ES2575125T3

ES2575125T3 - Métodos basados en Neuregulina para el tratamiento de la insuficiencia cardíaca

Info

Publication number: ES2575125T3
Application number: ES10785654.4T
Authority: ES
Inventors: Mingdong Zhou
Original assignee: Zensun Shanghai Science and Technology Ltd
Current assignee: Zensun Shanghai Science and Technology Ltd
Priority date: 2009-06-09
Filing date: 2010-06-12
Publication date: 2016-06-24
Anticipated expiration: 2030-06-12
Also published as: EP2440236A1; EP2440236A4; EP3087998A1; EP2440236B1; EP3087998B1; WO2010142141A1

Abstract

Proteína neuregulina 1 para su utilización en un método para la prevención, el tratamiento o el retardo de la insuficiencia cardíaca en mamíferos que la necesitan, en donde el método comprende la administración al mamífero que la necesita de dicha proteína neuregulina 1 en una cantidad: a) de aproximadamente 0,3 μg a aproximadamente 2,4 μg/kg/día; b) de aproximadamente 6 UE a aproximadamente 48 UE/kg/día; o c) de aproximadamente 0,04 nmol a aproximadamente 0,34 nmol/kg/día.

Description

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DESCRIPCION

Metodos basados en Neuregulina para el tratamiento de la insuficiencia ca^aca Campo de la invencion

La presente invencion se refiere a metodos para prevenir, tratar o retrasar la insuficiencia cardfaca en un mairnfero utilizando la protema neuregulina. En particular, la presente invencion proporciona el intervalo de administracion de la protema neuregulina para prevenir, tratar o retrasar la insuficiencia cardfaca en el mamnfero.

Antecedentes de la invencion

La insuficiencia cardfaca afecta aproximadamente a cinco millones de estadounidenses, y mas de 550.000 nuevos pacientes son diagnosticados con la enfermedad cada ano. El tratamiento farmacologico actual para la insuficiencia cardfaca esta dirigido principalmente a los inhibidores de la enzima convertidora de la angiotensina (ECA), que son vasodilatadores que hacen que los vasos sangumeos se expandan, disminuyendo la presion arterial y reduciendo la carga de trabajo del corazon. Mientras que el porcentaje de reduccion de la mortalidad ha sido significativo, la reduccion real de la mortalidad con inhibidores de la eCa tiene un promedio de solo el 3% al 4%, y hay varios efectos secundarios potenciales. Otras limitaciones estan asociadas a otras opciones para la prevencion o el tratamiento de la insuficiencia cardfaca. Por ejemplo, el trasplante de corazon es claramente mas costoso e invasivo que el tratamiento farmacologico, y esta limitado ademas por la disponibilidad de corazones de donantes. El uso de dispositivos mecanicos, tales como los marcapasos biventriculares, es igualmente invasivo y costoso. Por lo tanto, ha habido necesidad de nuevos tratamientos dadas las deficiencias de los tratamientos actuales.

Una nueva terapia prometedora conlleva la administracion de neuregulina (en lo sucesivo denominada "NRG") a un paciente que padece o esta en situacion de riesgo de desarrollar insuficiencia cardfaca. Las NRG, una familia de factores de crecimiento similares a EGF, comprende una familia de factores de crecimiento y diferenciacion relacionados estructuralmente que incluyen NRG1, NRG2, NRG3 y NRG4 y sus isoformas, estan involucrados en una variedad de respuestas biologicas: la estimulacion de la diferenciacion de celulas de cancer de mama y la secrecion de protemas de la leche; la induccion de la diferenciacion de celulas de la cresta neural a las celulas de Schwann; la estimulacion de la smtesis de celulas de musculo esqueletico de los receptores de acetilcolina; y, la estimulacion de la supervivencia celular miocardica y la smtesis de ADN. Los estudios in vivo de embriones de ratones homocigoticos dirigidos al gen neuregulina con graves defectos en la formacion de trabeculas ventriculares y el desarrollo de los ganglios de la rafz dorsal indican que la neuregulina es esencial para el corazon y el desarrollo neuronal.

Las NRG se unen a la familia de receptores de EGF, que comprende EGFR, ErbB2, ErbB3 y ErbB4, cada uno de los cuales desempena una funcion importante en varias funciones celulares, incluidas el crecimiento celular, la diferenciacion y la supervivencia. Son receptores de la protema tirosina cinasa, consistentes en un dominio extracelular de union a ligando, dominio transmembrana de cinasa y el dominio citoplasmico de tirosina cinasa. Una vez la NRG se unen al dominio extracelular de ErbB3 o ErbB4, provoca un cambio de configuracion que conduce a la formacion de heterodfmero entre ErbB3, ErbB4 y ErbB2 o la formacion de homodfmero entre el propio ErbB4, lo que da como resultado la fosforilacion de dominio C-terminal del receptor dentro de la membrana celular. El dominio intracelular fosforilado se une entonces a protemas senal adicionales dentro de la celula, activando la via de senalizacion de AKT o ERK aguas abajo correspondiente, y provocando una serie de reacciones celulares, tales como la estimulacion o la depresion de la proliferacion celular, la diferenciacion celular, la apoptosis celular, la migracion celular o la adhesion celular. Entre estos receptores, principalmente ErbB2 y ErbB4 se expresan en el corazon.

Se ha demostrado que los dominios similares a EGF de NRG-1, que oscilan en tamano desde 50 a 64 aminoacidos, son suficientes para unirse a estos receptores y activarlos. Estudios anteriores han demostrado que la neuregulina- 1p (NRG-1p) se puede unir directamente a ErbB3 y ErbB4 con gran afinidad. El receptor huerfano, ErbB2, puede formar heterodfmeros con ErbB3 y ErbB4 con mayor afinidad que con homodfmeros de ErbB3 o ErbB4. La investigacion en desarrollo neural ha indicado que la formacion del sistema nervioso simpatico requiere un sistema de senalizacion intacto de NRG-1p, ErbB2 y ErbB3. La destruccion dirigida de la NRG-1p, ErbB2 o ErbB4 condujo a la letalidad embrionaria debido a defectos de desarrollo cardfaco. Estudios recientes tambien destacaron las funciones de NRG-1p, ErbB2 y ErbB4 en el desarrollo cardiovascular, asf como en el mantenimiento de la funcion normal del corazon adulto. Se ha demostrado que NRG-1p mejora la organizacion del sarcomero en los cardiomiocitos adultos. La administracion de un dominio similar a EGF de NRG-1p recombinada mejora significativamente o protege contra el deterioro en el rendimiento de miocardio en modelos animales distintos de insuficiencia cardfaca. Mas importante aun, NRG-1p prolonga significativamente la supervivencia de animales con insuficiencia cardfaca. Estos efectos hacen a NRG-1p prometedora como compuesto terapeutico o principal de amplio espectro para la insuficiencia cardfaca debido a una serie de enfermedades comunes. Sin embargo, todavfa hay necesidad de mas informacion acerca de la tolerancia y la dosis eficaz de NRG, que puede utilizarse en un entorno clinico para la prevencion, tratamiento o retraso de la insuficiencia cardfaca.

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Compendio de la invencion

La presente invencion se basa en el descubrimiento de que NRG mejora la diferenciacion de las celulas de musculo caMaco y la organizacion de la estructura sarcomerica y del citoesqueleto, asf como la adhesion celular. La presente invencion tambien se basa en el descubrimiento de que NRG mejora significativamente o protege contra el deterioro en el rendimiento del miocardio en distintos modelos animales de insuficiencia cardfaca y prolonga la supervivencia de los animales con insuficiencia caMaca. La neuregulina, el polipeptido de neuregulina, los derivados de neuregulina o los compuestos que imitan las actividades de las neuregulinas, caen dentro del alcance de los metodos de la presente invencion.

En un primer aspecto de la invencion, se proporciona el intervalo de tolerancia de administracion de la protema NRG cuando se usa en mairnferos (p. ej., personas). Dicho intervalo de tolerancia de administracion quiere decir la mayor cantidad de NRG que se puede administrar al maiMfero (p. ej., personas) sin dano. En una realizacion, el intervalo de tolerancia de administracion no excedfa de 2,4 jg/kgMa, p. ej., 2,4 jg/kgMa, 1,2 jg/kgMa, 0,6 jg/kgMa o 0,3 jg/kgMa. En una realizacion, el intervalo de tolerancia de administracion no excedfa de 48 U/kgMa, p. ej., 48 U/kgMa, 24 U/kgMa, 12 U/kgMa o 6 U/kgMa. En otra realizacion, el intervalo de tolerancia de administracion no excedfa de 0,34 nmol/kgMa, p. ej., 0,34 nmol/kgMa, 0,17 nmol/kgMa, 0,08 nmol/kgMa o 0,04 nmol/kgMa.

En un segundo aspecto de la invencion, se proporciona el intervalo de administracion eficaz de protema NRG para prevenir, tratar o retrasar la insuficiencia caMaca en maiMferos (p. ej., personas). Dicho intervalo de administracion eficaz significa la cantidad de NRG que produzca uno o mas efectos beneficiosos cuando se administra al mamnfero (p. ej., a una persona). Los efectos beneficiosos podnan ser la mejora de la funcion caMaca de los pacientes con insuficiencia caMaca, o la prevencion del deterioro de la funcion caMaca de los pacientes con insuficiencia caMaca, o el retraso del deterioro de la funcion caMaca de los pacientes con insuficiencia caMaca. En una realizacion, el intervalo de administracion eficaz es de 0,3 a 2,4 jg/kgMa, p. ej., 2,4 jg/kgMa, 1,2 jg/kgMa, 0,6 jg/kgMa o 0,3 jg/kgMa. En una realizacion, el intervalo de administracion eficaz es 6-48 U/kgMa, p. ej., 48 U/kgMa, 24 U/kgMa, 12 U/kgMa o 6 U/kgMa. En otra realizacion, el intervalo de administracion eficaz es 0,04-0,34 nmol/kgMa, p. ej., 0,34 nmol/kgMa, 0,17 nmol/kgMa, 0,08 nmol/kgMa o 0,04 nmol/kgMa.

