JP2017020979A - 乳がんの検査方法 - Google Patents
乳がんの検査方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017020979A JP2017020979A JP2015140888A JP2015140888A JP2017020979A JP 2017020979 A JP2017020979 A JP 2017020979A JP 2015140888 A JP2015140888 A JP 2015140888A JP 2015140888 A JP2015140888 A JP 2015140888A JP 2017020979 A JP2017020979 A JP 2017020979A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- polyamines
- breast cancer
- acetylspermidine
- sample
- saliva
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 25
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 25
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title abstract description 3
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 claims abstract description 41
- MQTAVJHICJWXBR-UHFFFAOYSA-N N(1)-acetylspermidine Chemical compound CC(=O)NCCCNCCCCN MQTAVJHICJWXBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- VHRGRCVQAFMJIZ-UHFFFAOYSA-N cadaverine Chemical compound NCCCCCN VHRGRCVQAFMJIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical compound NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 claims abstract description 12
- GUNURVWAJRRUAV-UHFFFAOYSA-N N(1)-acetylspermine Chemical compound CC(=O)NCCCNCCCCNCCCN GUNURVWAJRRUAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- FONIWJIDLJEJTL-UHFFFAOYSA-N N(8)-acetylspermidine Chemical compound CC(=O)NCCCCNCCCN FONIWJIDLJEJTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 238000007689 inspection Methods 0.000 claims description 4
- 238000010998 test method Methods 0.000 claims description 4
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 18
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 16
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- YZWANFXENNWOOR-UHFFFAOYSA-N 7-fluoro-n,n-dimethyl-2,1,3-benzoxadiazole-4-sulfonamide Chemical compound CN(C)S(=O)(=O)C1=CC=C(F)C2=NON=C12 YZWANFXENNWOOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N hexane-1,6-diamine Chemical compound NCCCCCCN NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 6
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 238000000513 principal component analysis Methods 0.000 description 4
- -1 N, N-dimethylaminosulfonyl Chemical group 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000002013 hydrophilic interaction chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 3
- QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N Diacetyl Chemical group CC(=O)C(C)=O QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQNXERHVLXYXRO-UHFFFAOYSA-N Diacetylspermine Chemical compound Cl.Cl.CC(=O)NCCCNCCCCNCCCNC(C)=O NQNXERHVLXYXRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KLZGKIDSEJWEDW-UHFFFAOYSA-N N-acetylputrescine Chemical compound CC(=O)NCCCCN KLZGKIDSEJWEDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000003544 deproteinization Effects 0.000 description 2
- SKQLBVJMDVTJMX-UHFFFAOYSA-N diacetylspermidine Chemical compound CC(=O)N(C(C)=O)CCCCNCCCN SKQLBVJMDVTJMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002101 electrospray ionisation tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 238000002553 single reaction monitoring Methods 0.000 description 2
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 description 2
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 2
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- SLLFVLKNXABYGI-UHFFFAOYSA-N 1,2,3-benzoxadiazole Chemical compound C1=CC=C2ON=NC2=C1 SLLFVLKNXABYGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 150000007824 aliphatic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000013095 identification testing Methods 0.000 description 1
