JP2016526900A - 単離された微生物株ラクトバチルス・プランタルムｔａｋ５９ ｎｃｉｍｂ４２１５０およびその使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、飼料中の栄養素の損失を減少させることにおける、飼料の発酵を促進するため、乳酸の濃度を増加させるため、および、ｐＨを低下させるために使用される、単離された微生物ラクトバチルス・プランタムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０提供する。プランタムＴＡＫ５９は飼料中の飼料中のアンモニア窒素および酪酸の濃度を減少させる。サイロ貯蔵での微生物の使用は、飼料中のタンパク質分解性微生物および病原微生物（腸病原体およびクロストリジウム属）の活性を抑制する。ラクトバチルス・プランタムＴＡＫ５９は、容易にサイレージ添加剤として用いることが可能であり、飼料のサイロ貯蔵を中程度に難しくし、および、飼料の保存期間の延長をする。

Description

本発明は、生物工学の分野に属し、飼料製造に適用される。本発明は、発酵の品質、および飼料の品質を増加させるための、微生物学的なサイレージ添加剤および飼料発酵におけるその使用を包含する。

今日の高い乳生産量の高精度な畜産農業において、年間通じて高品質の飼料を確実に動物に摂取させることが極めて重要である。サイレージは、このような飼料であることが証明されている。サイレージは、高含水量の作物の制御された発酵によって生産された材料である（例えば、非特許文献１参照。）。草およびマメ科植物のサイレージ飼草（ｆｏｒａｇｅ）に加えて、穀類、ホールクロップ穀類（トウモロコシなど）、アルコール産業および製糖産業の副産物（すなわち湿潤した蒸留かす（ｄｉｓｔｉｌｌｅｒｓ ｇｒａｉｎ）、醸造かす（ｂｒｅｗｅｒｓ’ ｇｒａｉｎｓ）、パルプ）を発酵させて、飼料を提供することもできる。

サイロ貯蔵は、数々の異なる化学的および微生物学的プロセスならびにそれらの合同作用の複合体である。飼料の天然発酵は制御が難しい。しかしながら、サイロ貯蔵は、酸素を利用しない乳酸発酵と考えられている（例えば、非特許文献２参照。）。これは、嫌気性条件において、微生物（理想的には乳酸菌）が、水溶性炭水化物を有機酸に発酵させることを意味する。好都合な条件下において、この発酵プロセスは乳酸を優勢に産生するため、結果的にサイレージのｐＨは低下し始める。このｐＨ低下は、望ましくない微生物の増殖および作用を阻害するため、飼料が保存される。サイレージのｐＨがｐＨ４に速く低下すればするほど、より速く飼料は安定化し、より多くの栄養素を保存することができる。

サイロ貯蔵の成功または困難さは、サイロ貯蔵中の植物材料の品質、およびサイレージ生産に使用される技術的な方法によって左右される。低い乾物含量および水溶性炭水化物を有する植物材料をサイロ貯蔵することは困難であり、さらに高い緩衝能力を有する植物材料をサイロ貯蔵することも困難である（例えば、非特許文献３参照。）。２００８年４月２５日の欧州連合委員会の規制（ＥＣ）第４２９／２００８号によれば、１．５パーセント未満の水溶性炭水化物（ＷＳＣ）含量を有する飼草をサイロ貯蔵することは難しく、１．５〜３パーセントのＷＳＣを有する飼草をサイロ貯蔵することは、容易から中程度に難しく、材料が３パーセントより高いＷＳＣ含量を有する場合、さらにより容易であると考えられている。これに加えて、気候条件も、サイロ貯蔵およびサイレージの品質に影響を与える。最適には及ばない気候条件の場合、乾物含量およびＷＳＣ含量を増加させ、および、緩衝能力を低下させるために、すなわち植物材料のサイロ貯蔵性（ｅｎｓｉｌａｂｉｌｉｔｙ）を増加させるために、植物材料をしおれさせることは不可能である。また難しいサイロ貯蔵条件は、飼料の腐敗を引き起こす望ましくない微生物（腸病原体、クロストリジウム属、杆菌、菌類、リステリア属）の発達も促進する。残念なことに、サイレージ作物の最適な発達段階中に収穫の気候を選択することができない。サイレージの化学物質含量は、主として、植物の発達段階および植物材料の発酵の品質によって決まる。増殖後期に収穫された植物で作製される栄養価の低いサイレージは、それを餌にする動物の生産性を低下させ、そのうち腐敗した飼料は、動物に供給できなくなる。サイレージの品質の評価において、発酵パラメーターが極めて重要である。サイロ貯蔵の成功を評価するためのパラメーターが多ければ多いほど、飼料品質のより優れた概要が得られる。最も重要な発酵パラメーターは（重要性の順で列挙されていない）、エタノール、揮発性脂肪酸（酢酸、プロピオン酸、酪酸）および乳酸の濃度、ｐＨならびに全窒素中のアンモニア窒素含量である。生成する発酵産物の種類は、サイレージ作物、サイレージ生産に使用される技術的な方法、貯蔵所のサイロ貯蔵材料中の微生物集団、および貯蔵所の気密性によって決まる。

