JP2016525080A - 関節健康組成物 - Google Patents
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Abstract
可動性及び軟骨を維持し、骨関節炎を防止するための関節健康組成物。組成物の1つはサンシュユ(Fructus corni)を含む。前記組成物は、クズ抽出物、及び/又はタンパク質源、カルシウム源及びビタミンD源をさらに含む。他の組成物はサンシュユ水抽出物及び粉乳を含む。【選択図】なし
Description
本発明は、概して、健康上の利益のある組成物に関連する。特に、本発明は関節の健康の分野に関連する。本発明の主題は、哺乳動物における関節の健康の維持における使用のための、サンシュユ(Fructus corni)を含む組成物である。本発明のさらなる態様は、サンシュユ水抽出物及び粉乳を含む組成物である。
関節疾患は高齢者の障害の最多原因である。関節の健康の損失は個人の肉体的活動を非常に困難とし、肥満のリスクの増加や生活の質の低下の要因となる。関節疾患のある高齢者はしばしば外出ができなくなる。多くの関節疾患は関節の炎症(関節炎)を伴う。骨関節炎(変形性関節症と呼ばれることもある。)は最も一般的な関節疾患であり、40歳代、50歳代の人々にしばしば症状が現れ、80歳までには(必ずしも症状が現れるわけではないが)ほぼ万人に共通のものとなる。骨関節炎は、手、足、背中、尻、及び膝を含む体の大小の関節に影響し得る。骨関節炎は、基本的には日々の関節の摩耗により生じるが、スポーツでのけがなど負傷の結果としても生じ得る。骨関節炎は、他の関節変化とともに関節軟骨の破壊及び損失により特徴付けられる。
関節疾患はヒトだけでなく動物も罹患する。ペットの観点から言えば、骨関節炎は老猫において極めて一般的であり[D.Bennett et al.,J Feline Med.Surg.,14,65〜75(2012)]、また、成犬では、5匹中1匹が骨関節炎に罹患していると推定されている[Veterinary Technician,24,664〜675(2003)]。骨関節炎は、圧痛、炎症及び疼痛だけでなく運動の制限も引き起こす。これらはすべてペットの生活の質に大きな影響を与え、ペットの所有者に心配と苦悩をもたらす。
現在、骨関節炎の薬理学的治療法はなく、一度破壊された軟骨を再生することは非常に難しい。大部分の治療法は、非ステロイド性抗炎症薬(NSAIDs)を用いた疼痛緩和に重点が置かれている。それ故、関節の健康の維持に有効な組成物、例えば、健常な個体における骨関節炎を防止できる又は骨関節炎の発症を遅延させることができる組成物を発見することは有益であろう。
グルコサミンは、主に関節の健康用の栄養補助食品として大変な人気を得ている。動物モデル及びインビトロ実験において、グルコサミンが、軟骨の生成を刺激し、かつ軟骨分解を抑制することが示されている。グルコサミンサルフェートは、下肢の骨関節炎の症状を有意に低減させることができることが報告されており[Rheumatology International,32,2959〜2967(2012)]、欧州特許第1890709号には、チコリ、ニンジン及びキクイモなどの植物からどのようにグルコサミンが生成され得るかが記載されている。しかし、グルコサミンの有効性に関する見解は分かれている。
サンシュユ(Fructus corni)は、主に中国、日本及び朝鮮で生育しているCornus officinalis(山茱萸(Japanese cornelian cherry)として知られているハナミズキの種(species))の果実である。サンシュユは、2000年以上の間、伝統的な漢方薬として広く使用されてきており、血中脂質の低下、食後高血糖の抑制、及び男性性機能の改善などの効果が報告されている。サンシュユは、典型的には、果実の乾燥果肉として生薬で使用されている。果実を沸騰水中に数分間浸漬し、次いで核を除去し、種なし果実を乾燥させると、サンシュユが得られる。サンシュユは、モロニサイド、ロガニンなどのグリコシドを含有する。中国では、サンシュユは商業的に生産され、機能性食品としての使用が許可されている。
国際公開第2005/003145号には、疼痛、炎症、及び自己免疫疾患を治療するために山茱萸(Cornus officinalis)の抽出物を使用することが記載されている。記載されている自己免疫疾患の1つは関節リウマチであり、山茱萸の抽出物は免疫抑制効果を提供する。Guo et al.には、罹患関節のインビトロモデルでのサンシュユの抽出物の効果が記載されている[Guo Lili Zhou Yong and Wang Xudan,Effects of total glycoside from Shanzhuyu(the sarocarp of Cornus officinalis)on chemotaxis of the supernatant of cultured primary synoviocytes of arthritic rats,Journal of Beijing University of Traditional Chinese Medicine,2002(03):30〜2]。山茱萸の抽出物が健常者における関節の健康を維持し得るという報告はない。
関節の健康の維持における使用のための新規の組成物、特に健常な個体における軟骨変性を低減又は防止する組成物を発見する必要性がある。天然供給源由来の組成物及び日常の食事への組み入れに適した組成物をさらに同定することは特に有益であろう。
本発明の目的は、技術水準を改善し、関節の健康の維持のための改善された解決策を提供すること、あるいは少なくとも有用な代替手段を提供することである。本発明の目的は独立請求項の主題により達成される。従属請求項は本発明のアイデアをさらに発展させる。本明細書における先行技術文献への参照は、そのような先行技術が広く知られており又は当分野の常識の一部を形成していることを認めたものとみなされるべきではない。本明細書で使用される場合、「含む」(“comprises”,“comprising”)という単語及びそれに類似する単語は、排他的(exclusive)又は網羅的(exhaustive)な意味で解釈されるべきではない。言い換えれば、それらは「〜を含むが、それらに限定されるものではない」を意味することが意図されている。
第一の態様において、本発明は、哺乳動物における関節の健康の維持における使用のための、サンシュユ(Fructus corni)を含む組成物を提供する。第二の態様において、本発明は、1〜30%のサンシュユ水抽出物及び40〜99%の粉乳を含む組成物に関する。別段の記載がない限り、本明細書のすべてのパーセンテージは重量ベースである。
卵巣摘出された成熟ラットは、健康な哺乳動物で生じる関節劣化のモデルを提供する[Hoegh−Andersen et al.,Arthritis research & therapy 6(2),R169〜180(2004)]。驚くべきことに、本発明者らは、サンシュユが、卵巣摘出された成熟ラットにおける軟骨変性に対してプラスの効果を有することを見出した。サンシュユ水抽出物は、軟骨変性のバイオマーカーであるCTX−II(II型コラーゲンの架橋C−テロペプチド)の濃度を減少させることが判明した。さらに、サンシュユ水抽出物による処置は、卵巣摘出されたラットの血清中の炎症マーカーTNF−α(腫瘍壊死因子α)を減少させることが判明した。これらの知見は、サンシュユは、健常な個体における関節変性に対する防止効果を提供し、かつ抗炎症効果を提供し得ることを示している。それ故、サンシュユを含む組成物は、哺乳動物(例えば健常な哺乳動物)における関節の健康の維持において有効に使用され得る。
図1(Fig.1)は、偽手術群(A)、卵巣摘出群(B)、サンシュユ水抽出物で処置した卵巣摘出群(C)、サンシュユ樹脂エタノール/水抽出物で処置した卵巣摘出群(D)、サンシュユ水抽出物及びクズ水抽出物で処置した卵巣摘出群(E)、及びグルコサミンで処置した卵巣摘出群(F)に関する、6週目(■)及び12週目(□)の血清CTX−II濃度(軟骨変性マーカー)(pg/mL)を示す。*は、卵巣摘出群に対してP<0.01であることを示す。#は、グルコサミン群に対してP<0.01であることを示す。
図2(Fig.2)は、偽手術群(A)、卵巣摘出群(B)、サンシュユ水抽出物で処置した卵巣摘出群(C)、サンシュユ樹脂エタノール/水抽出物で処置した卵巣摘出群(D)、サンシュユ水抽出物及びクズ水抽出物で処置した卵巣摘出群(E)、及びグルコサミンで処置した卵巣摘出群(F)に関する血清TNF−α(pg/mL)を示す。*は、卵巣摘出群に対してP<0.05であることを示す。
本発明は、哺乳動物における関節の健康の維持における使用のための、サンシュユを含む組成物を提供する。健康な関節は、活動的で痛みのない生活を送るために大変重要である。健康な関節がないと、可動性の問題により、鬱や肥満などの他の有害な状態がもたらされ得る。関節の健康の維持とは、例えば、日々の関節の摩耗により経時的に生じる関節変性の防止又は低減であり得る。
骨関節炎(変形性関節症又は変形性関節疾患としても知られる。)は、関節の分解を伴う機械的異常の一群である。いずれの関節も骨関節炎に罹患し得るが、手、及び体重負荷を受ける関節(脊椎、尻、膝など)が最も頻繁に罹患する。肩、肘、足首などの他の関節も罹患する可能性が高い。ヒトでは45歳以降に生じることが多いが、子供から高齢者までのすべての年齢の人にリスクがある。老齢まで生存する哺乳動物の大部分が骨関節炎に罹患している可能性が高い。例えば、骨関節炎はウマ、イヌ、ネコ、及び霊長類において知られている。本発明の組成物は、哺乳動物における関節の健康の維持における使用のためのものであり得、ここで、関節の健康は骨関節炎の防止により維持される。
サンシュユを含む組成物は、哺乳動物の可動性の維持における使用のためのものであり得る。この組成物は関節の健康の維持に有用であり、このことは個体の活動性又は可動性の改善をもたらす。サンシュユを含む組成物をヒト、ペット又はウマに投与すると、それらの生活の質が大いに改善される。ペットの場合、可動性の改善はペットとその飼い主との交流を強化及び改善する。
骨関節炎は、通常、関節内の軟骨の破壊により引き起こされる。サンシュユは、ヒト又は他の動物における軟骨変性を低減する。軟骨とは、骨と骨の間の関節、胸郭、及び椎間板など、ヒト及び他の動物の身体の多くの領域に見られる柔軟な結合組織である。軟骨変性は関節の健康の損失の重大な側面である。例えば、軟骨変性は骨関節炎において生じる。サンシュユを含む組成物は、軟骨の維持における使用のためのものであり得る。
サンシュユは、ヒト又は動物への投与に適した任意の形態で提供され得る。例えば、サンシュユは乾燥粉末又は抽出物として提供され得る。本発明の組成物は水抽出物として提供され得る。サンシュユ水抽出物は、乾燥させたサンシュユを水、例えば沸騰水で抽出することによって得られる。ろ過の後、抽出物は濃縮及び乾燥させて粉末とする。
本発明の組成物は、関節の健康の維持に関連する他の材料、例えば、グルコサミン及び/又はコンドロイチン硫酸をさらに含み得る。本発明の組成物はクズ抽出物をさらに含み得る。クズ(Pueraria lobata)は、中国起源の登攀性つる植物であり、1800年代後半に日本からアメリカ合衆国に持ち込まれたものである。アメリカ合衆国東部エリアの大部分に分布し、アメリカ大陸南部ではごくありふれたものである。クズは、ヒト又は動物への投与に適した任意の形態で提供され得る。クズの根は、関節軟骨の分解を低減することが知られており[国際公開第2011/135011号]、そのため、一緒に摂取すれば、サンシュユを補完し、例えば、より少ない各々の用量で同様の効果を得ることを可能にする。
本発明の組成物は、ヒト又は動物による摂取に適した任意の組成物であり得る。したがって、組成物は、食品、飲料、栄養補助食品、栄養配合物、及びペット食品からなる群から選択され得る。フードサプリメント又はダイエタリーサプリメントとしても知られる栄養補助食品は、食事を補完し、個人の食事において不足している又は十分な量で摂取されない可能性のあるビタミン、ミネラル、繊維、脂肪酸又はアミノ酸などの栄養素を提供することを目的とする調製物である。栄養補助食品は、通常、錠剤の形態で経口的に摂取される。
栄養配合物は、投与される対象者の唯一の栄養供給源として十分な種類と量の多量栄養素(タンパク質、脂肪、及び炭水化物)及び微量栄養素を提供する完全栄養配合物であり得る。栄養配合物は、部分栄養を提供し、対象者の従来の食事を補完するものとしても働き得る。
本発明の組成物は経口的、経腸的又は局所的に投与され得る。大半のヒト及び動物は注射を嫌うため、注射せずに投与できる組成物を有することは有利である。
本発明の組成物はアスリートに投与され得る。トレーニングをし、スポーツの練習やプレイをする、初心者レベルに及ぶアスリートは、より適度なレベルで運動をする個体に比べて、関節の不良な健康状態、例えば骨関節炎を発症する可能性が高い。フットボール、ラグビー、及び陸上競技などの激しいスポーツをすると、関節への負担及び関節の損傷が生じ得る。これらは(場合により後年)軟骨変性をもたらし得る。
本発明の組成物は成体又は高齢個体に投与され得る。関節の健康はしばしば年齢とともに悪化するため、そのことは有利である。本発明に関しては、出身国における平均寿命の半分を超えていれば、好ましくは出身国における平均寿命の3分の2を超えていれば、さらに好ましくは出身国における平均寿命の4分の3を超えていれば、最も好ましくは出身国における平均寿命の5分の4を超えていれば、該対象者を「高齢」とみなすものとする。本発明による使用のための組成物は、40歳以上、例えば50歳以上、さらなる例として60歳以上の成人に投与され得る。
関節の健康の悪化はヒトだけではなく他の動物にも起こるので、本発明の組成物は、ヒト又は動物、例えば、ネコ又はイヌなどのコンパニオンアニマルに投与され得る。
本発明の組成物の効力は用量反応曲線に従う。組成物は、関節の不良な健康状態を発症するリスクを少なくとも部分的に低減するのに十分な量で投与され得る。正確な量は、対象者の健康状態及び体重など、対象者に特異的ないくつかの要因に依存する。当業者はそのような用量を適切に決定できるであろう。しかし、概して、本発明の組成物は、1日当たり体重1kg当たり乾燥ベースで少なくとも10mgのサンシュユ、例えば、1日当たり体重1kg当たり乾燥ベースで少なくとも20mgのサンシュユ、さらなる例として、1日当たり体重1kg当たり乾燥ベースで少なくとも50mgのサンシュユに相当する1日用量で投与され得る。望ましくない副作用を回避するために、用量はある程度低用量に抑えられるべきである。本発明の組成物は、1日当たり体重1kg当たり乾燥ベースで10mg〜500mgのサンシュユに相当する1日用量で投与され得る。
サンシュユからの異なる抽出方法は異なる濃度の有効成分を提供し得るが、用量はモロニサイド(morroniside)含有量に従って調整できる。モロニサイド含有量は、当技術分野で知られている方法により測定できる(例えば、Zhou et al.[Pharmaceutical Care and Research 12(6),pp.441+446+457(2012)])。乾燥サンシュユは、典型的には約10mg/gのモロニサイドを含有する。したがって、本発明の組成物は、1日当たり体重1kg当たり少なくとも0.1mg、0.2mg、又は0.5mgのモロニサイドを含む1日用量で投与され得る。本発明の組成物は、1日当たり体重1kg当たり0.1mg〜5mgのモロニサイドを含む1日用量で投与され得る。
本発明による使用のためのサンシュユを含む組成物はタンパク質源、カルシウム源及びビタミンD源をさらに含み得る。タンパク質源は、粉乳、乳清タンパク質、大豆タンパク質、又はそれらの組み合わせからなる群から選択され得る。タンパク質は筋肉の増強を支援し、カルシウム及びビタミンDは、強く健康な骨の構築及び維持を支援する。健康な筋肉、骨及び関節を有することは良好な可動性をもたらし、好循環として、関節の良好な健康状態の維持は、良好な可動性を有する個体においてより有効なものとなる。それ故、サンシュユ、タンパク質、カルシウム及びビタミンDを含む組成物は、哺乳動物における関節の健康の維持において有益である。
本発明は、1〜30%のサンシュユ水抽出物及び40〜99%の粉乳、例えば、5〜25%のサンシュユ水抽出物及び50〜95%の粉乳、さらなる例として、10〜20%のサンシュユ水抽出物及び60〜90%の粉乳を含む組成物をさらに提供する。サンシュユ水抽出物は、概して、例えば、マルトデキストリンなどの担体とともに噴霧乾燥されて、粉末として製剤化される。しかし、担体の量が変動し得るため、本発明の組成物におけるサンシュユ水抽出物の量は乾燥ベースで与えられ、ともに製剤化されている可能性のある担体を含まない。100gの組成物は10mg〜300mgのモロニサイドを含み得る。乳は、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、又は全脂粉乳であり得る。サンシュユ水抽出物及び粉乳を含む組成物はさらにビタミン及びミネラルを含み得る。例えば、100gの組成物は2〜25μgのビタミンD及び1〜3gのカルシウムを含み得る。ビタミンDはコレカルシフェロールであり得る。カルシウム及びビタミンDは、関節の健康にとって重要な強い骨を促進及び維持するのを支援する。良好な骨の健康状態は良好な関節の健康状態を促進する。例えば、健康な骨を有する高齢個体は依然として活動的であることができ、そのことは関節の健康に資する。ビタミンD、カルシウム及びサンシュユを乳と組み合わせることによって、関節の健康に有益な組成物が提供される。
当業者は、ここで開示される本発明のすべての特徴を自由に組み合わせることができることを理解するであろう。特に、本発明の製品に関して記載された特徴は本発明の方法と組み合わされ得、逆もまた同様である。さらに、本発明の異なる実施形態に関して記載された特徴を組み合わせてもよい。特定の特徴に対して既知の均等物が存在する場合、そのような均等物は、あたかも本明細書で具体的に言及されているかのように組み入れられている。本発明のさらなる利点及び特徴は図及び非限定的な例から明らかである。
実施例1(サンシュユ水抽出物(FCw)の調製):
12kgの乾燥させたサンシュユ(Bozhou Yonggan)を、200L抽出タンク中で144Lの熱水と混合した。混合物を95℃の温度で1時間撹拌し、その後、100メッシュのステンレス篩に通してろ過した。次いで、この抽出の残渣を、95℃で30分間、さらなる60Lの熱水で抽出し、その後、100メッシュのステンレス篩に通してろ過した。2つの抽出物を合わせ、35℃まで冷却し、遠心分離した。得られた清澄な液体を、逆浸透膜を用いて濃縮し、ブリックス値約5.5°Bxの濃縮物を得た。その後、この濃縮物を、80℃で1時間、真空中でさらに濃縮した。得られた濃縮物を6.5kgのデキストリンと混合し、噴霧乾燥した。10.8mg/gのモロニサイド含有量を有する12kgの噴霧乾燥粉末抽出物が得られた。
12kgの乾燥させたサンシュユ(Bozhou Yonggan)を、200L抽出タンク中で144Lの熱水と混合した。混合物を95℃の温度で1時間撹拌し、その後、100メッシュのステンレス篩に通してろ過した。次いで、この抽出の残渣を、95℃で30分間、さらなる60Lの熱水で抽出し、その後、100メッシュのステンレス篩に通してろ過した。2つの抽出物を合わせ、35℃まで冷却し、遠心分離した。得られた清澄な液体を、逆浸透膜を用いて濃縮し、ブリックス値約5.5°Bxの濃縮物を得た。その後、この濃縮物を、80℃で1時間、真空中でさらに濃縮した。得られた濃縮物を6.5kgのデキストリンと混合し、噴霧乾燥した。10.8mg/gのモロニサイド含有量を有する12kgの噴霧乾燥粉末抽出物が得られた。
実施例2(サンシュユ樹脂エタノール/水抽出物(FCr)の調製):
120Lのアンバーライト(商標)XAD1600樹脂(Rohm and Haas)を、1%NaOHに12時間浸漬することによって前処理し、その後、純水を用いて洗浄してpH6.5〜7.5とし、95%エタノール/水中に12時間浸漬し、純水で繰り返し洗浄してエタノールを除去した。50kgの乾燥させたサンシュユ(Bozhou Yonggan)を、3000L抽出タンク中で600Lの熱水と混合した。混合物を95℃の温度で1時間撹拌し、その後、100メッシュのステンレス篩に通してろ過した。次いで、この抽出の残渣を、95℃で30分間、さらなる250Lの熱水で抽出し、その後、100メッシュのステンレス篩に通してろ過した。2つの抽出物を合わせ、35℃まで冷却し、遠心分離した。800Lの清澄な液体を、240L/hの流量で120LのXAD1600樹脂カラムにロードし、その後、300Lの純水で洗い流した。樹脂カラムを、300Lの70%エタノール/水を用いて120L/hの流量で溶出した。エタノール/水画分を回収し、70℃で120分間、真空下で濃縮して、エタノールを再利用した。これにより50.4kgの6.8°Bxの濃縮物を得、それを(担体なしで)噴霧乾燥して、180mg/gのモロニサイド含有量を有する3.15kgの噴霧乾燥粉末抽出物を得た。
120Lのアンバーライト(商標)XAD1600樹脂(Rohm and Haas)を、1%NaOHに12時間浸漬することによって前処理し、その後、純水を用いて洗浄してpH6.5〜7.5とし、95%エタノール/水中に12時間浸漬し、純水で繰り返し洗浄してエタノールを除去した。50kgの乾燥させたサンシュユ(Bozhou Yonggan)を、3000L抽出タンク中で600Lの熱水と混合した。混合物を95℃の温度で1時間撹拌し、その後、100メッシュのステンレス篩に通してろ過した。次いで、この抽出の残渣を、95℃で30分間、さらなる250Lの熱水で抽出し、その後、100メッシュのステンレス篩に通してろ過した。2つの抽出物を合わせ、35℃まで冷却し、遠心分離した。800Lの清澄な液体を、240L/hの流量で120LのXAD1600樹脂カラムにロードし、その後、300Lの純水で洗い流した。樹脂カラムを、300Lの70%エタノール/水を用いて120L/hの流量で溶出した。エタノール/水画分を回収し、70℃で120分間、真空下で濃縮して、エタノールを再利用した。これにより50.4kgの6.8°Bxの濃縮物を得、それを(担体なしで)噴霧乾燥して、180mg/gのモロニサイド含有量を有する3.15kgの噴霧乾燥粉末抽出物を得た。
実施例3(インビボ研究):
卵巣摘出した(OVX)ラットを、閉経後の健常な女性の骨関節炎を模倣するモデルとして使用した。軟骨変性の抑制マーカー、II型コラーゲンの架橋C−テロペプチド(CTX−II)、及び炎症の抑制マーカー、腫瘍壊死因子α(TNF−α)に対するサンシュユの効果を調べた。
卵巣摘出した(OVX)ラットを、閉経後の健常な女性の骨関節炎を模倣するモデルとして使用した。軟骨変性の抑制マーカー、II型コラーゲンの架橋C−テロペプチド(CTX−II)、及び炎症の抑制マーカー、腫瘍壊死因子α(TNF−α)に対するサンシュユの効果を調べた。
生後7か月の雌のSprague−Dawleyラットを、Beijing Weitong Lihua Laboratory Animal Centreより購入した。手術は、Shenyang Medical Collegeの研究チームにより行われた。ラットに、Hypnorm(商標)/Dormicum(商標)(1部のHypnorm(商標)+1部のDormicum(商標)+2部の滅菌水)を0.2mL/100g体重で注射して、麻酔をかけた。麻酔後、動物の背中の毛を剃り、皮膚を消毒した。脊椎上で皮膚を1箇所切開し、両方の卵巣へのアクセスを得た。筋肉を切断してアクセスを得、卵巣の位置を特定して切除した。各側の筋肉を1〜2針縫って塞ぎ、皮膚を3〜4針縫って塞いだ。偽手術については、卵巣が切除されなかったことを除いてOVX手術と同様の手順に従った。ラットには、手術当日及びそれに続く2日間、術後鎮痛法(Rimadyl(商標))が施された。
ラットは、12時間/12時間の明/暗サイクルを有する、温度及び湿度が制御された部屋(温度:22±2℃、湿度:50±20%)に置かれた。ラットには、手術と実験的処置の開始との間に1週間の順化期間を設けた。処置は12週間継続した。動物は、体重をマッチさせて下記の群にランダムに割り当てた。
飼料はAIN−93M飼料であった[P.G.Reeves et al.,Journal of Nutrition 123(11),1939(1993)]。植物抽出物は飼料を介して投与した。クズ水抽出物はHigh Star Ltd.より得た。各試験群の抽出物は、用量及び推定平均飼料摂取量に応じて飼料と均一に混合した。混合後、飼料ペレットを調製した。ラットに与える飼料の量を平均飼料摂取量の90%とし、与えられたすべての飼料をラットが確実に摂取するようにした。グルコサミン(GS)塩酸塩(Regenasure(登録商標)glucosamine,Cargill,US)を抗軟骨変性の陽性対照として使用し、脱イオン飲料水を介して投与した。ラットは2匹ずつケージに入れられた。飼料の量は、各飼料についてラット1匹当たり16g/日(これは、順化期間中のラットの最小平均飼料摂取量である。)とした。すべてのラットは蒸留水に自由にアクセスできた。群Fのラットは、0.5%のグルコサミンを含有する蒸留水に自由にアクセスでき、消費された水の量は各ラットについて記録された。試験飼料による処置を卵巣摘出1週間後に開始し、12週間継続した。余剰ラットには、処置の第1週の間の個体の交換に備えて各群の手術を施した。
1.5mLの血液サンプルを、0週目、6週目及び12週目にすべてのラットから採取した。採取した血液の遠心分離(3000rpm,10分)によって血清を調製した。血清画分を、ラベル付きのエッペンドルフ(商標)チューブに慎重に回収し、後の分析用に−80℃で冷凍保存した。研究の最後に、ラットにイソフルラン吸入により麻酔をかけた後、CO2吸入により安楽死させた。
CTX−IIは、Serum Preclinical Cartilaps ELISA(Nordic Bioscience,Herlev,Denmark)を用いて測定した。アッセイ内及びアッセイ間の変動係数(CVs)はそれぞれ4.6%及び16.2%であった。血清TNFαは、研究の最後に回収された血清についてのみ、Rat TNF−α Platinum ELISA(eBioscience,USA)を用いて測定した。アッセイ内及びアッセイ間の変動係数(CVs)はそれぞれ3.5%及び9.7%であった。
データは平均±標準偏差(SD)として表した。すべての統計解析は、SPSS13.0の統計ソフトウェア(SPSS Inc,Chicago,IL,USA)を用いて行われた。群間の差異を試験するために一元配置分散分析(One−way ANOVA)を使用した。
0週目において、血清中のCTX−II濃度に群間の有意差はなかった。6週目において、血清CTX−II濃度は、偽手術群(A)と比較してOVX群(B)において有意に増加し(P<0.01)、このモデルの成功が示された(図1)。OVX誘導性のCTX−IIの増加は、6週目においてすべての処置群において有意に抑制された(P<0.01)。12週目において、偽手術群とOVX群との間のCTX−IIの差異は小さくなったものの、CTX−IIの抑制は、群D(サンシュユ樹脂エタノール/水抽出物)及び群E(サンシュユ水抽出物+クズ)において依然として観察された。
12週目において、血清TNF−α濃度は、偽手術群(A)と比較してOVX群(B)において有意に増加した(P<0.05)(図2)。サンシュユ水抽出物による処置(C)は、OVXにより誘導されたTNF−αの増加を抑制した(P<0.05)が、これは、陽性対照のグルコサミン群(F)を含む他の処置群では観察されなかった。
サンシュユによる処置は、成熟OVXラットにおいて軟骨変性のマーカーCTX−IIを減少させた。この効果は、サンシュユ水抽出物、サンシュユ樹脂エタノール/水抽出物、及びクズ水抽出物と組み合わされたサンシュユ水抽出物において観察された。効果の大きさは、陽性対照のグルコサミン群と同程度に良好であった。さらに、サンシュユ水抽出物はOVXラットにおける血清中の炎症マーカーTNF−αを減少させたが、この効果はグルコサミンでは観察されなかった。炎症は概して軟骨損傷と一緒に生じ、個体の関節の健康全体を悪化させるので、炎症の低減は追加的な利益となる。これらの知見は、サンシュユが例えば加齢に伴う関節変性に対して防止効果を提供し得ることを示している。このことは、サンシュユを含む組成物が、哺乳動物における関節の健康の維持における使用のためのものであり得ることを示している。
Claims (15)
- 哺乳動物における関節の健康の維持における使用のための、サンシュユ(Fructus corni)を含む組成物。
- 関節の健康は骨関節炎の防止により維持される、請求項1に記載の使用のための組成物。
- 哺乳動物の可動性の維持における使用のための、請求項1又は2に記載の使用のための組成物。
- 軟骨の維持における使用のための、請求項1〜3のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
- サンシュユは水抽出物として提供される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
- クズ抽出物をさらに含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
- 食品、飲料、栄養補助食品、栄養配合物、及びペット食品からなる群から選択される、請求項1〜6のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
- ヒト又は動物に投与される、請求項1〜7のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
- 成体又高齢個体に投与される、請求項1〜8のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
- 40歳以上の成人に投与される、請求項1〜9のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
- アスリートに投与される、請求項1〜10のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
- 1日当たり体重1kg当たり乾燥ベースで少なくとも10mgのサンシュユに相当する1日用量で投与される、請求項1〜11のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
- タンパク質源、カルシウム源及びビタミンD源をさらに含む、請求項1〜12のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
- 1〜30%のサンシュユ水抽出物及び40〜99%の粉乳を含む組成物。
- 100gの組成物が2〜25μgのビタミンD及び1〜3gのカルシウムを含む、請求項14に記載の組成物。
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