JP2016512540A - シクロデキストリンおよび抗体−薬物結合体製剤 - Google Patents

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Abstract

ベンゾジアゼピン抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）およびシクロデキストリンを含む、液体製剤および凍結乾燥製剤両方を含めた、製剤を開示する。また、ベンゾジアゼピン抗体−薬物結合体およびプロセス薬物関連不純物を含む混合物を精製する方法も開示する。本発明者らは、とりわけ、ベンゾジアゼピンＡＤＣおよびベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含む混合物に、接線流ろ過を行う前にシクロデキストリンを添加することによって、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物の効率的な排除が可能になるということを見出した。

Description

本出願は、２０１３年３月１３日に出願された米国仮特許出願第６１／７８０，１８５号および２０１３年３月１４日に出願された米国仮特許出願第６１／７８２，２３１号の優先権を主張し、それぞれは、全ての目的についてその全体が参考として援用される。
背景
抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）は、組織または生体において標的部位へ薬物を送達する効果的な手段を提供することができる。抗体による腫瘍などの標的の認識は、標的ではない組織の毒性のある化学療法剤への曝露を最小にし、「遊離」薬物（すなわち、抗体などの担体に結合していない）の毒性に関連する副作用を限定する。ＡＤＣは、いくつかの技術によって調製することができる。ヒトまたは他の被験体への投与の前に、遊離薬物および他の不純物を取り除くため、結合体は精製される。
ベンゾジアゼピン含有薬物の非常に高い効能のため、ベンゾジアゼピンＡＤＣおよびベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含む混合物からの薬物関連不純物の除去には、高い効果が要求される。本発明は、この要求および他の要求に取り組むものである。
概論
一部において、本発明は、ベンゾジアゼピンＡＤＣおよびベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含む混合物（本明細書においてＡＤＣ混合物ともいう）からのベンゾジアゼピン薬物関連不純物の除去は、ベンゾジアゼピン薬物の特質のために非効率的であるという知見、ならびに混合物へのシクロデキストリンの添加が、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物の効率的な排除を可能にするという発見に基づく。本発明者らは、とりわけ、ベンゾジアゼピンＡＤＣおよびベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含む混合物に、接線流ろ過を行う前にシクロデキストリンを添加することによって、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物の効率的な排除が可能になるということを見出した。
一部において、本発明はまた、シクロデキストリンを含有するベンゾジアゼピンＡＤＣの製剤は、シクロデキストリンを含有していない製剤と比較して優れた安定性を奏するという発見に基づく。改善された安定性は、例えば、以下の１つまたは複数によって実証され得る：（ｉ）凝集の速度および程度の低減、（ｉｉ）酸性種の増大の低減、および（ｉｉｉ）薬物の化学的分解の低減。
概要
本明細書において、シクロデキストリンを用いた接線流ろ過によって、ベンゾジアゼピンＡＤＣおよびベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含む混合物からベンゾジアゼピン薬物関連不純物を除去する方法を提供する。本方法は、ベンゾジアゼピン（ｂｅｎｚｏｄｉｚｅｐｉｎｅ）ＡＤＣおよびベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含む混合物を接線流ろ過に供する工程を含む。ろ過中のシクロデキストリンの使用は、分離プロセスにおいて補助となる。したがって、本明細書において、ベンゾジアゼピンＡＤＣおよびベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含む混合物からベンゾジアゼピン薬物関連不純物を除去する方法であって、ベンゾジアゼピンＡＤＣおよびベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含む混合物を接線流ろ過に供する工程を含み、シクロデキストリンを精製プロセスにおいて補助として用いる方法を提供する。好ましい局面において、シクロデキストリンは、ＡＤＣ混合物中の構成成分の溶解性を実質的に維持しかつ凝集を防止するのに十分な量で添加される。