サイロ貯蔵プロセスに良い作用を与えるために、サイレージ添加剤が使用される。サイレージ添加剤は、乳酸発酵を向上させてサイロ貯蔵中のｐＨ低下を促進したり、および／または貯蔵所で植物材料中の望ましくない微生物の作用を阻害したりすることにより、それらによって産生された生成物が傷まないようにする添加剤と理解されている。

最も一般的なサイレージ添加剤は、酵素、糖、酸、塩および細菌の接種材料である。（例えば、非特許文献４参照。）。

ほとんどのサイレージ添加剤は万能ではないが、サイロ貯蔵される作物または問題に特定されている。サイレージ添加剤は、サイロ貯蔵が容易である、中程度に難しい、もしくは難しいサイレージ作物に好適であるか、または飼料の腐敗を引き起こす菌類、クロストリジウム属および他の微生物の影響の阻害に好適である。

サイレージ添加剤を使用する目的は、望ましい発酵を促進して望ましくない微生物の影響を阻害することである。化学添加剤は、サイロ貯蔵作物の酸性度を増加させる酸により発酵を制限するか、または望ましくない微生物の作用を阻害する他の化学物質を含有する。化学的なサイレージ添加剤は、通常、最適には及ばないサイロ貯蔵条件で使用されるが、一方でこれらの条件における生物学的なサイレージ添加剤の良い影響は十分に証明されていない。発酵は、糖、酵素または乳酸菌を含有する生物学的なサイレージ添加剤によって促進／強化される。乳酸菌ベースのサイレージ接種材料を添加することによって、この有益な細菌が植物材料中で優勢になる。したがって乳酸菌の競合力が増加し、発酵プロセスが促進される。乳酸菌によって産生された乳酸は、貯蔵されたサイレージにおける酸性環境および飼料保存の成功を迅速にもたらす。迅速なｐＨ低減は、サイレージ中で望ましくない微生物（タンパク質分解性微生物および病原微生物、例えばクロストリジウム属、杆菌、リステリア属および腸病原体など）の作用を阻害する。結果として、家畜における飼料摂取の低下および健康問題を引き起こす不良な発酵の有害な分解化合物（例えばアンモニアおよび酪酸）の形成が防がれる。酵母によって産生されたプロピオン酸、高含量の酢酸またはエタノールは、サイレージにおいて望ましくない。サイレージの腐敗を引き起こす微生物の生存を防ぐことによって、動物生産に使用できる栄養素を飼料中に保持することができる。乳酸菌は天然の植物ミクロフローラの一部であるため、乳酸菌ベースのサイレージ添加剤は、化学的な添加剤とは異なりそれらは特殊な取り扱いを必要としないため、使用が簡単な天然産物を構成し、腐食もしないし環境を害したりもしないと予想される。上述の欧州委員会の規制において、サイレージ添加剤は、技術的な添加剤として言及されている。

サイレージ発酵の品質を増加させることにおける乳酸菌の使用は、数々の特許出願および特許において記載されてきた。

特許文献１（Ｊ．Ｓｅｔａｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｖａｌｉｏ １９９３）では、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＤＳＭ４９０４（ＡＩＶ７５５）を含有する飼料添加剤が記載されている。

特許文献２（Ｂ．Ｂ．Ｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｄｕｐｈａｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｂ．Ｖ．）では、微生物株ラクトバチルス・プランタルムＣＢＳ３４２．９２およびＣＢＳ３４３．９２が記載されている。これらは、クロストリジウムを低減させる因子、すなわちタンパク質様の因子を提供する。

特許文献３（Ｓ．Ｐ．Ｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔａｌ Ｌｔｄ ２００１）では、酵母およびカビを抑制し、さらに飼料およびサイレージ中に空隙を生じさせる細菌も抑制する、ブーフナー乳酸杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｃｈｎｅｒｉ）（ＮＣＩＭＢ４０７８８）の使用が記載されている。

特許文献４（Ｄ．Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎｕｓ Ｐｌｃ，２００３）では、ラクトバチルス・プランタルムＮＣＩＭＢ４１０２８およびラクトバチルス・パラカゼイ種パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ ｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ）ＮＣＩＭＢ４１０２９（サイロ貯蔵が難しい材料の発酵に使用される）が記載されている。これらの株は、炭水化物が少ないサイロ貯蔵材料中のフルクタン（フルクトースの残基で構成される）の分解を可能にする。

特許文献５（特許文献６として公開）（Ｅ．Ｍ．Ｂｉｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ，２０１０）では、以下：エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）（ＤＳＭ３５３０）、乳酸短桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）（ＤＳＭ１９４５６）、ラクトバチルス・プランタルム（ＤＳＭ１９４５７）、ラクトバチルス・ケフィリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｋｅｆｉｒｉ）（ＤＳＭ１９４５５）、トリコスポロン属新種（ＤＳＭ１４１５３）、トリコスポロン・ムコイデス（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｍｕｃｏｉｄｅｓ）（ＤＳＭ１４１５６）、トリコスポロン・ダルシタム（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｄｕｌｃｉｔｕｍ）（ＤＳＭ１４１６２）およびユーバクテリウム属（ＤＳＭ１１７９８）の少なくとも２種の微生物と、サイレージ中のマイコトキシンを減少させ、さらに動物におけるメタン放出も減少させる、大きい内部表面積を有する無機物質、例えばケイ酸アルミニウムとを含有するサイレージ添加剤が記載されている。

特許文献７（Ｃｈａｎ Ｒ．Ｋ−Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｉｏｎｅｅｒ Ｈｉ−Ｂｒｅｄ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．，２００２）では、同種発酵性乳酸菌ラクトバチルス・プランタルムを、異種発酵性ブーフナー乳酸杆菌または乳酸短桿菌および微生物エンテロコッカス・フェシウムと共に使用することが、サイレージの好気的安定性の増加に関して記載されている。特許文献８（Ｃｈａｒｌｅｙ Ｒ．Ｃ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｌｌｅｍａｎｄ Ａｎｉｍａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａ，２００６）では、サイレージの好気性の腐敗を回避することにおける微生物ラクトバチルス・ディオリボランス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｉｏｌｉｖｏｒａｎｓ）の使用が記載されている。

欧州特許ＥＰ０３６９１９８号明細書 欧州特許出願ＥＰ０５８０２３６号明細書 欧州特許ＥＰ０８８０３２３号明細書 イギリス特許ＧＢ２３５６１２５号明細書 欧州特許出願ＥＰ２３１２９５５号明細書 国際公開第２０１０／０１７５６８号 米国特許ＵＳ６４０３０８４号明細書 国際特許出願国際公開第２００６／００７３９５号

ＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｐ．，Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ，Ａ．Ｒ．，Ｈｅｒｏｎ，Ｓ．Ｊ．Ｅ．１９９１．Ｔｈｅ ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ ｓｉｌａｇｅ．２ｎｄ ｅｄ．Ｃｈａｌｃｏｍｂｅ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｌｏｗ，Ｂｕｃｋｓ ＵＫ，ｐ．３４０ Ｒｏｏｋｅ，Ｊ．，Ａ．ａｎｄ Ｈａｔｆｉｅｌｄ，Ｇ．，Ｄ．，２００３．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｎｓｉｌｉｎｇ．Ｉｎ：Ｓｉｌａｇｅ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｄ．Ｒ．Ｂｕｘｔｏｎ，Ｒ．Ｅ．Ｍｕｃｋ，ａｎｄ Ｊ．Ｈ．Ｈａｒｒｉｓｏｎ，ｅｄｓ．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｇｒｏｎｏｍｙ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡ．ｐｐ．９５−１３９ Ｐａｈｌｏｗ，Ｇ．，Ｒａｍｍｅｒ，Ｃ．，Ｓｌｏｔｔｎｅｒ，Ｄ．，Ｔｕｏｒｉ，Ｍ．Ｅｎｓｉｌｉｎｇ ｏｆ ｌｅｇｕｍｅｓ．Ｉｎ：Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｒ．Ｊ．ａｎｄ Ｐａｕｌ，Ｃ．（ｅｄｓ）：Ｌｅｇｕｍｅｓ Ｓｉｌａｇｅｓ ｆｏｒ Ａｎｉｍａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ−ＬＥＧＳＩＬ．Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，ＦＡＬ，２００２，ｐｐ．２７−３１ Ｋｕｎｇ，Ｌ．，Ｓｔｏｋｅｓ，Ｍ．Ｒ．，Ｌｉｎ，Ｃ．Ｊ．，２００３．Ｓｉｌａｇｅ ａｄｄｉｔｉｖｅｓ．Ｉｎ：Ｓｉｌａｇｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｄ．Ｒ．Ｂｕｘｔｏｎ，Ｒ．Ｅ．Ｍｕｃｋ，ａｎｄ Ｊ．Ｈ．Ｈａｒｒｉｓｏｎ，ｅｄｓ．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｇｒｏｎｏｍｙ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡ．ｐｐ．３０５−３６０ ＥＦＳＡ Ｊｏｕｒｎａｌ ２０１２；１０（６）：２７４０ Ｈｕｔｔ Ｐ，Ｓｈｃｈｅｐｅｔｏｖａ Ｊ，Ｌｏｉｖｕｋｅｎｅ Ｋ，Ｋｕｌｌｉｓａａｒ Ｔ，Ｍｉｋｅｌｓａａｒ Ｍ．Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ ａｎｄ ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ ａｇａｉｎｓｔ ｅｎｔｅｒｏ−ａｎｄ ｕｒｏｐａｔｈｏｇｅｎｓ．Ｊ Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００６；１００（６）：１３２４−３２ ＡＯＡＣ，２００５．Ｏｆｆｉｃｉａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＡＯＡＣ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，１８th ｅｄ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｏｆｆｉｃｉａｌ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ，ＵＳＡ Ｖａｎ Ｓｏｅｓｔ，Ｐ．Ｊ．，Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，Ｊ．Ｂ．，Ｌｅｗｉｓ，Ｂ．Ａ．１９９１．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｄｉｅｔａｒｙ ｆｉｂｅｒ，ｎｅｕｔｒａｌ ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ ｆｉｂｅｒ ａｎｄ ｎｏｎｓｔａｒｃｈ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｎ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ａｎｉｍａｌ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ−Ｊ．Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．７４：３５８３−３５９７

問題は、ほとんどのサイレージ添加剤は、サイロ貯蔵されている作物に特定されているか、または特定の問題に特定されていることである。これは、サイレージ添加剤は、サイロ貯蔵が容易である、中程度に難しい、もしくは難しいのいずれかであるサイレージ作物に好適であるか、またはそれが、酵母、カビもしくは飼料の腐敗を引き起こす可能性がある他の微生物の作用を阻害することを意味する。

本発明によって提供された微生物株は、全ての作物、すなわち、サイロ貯蔵が容易な、中程度に難しい、または難しい作物をサイロ貯蔵し、飼料の腐敗を引き起こす可能性がある微生物の作用を阻害するのに好適である。

本発明は、単離された微生物ラクトバチルス・プランタルム株ＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０、ならびに前記株を含む飼料、飼料添加剤および組成物を開示する。飼料は、発酵した飼料、例えばサイレージであり得る。飼料添加剤は、サイレージ添加剤であり得る。組成物中の他の成分として好適な賦形剤が包含されていてもよい。

本発明の次の目的は、飼料の発酵を促進すること、乳酸の濃度を増加させること、ｐＨを低下させること、ならびに飼料中の栄養素の損失ならびに飼料中のアンモニア窒素および酪酸の濃度を減少させることにおける、その命名された微生物の使用である。ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０は、サイロ貯蔵が容易な、中程度に難しい、または難しい作物のサイロ貯蔵に好適である。ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０は乳酸発酵を向上させ、結果として、産生された乳酸がサイレージのｐＨ低下を促進する。

また本発明は、飼料中のタンパク質分解性微生物および病原微生物の活性を阻害するための前記微生物の使用も開示する。例えば、タンパク質分解性微生物および病原微生物は、腸病原体、クロストリジウム属および酵母を含み得る。前記腸病原体は、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、エルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）、腸炎菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）、ネズミチフス菌（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｃａｓｅｒｏｖａｒ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、ソンネ菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、エンテロバクター・サカザキイ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓａｋａｚａｋｉｉ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）などを含む群から選択される。前述のクロストリジウム属は、クロストリジウム・チロブチリカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｙｒｏｂｕｔｙｒｉｃｕｍ）、酪酸菌（Ｃ．ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ）、スポロゲネス菌（Ｃ．Ｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓ）などであり得る。

抗微生物特性に対する調査に基づいて、ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０は、望ましくない微生物の増殖および作用を阻害する。

ラクトバチルス・プランタルム株ＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を用いた標的化された乳酸発酵による迅速で大規模なｐＨ低下の結果として、酵素および望ましくないタンパク質分解性病原微生物の影響、およびそれらによって産生された分解化合物の産生が阻害される。ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を使用する場合、飼料中のアンモニア窒素および酪酸（サイレージ中のタンパク質分解性微生物によって産生された）の濃度は、対照サイレージまたは化学的なサイレージ添加剤で生産されたサイレージと比較して有意に低い。またラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０は、エタノール（酵母によって産生された）の濃度および酢酸（飼料中の酢酸菌および腸内細菌によって産生された）の濃度も低下させる。

本発明の次の目的は、ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０の接種により、飼料の保存を長くする方法である。家畜のために、栄養価の高い優れた品質の飼料を確保しなければならない。乳生産量が高い多くの国々と同様に、植物生長期間（ｖｅｇｅｔａｔｉｏｎ ｐｅｒｉｏｄ）は１年中続かず、必要な飼料を保存しなければならない。このような保存された飼料が、嫌気性乳酸菌を用いて植物材料を発酵させて生産されたサイレージである。

草およびマメ科植物のサイレージ作物に加えて、穀類、ホールクロップ穀類（トウモロコシなど）、アルコール産業および糖産業の副産物（すなわち湿潤した蒸留かす、醸造かす、パルプ）もサイロ貯蔵される。

サイロ貯蔵しようとする植物材料にラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を接種することによって、より多くの乳酸が産生され、さらに飼料のｐＨが低下することにより発酵が促進される。これは順に、サイレージ中の望ましくない微生物の増殖および作用を阻害し、飼料中の栄養素の損失を減少させると予想される。飼料中の腐敗を引き起こす微生物（タンパク質分解性微生物および病原微生物など）の作用が阻害されれば、上述の方法で発酵する場合、数カ月にわたり嫌気性条件で安定であり保存することができる優れた品質の飼料が保障される。これは、いかに長く飼料を保存できるかということである。

微生物ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０は、発酵した飼料１ｇ当たり１×１０⁵〜１×１０⁶ＣＦＵの比率で飼料に添加される。

Ｌ．プランタルム株ＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を用いた、サイロ貯蔵が容易な飼草の発酵品質の向上を示す図であり、ここでａは、エタノール、ｇ／ｋｇ乾物であり；ｂは、酢酸、ｇ／ｋｇ乾物であり；ｃは、プロピオン酸、ｇ／ｋｇ乾物であり；ｄは、酪酸、ｇ／ｋｇ乾物であり；ｅは、乳酸、ｇ／ｋｇ乾物であり；ｆは、ｐＨであり；ｇは、全窒素中のアンモニア窒素、パーセントである。 Ｌ．プランタルム株ＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を用いた、サイロ貯蔵が中程度に難しい飼草の発酵品質の向上を示す図であり、ここでａは、エタノール、ｇ／ｋｇ乾物であり；ｂは、酢酸、ｇ／ｋｇ乾物であり；ｃは、プロピオン酸、ｇ／ｋｇ乾物であり；ｄは、酪酸、ｇ／ｋｇ乾物であり；ｅは、乳酸、ｇ／ｋｇ乾物であり；ｆは、ｐＨであり；ｇは、全窒素中のアンモニア窒素、パーセントである。 Ｌ．プランタルム株ＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を用いた、サイロ貯蔵が難しい飼草の発酵品質の向上を示す図であり、ここでａは、エタノール、ｇ／ｋｇ乾物であり；ｂは、酢酸、ｇ／ｋｇ乾物であり；ｃは、プロピオン酸、ｇ／ｋｇ乾物であり；ｄは、酪酸、ｇ／ｋｇ乾物であり；ｅは、乳酸、ｇ／ｋｇ乾物であり；ｆは、ｐＨであり；ｇは、全窒素中のアンモニア窒素、パーセントである。

株の説明
本発明の目的である、微生物株ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を、エストニア（ペルヌ県）で、自然にサイロ貯蔵された飼い葉であるマメ科植物の作物（＞７５パーセント）の添加剤を使用しないサイレージ中で単離した。サイレージサンプル中の乳酸杆菌の定量的な含量を決定するために、生理的溶液（０．９パーセントのＮａＣｌ）での１０進希釈法を使用して溶液から懸濁液（濃度を漸減させて）を作製し、Ｒｏｇｏｓａ寒天（ＯＸＯＩＤ、Ｕ．Ｋ．）に植え付け、これを嫌気性環境で、３７℃で４８時間インキュベートした（サーモスタットＩＧ１５０、Ｊｏｕａｎ、Ｆｒａｎｃｅ）。発生したコロニーを記述し、計数し、微生物総数を決定した。微生物の形態を描写するために、グラム染色法を使用して標本を作製し、顕微鏡検査を行った。乳酸桿菌種（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ）に特有なコロニーおよび細胞の形態に基づいて株は単離された。続いて、暫定的および詳細な同定をしたが、これは後述される。

２０１３年５月２９日に、ラクトバチルス・プランタルム株ＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を、ブダペスト条約に基づく「特許手続上の微生物の寄託」に従って、イギリスの国立産業食品および海洋菌保存機関（ＮＣＩＭＢ；Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ，Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｍａｒｉｎｅ Ｂａｃｔｅｒｉａ）にＮＣＩＭＢ４２１５０という番号で寄託した。

ＭＲＳ寒天および培養液の供給（ＯＸＯＩＤ）で増殖させた後、培養物の形態学的な特徴を決定した。ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０は、グラム陽性の桿菌様の胞子を形成しない細菌であり、この桿菌は、厚さおよび長さが中程度の規則的な形状を有し、単独で、または対で存在する。
物理学的生化学的特性

ＭＲＳ培養液（２４〜４８時間）は、ＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０の微生物株を培養するのに好適であり、その後、均質な混濁増殖（ｔｕｒｂｉｄ ｇｒｏｗｔｈ）が起こる。微好気性環境（ＣＯ₂／Ｏ₂／Ｎ₂：１０／５／８５％）におけるＭＲＳ寒天飼料中の３７℃で４８時間の培養後、コロニーは、白色であり、凸型であり、光沢を有しており、整った縁を有し、直径１〜２．５ｍｍである。

この株の最適な増殖温度は３７℃であり、この株はまた、１５℃では複製するが、４５℃では複製しない。最適な増殖環境のｐＨは、６．５である。

ラクトバチルス・プランタルム株ＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０は、カタラーゼおよびオキシダーゼ陰性であり、通性異種発酵性であり、アルギニンを加水分解せず、グルコース発酵でガスを産生しない。

ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０は、ＡＰＩ５０ＣＨＬシステム（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ、Ｆｒａｎｃｅ）キットの試験キットを使用して、生化学活性に基づいて、ラクトバチルス・プランタルムと同定された（基準株の株と一致：優良、ＩＤ％−９９．９、Ｔインデックス−１．０）。

配列決定での同定：ラクトバチルス・プランタルム（基準株との１６Ｓ ｒＲＮＡ類似性：９９％）。

ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０の炭水化物の、ＡＰＩ ＣＨＬ５０に基づく発酵プロファイルは後述される。この株は、Ｌ−アラビノース、リボース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、Ｄ−マンノース、Ｄ−マンニトール、Ｄ−ソルビトール、メチル−αＤ−マンノピラノシド、Ｎ−アセチル−グリコサミン、アミグダリン、アルブチン、エスクリン、サリシン、セロビオース、マルトース、Ｄ−ラクトース、Ｄ−メリビオース、Ｄ−スクロース、Ｄ−トレハロース、Ｄ−メレジトース、Ｄ−ラフィノース、ゲンチオビオース、Ｄ−ツラノース、Ｋ−グルコネートを発酵させる。
抗生物質耐性
方法：ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０の抗生物質に対する感受性を、Ｅ−テスト（ＡＢ Ｂｉｏｄｉｓｋ、Ｓｏｌｎａ）を用いて試験した。欧州食品安全機関（ＥＦＳＡ）の推奨された疫学的なカットオフ値に従って最小阻害濃度を決定した。

特定の抗微生物性化合物のカットオフ値に等しいかまたはそれより低い濃度（Ｓ≦ｘｍｇ／Ｌ）のいずれかでその増殖が阻害される場合、その微生物株は感受性であるとみなされる。

特定の抗微生物性化合物のカットオフ値より高い濃度（Ｒ＞ｘｍｇ／Ｌ）でその増殖が阻害される場合、その微生物株は耐性であるとみなされる。

ラクトバチルス・プランタルム株ＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０は、調査した抗生物質に対して耐性を示さなかった（表１）。
株の機能特性
短鎖脂肪酸のプロファイル
方法：ＭＲＳ寒天上で培養されたラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０の２４時間経過した株を、マクファーランド標準に従って微生物１０⁹個／ｍｌで生理食塩水に懸濁し、０．５ｍｌをＰＹＧ上に植え付け（４．６５ｍｌで）、サーモスタット中、３７℃で２４時間および４８時間、微好気的にインキュベートした（１０％ＣＯ₂）。

短鎖脂肪酸のプロファイルを、ガスクロマトグラフＨＰ６８９０シリーズＧＣシステムによって決定し、キャピラリーカラムＨＰ−ＩＮＮＯＷａｘ（１５ｍ×０．２５ｍｍ；０．１５μｍ）を使用した。カラム温度のプログラムは、６０℃で１分、２０℃／分で１２０℃で１０分、検出器（ＦＩＤ）２５０℃であった（表２）。

植物由来のラクトバチルス属および病原体に対する抗菌活性
病原体に対する抗微生物特性を評価するために、混釈平板技術を使用した（例えば、非特許文献６参照。）。

ミリメートルでの標的微生物の増殖阻害ゾーンを流脈法の手順で測定した。同様に、非特許文献６に従って使用されたサンプルの結果に基づいて相加平均および標準誤差（表３）を計算した。このようにして、株の拮抗活性を以下のように評価した：弱＜２０．９；平均２１．０〜２３．９；強＞２４；嫌気性環境における阻害ゾーン（ｍｍ−ｓ）：弱＜２０．９；平均２１．０〜２２．９；強＞２３。

微好気性環境における阻害ゾーン（ｍｍ−ｓ）：弱＜２０．９；平均２１．０〜２３．９；強＞２４。

嫌気性環境における阻害ゾーン（ｍｍ−ｓ）：弱＜２０．９；平均２１．０〜２２．９；強＞２３。

クロストリジウム属に対する抗菌活性を以下のように決定した。

ブレインハートインフュージョン（ＢＨＩ）培養液中の２４時間経過したラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０培養物から、上清を単離した。クロストリジウム属の懸濁液を、滅菌した（ろ過により）上清またはＢＨＩ培養液に添加した（陽性チェック）。４８時間後にＯＤ_620nmで結果を評価した。以下のように計算した。クロストリジウム属ＣＤの増殖阻害（％）＝１００−（ＯＤ_t×１００／ＯＤ_t）、式中、
ＯＤ_tは、上清添加であり、
ＯＤ_cは、上清非添加である。

ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０によって産生された抗微生物性化合物は、植物由来クロストリジウム属の減少を１９．８１パーセント阻害した。

実施形態の説明

ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を用いた、植物材料であるサイロ貯蔵が容易な飼草の発酵品質の向上
ムラサキツメクサ（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ ｐｒａｔｅｎｓｅ Ｌ．）およびオオアワガエリ（Ｐｈｌｅｕｍ ｐｒａｔｅｎｓｅ Ｌ．）飼草の２５：７５の比率の混合物を用いて試験を行った。サイロ貯蔵材料中の水溶性炭水化物の含量は３．０１パーセントであった。新鮮な飼草を切断し、４８時間でしおれさせた。しおれた飼草を収穫し、細かく切断して、対照サイレージを調製した。対照サイレージは、サイレージ添加剤を用いずに作製された。

ラクトバチルス・プランタルム株ＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を、第２のサイレージに植え付け、第３のサイレージを、以下の内容物：ギ酸４２．５パーセント、ギ酸アンモニウム３０．３パーセント、プロピオン酸１０．０パーセント、安息香酸１．２パーセント、安息香酸エチル１．０パーセントおよび水１５．０パーセントを含む化学的なサイレージ添加剤を用いて調製した。ラクトバチルス・プランタルム株ＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を、サイロ貯蔵された飼草に、サイロ貯蔵された新鮮な植物材料（飼料）１ｇ当たり１．２×１０⁵ＣＦＵの濃度で植え付けた。１００日のサイロ貯蔵後に、試験サイレージを開けた。

一般的に容認された方法（例えば、非特許文献７参照。）に従ってサンプルを分析した。

乾物含量を決定するために、サイレージサンプルを、サーモスタット中、１３０℃で一定重量まで乾燥させた。粗製灰分の含量を決定するために、サイレージサンプルを、マッフル炉中、５５０℃で６時間かけて灰にした。タンパク質含量を、ケルダール法（Ｎ×６．２５）を使用してＫｊｅｌｔｅｃ（商標）２３００分析器で決定した。中性デタージェント繊維（ＮＤＦ）および酸デタージェント繊維（ＡＤＦ）を決定するために、Ｖａｎ Ｓｏｅｓｔ ｅｔ ａｌによって記載されている方法（例えば、非特許文献８参照。）および繊維分析器ＡＮＫＯＭ²²⁰を使用した。サイレージの酸およびエタノール含量を決定するために、ガスクロマトグラフＡｇｉｌｅｎｔ７８９０Ａを使用した。全窒素中のアンモニア窒素含量を、Ｋｊｅｌｔｅｃ（商標）２３００分析器を用いて決定した。サイレージのｐＨを、ｐＨメーターであるＨａｎｎａ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓのｐＨ２１０を用いて決定した。

対照サイレージと比較して、微生物ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０は、サイレージの発酵を向上させた（表４および図１を参照）。ラクトバチルス・プランタルム株ＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０の接種は、乳酸含量を増加させ、ｐＨを４．１に低下させた。したがってサイレージ中の望ましくない微生物の増殖および作用が阻害されたが、これは、エタノール（酵母によって産生された）の含量および酢酸（酢酸菌および腸病原体によって産生された）の含量がより少ないことで示される。またラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を使用して作製されたサイレージは、より低いアンモニア窒素および酪酸含量（タンパク質分解性微生物によって産生された）も有していた。

上述した実施例の容易なサイロ貯蔵条件にもかかわらず、サイレージの発酵品質パラメーター（乳酸菌の天然集団による）は、添加剤ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９を用いたサイレージのものよりも劣っていた。

したがって、ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０は、サイロ貯蔵が容易な作物サイレージの発酵を向上させ、それゆえに飼料の品質を向上させた。より大規模なｐＨ低下は、腐敗を引き起こす望ましくないタンパク質分解性微生物および腸病原体の増殖および作用を阻害し、それゆえに飼料中の栄養素の損失を低下させた。この方法で発酵した飼料において、数カ月にわたり、腐敗を引き起こす微生物の作用は阻害され、ｐＨは低く保たれ、飼料は嫌気条件で保たれる。

ラクトバチルス・プランタルム株ＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を用いた、サイロ貯蔵が中程度に難しい飼草の発酵品質の向上
ヒロハノウシノケグサ（Ｆｅｓｔｕｃａ ｐｒａｔｅｎｓｉｓ）およびオオアワガエリ（Ｐｈｌｅｕｍ ｐｒａｔｅｎｓｅ Ｌ．）飼草の５０：５０の比率の混合物を用いて試験を行った。新鮮な飼草を切断し、４８時間でしおれさせた。しおれた飼草を収穫し、細かく切断して、試験サイレージを調製した。サイロ貯蔵材料中の水溶性炭水化物含量は２．１５パーセントであった。対照サイレージは、サイレージ添加剤を用いずに作製された。ラクトバチルス・プランタルム株ＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を、第２のサイレージに植え付け、第３のサイレージを、以下の内容物：ギ酸７６．０パーセント、ギ酸アンモニウム５．５パーセント、水１８．５パーセントを含む化学的なサイレージ添加剤を用いて調製した。ラクトバチルス・プランタルム株ＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を、サイロ貯蔵された飼草に、新鮮な植物材料１ｇ当たり２．４×１０⁵ＣＦＵの濃度で植え付けた。９０日のサイロ貯蔵後に、試験サイレージを開けた。

サイレージサンプルを、上記の第１の実施例で記載された方法に従って分析した。

ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０は、サイロ貯蔵が中程度に難しい発酵作物からのサイレージの品質を向上させた（表５および図２）。約３６パーセントの乾物含量の場合、ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を用いたところ、ｐＨレベルは３．９であり、一方、サイレージ添加剤を用いないサイレージの対応するパラメーターはｐＨ４．２であった。サイレージのｐＨは乳酸含量と直接関連するため、ラクトバチルス・プランタルム株ＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を用いて調製されたサイレージは、より多くの乳酸産生を示し、さらにより低いｐＨレベルも示した。これは、ラクトバチルス・プランタルム株ＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０の接種は、飼料中の乳酸発酵を促進し、サイレージの望ましくない発酵に伴い出現する可能性がある発酵産物の産生を防ぐことを意味する。より速い発酵中では、栄養素の損失がより少ない。対照サイレージと比較して、ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０の接種は、サイレージ中のエタノール、酢酸、酪酸およびアンモニア窒素含量を減少させた。酪酸含量は５．２倍減少し、アンモニア含量およびエタノール含量はそれぞれ１．５倍および１．８倍減少した。

それゆえに、ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０は、サイロ貯蔵が中程度に難しい作物サイレージの発酵を向上させ、したがって飼料の品質を向上させた。より大規模なｐＨ低減は、腐敗を引き起こす望ましくないタンパク質分解性微生物および腸病原体の増殖および作用を阻害し、それゆえに飼料中の栄養素の損失を減少させた。この方法で発酵した飼料において、数カ月にわたり、腐敗を引き起こす微生物の作用は阻害され、ｐＨは低く安定に保たれ、飼料の品質は嫌気条件で保たれる。

ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を用いた、サイロ貯蔵が難しい飼草の発酵品質の向上
またサイレージ添加剤であるラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０は難しいサイロ貯蔵条件でも機能するが、そのことを、ムラサキツメクサ（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ ｐｒａｔｅｎｓｅ Ｌ．）およびオオアワガエリ（Ｐｈｌｅｕｍ ｐｒａｔｅｎｓｅ Ｌ．）飼草の混合物を使用した試験を行って実証した。それらの対応する比率は、２５：７５であった。新鮮な飼草を収穫し、細かく切断して、試験サイレージを調製した。収穫された材料中の水溶性炭水化物含量は０．９１パーセントであった。サイレージ添加剤を用いない対照サイレージを作製し、ラクトバチルス・プランタルム株ＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を、第２のサイレージに植え付け、第３のサイレージを、以下の内容物：ギ酸４２．５パーセント、ギ酸アンモニウム３０．３パーセント、プロピオン酸１０．０パーセント、安息香酸１．２パーセント、安息香酸エチル１．０パーセント、水１５．０パーセントを含む化学的なサイレージ添加剤を用いて調製した。

ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９株ＮＣＩＭＢ４２１５０を、サイロ貯蔵された作物に、新鮮な材料（飼料）１ｇ当たり１．２×１０⁵ＣＦＵの濃度で植え付けた。１００日のサイロ貯蔵後に、試験サイレージを開けた。

サイレージサンプルを、上記の第１の実施例で記載された方法に従って分析した。

サイロ貯蔵が難しい飼草は、低い乾物および糖含量を特徴とし、さらにサイレージ添加剤を用いずに調製したサイレージは極めて不良な発酵パラメーターを示すという事実も特徴とする（表６、図３）。対照サイレージは、多量の酪酸およびアンモニア窒素を含有しており、これは、発酵中の大規模なタンパク質分解の指標である。対照サイレージにおいて、酪酸および乳酸含量はおよそ同じであり、そのうち前者は高すぎるとみなされ、後者は低すぎるとみなされた。このようなサイレージは、動物に供給することができない。一方で、ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を用いて調製されたサイレージは２倍多くの乳酸を含んでおり、酪酸含量（クロストリジウム属によって産生された）は有意ではなかった。サイロ貯蔵が難しい飼草をサイロ貯蔵する場合、ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０は、サイレージのｐＨを４．４に低下させたが、それに対して対照サイレージのｐＨは５．１であった。同様に、対照サイレージと比較した場合、ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を用いて調製されたサイレージは、アンモニア窒素、プロピオン酸およびエタノールに関してより優れたパラメーターを示した。乳酸菌ＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を植え付けたサイレージは品質に関して一定していたが、それに対して対照サイレージの対応するパラメーターは大きく変動した。対照サイレージとは異なり、ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を用いて調製されたサイレージのｐＨは、発酵中により速く、より大きい程度に減少し、望ましくない微生物の増殖および作用は阻害され、サイレージ中の栄養素の損失は軽減された。

それゆえに、ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０は、サイロ貯蔵が難しい飼草サイレージの発酵を向上させ、それゆえに飼料の品質を向上させた。より大規模なｐＨ低減は、腐敗を引き起こす望ましくないタンパク質分解性微生物および腸病原体の増殖および作用を阻害し、したがって飼料からの栄養素の損失を低下させた。この方法で発酵した飼料において、数カ月にわたり、腐敗を引き起こす微生物の作用は阻害され、ｐＨは低く安定に保たれ、飼料の品質は嫌気条件で保たれる。

全ての３つの実施例において、ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０を用いて調製されたサイレージ中の乳酸およびアンモニア窒素のｐＨおよびパラメーターも、化学的なサイレージ添加剤を用いて調製されたものより優れていた。ここで再度、これは、異なるレベルのサイロ貯蔵の困難さでサイレージ作物をサイロ貯蔵する場合の、ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０の有効性の指標である。

Claims (11)

1. 単離された微生物株ラクトバチルス・プランタルムＴＡＫ ５９ ＮＣＩＭＢ４２１５０。
2. 凍結乾燥形態の請求項１に記載の前記微生物株。
3. 請求項１または２に記載の前記微生物株を含む飼料。
4. 例えば、サイレージといった、発酵飼料の形態である請求項３に記載の飼料。
5. 請求項１に記載の前記微生物株を含む組成物。
6. 飼料添加剤としての請求項１に記載の微生物株の使用。
7. 飼料の発酵における請求項１に記載の微生物株の使用。
8. 飼料の発酵を促進させ、
   飼料中の乳酸の濃度を増加させ、
   ｐＨを低下させて、
   飼料中の栄養素の損失を減少させ、および、飼料中のアンモニア窒素および酪酸の濃度を減少させるための、請求項１に記載の微生物株の使用。
9. 発酵する前記飼料に請求項１の前記微生物株を添加することによって、タンパク質分解性微生物および病原微生物の活性を阻害するための請求項１の微生物株の使用。
10. タンパク質分解性微生物および病原微生物がクロストリジウム属および腸病原体である請求項９に記載の使用。
11. 発酵させるために請求項１の前記微生物が前記飼料に接種／添加される、飼料の保存を長くする方法。

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