコントロールにおけるLV ErbB4およびβ−アクチンmRNAの発現を示すリボヌクレアーゼプロテクションアッセイの結果を示す。次いで、大動脈狭窄ラットおよびコントロール由来のLV組織におけるErbB2、ErbB4およびニューレグリンmRNAのレベルの安定した状態のレベル(n=5心臓/1群)は、リボヌクレアーゼプロテクションアッセイ(RPA)により測定され、β−アクチンに対して正規化された。LVニューレグリンmRNAレベルは、6週齢の大動脈狭窄ラットと一致した年齢のコントロールラット由来の組織において有意な差は無かった(0.68±0.12vs0.45±0.12単位、NS)。これは、22週齢の大動脈狭窄ラットと一致した年齢のコントロールラット由来の組織において有意なさは無かった(0.78±0.21vs0.51±0.21単位、NS)。さらに、β−アクチンのレベルに対して正規化したLV ErbB2およびErbB4のmRNAレベルは、6週齢の大動脈狭窄ラットにおいて、コントロールに対して代償的な肥大を伴って保存されていた。これに対し、LV ErbB2(p<0.05)およびErbB4(p<0.01)伝達レベルは、初期不全の段階にある22週齢の大動脈狭窄ラットにおいて顕著に弱められていた(図10および表2)。
相応の年齢のコントロールと比較して、6週および22週齢の大動脈狭窄ラットのLV組織由来のタンパク質サンプルを用いて、ErbB2およびErbB4に対するポリクローナル抗体を用いたウエスタンブロッティングを行った(n=5/群)。図13Aおよび13Bは、6週齢(図13A)の大動脈狭窄心臓およびコントロールおよび22週齢(図13B)の大動脈狭窄心臓およびコントロールにおける、LV ErbB2およびβ−アクチンのタンパク質レベルを示すウェスタンブロットを示す。図13Cおよび13Dは、6週齢(図13A)の大動脈狭窄心臓およびコントロールおよび22週齢(図13B)の大動脈狭窄心臓およびコントロールにおける、LV ErbB4およびβ−アクチンのタンパク質レベルを示すウェスタンブロットを示す。図13A〜13Dおよび表2に示されているように、ErbB2およびErbB4のmRNA発現は、代償性肥大(NS)のステージにある6週齢の大動脈狭窄動物におけるコントロールと比較して保存されている。しかし、ErbB2(p<0.05)およびErbB4(p<0.01)は、初期不全の間に22週齢の大動脈狭窄動物において下方制御される。このように、LVメッセージならびにErbB2およびErbB4のタンパク質レベルの両方の減少が、この圧負荷のモデルにおいて初期不全のステージにおいて現れる。
ディゴキシゲニン標識ニューレグリンのアンチセンスmRNAは、LV凍結切片上に再現性のあるハイブリダイゼーションシグナルを生成した。その一方で、対応するセンス転写物は、バックグラウンドの上にシグナルを示さなかった。成人の心臓の凍結切片におけるニューレグリンシグナルは、心臓の微小血管の上皮細胞において観察され、他の細胞区分においては弱いか、全く観察されなかった。コントロールと大動脈狭窄動物の間には違いは全く存在しなかった。
上記の実施例のデータは、rhGGF2が、ErbB2およびErbB4依存性様式でアポトーシスを抑制し、心筋細胞の肥大を刺激するとことを示す。さらに、ErbB2およびErbB4レセプターは、圧負荷誘導心不全を有するラットの左心室において下方制御される。心筋細胞のアポトーシスは大動脈狭窄マウスにおいて、初期の代償性肥大ステージ(すなわち、大動脈染色から4週間後)の間にはほとんど見られないが、初期心不全への遷移の間には一貫して見られる(すなわち、大動脈染色から7週間後)。
20年以上の間、アントラサイクリン抗体(ダウノルビシンおよびドキソルビシンなど)は、癌の化学的治療の大黒柱であった。しかし、これらの薬物の短期および長期に渡る心臓毒性は、患者に送達され得る個々の用量および累積用量の両方をを制限する。
様々なタイプの癌細胞は、ErbBレセプターの増加した発現、または増加した生物学的活性を示す。これらの膜貫通レセプターチロシンキナーゼは、ニューレグリン(へレグリンとしてもまた公知である)ファミリーに属する増殖因子に結合する。癌細胞におけるErbB2レセプター(HER2およびneuとしても知られる)の発現は、様々な組織由来の癌細胞の増殖における増加と関連している。これらの組織には胸、卵巣、前立腺、結腸、膵臓、唾液腺などが含まれるが、これらに限定されない。
本明細書中に列挙される全ての刊行物および特許出願は、それぞれの独立した刊行物または特許出願が参考として具体的かつ個別に援用されるように示されるような程度と同程度に本明細書中で参考として援用される。
Claims (1)
- 本願明細書に記載された発明。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US09/298,121 | 1999-04-23 | ||
US09/298,121 US6635249B1 (en) | 1999-04-23 | 1999-04-23 | Methods for treating congestive heart failure |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013078262A Division JP6134190B2 (ja) | 1999-04-23 | 2013-04-04 | うっ血性心不全を処置するための方法 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018023316A Division JP2018083850A (ja) | 1999-04-23 | 2018-02-13 | うっ血性心不全を処置するための方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017071649A true JP2017071649A (ja) | 2017-04-13 |
Family
ID=23149139
Family Applications (7)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2000613391A Withdrawn JP2002542270A (ja) | 1999-04-23 | 2000-04-20 | うっ血性心不全を処置するための方法 |
JP2011116364A Pending JP2011157402A (ja) | 1999-04-23 | 2011-05-24 | うっ血性心不全を処置するための方法 |
JP2013078262A Expired - Lifetime JP6134190B2 (ja) | 1999-04-23 | 2013-04-04 | うっ血性心不全を処置するための方法 |
JP2014226670A Pending JP2015034174A (ja) | 1999-04-23 | 2014-11-07 | うっ血性心不全を処置するための方法 |
JP2017010999A Pending JP2017071649A (ja) | 1999-04-23 | 2017-01-25 | うっ血性心不全を処置するための方法 |
JP2018023316A Pending JP2018083850A (ja) | 1999-04-23 | 2018-02-13 | うっ血性心不全を処置するための方法 |