シクロデキストリンは、例えば、接線流ろ過プロセスの開始時に混合物中に存在することができ、あるいはまた、接線流ろ過を始めた後に（好ましくは、不純物の実質的な除去の前に）、混合物に初めて添加することもできる。いくつかの局面において、本方法は、ベンゾジアゼピンＡＤＣおよびベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含む混合物を、混合物中で少なくとも約１％ｗ／ｖのシクロデキストリン、少なくとも約２％ｗ／ｖのシクロデキストリン、または少なくとも約３％ｗ／ｖのシクロデキストリン濃度を維持しながら接線流ろ過に供する工程を含む。本発明はまた、ベンゾジアゼピンＡＤＣ、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物およびシクロデキストリンを含み、シクロデキストリンが少なくとも約１％ｗ／ｖの濃度で存在する混合物を用意する工程、ならびに混合物を混合物中で少なくとも約１％ｗ／ｖのシクロデキストリン濃度を維持しながら接線流ろ過に供する工程を含む方法；ベンゾジアゼピンＡＤＣ、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物およびシクロデキストリンを含み、シクロデキストリンが少なくとも約２％ｗ／ｖの濃度で存在する混合物を用意する工程、ならびに混合物を混合物中で少なくとも約２％ｗ／ｖのシクロデキストリン濃度を維持しながら接線流ろ過に供する工程を含む方法；ならびに、ベンゾジアゼピンＡＤＣ、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物およびシクロデキストリンを含み、シクロデキストリンが少なくとも約３％ｗ／ｖの濃度で存在する混合物を用意する工程、ならびに混合物を混合物中で少なくとも約３％ｗ／ｖのシクロデキストリン濃度を維持しながら接線流ろ過に供する工程を含む方法を提供する。
接線流ろ過は、例えば、定容ダイアフィルトレーションまたは不連続ダイアフィルトレーションであり得る。接線流ろ過装置は、例えば、ポンプ；入口、ろ液出口、被保持物出口を有するろ過ホルダー；約５０Ｋｄまたはそれより小さい孔サイズを有する限外ろ過膜であって、ろ液出口を通ってろ過ホルダーから出る前に全てのろ液が入口に入り限外ろ過膜を通り抜けるように、ろ過ホルダーを上流区画と下流区画とに分ける限外ろ過膜；結合体化反応混合物を保持するためのサンプル貯留槽；ならびにサンプル貯留槽と流体連通しているバッファー貯留槽を含み得る。好ましい局面において、バッファー貯留槽は、少なくとも約１％ｗ／ｖのシクロデキストリン、少なくとも約２％ｗ／ｖのシクロデキストリン、または少なくとも約３％ｗ／ｖのシクロデキストリンを含む。限外ろ過膜は、例えば、約３０Ｋｄの孔サイズを含めた孔サイズ範囲を有し得る。限外ろ過膜は、再生セルロースを含めた多くの材料から作製し得る。
接線流ろ過によって精製される混合物は、本明細書に記載の結合体化反応混合物のいずれかを含めた結合体化反応混合物であり得る。ベンゾジアゼピン薬物関連不純物は、本明細書に記載の不純物のいずれかであり得る。ベンゾジアゼピン薬物関連不純物は、クエンチされていてもクエンチされていなくてもよい。例えば、本方法は、ベンゾジアゼピンＡＤＣを含む結合体化反応混合物を形成するのに十分な条件下で、抗体または抗体リンカーをベンゾジアゼピン薬物リンカーと接触させる工程を含み得る。任意選択で、結合体化反応混合物をクエンチング剤と接触させて、クエンチされた結合体化反応混合物を形成することができる。クエンチされていないまたはクエンチされた結合体化混合物は、本明細書に記載のような接線流ろ過に供される。あるいはまた、本方法は、ベンゾジアゼピンＡＤＣを含む結合体化反応混合物を形成するのに十分な条件下で、抗体または抗体リンカーを遊離薬物と接触させる工程を含むことができる。任意選択で、結合体化反応混合物をクエンチング剤と接触させて、クエンチされた結合体化反応混合物を形成することができる。クエンチされていないまたはクエンチされた結合体混合物は、本明細書に記載のような接線流ろ過に供される。ベンゾジアゼピン薬物関連不純物は、例えば、クエンチされたもしくはクエンチされていない薬物リンカーまたはクエンチされたもしくはクエンチされていない薬物であり得る。本発明の方法は、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物の除去に効果的である。好ましくは、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物は、約１μＭもしくはそれ未満、０．５μＭもしくはそれ未満、０．１μＭもしくはそれ未満、または０．０５μＭもしくはそれ未満のレベルまで低減される。
化学修飾されたベータおよびガンマシクロデキストリンを含めたベータおよびガンマシクロデキストリンは、本発明における使用に特に効果的である。シクロデキストリンは、例えば、ヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンまたはスルホブチルエーテルベータシクロデキストリンであり得る。いくつかの局面において、シクロデキストリンがガンマシクロデキストリンであるとき、シクロデキストリンは、接線流ろ過中に少なくとも約１％ｗ／ｖの濃度に維持され、シクロデキストリンがベータシクロデキストリンであるとき、シクロデキストリンは、接線流ろ過中に少なくとも約２％ｗ／ｖまたは少なくとも約３％ｗ／ｖの濃度に維持される。
また、本明細書においては、ベンゾジアゼピンＡＤＣ、および約３％ｗ／ｖから約３０％ｗ／ｖの濃度、好ましくは、約５％ｗ／ｖもしくは６％ｗ／ｖから約３０％ｗ／ｖ、または約６％ｗ／ｖから約１０％ｗ／ｖの濃度のシクロデキストリンを含む、医薬製剤を提供する。製剤は、水性形態または非水性形態であり得る。製剤は、凍結乾燥用保護剤（好ましくは、スクロースなどの糖）などの追加の添加剤を含むことができる。凍結乾燥用保護剤は、それ自体が作用するのに効果的な任意の濃度、例えば、約４％から約８％（ｗ／ｖ）、好ましくは約６％（ｗ／ｖ）であり得る。製剤のｐＨは、生理学的に適したｐＨである。例示的なｐＨ値は、約６．０から約８．０、または約６．５から７．５、または約７から７．５である。製剤は、バッファー剤を典型的に含む。バッファー剤は、トリス、酢酸塩、ヒスチジン、クエン酸塩、リン酸塩およびコハク酸塩を含めた幅広い種類のバッファー剤から選択することができる。例えば、トリスは、約２０ｍＭの濃度で存在することができる。製剤中のベンゾジアゼピンＡＤＣの濃度は、幅広く変化し得る。好ましい局面において、ＡＤＣは、約０．５ｍｇ／ｍｌから約３０ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌから約１０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌから約１０ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌから約１０ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌから約５ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約３ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。化学修飾されたベータおよびガンマシクロデキストリンを含めたベータおよびガンマシクロデキストリンは、製剤中における使用に特に効果的である。シクロデキストリンは、例えば、ヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンまたはスルホブチルエーテルベータシクロデキストリンであり得る。
本明細書において、ＡＤＣの濃度が約２ｍｇ／ｍｌから約５ｍｇ／ｍｏｌであるＰＢＤ ＡＤＣ；約５％ｗ／ｖから約１０％ｗ／ｖの濃度のヒドロキシプロピルシクロデキストリン；約４％から約８％の濃度の糖；および少なくとも１種のバッファー剤を含み、水溶液であり、少なくとも１種のバッファー剤の濃度が生理学的に適したｐＨ（例えば、約６から約８、より好ましくは、約７から約８、または約７から約７．５）を維持するのに効果的である、医薬製剤を提供する。
本明細書において、ＡＤＣの濃度が約３ｍｇ／ｍｌであり、ヒドロキシプロピルシクロデキストリンが約６％の濃度であり、スクロースが約６％の濃度であり、トリスが約２０ｍＭの濃度であり、ｐＨが約７から約７．５（例えば約７．３）である、ＰＢＤ ＡＤＣを含む医薬製剤を提供する。
本明細書において提供される方法および製剤において、ＡＤＣは、本明細書に記載の式のいずれかを有することができる。ＡＤＣは、例えば、ＰＢＤ ＡＤＣであり得る。例えば、ＡＤＣは、式
Figure 2016512540
（式中、Ａｂはモノクローナル抗体であり、ｐは、抗体当たりの薬物リンカー分子の平均数を表し、約２である）
を有するかまたは薬学的に許容可能なその塩であり得る。他の局面において、ＡＤＣは、インドリノベンゾジアゼピン２量体と結合体化したモノクローナル抗体またはオキサゾリジノベンゾジアゼピン２量体と結合体化したモノクローナル抗体を含み得る。本明細書に記載の方法および製剤において、抗体は、本明細書に記載のヒト化２Ｈ１２または１Ｆ６抗体を含めた任意のモノクローナル抗体を含めた任意の抗体であり得る。薬物リンカーへの抗体の結合体化は、導入されたシステイン残基の硫黄原子を介した結合体化を含めた、当該分野において公知の方法のいずれかによるものであり得る。
また、本明細書において、安定化された凍結乾燥抗体−薬物結合体製剤を調製する方法も提供する。本方法は、本明細書に記載された水性製剤を用意する工程、および水溶液を凍結乾燥して、凍結乾燥抗体−薬物結合体製剤を形成する工程を含み得る。本明細書において、そのようにして調製された安定化された凍結乾燥抗体−薬物結合体製剤もまた提供する。