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 238000009607 mammography Methods 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000002705 metabolomic analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002559 palpation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- ZNZJJSYHZBXQSM-UHFFFAOYSA-N propane-2,2-diamine Chemical compound CC(C)(N)N ZNZJJSYHZBXQSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57415—Specifically defined cancers of breast
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2560/00—Chemical aspects of mass spectrometric analysis of biological material
Abstract
Description
(1)被験者から採取された試料を分析して、ポリアミン及びそのモノ又はジアセチル体から選ばれるポリアミン類であって、N1−アセチルスペルミジン(N1−AcSPD)を含む複数種類のポリアミン類の割合から乳がんか否かを判定する乳がんの検査方法。
(2)前記ポリアミン類が、少なくともスペルミン(SPM)、N−アセチルスペルミン(N−AcSPM)、スペルミジン(SPD)、N1−アセチルスペルミジン(N1−AcSPD)、N8−アセチルスペルミジン(N8−AcSPD)及びカダベリン(CAD)を含む前記(1)に記載の検査方法。
(3)被験者から採取された試料が唾液試料である前記(1)又は(2)に記載の検査方法。
試料は使用前にそれぞれの試料に応じて前処理をすることが好ましい。具体的には、唾液試料は使用前に前処理、例えば、アセトニトリル等の有機溶媒による希釈、遠心分離による除タンパクをすることが好ましい。通常、除タンパク後の上清を分析に用いる。
本発明の対象となるポリアミン類としては、N1−アセチルスペルミジン(N1−AcSPD)を含む複数種類のポリアミン類であれば特に制限はなく、N1−アセチルスペルミジン(N1−AcSPD)以外のポリアミン類としては、例えばジアミノプロパン(DAP)、プトレシン(PUT)、N−アセチルプトレシン(N−AcPUT)、カダベリン(CAD)、スペルミジン(SPD)、N8−アセチルスペルミジン(N8−AcSPD)、ジアセチルスペルミジン(DAcSPD)、スペルミン(SPM)、N−アセチルスペルミン(N−AcSPM)、ジアセチルスペルミン(DAcSPM)が挙げられる。
(Yは判別得点を表し、Xは6種のポリアミン類の合計を100%としたときの各ポリアミン類の割合を表し、Aは係数「0.5」、Bは係数「−3」、Cは係数「−0.15」、Dは係数「−3.5」、Eは係数「0.5」、Fは係数「0.04」を表す。)
(実施例1)
個人間の差が小さくなるよう、健常者及び乳がん患者の唾液(初発群、再発群)各20検体を5検体ずつプールしたサンプルを用意し、2倍量のアセトニトリルを加え、遠心分離して除タンパク後の上清を0.45μmフィルターでろ過した。この上清10μLをLC−TOF−MS(Waters)にインジェクションし、分析した。カラムには逆相(RP)系のDiscoveryTMHS F5(SUPELCO)、HILIC系のTSK−Gel Amide80(東ソー)を用い、ESIポジティブ及びネガティブモードの計4系列で測定した。質量範囲はm/z100〜1000、保持時間はRP→0〜20分、HILIC→0〜25分とした。得られたクロマトグラムをMarkerLynx(Waters)で解析した。ポリアミン類の測定には、Anal. Chem. 2013, 85, 11835-11842(非特許文献2)に記載の4−(N,N−ジメチルアミノスルホニル)−7−フルオロ−2,1,3−ベンゾキサジアゾール(DBD−F)を用いる誘導体化によるLC−MS/MS(Xevo TQ−S;Waters)法を用いた。
従って、他のポリアミン類の増減を定量分析することにより更なる情報が得られるのではないかと考え、これらも含んだ一斉分析に着手した。
唾液試料30μL、内部標準(IS)としての1,6−ジアミノヘキサン(DAH)、及びアセトニトリル120μLの混合液を3000gで10分間遠心分離して除タンパクした上清120μLを溶媒留去した。残渣を0.1Mホウ砂水溶液やトリエチルアミン等の塩基に溶解し、4−(N,N−ジメチルアミノスルホニル)−7−フルオロ−2,1,3−ベンゾキサジアゾール(DBD−F)と反応させて誘導体化した後、UPLC−ESI−MS/MSで分析した。
ほとんど全てのポリアミン類が患者群で高くなっている傾向が見られ、特にスペルミン系、スペルミジン系の代謝物にはt検定において有意な差があることが明らかになった。
例えば、N1−アセチルスペルミジン(N1−AcSPD)の割合は乳がん患者初発群で多く、プトレシン(PUT)の割合は健常者群で多い。
従って、割合の値を用いたROC解析を行い、診断指標としてのカットオフ値を設定することとした。
視覚的には十分差があったように見えたが、いずれのポリアミン類も軒並み65%程度とマーカーとしては信頼に値しないものであった。
この結果を受け、特に感度、特異度の和が大きかったものにしぼり、判別分析を行い、精度の高い診断が可能とならないかと検討した。
判別分析で得られた結果を図12に示す。
この判別式が母集団に近いモデルなのかを回帰統計値で確かめた結果、重相関係数は0.5以上またこれに関する分散分析のP値は0.1%程度と十分有用性が得られる結果となった。
以上より、本発明の検査方法は生体試料を用いる乳がん診断に適用できると考えられる。
Claims (3)
- 被験者から採取された試料を分析して、ポリアミン及びそのモノ又はジアセチル体から選ばれるポリアミン類であって、N1−アセチルスペルミジンを含む複数種類のポリアミン類の割合から乳がんか否かを判定する乳がんの検査方法。
- 前記ポリアミン類が、少なくともスペルミン、N−アセチルスペルミン、スペルミジン、N1−アセチルスペルミジン、N8−アセチルスペルミジン及びカダベリン(CAD)を含む請求項1記載の検査方法。
- 被験者から採取された試料が唾液試料である請求項1又は2記載の検査方法。
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2015140888A JP6614435B2 (ja) | 2015-07-14 | 2015-07-14 | 乳がんの検査方法 |
US15/209,005 US20170016901A1 (en) | 2015-07-14 | 2016-07-13 | Examination method of breast cancer |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2015140888A JP6614435B2 (ja) | 2015-07-14 | 2015-07-14 | 乳がんの検査方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017020979A true JP2017020979A (ja) | 2017-01-26 |
JP6614435B2 JP6614435B2 (ja) | 2019-12-04 |
Family
ID=57776520
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015140888A Active JP6614435B2 (ja) | 2015-07-14 | 2015-07-14 | 乳がんの検査方法 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20170016901A1 (ja) |
JP (1) | JP6614435B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2020025989A1 (en) | 2018-07-31 | 2020-02-06 | Debreceni Egyetem | Treatment and diagnosis of breast cancer |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002281999A (ja) * | 2001-03-29 | 2002-10-02 | Kazue Igarashi | 尿毒症治療用化合物、その選別方法および該化合物を含有する尿毒症治療剤 |
WO2015064594A1 (ja) * | 2013-10-28 | 2015-05-07 | 学校法人 慶應義塾 | 癌用唾液バイオマーカー、その測定方法、装置、及び、癌用唾液バイオマーカーの特定方法 |