JP2019084077A Pending JP2019142939A (ja) | 1999-04-23 | 2019-04-25 | うっ血性心不全を処置するための方法 |
Family Applications Before (4)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2000613391A Withdrawn JP2002542270A (ja) | 1999-04-23 | 2000-04-20 | うっ血性心不全を処置するための方法 |
JP2011116364A Pending JP2011157402A (ja) | 1999-04-23 | 2011-05-24 | うっ血性心不全を処置するための方法 |
JP2013078262A Expired - Lifetime JP6134190B2 (ja) | 1999-04-23 | 2013-04-04 | うっ血性心不全を処置するための方法 |
JP2014226670A Pending JP2015034174A (ja) | 1999-04-23 | 2014-11-07 | うっ血性心不全を処置するための方法 |
Family Applications After (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018023316A Pending JP2018083850A (ja) | 1999-04-23 | 2018-02-13 | うっ血性心不全を処置するための方法 |
JP2019084077A Pending JP2019142939A (ja) | 1999-04-23 | 2019-04-25 | うっ血性心不全を処置するための方法 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (6) | US6635249B1 (ja) |
EP (3) | EP2319529A1 (ja) |
JP (7) | JP2002542270A (ja) |
KR (1) | KR20020016773A (ja) |
AU (1) | AU777300B2 (ja) |
CA (1) | CA2368357C (ja) |
WO (1) | WO2000064400A2 (ja) |
Families Citing this family (47)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7135456B1 (en) * | 1991-04-10 | 2006-11-14 | Acorda Therapeutics, Inc. | Glial mitogenic factors, their preparation and use |
US7115554B1 (en) * | 1993-05-06 | 2006-10-03 | Acorda Therapeutics, Inc. | Methods of increasing myotube formation or survival or muscle cell mitogenesis differentiation or survival using neuregulin GGF III |
US7037888B1 (en) * | 1992-04-03 | 2006-05-02 | Acorda Therapeutics, Inc. | Methods for treating muscle diseases and disorders |
AUPP785098A0 (en) * | 1998-12-21 | 1999-01-21 | Victor Chang Cardiac Research Institute, The | Treatment of heart disease |
US6635249B1 (en) * | 1999-04-23 | 2003-10-21 | Cenes Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating congestive heart failure |
EP1289553B1 (en) * | 2000-05-23 | 2011-07-13 | CeNeS Pharmaceuticals, Inc. | Nrg-2 nucleic acid molecules, polypeptides, and diagnostic and therapeutic methods |
AU2002217795A1 (en) * | 2000-11-22 | 2002-06-03 | Gwathmey, Inc. | Isolation procedure and optimized media solution to enhance long-term survival of cells |
EP1500402A4 (en) | 2002-04-26 | 2009-12-30 | Takeda Pharmaceutical | INHIBITOR OF CELL DEATH |
WO2003099320A1 (en) * | 2002-05-24 | 2003-12-04 | Zensun (Shanghai) Sci-Tech.Ltd | Neuregulin based methods and compositions for treating viral myocarditis and dilated cardiomyopathy |
US8293710B2 (en) * | 2005-01-03 | 2012-10-23 | Blue Blood Biotech Corp. | Method for treating wounds using an EGF-like domain of thrombomodulin |
CA2658326C (en) * | 2005-09-02 | 2013-04-23 | Morehouse School Of Medicine | Neuregulins for prevention and treatment of damage from acute assault on vascular and neuronal tissue |
US20070213264A1 (en) | 2005-12-02 | 2007-09-13 | Mingdong Zhou | Neuregulin variants and methods of screening and using thereof |
RU2457854C2 (ru) | 2005-12-30 | 2012-08-10 | Цзэньсунь (Шанхай) Сайенс Энд Текнолоджи Лимитед | Длительное высвобождение нейрегулина для улучшения сердечной функции |
AU2013203483B2 (en) * | 2005-12-30 | 2015-11-05 | Zensun (Shanghai) Science & Technology, Co., Ltd. | Extended release of neuregulin for improved cardiac function |