En un tercer aspecto de la invencion, se proporciona NRG para su uso en un metodo para prevenir, tratar o retrasar la insuficiencia caMaca en maiMferos (p. ej., personas), comprendiendo el metodo la administracion de una protema NRG dentro del intervalo de tolerancia de administracion en el maiMfero (p. ej., en una persona) que lo necesita. En una realizacion, la protema NRG dentro del intervalo de tolerancia de administracion se administra una vez al dfa. En otra realizacion, la protema NRG dentro del intervalo de tolerancia de administracion se administra varias veces al dfa. En una realizacion, la protema NRG dentro del intervalo de tolerancia de administracion se administra durante un dfa. En otra realizacion, la protema NRG dentro del intervalo de tolerancia de administracion se administra durante varios dfas.

En un cuarto aspecto de la invencion, se proporciona NRG para su uso en un metodo para prevenir, tratar o retrasar la insuficiencia caMaca en maiMferos (p. ej., en personas), comprendiendo el metodo la administracion de una protema NRG dentro del intervalo de administracion eficaz en el maiMfero (p. ej., en una persona) que lo necesite. En una realizacion, la protema NRG dentro del intervalo de administracion eficaz se administra una vez al dfa. En otra realizacion, la protema NRG dentro del intervalo de administracion eficaz se administra varias veces al dfa. En una realizacion, la protema NRG dentro del intervalo de administracion eficaz se administran durante un dfa. En otra realizacion, la protema NRG dentro del intervalo de administracion eficaz se administra durante varios dfas.

En un quinto aspecto de la invencion, se proporciona una composicion farmaceutica para prevenir, tratar o retrasar la insuficiencia caMaca, la composicion comprende la protema NRG con la cantidad dentro del intervalo de tolerancia de administracion.

En un sexto aspecto de la invencion, se proporciona una composicion farmaceutica para prevenir, tratar o retrasar la insuficiencia caMaca, la composicion comprende la protema NRG con la cantidad dentro del intervalo de administracion eficaz.

En un septimo aspecto de la invencion, se proporciona un kit para prevenir, tratar o retrasar la insuficiencia caMaca, el kit comprende una o varias dosis de la composicion farmaceutica susodicha para prevenir, tratar o retrasar la insuficiencia caMaca.

Descripcion detallada de la invencion

Aunque en la practica de la presente invencion pueden utilizarse cualesquiera de los metodos similares o equivalentes a los descritos en el presente documento, se describen ahora los metodos y materiales preferidos.

La presente invencion proporciona metodos para prevenir, tratar o retrasar la insuficiencia caMaca en maiMferos (p. ej., en personas) que los necesitan usando una protema NRG dentro del intervalo de administracion de tolerancia y/o eficaz. Preferiblemente, los maiMferos (p. ej., las personas) son personas o pacientes que padecen o estan en situacion de riesgo de desarrollar insuficiencia caMaca.

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A. Definiciones

A menos que se defina de otra manera, todos los terminos tecnicos y cientificos empleados en la presente memoria tienen el mismo significado que entiende generalmente cualquier experto en la tecnica a la que pertenece esta invencion.

Tal como se emplea en el presente documento, las formas singulares "un", "una", y "el", "la" significa "al menos uno" o "uno o mas" a menos que el contexto indique claramente lo contrario.

Tal como se emplea en la presente memoria, "neuregulina" o "NRG" empleada en la presente invencion se refiere a protemas o peptidos que pueden unirse y activar ErbB2, ErbB3, ErbB4 o una de sus combinaciones, incluidas, pero sin limitarse a todas las isoformas de neuregulina, dominio EGF de neuregulina solo, polipeptidos que comprenden el dominio similar a EGF de neuregulina, mutantes o derivados de neuregulina, y cualquier tipo de productos genicos similares a neuregulina que tambien activan los receptores anteriores como los descritos con detalle a continuacion. La neuregulina tambien incluye protemas, peptidos, fragmentos de NRG-1, NRG-2, NRG-3 y NRG-4 y compuestos que imitan las actividades de la neuregulina. La neuregulina utilizada en la presente invencion puede activar los receptores de ErbB anteriores y modular sus reacciones biologicas, p. ej., estimular la smtesis del receptor de acetilcolina en celulas de musculo esqueletico; y/o mejorar la diferenciacion de los cardiocitos, la supervivencia y la smtesis de ADN. La neuregulina tambien incluye las variantes con sustituciones conservadoras de aminoacidos que no alteran sustancialmente su actividad biologica. Las sustituciones conservadoras adecuadas de aminoacidos son conocidas por los expertos en esta tecnica y pueden realizarse generalmente sin alterar la actividad biologica de la molecula resultante. Los expertos en esta tecnica reconocen que, en general, cada una de las sustituciones de aminoacidos en regiones no esenciales de un polipeptido no alteran sustancialmente la actividad biologica (vease, p. ej., Watson et al., Molecular Biology of the Gene, 4a Edicion, 1987 The Bejacmin/Cummings Pub. co., pag. 224). En realizaciones preferidas, la neuregulina utilizada en la presente invencion se une y activa los heterodfmeros ErbB2/ErbB4 o ErbB2/ErbB3, por ejemplo, pero no con el proposito de restriccion, incluyendo los peptidos los restos 177-237 de la isoforma p2 de NRG-1 que contienen la secuencia de aminoacidos: SHLVKCAEKEKTFCVNGGECFMVKDLSNPSRYLC KCPNEFTGDRCQNYVMASFYKAEELYQ (SEQ. ID. n°: 1).

La neuregulina puede administrarse por cualquier via segun el criterio de los expertos en la tecnica, incluidas, pero no limitadas a via oral, por inhalacion, parenteral (p. ej., intravenosa, intramuscular, subcutanea o intradermica). En determinadas realizaciones, la neuregulina se administra por via oral. En determinadas realizaciones, la neuregulina se administra por via intravenosa. En determinadas realizaciones, la neuregulina se administra por via subcutanea. En realizaciones preferidas, la neuregulina se libera un periodo prolongado al mairnfero por via intravenosa o subcutanea.

La liberacion prolongada de neuregulina proporciona nivel terapeutico continuo de neuregulina durante un penodo. En algunas realizaciones, se libera neuregulina durante un periodo de 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 10 horas, 12 horas, 14 horas, 16 horas, 20 horas, 24 horas o mas. En algunas realizaciones, se libera neuregulina durante un periodo de 1 dfa, 2 dfas, 3 dfas, 4 dfas, 5 dfas, 6 dfas, 7 dfas, 8 dfas, 9 dfas, 10 dfas o mas. En otras realizaciones, se libera neuregulina durante un periodo de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas o mas. En otras realizaciones, se libera neuregulina durante un periodo de 1 mes, 2 meses, 4 meses, 8 meses, 12 meses o mas. En otras realizaciones, se libera neuregulina durante un periodo de 1 ano, 2 anos, 3 anos, 4 anos o mas. En otras realizaciones, se libera neuregulina 4 horas cada dfa durante 3 dfas consecutivos, 4 horas cada dfa durante 5 dfas consecutivos, 4 horas cada dfa durante 7 dfas consecutivos, 4 horas cada dfa durante 10 dfas consecutivos, 6 horas cada dfa durante 3 dfas consecutivos, 6 horas cada dfa durante 5 dfas consecutivos, 6 horas cada dfa durante 7 dfas consecutivos, 6 horas cada dfa durante 10 dfas consecutivos, 8 horas cada dfa durante de 3 dfas consecutivos, 8 horas cada dfa durante 5 dfas consecutivos, 8 horas cada dfa durante 7 dfas consecutivos, 8 horas cada dfa durante 10 dfas consecutivos.

Como se emplea en la presente memoria, "dominio similar al factor de crecimiento epidermico" o "dominio similar a EGF" se refiere a un motivo de polipeptido codificado por el gen de neuregulina que se une a ErbB2, ErbB3, ErbB4, o combinaciones de los mismos, y los activa y lleva una similitud estructural con el dominio de fijacion al receptor de EGF como se describe en el documento WO 00/64400, Holmes y otros, Science, 256:1205-1210 (1992); patentes de EE.UU. n° 5.530.109 y n° 5.716.930.; Hijazi et al., Int.. J. Oncol., 13: 1061-1067 (1998); Chang et al., Nature, 387: 509-512 (1997); Carraway et al., Nature, 387:512-516 (1997); Higashiyama et al., J. Biochem., 122:675-680 (1997); y documento WO 97/09425, cuyos contenidos estan todos incorporados en la presente memoria por referencia. En determinadas realizaciones, el dominio similar a EGF se une a los heterodfmeros ErbB2/ErbB4 o ErbB2/ErbB3 y los activa. En determinadas realizaciones, el dominio similar a EGF comprende la secuencia de aminoacidos del dominio de union al receptor de NRG-1. En algunas realizaciones, el dominio similar a EGF comprende la secuencia de aminoacidos correspondiente a los residuos de aminoacidos 177-226, 177-237 o 177240 de NRG-1. En determinadas realizaciones, el dominio similar a EGF comprende la secuencia de aminoacidos del dominio de union al receptor de NRG-2. En determinadas realizaciones, el dominio similar a EGF comprende la secuencia de aminoacidos del dominio de union al receptor de NRG-3. En determinadas realizaciones, el dominio similar a EGF comprende la secuencia de aminoacidos del dominio de union al receptor de NRG-4. En determinadas realizaciones, el dominio similar a EGF comprende la secuencia de aminoacidos de Ala Glu Lys Glu Lys Thr Phe Cys Val Asn Gly Gly Glu Cys Phe Met Val Lys Asp Leu Ser Asn Pro (SEQ. ID. n°: 2), como se describe en la patente de EE.UU. n° 5.834.229.

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Como se emplea en la presente memoria, "dosis de tolerancia" se refiere a la mayor cantidad de NRG que puede administrarse en un mairnfero sin dano. En determinadas realizaciones, el dano puede determinarse por la incidencia y gravedad de casos clmicos adversos, anomaKas de los signos vitales, incluidas la presion arterial, la frecuencia cardfaca, la respiracion y la temperatura corporal, nuevos cambios electrocardiograficos y anomalfas ffsicas o de laboratorio. En determinadas realizaciones, la dosis de tolerancia se refiere a la mayor cantidad de NRG que puede administrarse a una persona sin efectos secundarios graves. En una realizacion espedfica, los efectos secundarios graves son fatales o potencialmente mortales. En otra realizacion espedfica, los efectos secundarios graves dan lugar a hospitalizacion de pacientes ingresados u hospitalizacion actual prolongada. En otra realizacion espedfica, los efectos secundarios graves dan lugar a una discapacidad o incapacidad persistente o significativa. En otra realizacion espedfica, los efectos secundarios graves dan lugar a infarto de miocardio, evolucion a angina inestable u otro aumento en la isquemia miocardica. En otra realizacion espedfica, los efectos secundarios graves dan lugar a la aparicion de una nueva arritmia mantenida, p. ej., aleteo auricular o fibrilacion auricular, taquicardia ventricular o fibrilacion ventricular, bloqueo cardfaco completo. En otra realizacion espedfica, los efectos secundarios graves dan lugar a anomalfa congenita. En otras realizaciones, los efectos secundarios graves pueden no ser potencialmente mortales inmediatamente o causar la muerte o la hospitalizacion, pero pueden poner en peligro al paciente o requerir intervencion para evitar uno de los resultados mencionados anteriormente.

Como se emplea en la presente memoria, "dosis eficaz" se refiere a la cantidad de NRG que produzca uno o mas efectos beneficiosos cuando se administra a un mamffero. En determinadas realizaciones, los efectos beneficiosos pueden determinarse por cambios de la funcion cardfaca incluidos, pero no limitados por LVEF, LVEDV y LVESV medidos por MRI. En determinadas realizaciones, los efectos beneficiosos pueden determinarse por los cambios hemodinamicos agudos, incluidos, pero no limitados al gasto cardfaco, a las presiones de llenado ventricular izquierdo y derecho, a las presiones arteriales pulmonar y general y a la resistencia vascular general y pulmonar. En determinadas realizaciones, los efectos beneficiosos pueden determinarse mediante marcadores neuro-hormonales e inmunologicos en sangre, p. ej., noradrenalina, aldosterona, endotelina-1, NT-proBNP, propeptido terminal de procolageno de tipo III (PIIINP), hsCRP, TNF e IL6. En determinadas realizaciones, los efectos beneficiosos se pueden determinar mediante Six-minute Walk Test. En determinadas realizaciones, los efectos beneficiosos pueden determinarse mediante la New York Heart Association Classification of CHF patients. En determinadas realizaciones, los efectos beneficiosos pueden determinarse por la calidad de vida (QOL, Minnesota, 1986). En determinadas realizaciones, los efectos beneficiosos pueden determinarse por la frecuencia de rehospitalizacion del paciente. En determinadas realizaciones, los efectos beneficiosos pueden determinarse por la tasa de supervivencia o la mortalidad de los pacientes.

Como se emplea en la presente memoria, "tratar" y "tratamiento" se refieren a cualquier manera en que se mejoran los smtomas de una afeccion, trastorno o enfermedad o de otra manera se alteran favorablemente. El efecto puede ser profilactico por lo que respecta a evitar completa o parcialmente una enfermedad o uno de sus smtomas y/o puede ser terapeutico por lo que respecta a una cura parcial o completa para una enfermedad y/o efecto secundario atribuible a la enfermedad. El tratamiento tambien abarca cualquier uso farmaceutico de las composiciones de la presente invencion.

Tal como se emplea en la presente memoria, "fraccion de expulsion del ventnculo izquierdo" o "LVEF" significa la porcion de sangre que se bombea fuera de un ventnculo lleno como resultado de un latido del corazon. Puede definirse mediante la formula siguiente: (LVEDV-LVESV)/LVEDV.

Tal como se emplea en la presente memoria, "LVEDV" significa el volumen diastolico final del ventnculo izquierdo.

Tal como se emplea en la presente memoria, "LVESV" significa el volumen sistolico final del ventnculo izquierdo.

Tal como se emplea en la presente memoria, "acortamiento fraccionado" o "FS" significa una relacion del cambio de diametro del ventnculo izquierdo entre los estados contrafdo y relajado. Puede definirse mediante la formula siguiente: (diametro diastolico final del Vl-diametro sistolico final del VI) / diametro sistolico final del VI.

Tal como se emplea en la presente memoria, "insuficiencia cardfaca" significa una anomalfa de la funcion cardfaca en la que el corazon no bombea sangre al ritmo necesario para los requisitos de los tejidos metabolizantes. La insuficiencia cardfaca incluye una amplia gama de enfermedad tales como la insuficiencia cardfaca congestiva, infarto de miocardio, taquiarritmia, cardiomiopatfa hipertrofica familiar, cardiopatfa isquemica, cardiomiopatfa dilatada idiopatica, miocarditis y similares. La insuficiencia cardfaca puede ser causada por cualquier numero de factores, incluidos, sin limitacion, formas isquemica, congenita, reumatica, vinca, toxica o idiopatica. La hipertrofia cardfaca cronica es una condicion significativamente patologica que es un precursor para la insuficiencia cardfaca congestiva y el paro cardfaco.

Tal como se emplea en la presente memoria, "protema" es sinonimo de "polipeptido" o "peptido", a menos que el contexto indique claramente lo contrario.

Tal como se emplea en la presente memoria, "unidad de actividad" o "UE" o "U" significa la cantidad de producto estandar que puede inducir un 50% de reaccion maxima. En otras palabras, para determinar la unidad de actividad de un agente activo dado, debe medirse la EC50. Por ejemplo, si la EC50 para un lote de producto fue de 0,1 |jg, entonces esa sena una unidad. Ademas, si se esta utilizando 1 jg de estos productos, entonces, se esta utilizando 10 UE (1/0,1). La EC50 puede determinarse por cualquier metodo conocido en la tecnica, incluido el metodo empleado por el inventor. Esta determinacion de la unidad de actividad es importante para el control de calidad de

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los productos geneticamente modificados y de los farmacos utilizados en clmica, permite que los productos de diferentes productos farmaceuticos y/o diferentes numeros de lote sean cuantificados con criterios uniformes.

El siguiente es un metodo ilustrativo, rapido, sensible, de alto flujo y cuantitativo para la determinacion de la actividad biologica de NRG-1 a traves de la combinacion de NRG con moleculas ErbB3/ErbB4 de la superficie celular y mediacion indirecta de la fosforilacion de ErbB2 (Vease, p. ej., Michael D. Sadick et al., 1996, Analytical Biochemistry, 235:207-214 y documento WO03/099300).

En resumen, el ensayo, denominado ensayo por inmunoabsorcion ligado a enzimas de activacion del receptor de cinasa (KIRA-ELISA), consiste en dos placas separadas de microvaloracion, una para el cultivo celular, estimulacion de ligandos y lisis celular/disolucion del receptor y la otra placa para la captura de receptor y ELISA de fosfotirosina. El ensayo se desarrollo para el analisis de la activacion de ErbB2 inducida por NRG y utiliza la estimulacion del receptor intacto en la estirpe celular de carcinoma de mama adherente, MCF-7. Las protemas de membrana se disuelven por lisis con Triton X-100 y el receptor se captura en los pocillos de ELISA recubiertos con anticuerpos espedficos contra ErbB2 sin reaccion cruzada para ErbB3 o ErbB4. El grado de fosforilacion del receptor se cuantifica a continuacion por ELISA de antifosfotirosina. Una curva patron reproducible se genera con una EC50 de aproximadamente 360 pM para heregulina beta 1 (177 a 244). Cuando muestras identicas de HRG beta 1 (177 a 244) se analizan tanto por KIRA-ELISA como por analisis cuantitativo de transferencia Western con antifosfotirosina, los resultados se correlacionan muy estrechamente entre su El ensayo descrito en este informe es capaz de cuantificar espedficamente la fosforilacion de tirosina de ErbB2 que resulta de la interaccion de HRG con ErbB3 y/o ErbB4.

Dado que la mayona de los medicamentos geneticamente modificados son protemas y polipeptidos, su actividad puede determinarse por sus secuencias de aminoacidos o el centro de actividad formado por su estructura espacial. El valor de la actividad de la protema y el polipeptido no es coherente con su calidad absoluta, por lo tanto, no puede determinarse con la unidad de peso como la de los farmacos qmmicos. Sin embargo, la actividad biologica de los medicamentos geneticamente modificados es generalmente coherente con su farmacodinamica y sistema de determinacion del valor probado por la actividad biologica dada puede determinar su unidad de valor. Por lo tanto, la determinacion de la actividad biologica puede formar parte de un proceso de valoracion de la sustancia con actividad biologica y es un componente importante del control de calidad del producto geneticamente modificado. Es importante determinar los criterios de actividad biologica para el control de calidad de productos geneticamente modificados y los farmacos utilizados clmicamente.

La cantidad de producto patron que puede inducir el 50% de reaccion maxima se define como una unidad de actividad (1 UE). En consecuencia, el producto de diferentes productos farmaceuticos y de los diferentes numeros de lote puede cuantificarse con criterios uniformes.

B. Ejemplos

La invencion se ilustra mediante los siguientes ejemplos.

Ejemplo 1: Un estudio en fase I, abierto, no comparativo, de una sola dosis para evaluar la tolerancia de neuregulina-1 humana recombinada a inyecciones en voluntarios sanos

Para determinar la seguridad y tolerancia de la dosis unica de neuregulina-1 humana recombinada a inyecciones en personas sanas, se llevo a cabo el ensayo clmico en fase I (Protocolo ID.: KW-70112) en el Primer Hospital Universitario de Pekin en China, se inscribieron 28 voluntarios sanos y se asignaron al azar en seis grupos de dosis segun su orden de inscripcion, entre las cuales la relacion de genero fue de aproximadamente 1:1.

Producto en investigacion:

Especificacion: Neucardin™, un polipeptido de 61 aminoacidos que comprende el dominio similar a EGF de la isoforma p2 de neuregulina-1 y que tiene la secuencia de aminoacidos expuesta en la SEQ. ID. n°: 1, con el peso molecular de 7.054 Dal (1 pg = 0,14 nmol). 250 pg (5.000 UE)/vial (1 pg = 20 UE).

Preparacion: Para inyectables.

Modo de administracion: inyeccion en embolada lenta (20 ml/10 min, control de la bomba de infusion). Almacenamiento: en lugar seguro, con acceso limitado y protegido de la luz, a 3-8 ° C.

Grupos de dosis:

Veintiocho voluntarios se dividieron en seis grupos con dosis crecientes equivalentes a 0,2 pg, 0,4 pg, 0,8 pg, 1,2 pg, 1,6 pg y 2,4 pg (referirse a la Tabla 1 para mas detalles). Comenzado desde 0,2 mg/kg, bajo condicion previa de confirmacion de la seguridad y tolerabilidad del grupo de dosis anterior, el estudio se escalono a las dosis siguientes.

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Tabla 1: Grupos de dosis y pacientes en cada grupo

Grupo: Dosis Muestras

A: 0,2 pg/kg (4 UE/kg) 4

B: 0,4 pg/kg (8 EU/kg) 4

C: 0,8 pg/kg (16 UE/kg) 4

D: 1,2 pg/kg (24 UE/kg) 5

E: 1,6 pg/kg (32 UE/kg) 6

F: 2,4 pg/kg (48 UE/kg) 5

Procedimientos del estudio

1) Penodo de seleccion:

• Obtener el formulario de consentimiento informado por escrito;

• Comprobar los criterios de inclusion/exclusion;

• Demograffa

• Recoger los antecedentes personales patologicos;

• Examen ffsico;

• Signos vitales (presion arterial en decubito supino, pulso, frecuencia respiratoria, temperatura);

• Hematologfa, analisis de orina;

• Analisis bioqmmico de sangre;

• Marcadores cardfacos del suero;

• ECG;

• Cardiograma ultrasonico;

• Prueba de coagulacion de la sangre: APTT, PT;

• Prueba de serologfa (incluidos los ensayos HBsAg, anti-VCH, anti-VIH);

• Radiograffa de torax;

• Analisis de HCG en la orina (paciente femenina, si es necesario);

• Registrar efectos secundarios y efectos secundarios graves;

• Registrar las medicaciones simultaneas.

2) Valor de referencia: Tiempo desde la administracion del farmaco en estudio programada la noche anterior hasta el inicio de la administracion del farmaco en estudio.

• Examen ffsico;

• Ensayo de anticuerpos espedficos;

• Volver a comprobar los criterios de inclusion/exclusion;

• Registrar los efectos secundarios y efectos secundarios graves;

• Registrar la medicacion simultanea.

3) El farmaco en estudio del dfa se administro

• Estudiar la administracion del farmaco;

• ECG;

• Ecocardiograffa;

• Registrar efectos secundarios y efectos secundarios graves;

• Registrar la medicacion simultanea (cada dfa).

5

10

15

20

25

4) El 1er dfa y el 7° dfa despues del cese de la administradon de farmacos

• Examen ffsico;

• Signos vitales (presion arterial en decubito supino, pulso, frecuencia respiratoria, temperature);

• Ensayo de anticuerpos espedficos;

• Hematolog^a, analisis de orina;

• Analisis bioqmmico de sangre;

• Marcadores cardfacos del suero;

• ECG;

• Cardiograma ultrasonico (7° d^a despues del cese de la administradon del farmaco);

• Prueba de coagulacion de la sangre: APTT, PT;

• Analisis de HCG en orina (paciente femenina, si es necesario);

• Registrar los efectos secundarios y efectos secundarios graves;

• Registrar las medicaciones simultaneas.

5) El 10° dfa despues del cese de la administradon de farmacos

En cuanto a cualquier punto anormal en los resultados de las pruebas del 7° dfa despues del cese de la administradon del farmaco, este punto se volvio a probar, el 10° dfa despues de la dosis. Despues de eso, se volvio a probar con un determinado intervalo hasta que el resultado se normalizo.

Resultados y Analisis

28 personas totalmente sanas se inscribieron en 6 grupos de dosis de 0,2, 0,4, 0,8, 1,2, 1,6, 2,4 pg/kg, el numero de personas que completaron el estudio en cada uno de los grupos de dosis fue de 4, 4, 4, 5, 6, 5, respectivamente (consultar la Tabla 1).

Los efectos secundarios (E.S.) se controlaron a partir del momento en que se firmo el consentimiento informado hasta la visita al final del tratamiento. Dieciseis personas (57,1%) experimentaron al menos un efecto secundario durante el transcurso del estudio, todos los efectos secundarios fueron leves. Ninguna de las personas experimento efectos secundarios moderados o graves durante el estudio.

Durante el estudio, los efectos secundarios mas frecuentes se enumeraron en la Tabla 2, los efectos secundarios de gravedad se enumeraron en la Tabla 3.

Tabla 2. Listado de efectos secundarios

Grupo: Pacientes E.S. Gravedad Resultado

0,2 pg/kg: 402 ECG anormal Leve Recuperacion

0,8 pg/kg: 101 Nauseas Leve Recuperacion

: 102 Nauseas; fatiga de las extremidades inferiores Leve Recuperacion

: 103 Nauseas; fatiga; heces blandas; ligera excitacion Leve Recuperacion

: 104 Nauseas Leve Recuperacion

1,2 pg/kg: 601 ECG anormal Leve Recuperacion

: 603 Anomalfas en hematologfa Leve Recuperacion

: 605 ECG anormal Leve Recuperacion

1,6 pg/kg: 201 Poco apetito; Anomalfas en hematologfa Leve Recuperacion

: 202 Anomalfas en ECG y urinarias Leve Recuperacion

: 204 Nauseas; ECG anormal Leve Recuperacion

: 206 Nauseas; Poco apetito Leve Recuperacion

2,4 pg/kg: 302 ECG anormal Leve Recuperacion

: 303 Resfriado comun Leve Recuperacion

: 304 ECG anormal Leve Recuperacion

: 305 Nauseas; ligera excitacion; ECG anormal Leve Recuperacion

5

10

15

20

25

Tabla 3. Compendio de efectos secundarios por gravedad

: 0,2 g/kg (N = 4) n (%) 0,4 g/kg (N = 4) n (%) 0,8 g/kg (N = 4) n (%) 1,2 g/kg (N = 5) n (%) 1,6 g/kg (N = 6) n (%) 2,4 g/kg (N = 5) n (%) Total (N = 28) n (%)

Los pacientes experimentaron al menos un efecto secundario: 1 (25,0) 0 (0,0) 4 (100,0) 3 (60,0) 4 (66,7) 4 (80,0) 16 (57,1)

Pacientes clasificados por peores efectos secundarios

Leve: 1 (25,0) 0 (0,0) 4 (100,0) 3 (60,0) 4 (66,7) 4 (80,0) 16 (57,1)

Moderado: 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0)

Grave: 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0)

Los pacientes experimentaron al menos un E.S.G.: 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0)

Los pacientes experimentaron al menos un efecto secundario que conduce al aborto prematuro: 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0)

Muerte: 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0)

Los efectos secundarios relacionados con el farmaco en estudio fueron las anomalfas en el ECG (8 pacientes, 28,6%) y los trastornos gastrointestinales (7 pacientes, 25,0%). Las anomalfas del ECG inclrnan ligera depresion del segmento ST-T, aplanamiento de la onda T o inversion minima de la onda T. Durante el penodo de administracion y el penodo de observacion del farmaco en estudio, ninguno de los pacientes experimento malestar precordial, sensacion de ahogo, dolor en el pecho, disnea; la presion arterial era normal 2 horas y 24 horas despues de la dosificacion; no se encontro ninguna anomalfa en el analisis bioqmmica de la sangre, los electrolitos, los marcadores cardfacos del suero y la ecocardiograffa.

Todos los pacientes de cada dosis no cambiaron en los parametros de la exploracion ffsica de los valores de referencia. El ensayo de anticuerpos en el suero presentaba resultados negativos en todas los pacientes (vease la Tabla 4).

Tabla 4. Anticuerpo anti-NRG-1 en el suero de cada grupo

Primer muestreo Segundo muestreo Tercer muestreo

1:50 1:100 1:50 1:100 1:50 1:100

0,2 jg/kg: 0, 18 ± 0 05 0, 12 ± 0 02 0, 18 ± 0 06 0, 13 ± 0 02 0, 17 ± 0 06 0, 14 ± 0 02

0,4 jg/kg: 0 12 ± 0 01 0, 10 ± 0 01 0 12 ± 0 06 0, 10 ± 0 02 0 11 ± 0 01 0, 10 ± 0 01

0,8 jg/kg: 0 16 ± 0 05 0, 15 ± 0 02 0 18 ± 0 03 0, 15 ± 0 04 0 18 ± 0 05 0, 16 ± 0 05

1,2 jg/kg: 0 12 ± 0 02 0, 10 ± 0 02 0 12 ± 0 03 0, 10 ± 0 02 0 11 ± 0 02 0, 10 ± 0 02

1,6 jg/kg: 0 21 ± 0 12 0, 17 ± 0 08 0 22 ± 0 10 0, 17 ± 0 07 0 22 ± 0 10 0, 18 ± 0 06

2,4 jg/kg: 0 15 ± 0 04 0, 15 ± 0, 03 0 17 ± 0 04 0, 13 ± 0 03 0, 14 ± 0, 03 0, 14 ± 0 03

Los resultados del estudio clinico en fase I demostraron que en la dosis no superior a 2,4 pg/kg/dfa, los efectos secundarios relacionados con el farmaco son anomalfas en el ECG principalmente leves y trastornos gastrointestinales, no se observaron efectos secundarios moderados o graves. Asf que, la dosis no superior a 2,4 jg/kgMa cuando se administra con una sola dosis es tolerable.

Ejemplo 2: Estudio en varias dosis en fase I, abierto, no comparativo, para evaluar la tolerancia de neuregulina-1 humana recombinada para inyectables en voluntarios sanos

Para evaluar la seguridad y tolerancia de varias dosis de neuregulina-1 humana recombinada para inyectables en personas sanas durante 5 dfas consecutivos, se llevo a cabo el estudio clinico en fase I (Protocolo ID: KW-70112) en el Primer Hospital Universitario de Pekin en China, se inscribieron y se distribuyeron aleatoriamente 32 voluntarios sanos en 4 grupos de dosis.

Producto de investigacion:

Especificacion: Neucardin™, un polipeptido de 61 aminoacidos que comprende el dominio similar a EGF de la isoforma p2 de neuregulina-1 y que tiene la secuencia de aminoacidos expuesta en la SEQ. ID. n°: 1, con el peso molecular de 7.054 Dal (1 jg = 0,14 nmol). 250 jg (5.000 UE)/vial (1 jg = 20 UE).

Preparacion: Para inyectables.

Modo de administracion: inyeccion en embolada lenta (20 ml/10 min, control de la bomba de infusion). Almacenamiento: en lugar seguro, con acceso limitado y protegido de la luz, a 3-8°C.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Grupos de dosis:

Treinta y dos voluntarios se dividieron en cuatro grupos con dosis crecientes equivalentes a 0,2 |jg, 0,4 |jg, 0,8 jg y

1,2 jg (vease la Tabla 5 para mas detalles). Comenzado desde 0,2 jg/kg, en condicion previa de confirmacion de la seguridad y tolerabilidad del primer grupo de dosis, el estudio se intensifico a la dosis siguiente.

