JP2017002069A - 脂質動員特性を有する糖タンパク質およびその治療的使用法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】特定の配列を有するポリペプチド{亜鉛−α2−糖蛋白質(ZAG)}又はその機能的断片を投与することにより、高血糖症に関連する症状を改善するための組成物、及び該組成物による治療方法。該ポリペプチドは、静脈内に、皮下に、腹腔内に、又は経口的に投与されることが好ましく、該ポリペプチドは、β3作動物質又はβ3-アドレナリン作動性受容体拮抗物質と組み合わせて投与されることが好ましい高血糖症に関連する症状の改善する方法。
【選択図】なし
Description
本発明は、全体として、高血糖症および肥満の薬剤および治療、ならびに、より具体的には、高血糖症に関連する症状を改善するための組成物および方法に関する。
糖尿病は、糖尿病患者の高い血中グルコースレベルによって数ある中でも顕在化するグルコース代謝障害を特徴とする。根底にある欠陥によって、糖尿病は2つの主要なグループに分類される。1型糖尿病またはインスリン依存性糖尿病(IDDM)は、患者が膵臓腺中のインスリン産生β細胞を欠く場合に発生する。2型糖尿病またはインスリン非依存性糖尿病(NIDDM)は、β細胞機能が障害されインスリン作用が変化した患者において発生する。
(図1B)培地におけるZAGの発現および精製されたZAGを示すウェスタンブロットの結果を示す絵図面である。
(図1C)体重減少を経たMAC16マウスの脂肪組織および肝臓組織におけるZAG mRNAレベルを示すグラフ図である。P<0.01。
(図1D)イソプレナリン(Iso)およびZAGに応答した、非肥満マウス(■)およびob/obマウス(□)に由来する精巣上体脂肪細胞における脂肪分解の結果を示すグラフ図である。非肥満マウスとの差を*p<0.05、**p<0.01、および***p<0.001として示す。
(図1E)処置無し(■)、イソプレナリン(10μM)(□)、または
のいずれかを施した肥満(ob/ob)マウスおよび非肥満(non ob)マウスに由来する精巣上体(ep)沈着物、皮下(s.c.)沈着物、および内臓(vis)沈着物から得た脂肪細胞における脂肪分解の結果を示すグラフ図である。精巣上体脂肪細胞との差を**p<0.01として示す。
(図1F)方法において説明するような、PBS(◆)と比較した、ob/obマウスの体重に対するZAG(■)の効果を示すグラフ図である。0時点かつPBS対照との体重差を***p<0.001として示す。
(図1G)PBS対照(■)と比較した、eに示すマウスの体温に対するZAG(□)の効果を示すグラフ図である。対照との差を***p<0.001として示す。
(図2A)ZAGで処置したob/obマウスの耐糖能、脂肪細胞および腓腹筋中へのグルコース取込みを示すグラフ図である。グルコース(2g/kg)の静脈内投与後3日間ZAG(■)またはPBS(◆)のいずれかで処置した、摂食状態のob/obマウスの血漿グルコースレベル。PBSと比べてp<0.001。グルコース投与後、間隔を空けて尾静脈から血液試料を採取し、グルコースおよびインスリンの測定のために使用した。
(図2B)グルコース(1g/kg)の経口投与後にZAGで処置したob/obマウスの血漿インスリンレベルを示すグラフ図である。PBSと比べてp<0.001。
(図2C)0nMインスリン(■)、1nMインスリン(□)、または
の存在下で5日間ZAGで処置したob/obマウスの精巣上体(ep)脂肪細胞、内臓(vis)脂肪細胞、および皮下(s.c.)脂肪細胞中へのグルコース取込みを示すグラフ図である。ZAGの存在下での差を***p<0.001として示す。
(図2D)インスリン(100nM)の不在下または存在下で5日間、ZAGまたはPBSのいずれかで処置したob/obマウスの腓腹筋中への2-デオキシ-D-グルコース取込みを示すグラフ図である。インスリンの存在下での差を*p<0.05または**p<0.01として示し、ZAGの存在下での差を***p<0.001として示す。
(図2E)ob/obマウスの骨格筋におけるタンパク質の合成および分解に対するZAGの影響を示す絵図面である。ob/obマウスを5日間処置した後、骨格筋を取り出し、GLUT4発現に関してウェスタンブロットを行った。
(図3A)ob/obマウスの骨格筋におけるタンパク質の合成および分解に対するZAGの影響を示すグラフ図である。ob/obマウスを5日間処置した後、骨格筋を取り出し、タンパク質合成の測定のために使用した。PBS対照または非肥満動物との差を***p<0.001として示す。
(図3B)ob/obマウスの骨格筋におけるタンパク質の合成および分解に対するZAGの影響を示すグラフ図である。ob/obマウスを5日間処置した後、骨格筋を取り出し、タンパク質分解の測定のために使用した。PBS対照または非肥満動物との差を***p<0.001として示す。
(図3C)ob/obマウスの骨格筋におけるタンパク質の合成および分解に対するZAGの影響を示すグラフ図である。ob/obマウスを5日間処置した後、骨格筋を取り出し、キモトリプシン様酵素活性の測定のために使用した。PBS対照または非肥満動物との差を***p<0.001として示す。
(図3D)ob/obマウスの骨格筋におけるタンパク質の合成および分解に対するZAGの影響を示す絵図面である。ob/obマウスを5日間処置した後、骨格筋を取り出し、20Sプロテアソームαサブユニットの発現に関してウェスタンブロットを行った。
(図3E)ob/obマウスの骨格筋におけるタンパク質の合成および分解に対するZAGの影響を示す絵図面である。ob/obマウスを5日間処置した後、骨格筋を取り出し、p42発現に関してウェスタンブロットを行った。
(図3F)ob/obマウスの骨格筋におけるタンパク質の合成および分解に対するZAGの影響を示す絵図面である。ob/obマウスを5日間処置した後、骨格筋を取り出し、ミオシン発現に関してウェスタンブロットを行った。
(図3G)ob/obマウスの骨格筋におけるタンパク質の合成および分解に対するZAGの影響を示す絵図面である。ob/obマウスを5日間処置した後、骨格筋を取り出し、アクチン発現に関してウェスタンブロットを行った。
(図4A)PBSまたはZAGのいずれかで5日間処置した後のob/obマウスの腓腹筋中のホスホPKRをウェスタンブロットすることにより、骨格筋中の異化シグナル伝達経路に対するZAGの影響を示す絵図面である。全形態(total form)のこれらのタンパク質は、ローディングコントロールとして役立つ。PBS対照との差を***p<0.001として示し、非肥満マウスとの差を#p<0.001として示す。
(図4B)PBSまたはZAGのいずれかで5日間処置した後のob/obマウスの腓腹筋中のホスホeIF2aをウェスタンブロットすることにより、骨格筋中の異化シグナル伝達経路に対するZAGの影響を示す絵図面である。全形態のこれらのタンパク質は、ローディングコントロールとして役立つ。PBS対照との差を***p<0.001として示し、非肥満マウスとの差を#p<0.001として示す。
(図4C)PBSまたはZAGのいずれかで5日間処置した後のob/obマウスの腓腹筋中のホスホPLA2をウェスタンブロットすることにより、骨格筋中の異化シグナル伝達経路に対するZAGの影響を示す絵図面である。全形態のこれらのタンパク質は、ローディングコントロールとして役立つ。PBS対照との差を***p<0.001として示し、非肥満マウスとの差を#p<0.001として示す。
(図4D)PBSまたはZAGのいずれかで5日間処置した後のob/obマウスの腓腹筋中のホスホp38MAPKをウェスタンブロットすることにより、骨格筋中の異化シグナル伝達経路に対するZAGの影響を示す絵図面である。全形態のこれらのタンパク質は、ローディングコントロールとして役立つ。PBS対照との差を***p<0.001として示し、非肥満マウスとの差を#p<0.001として示す。
(図4E)PBSまたはZAGのいずれかで5日間処置した後のob/obマウスの腓腹筋中のカスパーゼ-3(■)およびカスパーゼ-8(□)の活性に基づいて、骨格筋中の異化シグナル伝達経路に対するZAGの影響を示すグラフ図である。