また、本明細書において、抗体に付いたベンゾジアゼピン（ｂｅｎｚｏｄｉａｐｉｎｅ）薬物リンカーの化学的分解および断片化を防止する方法も提供する。本方法は、本明細書において提供する実施態様のいずれかに記載のように、少なくとも約６％ｗ／ｖのガンマシクロデキストリンまたは化学修飾されたベータシクロデキストリンを用いて、抗体に付いたベンゾジアゼピン薬物リンカーを製剤化する工程を含み得る。
図１は、２５℃にて保存した様々なｈ２Ｈ１２−１製剤中に存在する高分子量種のパーセント（％ＨＭＷ）を示すグラフを提供する。％ＨＭＷは、０、７日目および１４日目の時点で決定する。
図２は、２５℃にて保存した様々なｈ１Ｆ６−１製剤中に存在する高分子量種のパーセント（％ＨＭＷ）を示すグラフを提供する。％ＨＭＷは、０、７日目および１４日目の時点で決定する。
図３は、４０℃にて保存した様々なｈ２Ｈ１２−３製剤中に存在する高分子量種のパーセント（％ＨＭＷ）を示すグラフを提供する。％ＨＭＷは、０、３日目および７日目の時点で決定する。
図４は、４０℃にて保存した様々なｈ１Ｆ６−３製剤中に存在する高分子量種のパーセント（％ＨＭＷ）を示すグラフを提供する。％ＨＭＷは、０、３日目および７日目の時点で決定する。
図５は、４０℃にて保存した様々なｈ２Ｈ１２−２製剤中に存在する高分子量種のパーセント（％ＨＭＷ）を示すグラフを提供する。％ＨＭＷは、０、３日目および７日目の時点で決定する。
図６は、４０℃にて保存した様々なｈ１Ｆ６−２製剤中に存在する高分子量種のパーセント（％ＨＭＷ）を示すグラフを提供する。％ＨＭＷは、０、３日目および７日目の時点で決定する。
図７は、２５℃にて保存した様々なｈ２Ｈ１２−１製剤中に存在する酸性種のパーセントを示すグラフを提供する。酸性種のパーセントは、０、７日目および１４日目の時点で決定する。
図８は、２５℃にて保存した様々なｈ２１Ｆ６−１製剤中に存在する酸性種のパーセントを示すグラフを提供する。酸性種のパーセントは、０、７日目および１４日目の時点で決定する。
図９は、４０℃にて保存した様々なｈ２Ｈ１２−３製剤中に存在する酸性種のパーセントを示すグラフを提供する。酸性種のパーセントは、０、３日目および７日目の時点で決定する。
図１０は、４０℃にて保存した様々なｈ１Ｆ６−３製剤中に存在する酸性種のパーセントを示すグラフを提供する。酸性種のパーセントは、０、３日目および７日目の時点で決定する。
図１１は、４０℃にて保存した様々なｈ２Ｈ１２−２製剤中に存在する酸性種のパーセントを示すグラフを提供する。酸性種のパーセントは、０、３日目および７日目の時点で決定する。
図１２は、４０℃にて保存した様々なｈ２１Ｆ６−２製剤中に存在する酸性種のパーセントを示すグラフを提供する。酸性種のパーセントは、０、３日目および７日目の時点で決定する。
図１３は、２５℃にて保存した様々なｈ１Ｆ６−１製剤中に存在する高分子量種のパーセント（％ＨＭＷ）を示すグラフを提供する。％ＨＭＷは、０および７日目の時点で決定する。
図１４は、ダイアフィルトレーションプロセス中のヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンの濃度を示すグラフを提供する。ダイアフィルトレーションバッファーは、シクロデキストリン（ｃｙｌｏｄｅｘｔｒｉｎ）を３％ｗ／ｖ含有していた。データは、膜がシクロデキストリンを透過させ得ることを示している。
図１５は、１０％ｗ／ｖのシクロデキストリン濃度（ダイヤモンド形）または３％ｗ／ｖのシクロデキストリン濃度（四角形）を維持しながらの、クエンチされた結合体化反応混合物からのクエンチされた薬物リンカーの排除を示すグラフを提供する。
図１６は、３％ｗ／ｖのシクロデキストリン濃度を維持しながらの、クエンチされた結合体化反応混合物からのクエンチされた薬物リンカーの排除を示すグラフを提供する。
図１７は、３％ｗ／ｖのシクロデキストリン濃度を維持しながらの、クエンチされた結合体化反応混合物からのクエンチされた薬物リンカーの排除を示すグラフを提供する。
図１８は、３％ｗ／ｖのシクロデキストリン濃度を維持しながらの、クエンチされた結合体化反応混合物からのクエンチされた薬物リンカーの排除を示すグラフを提供する。
定義
異なって定義されない限り、本明細書で用いられる全ての技術的および科学的用語は、説明される方法および組成物の属する分野の当業者に通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で用いられる場合、以下の用語および句は、異なって特定されない限りそれらに与えられた意味を有する。
本明細書において使用される用語「ヘテロ環」は、少なくとも１つの環における少なくとも１つの環原子が、Ｎ、Ｏ、ＰまたはＳから選択されるヘテロ原子である、３から１４個の環原子（環員ともいう）を有する単環、二環または多環系（ならびに、その中の炭素原子およびヘテロ原子の範囲および特定の数のあらゆる組合せおよび部分的組合せ）をいう。ヘテロ環は、Ｎ、Ｏ、ＰまたはＳから独立して選択される１から４個の環ヘテロ原子を有し得る。ヘテロ環中の１つまたは複数のＮ、ＣまたはＳ原子は、酸化され得る。ヘテロ単環は、３から７環員を好ましくは有し（例えば、２から６個の炭素原子およびＮ、Ｏ、ＰまたはＳから独立して選択される１から３個のヘテロ原子）、ヘテロ二環は、５から１０環員を好ましくは有する（例えば、４から９個の炭素原子およびＮ、Ｏ、ＰまたはＳから独立して選択される１から３個のヘテロ原子）。ヘテロ原子を含む環は、芳香族または非芳香族であり得る。
本明細書において使用される用語「炭素環」は、３から１４個の環原子を有する、飽和または不飽和の非芳香族単環、二環または多環系（ならびに、その中の炭素原子の範囲および特定の数のあらゆる組合せおよび部分的組合せ）であって、環原子の全てが炭素原子であるものをいう。単環炭素環は、好ましくは３から６個の環原子、さらにより好ましくは５または６個の環原子を有する。炭素環は、３から８個の炭素環原子を好ましくは有する。
本明細書において使用される表現「薬学的に許容可能な塩」は、薬学的に許容可能な、化合物の有機または無機塩をいう。化合物は少なくとも１つのアミノ基を含有することができ、したがって、アミノ基と共に酸付加塩を形成することができる。例示的な塩には、限定されるものではないが、硫酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、およびパモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエ酸塩））が含まれる。薬学的に許容可能な塩は、他の分子（例えば、酢酸イオン、コハク酸イオンまたは他の対イオン）の包含を含み得る。対イオンは、親の化合物上の電荷を安定させる任意の有機部分または無機部分であり得る。さらに、薬学的に許容可能な塩は、電荷を帯びた複数の原子をその構造中に有し得る。電荷を帯びた複数の原子が薬学的に許容可能な塩の部分であるような例は、複数の対イオンを有し得る。したがって、薬学的に許容可能な塩は、電荷を帯びた１つもしくは１つより多くの原子および／または１つもしくは１つより多くの対イオンを有し得る。
「ポリペプチド」または「ポリペプチド鎖」は、天然で産生されたか、または合成的に産生されたかに拘わらず、ペプチド結合によって繋がったアミノ酸残基の重合体である。約１０アミノ酸残基より少ないポリペプチドは、通常「ペプチド」と呼ばれる。
「タンパク質」は、１つ以上のポリペプチド鎖を含む高分子である。タンパク質はまた、非ペプチド性の構成要素（例えば、炭水化物基）も含み得る。炭水化物および他の非ペプチド性置換基は、そのタンパク質が産生される細胞によってタンパク質に添加され得、そして細胞のタイプに応じて変化し得る。タンパク質は、本明細書においてそれらのアミノ酸骨格構造の点から定義される；置換基（例えば、炭水化物基）は、一般的には特定されないが、それに拘わらず、存在してよい。
本明細書において、「アミノ末端」および「カルボキシル末端」という用語は、ポリペプチド内の位置を示すために用いられる。文脈が許容する場合、これらの用語は、ポリペプチドの特定の配列または部分を指して、近接または相対位置を示すために用いられる。例えば、ポリペプチド内のリファレンス配列のカルボキシル末端に位置する特定の配列は、リファレンス配列のカルボキシル末端に近接して存在するが、必ずしも完全長ポリペプチドのカルボキシル末端になくてもよい。
本明細書において、「抗体」という用語は、抗原の存在への応答において身体によって産生され、抗原に結合する免疫グロブリンタンパク質、ならびにその抗原結合フラグメントおよび操作された改変体を示すために用いられる。したがって、「抗体」という用語は、例えば、全長の免疫グロブリン重鎖および軽鎖を含むインタクトなモノクローナル抗体（例えば、ハイブリドーマ技術を用いて産生された抗体）および抗原結合抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）２およびＦａｂフラグメント）を含む。遺伝的に操作されたインタクトな抗体およびフラグメント、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、一本鎖Ｆｖフラグメント、一本鎖抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、リニア抗体、多価もしくは多重特異性（例えば、二重特異性）ハイブリッド抗体等もまた含まれる。したがって、「抗体」という用語は、抗体の抗原結合部位を含み、その抗原に対して特異的に結合することのできる任意のタンパク質を含むように拡張的に用いられる。
「遺伝的に操作された抗体」という用語は、アミノ酸配列が天然の抗体のアミノ酸配列から変化している抗体を意味する。抗体の生成における組み換えＤＮＡ技術の妥当性により、天然の抗体に見出されるアミノ酸の配列に制限される必要はない；抗体は所望の特性を得るために再設計され得る。可能なバリエーションは、多数であり、ただ１つもしくは数アミノ酸の変化から、例えば、可変領域もしくは定常領域の完全な再設計までの範囲におよぶ。定常領域の変化は、一般的に、例えば、補体の固定、細胞との相互作用、および他のエフェクター機能といった特性を改善または変化させるために行われる。典型的には、可変領域の変化は、抗原結合の特性を改善するため、可変領域の安定性を改善するため、または免疫原性のリスクを低減するために行われる。
「抗体の抗原結合部位」は、その抗原と結合するのに十分な抗体の部分である。そのような領域の最小限は、典型的には、可変領域またはその遺伝的に操作された改変体である。単一ドメインの結合部位は、ラクダ抗体から生成することができ（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ａｎｄ Ｌａｕｗｅｒｅｙｓ，Ｊ． Ｍｏｌ． Ｒｅｃｏｇ． １２：１３１−１４０，１９９９；Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ． １９：９２１−９３０，２０００を参照）、または、単一ドメイン抗体（「ｄＡｂ」）を産生する他の生物種のＶＨドメインから生成することができる（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６，１９８９；Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．の米国特許第６，２４８，５１６号を参照）。特定のバリエーションでは、抗原結合部位は、天然に、または非天然に（例えば、変異誘発され）存在する重鎖可変領域または軽鎖可変領域あるいはその組み合わせの、２つのみの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有するポリペプチド領域である（例えば、Ｐｅｓｓｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：３６７−３６９，１９９３；Ｑｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２５：９２１−９２９，２００７を参照）。より一般的には、抗体の抗原結合部位は、共通のエピトープに結合する重鎖可変（ＶＨ）ドメインおよび軽鎖可変（ＶＬ）ドメインの両方を含む。本発明に関して言えば、抗体は、抗原結合部位に加えて１つ以上の構成要素（例えば、抗体の第二の抗原結合部位（同一もしくは異なるエピトープに、または同一もしくは異なる抗原に結合し得る）、ペプチドリンカー、免疫グロブリン定常領域、免疫グロブリンヒンジ、両親媒性ヘリックス（Ｐａｃｋ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍ． ３１：１５７９−１５８４，１９９２を参照）、非ペプチドリンカー、オリゴヌクレオチド（Ｃｈａｕｄｒｉ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４５０：２３−２６，１９９９を参照）、細胞増殖抑制薬物もしくは細胞傷害性薬物等）を含み得、そして、単量体または多量体タンパク質であり得る。抗体の抗原結合部位を含む分子の例は、当該分野で公知であり、例えば、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）ｃ、ダイアボディ、ｄＡｂ、ミニボディ、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ融合物、二重特異性（ｓｃＦｖ）４−ＩｇＧ、および二重特異性（ｓｃＦｖ）２−Ｆａｂが挙げられる。（例えば、Ｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５６：３０５５−３０６１，１９９６；Ａｔｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３３：１３０１−１３１２，１９９６；Ｃａｒｔｅｒ ａｎｄ Ｍｅｒｃｈａｎｔ，Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ８：４４９−４５４，１９９７；Ｚｕｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １３：３６１−３６７，２０００；およびＬｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ２６７：２１３−２２６，２００２．を参照。）
本明細書で用いられる場合、「免疫グロブリン」という用語は、実質的に免疫グロブリン遺伝子にコードされた１つ以上のポリペプチドからなるタンパク質をいう。免疫グロブリンの１つの形は、脊椎動物における天然（ｎａｔｉｖｅ）の（すなわち、天然（ｎａｔｕｒａｌ）の）抗体の基本構造単位を構成する。この形は、４量体であり、免疫グロブリン鎖の２つの同一のペアからなり、それぞれのペアは１つの軽鎖と１つの重鎖を有する。それぞれのペアにおいて、軽鎖可変領域および重鎖可変領域（ＶＬおよびＶＨ）は、共に抗原への結合の主な要因であって、そして、定常領域は抗体エフェクター機能の主な要因である。免疫グロブリンタンパク質の５つのクラス（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ）が、高等脊椎動物において同定されている。ＩｇＧは、主要なクラスを含む；ＩｇＧは、通常、血漿中に見出される２番目に豊富なタンパク質として存在する。ヒトにおいて、ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４という４つのサブクラスから構成される。ＩｇＧクラスの重鎖定常領域は、ギリシャ記号γを用いて同定される。例えば、ＩｇＧ１サブクラスの免疫グロブリンは、γ１重鎖定常領域を含む。それぞれの免疫グロブリン重鎖は、生物種における与えられたサブクラスについて本質的に不変な定常領域タンパク質ドメイン（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３；ＩｇＧ３はＣＨ４ドメインもまた含む）から構成される定常領域を有する。ヒトおよび非ヒト免疫グロブリン鎖をコードするＤＮＡ配列は当該分野で公知である。（例えば、Ｅｌｌｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＤＮＡ １：１１−１８，１９８１；Ｅｌｌｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １０：４０７１−４０７９，１９８２；Ｋｅｎｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７９：６６６１−６６６５，１９８２；Ｓｅｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １１：７１９−７２６，１９８３；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２７，１９８８；Ａｍｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ８：２０５５−２０６５，１９８０；Ｒｕｓｃｏｎｉ ａｎｄ Ｋｏｈｌｅｒ， Ｎａｔｕｒｅ ３１４：３３０−３３４，１９８５；Ｂｏｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １２：３７９１−３８０６，１９８４；Ｂｏｔｈｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２９８：３８０−３８２，１９８２；ｖａｎ ｄｅｒ Ｌｏｏ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ４２：３３３−３４１，１９９５；Ｋａｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｍｏｌ． Ｅｖｏｌ． ２２：１９５−２０８，１９８５；Ｋｉｎｄｓｖｏｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，ＤＮＡ １：３３５−３４３，１９８２；Ｂｒｅｉｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １８：１６５−１７４，１９８２；Ｋｏｎｄｏ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２３：２４５−２４９，１９９３；およびＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｊ００２２８を参照。）免疫グロブリンの構造および機能のレビューについては、Ｐｕｔｎａｍ，Ｔｈｅ Ｐｌａｓｍａ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｖｏｌ Ｖ， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．，４９−１４０，１９８７；およびＰａｄｌａｎ，Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ３１：１６９−２１７，１９９４を参照。「免疫グロブリン」という用語は、本明細書においてその一般的な意味で用いられ、文脈に依存して、インタクトの抗体、その構成要素の鎖、または鎖のフラグメントを示す。
全長免疫グロブリン「軽鎖」（約２５Ｋｄまたは２１４アミノ酸）は、アミノ末端の可変領域遺伝子（約１１０アミノ酸をコードする）によって、およびカルボキシル末端のカッパまたはラムダ定常領域遺伝子によってコードされる。全長免疫グロブリン重鎖（約５０Ｋｄまたは４４６アミノ酸）は、可変領域遺伝子（約１１６アミノ酸をコードする）およびガンマ、ミュー、アルファ、デルタもしくはイプシロン定常領域遺伝子（約３３０アミノ酸をコードする）によってコードされ、後者は、抗体のアイソタイプを、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥとして定義する。軽鎖および重鎖内において、可変領域および定常領域は約１２アミノ酸以上の「Ｊ」領域によって連結され、重鎖はまた約１０アミノ酸以上（１０ ｍｏｒｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ）の「Ｄ」領域も含む。（一般的には、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ，ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ， Ｎ．Ｙ．，第２版 １９８９），Ｃｈ．７を参照）。
