KR20220044384A

KR20220044384A - 사람 태반으로부터의 세포 및 조혈 세포를 사용한 치료

Info

Publication number: KR20220044384A
Application number: KR1020227010134A
Authority: KR
Inventors: 조디 피. 거니; 샤오구이 장; 스테이시 허브; 로버트 제이. 하리리
Original assignee: 안트로제네시스 코포레이션
Priority date: 2013-10-03
Filing date: 2014-10-02
Publication date: 2022-04-07
Also published as: KR20160102965A; EP3052109B1; DK3052109T3; CA2926199A1; AU2020202076A1; CN105792834A; RU2016116816A3; JP2019194211A; JP2016531889A; US20160235790A1; AU2014329513A1; JP2021107407A; JP2023078156A; EP3052109B8; MX2016004209A; WO2015051088A1; RU2019131152A3; EP3052109A1; MX2021003798A; ZA201602151B

Abstract

본원은 사람 태반 관류액(perfusate)으로부터의 단핵세포 및 조혈 세포를 대상체, 예를 들어, 사람 대상체에게 투여함을 포함하는 치료방법, 상기 세포를 포함하는 조성물, 및 키메라증(chimerism)을 확립하고, 조직(예를 들어, 혈액)을 이식하고, 이식편 대 숙주 질환의 중증도 및 기간을 감소시키고, 대사장애, 및 혈액암과 같은 혈액 장애를 치료하거나 이의 증상을 개선하기 위한 이의 용도를 제공한다.

Description

사람 태반으로부터의 세포 및 조혈 세포를 사용한 치료 {THERAPY WITH CELLS FROM HUMAN PLACENTA AND HEMATOPOIETIC CELLS}

본원은 2013년 10월 11일에 출원된 미국 가특허원 제61/890,057호 및 2013년 10월 3일에 출원된 미국 가특허원 제61/886,648호를 우선권으로 주장하며, 이들의 전문이 본원에 참조로 도입된다.

본원은 사람 태반 관류액(perfusate)으로부터의 단핵세포 및 조혈 세포를 대상체, 예를 들어, 사람 대상체에게 투여함을 포함하는 치료방법, 상기 세포를 포함하는 조성물, 및 키메라증(chimerism)을 확립하고, 조직(예를 들어, 혈액)을 주입하고, 이식편 대 숙주 질환의 중증도 및 기간을 감소시키고, 대사장애 및 혈액암과 같은 혈액 장애를 치료하거나 이의 증상을 개선하기 위한 이의 용도를 제공한다.

동종이형 조혈 줄기세포 이식(HSCT)에서, 면역 시스템을 재구성하고 혈액세포를 형성(조혈)할 수 있는 줄기세포는 한 개체로부터 다른 개체로 이식된다. 유전자형으로 사람 백혈구 항원(HLA)이 동일한 친족 공여자-백인 환자의 약 30%가 유용함-가 HSCT의 최상의 공여자로 간주된다. 불행히도, 많은 환자들이 가용 가족이 없거나 골수가 동일하게 일치하는 친족이 아닌 공여자를 갖지 못하고; 이들의 유일한 치료 옵션은 이식편 대 숙주 질환(GVHD) 및 이식 관련 사망을 포함한 합병증의 위험이 따르는 부분적으로 일치하는 친족 공여자(PMRD)로부터의 이식물을 갖는 것이다.

제대혈(UCB)은 HSCT에 사용하기에 적합한 세포의 다른 공급원을 대표한다. 이러한 임상적 환경에서의 UCB의 이점 중 하나는 GVHD의 위험이 감소된다는 것이다. 불행히도, 현재 UCB 세포 이식 치료는 이식될 수 있는 세포의 양이 제한된다는 것을 포함한 단점도 있다. 다수의 UCB 세포, 예를 들어, 1단위 초과의 이식이 필요한 경우 안전성 및 효능이 절충될 수 있다. 또한, 이식 실패 및 GVHD의 위험이 특히 HLA 일치가 불완전할 때 존재한다. 골수 또는 말초혈에 비해 UCB를 사용하는 HSCT의 다른 단점은 수령자 사망을 빈번히 야기하는 이식까지의 시간이 지연된다는 것이다.

그러므로, 조혈 재구성을 위한 지정된 줄기세포 이식 치료의 개선이 필요하다.

한 실시양태에서, 본원은 조혈 세포를 사람 태반 관류액(HPC)으로부터의 단핵세포, 예를 들어, 사람 태반 관류액과 조합하여 투여함을 포함하는, 조혈 세포를 대상체, 예를 들어, 사람 대상체에 이식하는 방법을 제공한다. 본원에 기재된 조혈 세포의 이식방법에 사용될 수 있는 조혈 세포의 공급원은, 예를 들어, 골수 또는 그로부터의 세포, 말초혈 또는 그로부터의 세포 및 제대혈 또는 그로부터의 세포를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 조혈 세포의 이러한 공급원은 총괄하여 "HT 세포"로 지칭한다.

한 실시양태에서, 본원은 HT 세포, 예를 들어, 사람 제대혈(UCB) 세포를 대상체에 이식하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포를 사람 태반 관류액으로부터의 단구세포군과 조합하여 투여함을 포함하고, 상기 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 대상체와 친족 관계가 아니다. 한 실시양태에서, 본원은 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포를 대상체에 이식하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포를 사람 태반 관류액으로부터의 단핵세포군과 조합하여 투여함을 포함하고, 사람 태반 관류액으로부터의 상기 세포는 대상체와 친족 관계가 아니다. 한 실시양태에서, 본원은 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포를 대상체에 이식하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포를 사람 태반 관류액으로부터의 단핵세포군과 조합하여 투여함을 포함하고, 사람 태반 관류액으로부터의 상기 세포는 대상체와 일치하지 않는다.

한 실시양태에서, 본원은 대상체에서의 질환 치료방법에 사용하기 위한 조혈 세포를 제공하고, 상기 방법은 조혈 세포를 사람 태반 관류액으로부터의 단핵세포와 조합하여 투여함을 포함하고, 상기 질환은 대사장애 또는 이의 증상; 혈액 장애, 혈액암 또는 이의 증상; 이식편 대 숙주 질환; 또는 종양이다. 조혈 세포는 골수 또는 그로부터의 세포, 말초혈 또는 그로부터의 세포, 또는 UCB 세포 또는 그로부터의 세포일 수 있다. 한 실시양태에서, UCB 세포는 대상체와 친족 관계가 아니다. 한 실시양태에서, 사람 태반 관류액으로부터의 단핵세포는 대상체와 친족 관계가 아니다. 한 실시양태에서, 사람 태반 관류액으로부터의 단핵세포는 대상체와 일치하지 않는다. 이후 기재되는 실시양태는 기재된 각 실시양태를 나타낸다.

특정 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 사람 태반 관류액으로부터의 단핵세포와 친족 관계가 아니다. 특정 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 사람 태반 관류액으로부터의 단핵세포와 일치하지 않는다. 특정 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 사람 태반 관류액으로부터의 단핵세포와 친족 관계가 아니거나 일치하지 않는다. 특정 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 대상체와 3/6 내지 6/6의 HLA가 일치한다. 특정 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, 성인 공급원으로부터의 HT 세포는 대상체와 6/8 내지 8/8의 HLA가 일치한다.

특정 실시양태에서, 1단위의 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포가 투여된다. 다른 실시양태에서, 1단위 초과의 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포가 투여된다. 특정 실시양태에서, 2 내지 6단위의 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포가 투여된다.

특정 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 혈액, 예를 들어, UCB에 존재한다. 특정 실시양태에서, 태반 관류액으로부터의 단핵세포는 태반 관류액에 존재한다.

특정 실시양태에서, 태반 관류액은 부분적으로 방혈된 태반으로부터 수득된다.

특정 실시양태에서, 태반 관류액 세포의 2% 이상이 CD34+이다.

특정 실시양태에서, 상기 방법은 대상체에서의 키메라증을 야기한다. 특정 실시양태에서, 키메라증은 HT 세포, 예를 들어, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포 또는 그로부터의 자손을 포함한다. 특정 실시양태에서, 1단위 초과의 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포가 투여되고, 상기 방법은 대상체에서의 키메라증을 야기하고, 키메라증은 1단위 초과의 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포 또는 그로부터의 자손을 포함한다. 특정 실시양태에서, 키메라증은 태반 관류액 세포 또는 그로부터의 자손을 포함한다. 특정 실시양태에서, 키메라증은 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포 또는 그로부터의 자손 및 태반 관류액 세포 또는 그로부터의 자손을 포함한다.

특정 실시양태에서, 상기 방법의 결과, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포가 생착(engraftment)된다. 특정 실시양태에서, 상기 방법의 결과 태반 관류액 세포가 생착된다.

특정 실시양태에서, 상기 방법은 이식편 대 숙주 질환의 기간 또는 중증도를 감소시킨다.

특정 실시양태에서, 대상체는 종양을 갖고, 상기 방법은 이식편 대 숙주 반응을 야기한다. 특정 실시양태에서, 상기 방법의 결과 종양이 치료된다.

특정 실시양태에서, 상기 방법의 결과 부신백색질형성장애증, 뮤코다당증, 니이만-픽병(Niemann-Pick disease), 이염색백색질장애(metachromatic leukodystrophy), 울만병(Wolman disease), 크라베병(Krabbe's disease), 고쉐병(Gaucher's disease), 푸코시드축적증 또는 배튼병(Batten disease)과 같은 대사장애의 증상이 이를 필요로 하는 대상체에서 개선된다.

특정 실시양태에서, 상기 방법의 결과 혈액 장애 또는 혈액암, 예를 들어, 골수형성이상증후군, 무거대핵세포혈소판감소증(amegakaryocytic thrombocytopenia), 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 낫적혈구병(sickle cell disease), 베타 탈라세미아(beta thalassemia), 중증 합병성 면역결핍질환, 골수 기능부전, 또는 중증 무형성 빈혈 또는 다이아몬드-블랙판 빈혈(Diamond-Blackfan anemia)과 같은 빈혈의 증상이 이를 필요로 하는 대상체에서 개선된다.

특정 실시양태에서, 대상체는 사람 대상체이다. 특정 실시양태에서, 사람 대상체는 25세 이하이다. 특정 실시양태에서, 사람 대상체는 영아이다.

1. 조혈 세포, 예를 들어, 제대혈 세포, 및 사람 태반 관류액으로부터의 세포를 이용하는 방법

한 실시양태에서, 본원은 조혈 세포를 사람 태반 관류액(HPC)으로부터의 단핵세포, 예를 들어, 사람 태반 관류액과 조합하여 투여함을 포함하는, 조혈 세포를 대상체, 예를 들어, 사람 대상체에 이식하는 방법을 제공한다. 본원에 기재된 조혈 세포의 이식방법에 사용될 수 있는 조혈 세포의 공급원은, 예를 들어, 골수 또는 그로부터의 세포, 말초혈 또는 그로부터의 세포, 및 제대혈 또는 그로부터의 세포를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 조혈 세포의 이러한 공급원은 총괄하여 "HT 세포"로 지칭한다.

한 실시양태에서, 본원은 HT 세포, 예를 들어, 사람 제대혈(UCB) 세포, 예를 들어, 사람 제대혈을 사람 태반 관류액(HPC)으로부터의 단핵세포, 예를 들어, 사람 태반 관류액과 조합하여 투여함을 포함하는, HT 세포, 예를 들어, 사람 제대혈(UCB) 세포, 예를 들어, 사람 제대혈을 대상체, 예를 들어, 사람 대상체에 이식하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, 사람 UCB 세포, 예를 들어, 사람 UCB는 대상체와 친족 관계가 아니다. 특정 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포, 예를 들어, 사람 UCB는 대상체와 부분적으로 불일치한다. 다른 실시양태에서, HPC, 예를 들어, 사람 태반 관류액은 대상체와 친족 관계가 아니다. 특정 실시양태에서, HPC, 예를 들어, 사람 태반 관류액은 대상체와 부분적으로 불일치한다. 다른 특정 실시양태에서, HPC, 예를 들어, 사람 태반 관류액은 대상체와 일치하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, 사람 UCB 세포, 예를 들어, 사람 UCB는 대상체와 친족 관계가 아니고, HPC, 예를 들어, 사람 태반 관류액은 대상체와 친족 관계가 아니다. 또 다른 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, 사람 UCB 세포, 예를 들어, 사람 UCB는 대상체와 부분적으로 불일치하고, HPC, 예를 들어, 사람 태반 관류액은 대상체와 친족 관계가 아니고 부분적으로 불일치하거나 불일치한다. 한 실시양태에서, HPC, 예를 들어, 사람 태반 관류액은 HT 세포, 예를 들어, 사람 UCB 세포, 예를 들어, UCB와 친족 관계가 아니고 불일치한다. 한 실시양태에서, HPC, 예를 들어, 사람 태반 관류액은 HT 세포, 예를 들어, 사람 UCB 세포, 예를 들어, UCB 및 수령자와 친족 관계가 아니고 불일치한다.

달리 언급하지 않는 한, UCB 및 HPC와 관련하여 본원에 사용된 "친족 관계"는 자신이나 1촌 또는 2촌 혈족을 말한다. 예를 들면, 대상체와 친족 관계인 UCB는 대상체 자신, 또는 대상체의 1촌 또는 2촌 혈족으로부터의 UCB를 말한다. 다른 예로, HPC와 친족 관계인 UCB는 동일한 공여자, 또는 1촌 또는 2촌 혈족인 공여자로부터의 UCB 및 HPC를 말한다. 마찬가지로, 달리 언급하지 않는 한, 이 맥락에서의 "친족 관계가 아니다"는 2촌 혈족보다 먼 관계를 말한다.

달리 언급하지 않는 한, UCB 또는 사람 태반 관류액(예를 들어, HPC)으로부터의 세포와 관련하여 본원에 사용된 "일치"는 일치된 HLA를 말한다. 추가로, UCB 또는 사람 태반 관류액(예를 들어, HPC)으로부터의 세포와 관련하여 본원에 사용된 "부분적으로 불일치"는 3/6, 4/6 또는 5/6의 HLA 부위가 일치하는 상황을 말하거나, 특정 실시양태에서는 HT 세포, 예를 들어, 성인 공급원으로부터의 HT 세포에 대해 6/8, 7/8 또는 8/8의 HLA 부위가 일치하는 상황을 말한다. 또한, 달리 언급하지 않는 한, UCB 또는 사람 태반 관류액(예를 들어, HPC)으로부터의 세포와 관련하여 본원에 사용된 "불일치" 또는 "일치하지 않는"은 0/6, 1/6 또는 2/6의 HLA 부위가 일치하는 상황을 말하거나, 특정 실시양태에서는 HT 세포, 예를 들어, 성인 공급원으로부터의 HT 세포에 대해 0/8, 1/8, 2/8, 3/8, 4/8 또는 5/8의 HLA 부위가 일치하는 상황을 말한다. 예를 들어, "일치", "부분적으로 불일치" 및 "불일치"는 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포와 HPC 사이, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포 단위들 사이, 및/또는 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포, 및/또는 HPC와 세포 수령자인 대상체 사이의 관계를 말한다.

달리 언급하지 않는 한, UCB 또는 그로부터의 세포의 (예를 들어, 이식과 관련하여) 본원에 사용된 "단위"는 단일 제대로부터의 UCB 또는 그로부터의 세포를 말한다. 특정 실시양태에서, 이러한 방법은 1단위의 UCB 또는 그로부터의 세포가 투여됨을 포함한다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 다중 단위의 UCB 또는 그로부터의 세포가 투여됨을 포함한다. 예를 들어, 본원에 제공된 방법은 2, 3 또는 4단위의 UCB 또는 그로부터의 세포가 투여됨을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 1단위 초과의 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포가 사용되는 경우, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포의 적어도 일부가 대상체, HPC 및/또는 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포의 기타 부분(예를 들어, 기타 UCB 세포 단위)과 친족 관계가 아닐 수 있다. 특정 실시양태에서, 1단위 초과의 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포가 사용되는 경우, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포의 적어도 일부가 대상체, HPC 및/또는 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포의 기타 부분(예를 들어, 기타 UCB 세포 단위)과 불일치하거나 부분적으로 불일치할 수 있다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 1단위 미만의 HT 세포 또는 UCB, 또는 그로부터의 세포가 투여됨을 포함할 수 있다. 예를 들어, 본원에 제공된 방법은 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8 또는 0.9 단위의 HT 세포 또는 UCB, 또는 그로부터의 세포가 투여됨을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 특정 수의 단위(1 미만, 1 또는 1 초과)가 다중 투여에 걸쳐 투여됨을 포함할 수 있다.

다른 실시양태에서, 본원은 대상체에 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포, 예를 들어, UCB, 및 HPC, 예를 들어, 사람 태반 관류액의 조합을 투여함을 포함하는, 대상체에서 키메라증을 유도하는 방법을 제공하고, 여기서 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포의 적어도 일부는 대상체와 부분적으로 불일치하고/하거나, HPC는 대상체와 불일치하거나 부분적으로 불일치하여 대상체에서 키메라증이 발생하게 된다. 본원에 사용된 "키메라증"은, 달리 언급하지 않는 한, 비자기 DNA, 예를 들어, 수령자 대상체에 대해 불일치하거나 부분적으로 불일치하는 세포로부터의 DNA가 대상체에 존재하는 것을 말한다.

이러한 방법의 한 실시양태에서, 1단위 초과의 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포가 대상체에 투여되는데, 예를 들어, 2, 3 또는 4단위의 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포가 대상체에 투여된다. 1단위 초과의 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포가 대상체에 투여되는 특정 실시양태에서, 키메라증을 유도하는 방법은 다중 키메라증을 야기할 수 있는데, 예를 들어, 투여된 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포 또는 그의 자손의 1단위 초과 내지 모든 단위를 포함하는 키메라증을 야기할 수 있다.

이러한 방법의 다른 실시양태에서, HPC 또는 그의 자손을 포함하는 키메라증을 야기할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포 또는 그의 자손을 포함하는 키메라증(1단위 초과의 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포가 투여되는 경우에서의 다중 키메라증 포함), 및 HPC 또는 그의 자손을 포함하는 키메라증을 야기할 수 있다.

이러한 방법의 또 다른 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 대상체와 친족 관계가 아니다. 1단위 초과의 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포가 투여되는 경우, 1단위 초과의 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 대상체와 친족 관계가 아닐 수 있다. 이러한 방법의 특정 실시양태에서, HPC는 대상체와 친족 관계가 아니고, 추가로 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포와 친족 관계가 아닐 수 있다. 이러한 방법의 또 다른 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포 및 HPC는 둘 다 대상체와 친족 관계가 아니다.

이러한 방법의 특정 실시양태에서, 키메라증(HT 세포, 예를 들어, UCB 세포 또는 그의 자손, 또는 HPC 또는 그의 자손 중 하나 또는 둘 다를 포함)은 먼저 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포를 HPC와 조합하여 대상체에 투여한지 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62일내 또는 그 후에 대상체에서 탐지된다.

키메라증은 당해 분야에 알려진 방법을 사용하여 탐지할 수 있다. 예를 들어, 키메라증은 혈액 샘플을 사용하여 탐지할 수 있다. 한 실시양태에서, 키메라증은 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)을 기초로 한 방법을 사용하여, 예를 들어, 짧은 반복 서열(short tandem repeat; STR) 분석으로 탐지한다. 한 실시양태에서, 조혈 줄기세포 이식 후의 키메라증에 대한 시험은 수령자 및 공여자의 유전자 프로파일을 동정한 다음, 수령자의 혈액, 골수 또는 기타 조직에서의 혼합물 정도를 평가함을 포함한다. DNA에 의한 키메라증 시험(생착 분석)은 사람 동정 시험에 통상 사용되는 방법을 사용하고 STR 부위로 불리는 게놈 동질이상 분석으로 수행한다. 한 실시양태에서, 기준선에서의 공여자 세포(UCB 및 관류액 세포)의 키메라증과 함께 기준선에서 평가된 말초혈 수령자 키메라증의 정량화(예를 들어, STR 분석 사용)와, 말초혈 공여자 키메라증(UCB/s 및 관류액 세포)(전혈, NK 및 T 세포)의 정량화(예를 들어, STR 분석 사용)를 7, 14, 30, 60, 100 및 180일(±10일)에 평가한다.

또 다른 실시양태에서, 본원은 대상체에 HT 세포, 예를 들어, 사람 UCB 세포, 예를 들어, UCB, 및 HPC, 예를 들어, 사람 태반 관류액의 조합을 투여함을 포함하는, 대상체에서의 세포 생착, 예를 들어, 혈소판 또는 호중구의 생착 방법을 제공하는데, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포의 적어도 일부가 대상체에 부분적으로 일치하고/하거나 HPC가 대상체에 불일치하거나 부분적으로 불일치하여 대상체에서 세포 생착이 일어나게 된다. 특정 실시양태에서, 세포 생착은 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포, 또는 그의 자손의 생착을 포함한다. 특정한 다른 실시양태에서, 세포 생착은 HPC 또는 그의 자손의 생착을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 생착은 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포, 또는 그의 자손 및 HPC 또는 그의 자손의 생착을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 세포 생착방법은 생착 시간을 단축시킨다.

이러한 방법의 한 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 대상체와 친족 관계가 아니다. 특정 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 대상체와 부분적으로 불일치한다. 다른 특정 실시양태에서, HPC는 대상체와 친족 관계가 아니고, 추가로 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포와 친족 관계가 아닐 수 있다. 특정 실시양태에서, HPC는 대상체와 부분적으로 불일치한다. 다른 특정 실시양태에서, HPC는 대상체와 일치하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, HPC는 대상체와 친족 관계가 아니다. 또 다른 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 대상체와 친족 관계가 아니고 대상체와 부분적으로 불일치하고, HPC는 대상체와 친족 관계가 아니고 대상체와 부분적으로 불일치하거나 불일치한다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포를 단독 투여하는 것에 비해 향상된 이식 능력을 나타낸다.

생착은 당해 분야에 알려진 방법을 사용하여 탐지할 수 있다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 온혈구 감별계산을 0일부터 최하점에 도달한 후 3일 동안의 절대 호중구수가 500/㎣를 넘을 때까지 및 최소 7일 동안 혈소판 수혈을 하지 않으면서 혈소판수가 추가의 3일 동안 3회 연속 측정한 바 20,000/㎣ 이상일 때까지 1 내지 3일 간격으로 수행할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "호중구 생착"은 호중구 최하점 이후 절대 호중구수가 500/㎣를 넘는 3일의 첫째날을 말한다. 본원에 사용된 바와 같이, "혈소판 생착"은 수혈 없이 혈소판수가 20,000/㎣ 이상인 7일의 기간 후, 혈소판수가 20,000/㎣ 이상을 나타내는 연속되는 3일의 첫째날을 말한다.

특정 실시양태에서, 대상체에서의 세포 생착은 대상체에 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포를 HPC와 조합하여 투여한 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61 또는 62일, 또는 2개월, 2.5개월, 3개월 또는 그 초과내에 탐지한다.

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 1단위의 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포, 예를 들어, UCB를 투여함을 포함한다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 다중 단위의 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포, 예를 들어, UCB를 투여함을 포함한다. 예를 들어, 본원에 제공된 방법은 2, 3 또는 4단위의 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포, 예를 들어, UCB를 투여함을 포함할 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 대상체에 HT 세포, 예를 들어, 사람 UCB 세포, 예를 들어, UCB, 및 HPC, 예를 들어, 사람 태반 관류액의 조합을 투여함을 포함하는, 대상체에서의 GVHD의 기간 또는 중증도를 감소시키는 방법을 제공하는데, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포의 적어도 일부가 대상체에 부분적으로 일치하고/하거나 HPC가 대상체에 불일치하거나 부분적으로 불일치하여 대상체에서 GVHD의 기간 또는 중증도가 감소하게 된다.

이러한 방법의 한 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 대상체와 친족 관계가 아니다. 특정 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 대상체와 부분적으로 불일치한다. 다른 특정 실시양태에서, HPC는 대상체와 친족 관계가 아니고, 추가로 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포와 친족 관계가 아닐 수 있다. 특정 실시양태에서, HPC는 대상체와 부분적으로 불일치한다. 다른 특정 실시양태에서, HPC는 대상체와 불일치한다. 또 다른 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 대상체와 친족 관계가 아니고 HPC는 대상체와 친족 관계가 아니다. 또 다른 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 대상체와 친족 관계가 아니고 대상체와 부분적으로 불일치하고, HPC는 대상체와 친족 관계가 아니고 대상체와 부분적으로 불일치하거나 불일치한다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포를 단독 투여하는 것에 비해 감소된 GVHD의 중증도 또는 기간을 나타낸다.

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포, 예를 들어, UCB를 HPC, 예를 들어, 사람 태반 관류액과 동시에 투여함을 포함한다.특정 실시양태에서, 상기 세포가 대상체에 동시에 투여된다. 다른 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포 및 HPC가 서로 대상체에 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 18 또는 24시간 또는 그 초과 내에, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7일 또는 그 초과 내에 투여된다. 특정 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포, 예를 들어, UCB가 대상체에 투여된 다음, HPC, 예를 들어, 사람 태반 관류액이 투여되는데, 예를 들어, UCB의 투여 후 1시간 내 또는 대상체가 UCB 투여에 대해 역반응을 나타내지 않는 것이 확인되는 최소한의 기간 내에 투여된다.

본원에 제공된 방법은 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포, 예를 들어, UCB의 단독 투여에 비해, 예를 들어, 세포 생착까지의 기간의 단축, 대상체가 호중성 백혈구감소증에 걸리는 시간의 제한, 대상체가 혈소판감소성자반증에 걸리는 시간의 제한, 키메라증의 확립, 및 GVHD의 중증도 또는 기간의 감소 또는 이의 예방을 포함할 수 있는 이점을 나타낼 수 있다.

투여되는 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포와 HPC의 비율은 변할 수 있다. HT 세포, 예를 들어, UCB 세포와 HPC의 비율은 당해 분야의 숙련가의 판단에 따라 결정할 수 있다. 특정 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포 대 HPC의 비율은 약 100,000,000:1, 50,000,000:1, 20,000,000:1, 10,000,000:1, 5,000,000:1, 2,000,000:1, 1,000,000:1, 500,000:1, 200,000:1, 100,000:1, 50,000:1, 20,000:1, 10,000:1, 5,000:1, 2,000:1, 1,000:1, 500:1, 200:1, 100:1, 50:1, 20:1, 10:1, 5:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:5, 1:10, 1:100, 1:200, 1:500, 1:1,000, 1:2,000, 1:5,000, 1:10,000, 1:20,000, 1:50,000, 1:100,000, 1:500,000, 1:1,000,000, 1:2,000,000, 1:5,000,000, 1:10,000,000, 1:20,000,000, 1:50,000,000 또는 약 1:100,000,000이다. 특정 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포 대 HPC의 비율은 약 20:1 내지 약 1:20, 또는 약 1:10, 약 1:5, 약 1:1, 약 5:1 또는 약 10:1이다.

HT 세포, 예를 들어, UCB 세포, 및 HPC의 투여는 당해 분야에 알려진 세포 투여를 위한 임의의 기술을 사용하여 수행할 수 있다. 한 실시양태에서, 투여는 정맥, 예를 들어, IV, PICC 라인, 중심 라인을 통한 정맥내이다. 예를 들어, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포와 HPC를 별도 조성물로 또는 단일 조성물로 대상체에 주사 또는 수혈을 포함하는 임의의 약제학적으로 또는 의학적으로 허용되는 방식으로 투여할 수 있다. 특정 실시양태에서, 조성물(들)은 주사가능한 조성물(예를 들어, 전문이 본원에 참조로 도입된 WO 96/39101)로 제형화할 수 있다.

특정 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포, 또는 HPC를 대상체에 비경구로 투여할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "비경구"는 피하주사, 정맥내, 근육내, 동맥내 주사 또는 주입 기술을 포함한다. 특정 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포, 또는 HPC를 대상체에 정맥내로 투여할 수 있다. 특정한 다른 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포, 또는 HPC를 대상체에 심실내로 투여할 수 있다.

HT 세포, 예를 들어, UCB 세포, 및 HPC는 임의의 약제학적으로 허용되는 담체에 별도로 또는 함께 함유될 수 있다. HT 세포, 예를 들어, UCB 세포 또는 HPC는 임의의 약제학적으로 또는 의학적으로 허용되는 용기, 예를 들어, 혈액주머니, 이송 백, 플라스틱 튜브, 시린지, 바이알 등으로 나르거나 저장하거나 이송할 수 있다.

HT 세포, 예를 들어, UCB 세포 및/또는 HPC의 대상체로의 투여는 1회 또는 다수회로 수행할 수 있다. 특정 실시양태에서, 투여는 1회 수행된다. 특정 실시양태에서, 투여는 다수회, 예를 들어, 2회, 3회, 4회 또는 그 초과의 횟수로 수행된다. 특정 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 다수회 투여된다. 특정 실시양태에서, HPC는 다수회 투여된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 따라 대상체에 투여되는 탯줄혈액 또는 그로부터 수득된 세포(예를 들어, 제대혈로부터의 총 유핵세포)의 양을 탯줄혈액에 존재하는 세포수를 기초로 하여 측정할 수 있다. 대상체에 투여되는 UCB 또는 그로부터 수득된 세포(예를 들어, 제대혈로부터의 총 유핵세포) 및/또는 사람 태반 관류액 또는 HPC 또는 그로부터 수득된 총 유핵세포의 양 또는 수는 제대혈의 공급원 또는 그로부터 수득된 세포(예를 들어, 제대혈로부터의 총 유핵세포) 및/또는 사람 태반 관류액 또는 HPC 또는 그로부터 수득된 총 유핵세포, 치료되는 장애 또는 병태의 중증도 또는 본질, 뿐만 아니라 대상체의 연령, 체중 및 신체 상태에 좌우된다. 특정 실시양태에서, 대상체의 체중 ㎏당 약 0.01 내지 약 0.1개, 약 0.1 내지 약 1개, 약 1 내지 약 10개, 약 10 내지 약 10²개, 약 10² 내지 약 10³개, 약 10³ 내지 약 10⁴개, 약 10⁴ 내지 약 10⁵개, 약 10⁵ 내지 약 10⁶개, 약 10⁶ 내지 약 10⁷개, 약 10⁷ 내지 약 10⁸개 또는 약 10⁸ 내지 약 10⁹개의 제대혈 세포(예를 들어, 제대혈로부터의 총 유핵세포), 사람 태반 관류액 또는 그로부터 수득된 세포(예를 들어, HPC, 또는 태반 관류액으로부터의 총 유핵세포), 또는 총 제대혈 세포 및 태반 관류액으로부터 수득된 세포(예를 들어, HPC 또는 총 유핵세포)가 투여된다. 다양한 실시양태에서, 대상체의 체중 ㎏당 약 0.1, 1, 10, 10², 10³, 10⁴, 10⁵, 10⁶, 10⁷, 10⁸ 또는 10⁹개 이상의 제대혈 세포(예를 들어, 제대혈로부터의 총 유핵세포), 태반 관류액으로부터 수득된 세포(예를 들어, HPC 또는 태반 관류액으로부터의 총 유핵세포), 또는 제대혈 세포 및 태반 관류액으로부터 수득된 세포가 투여된다.

특정 실시양태에서, 대상체의 체중 ㎏당 약 0.5 × 10⁶개, 1.0 × 10⁶개, 1.5 × 10⁶개, 2.0 × 10⁶개, 2.5 × 10⁶개, 3.0 × 10⁶개, 3.5 × 10⁶개, 4.0 × 10⁶개, 4.5 × 10⁶개, 5.0 × 10⁶개, 5.5 × 10⁶개, 6.0 × 10⁶개, 6.5 × 10⁶개, 7.0 × 10⁶개, 7.5 × 10⁶개, 8.0 × 10⁶개, 8.5 × 10⁶개, 9.0 × 10⁶개, 9.5 × 10⁶개, 1.0 × 10⁷개, 1.5 × 10⁷개, 2.0 × 10⁷개, 2.5 × 10⁷개, 3.0 × 10⁷개, 3.5 × 10⁷개, 4.0 × 10⁷개, 4.5 × 10⁷개, 5.0 × 10⁷개, 5.5 × 10⁷개 또는 6.0 × 10⁷개 이상의 제대혈 세포(예를 들어, 제대혈로부터의 총 유핵세포), 사람 태반 관류액으로부터 수득된 세포(예를 들어, HPC 또는 태반 관류액으로부터의 총 유핵세포), 또는 총 제대혈 세포 및 태반 관류액으로부터 수득된 세포(예를 들어, HPC 또는 태반 관류액으로부터의 총 유핵세포)가 투여된다. 보다 특정한 실시양태에서, 대상체의 체중 ㎏당 약 0.5 × 10⁶개, 1.0 × 10⁶개, 1.5 × 10⁶개, 2.0 × 10⁶개, 2.5 × 10⁶개, 3.0 × 10⁶개, 3.5 × 10⁶개, 4.0 × 10⁶개, 4.5 × 10⁶개 또는 5.0 × 10⁶개이상의 태반 관류액으로부터 수득된 세포(예를 들어, HPC 또는 태반 관류액으로부터의 총 유핵세포)가 투여된다. 보다 특정한 실시양태에서, 대상체의 체중 ㎏당 1.5 × 10⁷개, 2.0 × 10⁷개, 2.5 × 10⁷개, 3.0 × 10⁷개, 3.5 × 10⁷개, 4.0 × 10⁷개, 4.5 × 10⁷개, 5.0 × 10⁷개, 5.5 × 10⁷개 또는 6.0 × 10⁷개 이상의 제대혈 세포(예를 들어, 제대혈로부터의 총 유핵세포)가 투여된다. 다양한 실시양태에서, 대상체의 체중 ㎏당 최대한 최대한 약 10⁴, 10⁵, 10⁶, 10⁷, 10⁸ 또는 10⁹개의 제대혈 세포, 태반 관류액으로부터 수득된 세포(예를 들어, HPC 또는 태반 관류액으로부터의 총 유핵세포), 또는 제대혈 세포 및 태반 관류액으로부터 수득된 세포(예를 들어, HPC 또는 태반 관류액으로부터의 총 유핵세포)가 투여된다. 특정 실시양태에서, 대상체의 체중 ㎏당 최대한 약 0.5 × 10⁶개, 1.0 × 10⁶개, 1.5 × 10⁶개, 2.0 × 10⁶개, 2.5 × 10⁶개, 3.0 × 10⁶개, 3.5 × 10⁶개, 4.0 × 10⁶개, 4.5 × 10⁶개, 5.0 × 10⁶개, 5.5 × 10⁶개, 6.0 × 10⁶개, 6.5 × 10⁶개, 7.0 × 10⁶개, 7.5 × 10⁶개, 8.0 × 10⁶개, 8.5 × 10⁶개, 9.0 × 10⁶개, 9.5 × 10⁶개, 1.0 × 10⁷개, 1.5 × 10⁷개, 2.0 × 10⁷개, 2.5 × 10⁷개, 3.0 × 10⁷개, 3.5 × 10⁷개, 4.0 × 10⁷개, 4.5 × 10⁷개, 5.0 × 10⁷개, 5.5 × 10⁷개 또는 6.0 × 10⁷개의 제대혈 세포(예를 들어, 제대혈로부터의 총 유핵세포), 사람 태반 관류액으로부터 수득된 세포(예를 들어, HPC 또는 태반 관류액으로부터의 총 유핵세포), 또는 총 제대혈 세포 및 태반 관류액으로부터 수득된 세포(예를 들어, HPC 또는 태반 관류액으로부터의 총 유핵세포)가 투여된다. 보다 특정한 실시양태에서, 대상체의 체중 ㎏당 최대한 약 0.5 × 10⁶개, 1.0 × 10⁶개, 1.5 × 10⁶개, 2.0 × 10⁶개, 2.5 × 10⁶개, 3.0 × 10⁶개, 3.5 × 10⁶개, 4.0 × 10⁶개, 4.5 × 10⁶개 또는 5.0 × 10⁶개의 태반 관류액으로부터 수득된 세포(예를 들어, HPC 또는 태반 관류액으로부터의 총 유핵세포)가 투여된다. 보다 특정한 실시양태에서, 대상체의 체중 ㎏당 최대한 약 1.5 × 10⁷개, 2.0 × 10⁷개, 2.5 × 10⁷개, 3.0 × 10⁷개, 3.5 × 10⁷개, 4.0 × 10⁷개, 4.5 × 10⁷개, 5.0 × 10⁷개, 5.5 × 10⁷개 또는 6.0 × 10⁷개의 제대혈 세포(예를 들어, 제대혈로부터의 총 유핵세포)가 투여된다. 특정 실시양태에서, 대상체의 체중 ㎏당 태반 관류액으로부터 수득된 세포(예를 들어, HPC 또는 태반 관류액으로부터의 총 유핵세포)보다 많은 수의 제대혈 세포(예를 들어, 제대혈로부터의 총 유핵세포)가 투여된다.

특정 실시양태에서, 대상체의 체중 ㎏당 태반 관류액으로부터 수득된 세포(예를 들어, HPC 또는 태반 관류액으로부터의 총 유핵세포)보다 많은 수의 HT 세포, 예를 들어, 제대혈 세포(예를 들어, 총 유핵 HT 세포, 예를 들어, 제대혈로부터의 세포)가 투여된다.

특정 실시양태에서, 체중 ㎏당 약 10⁴ 내지 약 10⁷개, 예를 들어, 0.5 × 10⁴개, 1.0 × 10⁴개, 1.5 × 10⁴개, 2.0 × 10⁴개, 2.5 × 10⁴개, 3.0 × 10⁴개, 3.5 × 10⁴개, 4.0 × 10⁴개, 4.5 × 10⁴개, 5.0 × 10⁴개, 5.5 × 10⁴개, 6.0 × 10⁴개, 6.5 × 10⁴개, 7.0 × 10⁴개, 7.5 × 10⁴개, 8.0 × 10⁴개, 8.5 × 10⁴개, 9.0 × 10⁴개, 9.5 × 10⁴개, 0.5 × 10⁵개, 1.0 × 10⁵개, 1.5 × 10⁵개, 2.0 × 10⁵개, 2.5 × 10⁵개, 3.0 × 10⁵개, 3.5 × 10⁵개, 4.0 × 10⁵개, 4.5 × 10⁵개, 5.0 × 10⁵개, 5.5 × 10⁵개, 6.0 × 10⁵개, 6.5 × 10⁵개, 7.0 × 10⁵개, 7.5 × 10⁵개, 8.0 × 10⁵개, 8.5 × 10⁵개, 9.0 × 10⁵개, 9.5 × 10⁵개, 0.5 × 10⁶개, 1.0 × 10⁶개, 1.5 × 10⁶개, 2.0 × 10⁶개, 2.5 × 10⁶개, 3.0 × 10⁶개, 3.5 × 10⁶개, 4.0 × 10⁶개, 4.5 × 10⁶개, 5.0 × 10⁶개, 5.5 × 10⁶개, 6.0 × 10⁶개, 6.5 × 10⁶개, 7.0 × 10⁶개, 7.5 × 10⁶개, 8.0 × 10⁶개, 8.5 × 10⁶개, 9.0 × 10⁶개, 9.5 × 10⁶개, 1.0 × 10⁷개, 1.5 × 10⁷개, 2.0 × 10⁷개, 2.5 × 10⁷개, 3.0 × 10⁷개, 3.5 × 10⁷개, 4.0 × 10⁷개, 4.5 × 10⁷개, 5.0 × 10⁷개, 5.5 × 10⁷개 또는 6.0 × 10⁷개의 CD+34 세포가 투여된다. 이러한 CD+34 세포는 탯줄혈액 단독으로부터 수득된 것일 수 있거나, 탯줄혈액과 태반 관류액으로부터 수득된 것일 수 있다. 특정 실시양태에서, CD+34 세포가 탯줄혈액과 태반 관류액으로부터 수득된 것인 경우, 총 태반 관류액에 대한 태반 관류액으로부터의 CD+34 세포의 %가 총 탯줄혈액 세포에 대한 탯줄혈액으로부터의 CD+34 세포의 %보다 크다. 한 실시양태에서, 태반 관류액 세포군내의 CD+34 세포의 비율은 탯줄혈액 세포군 내의 CD+34 세포의 비율에 비해 0.1 내지 0.5배, 0.5 내지 1.0배, 1.0 내지 1.5배, 1.5 내지 2.0배, 2.0 내지 2.5배, 2.5 내지 3.0배, 3.0 내지 3.5배, 3.5 내지 4.0배, 4.0 내지 4.5배, 4.5 내지 5.0배, 5.0 내지 5.5배, 5.5 내지 6.0배, 6.0 내지 6.5배, 6.5 내지 7.0배, 7.0 내지 7.5배, 7.5 내지 8.0배, 8.0 내지 8.5배, 8.5 내지 9.0배, 9.0 내지 9.5배 또는 9.5 내지 10.0배이거나 이보다 높다. 특정 실시양태에서, 0.1%, 0.5%, 1.0%, 1.5%, 2.0%, 2.5%, 3.0%, 3.5%, 4.0%, 4.5% 또는 5.0%, 또는 이보다 높은 비율의 태반 관류액 세포가 CD+34이다.

HT 세포, 예를 들어, UCB 세포, 예를 들어, UCB, 및 HPC, 예를 들어, 태반 관류액은 대상체의 체격에 적합한 용적으로 전달될 수 있다. 사람 성인의 보통의 혈액 용적은 약 85 내지 100mL/㎏ 체중이다. 따라서, 사람 성인에 대한 혈액 용적은 대략 40mL 내지 대략 300mL 범위이다. 그러므로, 다양한 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포, 예를 들어, UCB, 및 HPC, 예를 들어, 태반 관류액은 약 0.5mL, 1.0mL, 2mL, 3mL, 4mL, 5mL, 6mL, 7mL, 8mL, 9mL, 10mL, 11mL, 12mL, 13mL, 14mL, 15mL, 16mL, 17mL, 18mL, 19mL, 20mL, 21mL, 22mL, 23mL, 24mL, 25mL, 26mL, 27mL, 28mL, 29mL 또는 약 30mL, 또는 이보다 많은 총 용적으로 투여된다. 이러한 용적의 투여는 단일 투여 또는 다중 투여일 수 있다. 이러한 용적의 탯줄혈액 또는 탯줄혈액 세포 수, 또는 사람 태반 관류액 또는 그로부터 수득된 세포(예를 들어, HPC 또는 태반 관류액으로부터의 총 유핵세포)가 투여될 수 있는 시간은, 예를 들어, 0.5시간, 1시간, 1.5시간, 2시간, 2.5시간, 3시간, 3.5시간, 4시간 또는 그 초과로 달라질 수 있다.

특정 실시양태에서, 20mL 미만의 적은 수혈은 시린지를 사용하여 수행한다. 고용적 수혈은 주입 장치를 사용하여, 예를 들어, 1 내지 4시간의 시간 내에 투여할 수 있다.

본원에 제공된 방법은 이를 필요로 하는 임의의 대상체에 수행할 수 있다. 한 실시양태에서, 대상체는 조혈 재구성, 부분적 재구성 또는 확대술이 필요하다. 특정 실시양태에서, 대상체는 사람 대상체이다. 특정 실시양태에서, 대상체는 성인 사람 대상체이다. 특정 실시양태에서, 대상체는 25세 이하이다. 특정 실시양태에서, 대상체는 영아이다.

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 방법, 예를 들어, 이식(transplanting), 키메라증 유도 방법 및/또는 생착 방법 전에, 대상체에, 예를 들어, TBI, 클로파라빈 및/또는 Ara-C1을 사용한 골수형성 컨디셔닝; 예를 들어, 부설판, 플루다라빈 및/또는 알렘투주맙을 사용한 감소된 독성 컨디셔닝(감소된 강도 컨디셔닝으로도 지칭됨); 방사선치료; 화학요법; 또는 면역억제 치료 또는 혈구 세포수를 감소시키는 치료와 같은 기타 치료 중 하나 이상을 부여한다. 대상체가 위의 것 중 하나 이상을 부여받는 특정 실시양태에서, 대상체는 완전 면역억제를 나타낸다. 한 실시양태에서, 적어도 몇몇 면역시스템 기능이 유지된다.

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 대상체에서 선천성 대사이상증, 부신백색질형성장애증, 뮤코다당증, 니이만-픽병, 이염색백색질장애, 울만병, 크라베병, 고쉐병, 푸코시드축적증 또는 배튼병과 같은 대사장애의 치료방법으로서 사용될 수 있다.

다른 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 대상체에서 혈액 장애 또는 혈액암, 예를 들어, 림프조혈성 악성종양, 골수형성이상증후군, 무거대핵세포혈소판감소증, 급성 림프모구성 백혈병(ALL) 및 급성 골수성 백혈병(AML)과 같은 백혈병, 호중성백혈구감소증, 낫적혈구 빈혈과 같은 낫적혈구, 베타 탈라세미아, 중증 합병성 면역결핍질환, 골수 기능부전, 또는 중증 무형성 빈혈 또는 다이아몬드-블랙판 빈혈과 같은 빈혈의 치료방법으로서 사용될 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 장애 또는 병태의 진행, 중증도 및/또는 기간의 감소 또는 개선을 말한다. 대상체가 생존하는 경우, 또는 치료되는 장애 또는 병태가 치료 결과로서 어떤 식으로든 측정가능하게 개선되는 경우, 그 치료는 효과적인 것으로 여겨질 수 있다. 이러한 개선은, 예를 들어, 생리학적 상태의 탐지가능한 변화, 또는 특정 질환, 장애 또는 병태와 관련된 생리학적 상태의 세트를 포함하는 하나 이상의 측정가능한 지표에 의해 나타날 수 있다. 하나 이상의 지표의 값이 상기 치료가 없는 경우 예상되는 것에 비해, 예를 들어, 유사한 연령의 개체에 대한 정상값 내이거나 그에 보다 근접한 값으로 변함으로써 이러한 치료에 반응성인 것으로 보이는 경우, 그 치료는 또한 효과적인 것으로 여겨진다.

본원에 제공된 방법의 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 장애 또는 병태의 치료에서 하나 이상의 제2 치료와 조합되어 제2 치료로서 사용될 수 있다. 이러한 제2 치료는 수술, 호르몬치료, 면역요법, 광선요법 또는 특정 약물을 사용한 치료를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 본원에 제공된 방법과 조합하여 사용할 수 있는 치료의 예는 환경 온도의 조절; 산소 지원; 호흡기 또는 환기기; 말초혈 수혈; 철 보충; 정맥내 공급; 광선요법; 수술; 대사장애 또는 혈액장애(혈액암 포함) 치료용 약제; 항생제 또는 항바이러스제; 소염제(예를 들어, 스테로이드성 항염증 화합물, 비스테로이드성 항염증(NSAID) 화합물); 산화질소; 항히스타민제; 면역억제제; 및 면역조절 화합물(예를 들어, TNF-α 억제제)을 포함한다.

2. 사람 태반 관류액 세포

본 기재에 따라 사용하기 위한 사람 태반 관류액(HPC)으로부터의 단핵세포, 예를 들어, 사람 태반 관류액은 임의의 의학적 또는 약제학적으로 허용되는 방식으로 수집할 수 있고, 조성물, 예를 들어, 약제학적 조성물에 존재할 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물, 즉 사람에게 투여하기 적합한 약제학적 등급 용액)은 사람 태반 관류액을 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 조성물은 부분적으로 방혈된 태반으로부터 수득된 사람 태반 관류액을 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 조성물은 방혈된 태반으로부터 수득된 사람 태반 관류액을 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 조성물은 사람 태반 관류액으로부터 분리된 세포, 예를 들어, 줄기세포를 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 조성물은 사람 태반 관류액으로부터 분리된 유핵세포, 예를 들어, 단핵세포 또는 총 유핵세포를 포함한다.

한 실시양태에서, HPC, 예를 들어, 사람 태반 관류액은 무균이다. 한 실시양태에서, HPC군, 예를 들어, 사람 태반 관류액군은 이종이다.

특정 실시양태에서, HPC 또는 사람 태반 관류액은 표준 방법에 따라 적혈구 및/또는 과립구를 제거함으로써 처리하여 유핵세포군을 생성시킨다. 이러한 강화된 세포군은 냉동시켜 사용할 수 있거나, 추후 사용을 위해 냉동시킬 수 있다. 세포군이 냉동상태인 경우, 표준 냉동보존제(예를 들어, DMSO, 글리세롤, Epilife™ 세포 냉동 배지(Cascade Biologics))를 강화된 세포군이 냉동되기 전에 첨가할 수 있다.

특정 실시양태에서, 태반 관류액으로부터 수득된 세포는 태반 관류액으로부터의 단핵세포를 포함한다. 특정 실시양태에서, 태반 관류액으로부터 수득된 세포는 태반 관류액으로부터의 총 유핵세포를 포함한다. 특정 실시양태에서, 태반 관류액으로부터 수득된 세포는 단일 태반으로부터 수득된다. 특정 실시양태에서, 태반 관류액으로부터 수득된 세포는 하나 이상의 태반으로부터 수득된다. 특정 실시양태에서, 태반 관류액으로부터 수득된 세포는 2개의 태반으로부터 수득된다. 상기 세포가 하나 이상의 태반으로부터 수득된 실시양태에서, 상이한 태반으로부터의 세포는 서로 친족 관계이거나 일치해야 할 필요는 없다.

본원에 기재된 바와 같이, 태반 관류액은 태반세포를 수득하기 위한 관류 전에, 탯줄혈액이 배출되었고 잔류 혈액을 제거하기 위해 관류된 태반으로부터 수득할 수 있다. 태반 관류액은 탯줄혈액이 배출되었으나 잔류 혈액을 제거하기 위해 관류되지는 않은 태반으로부터 수득할 수 있다. 태반 관류액은 탯줄로부터 거의 0.5 내지 6.0인치, 예를 들어, 0.5 내지 1.0인치, 1.0 내지 1.5인치, 1.5 내지 2.0인치, 2.0 내지 2.5인치, 2.5 내지 3.0인치, 3.0 내지 3.5인치, 3.5 내지 4.0인치 또는 4.0 내지 6.0인치 떨어진 태반으로부터 수득할 수 있고, 탯줄은 잔류 탯줄혈액을 함유할 수 있고, 이의 일부가 관류 동안 태반 관류액으로 유입되어 태반 관류액에 포함될 수 있다. 태반 관류액은 탯줄혈액이 배출되지도 않았고 잔류 혈액을 제거하기 위해 관류되지도 않은 태반으로부터 수득할 수 있다. 상기 중 마지막 2개의 실시양태에서, 태반세포, 예를 들어, 태반 관류액으로부터의 유핵세포, 예를 들어, HPC는 태반혈액 및/또는 탯줄혈액으로부터의 유핵세포를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 기재에 따라 사용되는 태반 관류액은 제대혈을 함유하지 않는다. 다른 특정 실시양태에서, 본 기재에 따라 사용되는 태반 관류액은 제대혈을 실질적으로 함유하지 않는데, 예를 들어, 상기 태반 관류액은 탯줄혈액을 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만, 0.5% 미만 또는 0.1% 미만 포함한다. 일반적으로, 관류액으로부터의 세포가 탯줄혈액 세포를 포함하면, 본원에 제공된 방법의 목적을 위해, 이러한 세포는 HT 세포의 일부가 아니라 HPC군의 일부로 여겨진다.

태반 관류액은 투여를 위해 단일 개체(즉, 단일 단위)로부터 수집할 수 있거나, 다른 단위들, 예를 들어, 동일한 개체로부터의 또는 하나 이상의 상이한 개체로부터의 단위들과 합할 수 있다. 특정 실시양태에서, 태반 관류액 또는 그로부터 수득된 세포는 투여 전에 저장한다. 특정 실시양태에서, 태반 관류액의 단위는 대상체의 체중 ㎏당 태반 관류액으로부터 수득된 세포가 약 0.5 × 10⁶개, 1.0 × 10⁶개, 1.5 × 10⁶개, 2.0 × 10⁶개, 2.5 × 10⁶개 또는 3.0 × 10⁶개 이상으로 투여되도록 충분한 수의 세포를 함유한다. 특정 실시양태에서, 1단위의 태반 관류액 또는 그로부터 수득된 세포가 투여된다. 특정 실시양태에서, 1단위 미만이 투여된다. 특정 실시양태에서, 1단위 초과가 투여된다.

태반 관류액을 수득하기 위한 태반은 성공적 출산 및 태반 만출 후 회수할 수 있다. 특정 실시양태에서, 태반은 만기출생으로부터 수득된다. 특정 실시양태에서, 태반은 조산으로부터 수득된다. 몇몇 실시양태에서, 태반은 임신 약 23주 내지 약 25주에 출생한 영아의 태반이다. 몇몇 실시양태에서, 태반은 임신 약 26주 내지 약 29주에 출생한 영아의 태반이다. 몇몇 실시양태에서, 태반은 임신 약 30주 내지 약 33주에 출생한 영아의 태반이다. 몇몇 실시양태에서, 태반은 임신 약 34주 내지 약 37주에 출생한 영아의 태반이다. 몇몇 실시양태에서, 태반은 임신 약 37주 내지 약 42주에 출생한 영아의 태반이다.

본 기재에 따라 사용하기 위한 사람 태반 관류액 또는 그로부터 수득된 세포는 일반적으로 세포의 대상체 수령자와 친족 관계가 아니다. 본 기재에 따라 사용하기 위한 사람 태반 관류액 또는 그로부터 수득된 세포는 일반적으로 세포의 대상체 수령자와 불일치하거나 부분적으로 불일치한다.

본 기재에 따라 사용하기 위한 사람 태반 관류액 또는 그로부터 수득된 세포는 임의의 방법으로 수득할 수 있다. 태반 관류액은, 예를 들어, 전문이 참조로 도입된 미국 특허 제7,045,148호, 미국 특허 제7,255,879호 및/또는 미국 특허 제8,057,788호에 기재된 대로 수득할 수 있다. 이러한 관류는, 예를 들어, 관류액이 태반 혈관계로 강제로 통과되고 태반, 일반적으로 모체쪽으로부터 흐르는 관류액이 태반을 함유하는 팬에 수집되는 팬 방법에 의한 관류일 수 있다. 관류는 또한, 예를 들어, 관류액이 태반의 태아 혈관계만을 통과하고 이로부터 수집되는 폐쇄순환관류일 수 있다. 전문이 참조로 도입된 미국 특허 제8,057,788호를 참조한다. 특정 실시양태에서, 이러한 관류는 연속일 수 있는데, 즉 태반을 통과한 관류액이 태반 관류액(예를 들어, HPC 또는 태반 관류액으로부터의 총 유핵세포)으로부터 수득된 세포의 분리 전에 두 번째 또는 다수회 통과된다.

3. 제대혈 세포

본 기재에 따라 사용하기 위한 제대혈(본원에서는 UCB 또는 "탯줄혈액"으로도 지칭됨)은 임의의 의학적 또는 약제학적으로 허용되는 방식으로 수집할 수 있고, 조성물, 예를 들어, 약제학적 조성물에 존재할 수 있다. 탯줄혈액의 수집을 위한 다양한 방법이 기재되어 있다. 예를 들어, 전문이 참조로 도입된 미국 특허 제6,102,871호, 미국 특허 제6,179,819호 및 미국 특허 제7,147,626호를 참조한다. 탯줄혈액의 수집을 위한 통상의 기술은 중력의 도움으로 사용되는 니들 또는 캐눌라의 사용을 기초로 한다. 탯줄혈액은, 예를 들어, 혈액주머니, 이송 백 또는 멸균 플라스틱 튜브 속에 수집할 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 제대혈은 시중의 탯줄혈액 은행(예를 들어, LifeBankUSA 등)으로부터 수득된다. 다른 실시양태에서, 제대혈은 분만 후 포유동물 제대로부터 수집하고 즉시(예를 들어, 수집 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 , 8, 9, 10, 11 또는 12시간 내) 사용한다. 다른 실시양태에서, 대상체를 치료하는 데 사용된 탯줄혈액은 냉동보존된 탯줄혈액이다. 제대혈은 단일 제대 또는 다수의 제대로부터 수집할 수 있다.

특정 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 대상체 및/또는 HPC와 친족 관계가 아니다. 다른 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 대상체 및/또는 HPC와 부분적으로 불일치한다. 또 다른 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 HPC와 불일치한다. 또 다른 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, UCB 세포는 HPC와 친족 관계가 아니고 불일치한다. 특정 실시양태에서, UCB는 대상체와 3/6, 4/6 또는 5/6의 HLA 부위가 일치한다. 특정 실시양태에서, HT 세포, 예를 들어, 성인 공급원으로부터의 세포는 대상체와 6/8, 7/8 또는 8/8의 HLA 부위가 일치한다.

몇몇 실시양태에서, 제대혈은 조산 제대로부터 준비한다. 다른 실시양태에서, 제대혈은 만기출생 제대로부터 준비한다. 특정 실시양태에서, 제대혈은 만기출생의 분만 후 포유동물 제대로부터 수득된다. 다른 실시양태에서, 제대혈은 조산의 분만 후 포유동물 제대로부터 수득된다. 몇몇 실시양태에서, 제대는 임신 약 23주 내지 약 25주에 출생한 영아의 제대이다. 몇몇 실시양태에서, 제대는 임신 약 26주 내지 약 29주에 출생한 영아의 제대이다. 몇몇 실시양태에서, 제대는 임신 약 30주 내지 약 33주에 출생한 영아의 제대이다. 몇몇 실시양태에서, 제대는 임신 약 34주 내지 약 37주에 출생한 영아의 제대이다. 몇몇 실시양태에서, 제대는 임신 약 37주 내지 약 42주에 출생한 영아의 제대이다.

탯줄혈액 또는 그로부터 수득된 세포(예를 들어, 총 유핵세포 또는 그로부터 유도된 줄기세포)를 투여를 위해 단일 개체(즉, 단일 단위)로부터 수집할 수 있거나, 다른 단위와 합할 수 있다. 특정 실시양태에서, 탯줄혈액 또는 그로부터 수득된 세포(예를 들어, 총 유핵세포 또는 그로부터 유도된 줄기세포)는 투여 전에 저장한다. 제대혈을 복수개의 제대와 합하는 경우, 합쳐진 탯줄혈액은 오직 만기출생으로부터의 제대혈, 만기출생의 조합으로부터의 탯줄혈액, 또는 오직 조산으로부터의 탯줄혈액을 포함할 수 있다. 예를 들어, 조산 영아의 제대로부터의 탯줄혈액은, 예를 들어, 다른 조산 영아로부터의 탯줄혈액, 오직 만기출생으로부터의 탯줄혈액, 또는 조산 및 만기 태반으로부터의 탯줄혈액의 배합물과 합할 수 있다. 자가 또는 동종이형 탯줄혈액을 포함하는 탯줄혈액을 또한 말초혈과 합할 수 있다. 특정 실시양태에서, 조산으로부터의 탯줄혈액이 만기출생으로부터의 탯줄혈액에 비해 단위 용적당 비교적 많은 수의 CD+34 줄기세포를 포함하기 때문에 조산으로부터의 탯줄혈액을 사용한다. 특정 실시양태에서, 탯줄혈액 단위는 대상체의 체중 ㎏당 약 1.0 × 10⁶개, 1.5 × 10⁶개, 2.0 × 10⁶개, 2.5 × 10⁶개, 3.0 × 10⁶개, 3.5 × 10⁶개, 4.0 × 10⁶개, 4.5 × 10⁶개, 6.0 × 10⁶개, 6.5 × 10⁶개, 7.0 × 10⁶개, 7.5 × 10⁶개, 8.0 × 10⁶개, 8.5 × 10⁶개, 9.0 × 10⁶개, 9.5 × 10⁶개, 1.0 × 10⁷개, 1.5 × 10⁷개, 2.0 × 10⁷개, 2.5 × 10⁷개, 3.0 × 10⁷개, 3.5 × 10⁷개, 4.0 × 10⁷개, 4.5 × 10⁷개, 5.0 × 10⁷개, 5.5 × 10⁷개 또는 6.0 × 10⁷개 이상의 상기 탯줄혈액으로부터 수득된 세포, 예를 들어, 탯줄혈액으로부터의 총 유핵세포가 투여되도록 충분한 수의 세포를 함유한다. 특정 실시양태에서, 1단위의 탯줄혈액 또는 그로부터 수득된 세포가 투여된다. 특정 실시양태에서, 1단위 미만이 투여된다. 특정 실시양태에서, 1단위 초과가 투여되고, 예를 들어, 2 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6 또는 그 초과)의 단위가 투여된다.

4. HT 세포, UCB 및 태반 관류액의 수집

HT 세포, 예를 들어, 제대혈 세포, 예를 들어, UCB, 및 HPC, 예를 들어, 사람 태반 관류액을 당해 분야에 알려진 방법을 사용하고 의사에 의해 확립된 절차에 따라 수득할 수 있다.

한 실시양태에서, 제대 또는 제대혈 및/또는 태반은 사전 동의한 환자로부터 회수하고 임신 전, 임신 중 및 임신 후의 환자의 완전 병력을 또한 얻는다. 이러한 의학적 기록은 태반 또는 UCB, 또는 이로부터 수확된 세포, 예를 들어, HPC 또는 HT 세포, 예를 들어, UCB 세포의 후속 사용을 조정하는 데 사용할 수 있다. 예를 들어, UCB 또는 태반 관류액으로부터 수득된 이러한 사람 세포를 치료되는 대상체에 대한 개인 맞춤형 의료에 쉽게 사용할 수 있다.

특정 실시양태에서, 사람 태반을 분만 후 태반 만출 직후에 회수한다. 특정 실시양태에서, 탯줄혈액을 또한 회수한다. 특정 실시양태에서, 제대를 통상의 탯줄혈액 회수 방법에 적용한다. 탯줄혈액은 또한 시중의 탯줄혈액 은행 서비스, 예를 들어, LifeBankUSA(Cedar Knolls, NJ)로부터 수득할 수 있다.

특정 실시양태에서, 제대혈은 전문이 본원에 참조로 도입된 미국 특허 제7,147,626호에 기재된 것과 같은 제대혈 수집 키트를 사용하여 수집한다.

한 실시양태에서, 표준 척(chuck), 멸균 거즈 패드, 포비딘 요오드 면봉, 멸균 알콜 패드, 플라스틱 제대혈 클램프, 슬라이드 클립 또는 지혈 클램프 및 새지 않는 개봉가능한 백 또는 캐니스터(canister)를 함유하는 수집 키트를 사용한다. 수집은 태반이 전달되기 전(자궁내 수집), 태반이 전달된 후(자궁외 수집) 또는 제왕절개 동안 태반이 전달되기 전에 수행할 수 있다. 간단히 말하면, 제대의 말단 부위 상의 정맥천자 부위를 살균한다. 큰 수집 백에서 연결된 수집 튜브를 클램핑하고, 니들에서 캡을 제거하고, 배꼽정맥에 배꼽정맥 쪽을 향해 앞면이 아래를 향하는 니들의 경사면을 캐뉼라 삽입한다. 클램프를 제거하여 혈액이 유동하도록 하고 수집 백을 캐뉼라 삽입 부위보다 낮춰 혈액이 중력에 의해 수집 백에 가득 차도록 한다. 혈액 유동이 멈추면, 정맥천자 부위를 클램핑하고 니들을 배꼽정맥에서 뺀다. 수집 백에 라벨을 붙이고 절연성 선박 용기에 넣는다. 클램핑된 제대혈이 있는 태반을 새지 않는 개봉가능한 백에 넣은 다음, 백을 적합하게 밀봉하고 라벨을 붙인다. 수집 후, 제대혈 세포의 생존력을 트립판 블루 염색 후 혈구계로 측정하다.

특정 실시양태에서, 근위 제대를 탯줄혈액 수집 전에, 예를 들어, 태반 디스크로 삽입되는 위치로부터 3 내지 4인치 내를 클램핑한다. 다른 실시양태에서, 근위 제대를 탯줄혈액 회수 후 태반 처리 전에 클램핑한다. 탯줄혈액 수집을 위한 통상의 기술을 사용할 수 있다. 한 실시양태에서, 중력의 도움으로 탯줄혈액을 배출시키기 위해 니들 또는 캐뉼라를 사용한다.

포유동물 태반의 관류방법은, 예를 들어, 전문이 본원에 참조로 도입된 미국 특허 제7,045,148호 및 제7,255,879호(Hariri), 및 미국 츨원공보 제2007/0190042호(발명의 명칭 "Improved Composition for Collecting and Preserving Organs")에 기재되어 있다.

특정 실시양태에서, 임의의 잔류 탯줄혈액을 제거하기 위해 태반을 관류시키기 전에 또는 잔류 탯줄혈액을 제거하지 않고 태반을 관류시키기 전에 태반을 약 1시간 내지 약 72시간 또는 약 4시간 내지 약 24시간 동안 저장할 수 있다. 태반은 약 5℃ 내지 약 25℃의 온도에서, 예를 들어, 대략 실온에서 항응혈 용액 속에서 저장할 수 있다. 적합한 항응혈 용액은 당해 분야에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 헤파린 또는 와파린 나트륨 용액을 사용할 수 있다. 한 실시양태에서, 항응혈 용액은 헤파린 용액(1:1000 용액 중 1% w/w)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 태반을 HPC, 예를 들어, 사람 태반 관류액을 수집하기 전에 36시간 이하 동안 저장한다.

한 실시양태에서, 사람 태반 관류액은 적합한 수성 관류 유동액을 사용하여 방혈된 또는 부분적으로 방혈된 태반을 관류시킴으로써 수득된다. 한 실시양태에서, 태반은 전체를 방혈시키지 않고 적합한 수성 관류 유동액을 사용하여 관류시킨다. 관류 용액은 임의의 수성 등장액일 수 있다. 한 실시양태에서, 항응혈제(예를 들어, 헤파린, 와파린 나트륨)를 관류 용액에 용해시킨다. 관류를 위한 이러한 수성 등장액은 당해 분야에 잘 알려져 있고, 예를 들어, 영양 배지, 염 용액, 예를 들어, 인산염 완충 염수 또는 0.9N 염화나트륨 용액을 포함한다. 관류 유동액은, 사용되는 경우, 임의의 잔류 탯줄혈액의 혈전 생성을 방지하기에 충분한 농도의 항응혈제를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 1 내지 100 단위 농도의 헤파린이 사용된다. 다른 실시양태에서, 1 내지 10 단위/mL 농도의 헤파린이 사용된다. 한 실시양태에서, 특정한 산소 유리 라디칼 스캐빈저 중의 아폽토시스 억제제, 예들 들어, 유리 라디칼 스캐빈저가 방혈 동안 또는 방혈 후 즉시 사용될 수 있고, 이후 이들 약제는 태반으로부터 세척되어 제거될 수 있다. 이 실시양태에 따라, 분리된 태반을 아폽토시스를 방지하거나 억제하기 위해 저체온 조건하에서 저장할 수 있다.

특정 실시양태에서, 관류 전에 모든 잔류 탯줄혈액을 제거하기 위해 태만을 관류액으로 씻어내지 않는다. 다른 실시양태에서, 태반 관류액으로부터 수득된 세포를 수집하기 전에, 실질적으로 모든 잔류 탯줄혈액을 제거하기 위해, 예를 들어, 10 내지 100mL의 관류 유동액으로 태반을 씻어낸다. 일반적으로 이러한 세척(flushing)은 태반으로의 중력식 유동을 사용하여 관류 유동액을 제대 동맥 및 제대 정맥 중 하나 또는 둘 다로 통과시킴으로써 수행한다. 태반은, 제대 동맥 및 제대 정맥이 태반의 최고점에 위치하도록 배향될 수 있다(예를 들어, 매달 수 있다). 한 실시양태에서, 제대 동맥 및 제대 정맥은 가요성 커넥터를 통해 관류 유동액의 저장소에 연결된 피펫에 동시에 연결된다. 관류 유동액은 제대 정맥 및 동맥을 통과하고 임신 동안 모체의 자궁에 연결되었던 태반의 표면으로부터 적합한 개방 용기에 수집된다. 관류 유동액은 또한 제대 개구를 통해 도입될 수 있고 모체의 자궁벽과의 공유 영역인 태반벽의 개구 밖으로 유동되거나 스며들 수 있다.

한 실시양태에서, 근위 제대는 관류 동안 클램핑되는데, 예를 들어, 태반 디스크로 삽입된 제대의 4 내지 6인치 이내를 클램핑한다.

한 실시양태에서, 충분한 양의 관류 유동액을 사용하면 필수적으로 모든 잔류 탯줄혈액이 제거될 것이고, 후속적으로 탯줄혈액을 제거한 후 태반에 잔류되는 태반 세포가 수집 또는 회수될 것이다.

특정 실시양태에서, 약 500mL 내지 1.5L, 예를 들어, 750mL 내지 1L의 관류 유동액이 태반을 부분적으로 또는 완전히 방혈시키고 세포, 예를 들어, HPC 또는 총 유핵세포의 초기 군을 회수하는데 적합하나, 관류 유동액 거의를 관찰된 결과에 따라 사용될 수 있다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 사용된 태반 관류액은 제대혈이 제거된 것이 아니다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 사용된 태반 관류액은 제대혈이 제거된 것이다. 다른 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 사용된 태반 관류액은 제대혈이 실질적으로 제거된 것으로, 예를 들어, 상기 태반 관류액은 제대혈을 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만, 0.5% 미만 또는 0.1% 미만 포함한다.

다른 실시양태에서, 관류 용액은 제대 정맥을 통과하고 제대 동맥으로부터 수집되거나, 제대 동맥을 통과하고 제대 정맥으로부터 수집된다. 이러한 방법의 대표적인 비제한적 예를 다음과 같이 수행할 수 있다. 산후 태반을 출산 후 약 48시간 내에 수득한다. 제대를 클램핑하고 클램프 윗부분을 절단하다. 관류 동안 양막이 보유될 수 있거나, 예를 들어, 손가락을 사용한 비절개박리로 융모막으로부터 양막을 분리할 수 있다. 모든 보이는 혈전 및 남은 혈액을, 예를 들어, 멸균 거즈로 세척한 후, 제대 혈관을, 예를 들어, 제대막을 부분적으로 절단하여 제대의 단면을 노출시킴으로써 노출시킨다. 혈관을 확인하고, 예를 들어, 각 혈관의 절단된 말단을 통해 비개방 악구 클램프를 통과시킴으로써 개방한다. 이어서, 예를 들어, 관류 장치에 연결된 플라스틱 튜브와 같은 기구를 각각의 태반 동맥에 삽입한다. 이어서, 멸균 수집 저장소, 예를 들어, 250mL 수집 백과 같은 혈액주머니에 연결된 플라스틱 튜브를 태반 정맥에 삽입한다. 그렇지 않으면, 상기 기구에 연결된 상기 튜브를 태반 정맥에 삽입하고, 수집 저장소(들)로의 튜브를 태반 동맥 중 하나 또는 둘 다에 삽입한다. 이어서, 태반을 일정 용적의 관류 용액, 예를 들어, 약 750mL의 관류 용액으로 관류시킨다. 이어서, 관류액 중의 세포를, 예를 들어, 원심분리로 수집할 수 있다.

다른 특정 실시양태에서, 태반을 멸균 대야에 넣고 인산염 완충 정상 염수 500mL로 세척한다. 이어서, 세척액을 버린다. 이어서, 태반 정맥에 멸균 연결 기구, 예를 들어, 멸균 튜브에 연결된 캐뉼라, 예를 들어, TEFLON^® 또는 플라스틱 캐뉼라를 삽입한다. 멸균 연결 기구는 관류 매니폴드에 연결되어 있다. 이어서, 태반 함유 용기를 덮고 태반을 실온(20 내지 25℃)에서 목적한 시간 동안, 예를 들어, 2 내지 24시간 동안 유지시키고, 특정 실시양태에서는 48시간 이하 동안 유지시킨다. 태반을, 등용적의 관류액을 도입하고 오염 관류액은 제거하거나 수집하면서, 연속 관류시킬 수 있다. 다르게는, 태반을 주기적으로, 예를 들어, 배양 동안 2시간 간격으로; 4, 8, 12 및 24시간 간격으로; 또는 기타 간격으로 일정 용적의 관류액, 예를 들어, 100mL의 관류액(1000단위/L 헤파린 및/또는 EDTA 및/또는 CPDA(크레아틴 포스페이트 덱스트로즈)로 보충되거나 보충되지 않은 멸균 정상 염수)으로 관류시킬 수 있다. 주기적 관류의 경우, 등용적의 관류액이 도입되고 제거되어 항상 안정한 용적의 관류액이 태반을 세척한다.

태반, 예를 들어, 태반의 반대쪽 표면에서 배출된 오염 관류액은 수집되고 가공되어 세포, 예를 들어, HPC를 분리시킨다. 특정 실시양태에서, 태반 세포를 당해 분야의 숙련가에게 알려진 기술, 예를 들어, 밀도 구배 원심분리를 사용하여 오염 관류액으로부터 분리한다. 한 실시양태에서, 태반 관류액으로부터의 HPC 또는 총 유핵 세포를, 예를 들어, 세포 잔해, 혈청 또는 제핵세포로부터의 총 유핵세포를 분리하기 위해 차동 원심분리로 분리한다. 특정 실시양태에서, 태반 세포를, 세포를 오염 잔해 및 혈소판에서 분리하는 원심분리, 예를 들어, 약 5000×g에서 약 15분 동안 실온에서 원심분리하여 오염 관류액으로부터 회수할 수 있다. 세포 펠렛을, 예를 들어, 2U/mL 헤파린 및 2mM EDTA(GibcoBRL, NY)를 함유하는 IMDM 혈청 비함유 배지 속에서 재현탁시킨다. 총 단핵세포 분획을 성분채집술, 예를 들어, LYMPHOPREP™(Nycomed Pharma, Oslo, Norway)와 같은 시판중인 수집 키트를 사용하여 분리할 수 있다. 이어서, 세포를, 예를 들어, 혈구계산기를 사용하여 계수할 수 있다. 생존도는 일반적으로 트립판 블루 배제(trypan blue exclusion)를 사용하여 평가한다.

한 실시양태에서, 분리된 태반을 관류액을 수집하지 않으면서 일정 시간 동안 관류시켜 괸류액이 수집되기 전 2, 4, 6, 8, 10, 12, 20 또는 24시간 또는 수 일 동안 태반이 관류될 수 있도록 한다. 이러한 실시양태에서, 예를 들어, 관류 유동액이 태반으로 도입되고 수집 전 시간 동안 태반 혈관계를 차지할 수 있거나, 순환 관류액의 경우, 관류 유동액이 상기 시간 동안 재순환될 수 있다.

한 실시양태에서, 태반의 관류 및 태반 관류액의 수집은 수집된 유핵세포의 수가 100 세포/mL 미만이 될 때까지 1회 또는 2회 반복된다. 관류액을 수집하고 혈소판, 잔해 및 제핵세포막을 제거하기 위해 광 원심분리시킨다. 이어서, 유핵세포를 Ficoll-Hypaque 밀도 구배 원심분리로 분리한다.

다른 실시양태에서, 태반으로부터 수집된 세포는 차후 사용을 위해 냉동보존한다. 세포, 예를 들어, 줄기세포의 냉동보존법은 당해 분야에 잘 알려져 있고, 예를 들어, 미국 특허 제5,192,553호(Boyse et al., 1993년 3월 9일 허여) 또는 WO 00/73421(Hu et al., 2000년 12월 7일 공개)의 방법을 사용한 냉동보존이 있다.

실시예

1. 실시예 1: 대사장애를 갖는 환자에 있어서 친족 관계가 아닌 제대혈 및 사람 태반 관류액으로부터의 불일치하는 단핵세포의 이식

본 실시예는 대사장애를 갖는 환자에게 친족 관계가 아닌 제대혈()UCB 및 사람 태반 관류액으로부터의 불일치하는 단핵세포를 안전하고 성공적으로 투여함을 설명한다.

환자는 공격적 돌연변이인 부신백색질형성장애증(ALD)을 갖는 11세 남성이었다. 환자는 감소된 독성 컨디셔닝을 -8일경에 받았다. 0일에, 환자는 친족 관계가 아닌 UCB 및 사람 태반 관류액으로부터의 (환자 수령자와 또는 상기 UCB와) 친족 관계가 아니고 불일치하는 단핵세포 1단위를 주입에 의해 이식받았다. 특히, 환자는 단일 UCB 공여자 제품(6/6의 HLA 일치; 대략 3.9×10⁷개의 세포/㎏; 대략 2.8×10⁵개의 CD34+ 세포/㎏) 및 대략 0.6×10⁷개의 세포/㎏의 관류액(대략 0.3×10⁵개의 CD34+ 세포/㎏)으로부터의 총 유핵세포 용량(TNC)을 함께 투여받았다.

이식 후 140일에 1) 환자는, 혈액으로 분석한 바, 99% UCB 이식 공여자 키메라증 및 0% 태반 관류액 세포 키메라증을 갖는 UCB의 완전 생착을 나타냈고; 2) 환자는 GVHD의 어떠한 증거도 보이지 않았으며; 3) 환자는 ALD의 증상인 신경퇴행의 어떠한 징후도 보이지 않았다. 키메라증의 시험은 먼저 이식 후 28일 내지 42일 사이에 수행하였다.

이러한 결과는 비악성 질환을 갖는 아동에 있어서 사람 태반 관류액으로부터의 불일치하는 친족 관계가 아닌 단핵세포의 주입과 함께 단일 UCB 이식이 안전하고 잘 용인됨을 나타낸다. 또한, 비록 최종 분석 시점까지(이식 후 140일) 신경퇴행의 탐지가 이러한 ALD 환자에 있어 예상되더라도, 실제로 신경퇴행은 탐지되지 않았다.

2. 실시예 2: 악성 질환을 갖는 환자에 있어서 친족 관계가 아닌 제대혈 및 사람 태반 관류액으로부터의 불일치하는 단핵세포의 이식(#1)

본 실시예는 악성 질환인 급성 림프모구성 백혈병(ALL)을 갖는 환자에게 친족 관계가 아닌 제대혈(UCB) 및 사람 태반 관류액으로부터의 불일치하고 친족 관계가 아닌 단핵세포를 안전하고 성공적으로 투여함을 설명한다.

환자는 ALL을 갖는 22세 여성이었다. 친족 관계가 아닌 UCB 및 사람 태반 관류액으로부터의 불일치하고 친족 관계가 아닌 단핵세포를 투여하기 전에, 환자에게 미리 화학요법을 수행하였고, 환자는 감소된 독성 컨디셔닝을 -8일경에 받았다. 친족 관계가 아닌 UCB 및 사람 태반 관류액으로부터의 불일치하고 친족 관계가 아닌 단핵세포를 투여받을 때, 환자는 완전 골수억제를 나타냈다. 0일에, 환자는 친족 관계가 아닌 UCB 2단위(두 단위 모두 5/6의 HLA 일치; 한 단위는 대략 3×10⁷개의 세포/㎏(대략 1.9×10⁵개의 CD34+ 세포/㎏)를 함유하고, 다른 단위는 대략 총 2.5×10⁷개의 세포/㎏(대략 1.42×10⁵개의 CD34+ 세포/㎏)를 함유) 및 사람 태반 관류액으로부터의 (환자 수령자 또는 상기 UCB에 대해) 불일치하고 친족 관계가 아닌 유핵세포(대략 0.4×10⁷개의 세포/㎏; 대략 0.4×10⁵개의 CD34+ 세포/㎏의 TNC)를 투여받았다.

UCB 단위 및 관류액 세포 둘 다로부터의 세포의 생착은 23일까지 탐지하였다. 이식 후 70일에, 환자는, 혈액 분석 결과, 65%/34%/1% UCB(단위 #1/단위 #2)/태반 관류액을 갖는 완전 생착을 나타냈다. 추가로, 면역억제 후 환자가 약 1% 면역 시스템을 보유했다는 사실에도 불구하고, 환자는 GVHD를 나타내지 않았다. 최종 평가(이식 후 100일 초과)에서, 환자는 생존하였다.

이러한 결과는 악성 질환을 갖는 환자에 있어서 사람 태반 관류액으로부터의 불일치하고 친족 관계가 아닌 단핵세포의 주입과 함께 2개의 부분적으로 불일치하는 UCB의 이식은 안정하고 잘 용인됨을 나타낸다.

3. 실시예 3: 악성 질환을 갖는 환자에 있어서 친족 관계가 아닌 제대혈 및 사람 태반 관류액으로부터의 불일치하는 단핵세포의 이식(#2)

본 실시예는 악성 질환인 급성 림프모구성 백혈병(ALL)을 갖는 환자에 있어서 불일치하고 친족 관계가 아닌 제대혈(UCB) 및 사람 태반 관류액으로부터의 불일치하고 친족 관계가 아닌 단핵세포의 투여를 평가하기 위함이다.

환자는 CR1(유도 실패)의 ALL을 갖는 17세 여성이었다. 환자는 면역억제 컨디셔닝 또는 감소된 독성 컨디셔닝을 -8일경에 받았다. 0일에, 환자는 친족 관계가 아닌 UCB 2단위(두 단위 모두 4/6의 HLA 일치; 한 단위는 대략 2.7×10⁷개의 세포/㎏(대략 3.6×10⁵개의 CD34+ 세포/㎏)를 함유하고, 다른 단위는 대략 총 2.7×10⁷개의 세포/㎏(대략 2.5×10⁵개의 CD34+ 세포/㎏)를 함유) 및 사람 태반 관류액으로부터의 (환자 수령자 또는 상기 UCB에 대해) 불일치하고 친족 관계가 아닌 유핵세포(대략 0.3×10⁷개의 세포/㎏; 대략 0.2×10⁵개의 CD34+ 세포/㎏의 TNC)를 투여받았다. 생착을 탐지하였고 환자는 어떠한 안전성 이벤트도 나타내지 않았다. 최종 평가(이식 후 60일)에서, 환자는 어떠한 III 또는 IV 등급 GVHD도 나타내지 않았다.

4. 실시예 4: 사람 단핵 태반 관류액 세포와 조합된 친족 관계가 아닌 제대혈및 친족 관계인 제대혈의 이식을 위한 임상적 프로토콜

여기에 나타낸 프로토콜은 단일 암(arm), 비무작위화 파일럿 연구로서, 이의 1차 목적은 줄기세포 이식이 필요한 다양한 악성 또는 비악성 장애를 갖는 하기 그룹 A 내지 D에서의 탯줄혈액과 함께 사람 단핵 태반 관류액 세포의 이식 안정성을 평가하는 것이다. 이 연구의 2차 목적은 줄기세포 생착으로 잠재적으로 치유가능한다양한 악성 또는 비악성 장애를 갖는 대상체에서의 조혈 이식, 공여자 키메라증 및 면역 기능을 평가하는 것이다.

다음 그룹들이 연구에 사용된다:

그룹 A: (3명의 대상체) 환자와 3/6 이상의 HLA가 일치하는 부분적으로 불일치하는 친족 관계의 탯줄혈액 및 친족 관계의 관류액 세포. UCB 및 관류액 세포는 동일한 공여자로부터 수득하고 공여자는 환자와 친족 관계이다.

그룹 B: (12명의 대상체) 환자와 4/6 이상의 HLA가 일치하는 친족 관계가 아닌 탯줄혈액 및 친족 관계가 아닌 관류액 세포. UCB는 친족 관계가 아닌 공여자로부터 수득하고 관류액 세포는 별도의 친족 관계가 아닌 공여자로부터 수득한다.

그룹 C: (3명의 대상체) 환자와 4/6 이상의 HLA가 일치하는 친족 관계가 아닌 탯줄혈액 및 친족 관계의 관류액 세포. UCB 및 관류액 세포는 동일한 공여자로부터 수득하나 공여자는 환자와 친족 관계가 아니다.

그룹 D: (12명의 대상체) 환자 및 서로에 대해 4/6 이상의 HLA가 일치하는 친족 관계가 아닌 탯줄혈액 2단위 및 친족 관계가 아닌 관류액 세포. 각각의 UCB 단위는 환자와 별도의 친족 관계가 아닌, 부분적으로 불일치하는 공여자로부터 수득하고 관류액 세포 공여자는 환자 또는 UCB 공여자 중 한 명과 친족 관계가 아니다.

모든 대상체는, 이식이 지시되는 장애에 의해 서술되는 바와 같이, 완전 면역억제되거나 감소된 독성 이식전 컨디셔닝을 받은 다음, UCB 및 관류액 세포의 주입으로 이식을 받는다. UCB 주입은 표준 절차를 사용하여 투여한다. 4시간의 대기 시간 후, UCB 주입으로부터의 독성이 진행되지 않도록 하기 위해, 1단위의 관류액 세포를 주입한다(이러한 단위는 충분한 수의 세포를 함유하여서 대상체가 2.5×10⁶개 이상의 TNC/㎏ 체중을 투여받도록 해야 한다). 관류액 세포 단위를 해빙시키고 해빙 개시 후 90분 내에 주입한다. 의료 GVHD 예방 표준을 또한 수행한다.

이 연구를 수행하는 동안, 임상적 및 실험실의 모든 유해사례의 발생이 수집될 것인데, 이식 후 처음 100일 동안 그룹 A 내지 D 각각에서의 GVHD의 발생 및 급성 수혈 반응(이식 후 24시간 동안 또는 그 이내에 발생)의 발생 평가에 중점을 둔다. 대상체를 기준선에서, 이식 전 컨디셔닝 기간 동안, 이식 시점에서, 이식 후 6개월 이상 동안 평가한다. 대상체 안전성을 보호하기 위해, 연구에 등록된 임의의 대상체에서의 심각한 유해사례의 하나 이상의 지수의 발현에 의해 일시적 등록 지연이 촉발될 것이다.

포함 기준: 진단과 상관없이 모든 대상체에 대한 주요 포함 기준은 다음을 포함한다: 1) 대상체, 부모 또는 법적 후견인은 사전 동의서를 이해하고 자발적으로 서명해야 함; 2) 대상체는 연령에 맞는 승인서를 이해하고 서명해야 함(제공되는 경우); 3) 사전 동의서에 서명할 때의 연령이 55세 이하여야 함; 4) 연구 방문 스케줄 및 기타 필요사항을 고수할 수 있어야 함; 5) 가임 여성(FCBP)은 예비컨디셔닝 개시 7일 전에 혈청 또는 뇨 임신 테스트가 음성이어야 함; 6) 성적으로 왕성한 FCBP는 연구 치료 동안 적당한 피임법을 사용할 것에 동의해야 함; 7) 3개월을 초과하는 기대수명; 8) a) Lansky 전신활동도 ≥50%(아동) 또는 Karnogsky 전신활동도 ≥70%(성인) 또는 ECOG 전신활동도 0-2(성인), b) 보정된 DLCO ≥예상치의 50%, c) 좌심실 박출률 ≥추정치의 40%, d) 크레아티닌 청소율 또는 추정된 GFR ≥60mL/min/1.73㎡, e) 혈청 빌리루빈 ≤정상치 하한의 1.5배, f) 트랜스아미나제 ≤정상 하한치의 3배, g) 제어되지 않는 감염의 부재 및 h) HIV 음성을 포함한 적합한 종합적 건강 상태. 대상체에 의해 나타나는 질환 또는 장애에 특이적인 추가 포함 기준이 또한 충족될 것이다.

제외 기준: 다음 기준 중 임의의 하나를 충족시킨다면 대상체는 본 연구에 부적격일 것이다: 1) 환자에게 과도한 위험을 부여할 수 있거나 그/그녀의 본 연구 참여에 역효과를 줄 수 있거나 본 연구로부터의 데이터를 해석할 능력이 없음을 입증하는 임의의 의학적 병태, 실험실 이상 또는 정신병; 2) 판코니(Fanconi) 빈혈 환자는 본 연구에 부적격임; 3) 등록 전 6개월 이내의 심근경색; 4) 뉴욕 심장협회(New York Heart Association(NYHA)) 클래스 III 또는 IV 심부전; 5) 조절되지 않는 협심증; 6) 심각한 조절되지 않는 심실빈맥; 7) 급성 허혈 또는 활동적 심장전도계 이상의 심전계 증거; 8) 조절되지 않는 감염; 9) 줄기 세포 이식으로부터의 생존과 맞지 않는 심각한 예상 질환 또는 장기 부전; 10) 임신 또는 수유 여성; 11) 컨디셔닝 요법 개시 30일 전에 다른 시험용 약제를 투여받은 대상체.

UCB 및 관류액 세포 필요조건: 1) 단일의 친족 관계인 탯줄혈액 단위는 해동 전 5/6 및 6/6의 HLA 일치를 위해 3.5×10⁷개 이상의 TNC/㎏ 체중, 및 3/6 및 4/6의 HLA 일치를 위해 5.0×10⁷개 이상의 TNC/㎏ 체중을 함유해야 함(그룹 A); 2) 단일의 친족 관계가 아닌 UCB 단위는 5/6의 HLA 일치 또는 6/6의 HLA 일치를 위해 3.5×10⁷개 이상의 TNC/㎏ 체중, 또는 4/6의 HLA 일치를 위해 5.0×10⁷개 이상의 TNC/㎏ 체중을 함유해야 함(해동 전)(그룹 B); 3) 단일의 친족 관계가 아닌 탯줄혈액 단위는 4/6, 5/6 또는 6/6의 HLA 일치를 위해 해동 전 5.0×10⁷개 이상의 TNC/㎏ 체중을 함유해야 함(그룹 C); 4) 친족 관계가 아닌 탯줄혈액 2단위는 서로 및 수령자와 4/6 이상의 HLA 일치를 위해 두 단위를 합하여 5.0×10⁷개 이상의 TNC/㎏ 체중을 함유해야 함(해동 전)(그룹 D); 5) HPC 단위는 충분한 수의 세포를 함유하여 대상체가 2.5×10⁶개 이상의 TNC/㎏ 체중을 받을 수 있도록 해야 한다.

HLA 타이핑(typing) 및 HLA 일치 등급: 1) 친족 관계가 아닌 탯줄혈액/일치하는 가족 공여자: HLA 타이핑을 클래스 I A 및 B에 대한 혈청 테스트 및 DRB1의 고분해능 DNA 타이핑으로 수행한다; 2) 가족 공여자는 혈청 테스트에 의한 5/6 또는 6/6 HAL A 및 B(클래스 I) 항원 및 DNA 타이핑에 의한 HLA DRB1(클래스 II) 항원이 일치하는 1세대 친족이어야 함; 3) 단일의 친족 관계인 탯줄혈액 단위는 해동 전 5/6 및 6/6의 HLA 일치를 위해 3.5×10⁷개 이상의 TNC/㎏ 체중, 및 3/6 및 4/6의 HLA 일치를 위해 5.0×10⁷개 이상의 TNC/㎏ 체중을 함유해야 함(그룹 A); 4) 단일의 친족 관계가 아닌 UCB 단위는 5/6의 HLA 일치 또는 6/6의 HLA 일치를 위해 3.5×10⁷개 이상의 TNC/㎏ 체중, 또는 4/6의 HLA 일치를 위해 5.0×10⁷개 이상의 TNC/㎏ 체중을 함유해야 함(해동 전)(그룹 B); 5) 단일의 친족 관계가 아닌 탯줄혈액 단위는 4/6, 5/6 또는 6/6의 HLA 일치를 위해 해동 전 5.0×10⁷개 이상의 TNC/㎏ 체중을 함유해야 함(그룹 C); 6) 친족 관계가 아닌 탯줄혈액 2단위는 서로 및 수령자와 4/6 이상의 HLA 일치를 위해 두 단위를 합하여 5.0×10⁷개 이상의 TNC/㎏ 체중을 함유해야 함(해동 전)(그룹 D); 7) 이중의 친족 관계가 아닌 탯줄혈액 이식의 경우, 선택된 첫 번째 단위는 최상의 이용가능한 HLA 일치된 탯줄혈액 단위(4/6 이상의 환자)일 것이고 서로의 단위로 4/6 이상일 것임.

모든 대상체들은 이식 전 컨디셔닝 기간 동안, 이식 시기에, 및 이식 후 6개월까지 철저한 안전성 평가를 받을 것이다. 수행되는 주요 평가는 신체 검사, 혈액학 및 임상적 화학 측정, 골수 천자액, 골수 생검 및 말초혈 분석, 방사선검사 및 특별히 GVHD, 독성 및 감염에 집중된 유해사례의 완전한 모니터링을 포함한다.

호중구 및 혈소판 생착에 대한 혈액학 평가: 온혈구 감별계산을 0일부터 최하점에 도달한 후 3일 동안의 절대 호중구수가 500/㎣를 넘을 때까지 및 최소 7일 동안 혈소판 수혈을 하지 않으면서 혈소판수가 추가의 3일 동안 3회 연속 측정한 바 20,000/㎣ 이상일 때까지 1 내지 3일 간격으로 수행할 수 있다. 호중구 및 혈소판 생착 연구는 CRF의 적절한 페이지에 기록될 것이다. "호중구 생착"은 호중구 최하점 이후 절대 호중구수가 500/㎣를 넘는 3일의 첫째날을 말한다. "혈소판 생착"은 수혈 없이 혈소판수가 20,000/㎣ 이상인 7일의 기간 후, 혈소판수가 20,000/㎣ 이상을 나타내는 연속되는 3일의 첫째날을 말한다.

공여자 키메라증: 말초혈 공여자 카메라증(UCB/및 관류액 세포)(전혈, NK 세포 및 T 세포)의 정량을 7, 14, 30, 60, 100 및 180(±10)일에 평가한다. 또한, 말초혈 공여자 카메라증의 정량을 기준선에서의 공여자 세포(UCB/및 관류액 세포)의 키메라증과 함께 기준선에서 평가한다. 정량화는 짧은 반복 서열 분석을 사용하여 수행한다.

골수 천자액, 골수 생검 및 말초혈 분석: 골수 천자액 및 생검으로 대상체의 질환 상태를 평가하기 위해 근원적 질환에 허용되는 절차에 따라 수행한다. 이러한 분성은 이식후 100±10일 및 180±10일에 수행되는 것으로 예상된다.

등가물:

본 발명은 본원에 기재된 특정 실시양태에 의해 범위가 제한되지 않는다. 사실, 본원에 기재된 것 이외에 본 발명의 다양한 수정이 상기 기재로부터 당해 분야의 숙련가에게는 명백할 것이다. 이러한 수정은 첨부된 특허청구범위의 범위내에 포함된다.

본원에 인용된 모든 참고문헌들은 전문이 본원에 참조로 도입되고 각각의 개별적 출판물, 특허 또는 특허원이 특별히 개별적으로 모든 목적을 위해 그의 전문이 본원에 참조로 도입되는 것으로 나타낸 것과 같이 동일한 정도로 모든 목적을 위해 도입된다.

임의의 출판물의 인용은 출원일 이전의 기재에 대한 것이고, 본 발명이 선행 발명에 의해 이러한 출판물을 앞설 권리가 없음을 인정하는 것으로 이해되어서는 안된다.

Claims

사람 제대혈(UCB) 세포를 대상체에 이식하는 방법으로서,
상기 방법은 UCB 세포를 사람 태반 관류액(perfusate)으로부터의 단핵세포군과 조합하여 투여함을 포함하고, 상기 UCB 세포는 상기 대상체와 친족 관계가 아닌, 이식방법.
사람 제대혈(UCB) 세포를 대상체에 이식하는 방법으로서,
상기 방법은 UCB 세포를 사람 태반 관류액으로부터의 단핵세포군과 조합하여 투여함을 포함하고, 상기 사람 태반 관류액으로부터의 세포는 상기 대상체와 친족관계가 아닌, 이식방법.
사람 제대혈(UCB) 세포를 대상체에 이식하는 방법으로서,
상기 방법은 UCB 세포를 사람 태반 관류액으로부터의 단핵세포군과 조합하여 투여함을 포함하고, 상기 사람 태반 관류액으로부터의 세포는 상기 대상체와 일치하지 않는, 이식방법.
제1항, 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 UCB 세포가 태반 관류액으로부터의상기 단핵세포와 친족 관계가 아닌, 이식방법.
제1항, 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 UCB 세포가 태반 관류액으로부터의상기 단핵세포와 일치하지 않는, 이식방법.
제1항, 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 UCB 세포가 태반 관류액으로부터의상기 단핵세포와 친족 관계가 아니거나 일치하지 않는, 이식방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 UCB 세포가 대상체와 3/6 내지 6/6의 사람 백혈구 항원(HLA)이 일치하는, 이식방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 1단위의 UCB 세포가 투여되는, 이식방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 1단위 초과의 UCB 세포가 투여되는, 이식방법.
제9항에 있어서, 2 내지 6단위의 UCB 세포가 투여되는, 이식방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 UCB 세포가 UCB에 존재하는, 이식방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 태반 관류액으로부터의 상기 단핵세포가 태반 관류액에 존재하는, 이식방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 태반 관류액이 부분적으로 방혈된(exsanguinated) 태반으로부터 수득되는, 이식방법.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 태반 관류액 세포의 2% 이상이 CD34+인. 이식방법.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에서 키메라증(chimerism)을 야기하는, 이식방법.
제15항에 있어서, 키메라증이 UCB 세포 또는 그로부터의 자손을 포함하는, 이식방법.
제15항 또는 제16항에 있어서, 키메라증이 UCB 세포 또는 그로부터의 자손 및 태반 관류액 세포 또는 그로부터의 자손을 포함하는, 이식방법.
제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 1단위 초과의 UCB 세포가 투여되고, 대상체에서 키메라증을 야기하며, 키메라증은 1단위 초과의 UCB 세포로부터의 세포 또는 그로부터의 자손을 포함하는, 이식방법.
제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라증이 태반 관류액 세포 또는 그로부터의 자손을 포함하는, 이식방법.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, UCB 세포의 생착(engraftment)을 야기하는, 이식방법.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 태반 관류액 세포의 생착을 야기하는, 이식방법.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 이식편 대 숙주 질환의 기간 또는 중증도를 감소시키는, 이식방법.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 종양을 갖고, 상기 방법은 이식편 대 종양 반응을 야기하는, 이식방법.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 부신백색질형성장애증, 뮤코다당증, 니이만-픽병(Niemann-Pick disease), 이염색백색질장애(metachromatic leukodystrophy), 울만병(Wolman disease), 크라베병(Krabbe's disease), 고쉐병(Gaucher's disease), 푸코시드축적증 또는 배튼병(Batten disease)과 같은 대사장애의 증상을 이를 필요로 하는 대상체에서 개선시키게 되는, 이식방법.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 골수형성이상증후군, 무거대핵세포혈소판감소증(amegakaryocytic thrombocytopenia), 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 낫적혈구병(sickle cell disease), 베타 탈라세미아(beta thalassemia), 중증 합병성 면역결핍질환, 골수 기능부전, 또는 중증 무형성 빈혈 또는 다이아몬드-블랙판 빈혈(Diamond-Blackfan anemia)과 같은 빈혈과 같은 혈액 장애 또는 혈액암의 증상을 이를 필요로 하는 대상체에서 개선시키게 되는, 이식방법.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 사람 대상체인, 이식방법.
제26항에 있어서, 상기 사람 대상체가 25세 이하인, 이식방법.
제27항에 있어서, 상기 사람 대상체가 영아인, 이식방법.
조혈 세포를 대상체에 이식하는 방법으로서, 조혈 세포를 사람 태반 관류액으로부터의 단핵세포, 예를 들어, 사람 태반 관류액과 조합하여 투여함을 포함하는, 이식방법.
제29항에 있어서, 상기 조혈 세포가 골수 또는 그로부터의 세포, 말초혈 또는 그로부터의 세포, 또는 제대혈 또는 그로부터의 세포인, 이식방법.
대상체에서의 질환 치료방법에 사용하기 위한 조혈 세포로서,
상기 방법은 조혈 세포를 사람 태반 관류액으로부터의 단핵세포와 조합하여 투여함을 포함하고, 상기 질환은 대사장애 또는 이의 증상; 혈액 장애, 혈액암 또는 이의 증상; 이식편 대 숙주 질환; 또는 종양인, 조혈 세포.
제31항에 있어서, 상기 조혈 세포가 골수 또는 그로부터의 세포, 말초혈 또는 그로부터의 세포, 또는 제대혈 또는 그로부터의 세포인, 조혈 세포.
제32항에 있어서, 상기 제대혈 세포가 대상체와 친족 관계가 아니거나, 사람 태반 관류액으로부터의 상기 단핵세포가 대상체와 친족 관계가 아니거나, 사람 태반 관류액으로부터의 상기 단핵세포가 대상체와 일치하지 않는, 조혈 세포.
제33항에 있어서, 상기 방법이 제4항 내지 제28항에 정의된 바와 같은, 조혈 세포