(図5A)ZAGに応答したHSLおよびATGLの発現を示す絵図面である。ウェスタンブロットは、処置無し(Con)の3時間後、またはイソプレナリン(10μM)単独もしくはZAG(0.46μM)単独で処置の3時間後、またはZAGによる5日間処置後のPD98059(25μM)存在下3時間後の非肥満マウスの脂肪細胞中のホスホHSLの発現を示す。
(図5B)ZAGによる5日間処置後の精巣上体(ep)脂肪細胞の免疫ブロットによってHSLの発現を示す絵図面である。
(図5C)ZAGによる5日間処置後の皮下(sc)脂肪細胞の免疫ブロットによってHSLの発現を示す絵図面である。
(図5D)ZAGによる5日間処置後の内臓(vis)脂肪細胞の免疫ブロットによってHSLの発現を示す絵図面である。
(図5E)ZAGによる5日間処置後の精巣上体脂肪細胞におけるATGL発現を示す絵図面である。
(図5F)ZAGによる5日間処置後の皮下脂肪細胞におけるATGL発現を示す絵図面である。
(図5G)ZAGによる5日間処置後の内臓脂肪細胞におけるATGL発現を示す絵図面である。
(図5H)ZAGによる5日間処置後の精巣上体脂肪細胞におけるERK発現を示す絵図面である。
(図5I)ZAGによる5日間処置後の皮下脂肪細胞におけるERK発現を示す絵図面である。
(図5J)ZAGによる5日間処置後の内臓脂肪細胞におけるERK発現を示す絵図面である。
(図5K)PBSまたはZAGのいずれかで5日間処置したob/obマウスに由来する精巣上体(ep)沈着物、皮下(sc)沈着物、および内臓(vis)沈着物から得た脂肪細胞の、BRL37344の脂肪分解作用に対する応答を示すグラフ図である。PBS対照との差を***p<0.001として示し、PD98059存在下での差を#p<0.001として示す。
(図6A)ZAGによる5日間のob/obマウス処置が、WAT中のZAGおよびHSL、BAT中のUCP1およびUCP3、ならびに腓腹筋中のUCP3の発現に与える影響を示す絵図面である。ep、sc、およびvisの脂肪細胞中のZAG発現を示すウェスタンブロット。0日は、脂肪細胞がマウスから採取された日を表す。
(図6B)方法において説明する通りにRMPI培地中に懸濁させた精巣上体脂肪細胞中のZAG発現を示す絵図面である。次いで、これらの試料を一日間隔で取り出し、ZAG発現に関してウェスタンブロットした。0日は、脂肪細胞がマウスから採取された日を表す。
(図6C)方法において説明する通りにRMPI培地中に懸濁させた精巣上体脂肪細胞中のHSL発現を示す絵図面である。次いで、これらの試料を一日間隔で取り出し、HSL発現に関してウェスタンブロットした。0日は、脂肪細胞がマウスから採取された日を表す。
(図6D)マウスから採取されたBAT中のUCP1発現を示す絵図面である。PBS処置マウスとの差を***p<0.001として示す。
(図6E)マウスから採取されたBAT中のUCP3発現を示す絵図面である。PBS処置マウスとの差を***p<0.001として示す。
(図6F)マウスから採取された腓腹筋中のUCP3発現を示す絵図面である。PBS処置マウスとの差を***p<0.001として示す。
(図7A)21日間の研究の間のob/obマウスの体重減少を示すグラフ図である。ZAGは、1日目、4日目、5日目、8日目、13日目、16日目、18日目、および19日目に注射し、PBSは同じ時点に注射した。
(図7B)ZAGで処置する間のob/obマウス(体重80〜90g)の体重変化(g)を示すグラフ図である。
(図7C)21日間の研究の間のob/obマウスの体温上昇を示すグラフ図である。ZAGは、1日目、4日目、5日目、8日目、13日目、16日目、18日目、および19日目に注射し、PBSは同じ時点に注射した。
(図8A)処置の最初の5日間の間の、尿中グルコース排泄の漸進的減少を示すグラフ図である。
(図8B)21日間の研究の間の、尿中グルコース排泄の漸進的減少を示すグラフ図である。
(図9)ZAGで処置されたobマウスおよびZAGで処置されていないobマウスに由来し、最長5日間培養された単離脂肪細胞からの、イソプレナリン(iso)によって促進されたグリセロール放出を示すグラフ図である。
(図10)T. Araki et al. (1988)「Complete amino acid sequence of human plasma Zn-α2-glycoprotein and its homology to histocompatibility antigens」によって公開されている、ヒト血漿Zn-α2-糖タンパク質のアミノ酸配列全体(SEQ ID NO: 1)を示す絵図面である。
(図11)SR59230A(10μM)または抗ZAG抗体(1:1000)(IgG)の不在下または存在下でのイソプレナリン(10μM)と比較して、単離されたラット精巣上体脂肪細胞中のヒトZAGの脂肪分解活性を示すグラフ図である。各値は、5回の別々の調査の平均である。対照との差をb、p<0.01またはc、p<0.001として示し、ZAG単独との差をe、p<0.01またはf、p<0.001として示す。
(図12A)10日間にわたる、雄ウィスターラットの体重に対する、100μl PBS中ZAG(50μg/100g体重(b.w.))(■)またはPBS単独(◆)のいずれかの静脈内連日投与の効果を示すグラフ図である。この実験のプロトコールは方法のセクションで示す。
(図12B)図12Aで説明した通りにZAG(■)またはPBS(◆)のいずれかを投与された雄ウィスターラットの体温を示すグラフ図である。
(図12C)インスリン(60μU/ml)の不在下または存在下で、図12Aに示す通りに、10日間ZAG(白い(open)棒)またはPBS(黒い(closed)棒)のいずれかで10日間処置した後の雄ウィスターラットの精巣上体脂肪細胞中への2-デオキシ-D-グルコースの取込みを示すグラフ図である。
(図12D)インスリン(60μU/ml)の不在下または存在下で、ZAGまたはPBSのいずれかで10日間処置した後の雄ウィスターラットの腓腹筋およびBAT中へのグルコース取込みを示すグラフ図である。ZAG処置動物とPBS処置動物の差をa、p<0.05、b、p<0.01、またはc、p<0.001として示し、インスリンの存在下での差をf、p<0.001として示す。
(図12E)ZAGを投与されたob/obマウスにおける組織Rgを示すグラフ図である。c、PBSと比べてp<0.001。
(図13A)図12に示す通りにPBSまたはZAGのいずれかで10日間処置された雄ウィスターラットのBATにおけるGLUT4発現を示すウェスタンブロットの絵図面である。ZAG処置動物とPBS処置動物の差をc、p<0.001として示す。
(図13B)図12に示す通りにPBSまたはZAGのいずれかで10日間処置された雄ウィスターラットのWATにおけるGLUT4発現を示すウェスタンブロットの絵図面である。ZAG処置動物とPBS処置動物の差をc、p<0.001として示す。
(図13C)図12に示す通りにPBSまたはZAGのいずれかで10日間処置された雄ウィスターラットの腓腹筋におけるGLUT4発現を示すウェスタンブロットの絵図面である。ZAG処置動物とPBS処置動物の差をc、p<0.001として示す。
(図14A)図12に示す通りにPBSまたはZAGのいずれかで10日間処置された雄ウィスターラットのBATにおけるUCP1およびUCP3の発現を示すウェスタンブロットの絵図面である。ZAG処置動物とPBS処置動物の差をc、p<0.001として示す。
(図14B)図12に示す通りにPBSまたはZAGのいずれかで10日間処置された雄ウィスターラットのWATにおけるUCP1およびUCP3の発現を示すウェスタンブロットの絵図面である。ZAG処置動物とPBS処置動物の差をc、p<0.001として示す。
(図15A)図12に示す通りにPBSまたはZAGのいずれかで10日間処置された雄ウィスターラットの精巣上体脂肪組織におけるATGLの発現を示すウェスタンブロットの絵図面である。ZAG処置動物とPBS処置動物の差をc、p<0.001として示す。