Procedimientos del estudio

1) Penodo de seleccion:

• Obtener el formulario de consentimiento informado por escrito;

• Comprobar los criterios de inclusion/exclusion;

• Demograffa;

• Recoger los antecedentes personales patologicos;

• Examen ffsico;

• Hematologfa, analisis de orina;

• Analisis bioqmmico de la sangre;

• Marcadores cardfacos del suero;

• ECG;

• Cardiograma ultrasonico;

• Prueba de coagulacion de la sangre: APTT, PT;

• Prueba serologica (incluido el ensayo con HBsAg, anti-VCH, anti-VHI);

• Radiograffa de torax;

• Analisis de HCG en la orina ( paciente femenina, si es necesario);

• Registrar efectos secundarios y efectos secundarios graves;

• Registrar los medicaciones simultaneas.

2) Valor de referencia: Tiempo desde la noche antes de la administracion programada del farmaco del estudio al inicio de la administracion del farmaco del estudio.

• Examen ffsico;

• Volver a comprobar los criterios de inclusion/exclusion;

• Registrar efectos secundarios y efectos secundarios graves;

• Registrar la medicacion simultanea.

3) 1er dfa a 5° dfa de administracion del farmaco

• Estudiar la administracion del farmaco;

• ECG;

• Registro de efectos secundarios y efectos secundarios graves (cada dfa);

• Registrar la medicacion concomitante (cada dfa).

4) El 1er dfa y el 7° dfa despues del cese de la administracion del farmaco

• Examen ffsico;

• Hematologfa, analisis de orina;

• Analisis bioqmmico de la sangre;

• Marcadores cardfacos del suero;

• ECG;

• Cardiograma ultrasonico (7° dfa despues del cese de la administracion del farmaco);

• Prueba de coagulacion de la sangre: APTT, PT;

• Analisis de HCG en la orina (persona femenina, si es necesario);

• Registrar los efectos secundarios y efectos secundarios graves;

• Registrar las medicaciones simultaneas.

Tabla 5. Grupos de dosis y pacientes en cada grupo

Grupo

I (5 dias)

II (5 dias)

III (5 dias)

IV (5 dias)

0,2 mg/kg (4 UE) 0,4 mg/kg (8 UE) 0,8 mg/kg (16 UE)

1,2 mg/kg (24 UE)

Dosis

Muestras

8

5) El 14° dfa despues del cese de la administracion del farmaco

En cuanto a cualquier punto anormal en los resultados de las pruebas del 7° dfa despues del cese de la administracion del farmaco, este punto se volvio a probar, el 10° dfa despues de la dosis. Despues de eso, se volvio a probar con un determinado intervalo hasta que se normalizo el resultado.

5 Resultados y Analisis

Un total de 32 personas sanas se inscribieron de forma aleatoria en 4 grupos de dosis diferentes de 0,2, 0,4, 0,8 y

1.2 |jg/kg, con 8 personas en cada grupo y la relacion entre los generos de 1:1. Una persona en el grupo de dosis de

1.2 jg abandono el estudio debido a efectos secundarios, todas las demas personas completaron el estudio.

Se hizo seguimiento de los efectos secundarios desde el momento en que se firmo el consentimiento informado 10 hasta la visita al final del tratamiento. Veintitres personas (71,9%) experimentaron al menos un efecto secundario durante el transcurso del estudio, todos los efectos secundarios fueron leves. Ninguno de los personas experimentaron efectos secundarios graves o serios durante el estudio (vease la Tabla 6).

Tabla 6. Efectos secundarios por gravedad

: 0,2 g/kg (N = 8) n (%) 0,4 g/kg (N = 8) n (%) 0,8 g/kg (N = 8) n (%) 1,2 g/kg (N = 8) n (%) Total (N = 32) n (%)

Los pacientes experimentaron al menos un efecto secundario: 4 (50,0) 5 (62,5) 7 (87,5) 7 (87,5) 23 (71,9)

Pacientes clasificados por peores efectos secundarios

Leve: 4 (50,0) 5 (62,5) 7 (87,5) 7 (87,5) 23 (71,9)

Moderado: 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0)

Grave: 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0)

Los pacientes experimentaron al menos un E.S.G.: 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0)

Los pacientes experimentaron al menos un efecto secundario que conduce a aborto prematuro: 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 1 (12,5) 1 (3,1)

Muerte: 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0)

Los efectos secundarios relacionados con el farmaco del estudio descrito con frecuencia inclrnan anomalfas en el 15 ECG (14 casos, 40,63%) y trastornos gastrointestinales (9 casos, 28,13%). Las anomalfas en el ECG inclrnan una ligera depresion del segmento STT, aplanamiento de la onda T o una minima inversion de la onda T. Durante el penodo de administracion y el penodo de observacion del farmaco del estudio, ninguno de los pacientes con ECG anormal experimento malestar precordial, sensacion de ahogo, dolor toracico y disnea. No se tomo ningun tratamiento en todo el proceso de estudio, casi todas las anomalfas en el ECG vuelven a la normalidad dentro de las 20 48 horas despues de la 5a administracion del farmaco del estudio.

Los trastornos gastrointestinales relacionados con el farmaco del estudio fueron malestar estomacal, nauseas, vomitos y heces blandas (vease la Tabla 7).

Tabla 7. Efectos secundarios relacionados con el farmaco del estudio descrito con frecuencia

Clase de organos del sistema MedDRA/ termino preferido de MedDRA Pacientes que experimentaron al menos un efecto secundario

Trastornos de la piel y la hipodermis Exantema

Trastorno del sistema nervioso Cefalea

Trastorno gastrointestinal

Nauseas

Vomitos

Malestar estomacal Heces blandas Trastorno cardiaco Arritmia ventricular Anomalias en el ECG Inversion de la onda T

0,2 jg/kg (N = 8) n (%): 0,4 jg/kg (N = 8) n (%) 0,8 jg/kg (N = 8) n (%) 1,2 jg/kg (N = 8) n (%) Total (N = 32) n (%)

2 (25,0): 4 (50,0) 7 (87,5) 7 (87,5) 20 (62,5)

0 (0,0)
0 (0,0): 2 (25,0) 0 (0,0) 2 (6,3)

0 (0,0)
0 (0,0): 2 (25,0) 0 (0,0) 2 (6,3)

0 (0,0)
0 (0,0): 1 (12,5) 0 (0,0) 1 (3,1)

0 (0,0)
0 (0,0): 1 (12,5) 0 (0,0) 1 (3,1)

0 (0,0): 1 (12,5) 4 (50,0) 4 (50,0) 9 (28,1)

0 (0,0)
0 (0,0): 4 (50,0) 2 (25,0) 6 (18,8)

0 (0,0)
0 (0,0)
0 (0,0): 2 (25,0) 2 (6,3)

0 (0,0): 1 (12,5) 0 (0,0) 0 (0,0) 1 (3,1)

0 (0,0)
0 (0,0)
0 (0,0): 1 (12,5) 1 (3,1)

2 (25,0): 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 2 (6,3)

2 (25,0): 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 2 (6,3)

0 (0,0): 3 (37,5) 5 (62,5) 6 (75,0) 14 (43,8)

0 (0,0): 2 (25,0) 2 (25,0) 3 (37,5) 7 (21,9)

5

10

15

20

25

30

35

40

Clase de organos del sistema MedDRA/ termino preferido de MedDRA: 0,2 pg/kg (N = 8) n (%) 0,4 pg/kg (N = 8) n (%) 0,8 pg/kg (N = 8) n (%) 1,2 pg/kg (N = 8) n (%) Total (N = 32) n (%)

Depresion de la onda T: 0 (0,0) 2 (25,0) 5 (62,5) 4 (50,0) 11 (34,4)

Anomalias en la onda T: 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 1 (12,5) 1 (3,1)

Los resultados del estudio clmico en fase I demostraron que en la dosis no superior a 1,2 m |jg/kg/dfa, los efectos secundarios relacionados con el farmaco son anomaKas en el ECG y trastornos gastrointestinales principalmente leves, no se observaron efectos secundarios moderados o graves. Los efectos secundarios experimentados en este estudio de varias dosis fueron similares a los del estudio de una sola dosis, apoyando que la incidencia e intensidad de los efectos secundarios no va a aumentar cuando el farmaco del estudio se administre durante varios dfas.

Ejemplo 3: Un estudio abierto, de un solo centro, de grupos paralelos para evaluar la eficacia y seguridad de neuregulina-1 humana recombinada para inyectables en pacientes de insuficiencia cardfaca en tratamiento normal

Para evaluar la eficacia y seguridad de neuregulina-1 humana recombinada para inyectables en la insuficiencia cardfaca cronica y para investigar el intervalo de administracion eficaz de neuregulina-1 humana recombinada para inyectables para tratar la insuficiencia cardfaca cronica, se llevo a cabo el estudio basado en un tratamiento normal de fase II, abierto, de un solo centro, de grupos paralelos, (Protocolo ID.: HREC 06/035) en St Vicent's Hospital en Australia. Quince pacientes con insuficiencia cardfaca cronica se inscribieron y se asignaron de forma aleatoria en 3 grupos.

Producto de investigacion:

Especificacion: Neucardin™, un polipeptido de 61 aminoacidos que comprende el dominio similar a EGF de la isoforma p2 de neuregulina-1 y que tiene la secuencia de aminoacidos expuesta en la SEQ. ID. n°: 1, con el peso molecular de 7.054 Dal (1 pm = 0,14 nmol). 250 pg (5.000 UE)/vial (1p g = 20 UE).

Preparacion: Para inyectables.

Modo de administracion: Goteo por via intravenosa.

Almacenamiento: en lugar seguro, con acceso limitado y protegido de la luz, a 3-8°C.

Grupos de dosis:

Quince pacientes con insuficiencia cardfaca cronica (LVEF< 40%, NYHA clase II/NI, probada en ACEI/ARA y bloqueador beta con dosis estables de estos medicamentos durante los 3 meses anteriores) se inscribieron y asignaron de forma aleatoria en 3 grupos de dosis con 5 pacientes en cada grupo (vease la Tabla 8).