US9580515B2 (en) | 2006-08-21 | 2017-02-28 | Zensun (Shanghai) Science & Technology, Co., Ltd. | Neukinase, a downstream protein of neuregulin |
CN101743474B (zh) * | 2007-05-10 | 2015-06-03 | 阿索尔达治疗公司 | 检测心脏损伤的方法 |
US20090156488A1 (en) * | 2007-09-12 | 2009-06-18 | Zensun (Shanghai) Science & Technology Limited | Use of neuregulin for organ preservation |
US20090291893A1 (en) * | 2008-05-23 | 2009-11-26 | Morehouse School Of Medicine | Compositions for the prevention and treatment of neuroinjury and methods of use thereof |
EP3632459A1 (en) * | 2008-07-17 | 2020-04-08 | Acorda Therapeutics, Inc. | Therapeutic dosing of a neuregulin or a subsequence thereof for treatment or prophylaxis of heart failure |
CN107041949A (zh) | 2008-08-15 | 2017-08-15 | 阿索尔达治疗公司 | 在cns神经性损伤后非‑急性期间处理的组合物及方法 |
WO2010033249A2 (en) | 2008-09-22 | 2010-03-25 | Massachusetts Institute Of Technology | Compositions of and methods using ligand dimers |
WO2010060265A1 (en) | 2008-11-28 | 2010-06-03 | Zensun (Shanghai) Science & Technology Limited | Neuregulin peptides and their use |
WO2010060266A1 (en) * | 2008-11-28 | 2010-06-03 | Zensun (Shanghai) Science & Technology Limited | Neuregulin and cardiac stem cells |
CA2763161A1 (en) * | 2009-05-29 | 2010-12-02 | Xoma Technology Ltd. | Cardiovascular related uses of il-1.beta. antibodies and binding fragments thereof |
WO2010142141A1 (en) | 2009-06-09 | 2010-12-16 | Zensun (Shanghai) Science & Technology Limited | Neuregulin based methods for treating heart failure |
ES2748886T3 (es) | 2009-06-09 | 2020-03-18 | Zensun Shanghai Science & Tech Co Ltd | Métodos basados en Neuregulina para el tratamiento de la insuficiencia cardíaca |
US20120121557A1 (en) * | 2009-07-22 | 2012-05-17 | Children's Medical Center Corporation | Neuregulin induced proliferation of cardiomyocytes |
JP6096262B2 (ja) | 2009-08-25 | 2017-03-15 | ゼンサン (シャンハイ) サイエンス アンド テクノロジー,シーオー.,エルティーディー. | ニューレグリンに基づく心不全の治療方法 |
CN102139095A (zh) | 2010-01-29 | 2011-08-03 | 上海泽生科技开发有限公司 | 神经调节蛋白用于预防、治疗或延迟心脏缺血再灌注损伤的方法和组合物 |
EP2555788B1 (en) * | 2010-03-24 | 2017-10-11 | Massachusetts Institute of Technology | NEUREGULIN DIMER FOR AN ErbB/HER RECEPTOR FOR USE IN REDUCING CARDIOTOXICITY. |
WO2013053076A1 (en) * | 2011-10-10 | 2013-04-18 | Zensun (Shanghai)Science & Technology Limited | Compositions and methods for treating heart failure |
RU2650635C2 (ru) * | 2012-10-08 | 2018-04-16 | Цзэньсунь (Шанхай) Сайенс Энд Текнолоджи, Ко., Лтд. | Композиции и способы лечения сердечной недостаточности у пациентов с диабетом |
WO2014138502A1 (en) * | 2013-03-06 | 2014-09-12 | Acorda Therapeutics, Inc. | Therapeutic dosing of a neuregulin or a fragment thereof for treatment or prophylaxis of heart failure |
BR112015029293A2 (pt) | 2013-05-22 | 2018-04-24 | Zensun Shanghai Science & Tech Ltd | método e kit para prevenir, tratar ou retardar uma doença ou distúrbio cardiovascular em um mamífero |
BR112016013849A2 (pt) | 2014-01-03 | 2017-10-10 | Hoffmann La Roche | conjugados de anticorpos biespecíficos antihapteno/antirreceptores da barreira hematoencefálica, seus usos, e formulação farmacêutica |
CN110946993A (zh) | 2014-01-03 | 2020-04-03 | 上海泽生科技开发股份有限公司 | 纽兰格林制剂的配方 |