-
2015
- 2015-07-14 JP JP2015140888A patent/JP6614435B2/ja active Active
-
2016
- 2016-07-13 US US15/209,005 patent/US20170016901A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002281999A (ja) * | 2001-03-29 | 2002-10-02 | Kazue Igarashi | 尿毒症治療用化合物、その選別方法および該化合物を含有する尿毒症治療剤 |
WO2015064594A1 (ja) * | 2013-10-28 | 2015-05-07 | 学校法人 慶應義塾 | 癌用唾液バイオマーカー、その測定方法、装置、及び、癌用唾液バイオマーカーの特定方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
L. PERSSON, E. ROSENGREN: "Increased formation of N1-acetylspermidine in human breast cancer", CANCER LETTERS, vol. 45, no. 2, JPN6019006356, 1989, pages 83 - 86, XP026176930, ISSN: 0003985211, DOI: 10.1016/0304-3835(89)90140-7 * |
TSUTSUI H ET AL.: "High-throughput LC-MS/MS based simultaneous determination of polyamines including N-acetylated forms", ANALYTICAL CHEMISTRY, vol. 85, no. 24, JPN6019006354, 2013, pages 11835 - 11842, ISSN: 0003985210 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP6614435B2 (ja) | 2019-12-04 |
US20170016901A1 (en) | 2017-01-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US10006925B2 (en) | Methods and systems for metabolite and/or lipid-based detection of colorectal cancer and/or adenomatous polyps | |
Belgrave et al. | Assessment of serum amyloid A testing of horses and its clinical application in a specialized equine practice | |
CN102027373B (zh) | 发现用于前列腺癌诊断和治疗之生物标志物和药物靶标的方法及其确立的生物标志物测定 | |
JP6670288B2 (ja) | 化学療法標的に対するsrmアッセイ | |
CN110196335A (zh) | 与肾功能相关的生物标记及其使用方法 | |
WO2015182580A1 (ja) | 大腸がんの転移検出方法 | |
JP2019058171A (ja) | Pd−l1に対するsrmアッセイ | |
KR101516086B1 (ko) | 대사체 분석을 이용한 류마티스 관절염 진단방법 | |
JP6614435B2 (ja) | 乳がんの検査方法 | |
JP6128631B2 (ja) | 糖尿病性腎症鑑別用マーカー及びその用途 | |
Jin et al. | 2‐D DIGE and MALDI‐TOF‐MS analysis of the serum proteome in human osteosarcoma | |
JP5867834B2 (ja) | 肺癌マーカー補体C3dg分子及び肺癌マーカーの分析方法 | |
EP2764082A1 (en) | Srm/mrm assay for the ephrin type-a receptor 2 protein | |
Lin et al. | Comparison of breast cancer tumor marker test results: A retrospective analysis of paired CA 15-3 and CA 27.29 testing at a national reference laboratory | |
KR101552011B1 (ko) | 리소포스파티딜콜린 및 호모시스테인산을 포함하는 난소암 진단용 조성물 및 이를 사용하여 난소암을 진단하는 방법 | |
US20220221460A1 (en) | Method of quantifying her2 in breast cancer sample by mass spectrometry and scoring her2 status using the same | |
US9309554B2 (en) | SRM/MRM assay for the fatty acid synthase protein | |
KR102112206B1 (ko) | 혈흔진단용 바이오마커 및 이의 용도 | |
CN111060585B (zh) | 一种血浆外泌体质谱峰及其运用 | |
CA3065333A1 (en) | Predicting gastric cancer treatment outcome | |
JP5376370B2 (ja) | 肝細胞がんタンパク質マーカーとそれを用いた肝細胞がんの検出方法 | |
CN116165385A (zh) | 用于肝癌诊断的血清代谢标志物及其筛选方法和应用 | |
CN111366650A (zh) | 神经退行性疾病内源性小分子早期预测标志物及应用 | |
Unger et al. | Pre-analytical conditions strongly influence molecular pattern in clinical biospecimen | |
Gim et al. | A normalization method for multiple reaction monitoring (MRM) data |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150731 |
|
A80 | Written request to apply exceptions to lack of novelty of invention |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A80 Effective date: 20150805 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20180608 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20180608 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180704 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180705 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180920 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20190130 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190304 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190425 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20191003 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20191023 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6614435 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |