JP2016531889A - ヒト胎盤および造血細胞由来の細胞による治療 - Google Patents

Abstract

本明細書で提供されるのは、ヒト胎盤灌流液由来の単核球および造血細胞を対象、例えば、ヒト対象に投与することを含む治療方法、それらを含む組成物、およびキメリズムを確立し、組織（例えば、血液）を生着し、移植片対宿主病の重症度または持続期間を減少させ、代謝異常や血液悪性腫瘍などの血液学的疾患の症状を治療または寛解するためのそれらの使用である。【選択図】なし

Description

（１．技術分野）
本出願は、２０１３年１０月１１日出願の米国仮特許出願第６１／８９０，０５７号、および２０１３年１０月３日出願の米国仮特許出願第６１／８８６，６４８号の利益を請求しており、それらの開示はそれらの全体において参照により本明細書に組み込まれている。

本明細書で提供されるのは、ヒト胎盤灌流液および造血細胞由来の単核球を対象、例えば、ヒト対象に投与することを含む治療方法、それらを含む組成物、およびキメリズムを確立し、組織（例えば、血液）を生着し、移植片対宿主病の重症度または持続期間を減少させ、代謝異常や血液悪性腫瘍などの血液学的疾患の症状を治療または寛解するためのそれらの使用である。

（２．背景技術）
同種造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）では、免疫系を再構成し、かつ、血球（造血）を形成することが可能な幹細胞をある個人から別の個人に移す。遺伝子型でヒト白血球抗原（ＨＬＡ）が同一の血縁関係にあるドナー−白人患者の約３０％に使用可能なドナー−は、ＨＳＣＴに対する最適なドナーと見なされる。残念なことに、多くの患者は、骨髄が完全に適合する家族または非血縁ドナーが利用可能ではなく、彼らの唯一の治療選択肢は、部分的に適合した血縁関係にあるドナー（ＰＭＲＤ）からの移植を有することであり、これは、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）およびその合併症（例えば、移植関連死）のリスクを伴う。

臍帯血（ＵＣＢ）は、ＨＳＣＴで使用するのに適した細胞の別の供給源を表す。この臨床状況におけるＵＣＢの利点の１つは、ＧＶＨＤのリスクが軽減されることである。残念なことに、現在のＵＣＢ細胞移植療法にも、移植できる細胞の量が限られていることなどの欠点がある。大量のＵＣＢ細胞、例えば、１単位超の移植を必要とする場合、安全性や有効性が危険にさらされることがある。さらに、特に、ＨＬＡ適合が不完全である場合には、生着不全やＧＶＨＤのリスクが存在する。骨髄または末梢血に対してＵＣＢを用いるＨＳＣＴの別の欠点は、生着までの時間に遅れが生じ、レシピエントの死をもたらすことが多いことである。

そのため、造血再構成用に設計された幹細胞移植療法の改善が必要とされている。

（３．概要）
一態様では、本明細書で提供されるのは、ヒト胎盤灌流液（ＨＰＣ）、例えば、ヒト胎盤灌流液由来の単核球と組み合わせて造血細胞を投与することを含む、造血細胞を対象、例えば、ヒト対象に移植する方法である。本明細書に記載の造血細胞を移植する方法で使用することができる造血細胞の供給源としては、例えば、骨髄またはそれに由来する細胞、末梢血またはそれに由来する細胞、および臍帯血またはそれに由来する細胞が挙げられる。本明細書で用いる場合、造血細胞のこれらの供給源は、「ＨＴ細胞」と総称される。

一態様では、本明細書で提供されるのは、ＨＴ細胞、例えば、ヒト臍帯血（ＵＣＢ）細胞を対象に移植する方法であって、前記方法は、ヒト胎盤灌流液由来の単核球の集団と組み合わせてＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞を投与することを含み、前記ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞は、対象と非血縁である。一態様では、本明細書で提供されるのは、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞を対象に移植する方法であって、前記方法は、ヒト胎盤灌流液由来の単核球の集団と組み合わせてＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞を投与することを含み、ヒト胎盤灌流液由来の前記細胞は、対象と非血縁である。一態様では、本明細書で提供されるのは、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞を対象に移植する方法であって、前記方法は、ヒト胎盤灌流液由来の単核球の集団と組み合わせてＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞を投与することを含み、ヒト胎盤灌流液由来の前記細胞は、対象に適合しない。

一態様では、本明細書で提供されるのは、対象における疾患の治療方法に使用される造血細胞であって、該方法は、ヒト胎盤灌流液由来の単核球と組み合わせて前記造血細胞を投与することを含み、該疾患は、代謝異常またはその症状、血液学的疾患または悪性疾患またはその症状、移植片対宿主病、または腫瘍である。造血細胞は、骨髄細胞またはそれに由来する細胞、末梢血細胞またはそれに由来する細胞、あるいはＵＣＢ細胞またはそれに由来する細胞であってもよい。一態様では、ＵＣＢ細胞は、対象と非血縁である。一態様では、ヒト胎盤灌流液由来の単核球は、対象と非血縁である。一態様では、ヒト胎盤灌流液由来の単核球は、対象に適合しない。後述の実施態様は、開示の各態様のことを指す。

ある実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞は、胎盤潅流液由来の前記単核球と非血縁である。ある実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞は、胎盤潅流液由来の前記単核球に適合しない。ある実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞は、胎盤潅流液由来の前記単核球と非血縁であるかまたは適合しない。特定の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞は、対象に３／６〜６／６ＨＬＡ適合している。特定の実施態様では、ＨＴ細胞は、例えば、成人の供給源由来のＨＴ細胞対象に６／８〜８／８ＨＬＡ適合している。

ある実施態様では、１単位のＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞を投与する。他の実施態様では、１単位超のＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞を投与する。特定の実施態様では、２〜６単位のＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞を投与する。

ある実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞は、血液、例えば、ＵＣＢ中に存在する。ある実施態様では、胎盤潅流液由来の単核球は、胎盤潅流液中に存在する。

ある実施態様では、胎盤潅流液は、部分的に放血させた胎盤から得られる。

ある実施態様では、胎盤潅流液細胞の２％またはそれ以上は、ＣＤ３４＋である。

ある実施態様では、該方法は、対象におけるキメリズムをもたらす。特定の実施態様では、該キメリズムは、ＨＴ細胞、例えば、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、またはそれに由来する子孫を含む。特定の実施態様では、１単位超のＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞を投与し、該方法は、対象におけるキメリズムをもたらし、該キメリズムは、１単位超のＨＴ細胞由来の細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、またはそれに由来する子孫を含む。特定の実施態様では、キメリズムは、胎盤潅流液細胞またはそれに由来する子孫を含む。特定の実施態様では、キメリズムは、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、またはそれに由来する子孫と、胎盤潅流液細胞またはそれに由来する子孫とを含む。

ある実施態様では、該方法は、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞の生着をもたらす。特定の実施態様では、該方法は、胎盤潅流液細胞の生着をもたらす。

ある実施態様では、該方法は、移植片対宿主病の持続期間または重篤度を減少させる。

ある実施態様では、対象は腫瘍を有し、該方法は、移植片対腫瘍反応をもたらす。ある実施態様では、該方法は、腫瘍治療をもたらす。

ある実施態様では、該方法は、それを必要とする対象において、副腎脳白質ジストロフィー、ムコ多糖症、ニーマン−ピック病、異染性白質ジストロフィー、ウォルマン病、クラッベ病、ゴーシェ病、フコシドーシス、またはバッテン病などの代謝異常の症状の寛解をもたらす。

ある実施態様では、該方法は、それを必要とする対象において、骨髄異形成症候群、無巨核球性血小板減少症、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、鎌状赤血球病、ベータサラセミア、重症複合型免疫不全症、骨髄不全症、または貧血（例えば、重症再生不良性貧血またはダイアモンド・ブラックファン貧血）などの血液学的疾患または悪性疾患の症状の寛解をもたらす。

ある実施態様では、対象は、ヒト対象である。ある実施態様では、ヒト対象は、２５歳またはそれよりも若い。特定の実施態様では、ヒト対象は、乳児である。

（４．詳細な説明）
（４．１．造血細胞、例えば、臍帯血細胞、およびヒト胎盤灌流液由来の細胞を用いる方法）
一態様では、本明細書で提供されるのは、ヒト胎盤灌流液（ＨＰＣ）、例えば、ヒト胎盤灌流液由来の単核球と組み合わせて造血細胞を投与することを含む、造血細胞を対象、例えば、ヒト対象に移植する方法である。本明細書に記載の造血細胞を移植する方法で使用することができる造血細胞の供給源としては、例えば、骨髄またはそれに由来する細胞、末梢血またはそれに由来する細胞、および臍帯血またはそれに由来する細胞が挙げられる。本明細書で用いる場合、造血細胞のこれらの供給源は、「ＨＴ細胞」と総称される。

一実施態様では、本明細書で提供されるのは、ヒト胎盤灌流液（ＨＰＣ）、例えば、ヒト胎盤灌流液由来の単核球と組み合わせてＨＴ細胞、例えば、ヒト臍帯血細胞（ＵＣＢ）細胞、例えば、ヒト臍帯血を投与することを含む、ＨＴ細胞、例えば、ヒト臍帯血細胞（ＵＣＢ）細胞、例えば、ヒト臍帯血を対象、例えば、ヒト対象に移植する方法である。一実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ヒトＵＣＢ細胞、例えば、ヒトＵＣＢは、対象と非血縁である。特定の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、例えば、ヒトＵＣＢは、対象に部分的に不適合である。別の実施態様では、ＨＰＣ、例えば、ヒト胎盤灌流液は、対象と非血縁である。特定の実施態様では、ＨＰＣ、例えば、ヒト胎盤灌流液は、対象に部分的に不適合である。別の特定の実施態様では、ＨＰＣ、例えば、ヒト胎盤灌流液は、対象に適合しない。さらに別の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ヒトＵＣＢ細胞、例えば、ヒトＵＣＢは、対象と非血縁であり、ＨＰＣ、例えば、ヒト胎盤灌流液は、対象と非血縁である。さらに別の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ヒトＵＣＢ細胞、例えば、ヒトＵＣＢは、対象と非血縁であり、かつ、該対象に部分的に不適合であり、ＨＰＣ、例えば、ヒト胎盤灌流液は、対象と非血縁であり、かつ、該対象に部分的に不適合であるかまたは不適合である。一実施態様では、ＨＰＣ、例えば、ヒト胎盤灌流液は、ＨＴ細胞、例えば、ヒトＵＣＢ細胞、例えば、ＵＣＢと非血縁であり、かつ、不適合である。一実施態様では、ＨＰＣ、例えば、ヒト胎盤灌流液は、ＨＴ細胞、例えば、ヒトＵＣＢ細胞、例えば、ＵＣＢ、およびレシピエントと非血縁であり、かつ、不適合である。

特に記載のない限り、ＵＣＢまたはＨＰＣの文脈において本明細書で使用される「血縁関係にある」とは、自身または一親等もしくは二親等血縁者のことを言う。例えば、対象と血縁関係にあるＵＣＢとは、対象自身由来のＵＣＢ、または対象の一親等もしくは二親等血縁者由来のＵＣＢのことを言う。別の例では、ＨＰＣと血縁関係にあるＵＣＢとは、同じドナー、または一親等もしくは二親等血縁者であるドナー由来のＵＣＢおよびＨＰＣのことを言う。同様に、特に記載のない限り、これらの文脈における「非血縁である」とは、二親等血縁者の関係よりも遠い関係のことを言う。

特に記載のない限り、ＵＣＢまたはヒト胎盤灌流液由来の細胞（例えば、ＨＰＣ）の文脈において本明細書で使用される「適合した」とは、ＨＬＡ適合のことを言う。さらに、本明細書で使用される、ＵＣＢまたはヒト胎盤灌流液由来の細胞（例えば、ＨＰＣ）の文脈において本明細書で使用される「部分的に不適合である」とは、３／６、４／６、または５／６のＨＬＡ遺伝子座で適合する状況のことを言い、または、例えば、成人の供給源由来のＨＴ細胞に対する特定の実施態様では、６／８、７／８、または８／８のＨＬＡ遺伝子座で適合する状況のことを言う。また、特に記載のない限り、ＵＣＢまたはヒト胎盤灌流液由来の細胞（例えば、ＨＰＣ）の文脈において本明細書で使用される「不適合である」または「適合しない」とは、０／６、１／６、または２／６のＨＬＡ遺伝子座での適合のことを言い、または、例えば、成人の供給源由来のＨＴ細胞に対する特定の実施態様では、０／８、１／８、２／８、３／８、４／８、または５／８のＨＬＡ遺伝子座での適合のことを言う。「適合した」、「部分的に不適合であった」、および「不適合であった」とは、例えば、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞とＨＰＣとの間、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞の単位間、および／または、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、および／またはＨＰＣと細胞のレシピエントである対象との間の関係のことを指すこともある。

特に記載のない限り、本明細書で使用される（例えば、移植の文脈における）、ＵＣＢまたはそれに由来する細胞の「単位」とは、単一の臍帯由来のＵＣＢまたはそれに由来する細胞のことを言う。ある実施態様では、そのような方法は、１単位のＵＣＢまたはそれに由来する細胞を投与することを含む。別の実施態様では、本明細書に示される方法は、複数単位のＵＣＢまたはそれに由来する細胞を投与することを含む。例えば、本明細書に示される方法は、２、３、または４単位のＵＣＢまたはそれに由来する細胞を投与することを含むことができる。１単位超のＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞を使用する例では、ある実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞の少なくとも一部分は、対象と、ＨＰＣと、および／または、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞（例えば、他のＵＣＢ細胞単位）の他の部分と非血縁であり得る。１単位超のＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞を使用する例では、ある実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞の少なくとも一部分は、対象に、ＨＰＣに、および／または、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞（例えば、他のＵＣＢ細胞単位）の他の部分に不適合であるかまたは部分的に不適合であり得る。別の実施態様では、本明細書に示される方法は、１単位未満のＨＴ細胞またはＵＣＢまたはそれに由来する細胞を投与することを含むことができる。例えば、本明細書に示される方法は、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、または０．９単位のＨＴ細胞またはＵＣＢまたはそれに由来する細胞を投与することを含むことができる。特定の実施態様では、本明細書に示される方法は、複数投与にわたって特定数の単位（１未満、１、または２以上）を投与することを含むことができる。

別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、例えば、ＵＣＢと、ＨＰＣ、例えば、ヒト胎盤灌流液との組み合わせを対象に投与することを含む、対象におけるキメリズムを誘発する方法であって、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞の少なくとも一部分は、対象に部分的に不適合であり、および／または、ＨＰＣは、対象におけるキメリズムが起こるように、対象に不適合であるかまたは部分的に不適合である。特に記述がない限り、本明細書で使用される「キメリズム」とは、対象における非自己ＤＮＡの存在、例えば、レシピエント対象に対して不適合であるかまたは部分的に不適合である細胞由来のＤＮＡの存在のことを言う。

そのような方法の一実施態様では、１単位超のＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞を対象に投与し、例えば、２、３、または４単位のＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞を対象に投与する。１単位超のＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞を対象に投与する特定の実施態様では、キメリズムを誘発する方法は、複数のキメリズムをもたらすことができる、すなわち、１単位超および最大で全単位の投与したＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞またはその子孫を伴うキメリズムをもたらし得る。

そのような方法の別の実施態様では、ＨＰＣまたはその子孫を伴うキメリズムをもたらし得る。さらに別の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞（１単位超のＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞を投与する例では、複数のキメリズムを含む）またはその子孫、およびＨＰＣまたはその子孫を伴うキメリズムをもたらし得る。

そのような方法のさらに別の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞は、対象と非血縁である。１単位超のＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢを投与する例では、１単位以上のＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞は、対象と非血縁であることがある。そのような方法の特定の実施態様では、ＨＰＣは、対象と非血縁であり、かつ、さらに、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞と非血縁であり得る。さらにそのような方法の別の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞とＨＰＣの両方は、対象と非血縁である。

そのような方法のある実施態様では、キメリズム（ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、またはその子孫、またはＨＰＣまたはその子孫のいずれかまたは両方を含む）は、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞をＨＰＣと組み合わせて対象に投与した１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２日、またはそれ以上以内に対象において最初に検出される。

キメリズムは、当該技術分野で公知の方法を用いて検出することができる。例えば、キメリズムは、血液試料を用いて検出することができる。一実施態様では、キメリズムは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）ベース方法を用いて、例えば、短縦列反復アッセイによって検出される。一実施態様では、造血幹細胞移植後のキメリズムに対する試験は、レシピエントとドナーの遺伝子プロファイルを識別することと、その後、レシピエントの血液、骨髄、または他の組織中における混合の度合いを評価することを伴う。ＤＮＡによるキメリズム試験（生着分析）は、ヒト同一性試験で一般に用いられる方法を使用し、短縦列反復（ＳＴＲ）遺伝子座と呼ばれるゲノム多型の分析により達成される。一実施態様では、末梢血ドナーキメリズム（ＵＣＢおよび潅流液細胞）（全血、ＮＫおよびＴ細胞）の定量（例えば、短縦列反復アッセイを用いて）は、７日目、１４日目、３０日目、６０日目、１００日目、および１８０日目（＋／−１０日）に評価し、ここで、末梢血レシピエントキメリズムの定量（例えば、短縦列反復アッセイを用いて）は、ベースラインでのドナー細胞（ＵＣＢおよび潅流液細胞）のキメリズムに沿ったベースラインで評価する。

さらに別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＨＴ細胞、例えば、ヒトＵＣＢ細胞、例えば、ＵＣＢと、ＨＰＣ、例えば、ヒト胎盤灌流液との組み合わせを対象に投与することを含む、対象における細胞生着、例えば、血小板または好中球生着の方法であり、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞の少なくとも一部分は、対象に部分的に適合し、および／または、ＨＰＣは、対象において細胞生着が起こるように、対象に不適合であるかまたは部分的に不適合である。ある実施態様では、細胞生着は、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞またはその子孫の生着を含む。特定の他の実施態様では、細胞生着は、ＨＰＣまたはその子孫の生着を含む。さらに他の実施態様では、生着は、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞またはその子孫、およびＨＰＣまたはその子孫の生着を含む。ある実施態様では、本明細書で提供される細胞生着の方法は、生着までの時間を短縮する。

そのような方法の一実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞は、対象と非血縁である。特定の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞は、対象に部分的に不適合である。別の特定の実施態様では、ＨＰＣは、対象と非血縁であり、かつ、さらに、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞と非血縁であり得る。特定の実施態様では、ＨＰＣは、対象に部分的に不適合である。別の特定の実施態様では、ＨＰＣは、対象に適合しない。さらに別の実施態様では、ＵＣＢ細胞は、対象と非血縁であり、ＨＰＣは、対象と非血縁である。さらに別の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞は、対象と非血縁であり、かつ、該対象に部分的に不適合であり、ＨＰＣは、対象と非血縁であり、かつ、該対象に部分的に不適合であるかまたは不適合である。ある実施態様では、本明細書に示される方法は、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞を単独で投与する場合と比べて、生着する能力が増したことを示す。

生着は、当該技術分野で公知の方法を用いて検出することができる。例えば、一実施態様では、分画をもつ全血球数は、０日目から、好中球絶対数が最低値に到達した後に３日間＞５００／ｍｍ^３になり、かつ、血小板数が、３つの異なる日で３回連続した測定で、血小板輸血から最低７日間独立して≧２０，０００／ｍｍ^３に到達するまで、１日〜３日ごとに行ってもよい。本明細書で用いる場合、「好中球生着」とは、好中球数最低値の後に好中球絶対数が５００／ｍｍ^３を上回る最初の３日間のことを言う。本明細書で用いる場合、「血小板生着」とは、血小板が輸血なしで≧２０，０００／ｍｍ^３となる７日間の後に、血小板数が≧２０，０００／ｍｍ^３を示す最初の連続３日間のことを言う。

ある実施態様では、対象における細胞生着は、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞をＨＰＣと組み合わせて対象に投与した１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、または６２日、または２カ月、２．５カ月、３カ月、またはそれ以上以内に検出される。

ある実施態様では、本明細書に示される方法は、１単位のＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、例えば、ＵＣＢを投与することを含む。別の実施態様では、本明細書に示される方法は、複数単位のＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、例えば、ＵＣＢを投与することを含む。例えば、本明細書に示される方法は、２、３、または４単位のＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、例えば、ＵＣＢを投与することを含むことができる。

さらに別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＨＴ細胞、例えば、ヒトＵＣＢ細胞、例えば、ＵＣＢと、ＨＰＣ、例えば、ヒト胎盤灌流液との組み合わせを対象に投与することを含む、対象におけるＧＶＨＤの持続期間または重篤度を軽減する方法であり、対象におけるＧＶＨＤの持続期間または重篤度の軽減が起こるように、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞の少なくとも一部分は、対象に部分的に適合し、および／または、ＨＰＣは、対象に不適合であるかまたは部分的に不適合である。

そのような方法の一実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞は、対象と非血縁である。特定の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞は、対象に部分的に不適合である。別の特定の実施態様では、ＨＰＣは、対象と非血縁であり、かつ、さらに、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞と非血縁であり得る。特定の実施態様では、ＨＰＣは、対象に部分的に不適合である。別の特定の実施態様では、ＨＰＣは、対象に適合しない。さらに別の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞は、対象と非血縁であり、かつ、ＨＰＣは、対象と非血縁である。さらに別の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞は、対象と非血縁であり、かつ、該対象に部分的に不適合であり、ＨＰＣは、対象と非血縁であり、かつ、該対象に部分的に不適合であるかまたは不適合である。ある実施態様では、本明細書に示される方法は、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞を単独で投与する場合と比べて、ＧＶＨＤの重症度または持続期間が軽減されたことを示す。

ある実施態様では、本明細書に示される方法は、１単位のＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、例えば、ＵＣＢを投与することを含む。別の実施態様では、本明細書に示される方法は、複数単位のＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、例えば、ＵＣＢを投与することを含む。例えば、本明細書に示される方法は、２、３、または４単位のＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、例えば、ＵＣＢを投与することを含むことができる。