Tabla 8. Regimen de dosificacion del estudio de fase II en Australia

Grupo de dosis: Muestra Dosis (1er dfa) Dosis (2° a 11° dfa)

A: 5 1,2 pg/kg/6 h 2,4 pg/kg/12 h

B: 5 1,2 pg/kg/6 h 1,2 pg/kg/12 h

C: 5 1,2 pg/kg/6 h 0,6 pg/kg/12 h

Procedimientos del estudio

1) Seleccion y valores de referencia:

• Obtener el formulario de consentimiento informado por escrito;

• Recoger los antecedentes personales patologicos;

• Examen ffsico;

• Comprobar los criterios de inclusion/exclusion;

• ECG;

• FBC;

• Marcador inmunologico neurohormonal (NT-proBNP, PIIINP, NA, Aldos, endotelina, hsCRP, TNF-a, IL-6);

• Cardiograma ultrasonico;

• IRM.

2) 1er dfa de administracion de farmacos

• Administracion del farmaco del estudio;

• ECG;

• Cateter de RH;

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

• NT-proBNP.

3) 2° a 11° dfa de administracion de farmacos

• Administradon del farmaco del estudio;

• ECG.

4) 12° dfa del estudio

• ECG;

• Cateter de RH;

• FBC;

• Cardiograma ultrasonico;

• IRM.

5) 30° dfa del estudio

• ECG;

• FBC;

• Cardiograma ultrasonico;

• IRM.

6) 60° dfa del estudio

• ECG;

• FBC;

7) 90° dfa del estudio

• Recoger los antecedentes personales patologicos;

• Examen ffsico;

• ECG;

• FBC;

• Cateter de RH;

• Cardiograma ultrasonico;

• IRM.

Resultados y Analisis

El criterio principal de valoracion de la eficacia esta evaluando la funcion ventricular izquierda y la remodelacion (como se determina por el cambio en LVEF, LVEDV y LVESV medido por IRM). Los parametros hemodinamicos y los marcadores neurohormonales e inmunologicos actuan como criterios secundarios de valoracion de la eficacia.

Como recuento total, 13 pacientes (13/15, 86,7%) recibieron el farmaco de la prueba por infusion intravenosa durante 11 dfas consecutivos, un persona (1/15, 6,7%) recibio el farmaco de la prueba por infusion intravenosa durante 10 dfas, un persona (1/15, 6,7%) recibio el farmaco de la prueba por infusion intravenosa durante 7 dfas. No se retiro ninguna persona.

En el grupo A (1,2 |jg/kg/dfa * 1 dfa + 2,4 pg/kg/dfa * 10 dfas), 4 pacientes (4/5, 80,0%) recibieron el farmaco de la prueba por infusion intravenosa durante 11 dfas consecutivos, un persona (1/5, 20,0%) recibio el farmaco de la prueba por via infusion intravenosa durante 7 dfas. En el grupo B (1,2 jg/kgMa * 1 dfa + 1,2 jg/kgMa * 10 dfas), 5 pacientes (5/5, 100,0%) recibieron el farmaco de la prueba por infusion intravenosa durante 11 dfas consecutivos. En el grupo C (1,2 jg/kg/dfa * 1 dfa + 0,6 jg/kg/dfa * 10 dfas), 4 pacientes (4/5, 80,0%) recibieron el farmaco de la prueba por infusion intravenosa durante 11 dfas consecutivos, un persona (1/5, 20%) recibio el farmaco de la prueba por infusion intravenosa durante 10 dfas.

En el grupo A, tras la administracion de Neucardin™, el 12° dfa, LVEF (%) mejoro en un 5,4% en comparacion con el valor de referencia; el incremento porcentual fue del 16,0%; en 1 mes, la LVEF (%) mejoro en un 3,3% en comparacion con el valor de referencia, el porcentaje de aumento fue del 8,8%; a los 3 meses, la LVEF (%) mejoro aun en un 2,6% en comparacion con el valor de referencia, el porcentaje de aumento fue del 6,1%.

En el grupo B, el 12° dfa, la LVEF (%) mejoro en un 3,8% en comparacion con el valor de referencia; el incremento porcentual fue del 11,8%; en 1 mes, la LVEF (%) mejoro en un 3,4% en comparacion con el valor de referencia, el porcentaje de aumento fue del 9,7%; a los 3 meses, la mejora de la LVEF (%) se incremento hasta el 4,8% en comparacion con el valor de referencia, el porcentaje de aumento fue del 15,7%.

5 En el grupo C, el 12° dfa, la LVEF (%) mejoro en un 2,2% en comparacion con el valor de referencia; el porcentaje de incremento fue del 8,4%; en 1 mes, la LVEF (%) mejoro en un 4,6% en comparacion con el valor de referencia, el porcentaje de aumento fue del 15,4%; y la mejora de la LVEF (%) se mantuvo hasta 3 meses un 4,4% en comparacion con el valor de referencia, el porcentaje de aumento fue del 15,5%.

Y para los 15 pacientes que completaron el estudio (combinado), la mejora de la LVEF (%) fue de 3,8%, 3,8% y 10 3,9% el 12° dfa, en 1 mes, 3 meses, en comparacion con el valor de referencia, respectivamente (vease la Tabla 9) .

Para los 15 pacientes que completaron el estudio (combinado) y para cada grupo de dosis individual, no hubo ningun cambio significativo en comparacion con el valor de referencia de LVEDV (ml) en ningun punto de tiempo.

En cuanto a LVESV (ml), en el grupo A, el 12° dfa, el LVESV (ml) se redujo en 8,4 ml en comparacion con el valor de referencia, la disminucion porcentual fue del 4,9%; en 1 mes, el LVESV (ml) se redujo en 14,3 ml en comparacion

15 con el valor de referencia, la disminucion porcentual fue del 8,8%; a los 3 meses, el LVESV (ml) se redujo en 12,0 ml

en comparacion con el valor de referencia, la disminucion porcentual fue del 8,3%.

Tabla 9. Valores medidos (media ± D.T.) de la LVEF (%)

Grupo de dosis: Puntos de tiempo Valor medido de LVEF (%) Cambio absoluto de LVEF (%) Cambio porcentual de LVEF comparado con el valor de referencia (%)

Grupo A (1,2 |jg/kg/dfa * 1 dfa + 2,4 jg/kg/dfa * 10 dfas): Valor de referencia (n = 5) 33,2 ± 9,7

12° dfa (n = 5): 38,6 ± 11,6 5.4 ± 2.9 16,0 ± 8,2

1 mes (n = 4): 37,5 ± 13,1 3,3 ± 2,8 8,8 ± 6,3

3 meses (n = 5): 35,8 ± 13,1 2,6 ± 4,0 11,0 ± 6,1

Grupo B (1,2 jg/kg/dfa * 1 dfa + 1,2 jg/kg/dfa * 10 dfas): Valor de referencia (n = 5) 30,8 ± 8,0

12° dfa (n = 5): 34,6 ± 10,0 3,8 ± 2,6 11,8 ± 5,9

1 mes (n = 5): 34,2 ± 10,9 3,4 ± 4,1 9,7 ± 12,4

3 meses (n = 5): 35,6 ± 9,4 4,8 ± 3,4 15,7 ± 11,2

Grupo C (1,2 jg/kg/dfa * 1 dfa + 0,6 jg/kg/dfa * 10 dfas): Valor de referencia (n = 5) 32,6 ± 7,3

12° dfa (n = 5): 34,8 ± 5,4 2,2 ± 3,7 8,4 ± 11,9

1 mes (n = 5): 37,2 ± 6,8 4,6 ± 3,4 15,4 ± 11,5

3 meses (n = 5): 37,0 ± 5,2 4,4 ± 3,0 15,5 ± 12,9

Todos los pacientes: Valor de referencia (n =15) 32,2 ± 7,9

12° dfa (n = 15): 36,0 ± 8,9 3,8 ± 3,2 12,1 ± 8,9

1 mes (n = 14): 36,2 ± 9,6 3,8 ± 3,3 11,5 ± 10,3

3 meses (n = 15): 36,1 ± 9,1 3,9 ± 3,4 12,4 ± 11,8

En el grupo B, el 12° dfa, el LVESV (ml) se redujo 1,0 ml en comparacion con el valor de referencia, la disminucion porcentual fue del 2,5%; en 1 mes, el LVESV (ml) se redujo en 3,8 ml en comparacion con el valor de referencia, la 20 disminucion porcentual fue del 2,5%; a los 3 meses, el LVESV (ml) se redujo en 12,6 ml en comparacion con el valor de referencia, la disminucion porcentual fue del 6,3%.

En el grupo C, el 12° dfa, el LVESV (ml) se redujo en 11,4 ml en comparacion con el valor de referencia, la disminucion porcentual fue del 8,6%; en 1 mes, el LVESV (ml) se redujo en 8,0 ml en comparacion con el valor de

referencia, la disminucion porcentual fue del 5,1%; a los 3 meses, el LVESV (ml) se redujo en 10,8 ml en comparacion con el valor de referencia, la disminucion porcentual fue del 7,1%.

Y para los 15 pacientes que completaron el estudio (combinado), la disminucion del LVESV (ml) fue del 6,9, 8,3 y 11,8 ml el 12° dfa, en 1 mes, en 3 meses, en comparacion con el valor de referencia, respectivamente (vease la 5 Tabla 10).

Tabla 10. Valores medidos (media ± D.T.) de LVESV (ml)

Grupos de dosis: Puntos de tiempo Valor medido de LVESV (ml) Cambio absoluto de LVESV (ml) Cambio porcentual de LVESV comparado con el valor de referencia (%)

Grupo A (1,2 |jg/kg/dfa * 1 dfa + 2,4 jg/kg/dfa * 10 dfas): Valor de referencia (n = 5) 194,2 ± 74,0

12° dfa (n = 5): 185,8 ± 73,2 -8,4 ± 10,4 -4,9 ± 6,3

1 mes (n = 4): 172,8 ± 81,5 -14,3 ± 14,9 -8,8 ± 9,8

3 meses (n = 5): 182,2 ± 83,4 -12,0 ± 17,6 -8,3 ± 11,4

Grupo B (1,2 jg/kg/dfa * 1 dfa + 1,2 jg/kg/dfa * 10 dfas): Valor de referencia (n = 5) 179,6 ± 34,7

12° dfa (n = 5): 178,6 ± 60,5 -1,0 ± 29,0 -2,5 ± 16,6

1 mes (n = 5): 175,8 ± 40,1 -3,8 ± 14,5 -2,5 ± 8,3

3 meses (n = 5): 167,0 ± 26,0 -12,6 ± 15,6 -6,3 ± 8,3

Grupo C (1,2 jg/kg/dfa * 1 dfa + 0,6 jg/kg/dfa * 10 dfas): Valor de referencia (n = 5) 182,4 ± 70,5

12° dfa (n = 5): 171,0 ± 81,6 -11,4 ± 22,2 -8,6 ± 14,2

1 mes (n = 5): 174,4 ± 73,4 -8,0 ± 9,2 -5,1 ± 6,9

3 meses (n = 5): 171,6 ± 74,4 -10,8 ± 8,9 -7,1 ± 6,6

Todos los pacientes: Valor de referencia (n = 15) 185,4 ± 58,1

12° dfa (n = 15): 178,5 ± 67,2 -6,9 ± 20,8 -5,3 ± 12,4

1 mes (n = 14): 174,4 ± 60,7 -8,3 ± 12,7 -5,2 ± 8,1

3 meses (n = 15): 173,6 ± 61,7 -11,8 ± 13,5 -7,2 ± 8,4

Una infusion de 6 horas de Neucardin™ influyo de forma aguda y significativa en varios parametros hemodinamicos cuando se controlo durante 24 horas. Como se muestra en la Tabla 11, la influencia aguda de Neucardin™ sobre la hemodinamica fue bastante positiva.

Tabla 11. Compendio de los cambios significativos en los parametros hemodinamicos durante y despues de una

infusion de 6 horas de Neucardin™

Parametros hemodinamicos: Puntos de tiempo cuando los parametros aumentaban significativamente en comparacion con el valor de referencia Puntos de tiempo cuando los parametros disminrnan significativamente en comparacion con el valor de referencia

Frecuencia cardfaca (FC, latidos/min): 1 hora, 2 horas, 4 horas y 6 horas

Presion arterial sistolica (PAS, mm Hg): 6 horas

Presion arterial diastolica (PAD, mm Hg): 24 horas

Presion arterial media (PAM, mm Hg): 24 horas

Presion en auricula derecha (AD, mm Hg): 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas y 24 horas

Presion sistolica en arteria pulmonar (PSAP, mm Hg): 30 minutos, 1 hora

Presion diastolica en arteria pulmonar (PDAP, mm Hg): 2 horas, 12 horas y 24 horas

Presion media en arteria pulmonar (PMAP, mm Hg): 2 horas, 12 horas y 24 horas

Presion de enclavamiento en arteria pulmonar (PEAP, mm Hg): 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas y 24 horas

Gradiente de presion transpulmonar (GPT, mm Hg): 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas y 24 horas

Resistencia vascular pulmonar (RVP, dinas. s.cm"5)

Resistencia vascular general (SVR, dinas. s.cm-5): 30 minutos, 2 horas, 4 horas, 6 horas y 24 horas

Gasto cardfaco (CO, l/min): 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas y 24 horas

fndice cardfaco (IC, l/min/m2): 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas y 24 horas

Volumen sistolico (VS, ml): 30 minutos, 2 horas, 4 horas, 12 horas y 24 horas

fndice volumetrico sistolico(IVS, ml/m2): 30 minutos, 2 horas, 4 horas, 12 horas y 24 horas

Los cambios significativos a largo plazo de la hemodinamica de los pacientes del estudio se resumen en la tabla siguiente, y los detalles se enumeran a continuacion (Tabla 12).

Tabla 12. Compendio de los cambios significativos en los parametros hemodinamicos a largo plazo

PAS (mm Hg): 12° dfa, 3 meses

PAD (mm Hg): 12° dfa, 3 meses

PAM (mm Hg): 12° dfa, 3 meses

GPT (mm Hg) PEAP (mm Hg): 12° dfa, 3 meses 3 meses

5 En lo que se refiere a los biomarcadores neurohormonales e inmunologicos, la NT-proBNP se incremento despues de la infusion de 6 horas de Neucardin™ el primer dfa, y no volvio a los valores de referencia a las 24 horas desde el

5

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15

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25

30

35

40

inicio de la administracion, y despues del final de la medicacion, disminuyo y volvio al valor de referencia al final del estudio.

No se observo ningun cambio significativo en hs-CRP.

En cuanto a la evaluacion de la seguridad, 10 pacientes (10/15, 66,7%) experimentaron al menos un efecto secundario (E.S.). Cada uno de los E.S. descritos con mas frecuencia fueron las nauseas (20%), el letargo (20%) y el dolor toracico (20%), sin una relacion causal clara con la dosis. Aproximadamente el 67% de los pacientes teman anomalfas en el ECG durante o despues de la administracion del farmaco de estudio, incluyendo: inversiones o aplanamiento de la onda T, cambios en el segmento ST-T, contracciones ventriculares prematuras, salvas discontinuas de taquicardia supraventricular o ventricular o fibrilacion/aleteo auricular. Como las anomalfas en el ECG son frecuentes en pacientes con ICC y no hubo grupo de placebo para comparacion, es dificil evaluar la causalidad o relacion con el farmaco en este estudio.

Una persona en el grupo A (2,4 jg/kg^a) y un persona en el grupo C (0,6 jg/kgMa) experimentaron efecto(s) secundario(s) grave(s) (E.S.G.).

No hubo anomalfas clmicas significativas identificadas en cuanto se refiere a signos vitales, examen ffsico o parametros de laboratorio.

Segun los resultados del estudio en fase II, se cree que la neurregulina-1 humana recombinada es eficaz y segura para el tratamiento de pacientes con insuficiencia cardfaca cronica en el intervalo de administracion entre 0,6 a 2,4 jg/kgMa (12 a 48 UE/kgMa o 0,08 a 0,34 nmol/kgMa).

Ejemplo 4: Estudio controlado con placebo al azar, doblemente a ciegas, multicentrico, para evaluar la eficacia y seguridad de la neuregulina-1 humana recombinada en pacientes con insuficiencia cardfaca cronica en base a un tratamiento habitual

Para evaluar la eficacia y seguridad de neuregulina-1 humana recombinada para inyectables en la insuficiencia cardfaca congestiva cronica y para investigar el intervalo de administracion eficaz de neuregulina-1 humana recombinada para inyectables para tratar la insuficiencia cronica cardfaca congestiva, se llevo a cabo la fase II del estudio basado en el tratamiento habitual, controlado con placebo, doblemente a ciegas, multicentrico (Protocolo ID.: ZS-01-206) en varios centros clmicos en China. Sesenta y cuatro pacientes con diagnostico de insuficiencia cardfaca cronica procedente de uno o mas factores incluidos la miocardiopatfa dilatada, hipertension, miocarditis vmca, infarto de miocardio, y cardiomiopatfa alcoholica, se inscribieron y se asignaron al azar en 4 grupos.

Producto de la investigacion:

Especificacion: Neucardin™, polipeptido de 61 aminoacidos que comprende el dominio similar a EGF de la isoforma p2 de neuregulina-1 y que tiene la secuencia de aminoacidos expuesta en la SEQ. ID. n°: 1, con peso molecular de 7.054 Dal (1 jg = 0,14 nmol). 250 jg (5.000 UE)/vial (1 jg = 20 UE).

Preparacion: Para inyectables.

Modo de administracion: Goteo por via intravenosa.

Placebo:

Especificacion: Excipiente para Neucardin™. 250 jg/vial y sin protema neuregulina-1 humana recombinada activa. Grupos de dosis:

Se designaron 64 pacientes con insuficiencia cardfaca cronica (LVEF < 40%, NYHA clase II/III, probada en ACEI/ARA, bloqueador beta, diureticos o digoxina con dosis estables de estos medicamentos durante 1 mes) para ser inscritos y asignados al azar en 4 grupos de dosis con 16 pacientes en cada grupo (vease la Tabla 13).

Tabla 13. Grupos de dosis y regimen de dosificacion

Dosis 0 jg/kg/dfa 0,3 jg/kg/dfa 0,6 jg/kg/dfa 1,2 jg/kg/dfa

Administracion Infusion intravenosa

Volumen 50 ml

Curso 10 horas al dfa, durante 10 dfas consecutivos

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10

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30

35

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45

50

55

Procedimientos del estudio

1) Seleccion y valor de referencia:

• Obtencion del formulario de consentimiento informado por escrito;

• Demograffa;

• Recoger los antecedentes personales patologicos;

• Examen ffsico;

• Analisis de sangre/orina de rutina, analisis bioqmmico de sangre;

• Prueba de coagulacion de la sangre: APTT, PT;

• NT-proBNP;

• ECG;

• Clasificacion de la NYHA;

• Cardiograma ultrasonico;

• Radiograffa de torax;

• IRM;

• Doppler tisular (mama, tffgado, vesfcula biliar, rinon, glandula suprarrenal, pancreas, bazo, ovario, utero, prostata);

• Prueba de embarazo en orina (mujeres en edad de procrear);

• Evaluacion disnea en la fase de reposo;

• Calidad de vida;

• Prueba de marcha de seis minutos;

• Comprobar los criterios de inclusion/exclusion;

• Volumen de orina en 24 horas;

• Registrar los efectos secundarios y efectos secundarios graves;

• Registrar las medicaciones simultaneas.

2) 1er a 10° dfa de administracion de medicamentos

• ECG;

• Administracion del farmaco del estudio;

• Volumen de orina en 24 horas;

• Registrar los efectos secundarios y efectos secundarios graves;

• Registrar las medicaciones simultaneas.

3) 11° a 13° dfa del estudio

• Examen ffsico;

• ECG;

• Analisis de sangre/orina de rutina, analisis bioqmmico de sangre;

• Prueba de coagulacion de la sangre: APTT, PT;

• NT-proBNP;

• Prueba de embarazo en orina (mujeres en edad de procrear);

• Calidad de vida;

• Prueba de marcha de seis minutos;

• IRM;

• Clasificacion de la NYHA;

• Evaluacion de disnea en fase de reposo;

• Volumen de orina en 24 horas;

• Registrar los efectos secundarios y efectos secundarios graves;

• Registrar las medicaciones simultaneas.

4) 30° y 90° dfa del estudio

• Examen ffsico;

• Analisis de sangre/orina de rutina, analisis bioqmmico de sangre;

• Prueba de coagulacion de la sangre: APTT, PT;

• NT-proBNP;

• ECG;

• Radiograffa de torax;

• Prueba de marcha de seis minutos;

• IRM;

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10

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20

25

• Clasificacion de la NYHA;

• Evaluacion de disnea en fase de reposo;

• Calidad de vida;

• Registrar los efectos secundarios y efectos secundarios graves;

• Registrar las medicaciones simultaneas.

Resultados y Analisis

Cuarenta pacientes completaron el estudio. El criterio principal de valoracion de la eficacia es los parametros de la funcion del corazon (LVEf, LVEDV y LVESV) el 30° dfa. En cuanto a la LVEF, el valor medio de la LVEF se reduce desde 21,54% al valor de referencia a 20,93% el 30° dfa en el grupo de placebo. Mientras que en el grupo de 0,3 g/kg/dfa, el valor medio de LVEF ha mejorado ligeramente desde 25,08% de referencia a 26,61%, el incremento porcentual es 4,88%. Y en el grupo de 0,6 mg/kg/dfa, el valor medio de la LVEF se incrementa significativamente desde 23,03% de referencia hasta 28,01% el dfa 30, el incremento porcentual es 27,11% (vease la Tabla 14).

En cuanto a LVEDV, el valor medio de LVEDV ha aumentado desde 392,16 ml al inicio hasta 413,35 ml el 30° dfa en el grupo de placebo, con el incremento porcentual de 5,93%. Mientras que en el grupo de 0,3 jg/kgMa, el valor medio de lVeDV disminuyo ligeramente desde 333,62 ml al inicio hasta 323,22 ml el 30° dfa, con 3,28% de disminucion porcentual . En el grupo de 0,6 pg/kg/dfa y 1,2 pg/kg/dfa, el valor medio de LVEDV disminuyo significativamente desde 408,51 ml y 397,04 ml al inicio hasta 386,89 ml y 374,46 ml el 30° dfa, respectivamente, ambos con la disminucion porcentual de mas del 5% (vease la Tabla 15).

Tabla 14. Valor de LVEF antes y despues del tratamiento

: Grupo A (Placebo) n = 10 Grupo B 0,3 |jg/kg/dfa n = 11 Grupo C 0,6 jg/kg/dfa n = 11 Grupo D 1,2 jg/kg/dfa n = 8

Valor de referencia (%): 21,54 ± 4,73 25,08 ± 7,64 23,03 ± 10,23 22,64 ± 4,24

30° dfa (%): 20,93 ± 8,53 26,61 ± 9,68 28,01 ± 11,27 22,01 ± 7,21

ALVEF (%): -0,61 ± 8,22 1,53 ± 3,81 4,98 ± 5,37 -0,63 ± 4,34

Porcentaje cambiado (%): -1,39 ± 33,34 4,88 ± 17,07 27,11 ± 31,12 -4,01 ± 19,42

Tabla 15. Valor de LVEDV antes y despues del tratamiento

: Grupo A (Placebo) n = 10 Grupo B 0,3 jg/kg/dfa n = 11 Grupo C 0,6 jg/kg/dfa n = 11 Grupo D 1,2 jg/kg/dfa n = 8

Valor de referencia (ml): 392,16 ± 107,38 333,62 ± 106,14 408,51 ± 142,85 397,04 ± 86,94

30° dfa (ml): 413,35 ± 143,98 323,22 ± 111,86 386,89 ± 150,14 374,46 ± 84,47

ALVEDV (ml): 21,20 ± 108,13 -10,40 ± 33,19 -21,63 ± 42,72 -22,58 ± 37,72

Porcentaje cambiado (%): 5,93 ± 31,48 -3,28 ± 11,34 -5,64 ± 10,03 -5,41 ± 8,53

El resultado de LVESV es similar al de LVEDV, en el grupo de placebo, el valor medio de LVESV aumento desde 310,54 ml al inicio hasta 335,78 ml el 30° dfa, con el aumento porcentual del 9,45%. Mientras que en cada grupo de tratamiento con neuregulina recombinada, el valor medio de LVESV disminuyo. Para el grupo de 0,6 g/kg/dfa como ejemplo, el valor medio de LVESV disminuyo desde 325,02 ml al inicio hasta 291,71 ml el 30° dfa, con la disminucion porcentual del 11,58% (vease la Tabla 16).

Tabla 16. Valor de LVESV antes y despues del tratamiento

Valor de referencia (ml): 310,54 ± 97,54 254,85 ± 100,86 325,02 ± 142,70 308,46 ± 74,37

30° dfa (ml): 335,78 ± 145,37 244,01 ± 110,30 291,71 ± 147,66 292,22 ± 69,20

ALVESV (ml): 25,24 ± 119,19 -10,84 ± 25,10 -33,31 ± 44,54 -16,24 ± 20,89

Porcentaje cambiado (%): 9,45 ± 48,04 -5,33 ± 12,89 -11,58 ± 12,74 -5,01 ± 6,77

NT-proBNP es un importante factor pronostico independiente para la tasa de supervivencia de los pacientes con insuficiencia cardfaca cronica. A partir del resultado, el valor de NT-proBNP en el grupo de placebo y 1,2 jg/kgMa el 30° dfa y el 90° dfa aumentaron significativamente en comparacion con el valor de referencia. Mientras que en el 5 grupo de 0,3 jg/kg^a y 0,6 jg/kg^a, muestra una tendencia a la disminucion (vease la Tabla 17), lo que sugiere un mejor pronostico.

Tabla 17. Cambio de NT-proBNP el 30° dfa y el 90° dfa

: Grupo A (Placebo) n = 10 Grupo B 0,3 jg/kg/dfa n = 11 Grupo C 0,6 jg/kg/dfa n = 11 Grupo D 1,2 mjg/kg/dfa n = 8

Valor de referencia (fmol/ml): 1013 ± 634,5 1732 ± 1.638,4 1403 ± 1.755,2 859 ± 460,7

30° dfa (fmol/ml): 811 ± 436,6 1631 ± 1222,1 1021 ± 1045,9 822 ± 349,4

Porcentaje cambiado (%): 6,54 ± 74,29 25,68 ± 72,09 -4,27 ± 41,37 49,42 ± 118,19

90° dfa (fmol/ml): 869 ± 440,9 1663 ± 1664,1 1112 ± 1418,5 847 ± 316,2

Porcentaje cambiado (%): 26,79 ± 102,61 -3,5 ± 60,07 8,66 ± 74,83 45,99 ± 97,45

Hubo efectos secundarios en cada grupo, especialmente, en el grupo de 1,2 jg/kg^a, el 100% de los pacientes en el grupo experimentaron al menos en efecto secundario. Los E.S. descritos con mayor frecuencia fueron nauseas, 10 falta de apetito y cefalea. No hubo efectos secundarios graves descritos (vease la Tabla 18). La mayona de los efectos secundarios comunicados se aliviaron sin tratamiento y el resto se aliviaron despues del cese de la administracion del farmaco del estudio o mediante tratamiento sintomatico y sin secuelas.

No hubo anomalfas clmicas significativas identificadas referentes a los signos vitales y al examen ffsico.

A partir de los resultados de eficacia y seguridad, se puede encontrar que en la dosis de 0,3 a 1,2 jg/kgMa (6-24 15 uE/kg/dfa o 0,04 a 0,17 nmol/kg/dfa), la neuregulina-1 humana recombinada es eficaz y segura para el tratamiento de la insuficiencia cardfaca cronica.

Tabla 18. Incidencia de E.S. y E.S.G. en cada grupo

: Grupo de dosis Con Sin Incidencia (%)

E.S.: Grupo A (n = 11) 6 5 54,5

: Grupo B (n = 11) 7 4 63,64

: Grupo C (n = 12) 8 4 66,67

E.S.G.: Grupo D (n = 10) 10 0 100

: Grupo A (n = 11) 0 11 0

: Grupo B (n = 11) 0 11 0

: Grupo C (n = 12) 0 12 0

: Grupo D (n = 10) 0 10 0

A partir de los resultados de estos estudios clmicos, se puede llegar una conclusion de que en la dosis de 0,3-2,4 jg/kgMa (6-48 UE/kg/dfa o 0,04-0,34 nmol/kg/dfa), la neuregulina-1 humana recombinada es tolerante y eficaz para 20 el tratamiento de la insuficiencia cardfaca cronica.

Claims

5

10

15

20

25

30

REIVINDICACIONES

1. Protema neuregulina 1 para su utilizacion en un metodo para la prevencion, el tratamiento o el retardo de la insuficiencia cardfaca en mai^eras que la necesitan, en donde el metodo comprende la administracion al mairnfero que la necesita de dicha protema neuregulina 1 en una cantidad:

a) de aproximadamente 0,3 |jg a aproximadamente 2,4 jg/kgMa;

b) de aproximadamente 6 UE a aproximadamente 48 UE/kgMa; o

c) de aproximadamente 0,04 nmol a aproximadamente 0,34 nmol/kgMa.
2. La protema neuregulina 1 para la utilizacion de la reivindicacion 1, en donde dicha protema neuregulina 1 es la isoforma p2 de neuregulina 1.
3. La protema neuregulina 1 para la utilizacion de la reivindicacion 1, en donde dicha protema neuregulina 1 comprende la secuencia de aminoacidos expuesta en la SEQ. ID. n°: 1.
4. La protema neuregulina 1 para la utilizacion de la reivindicacion 1, en donde dicha protema neuregulina 1 consiste en la secuencia de aminoacidos expuesta en la SEQ. ID. n°: 1.
5. La protema neuregulina 1 para la utilizacion de la reivindicacion 1, en donde dicha protema neuregulina 1 se administra al marnffero por via intravenosa.
6. La protema neuregulina 1 para la utilizacion de la reivindicacion 1, en donde dicha protema neuregulina 1 se administra al mamffero durante uno o varios dfas.
7. La protema neuregulina 1 para la utilizacion de la reivindicacion 6, en donde dicha protema neuregulina 1 se administra al mamffero durante al menos 10 dfas.
8. La protema neuregulina 1 para la utilizacion de la reivindicacion 7, en donde dicha protema neuregulina 1 se administra al mamffero de 10 minutos a 12 horas al dfa.
9. La protema neuregulina 1 para la utilizacion de la reivindicacion 8, en donde dicha protema neuregulina 1 se administra al mamffero 10 horas al dfa durante 10 dfas.
10. La protema neuregulina 1 para la utilizacion de la reivindicacion 1, en donde el mamffero tiene o se sospecha que tiene insuficiencia cardfaca.
11. La protema neuregulina 1 para la utilizacion de la reivindicacion 10, en donde la insuficiencia cardfaca es causada por uno o mas factores isquemicos, congenitos, reumaticos, idiopaticos, vmcos o toxicos.
12. La protema neuregulina 1 para la utilizacion de la reivindicacion 1, en donde el mamffero es un ser humano.