(図15B)図12に示す通りにPBSまたはZAGのいずれかで10日間処置された雄ウィスターラットの精巣上体脂肪組織におけるHSLの発現を示すウェスタンブロットの絵図面である。ZAG処置動物とPBS処置動物の差をc、p<0.001として示す。
(図16A)腓腹筋におけるZAG発現を示すウェスタンブロットの絵図面である。組織は、図12に示す通りにPBSまたはZAGのいずれかで10日間処置した雄ウィスターラットから採取した。ZAG処置動物とPBS処置動物の差をc、p<0.001として示す。
(図16B)WATにおけるZAG発現を示すウェスタンブロットの絵図面である。組織は、図12に示す通りにPBSまたはZAGのいずれかで10日間処置した雄ウィスターラットから採取した。ZAG処置動物とPBS処置動物の差をc、p<0.001として示す。
(図16C)BATにおけるZAG発現を示すウェスタンブロットの絵図面である。組織は、図12に示す通りにPBSまたはZAGのいずれかで10日間処置した雄ウィスターラットから採取した。ZAG処置動物とPBS処置動物の差をc、p<0.001として示す。
(図17A)図12に示す通りにPBSまたはZAGのいずれかで10日間処置された雄ウィスターラットの腓腹筋におけるリン酸化型PKRおよび全形態のPKRの発現を示すウェスタンブロットの絵図面である。濃度測定解析は、リン酸化型と全形態の比であり、PBSで処置したラットの場合の値に対する比率(%)として表している。
(図17B)図12に示す通りにPBSまたはZAGのいずれかで10日間処置された雄ウィスターラットの腓腹筋におけるeIF2αの発現を示すウェスタンブロットの絵図面である。濃度測定解析は、リン酸化型と全形態の比であり、PBSで処置したラットの場合の値に対する比率(%)として表している。
(図18A)様々な濃度のグルコースの存在下で、4時間ZAGで処置したC2C12筋管およびZAGで処置しなかったC2C12筋管におけるフェニルアラニン放出を示すグラフ図である。統計学的に有意なcは、対照と比べてP<0.001であり;fは、グルコース単独と比べてP<0.001である。
(図18B)様々な濃度のグルコースの存在下で、4時間ZAGで処置したC2C12筋管およびZAGで処置しなかったC2C12筋管におけるタンパク質合成を示すグラフ図である。統計学的に有意なcは、対照と比べてP<0.001であり;fは、グルコース単独と比べてP<0.001である。
(図19)様々な濃度のグルコースの存在下ならびにSR59230Aの存在下および不在下で、ZAGで処置したC2C12筋管およびZAGで処置しなかったC2C12筋管におけるフェニルアラニン放出を示すグラフ図である。統計学的に有意なbは、対照と比べてP<0.01、cはP<0.001であり;eは、グルコース単独と比べてP<0.05、fはP<0.001である。
(図20)様々な濃度のグルコースの存在下ならびにSR59230Aの存在下および不在下で、ZAGで処置したC2C12筋管およびZAGで処置しなかったC2C12筋管におけるタンパク質合成を示すグラフ図である。統計学的に有意なbは、対照と比べてP<0.01、cはP<0.001であり;eは、グルコース単独と比べてP<0.05、fはP<0.001であり;Iは、グルコース+SRと比べてP<0.001である。
(図21)ZAGの存在下および不在下で様々な濃度のグルコースで処置したC2C12筋管におけるROS活性を示すグラフ図である。統計学的に有意なcは、対照と比べてP<0.001であり;fは、グルコース単独と比べてP<0.001である。
(図22A)ZAGの存在下および不在下でグルコースで処置したC2C12筋管中のPKRを示すウェスタンブロットの絵図面である。統計学的に有意なcは、対照と比べてP<0.001であり;fは、グルコース単独と比べてP<0.001である。
(図22B)ZAGの存在下および不在下でグルコースで処置したC2C12筋管中のeIF2αを示すウェスタンブロットの絵図面である。統計学的に有意なcは、対照と比べてP<0.001であり;fは、グルコース単独と比べてP<0.001である。
(図23A)ZAGで処置したob/obマウスおよびZAGで処置しなかったob/obマウスにおけるインスリン耐性試験の結果を示すグラフ図である。統計学的に有意なbはZAG処置と比べてP<0.05であり、cはP<0.001である。
(図23B)ZAGで処置したob/obマウスおよびZAGで処置しなかったob/obマウスにおけるインスリン耐性試験の結果を示すグラフ図である。統計学的に有意なbはZAG処置と比べてP<0.05であり、cはP<0.001である。
(図24)ob/obマウスにおけるD-[U-14Cグルコース]の14CO2への酸化を示すグラフ図である。
(図25)ob/obマウスにおける[14Cカルボキシ]トリオレインからの14CO2産生を示すグラフ図である。
本発明は、組換えヒト亜鉛-α2-糖タンパク質(ZAG)が、ob/obマウスおよびウィスターラットにおいて、食物摂取に対する影響なしに、体重の減少およびインスリン応答性の上昇をもたらすという観察結果に基づいている。したがって、本発明は、対象の高血糖症の症状を改善するため、対象の血漿インスリンレベルを低下させるため、および対象の骨格筋量を増加させるための方法を提供する。また、対象の体重低下または肥満軽減をもたらすための組合せ治療も提供される。
亜鉛-α2-糖タンパク質は高血糖症を軽減する
亜鉛-α2-糖タンパク質(ZAG)が肥満および高血糖症を軽減する能力を評価するために、ob/obマウスにZAGを投与したところ、体重減少および体温上昇が誘発され、エネルギー消費の増加が示唆された。褐色脂肪組織における脱共役タンパク質-1および脱共役タンパク質-3の発現は増大したのに対し、脂肪分解の増加を示すグリセロールは増加したものの、グルコース、トリグリセリド、および非エステル化脂肪酸の血清レベルは低下した。脂肪細胞および骨格筋中へのグルコース取込みの増加と共に、血漿インスリンの減少および静脈内グルコースに対する応答の改善があった。精巣上体脂肪細胞中のホルモン感受性リパーゼの発現は増大した。タンパク質合成の増加および分解の減少が原因で、骨格筋量の増加があった。このことから、高血糖症の治療においてZAGが有効であり得ることが示唆される。
HEK293F細胞を、発現ベクターpcDNA3.1中の完全長ヒトZAG cDNAでトランスフェクトし、37℃、大気中CO2濃度5%の雰囲気下、FreeStyle培地中で維持した。ZAGが培地中に分泌され、これを採取した。最大タンパク質レベル(16μgml-1)は14日間の培養後に得られた。ZAGを精製するために、培地(200ml)を700gで15分間遠心分離して細胞を除去し、カットオフ値10kDaのAmicon Ultra-15遠心ろ過機を用いて体積1mlの無菌PBS中に濃縮した。この濃縮物(タンパク質約2mg)を、20mlの10mM Tris, pH8.8中に懸濁したDEAEセルロース2gに添加し、4℃で2時間攪拌した。DEAEセルロースはZAGを結合した。遠心分離(1500gで15分間)によってこれを沈降させ、0.3M NaClを含む20mlの10mM Tris, pH8.8と共に4℃で30分間攪拌することによってZAGを溶出させた。この溶出物を洗浄し、Amicon遠心ろ過機を用いて無菌PBS中で体積1mlに濃縮した。LAL Pyrogentシングルテストキット(Lonza, Bucks, UK)を用いて測定される通りに、精製されたZAGはエンドトキシンを含まなかった。
先に説明した通りに95%酸素:5%CO2の雰囲気下で、1.5mgml-1コラゲナーゼ、および4%ウシ血清アルブミンを含むクレブスリンガー重炭酸緩衝液中、37℃で2時間インキュベーションすることによって、刻んだ脂肪沈着物から白色脂肪細胞の単細胞懸濁物を調製した。経時変化研究のために、10%ウシ胎児血清を含むDMEM中に、細胞105個/mlの濃度で脂肪細胞を懸濁し、37℃、大気中CO2濃度10%の雰囲気下で維持した。ヒトZAGを含むプラスミドでトランスフェクトされたヒト293細胞を、FreeStyle培地中に細胞105個/mlの濃度で播種し、37℃、大気中CO2濃度5%の雰囲気下で維持した。最大タンパク質レベル(16μgml-1)は14日間の培養後に得られた。次いで、培地(200ml)を700gで15分間遠心分離して細胞を除去し、カットオフ値10kDaのAmicon Ultra-15遠心ろ過機を用いて体積1mlの無菌PBS中に濃縮した。この試料(約2mg)のタンパク質濃度を測定した後、20mlの10mM Tris, pH8.8中に懸濁したDEAEセルロース2gにそれを添加し、4℃で2時間攪拌した。負に帯電したZAGはDEAEセルロースに結合する。これを遠心分離(1500gで15分間)によって沈降させ、0.3M NaClを含む20mlの10mM Tris、pH8.8と共に4℃で30分間攪拌することによって溶出させた。上清を洗浄し、Amicon遠心ろ過機を用いて無菌PBS中で体積1mlに濃縮した。