ある実施態様では、本明細書に示される方法は、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、例えば、ＵＣＢを、ＨＰＣ、例えば、ヒト胎盤灌流液と同時に投与することを含む。特定の実施態様では、細胞を対象に同時に投与する。別の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、およびＨＰＣを、互いに、０．５、１、１．５、２、３、４、６、８、１０、１２、１６、１８、または２４時間、またはそれ以上以内、または１、２、３、４、５、６、または７日、またはそれ以上以内に対象に投与する。特定の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、例えば、ＵＣＢを対象に投与した後、ＨＰＣ、例えば、ヒト胎盤灌流液を投与する、例えば、ＵＣＢを投与してから１時間以内に、または対象がＵＣＢ投与に有害反応を示していないことを確認するのに必要な最短期間以内に投与する。

本明細書で提供される方法は、例えば、細胞生着までにかかる時間の短縮、対象が好中球減少症になる時間の制限、対象が血小板減少症になる時間の制限、キメリズムの確立、およびＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、例えば、ＵＣＢの単独投与に対するＧＶＨＤの重症度または持続期間の軽減またはＧＶＨＤの予防を含み得る利点を示すことができる。

投与されるＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞のＨＰＣに対する比率は変更可能である。ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞のＨＰＣに対する比率は、当業者の判断に従って決めることができる。ある実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞のＨＰＣに対する比率は、約１００，０００，０００：１、５０，０００，０００：１、２０，０００，０００：１、１０，０００，０００：１、５，０００，０００：１、２，０００，０００：１、１，０００，０００：１、５００，０００：１、２００，０００：１、１００，０００：１、５０，０００：１、２０，０００：１、１０，０００：１、５，０００：１、２，０００：１、１，０００：１、５００：１、２００：１、１００：１、５０：１、２０：１、１０：１、５：１、２：１、１：１；１：２；１：５；１：１０；１：１００；１：２００；１：５００；１：１，０００；１：２，０００；１：５，０００；１：１０，０００；１：２０，０００；１：５０，０００；１：１００，０００；１：５００，０００；１：１，０００，０００；１：２，０００，０００；１：５，０００，０００；１：１０，０００，０００；１：２０，０００，０００；１：５０，０００，０００；または約１：１００，０００，０００である。ある実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞のＨＰＣに対する比率は、約２０：１〜約１：２０であり、または約１：１０、約１：５、約１：１、約５：１、または約１０：１である。

ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、およびＨＰＣの投与は、当該技術分野で公知の任意の細胞投与技術を用いて行うことができる。一実施態様では、投与は、静脈、例えば、静脈内、例えば、ＩＶ、ＰＩＣＣライン、中心静脈ラインなどを介してである。例えば、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、およびＨＰＣは、注射または輸血を含む任意の薬学的または医学的に許容される様式で、対象に別々の組成物または単一組成物で投与してもよい。ある実施態様では、組成物（または複数）は、注射用組成物として配合してもよい（例えば、ＷＯ９６／３９１０１、その内容全体を文献引用によって本明細書に組み込んだものとする）。

ある実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、またはＨＰＣを対象に非経口投与する。本明細書で使用される用語「非経口」には、皮下注射、静脈内、筋肉内、動脈内注射、または注入技術が含まれる。ある実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、またはＨＰＣを対象に静脈内投与する。特定の他の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、またはＨＰＣを対象に脳室内投与する。

ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、およびＨＰＣは、任意の薬学的に許容される担体に別々または一緒に含まれてもよい。ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、またはＨＰＣは、任意の薬学的または医学的に許容される容器、例えば、血液バッグ、移動バッグ、プラスチック製チューブ、シリンジ、バイアルなどで運ぶ、保管する、輸送してもよい。

ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、および／またはＨＰＣの対象への投与は、１回または複数回で行ってもよい。ある実施態様では、投与は、１回で行う。ある実施態様では、投与は、複数回、例えば、２、３、４、またはそれ以上の回数で行う。ある実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞を複数回投与する。ある実施態様では、ＨＰＣを複数回投与する。

ある実施態様では、本明細書に記載の方法に従って対象に投与される臍帯血またはそれに由来する細胞（例えば、臍帯血由来の全有核細胞）の量は、臍帯血中に存在する細胞の数に基づいて決定することができる。対象に投与されるＵＣＢまたはそれに由来する細胞（例えば、臍帯血由来の全有核細胞）、および／または、ヒト胎盤灌流液またはＨＰＣまたはそれに由来する全有核細胞の量または数は、臍帯血またはそれに由来する細胞（例えば、臍帯血由来の全有核細胞）、および／または、ヒト胎盤灌流液またはＨＰＣまたはそれに由来する全有核細胞の供給源、治療される障害または状態の重症度または性質、並びに対象の年齢、体重、および健康状態などに依存する。ある実施態様では、対象のキログラム体重当たり約０．０１〜約０．１、約０．１〜約１、約１〜約１０、約１０〜約１０^２、約１０^２〜約１０^３、約１０^３〜約１０^４、約１０^４〜約１０^５、約１０^５〜約１０^６、約１０^６〜約１０^７、約１０^７〜約１０^８、または約１０^８〜約１０^９個の臍帯血細胞（例えば、臍帯血由来の全有核細胞）、ヒト胎盤灌流液またはそれに由来する細胞（例えば、ＨＰＣまたは胎盤潅流液由来の全有核細胞）、または全臍帯血細胞および胎盤潅流液由来の細胞（例えば、ＨＰＣまたは全有核細胞）を投与する。種々の実施態様では、対象のキログラム体重当たり少なくとも約０．１、１、１０、１０^２、１０^３、１０^４、１０^５、１０^６、１０^７、１０^８、または１０^９個の臍帯血細胞（例えば、臍帯血由来の全有核細胞）、胎盤潅流液由来の細胞（例えば、ＨＰＣまたは胎盤潅流液由来の全有核細胞）、または臍帯血細胞および胎盤潅流液由来の細胞を投与する。

特定の実施態様では、対象のキログラム体重当たり少なくとも約０．５×１０^６、１．０×１０^６、１．５×１０^６、２．０×１０^６、２．５×１０^６、３．０×１０^６、３．５×１０^６、４．０×１０^６、４．５×１０^６、５．０×１０^６、５．５×１０^６、６．０×１０^６、６．５×１０^６、７．０×１０^６、７．５×１０^６、８．０×１０^６、８．５×１０^６、９．０×１０^６、９．５×１０^６、１．０×１０^７、１．５×１０^７、２．０×１０^７、２．５×１０^７、３．０×１０^７、３．５×１０^７、４．０×１０^７、４．５×１０^７、５．０×１０^７、５．５×１０^７、または６．０×１０^７個の臍帯血細胞（例えば、臍帯血由来の全有核細胞）、胎盤潅流液由来の細胞（例えば、ＨＰＣまたは胎盤潅流液由来の全有核細胞）、または臍帯血細胞および胎盤潅流液由来の細胞（例えば、ＨＰＣまたは胎盤潅流液由来の全有核細胞）を投与する。より具体的な実施態様では、対象のキログラム体重当たり少なくとも約０．５×１０^６、１．０×１０^６、１．５×１０^６、２．０×１０^６、２．５×１０^６、３．０×１０^６、３．５×１０^６、４．０×１０^６、４．５×１０^６、または５．０×１０^６個の胎盤潅流液由来の細胞（例えば、ＨＰＣまたは胎盤潅流液由来の全有核細胞）を投与する。より具体的な実施態様では、対象のキログラム体重当たり少なくとも約１．５×１０^７、２．０×１０^７、２．５×１０^７、３．０×１０^７、３．５×１０^７、４．０×１０^７、４．５×１０^７、５．０×１０^７、５．５×１０^７、または６．０×１０^７個の臍帯血細胞（例えば、臍帯血由来の全有核細胞）を投与する。種々の実施態様では、対象のキログラム体重当たり多くとも約１０^４、１０^５、１０^６、１０^７、１０^８、または１０^９個の臍帯血細胞、胎盤潅流液由来の細胞（例えば、ＨＰＣまたは胎盤潅流液由来の全有核細胞）、または臍帯血細胞および胎盤潅流液由来の細胞（例えば、ＨＰＣまたは胎盤潅流液由来の全有核細胞）を投与する。特定の実施態様では、対象のキログラム体重当たり多くとも約０．５×１０^６、１．０×１０^６、１．５×１０^６、２．０×１０^６、２．５×１０^６、３．０×１０^６、３．５×１０^６、４．０×１０^６、４．５×１０^６、５．０×１０^６、５．５×１０^６、６．０×１０^６、６．５×１０^６、７．０×１０^６、７．５×１０^６、８．０×１０^６、８．５×１０^６、９．０×１０^６、９．５×１０^６、１．０×１０^７、１．５×１０^７、２．０×１０^７、２．５×１０^７、３．０×１０^７、３．５×１０^７、４．０×１０^７、４．５×１０^７、５．０×１０^７、５．５×１０^７、または６．０×１０^７個の臍帯血細胞（例えば、臍帯血由来の全有核細胞）、胎盤潅流液由来の細胞（例えば、ＨＰＣまたは胎盤潅流液由来の全有核細胞）、または臍帯血細胞および胎盤潅流液由来の細胞（例えば、ＨＰＣまたは胎盤潅流液由来の全有核細胞）を投与する。より具体的な実施態様では、対象のキログラム体重当たり多くとも約０．５×１０^６、１．０×１０^６、１．５×１０^６、２．０×１０^６、２．５×１０^６、３．０×１０^６、３．５×１０^６、４．０×１０^６、４．５×１０^６、または５．０×１０^６個の胎盤潅流液由来の細胞（例えば、ＨＰＣまたは胎盤潅流液由来の全有核細胞）を投与する。より具体的な実施態様では、対象のキログラム体重当たり多くとも約１．５×１０^７、２．０×１０^７、２．５×１０^７、３．０×１０^７、３．５×１０^７、４．０×１０^７、４．５×１０^７、５．０×１０^７、５．５×１０^７、または６．０×１０^７個の臍帯血細胞（例えば、臍帯血由来の全有核細胞）を投与する。特定の実施態様では、対象のキログラム体重当たり、胎盤潅流液由来の細胞（例えば、ＨＰＣまたは胎盤潅流液由来の全有核細胞）よりも多くの臍帯血細胞（例えば、臍帯血由来の全有核細胞）を投与する。

特定の実施態様では、対象のキログラム体重当たり、胎盤潅流液由来の細胞（例えば、ＨＰＣまたは胎盤潅流液由来の全有核細胞）よりも多くのＨＴ細胞、例えば、臍帯血細胞（例えば、全有核ＨＴ細胞、例えば、臍帯血由来の細胞）を投与する。

ある実施態様では、キログラム体重当たり少なくとも約１０^４〜約１０^７、例えば、０．５×１０^４、１．０×１０^４、１．５×１０^４、２．０×１０^４、２．５×１０^４、３．０×１０^４、３．５×１０^４、４．０×１０^４、４．５×１０^４、５．０×１０^４、５．５×１０^４、６．０×１０^４、６．５×１０^４、７．０×１０^４、７．５×１０^４、８．０×１０^４、８．５×１０^４、９．０×１０^４、９．５×１０^４、０．５×１０^５、１．０×１０^５、１．５×１０^５、２．０×１０^５、２．５×１０^５、３．０×１０^５、３．５×１０^５、４．０×１０^５、４．５×１０^５、５．０×１０^５、５．５×１０^５、６．０×１０^５、６．５×１０^５、７．０×１０^５、７．５×１０^５、８．０×１０^５、８．５×１０^５、９．０×１０^５、９．５×１０^５、０．５×１０^６、１．０×１０^６、１．５×１０^６、２．０×１０^６、２．５×１０^６、３．０×１０^６、３．５×１０^６、４．０×１０^６、４．５×１０^６、５．０×１０^６、５．５×１０^６、６．０×１０^６、６．５×１０^６、７．０×１０^６、７．５×１０^６、８．０×１０^６、８．５×１０^６、９．０×１０^６、９．５×１０^６、１．０×１０^７、１．５×１０^７、２．０×１０^７、２．５×１０^７、３．０×１０^７、３．５×１０^７、４．０×１０^７、４．５×１０^７、５．０×１０^７、５．５×１０^７、または６．０×１０^７個のＣＤ３４＋細胞を投与する。そのようなＣＤ３４＋細胞は、臍帯血単独に由来してもよく、または臍帯血および胎盤潅流液に由来してもよい。ある実施態様では、ＣＤ３４＋細胞が臍帯血および胎盤潅流液に由来していた場合、全胎盤潅流液細胞に対する胎盤潅流液由来のＣＤ３４＋細胞の割合は、全臍帯血細胞に対する臍帯血由来のＣＤ３４＋細胞の割合よりも大きい。一実施態様では、胎盤潅流液細胞集団におけるＣＤ３４＋細胞の割合は、臍帯血細胞集団におけるＣＤ３４＋細胞の割合と比較して０．１〜０．５、０．５〜１．０、１．０〜１．５、１．５〜２．０、２．０〜２．５、２．５〜３．０、３．０〜３．５、３．５〜４．０、４．０〜４．５、４．５〜５．０、５．０〜５．５、５．５〜６．０、６．０〜６．５、６．５〜７．０、７．０〜７．５、７．５〜８．０、８．０〜８．５、８．５〜９．０、９．０〜９．５、または９．５〜１０．０倍またはそれ以上高い。ある実施態様では、胎盤潅流液細胞の０．１％、０．５％、１．０％、１．５％、２．０％、２．５％、３．０％、３．５％、４．０％、４．５％、または５．０％、またはそれ以上は、ＣＤ３４＋である。

ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、例えば、ＵＣＢ、およびＨＰＣ、例えば、胎盤潅流液は、対象のサイズに適した容量で送達することができる。ヒト成人の一般的な血液量は、約８５〜１００ｍＬ／ｋｇ体重である。従って、ヒト成人の血液量は、約４０ｍＬから約３００ｍＬの範囲である。従って、種々の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞、例えば、ＵＣＢ、およびＨＰＣ、例えば、胎盤潅流液は、約０．５ｍＬ、１．０ｍＬ、２ｍＬ、３ｍＬ、４ｍＬ、５ｍＬ、６ｍＬ、７ｍＬ、８ｍＬ、９ｍＬ、１０ｍＬ、１１ｍＬ、１２ｍＬ、１３ｍＬ、１４ｍＬ、１５ｍＬ、１６ｍＬ、１７ｍＬ、１８ｍＬ、１９ｍＬ、２０ｍＬ、２１ｍＬ、２２ｍＬ、２３ｍＬ、２４ｍＬ、２５ｍＬ、２６ｍＬ、２７ｍＬ、２８ｍＬ、２９ｍＬ、または約３０ｍＬ、またはそれ以上の全容量で投与する。そのような容量の投与は、単一投与または複数投与であってもよい。そのような容量の臍帯血または臍帯血細胞、またはヒト胎盤灌流液またはそれに由来する細胞の数（例えば、ＨＰＣまたは胎盤潅流液由来の全有核細胞）を投与することができる時間は、例えば、０．５時間、１時間、１．５時間、２時間、２．５時間、３時間、３．５時間、４時間、またはそれ以上に変更可能である。

ある実施態様では、２０ｍＬを下回る少量の輸血は、シリンジを用いて行われる。より大容量の輸血は、注入デバイスによって、例えば、１〜４時間以内で投与することができる。

本明細書で提供される方法は、それを必要とする任意の対象で行うことができる。一態様では、対象は、造血の再構成、部分再構成、または増加を必要としている。ある実施態様では、対象は、ヒト対象である。ある実施態様では、対象は、成人ヒト対象である。ある実施態様では、対象は、２５歳またはそれ以下である。ある実施態様では、対象は、乳児である。

ある実施態様では、本明細書に示される方法、例えば、キメリズムを誘発する移植方法、および／または生着方法の前に、例えば、ＴＢＩ、クロファラビン、および／またはＡｒａ−Ｃ１を用いた骨髄破壊的前処置；例えば、ブスルファン、フルダラビン、および／またはアレムツズマブを用いた毒性軽減前処置（強度減弱型前処置とも呼ばれる）；放射線治療；化学療法；または免疫抑制療法または血球数を減少させる療法などの他の療法の１つ以上が対象には施されている。対象が上記の１つ以上を受けている特定の実施態様では、対象は、完全な骨髄破壊を示す。一実施態様では、少なくともいくつかの免疫系機能は保持される。

特定の態様では、本明細書で提供される方法は、先天性代謝異常、副腎脳白質ジストロフィー、ムコ多糖症、ニーマン−ピック病、異染性白質ジストロフィー、ウォルマン病、クラッベ病、ゴーシェ病、フコシドーシス、またはバッテン病などの代謝異常の治療方法として、それを必要とする対象に使用することができる。

別の特定の態様では、本明細書で提供される方法は、血液学的疾患または悪性疾患、例えば、リンパ造血系悪性疾患、骨髄異形成症候群、無巨核球性血小板減少症、白血病（例えば、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）および急性骨髄性白血病（ＡＭＬ））、好中球減少症、鎌状赤血球病（例えば、鎌状赤血球貧血）、ベータサラセミア（例えば、ベータサラセミアメジャー）、重症複合型免疫不全症、骨髄不全症、または貧血（例えば、重症再生不良性貧血またはダイアモンド・ブラックファン貧血）の治療方法として、それを必要とする対象に使用することができる。

本明細書で用いる場合、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、および「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、障害または状態、またはそのような障害または状態の任意のパラメータまたは症状の進行、重症度、および／または持続期間を低下または寛解させることを指す。治療は、対象が生存する場合、または治療される障害または状態が、治療の結果として何らかの形で測定可能に改善される場合に、効能を示すとみなすことができる。そのような改善は、例えば、１つまたは複数の測定可能な指標によって示すことができ、それらとして、例えば、特定の疾患、障害または状態に伴う生理的な状態または一連の生理的な状態の検出可能な変化が挙げられる。また、１つまたは複数の指標が、例えば、ほぼ同年齢の個体についての正常値の範囲内の値、またはそのような（１つもしくは複数の）指標が、治療がない場合に示すと予想されるよりも正常値に近い値に変化することによって、そのような治療に対して応答しているように見える場合に、治療は有効とみなされる。

本明細書で提供される方法のある実施態様では、本明細書で提供される方法は、障害または状態の治療において、第１の療法を１つまたは複数の第２の療法と組み合わせて使用することができる。そのような第２の療法としては、これらに限定されないが、手術、ホルモン療法、免疫療法、光線療法、または特定の薬物を用いる治療が挙げられる。本明細書で提供される方法と組み合わせて使用することができる例示的な療法としては、環境温度の制御；酸素を用いる補助；人工呼吸器または換気装置；末梢血の輸血；鉄の補充；経静脈栄養；光線療法；手術；代謝異常または血液学的疾患（血液系腫瘍を含む）を治療するための薬剤；抗生物質または抗ウイルス薬；抗炎症剤（例えば、ステロイド系抗炎症性化合物、非ステロイド系抗炎症性（ＮＳＡＩＤ）化合物）；一酸化窒素；抗ヒスタミン剤；免疫抑制剤；および免疫調節化合物（例えば、ＴＮＦ−α阻害剤）が挙げられる。

（４．２．ヒト胎盤灌流液細胞）
本開示に従って使用されるヒト胎盤灌流液（ＨＰＣ）、例えば、ヒト胎盤灌流液由来の単核球は、任意の医学的または薬学的に許容される様式で収集してもよく、組成物、例えば、医薬組成物中に存在してもよい。ある実施態様では、本明細書で提供される組成物（例えば、医薬組成物、すなわち、ヒトへの投与に適した医薬品グレードの溶液）は、ヒト胎盤灌流液を含む。ある実施態様では、組成物は、部分的に放血させた胎盤から得られるヒト胎盤灌流液を含む。ある実施態様では、組成物は、放血させた胎盤から得られるヒト胎盤灌流液を含む。ある実施態様では、組成物は、ヒト胎盤灌流液から単離した幹細胞などの細胞を含む。ある実施態様では、組成物は、ヒト胎盤灌流液から単離した有核細胞、例えば、単核球または全有核細胞を含む。

一実施態様では、ＨＰＣ、例えば、ヒト胎盤灌流液は、無菌である。一実施態様では、ＨＰＣ、例えば、ヒト胎盤灌流液の集団は、不均一である。

特定の実施態様では、ＨＰＣまたはヒト胎盤灌流液は、標準的な方法に従って赤血球および／または顆粒球を除去することで処理し、有核細胞の集団を生成する。そのような濃縮した細胞集団は、凍結せずに使用してもよく、またはその後の使用のために凍結してもよい。細胞集団を凍結しようとする場合、標準的な凍結保存剤（例えば、ＤＭＳＯ、グリセロール、Ｅｐｉｌｉｆｅ（商標）Ｃｅｌｌ Ｆｒｅｅｚｉｎｇ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ））を、濃縮した細胞集団に添加してから、細胞集団を凍結する。

ある実施態様では、胎盤潅流液由来の細胞は、胎盤潅流液由来の単核球を含む。ある実施態様では、胎盤潅流液由来の細胞は、胎盤潅流液由来の全有核細胞を含む。ある実施態様では、胎盤潅流液由来の細胞は、単一胎盤から得られる。ある実施態様では、胎盤潅流液由来の細胞は、２つ以上の胎盤から得られる。ある実施態様では、胎盤潅流液由来の細胞は、２つの胎盤から得られる。細胞が２つ以上の胎盤から得られる実施態様では、異なる胎盤由来の細胞は、互いに血縁関係にあるかまたは適合している必要はない。

本明細書に記載のように、胎盤潅流液は、臍帯血を流し出しており、かつ、胎盤細胞を得るための灌流前に残留血液を除去するために灌流されている胎盤から得てもよい。胎盤潅流液は、臍帯血を流し出しているが、残留血液を除去するために灌流されていない胎盤から得てもよい。胎盤潅流液は、臍帯の０．５〜６．０インチ、例えば、０．５〜１．０、１．０〜１．５、１．５〜２．０、２．０〜２．５、２．５〜３．０、３．０〜３．５、３．５〜４．０、または４．０〜６．０インチを除いた全てから分離されている胎盤から得てもよく、臍帯は、残余の臍帯血を含んでもよく、その一部は、灌流中に胎盤潅流液に入ることがあるため、胎盤潅流液に含まれる。胎盤潅流液は、臍帯血を流し出しておらず、かつ、残留血液を除去するための灌流もされていない胎盤から得てもよい。後者の２つの実施態様では、胎盤細胞、例えば、胎盤潅流液由来の有核細胞、例えば、ＨＰＣは、胎盤血液および／または臍帯血由来の有核細胞を含む。特定の実施態様では、本開示に従って使用される胎盤潅流液は、臍帯血を含まない。別の特定の実施態様では、本開示に従って使用される胎盤潅流液は、臍帯血を実質的に含まず、例えば、前記胎盤潅流液は、１０％未満、５％未満、１％未満、０．５％未満、または０．１％未満の臍帯血を含む。一般に、潅流液由来の細胞が臍帯血細胞を含む場合、そのような細胞は、本明細書で提供される方法の目的上、ＨＰＣ集団の一部であり、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞の一部ではないと見なされる。

胎盤潅流液は、投与のために、単一の個人から（すなわち、単一の単位として）収集してもよく、または例えば、同じ個人または１人または複数の他の個人から他の単位と共にプールしてもよい。ある実施態様では、胎盤潅流液またはそれに由来する細胞を投与前に保管する。ある実施態様では、１単位の胎盤潅流液は、対象のキログラム体重当たり少なくとも約０．５×１０^６、１．０×１０^６、１．５×１０^６、２．０×１０^６、２．５×１０^６、または３．０×１０^６個の胎盤潅流液由来の細胞、例えば、全有核細胞を投与するように十分な数の細胞を含有する。ある実施態様では、１単位の胎盤潅流液またはそれに由来する細胞を投与する。ある実施態様では、１単位未満を投与する。ある実施態様では、１単位超を投与する。

胎盤潅流液を得るための胎盤は、出産および胎盤剥離に成功した後に回収することができる。ある実施態様では、胎盤は、正期産から得る。ある実施態様では、胎盤は、早産から得る。いくつかの実施態様では、胎盤は、妊娠約２３〜約２５週で出生した乳児の胎盤である。いくつかの実施態様では、胎盤は、妊娠約２６〜約２９週で出生した乳児の胎盤である。いくつかの実施態様では、胎盤は、妊娠約３０〜約３３週で出生した乳児の胎盤である。いくつかの実施態様では、胎盤は、妊娠約３４〜約３７週で出生した乳児の胎盤である。いくつかの実施態様では、胎盤は、妊娠約３７〜約４２週で出生した乳児の胎盤である。

本開示に従って使用されるヒト胎盤灌流液またはそれに由来する細胞は、一般に、細胞の対象レシピエントと非血縁である。本開示に従って使用されるヒト胎盤灌流液またはそれに由来する細胞は、一般に、細胞の対象レシピエントに不適合であるかまたは部分的に不適合である。

本開示に従って使用されるヒト胎盤灌流液またはそれに由来する細胞は、任意の方法によって得ることができる。胎盤潅流液は、例えば、米国特許第７，０４５，１４８号、米国特許第７，２５５，８７９号、および／または米国特許第８，０５７，７８８号に開示されるように得ることができる。これらの各々の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。そのような灌流は、例えば、灌流液を、胎盤脈管構造を強制的に通過させ、かつ胎盤、典型的には母側から滲出する灌流液を、胎盤を含むパン中に収集するパン法による潅流であってもよい。潅流は、例えば、灌流液を通過させ、胎盤の胎児脈管構造のみから収集する閉回路潅流であってもよい。例えば、米国特許第８，０５７，７８８号を参照されたい。この内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施態様では、そのような潅流は、連続的であってもよく、すなわち、胎盤を通過した灌流液を、胎盤潅流液由来の細胞（例えば、ＨＰＣまたは胎盤潅流液由来の全有核細胞）の単離に先立ってもう１回または複数回通過させてもよい。

（４．３．臍帯血細胞）
本開示に従って使用される臍帯血（本明細書では、ＵＣＢまたは「臍帯血」とも呼ばれる）は、任意の医学的または薬学的に許容される様式で収集してもよいし、組成物、例えば、医薬組成物中に存在してもよい。臍帯血を収集するための種々の方法が記載されている。例えば、米国特許第６，１０２，８７１号；米国特許第６，１７９，８１９号；および米国特許第７，１４７，６２６号を参照されたい。これらの各々の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。臍帯血を収集するための従来の技術は、針またはカニューレの使用に基づいており、これは、重力の助けを借りて使用される。臍帯血は、例えば、血液バッグ、移動バッグ、または無菌のプラスチック製チューブの中に収集してもよい。

いくつかの実施態様では、臍帯血は、商業的な臍帯血バンク（例えば、ＬｉｆｅＢａｎｋＵＳＡなど）から得られる。別の実施態様では、臍帯血を、分娩後の哺乳動物の臍帯から収集し、直ちに（例えば、収集後１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２時間以内に）使用する。他の実施態様では、対象を治療するために使用する臍帯血は、凍結保存されていた臍帯血である。臍帯血は、単一の臍帯または複数の臍帯から収集することができる。

ある実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞は、対象および／またはＨＰＣと非血縁である。別の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞は、対象および／またはＨＰＣに部分的に不適合である。さらに別の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞は、ＨＰＣに不適合である。さらに別の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞は、ＨＰＣと非血縁であり、かつ、不適合である。特定の実施態様では、ＵＣＢは、３／６、４／６、または５／６のＨＬＡ遺伝子座で対象に適合する。特定の実施態様では、ＨＴ細胞、例えば、成人の供給源由来のＨＴ細胞は、６／８、７／８、または８／８のＨＬＡ遺伝子座で対象に適合する。

いくつかの実施態様では、臍帯血は、早産の臍帯から調製する。他の実施態様では、臍帯血は、正期産の臍帯から調製する。ある実施態様では、臍帯血は、正期産の分娩後の哺乳動物の臍帯から得られる。他の実施態様では、臍帯血は、早産の分娩後の哺乳動物の臍帯から得られる。いくつかの実施態様では、臍帯は、妊娠約２３〜約２５週で出生した乳児の臍帯である。いくつかの実施態様では、臍帯は、妊娠約２６〜約２９週で出生した乳児の臍帯である。いくつかの実施態様では、臍帯は、妊娠約３０〜約３３週で出生した乳児の臍帯である。いくつかの実施態様では、臍帯は、妊娠約３４〜約３７週で出生した乳児の臍帯である。いくつかの実施態様では、臍帯は、妊娠約３７〜約４２週で出生した乳児の臍帯である。

臍帯血またはそれに由来する細胞（例えば、全有核細胞またはそれに由来する幹細胞）は、投与のために、単一の個人から（すなわち、単一の単位として）収集してもよく、または他の単位と共にプールしてもよい。ある実施態様では、臍帯血またはそれに由来する細胞（例えば、全有核細胞またはそれに由来する幹細胞）は、使用前に保管する。臍帯血を複数の臍帯からプールする場合、プールした臍帯血は、正期産のみに由来する臍帯血、正期産の組み合わせに由来する臍帯血、または早産のみに由来する臍帯血を含むことができる。例えば、未熟児の臍帯に由来する臍帯血は、例えば、他の未熟児に由来する臍帯血、正期産のみに由来する臍帯血、または早産の胎盤および正期産の胎盤の両方に由来する臍帯血の組み合わせと組み合わせることができる。自己由来の臍帯血または同種異系の臍帯血を含めて、臍帯血は、末梢血と組み合わせることもできる。ある実施態様では、早産に由来する臍帯血を使用し、したがって、臍帯血は、正期産の臍帯血と比較して、単位体積当たり、比較的多数のＣＤ３４＋幹細胞を含む。ある実施態様では、１単位の臍帯血は、対象のキログラム体重当たり少なくとも約１．０×１０^６、１．５×１０^６、２．０×１０^６、１．５×１０^６、２．０×１０^６、２．５×１０^６、３．０×１０^６、３．５×１０^６、４．０×１０^６、４．５×１０^６、６．０×１０^６、６．５×１０^６、７．０×１０^６、７．５×１０^６、８．０×１０^６、８．５×１０^６、９．０×１０^６、９．５×１０^６、１．０×１０^７、１．５×１０^７、２．０×１０^７、２．５×１０^７、３．０×１０^７、３．５×１０^７、４．０×１０^７、４．５×１０^７、５．０×１０^７、５．５×１０^７、または６．０×１０^７個の前記臍帯血から得られる細胞、例えば、臍帯血由来の全有核細胞を投与するように十分な数の細胞を含有する。ある実施態様では、１単位の臍帯血またはそれに由来する細胞を投与する。ある実施態様では、１単位未満を投与する。ある実施態様では、１単位超を投与する、例えば、２つまたはそれ以上（例えば、２、３、４、５、６、またはそれ以上）の単位を投与する。

（４．４．ＨＴ細胞、ＵＣＢ、および胎盤灌流液の収集）
ＨＴ細胞、例えば、臍帯血細胞、例えば、ＵＣＢ、およびＨＰＣ、例えば、ヒト胎盤灌流液は、当該技術分野で公知の方法を用いて、かつ、医師により確立された手順に従って得ることができる。

一実施態様では、臍帯または臍帯血および／または胎盤を、インフォームドコンセントを得た患者から回収し、患者の妊娠の前、間および後の完全な病歴も得る。これらの診療記録を使用して、胎盤またはＵＣＢ、またはそこから収穫した細胞、例えば、ＨＰＣまたはＨＴ細胞、例えば、ＵＣＢ細胞のそれに続く使用を調整することができる。例えば、ＵＣＢまたは胎盤潅流液から得られたそのようなヒト細胞は、次いで、治療すべき対象のための個別化医療のために容易に使用することができる。

ある実施態様では、ヒト胎盤は、その娩出後間もなく回収する。ある実施態様では、臍帯血も回収する。特定の実施態様では、臍帯には、従来の臍帯血回収プロセスを施す。臍帯血は、商業的な臍帯血バンクサービス、例えば、ＬｉｆｅＢａｎｋＵＳＡ、Ｃｅｄａｒ Ｋｎｏｌｌｓ、Ｎ．Ｊ．から得ることもできる。

ある実施態様では、臍帯血は、米国特許第７，１４７，６２６号に記載のような臍帯血収集キットを用いて収集する。この内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

一実施態様では、標準的なチャック、無菌のガーゼパッド、ポピドンヨードスワブ、無菌のアルコールパッド、プラスチック製臍帯血用クランプ、スライドクリップまたは止血用クランプ、および漏れ防止型ジッパー付き袋または小型の缶を含有する収集キットを使用する。胎盤の分娩前（子宮内での収集）、胎盤の分娩後（子宮外での収集）、または胎盤の分娩に先立つ帝王切開の間に収集を行うことができる。手短にいうと、臍帯上の遠位における静脈穿刺部位を滅菌する。大型の収集袋から伸びる収集チューブをクランプし、針からキャップを外し、針の先端面取り部を臍帯静脈に向かって、臍帯静脈にカニューレ挿入する。クランプを外して、血液を流れさせ、収集袋をカニューレ挿入部位より下まで下げ、血液が収集袋を重力によって満たすのを可能にする。血液の流れが止まったら、静脈穿刺部位をクランプし、臍帯静脈から針を引き抜く。収集袋にラベルを付け、断熱された発送容器中に入れる。臍帯血がクランプされた状態の胎盤を、漏れ防止型ジッパー付き袋中に置き、次いで、袋を適切に閉じ、ラベルを付ける。収集後、臍帯血細胞の生存率を、トリパンブルー染色後に血球計数器によって決定する。

ある実施態様では、近位の臍帯を、例えば、臍帯血の回収前に胎盤（ｐｌａｃｅｎｔａｌ ｄｉｓｃ）中への挿入部の３〜４インチ以内においてクランプする。他の実施態様では、近位の臍帯を、臍帯血の回収後ではあるが、胎盤を処理する前にクランプする。臍帯血を収集するための従来の技術を使用してもよい。一実施態様では、針またはカニューレを使用して、重力の助けを借りて臍帯血を流し出す。

哺乳動物の胎盤の灌流方法は、例えば、Ｈａｒｉｒｉの文献、米国特許第７，０４５，１４８号および同第７，２５５，８７９号、および「臓器の収集および保存のための改良組成物（Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ ａｎｄ Ｐｒｅｓｅｒｖｉｎｇ Ｏｒｇａｎｓ）」と題された米国特許出願公開第２００７／０１９００４２号に開示されている。これらの開示は、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる。

特定の実施態様では、胎盤は、約１時間〜約７２時間または約４時間〜約２４時間の期間にわたって保管し、それから、胎盤を灌流していずれの残余の臍帯血も除去してもよく、または残余の臍帯血を除去せずに胎盤を灌流してもよい。胎盤を、抗凝固溶液中で、約５℃〜約２５℃、例えば、室温付近の温度で保管してもよい。適切な抗凝固溶液は、当該技術分野ではよく知られている。例えば、ヘパリンまたはワルファリンナトリウムの溶液を使用することができる。一実施態様では、抗凝固溶液は、ヘパリン溶液（１：１０００溶液中、１％ｗ／ｗ）を含む。ある実施態様では、胎盤は、ＨＰＣ、例えば、ヒト胎盤灌流液を収集するまで、３６時間以上は保管しない。

一実施態様では、ヒト胎盤灌流液は、放血させたまたは部分的に放血させた胎盤を適切な灌流水溶液で灌流することで得られる。一態様では、胎盤は、完全に放血させずに適切な灌流水溶液で灌流する。灌流溶液は、任意の等張水溶液であってよい。一実施態様では、抗凝固薬（例えば、ヘパリン、ワルファリンナトリウム）は、灌流溶液中に溶解している。そのような灌流のための等張水溶液は、当該技術分野ではよく知られており、それらとしては、例えば、栄養培地、生理食塩水、例えば、リン酸緩衝生理食塩水または０．９Ｎ塩化ナトリウム溶液が挙げられる。使用する場合、灌流液は、いずれの残余の臍帯血の血餅形成も防止するのに十分な濃度で抗凝固薬を含むことができる。特定の実施態様では、１〜１００単位の濃度のヘパリンを用いる。別の特定の実施態様では、１ｍｌ当たり１〜１０単位の濃度のヘパリンを用いる。一実施態様では、アポトーシス阻害剤、例として、フリーラジカル消去剤、詳細には、酸素フリーラジカル消去剤を、放血の間および直後に使用することができ、次いで、これらの薬剤は、胎盤から洗浄することができる。この実施態様によれば、単離した胎盤は、アポトーシスを防止または阻害するために、低体温条件下で保管してもよい。

ある実施態様では、胎盤は、灌流液で洗い流さずに、灌流前に全ての残留する臍帯血を除去する。他の実施態様では、胎盤潅流液由来の細胞を収集する前に、胎盤を、例えば、１０〜１００ｍＬの灌流液で洗い流して、実質的に全ての残留する臍帯血を除去する。典型的には、灌流液を、胎盤中への重力による流れを使用して、臍帯動脈および臍帯静脈のいずれかまたは両方を通して通過させることによって、そのような洗い流しを行う。臍帯動脈および臍帯静脈が胎盤の最も高い点に位置するように、胎盤の位置を定める（例えば、胎盤をぶら下げる）ことができる。一実施態様では、臍帯動脈および臍帯静脈を、柔軟なコネクタを介して灌流液のリザーバに接続しているピペットに、同時に接続させる。灌流液を、臍帯静脈および臍帯動脈へと通過させ、妊娠中には母体の子宮に付着していた胎盤の表面から、適切な開放槽中に収集する。また、灌流液を、臍帯の開口部を通して導入し、母体の子宮壁と界面を形成していた胎盤壁中の開口部から流すまたは染み出させることもできる。

一実施態様では、近位の臍帯を、灌流の間クランプし、例えば、臍帯の、胎盤中への挿入部の４〜６インチ以内においてクランプする。

一実施態様では、本質的に全ての残余の臍帯血を除去し、それに続いて、臍帯血の除去後に胎盤中に残留する胎盤細胞を収集または回収するのに十分な量の灌流液を使用する。

ある実施態様では、約５００ミリリットル（ｍｌ）〜１．５リットル、例えば、７５０ｍｌ〜１リットルの灌流液は、胎盤を部分的または完全に放血させ、細胞、例えばＨＰＣまたは全有核細胞の最初の集団を回収するために十分であるが、それより多いまたは少ない灌流液を、観察される結果に依存して使用してもよい。

特定の実施態様では、本明細書に記載の方法で使用される胎盤潅流液は、臍帯血を含む。特定の実施態様では、本明細書に記載の方法で使用される胎盤潅流液は、臍帯血を含まない。別の特定の実施態様では、本明細書に記載の方法で使用される胎盤潅流液は、臍帯血を実質的に含まず、例えば、前記胎盤潅流液は、１０％未満、５％未満、１％未満、０．５％未満、または０．１％未満の臍帯血を含む。

別の実施態様では、灌流溶液を臍帯静脈を通して通過させ、臍帯動脈から収集するかまたは臍帯動脈を通して通過させ、臍帯静脈から収集する。そのような方法の代表的で非限定的な例としては、以下のように行うことができる。分娩後の胎盤は、出産後約４８時間以内に得られる。臍帯はクランプし、クランプの上部で切断する。羊膜は灌流の間保持されていてもよく、または、例えば指による鈍的切開によって絨毛膜から分離してもよい。例えば、滅菌されたガーゼを用いて、認識できる全ての血塊および残留血液を胎盤から取り除いた後、例えば、臍帯の断面を露出させるために臍帯膜を部分的に切ることで、臍帯の管を露出させる。例えば、閉じたワニ口クランプを各管の切断した一端から前進させることで、管は確認され、開かれる。その後、装置（例えば、灌流デバイスに接続されたプラスチック製チューブ）がそれぞれの胎盤動脈に挿入される。その後、滅菌された収集リザーバ、例えば、２５０ｍＬ採集袋などの血液バッグに接続されたプラスチック製チューブが、胎盤静脈に挿入される。あるいは、装置に接続されたチューブが胎盤静脈に挿入され、収集リザーバ（または複数）に接続されたチューブが胎盤動脈のうちの１つもしくは両方に挿入される。その後、胎盤には、一定量の灌流溶液、例えば、約７５０ｍＬの灌流溶液が灌流される。その後、灌流液中の細胞は、例えば、遠心分離によって収集することができる。

別の特定の実施態様では、胎盤を、無菌の盆中に配置し、５００ｍｌのリン酸緩衝生理食塩水を用いて洗浄する。次いで、洗浄液を捨てる。次いで、臍帯静脈に、無菌のチューブなどの無菌の接続装置に接続している、カニューレ、例えば、ＴＥＦＬＯＮ（登録商標）製またはプラスチック製のカニューレを用いてカニューレ挿入する。無菌の接続装置を、灌流マニフォールドに接続する。次いで、胎盤を含有する容器に蓋をし、胎盤を、室温（２０〜２５℃）で、所望の期間、例えば、２〜２４時間、ある実施態様では、４８時間以下にわたり維持する。胎盤を、連続的に灌流し、等しい体積の灌流液を導入し、溶出灌流液を除去または収集してもよい。あるいは、胎盤を、培養の間、定期的に、例えば、２時間毎に、４、８、１２、および２４時間に；または他の間隔で、ある体積の灌流液、例えば、１００ｍｌの灌流液（１０００単位／ｌのヘパリンおよび／またはＥＤＴＡおよび／またはＣＰＤＡ（クレアチンリン酸デキストロース）を補ったまたは補わない無菌の生理食塩水）で灌流してもよい。定期的な灌流の場合、胎盤が安定した体積の灌流液に常時浸かるように、等しい体積の灌流液を導入し、除去してもよい。

胎盤、例えば、胎盤の反対表面で漏れ出る溶出潅流液を収集し、処理して、細胞、例えば、ＨＰＣを単離する。特定の実施態様では、胎盤細胞は、当業者に公知の技術、例えば、密度勾配遠心分離などの技術を用いて溶出潅流液から単離する。一実施態様では、ＨＰＣまたは胎盤潅流液由来の全有核細胞は、例えば、細胞デブリ、血清、または除核細胞から全有核細胞を分離するために、分画遠心法によって単離される。特定の実施態様では，胎盤細胞を、溶出灌流液から、例えば、約５０００×ｇ、室温で約１５分間遠心分離することによって回収することができる。これによって、細胞が、汚染デブリおよび血小板から分離される。細胞ペレットを、例えば、２単位／ｍｌヘパリンおよび２ｍＭ ＥＤＴＡを含有するＩＭＤＭ無血清培地（ＧｉｂｃｏＢＲＬ、ＮＹ）中に再懸濁させる。総単核細胞画分を、アフェレーシスを使用して、例えば、ＬＹＭＰＨＯＰＲＥＰ（商標）（Ｎｙｃｏｍｅｄ Ｐｈａｒｍａ、Ｏｓｌｏ、ノルウェー）などの市販の収集キットを使用して単離することができる。次いで、細胞を、例えば、血球計数器を使用して数えてもよい。生存率を典型的には、トリパンブルー色素排除によって評価する。

一実施態様では、単離した胎盤を、灌流液を収集せずに、一定期間にわたり灌流する。したがって、胎盤を、灌流液を収集する前に、２、４、６、８、１０、１２、２０もしくは２４時間にわたり、または数日間にもわたり灌流することができる。そのような実施態様では、例えば、灌流液を、胎盤中に導入し、胎盤の血管構造をある期間にわたり占有させてから収集してもよく、または循環灌流液の場合には、灌流液を、そのような期間にわたり再度循環させてもよい。

一実施態様では、回収した有核細胞の数が１００個の細胞／ｍｌ未満になるまで、胎盤の灌流および溶出灌流液の収集を１回または２回繰り返す。灌流液をプールし、軽く遠心分離して、血小板、デブリおよび脱核細胞膜を除去する。次いで、有核細胞を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離によって単離する。

他の実施態様では、胎盤から収集した細胞を、その後のある時期に使用するために凍結保存する。幹細胞などの細胞を凍結保存する方法は、当該技術分野ではよく知られており、例えば、Ｂｏｙｓｅらの文献（１９９３年３月９日発行の米国特許第５，１９２，５５３号）またはＨｕらの文献（２０００年１２月７日公開のＷＯ００／７３４２１）の方法を使用する凍結保存がある。

（５．実施例）
（５．１．実施例１：代謝異常を有する患者におけるヒト胎盤灌流液由来の非血縁臍帯血および不適合単核球の移植）
この実施例は、代謝異常を有する患者に対してヒト胎盤灌流液由来の非血縁な臍帯血（ＵＣＢ）および不適合な単核球を安全かつ成功した投与を示す。

患者は、進行性変異の副腎脳白質ジストロフィー（ＡＬＤ）を有する１１歳の男性であった。患者は、およそ−８日目に毒性軽減前処置を受けた。０日目に、患者は、単一単位の非血縁なＵＣＢと、ヒト胎盤灌流液由来の（患者レシピエントまたはＵＣＢのいずれかに）非血縁で、不適合な単核球の移植を注入によって受けた。特に、患者は、単一ＵＣＢドナー産物（６／６ＨＬＡ適合；約３．９×１０^７個の全細胞／ｋｇ；約２．８×１０^５個のＣＤ３４^＋細胞／ｋｇ）および合わせられた約０．６×１０^７個の細胞／ｋｇの潅流液（約０．３×１０^５個のＣＤ３４^＋細胞／ｋｇ）由来の全有核細胞投与（ＴＮＣ）を受けた。

移植後１４０日目に、１）患者は、血液中で評価したように、９９％のＵＣＢ移植ドナーキメリズムと０％の胎盤潅流液細胞キメリズムで、ＵＣＢの完全生着を示し；２）患者は、ＧＶＨＤの証拠を示さず、３）患者は、ＡＬＤの症状である神経変性の兆候を示さなかった。キメリズムの試験は、移植後２８日〜４２日の間にまず行った。

非悪性疾患を有する子供における、ヒト胎盤灌流液由来の不適合で非血縁な単核球の注入と組み合わせた単一ＵＣＢ移植は安全で良好な耐容性を示したことを、これらの結果は示している。さらに、評価した最後の時点（移植後１４０日）までに、そのようなＡＬＤ患者において神経変性の検出が予測されていたが、神経変性は実際には検出されなかった。

（５．２．実施例２：悪性疾患を有する患者における非血縁臍帯血とヒト胎盤灌流液由来の不適合単核球との移植（＃１））
この実施例は、悪性疾患である急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を有する患者に対して非血縁な臍帯血（ＵＣＢ）とヒト胎盤灌流液由来の不適合で非血縁な単核球とを安全かつ成功した投与を示す。

患者は、ＡＬＬを有する２２歳の女性であった。非血縁なＵＣＢと、ヒト胎盤灌流液由来の不適合で非血縁な単核球とを投与する前に、患者は、事前化学療法を受け、およそ−８日目に毒性軽減前処置を受けた。非血縁なＵＣＢとヒト胎盤灌流液由来の不適合で非血縁な単核球とを投与する時点では、患者は完全な骨髄破壊を示した。０日目に、患者は、非血縁な臍帯ＵＣＢ単位（両方の単位は、５／６ＨＬＡ適合であり；１単位は、約３×１０^７個の細胞／ｋｇ（約１．９×１０^５個のＣＤ３４^＋細胞／ｋｇ）を含有し、他方は、約２．５×１０^７個の全細胞／ｋｇ（約１．４２×１０^５個のＣＤ３４^＋細胞／ｋｇ）を含有する）と、ヒト胎盤灌流液由来の（患者レシピエントまたはＵＣＢのいずれかに対して）不適合で非血縁な有核細胞（約０．４×１０^７個の細胞／ｋｇのＴＮＣ；約０．４×１０^５個のＣＤ３４^＋細胞／ｋｇ）とを二重で受けた。

両方のＵＣＢ単位由来の細胞と潅流液細胞の生着は、２３日までに検出した。移植後７０日目に、患者は、血液中で評価したように、６５％／３４％／１％のＵＣＢ（単位＃１／単位＃２）／胎盤潅流液細胞ドナーキメリズムで、完全生着を示し続けた。さらに、アブレーション後の患者は約１％の免疫系を保持していたにもかかわらず、患者はＧＶＨＤを示さなかった。最後の評価（移植後１００日を超えた）で、患者は生存していた。

悪性疾患を有する患者における、ヒト胎盤灌流液由来の不適合で非血縁な単核球の注入と組み合わせた二重で部分的に不適合なＵＣＢ移植は安全で良好な耐容性を示したことを、これらの結果は示している。

（５．３．実施例３：悪性疾患を有する患者におけるヒト胎盤灌流液由来の非血縁臍帯血および不適合単核球の移植（＃２））
この実施例は、悪性疾患である急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を有する患者に対して不適合で非血縁な臍帯血（ＵＣＢ）とヒト胎盤灌流液由来の不適合で非血縁な単核球との投与を評価するように設計されている。

患者は、ＣＲ１（誘発不全）のＡＬＬを有する１７歳の女性であった。患者は、およそ−８日目に骨髄破壊的前処置または毒性軽減前処置を受けた。０日目に、患者は、非血縁な臍帯ＵＣＢ単位（両方の単位は、４／６ＨＬＡ適合であり；一方の単位は、約２．７×１０^７個の細胞／ｋｇ（約３．６×１０^５個のＣＤ３４^＋細胞／ｋｇ）を含有し、他方は、約約２．７×１０^７個の細胞／ｋｇ（約２．５×１０^５個のＣＤ３４^＋細胞／ｋｇ）を含有する）と、ヒト胎盤灌流液由来の（患者レシピエントまたはＵＣＢのいずれかに対して）不適合で非血縁な単核球（約０．３×１０^７個の細胞／ｋｇのＴＮＣ；約０．２×１０^５個のＣＤ３４^＋細胞／ｋｇ）とを二重で受けた。生着を検出し、患者は安全性に関わる事件を示さなかった。最後の評価（移植後６０日目）で、患者は、悪性度ＩＩＩまたはＩＶのＧＶＨＤのいずれも示さなかった。

（５．４． 実施例４：ヒト単核胎盤灌流液細胞と組み合わせた非血縁および血縁の臍帯血の移植の臨床プロトコル）
本明細書に示されるプロトコルは、単一群非無作為化の予備研究であり、その主要な目的は、幹細胞移植を必要とする種々の悪性または非悪性疾患を有する以下のＡ群〜Ｄ群における臍帯血と組み合わせたヒト単核胎盤潅流液細胞の移植の安全性を評価することである。この研究の第２の目的は、幹細胞移植で潜在的に治癒可能な種々の悪性または非悪性疾患を有する対象における造血生着、ドナーキメリズム、および免疫機能を評価することである。

以下の群をこの研究で利用する：

Ａ群：（３人の対象）患者へのＨＬＡ適合が≧３／６の部分的に不適合で血縁関係にある臍帯血と、血縁関係にある潅流液細胞。ＵＣＢおよび潅流液細胞は、同じドナー由来であり、ドナーは、患者と血縁関係にある。

Ｂ群：（１２人の対象）患者へのＨＬＡ適合が≧４／６の非血縁の臍帯血と、非血縁の潅流液細胞。ＵＣＢは、非血縁ドナー由来であり、潅流液細胞は、別々の非血縁ドナー由来である。

Ｃ群：（３人の対象）患者へのＨＬＡ適合が≧４／６であるが、潅流液細胞と血縁関係にある非血縁の臍帯血。ＵＣＢおよび潅流液細胞は、同じドナー由来であるが、ドナーは、患者と非血縁である。

Ｄ群：（１２人の対象）患者および互いのＨＬＡ適合が≧４／６である、二重で非血縁な臍帯血単位と、非血縁の潅流液細胞。各ＵＣＢ単位は、別々であり、患者に非血縁で部分的に不適合であるドナー由来であり、潅流液細胞ドナーは、患者またはいずれかのＵＣＢドナーに非血縁である。

全ての対象には、移植を必要とする疾患で規定されるように、完全な骨髄破壊または毒性の低減した移植前処置のいずれかを施した後、ＵＣＢの移植および潅流液細胞の注入を施す。標準的な手順を用いてＵＣＢ注入（または複数）を投与する。４時間の待期期間後に、ＵＣＢ注入から毒性が進行していないことを確認するため、１単位の潅流液細胞を注入する（そのような単位は、対象が≧２．５×１０^６個のＴＮＣ／ｋｇ体重を受けることができるように十分な数の細胞を含まなければならない）。潅流液細胞単位を解凍し、解凍を開始してから９０分以内に注入を行う。標準治療のＧＶＨＤ予防薬も投与する。

この研究の実施中に、移植後最初の１００日中にＡ群〜Ｄ群の各々におけるＧＶＨＤの発生率、および（輸血中または輸血２４時間以内に起こる）急性輸血反応の任意の発生率を評価することに重きを置きながら、全ての臨床検査の有害事象の発生率を収集する。移植前処置期間中、移植時、および移植後少なくとも６カ月間、対象をベースラインで評価する。対象の安全性を守るため、一時的な登録停止は、研究に登録したいずれの対象において指標となる１つまたは複数の重篤な有害事象の発生によってもたらされる。

選択基準：診断に関わらず全ての対象に対する重要な選択基準としては：１）対象、親、または法定後見人は、インフォームドコンセント同意書を理解し、自発的に署名しなければならない；２）対象は、年齢に応じた同意書（該当する場合）を理解し、署名しなければならない；３）インフォームドコンセント同意書の署名時に≦５５歳の年齢でなければならない；４）施設訪問スケジュールおよび他のプロトコル要件を忠実に守ることができなければならない；５）子供を設ける可能性がある女性（ＦＣＢＰ）は、前処置を開始する７日以内に血清または尿妊娠検査が陰性でなければならない；６）性的に活発なＦＣＢＰは、研究治療中に適切な避妊方法を使用することに同意しなければならない；７）３カ月を超える余命；８）適切な全般健康状態、例えば、ａ）ランスキー全身状態≧５０％（子供）またはカルノフスキー全身状態≧７０％（成人）、またはＥＣＯＧ全身状態０〜２（成人）；ｂ）予測された補正ＤＬＣＯ≧５０％；ｃ）推定された左室駆出率≧４０％；ｄ）クレアチニンクリアランスまたは推定ＧＦＲ≧６０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２；ｅ）血清ビリルビン≦１．５×正常上限値；ｆ）トランスアミナーゼ≦３×正常上限値；ｇ）制御されない感染がない；およびｈ）ＨＩＶ陰性が挙げられる。対象によって示された疾患または障害に特異的なさらなる選択基準も満たされるであろう。

除外基準：対象は、以下の基準のいずれか１つを満たす場合、この研究の対象外である：１）患者に過剰なリスクを課すであろう、この研究に参加している彼／彼女に悪影響を及ぼすであろう、または本研究からのデータを解釈する能力を狂わせる任意の病状、検査所見の異常、または精神疾患；２）ファンコニ貧血を有する患者は、この研究の対象外である；３）登録前６カ月以内の心筋梗塞；４）ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）クラスＩＩＩまたはＩＶの心不全；５）制御されない狭心症；６）重度の制御されない心室性不整脈；７）急性虚血の心電図証拠または活性伝導系異常；８）制御されない感染；９）幹細胞移植からの生存に不適合な主に予想される病気または臓器不全；１０）妊娠中または授乳期の女性；１１）対象が、前処置レジメンの開始前３０日以内に他の治験薬を受けている。

ＵＣＢおよび潅流液細胞要件：１）１つの血縁関係にある臍帯血単位は、５／６および６／６ＨＬＡ適合である≧３．５×１０^７個のＴＮＣ／ｋｇ体重と、３／６および４／６ＨＬＡ適合である≧５．０×１０^７個のＴＮＣ／ｋｇとを含まなければならない（解凍前）（Ａ群）；２）１つの非血縁なＵＣＢ単位は、５／６ＨＬＡ適合または６／６ＨＬＡ適合である≧３．５×１０^７個のＴＮＣ／ｋｇ体重、または４／６ＨＬＡ適合である≧５．０×１０^７個のＴＮＣ／ｋｇ体重を含まなければならない（解凍前）（Ｂ群）；３）１つの非血縁な臍帯血単位は、４／６、５／６、または６／６ＨＬＡ適合である≧５．０×１０^７個のＴＮＣ／ｋｇ体重を含まなければならない（解凍前）（Ｃ群）；４）２つの非血縁な臍帯血単位は、両方の単位（解凍前）を組み合わせて≧５．０×１０^７個のＴＮＣ／ｋｇを含み、かつ、互いにかつレシピエントへのＨＬＡ適合が≧４／６でなければならない（Ｄ群）；５）ＨＰＣ単位は、対象が≧２．５×１０^６個のＴＮＣ／ｋｇ体重を受けることができるのに十分な数の細胞を含まなければならない。

ＨＬＡ分類およびＨＬＡ適合グレード：１）非血縁な臍帯血／適合した家族ドナー：ＨＬＡ分類は、クラスＩ ＡおよびＢの血清学、およびＤＲＢ１の高分解能ＤＮＡ分類によって行う；２）家族ドナーは、血清学によるＨＬＡ ＡおよびＢ（クラスＩ）抗原と、ＤＮＡ分類によるＨＬＡ ＤＲＢ１（クラスＩＩ）抗原と５／６または６／６で適合した一親等血縁者でなければならない；３）１つの血縁関係にある臍帯血単位は、５／６および６／６ＨＬＡ適合である≧３．５×１０^７個のＴＮＣ／ｋｇ体重と、３／６および４／６ＨＬＡ適合である≧５．０×１０^７個のＴＮＣ／ｋｇとを含まなければならない（解凍前）（Ａ群）；４）１つの非血縁なＵＣＢ単位は、５／６ＨＬＡ適合または６／６ＨＬＡ適合である≧３．５×１０^７個のＴＮＣ／ｋｇ体重、または４／６ＨＬＡ適合である≧５．０×１０^７個のＴＮＣ／ｋｇ体重を含まなければならない（解凍前）（Ｂ群）；５）１つの非血縁な臍帯血単位は、４／６、５／６、または６／６ＨＬＡ適合である≧５．０×１０^７個のＴＮＣ／ｋｇ体重を含まなければならない（解凍前）（Ｃ群）；６）２つの非血縁な臍帯血単位は、両方の単位（解凍前）を組み合わせて≧５．０×１０^７個のＴＮＣ／ｋｇを含み（解凍前）、かつ、互いにかつレシピエントへのＨＬＡ適合が≧４／６でなければならない（Ｄ群）；７）２つの非血縁な臍帯血の移植では、選択された最初の単位は、利用可能な最善のＨＬＡ適合臍帯血単位（患者と≧４／６）であり、互いの単位とのＨＬＡ適合が≧４／６である。

移植前処置期間中、移植時、および移植後最長６カ月、全ての対象は、厳格な安全性評価を受けるであろう。実施された重要な評価としては、身体検査、血液学および臨床化学的判断、骨髄穿刺液、骨髄生検および末梢血分析、放射線検査、並びにＧＶＨＤ、毒性、および感染に特に重点を置いた有害事象の完全モニタリングが挙げられる。

好中球および血小板生着の血液学的評価：分画をもつ全血球数は、０日目から、好中球絶対数が最低値に到達した後に３日間＞５００／ｍｍ^３になり、かつ、血小板数が、３つの異なる日で３回連続した測定で、血小板輸血から最低７日間独立して≧２０，０００／ｍｍ^３に到達するまで、１日〜３日ごとに行う。好中球および血小板生着研究は、ＣＲＦの適切なページ上に記録される。「好中球生着」とは、好中球数最低値の後に好中球絶対数が５００／ｍｍ^３を上回る最初の３日間のことを言う。「血小板生着」とは、血小板が輸血なしで≧２０，０００／ｍｍ^３となる７日間の後に、血小板数が≧２０，０００／ｍｍ^３を示す最初の連続３日間のことを言う。

ドナーキメリズム:末梢血ドナーキメリズム（ＵＣＢおよび潅流液細胞）（全血、ＮＫおよびＴ細胞）の定量は、７日目、１４日目、３０日目、６０日目、１００日目、および１８０日目（＋／−１０日）に評価する。さらに、末梢血レシピエントキメリズムの定量は、ベースラインでのドナー細胞（ＵＣＢおよび潅流液細胞）のキメリズムに沿ったベースラインで評価する。定量は、短縦列反復アッセイを用いて行う。

骨髄穿刺液、骨髄生検、および末梢血分析：骨髄穿刺液および生検は、基礎疾患について容認された手順に従って行い、対象の疾患状態を評価する。これらの分析は、移植後１００日目および１８０日目±１０日で行うと考えられる。

均等物：
本発明の範囲は、本明細書に記載の特定の実施態様によって制限されるものではない。実際に、本明細書に記載するものに加えて、本発明の種々の改変形態が、前述の説明から当業者には明らかになるであろう。そのような改変形態は、添付の特許請求の範囲に属することを意図する。

本明細書に引用した参照文献は全て、それぞれの個々の刊行物、特許または特許出願を具体的かつ個々に、その全体を全ての目的で参照により本明細書に組み込むのと同じ程度に、それらの全体が全ての目的で参照により本明細書に組み込まれている。

いずれの刊行物の引用も、本出願日前のその開示に関するものであり、これによって、本発明が、先行発明によるそのような刊行物に先行するものではないことを認めると解釈してはならない。

Claims (34)

1. ヒト臍帯血（ＵＣＢ）細胞を対象に移植する方法であって、ヒト胎盤灌流液由来の単核球の集団と組み合わせてＵＣＢ細胞を投与することを含み、前記ＵＣＢ細胞は、前記対象と非血縁である、前記方法。
2. ヒト臍帯血（ＵＣＢ）細胞を対象に移植する方法であって、ヒト胎盤灌流液由来の単核球の集団と組み合わせてＵＣＢ細胞を投与することを含み、ヒト胎盤灌流液由来の前記細胞は、前記対象と非血縁である、前記方法。
3. ヒト臍帯血（ＵＣＢ）細胞を対象に移植する方法であって、ヒト胎盤灌流液由来の単核球の集団と組み合わせてＵＣＢ細胞を投与することを含み、ヒト胎盤灌流液由来の前記細胞は、前記対象に適合しない、前記方法。
4. 前記ＵＣＢ細胞が、胎盤潅流液由来の前記単核球と非血縁である、請求項１、２、または３に記載の方法。
5. 前記ＵＣＢ細胞が、胎盤潅流液由来の前記単核球に適合しない、請求項１、２、または３に記載の方法。
6. 前記ＵＣＢ細胞が、胎盤潅流液由来の前記単核球と非血縁であるかまたは適合しない、請求項１、２、または３に記載の方法。
7. 前記ＵＣＢ細胞が、前記対象に３／６〜６／６ＨＬＡ適合している、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
8. １単位のＵＣＢ細胞を投与する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
9. １単位超のＵＣＢ細胞を投与する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
10. ２〜６単位のＵＣＢ細胞を投与する、請求項９に記載の方法。
11. 前記ＵＣＢ細胞が、ＵＣＢ中に存在する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
12. 胎盤潅流液由来の前記単核球が、胎盤潅流液中に存在する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
13. 前記胎盤潅流液が、部分的に放血させた胎盤から得られる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
14. 前記胎盤潅流液細胞の２％またはそれ以上が、ＣＤ３４＋である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
15. 前記方法が、前記対象におけるキメリズムをもたらす、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
16. 前記キメリズムが、ＵＣＢ細胞またはそれに由来する子孫を含む、請求項１５に記載の方法。
17. 前記キメリズムが、ＵＣＢ細胞またはそれに由来する子孫と、胎盤潅流液細胞またはそれに由来する子孫とを含む、請求項１５または１６に記載の方法。
18. １単位超のＵＣＢ細胞を投与し、前記方法が、前記対象におけるキメリズムをもたらし、前記キメリズムが、１単位超のＵＣＢ細胞またはそれに由来する子孫に由来する細胞を含む、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の方法。
19. 前記キメリズムが、胎盤潅流液細胞またはそれに由来する子孫を含む、請求項１５〜１８のいずれか１項に記載の方法。
20. 前記方法が、ＵＣＢ細胞の生着をもたらす、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
21. 前記方法が、胎盤潅流液細胞の生着をもたらす、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
22. 前記方法が、移植片対宿主病の持続期間または重篤度を減少させる、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
23. 前記対象が腫瘍を有し、前記方法が、移植片対腫瘍反応をもたらす、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
24. 前記方法が、それを必要とする対象において、副腎脳白質ジストロフィー、ムコ多糖症、ニーマン−ピック病、異染性白質ジストロフィー、ウォルマン病、クラッベ病、ゴーシェ病、フコシドーシス、またはバッテン病などの代謝異常の症状の寛解をもたらす、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
25. 前記方法は、それを必要とする対象において、骨髄異形成症候群、無巨核球性血小板減少症、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、鎌状赤血球病、ベータサラセミア、重症複合型免疫不全症、骨髄不全症、または貧血、例えば、重症再生不良性貧血またはダイアモンド・ブラックファン貧血などの血液学的疾患または悪性疾患の症状の寛解をもたらす、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
26. 前記対象が、ヒト対象である、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
27. 前記ヒト対象が、２５歳またはそれよりも若い、請求項２６に記載の方法。
28. 前記ヒト対象が、乳児である、請求項２７に記載の方法。
29. 造血細胞を対象に移植する方法であって、ヒト胎盤灌流液、例えば、ヒト胎盤灌流液由来の単核球と組み合わせて前記造血細胞を投与することを含む、前記方法。
30. 前記造血細胞が、骨髄またはそれに由来する細胞、末梢血またはそれに由来する細胞、または臍帯血またはそれに由来する細胞である、請求項２９に記載の方法。
31. 対象における疾患の治療方法に使用される造血細胞であって、前記方法は、ヒト胎盤灌流液由来の単核球と組み合わせて前記造血細胞を投与することを含み、前記疾患が、代謝異常またはその症状、血液学的疾患または悪性疾患またはその症状、移植片対宿主病、または腫瘍である、前記造血細胞。
32. 前記造血細胞が、骨髄またはそれに由来する細胞、末梢血またはそれに由来する細胞、または臍帯血またはそれに由来する細胞である、請求項３１に記載の使用のための造血細胞。
33. 前記臍帯血細胞が前記対象と非血縁である、またはヒト胎盤灌流液由来の前記単核球が前記対象と非血縁である、またはヒト胎盤灌流液由来の前記単核球が前記対象に適合しない、請求項３２に記載の使用のための造血細胞。
34. 前記方法が、請求項４〜２８のいずれか１項に記載のものである、請求項３３に記載の使用のための造血細胞。