MX2016015280A (es) | 2014-06-26 | 2017-03-03 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos anti-bromodesoxiuridina(brdu) y metodos de uso. |
CN105497876B (zh) | 2014-09-24 | 2021-01-15 | 上海泽生科技开发股份有限公司 | 神经调节蛋白用于预防、治疗或延迟心脏室性心律失常的方法和组合物 |
CN111407882A (zh) * | 2014-10-17 | 2020-07-14 | 上海泽生科技开发股份有限公司 | 神经调节蛋白用于预防、治疗或延迟射血分数保留的心力衰竭的方法和组合物 |
US10017574B2 (en) | 2015-05-07 | 2018-07-10 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods, kits and devices for promoting cardiac regeneration |
BR112020020646A2 (pt) | 2018-04-11 | 2021-02-23 | Salubris Biotherapeutics, Inc. | composições de proteína de fusão recombinante de neuregulina-1 (nrg-1) humana e métodos de uso destas |
CN111407881A (zh) | 2019-01-07 | 2020-07-14 | 上海泽生科技开发股份有限公司 | 神经调节蛋白用于预防、治疗或延迟心肌损伤的方法和组合物 |
AR121035A1 (es) | 2019-04-01 | 2022-04-13 | Lilly Co Eli | Compuestos de neuregulina-4 y métodos de uso |
WO2021052277A1 (zh) | 2019-09-16 | 2021-03-25 | 上海泽生科技开发股份有限公司 | 重组人神经调节蛋白衍生物及其用途 |
CN113289002A (zh) | 2020-02-24 | 2021-08-24 | 上海泽生科技开发股份有限公司 | 神经调节蛋白用于预防、治疗或延缓心力衰竭的方法和组合物 |
EP4351722A1 (en) | 2021-06-10 | 2024-04-17 | Amgen Inc. | Engineered nrg-1 variants with improved selectivity toward erbb4 but not against erbb3 |
WO2023178086A1 (en) | 2022-03-15 | 2023-09-21 | Salubris Biotherapeutics, Inc. | Methods of treating fibrosis and arrhythmia with a neuregulin-1 fusion protein |
Family Cites Families (55)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3773919A (en) | 1969-10-23 | 1973-11-20 | Du Pont | Polylactide-drug mixtures |
US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
US4263428A (en) | 1978-03-24 | 1981-04-21 | The Regents Of The University Of California | Bis-anthracycline nucleic acid function inhibitors and improved method for administering the same |
JPS6023084B2 (ja) | 1979-07-11 | 1985-06-05 | 味の素株式会社 | 代用血液 |
ATE12348T1 (de) | 1980-11-10 | 1985-04-15 | Gersonde Klaus Prof Dr | Verfahren zur herstellung von lipid-vesikeln durch ultraschallbehandlung, anwendung des verfahrens und vorrichtung zur durchfuehrung des verfahrens. |
IE52535B1 (en) | 1981-02-16 | 1987-12-09 | Ici Plc | Continuous release pharmaceutical compositions |
US4485045A (en) | 1981-07-06 | 1984-11-27 | Research Corporation | Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes |
US4640835A (en) | 1981-10-30 | 1987-02-03 | Nippon Chemiphar Company, Ltd. | Plasminogen activator derivatives |
JPS58118008A (ja) | 1982-01-06 | 1983-07-13 | Nec Corp | デ−タ処理装置 |
EP0088046B1 (de) | 1982-02-17 | 1987-12-09 | Ciba-Geigy Ag | Lipide in wässriger Phase |
DE3218121A1 (de) | 1982-05-14 | 1983-11-17 | Leskovar, Peter, Dr.-Ing., 8000 München | Arzneimittel zur tumorbehandlung |
EP0102324A3 (de) | 1982-07-29 | 1984-11-07 | Ciba-Geigy Ag | Lipide und Tenside in wässriger Phase |
US4544545A (en) | 1983-06-20 | 1985-10-01 | Trustees University Of Massachusetts | Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting |
HUT35524A (en) | 1983-08-02 | 1985-07-29 | Hoechst Ag | Process for preparing pharmaceutical compositions containing regulatory /regulative/ peptides providing for the retarded release of the active substance |
ATE59966T1 (de) | 1983-09-26 | 1991-02-15 | Ehrenfeld Udo | Mittel und erzeugnis fuer die diagnose und therapie von tumoren sowie zur behandlung von schwaechen der zelligen und humoralen immunabwehr. |
EP0143949B1 (en) | 1983-11-01 | 1988-10-12 | TERUMO KABUSHIKI KAISHA trading as TERUMO CORPORATION | Pharmaceutical composition containing urokinase |
US4496689A (en) | 1983-12-27 | 1985-01-29 | Miles Laboratories, Inc. | Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer |
DE3675588D1 (de) | 1985-06-19 | 1990-12-20 | Ajinomoto Kk | Haemoglobin, das an ein poly(alkenylenoxid) gebunden ist. |
US4791192A (en) | 1986-06-26 | 1988-12-13 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Chemically modified protein with polyethyleneglycol |
WO1989001489A1 (en) | 1987-08-10 | 1989-02-23 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Or | Control of angiogenesis and compositions and methods therefor |
US5530109A (en) | 1991-04-10 | 1996-06-25 | Ludwig Institute For Cancer Research | DNA encoding glial mitogenic factors |
GB9107566D0 (en) | 1991-04-10 | 1991-05-29 | Ludwig Inst Cancer Res | Glial mitogenic factors,their preparation and use |
US5716930A (en) | 1991-04-10 | 1998-02-10 | Ludwig Institute For Cancer Research | Glial growth factors |
US7115554B1 (en) | 1993-05-06 | 2006-10-03 | Acorda Therapeutics, Inc. | Methods of increasing myotube formation or survival or muscle cell mitogenesis differentiation or survival using neuregulin GGF III |
US5367060A (en) | 1991-05-24 | 1994-11-22 | Genentech, Inc. | Structure, production and use of heregulin |
US5834229A (en) | 1991-05-24 | 1998-11-10 | Genentech, Inc. | Nucleic acids vectors and host cells encoding and expressing heregulin 2-α |
IL101943A0 (en) * | 1991-05-24 | 1992-12-30 | Genentech Inc | Structure,production and use of heregulin |
US6087323A (en) | 1992-04-03 | 2000-07-11 | Cambridge Neuroscience, Inc. | Use of neuregulins as modulators of cellular communication |
US7037888B1 (en) | 1992-04-03 | 2006-05-02 | Acorda Therapeutics, Inc. | Methods for treating muscle diseases and disorders |
EP0647449A1 (en) | 1993-06-24 | 1995-04-12 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Sustained-release preparation of anti-endothelin substance |
US5770567A (en) | 1994-11-14 | 1998-06-23 | Genentech, Inc. | Sensory and motor neuron derived factor (SMDF) |
EP0815224B1 (en) | 1995-03-10 | 2004-07-21 | Genentech, Inc. | Receptor activation by gas6 |
US6750196B1 (en) | 1995-03-27 | 2004-06-15 | Acorda Therapeutics | Methods of treating disorders of the eye |
US5721139A (en) | 1995-05-10 | 1998-02-24 | Genentech, Inc. | Isolating and culturing schwann cells |
US5714385A (en) | 1995-05-10 | 1998-02-03 | Genentech, Inc. | Media for culturing schwann cells |
US6033660A (en) | 1995-05-10 | 2000-03-07 | Genentech, Inc. | Method of treating a nervous system injury with cultured schwann cells |
US5919449A (en) * | 1995-05-30 | 1999-07-06 | Diacrin, Inc. | Porcine cardiomyocytes and their use in treatment of insufficient cardiac function |
US5912326A (en) | 1995-09-08 | 1999-06-15 | President And Fellows Of Harvard College | Cerebellum-derived growth factors |
US5968511A (en) | 1996-03-27 | 1999-10-19 | Genentech, Inc. | ErbB3 antibodies |