Aston Universityで維持されている集団に由来するホモ接合性肥満(ob/ob)マウスを本研究において使用した。Aston ob/obマウスの起源および特徴は以前に説明されている。雄マウス(20〜21週齢、体重90〜100g)を、12時間明期:12時間暗期のサイクル下の22±2℃に空調された部屋に置いたケージ1個当たり3匹にグループ分けし、ラットおよびマウスの飼育用餌(Special Diet Services, Witham, UK)および水道水を適宜与えた。PBS(100μl)に溶かしたZAG(35μg)を1日2回、静脈内投与によってそれらに投与し、体重ならびに食物および水の摂取量を毎日モニターした。対照マウスにはPBSのみを与えた。直腸温度計(RS Components, Northants, UK)を用いて、体温を毎日測定した。動物実験はすべて、英国動物(科学的処置)法1986(U.K. Animals (Scientific Procedures) Act 1986)に従って実施した。ZAG投与後に有害作用は全く観察されなかった。
体重540±82.5gの雄成熟ウィスターラット(本発明者ら自身の集団に由来する1歳)を個別に収容し、PBS(100μl)に溶かしたZAG(体重100g当たり50μg)または対照としてのPBS(100μl)のいずれかを1日1回静脈内投与して処置した。食物および水の摂取量ならびに体重の両方を毎日測定した。動物は、食物(Special Diet Services, Essex, UK)および水に適宜、自由に接近できるようにした。動物実験は、英国内務省(British Home Office)によって課される福祉条件下で実施した。10日間の処置後、動物を屠殺し、体組成を測定した。重量が一定になるまで、動物を80〜90℃まで7日間加熱した。次いで、湿重量と乾燥重量の差から、水含有量を決定した。Lundholm et al (14)によって説明されている通りに、クロロホルム:メタノール(1:1)、エタノール/アセトン(1:1)、およびジエチルエーテル(各120ml)を順番に用いて、乾燥した屠体から脂質を抽出した。溶媒を蒸発させ、脂肪を計量した。屠体の初期重量と水および脂肪の重量との差として、脂肪以外の屠体質量を計算した。
分析しようとする試料を、クレブスリンガー重炭酸緩衝液(pH7.2)1ml中で105〜2×105個の脂肪細胞と共に2時間インキュベートした。放出されたグリセロールの濃度を、Wieland(Wieland, O. Glycerol UV method. In Methods of Enzymatic Analysis(Bergmeyer, H.U.編)(Academic Press, London, UK, pp 1404-1409, 1974))の方法を用いて酵素学的に測定した。脂肪細胞のみを含む対照試料を分析して、自発的グリセロール放出を測定した。活性は、放出されたグリセロール(μmol)/脂肪細胞105個/2時間として表した。
Wako-ASC-ACODキット(Wako Chemical GmbH, Neuss, Germany)を用いて、非エステル化脂肪酸(NEFA)を測定した。トリグリセリドはTriglycerideキット(Sigma Chemical Co., Poole, United Kingdom)を用いて測定し、3-ヒドロキシブチラートは、定量的酵素学的測定キット(Sigma)を用いて測定した。グルコースは、グルコース分析機器(Beckman, Irvine, Calif.)を用いて測定し、グリセロールは、Academic Press, Londonによって出版された(1974)「Methods of Enzymatic Analysis」(Bergmeyer, H. U.編) 第3巻、pp1404-1409,において説明されているWielandの方法を用いて酵素学的に測定した。
典型的な手順では、白色脂肪細胞は、250mMスクロース、2mMエチレングリコールビス(β-アミノエチルエーテル)-N,N,N',N'(EGTA)、10mM Tris-HCl(pH7.4)中で細胞を洗浄することを除いては前述した通りに、マウス精巣上体脂肪パッドから単離した。上記の緩衝液20ml中に脂肪細胞を再懸濁し、吸引して少なくとも10回Swinnyフィルターを通過させることによってホモジナイズした。次いで、この細胞ホモジネートを300gで5分間遠心分離し、堅い脂肪層(fat cake)を表面から除去し、残存する沈殿物および下澄を清潔な試験管に移した。これらを30,000g、4℃で1時間遠心分離し、形成された膜沈殿物をスクロース緩衝液(200〜400μl)中に再懸濁した。形質膜を、PERCOLL(商標)コロイドシリカ粒子の自己形成勾配を用いて、他の細胞小器官膜から分別した。構成成分は、膜懸濁液と共に32:7:1の比率で混合した、250mMスクロース、2mM EGTA、10mM Tris-HCl、pH7.4; PERCOLL(商標);および2Mスクロース、8mM EGTA、80mM Tris-HCl、pH7.4であった(合計体積8ml)。この混合物を10,000g、4℃で30分間遠心分離した。この勾配を0.75mlずつに分割し、コハク酸デヒドロゲナーゼ、NADH-シトクロムcレダクターゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、および5'-ヌクレオチダーゼの存在について各ポーションを分析して、形質膜画分の位置を特定した。これらの膜画分を150mM NaCl、1mM EGTA、10mM Tris-HCl、pH7.4中に再懸濁し、10,000g、4℃で2分間、遠心分離した。このプロセスを2回繰り返した。次いで、洗浄した形質膜を、10mM Tris-HCl、pH7.4、250mMスクロース、2mM EGTA、および4μMフェニルメチルスルホニルフルオリド(PMSF)中で1〜2mg/mlの濃度に希釈し、液体窒素中で急速凍結し、使用するまで-70℃で保存した。
説明されている通りに(Beck SA, et al. Production of lipolytic and proteolytic factors by a murine tumor-producing cachexia in the host. Cancer Res 47:5919-5923, 1987)、コラゲナーゼ消化を利用して、雄ウィスターラット(400g)の細かく刻んだ精巣上体脂肪組織から白色脂肪細胞を調製した。脂肪分解活性は、クレブスリンガー重炭酸緩衝液(pH7.2)1ml中で2時間、105〜2×105個の脂肪細胞をインキュベートすることによって測定し、脂肪分解の程度は、放出されたグリセロールを測定することによって決定した(Wieland O. Glycerol UV method. Methods of Enzymatic Analysis, Bergmeyer HU.編、Academic Press, London, pp 1404-1409, 1974)。自発的グリセロール放出は、脂肪細胞のみをインキュベートすることによって測定した。脂肪分解活性は、放出されたグリセロール(μmol)/脂肪細胞105個/2時間として表した。
ゲルは、Laemmliの方法に従って調製し、通常、5%濃縮ゲルおよび15%SDS-PAGE分離ゲル(変性条件もしくは還元条件)または10%SDS-PAGE分離ゲル(非変性条件もしくは非還元条件)からなった。1〜5μg/レーンの試料を添加した。クーマシーブリリアントブルーR-250または銀のいずれかで染色することによって、バンドを可視化した。0.0625M Tris-HCl、pH6.8、10%グリセロール、1%SDS、0.01%ブロモフェノールブルー、および5% 2-メルカプトエタノール中、100℃で5分間加熱することによって、試料を還元条件用に調製した。
単離した脂肪細胞(5×104個)をクレブスリンガー重炭酸緩衝液、pH7.2(KRBS)1ml中で2回洗浄し、18.5MBq 2-[1-14C]デオキシ-D-グルコースおよび非放射性2-デオキシ-D-グルコースを最終濃度0.1mMまで含むKRBS 0.5ml中、室温で10分間、さらにインキュベートした。氷冷したグルコース無添加KRBS 1mlを添加することによって取込みを終結させ、細胞をKRBS 1mlで3回洗浄し、1M NaOH 0.5mlの添加によって溶解し、室温で少なくとも1時間放置した後、液体シンチレーション計数によって放射能を測定した。
腓腹筋をクレブス・ヘンゼライト重炭酸緩衝液中、37℃で45分間、インキュベートし、次いで、185M Bq 2-[1-14C]デオキシ-D-グルコースおよび非放射性2-デオキシ-D-グルコースを最終濃度0.1mMまで含むクレブス・ヘンゼライト緩衝液5ml中でさらに10分間、インキュベートした。次いで、筋肉を取り出し、0.9%NaCl中で5分間洗浄し、続いて、1M NaOH 0.5ml中に溶解させ、液体シンチレーション計数によって放射能を測定した。
ヒラメ筋をクレブス・ヘンゼライト重炭酸緩衝液中、37℃で45分間、インキュベートし、次いで、185MBq 2-[1-14C]デオキシ-D-グルコースおよび非放射性2-デオキシ-D-グルコースを最終濃度0.1mMまで含むクレブス・ヘンゼライト緩衝液5ml中でさらに10分間、インキュベートした。次いで、筋肉を取り出し、0.9%NaCl中で5分間洗浄し、続いて、1M NaOH 0.5ml中に溶解させ、液体シンチレーション計数によって放射能を測定した。
筋肉におけるタンパク質の合成および分解を測定するための方法は、以前に説明されている(Smith, K.L.およびTisdale, M.J. Increased protein degradation and decreased protein synthesis in skeletal muscle during cancer cachexia. Br. J. Cancer 67, 680-685 (1993))。結紮糸を用いて腓腹筋を切り出し、フェノールレッドを含まずO2:CO2(19:1)で飽和させたRPMI 1640培地中、37℃で30分間インキュベートし、次いで、PBSで洗浄した。フェノールレッドを含まずO2:CO2(19:1)で飽和させたRPMI/640中、37℃で筋肉をインキュベートした2時間を利用して、酸不溶性材料中へのL-[2,6-3H]フェニルアラニン(640MBq)の組入れに基づいてタンパク質合成を測定した。次いで、筋肉を非放射性培地中ですすいで、ブロットし、2%過塩素酸中でホモジナイズした。タンパク質に結合した放射能の量を酸可溶性放射能の量で割ることにより、タンパク質合成の比率を算出した。5mMグルコースおよび0.5mMシクロヘキシミドを含む酸素添加されたクレブス・ヘンゼライト緩衝液(pH7.4)3ml中での2時間にわたって腓腹筋からのチロシン放出に基づいて、タンパク質分解を測定した。
プロテアソームの「キモトリプシン様」活性は、筋管に関して以前に説明されている通りに(Whitehouse, A.S.およびTisdale, M.J. Increased expression of the ubiquitin-proteasome pathway in murine myotubes by proteolysis-inducing factor (PIF) is associated with activation of the transcription factor NF-κB. Br. J. Cancer 89, 1116-1122 (2003))、蛍光原基質N-スクシニルLys Lys Val Tyr. AMC(SEQ ID NO: 2)からの、励起波長360nmおよび発光波長460nmにおける7-アミド-4-メチルクマリン(AMC)の放出を測定することにより、蛍光分析によって測定した。20mM Tris、pH7.5、2mM ATP、5mM MgCl2、および50mM DTT中、4℃で腓腹筋をホモジナイズし、超音波処理し、18,000g、4℃で10分間遠心分離して不溶性材料を沈殿させ、得られた上清を、プロテアソーム阻害物質であるラクタシスチン(10μM)の存在下または不在下での「キモトリプシン様」酵素活性を測定するために使用した。ラクタシスチンで抑制可能な活性のみを、真のプロテアソーム活性とみなした。カスパーゼ-3(AcAspGluValAsp-CHO)(SEQ ID NO: 5)またはカスパーゼ-8(Ile Glu Phe Thr Asp-CHO)(SEQ ID NO: 6)の阻害物質(100μM)の存在下または不在下で、上記から得た上清(タンパク質50μg)およびカスパーゼ-3基質またはカスパーゼ-8基質のいずれか(10μM)を37℃で1時間使用して、AcAsp.Gly.Val.Asp.AMC (SEQ ID NO: 3)からのAMCの放出に基づいてカスパーゼ-3の活性を測定し、特異的基質Z-Ile Glu Phe Thr Asp-AFC(SEQ ID NO: 4)からの7-アミノ-4-トリフルロメチルクマリン(AFC)の放出に基づいてカスパーゼ-8の活性を測定した。AFCに起因する蛍光増加を前述の通りに測定し、励起波長400nmおよび発光波長505nmを用いて、AFCに起因する蛍光増加を測定した。カスパーゼ阻害物質の不在下での値と存在下での値の差を活性の指標とした。
新しく切り出した腓腹筋をPBS中で洗浄し、室温で5分間、PHOSPHOSAFE(商標)抽出試薬中に溶解し、続いて、4℃で超音波処理した。18,000g、4℃で5分間の遠心分離によって溶解物を清澄化し、細胞質タンパク質の試料(5μg)を、180Vで約1時間の12%ドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって分離させた。これに続いて、0.45μmニトロセルロース膜に移し、次いで、この膜を4℃で一晩、Tris緩衝生理食塩水(pH7.5)中5%Marvelでブロックした。抗ミオシン(1:250)以外は、一次抗体および二次抗体の両方とも希釈率1:1000で使用した。室温で1時間インキュベーションし、ECLによって顕色させた。濃度計によってブロットを調査して、差を定量化した。
これらの結果を、少なくとも3回の反復実験の平均値±SEMとして示す。群間の平均値の差は、一元配置分散分析(ANOVA)とそれに続くテューキー・クレーマー(Tukey-Kramer)の多重比較試験によって決定した。0.05未満のP値を有意とみなした。
ZAGの精製により、純度が95%を上回る(図1A)産生物が得られ、イムノブロッティングによってZAGであることが確認された(図1B)。ZAGは、精巣上体脂肪細胞において脂肪分解を促進したが(図1D)、皮下沈着物および内臓沈着物の両方に由来する脂肪細胞において、脂肪分解作用は、基本レベルよりは有意に高かったものの、かなり低かった(図1E)。ZAGの方が、モル濃度ベースで、イソプレナリンよりも脂肪分解を誘発する上で強力であったが、どの脂肪細胞群においても、イソプレナリンとZAGとで脂肪分解を促進する程度に有意な差はなかった。5日間にわたるob/obマウスの体重に対するZAGの効果を図1Fに示す。対照動物の体重は変化がないままであったのに対し、ZAGで処置した動物は漸進的な体重減少を示し、その結果、5日後には、実験の過程を通じて食物(PBS 32±3.1g;ZAG 30±2.5g)および水(PBS 140±8.2ml;ZAG 135±3.2ml)の摂取量は等しかったにもかかわらず、これらの群の間で3.5gの体重差があった。4日間のZAG投与後に、基礎代謝率の上昇を示す、0.4℃の有意な体温上昇があった(図1G)。血漿代謝産物レベルの測定により、ZAG処置動物における代謝基質利用の増加が示唆される(表1)。したがって、脂肪分解の増加を示すグリセロール濃度上昇にもかかわらず、ZAG処置動物において、血漿中のグルコース、トリグリセリド(TG)、および非エステル化脂肪酸(NEFA)の有意な減少があった。血漿インスリンレベルが36%減少したことから、糖尿病状態を軽減させる際にZAGが有効であることが示唆された。様々な組織中のZAG mRNAレベルを図1Cに示す。
イソプレナリンと比較した、ラット精巣上体脂肪細胞に対するヒトZAGの脂肪分解作用を図11に示す。233〜700nMの間の濃度で、ZAGは、用量に関連したグリセロール放出増加をもたらし、これは抗ZAGモノクローナル抗体によって弱められたことから、作用の特異性が示された。ラット脂肪細胞における脂肪分解の程度は、マウスで以前に報告されているものと同様であった。マウスの場合のように、ZAGの脂肪分解作用は、β3-アドレナリン作動性受容体(β3-AR)拮抗物質SR59230Aによって完全に弱められたことから、ZAGの作用がβ3-ARによって媒介されることが示唆された。これらの結果から、ラットにおいて脂肪減少を誘発する際にZAGが有効で有り得ることが示唆される。
PBSで処置した動物からの差をa、p<0.05;b、p<0.01;またはc、p<0.001のいずれかとして示す。
亜鉛-α2-糖タンパク質の間欠的投与
ob/obマウスにおける長期のZAG連日投与により、体重減少が停止されることが観察された。したがって、3〜4日中断し、続いてZAGを再輸注すると、継続的な体重減少および高血糖症に関連する症状の改善がもたらされることが確認された。
亜鉛-α2-糖タンパク質は、ob/obマウスにおける筋肉萎縮を弱める
本実施例は、新しく開発されたインビトロモデル(Russell et al, Exp. Cell Res. 315, 16-25, 2009)を用いて、ob/obマウスにおける筋肉萎縮をZAGが弱めるメカニズムを実証する。これは、高濃度のグルコース(10mMまたは25mM)に供されたマウス筋管を使用する。図18に示す通りに、高グルコースは、タンパク質分解の増加を促進し(図18A)、タンパク質合成を抑制し(図18B)、これらの効果は両方ともZAG(25μg/ml)によって完全に弱められた。したがって、拮抗物質SR59230Aを用いて、ZAGの効果がβ3-ARによって媒介されるか判定した。しかしながら、SR化合物(すなわちSR59230A)はまた、β-作動物質として作用することもでき、これらの実験においてはそのように思われた。したがって、10mMグルコースおよび25mMグルコースの両方によって誘発されるタンパク質分解は、ZAGおよびSR化合物の両方によって弱められ、その組合せは、拮抗的というよりはむしろ相加的であった(図19)。タンパク質合成に関して(図20)、SR化合物はZAGと同様に思われ、反対の徴候はないが、10mMグルコースを伴うと、SR化合物はタンパク質合成の抑制の強化を引き起こす。
亜鉛-α2-糖タンパク質はROS形成を弱める
活性酸素種(ROS)の形成が、高グルコース負荷によって誘発されるタンパク質分解において重要であることが示されている。図21のデータから、グルコースによって産生されるROSの増加をZAGが完全に弱めることが示され、タンパク質分解の減少と対応している(図18A)。また、高グルコースは、ob/obマウスの骨格筋において認められるように、PKR活性化(リン酸化)(図22A)およびその後のeIF2αリン酸化(図22B)も誘発し、これもまたZAGによって弱められた。これらの結果から、このインビトロモデルが、ZAGが分子レベルでどのように筋量に影響を及ぼすかを研究するのに有用であることが示される。
亜鉛-α2-糖タンパク質は、インスリン耐性を増大させる
また、インスリン耐性試験も、3日間ZAGを投与されたob/obマウスにおいて実施した(図23)。腹腔内注射によって2種の用量のインスリン(10U/kgおよび20U/kg)を動物に投与し、その後の60分間にわたって血中グルコースを測定した。図から分かる通りに(図23A)、ZAGで処置した動物は、PBSを与えられたものよりも高いインスリン(10U/kg)感受性を示した。より高いインスリン濃度(20U/kg)では、この差は消失した(図23B)。20U/kg+PBSの場合のグルコース消失曲線は、10U/kg+ZAGのものとほぼ同一であった。したがって、この用量レベルでは、ZAGは、インスリンの所要量を50%減少させるが、より多くのインスリンを与えることによってこれに打ち勝つことができる。
亜鉛-α2-糖タンパク質の5日間の投与
添付書類1に示すデータは、5日間毎日、1日当たり35μgのZAGを静脈内投与した5日間の研究から得たものである。実験終了時に、組織を採取しブロットするか、または単離した脂肪細胞を用いて機能的アッセイ法を実施した。図6Aにおいて確認できる通りに、ZAG投与により、精巣上体脂肪(ep)、皮下脂肪(sc)、および内臓脂肪(vis)におけるその発現が約2倍に増大した。ep脂肪細胞を調製し、組織培養状態で(RPMI 1640+10%FCS)維持した場合、ZAGを培地に添加しなかったにもかかわらず、さらに3日間、ZAG発現は維持された(図6B)。さらに、ZAGで処置したマウスに由来する脂肪細胞は、イソプレナリン(10μM)に対する応答の増大も示し、これもまた、ZAGの不在下、組織培養状態で4日間維持された(図9)。イソプレナリンに対する応答の増大は、ZAGによるHSLの発現増大に起因し、これもまた、ZAGの不在下、組織培養状態で4日間維持された(図6C)。これらの結果から、ZAGの効果は、ZAGの使用をやめてからさらに3日間維持され、したがって、毎日投与する必要はないことが示される。実際に、上述した通りに、過剰なZAGは、応答の増大よりもむしろ耐性をもたらす可能性の方が高い。
以下に、本発明の基本的な諸特徴および種々の態様を列挙する。
[1]
対象の高血糖症の症状を改善する方法であって、該方法が、そのような治療を必要としている該対象に、約10日間またはそれ以上の期間、SEQ ID NO: 1に示す配列を有するポリペプチドまたはその断片の治療的に有効な投与量を投与する段階を含み、治療後に高血糖症に関連する症状の改善がある、方法。
[2]
前記治療が、10日間の前記ポリペプチドの連日投与を含む、[1]記載の方法。
[3]
前記治療が、21日間の前記ポリペプチドの連日投与を含む、[1]記載の方法。
[4]
前記ポリペプチドを、1日おき、2日毎または3日毎に、最長21日間投与する、[1]記載の方法。
[5]
症状の前記改善が、治療前の血清レベルと比較した場合の、血清グルコースレベルの低下、血清トリグリセリドレベルの低下、血清インスリンレベルの低下、および血清非エステル化脂肪酸レベルの低下からなる群より選択される1種または複数種の徴候を含む、[1]記載の方法。
[6]
症状の前記改善が、治療前の体温と比較した場合の、治療開始から4日以内の約0.4℃〜1℃の体温上昇を含む、[1]記載の方法。
[7]
症状の前記改善が、治療前の血漿インスリンレベルと比較した場合の、治療開始から3日以内の血漿インスリンレベルの低下を含む、[1]記載の方法。
[8]
治療前の血漿インスリンレベルと比較して、血漿インスリンレベルが36%低下する、[7]記載の方法。
[9]
治療前の血漿グルコースレベルおよび血漿トリグリセリドレベルと比較して、血漿グルコースレベルおよび血漿トリグリセリドレベルが約36%低下する、[7]記載の方法。
[10]
症状の前記改善が、治療開始から3日以内の、静脈内グルコース(2g/kg)に応答した血中グルコースレベルおよびインスリン分泌の正常化を含む、[1]記載の方法。
[11]
症状の前記改善が、治療前の膵臓インスリンレベルと比較した場合の、膵臓インスリンレベルの上昇を含む、[1]記載の方法。
[12]
症状の前記改善が、治療前の脱共役タンパク質-1(UCP1)および脱共役タンパク質-3(UCP3)の発現と比較した場合の、褐色脂肪組織におけるUCP1およびUCP3の発現増大を含む、[1]記載の方法。
[13]
症状の前記改善が、治療前のUCP3の発現と比較した場合の、骨格筋におけるUCP3の発現増大を含む、[1]記載の方法。
[14]
前記ポリペプチドを1日2回投与する、[1]記載の方法。
[15]
前記ポリペプチドを、静脈内に、皮下に、腹腔内に、または経口的に投与する、[1]記載の方法。
[16]
前記ポリペプチドを3日に1回投与する、[1]記載の方法。
[17]
前記ポリペプチドをβ3作動物質と組み合わせて投与する、[1]記載の方法。
[18]
前記β3作動物質がBRL37344である、[17]記載の方法。
[19]
前記ポリペプチドをβ3-アドレナリン作動性受容体(β3-AR)拮抗物質と組み合わせて投与する、[1]記載の方法。
[20]
前記β3-AR拮抗物質がSR59230Aである、[19]記載の方法。
[21]
前記ポリペプチドがグリコシル化される、[1]記載の方法。
[22]
対象の血漿インスリンレベルを低下させる方法であって、SEQ ID NO: 1に示す配列を有するポリペプチドまたはその断片の治療的に有効な投与量を該対象に投与する段階を含む、方法。
[23]
前記ポリペプチドが、最長10日間、前記対象に投与され、治療後に血漿インスリンレベルが低下する、[22]記載の方法。
[24]
前記ポリペプチドが、最長21日間、前記対象に投与され、治療後に血漿インスリンレベルが低下する、[22]記載の方法。
[25]
血漿インスリンレベルの前記低下が、前記ポリペプチドの投与から3日以内に起こる、[22]記載の方法。
[26]
前記ポリペプチドの投与前の血漿インスリンレベルと比較して、血漿インスリンレベルが36%低下する、[24]記載の方法。
[27]
前記ポリペプチドの投与前の血漿グルコースレベルおよび血漿トリグリセリドレベルと比較して、血漿グルコースレベルおよび血漿トリグリセリドレベルが36%低下する、[24]記載の方法。
[28]
前記ポリペプチドをβ3作動物質と組み合わせて投与する、[22]記載の方法。
[29]
前記β3作動物質がBRL37344である、[28]記載の方法。
[30]
前記ポリペプチドをβ3-アドレナリン作動性受容体(β3-AR)拮抗物質と組み合わせて投与する、[22]記載の方法。
[31]
前記β3-AR拮抗物質がSR59230Aである、[30]記載の方法。
[32]
前記ポリペプチドがグリコシル化される、[22]記載の方法。
[33]
SEQ ID NO: 1に示す配列を有するポリペプチドまたはその断片を対象に投与する段階を含む、該対象の骨格筋量を増加させる方法。
[34]
前記骨格筋が腓腹筋またはヒラメ筋である、[33]記載の方法。
[35]
前記ポリペプチドが、最長10日間、前記対象に投与され、治療後に骨格筋量が増加する、[33]記載の方法。
[36]
前記ポリペプチドが、最長21日間、前記対象に投与され、治療後に骨格筋量が増加する、[33]記載の方法。
[37]
前記ポリペプチドをβ3作動物質と組み合わせて投与する、[33]記載の方法。
[38]
前記β3作動物質がBRL37344である、[37]記載の方法。
[39]
前記ポリペプチドをβ3-アドレナリン作動性受容体(β3-AR)拮抗物質と組み合わせて投与する、[33]記載の方法。
[40]
前記β3-AR拮抗物質がSR59230Aである、[39]記載の方法。
[41]
前記ポリペプチドがグリコシル化される、[33]記載の方法。
[42]
前記対象が、癌、AIDS、敗血症、COPD、腎不全、関節炎、うっ血性心不全、筋ジストロフィー、糖尿病、または加齢によるサルコペニアを有する、[33]記載の方法。
[43]
体重低下または肥満軽減をもたらすために対象を治療する方法であって、そのような治療を必要としている該対象に、SEQ ID NO: 1に示す配列を有するポリペプチドまたはその断片と組み合わせて、β3作動物質の治療的に有効な投与量を投与する段階を含む、方法。
[44]
前記β3作動物質がBRL37344である、[43]記載の方法。
[45]
前記ポリペプチドがグリコシル化される、[43]記載の方法。
[46]
体重低下または肥満軽減をもたらすために対象を治療する方法であって、そのような治療を必要としている該対象に、SEQ ID NO: 1に示す配列を有するポリペプチドまたはその断片と組み合わせて、β3-アドレナリン作動性受容体(β3-AR)拮抗物質の治療的に有効な投与量を投与する段階を含む、方法。
[47]
前記β3-AR拮抗物質がSR59230Aである、[46]記載の方法。
[48]
前記ポリペプチドがグリコシル化される、[46]記載の方法。
[49]
SEQ ID NO: 1に示す配列を有するポリペプチドと、β3作動物質とを含む、薬学的組成物。
[50]
SEQ ID NO: 1に示す配列を有するポリペプチドと、β3-アドレナリン作動性受容体(β3-AR)拮抗物質とを含む、薬学的組成物。
Claims (50)
- 対象の高血糖症の症状を改善する方法であって、該方法が、そのような治療を必要としている該対象に、約10日間またはそれ以上の期間、SEQ ID NO: 1に示す配列を有するポリペプチドまたはその断片の治療的に有効な投与量を投与する段階を含み、治療後に高血糖症に関連する症状の改善がある、方法。
- 前記治療が、10日間の前記ポリペプチドの連日投与を含む、請求項1記載の方法。
- 前記治療が、21日間の前記ポリペプチドの連日投与を含む、請求項1記載の方法。
- 前記ポリペプチドを、1日おき、2日毎または3日毎に、最長21日間投与する、請求項1記載の方法。
- 症状の前記改善が、治療前の血清レベルと比較した場合の、血清グルコースレベルの低下、血清トリグリセリドレベルの低下、血清インスリンレベルの低下、および血清非エステル化脂肪酸レベルの低下からなる群より選択される1種または複数種の徴候を含む、請求項1記載の方法。
- 症状の前記改善が、治療前の体温と比較した場合の、治療開始から4日以内の約0.4℃〜1℃の体温上昇を含む、請求項1記載の方法。
- 症状の前記改善が、治療前の血漿インスリンレベルと比較した場合の、治療開始から3日以内の血漿インスリンレベルの低下を含む、請求項1記載の方法。
- 治療前の血漿インスリンレベルと比較して、血漿インスリンレベルが36%低下する、請求項7記載の方法。
- 治療前の血漿グルコースレベルおよび血漿トリグリセリドレベルと比較して、血漿グルコースレベルおよび血漿トリグリセリドレベルが約36%低下する、請求項7記載の方法。
- 症状の前記改善が、治療開始から3日以内の、静脈内グルコース(2g/kg)に応答した血中グルコースレベルおよびインスリン分泌の正常化を含む、請求項1記載の方法。
- 症状の前記改善が、治療前の膵臓インスリンレベルと比較した場合の、膵臓インスリンレベルの上昇を含む、請求項1記載の方法。
- 症状の前記改善が、治療前の脱共役タンパク質-1(UCP1)および脱共役タンパク質-3(UCP3)の発現と比較した場合の、褐色脂肪組織におけるUCP1およびUCP3の発現増大を含む、請求項1記載の方法。
- 症状の前記改善が、治療前のUCP3の発現と比較した場合の、骨格筋におけるUCP3の発現増大を含む、請求項1記載の方法。
- 前記ポリペプチドを1日2回投与する、請求項1記載の方法。
- 前記ポリペプチドを、静脈内に、皮下に、腹腔内に、または経口的に投与する、請求項1記載の方法。
- 前記ポリペプチドを3日に1回投与する、請求項1記載の方法。
- 前記ポリペプチドをβ3作動物質と組み合わせて投与する、請求項1記載の方法。
- 前記β3作動物質がBRL37344である、請求項17記載の方法。
- 前記ポリペプチドをβ3-アドレナリン作動性受容体(β3-AR)拮抗物質と組み合わせて投与する、請求項1記載の方法。
- 前記β3-AR拮抗物質がSR59230Aである、請求項19記載の方法。
- 前記ポリペプチドがグリコシル化される、請求項1記載の方法。
- 対象の血漿インスリンレベルを低下させる方法であって、SEQ ID NO: 1に示す配列を有するポリペプチドまたはその断片の治療的に有効な投与量を該対象に投与する段階を含む、方法。
- 前記ポリペプチドが、最長10日間、前記対象に投与され、治療後に血漿インスリンレベルが低下する、請求項22記載の方法。
- 前記ポリペプチドが、最長21日間、前記対象に投与され、治療後に血漿インスリンレベルが低下する、請求項22記載の方法。
- 血漿インスリンレベルの前記低下が、前記ポリペプチドの投与から3日以内に起こる、請求項22記載の方法。
- 前記ポリペプチドの投与前の血漿インスリンレベルと比較して、血漿インスリンレベルが36%低下する、請求項24記載の方法。
- 前記ポリペプチドの投与前の血漿グルコースレベルおよび血漿トリグリセリドレベルと比較して、血漿グルコースレベルおよび血漿トリグリセリドレベルが36%低下する、請求項24記載の方法。
- 前記ポリペプチドをβ3作動物質と組み合わせて投与する、請求項22記載の方法。
- 前記β3作動物質がBRL37344である、請求項28記載の方法。
- 前記ポリペプチドをβ3-アドレナリン作動性受容体(β3-AR)拮抗物質と組み合わせて投与する、請求項22記載の方法。
- 前記β3-AR拮抗物質がSR59230Aである、請求項30記載の方法。
- 前記ポリペプチドがグリコシル化される、請求項22記載の方法。
- SEQ ID NO: 1に示す配列を有するポリペプチドまたはその断片を対象に投与する段階を含む、該対象の骨格筋量を増加させる方法。
- 前記骨格筋が腓腹筋またはヒラメ筋である、請求項33記載の方法。
- 前記ポリペプチドが、最長10日間、前記対象に投与され、治療後に骨格筋量が増加する、請求項33記載の方法。
- 前記ポリペプチドが、最長21日間、前記対象に投与され、治療後に骨格筋量が増加する、請求項33記載の方法。
- 前記ポリペプチドをβ3作動物質と組み合わせて投与する、請求項33記載の方法。
- 前記β3作動物質がBRL37344である、請求項37記載の方法。
- 前記ポリペプチドをβ3-アドレナリン作動性受容体(β3-AR)拮抗物質と組み合わせて投与する、請求項33記載の方法。
- 前記β3-AR拮抗物質がSR59230Aである、請求項39記載の方法。
- 前記ポリペプチドがグリコシル化される、請求項33記載の方法。
- 前記対象が、癌、AIDS、敗血症、COPD、腎不全、関節炎、うっ血性心不全、筋ジストロフィー、糖尿病、または加齢によるサルコペニアを有する、請求項33記載の方法。
- 体重低下または肥満軽減をもたらすために対象を治療する方法であって、そのような治療を必要としている該対象に、SEQ ID NO: 1に示す配列を有するポリペプチドまたはその断片と組み合わせて、β3作動物質の治療的に有効な投与量を投与する段階を含む、方法。
- 前記β3作動物質がBRL37344である、請求項43記載の方法。
- 前記ポリペプチドがグリコシル化される、請求項43記載の方法。
- 体重低下または肥満軽減をもたらすために対象を治療する方法であって、そのような治療を必要としている該対象に、SEQ ID NO: 1に示す配列を有するポリペプチドまたはその断片と組み合わせて、β3-アドレナリン作動性受容体(β3-AR)拮抗物質の治療的に有効な投与量を投与する段階を含む、方法。
- 前記β3-AR拮抗物質がSR59230Aである、請求項46記載の方法。
- 前記ポリペプチドがグリコシル化される、請求項46記載の方法。
- SEQ ID NO: 1に示す配列を有するポリペプチドと、β3作動物質とを含む、薬学的組成物。
- SEQ ID NO: 1に示す配列を有するポリペプチドと、β3-アドレナリン作動性受容体(β3-AR)拮抗物質とを含む、薬学的組成物。
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Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005511088A (ja) * | 2001-10-05 | 2005-04-28 | セローノ ジェネティクス インスティテュート ソシエテ アノニム | Gzipポリヌクレオチドおよびポリペプチドならびにその使用 |
JP2006096666A (ja) * | 2002-10-31 | 2006-04-13 | Kaneka Corp | 選択的ヒトβ3アドレナリン受容体アゴニスト剤 |
JP2006514032A (ja) * | 2002-12-20 | 2006-04-27 | ファイザー・プロダクツ・インク | ミクロソームトリグリセリド転送タンパク質阻害剤 |
JP2008527011A (ja) * | 2005-01-19 | 2008-07-24 | メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド | 糖尿病治療用又は予防用のジペプチジルペプチダーゼ−iv阻害剤としての二環系ピリミジン |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB9308178D0 (en) * | 1993-04-21 | 1993-06-02 | Smithkline Beecham Plc | Novel compounds |
CA2164009A1 (en) * | 1993-06-14 | 1994-12-22 | Robert L. Dow | Secondary amines as antidiabetic and antiobesity agents |
US5480908A (en) * | 1993-12-13 | 1996-01-02 | American Cyanamid Company | β3 -adrenergic agents benzodioxole dicarboxylates and their use in pharmaceutical compositions |
ES2094687B1 (es) * | 1994-08-02 | 1997-12-16 | S A L V A T Lab Sa | Combinacion farmaceutica contra la obesidad o el sobrepeso. |
US6657063B1 (en) * | 1998-04-30 | 2003-12-02 | Pfizer Inc. | Combinations of β3 agonists and growth hormone secretagogues |
GB9811465D0 (en) * | 1998-05-29 | 1998-07-29 | Tisdale Michael J | Glycoproteins having lipid mobilising properties and therapeutic applications thereof |
CA2394778A1 (en) * | 1999-12-16 | 2002-06-14 | Shiro Miyoshi | Novel substituted tricyclic compounds |
IL142707A0 (en) * | 2000-04-27 | 2002-03-10 | Pfizer Prod Inc | Methods of treating obesity using a neurotensin receptor ligand |
AUPQ981700A0 (en) * | 2000-09-01 | 2000-09-28 | Metabolic Pharmaceuticals Limited | Product and method for control of obesity |
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JP2006096666A (ja) * | 2002-10-31 | 2006-04-13 | Kaneka Corp | 選択的ヒトβ3アドレナリン受容体アゴニスト剤 |
JP2006514032A (ja) * | 2002-12-20 | 2006-04-27 | ファイザー・プロダクツ・インク | ミクロソームトリグリセリド転送タンパク質阻害剤 |
JP2008527011A (ja) * | 2005-01-19 | 2008-07-24 | メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド | 糖尿病治療用又は予防用のジペプチジルペプチダーゼ−iv阻害剤としての二環系ピリミジン |
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