DE69732711T2 (de) | 1996-07-12 | 2006-03-16 | Genentech, Inc., South San Francisco | Gamma-heregulin |
WO1998002540A1 (en) * | 1996-07-12 | 1998-01-22 | Genentech, Inc. | Chimeric heteromultimer adhesins |
PT931148E (pt) * | 1996-10-16 | 2006-06-30 | Zymogenetics Inc | Homologos do factor de crescimento fibroblastico |
US6593290B1 (en) | 1996-11-01 | 2003-07-15 | Genentech, Inc. | Treatment of inner ear hair cells |
US6156728A (en) | 1996-11-01 | 2000-12-05 | Genentech, Inc. | Treatment of inner ear hair cells |
US6136558A (en) | 1997-02-10 | 2000-10-24 | Genentech, Inc. | Heregulin variants |
DK0970207T3 (da) | 1997-02-10 | 2009-07-13 | Genentech Inc | Heregulin-varianter |
US6162641A (en) | 1997-06-06 | 2000-12-19 | The Regents Of The University Of Michigan | Neuregulin response element and uses therefor |
US6121415A (en) | 1997-07-09 | 2000-09-19 | Genentech, Inc. | ErbB4 receptor-specific neuregolin related ligands and uses therefor |
CA2296704C (en) * | 1997-07-14 | 2010-10-19 | Osiris Therapeutics, Inc. | Cardiac muscle regeneration using mesenchymal stem cells |
JP2001519400A (ja) * | 1997-10-14 | 2001-10-23 | ケンブリッジ ニューロサイエンス インク. | ニューレグリン使用を含む治療法 |
AUPP785098A0 (en) | 1998-12-21 | 1999-01-21 | Victor Chang Cardiac Research Institute, The | Treatment of heart disease |
US6446242B1 (en) | 1999-04-02 | 2002-09-03 | Actel Corporation | Method and apparatus for storing a validation number in a field-programmable gate array |
US6635249B1 (en) | 1999-04-23 | 2003-10-21 | Cenes Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating congestive heart failure |
CA2658326C (en) | 2005-09-02 | 2013-04-23 | Morehouse School Of Medicine | Neuregulins for prevention and treatment of damage from acute assault on vascular and neuronal tissue |
JP2013535507A (ja) | 2010-08-13 | 2013-09-12 | ジョージタウン ユニバーシティ | Ggf2および使用方法 |
-
1999
- 1999-04-23 US US09/298,121 patent/US6635249B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-04-20 CA CA2368357A patent/CA2368357C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-20 JP JP2000613391A patent/JP2002542270A/ja not_active Withdrawn
- 2000-04-20 EP EP10180490A patent/EP2319529A1/en not_active Withdrawn
- 2000-04-20 WO PCT/US2000/010664 patent/WO2000064400A2/en not_active Application Discontinuation
- 2000-04-20 EP EP16156504.9A patent/EP3087997B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-20 KR KR1020017013409A patent/KR20020016773A/ko not_active Application Discontinuation
- 2000-04-20 EP EP00931938A patent/EP1180040A4/en not_active Ceased
- 2000-04-20 AU AU49744/00A patent/AU777300B2/en not_active Expired
-
2003
- 2003-08-22 US US10/646,268 patent/US7662772B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2009
- 2009-12-29 US US12/655,361 patent/US8076283B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-05-24 JP JP2011116364A patent/JP2011157402A/ja active Pending
- 2011-11-09 US US13/292,193 patent/US8394761B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2012
- 2012-10-19 US US13/656,179 patent/US20130040879A1/en not_active Abandoned
-
2013
- 2013-04-04 JP JP2013078262A patent/JP6134190B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2014
- 2014-11-07 JP JP2014226670A patent/JP2015034174A/ja active Pending
-
2015
- 2015-09-03 US US14/844,475 patent/US10232016B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2017
- 2017-01-25 JP JP2017010999A patent/JP2017071649A/ja active Pending
-
2018
- 2018-02-13 JP JP2018023316A patent/JP2018083850A/ja active Pending
-
2019
- 2019-04-25 JP JP2019084077A patent/JP2019142939A/ja active Pending
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
OLIVETTI, G. ET AL.: "APOPTOSIS IN THE FAILING HUMAN HEART", N. ENGL. J. MED., vol. 336, no. 16, JPN6014018862, April 1997 (1997-04-01), pages 1131 - 1141 * |
SHAROV, V.G. ET AL.: "Evidence of Cardiocyte Apoptosis in Myocardium of Dogs with Chronic Heart Failure", AM. J. PATHOL., vol. 148, no. 1, JPN6010025562, January 1996 (1996-01-01), pages 141 - 149 * |
ZHAO, Y. ET AL.: "Neuregulins Promote Survival and Growth of Cardiac Myocytes", J. BIOL. CHEM., vol. 273, no. 17, JPN5002006861, 24 April 1998 (1998-04-24), pages 10261 - 10269, XP002946957, DOI: doi:10.1074/jbc.273.17.10261 * |
相川竜一: "疾患の成立機序 アポトーシスと心不全", 医学のあゆみ, vol. 185, no. 1, JPN6010025565, 4 April 1998 (1998-04-04), JP, pages 45 - 48 * |
西垣和彦 外1名: "心不全の成因 心不全の成因としてのアポトーシス", 医学のあゆみ, vol. 187, no. 10, JPN6010025563, 5 December 1998 (1998-12-05), JP, pages 865 - 869 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2013136638A (ja) | 2013-07-11 |
AU777300B2 (en) | 2004-10-07 |
JP2018083850A (ja) | 2018-05-31 |
AU4974400A (en) | 2000-11-10 |
US20160113998A1 (en) | 2016-04-28 |
WO2000064400A9 (en) | 2002-06-13 |
JP2002542270A (ja) | 2002-12-10 |
EP3087997A1 (en) | 2016-11-02 |
US20120065130A1 (en) | 2012-03-15 |
US6635249B1 (en) | 2003-10-21 |
EP2319529A1 (en) | 2011-05-11 |
JP2019142939A (ja) | 2019-08-29 |
US20070196379A1 (en) | 2007-08-23 |
US10232016B2 (en) | 2019-03-19 |
US8076283B2 (en) | 2011-12-13 |
JP6134190B2 (ja) | 2017-05-24 |
EP1180040A4 (en) | 2005-03-02 |
US7662772B2 (en) | 2010-02-16 |
CA2368357A1 (en) | 2000-11-02 |
US8394761B2 (en) | 2013-03-12 |
KR20020016773A (ko) | 2002-03-06 |
EP3087997B1 (en) | 2018-04-11 |
WO2000064400A3 (en) | 2001-01-04 |
JP2011157402A (ja) | 2011-08-18 |
CA2368357C (en) | 2012-10-16 |
US20130040879A1 (en) | 2013-02-14 |
US20100267618A1 (en) | 2010-10-21 |
JP2015034174A (ja) | 2015-02-19 |
WO2000064400A2 (en) | 2000-11-02 |
EP1180040A2 (en) | 2002-02-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6134190B2 (ja) | うっ血性心不全を処置するための方法 | |
US11235031B2 (en) | Therapeutic dosing of a neuregulin or a subsequence thereof for treatment or prophylaxis of heart failure | |
AU2020204070B2 (en) | Therapeutic dosing of a neuregulin or a fragment thereof for treatment or prophylaxis of heart failure | |
CN102026651B (zh) | 达到所需胶质生长因子2血浆水平的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170125 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170810 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20171109 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180109 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180213 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180223 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180522 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180719 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180823 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20181107 |