免疫グロブリンの軽鎖可変領域または重鎖可変領域（本明細書においてそれぞれ「軽鎖可変ドメイン」（「ＶＬドメイン」）または「重鎖可変ドメイン」（「ＶＨドメイン」）とも呼ばれる）は、３つの超可変性領域（「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」とも呼ばれる）によって分断された「フレームワーク」領域から構成される。フレームワーク領域は、抗原のエピトープへの特異的結合のためにＣＤＲを整列させるように働く。したがって、「超可変領域」または「ＣＤＲ」という用語は、抗原結合の主な要因である抗体のアミノ酸残基をいう。アミノ末端からカルボキシル末端に、ＶＬドメインおよびＶＨドメインの両方は、以下のフレームワーク領域（ＦＲ）およびＣＤＲ領域を含む：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。それぞれのドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９８７および１９９１）、またはＣｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ，Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１−９１７，１９８７；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８−８８３，１９８９の定義に従う。Ｋａｂａｔはまた、異なる重鎖の間または異なる軽鎖の間の対応する残基が同一の数字を割り当てられる、広く用いられるナンバリングの規定（Ｋａｂａｔナンバリング）を提供する。ＶＬドメインのＣＤＲ１、２および３は、それぞれ本明細書において、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３とも呼ばれる；ＶＨドメインのＣＤＲ１、２および３は、それぞれ本明細書において、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３とも呼ばれる。
文脈が異なる意味を要求しない限り、本明細書で用いられる「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術によって産生された抗体のみに限定されない。「モノクローナル抗体」という用語は、それが産生される方法をいうのではなく、単一のクローンに由来する抗体をいい、単一のクローンとしては、任意の真核性、原核性、またはファージクローンが挙げられる。
用語「キメラ抗体」は、第一の種に由来する可変ドメインおよび第二の種に由来する定常領域を有する抗体をいう。キメラ免疫グロブリンまたは抗体は、例えば遺伝子工学によって、異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子セグメントから構築され得る。用語「ヒト化抗体」は、下に定義するように、キメラ抗体を包含することを意図していない。ヒト化抗体は、それらの構築においてキメラである（すなわち、１つ超のタンパク質種からの領域を含む）が、本明細書において定義するように、キメラ免疫グロブリンまたは抗体においては認められない追加的な特徴（すなわち、ドナーＣＤＲ残部およびアクセプターフレームワーク残部を含む可変領域）を含む。
「ヒト化ＶＨドメイン」または「ヒト化ＶＬドメイン」という用語は、非ヒトドナー免疫グロブリン（例えば、マウスまたはラット）に全体的または実質的に由来するＣＤＲの一部または全部、ならびにヒト免疫グロブリン配列に全体的または実質的に由来する可変領域フレームワーク配列を含む免疫グロブリンのＶＨドメインまたはＶＬドメインをいう。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンは「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは、「アクセプター」と呼ばれる。いくつかの例では、ヒト化抗体は、適切な結合特性を促進するためにヒト可変ドメインフレームワーク領域内に非ヒト残基を保持し得る（例えば、抗体がヒト化される場合に、結合アフィニティを保存するために、フレームワーク内の変異が必要とされ得る）。
「ヒト化抗体」は、ヒト化ＶＨドメインおよびヒト化ＶＬドメインの１つまたは両方を含む抗体である。免疫グロブリン定常領域が存在する必要はないが、それがある場合は、ヒト免疫グロブリン定常領域に全体的または実質的に由来する。
ヒト化抗体内のＣＤＲは、それぞれのＣＤＲの間で少なくとも６０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％の対応する残基（Ｋａｂａｔによって定義されるように）が同一である場合、非ヒト抗体中の対応するＣＤＲに「実質的に由来」するという。ＣＤＲが非ヒト免疫グロブリンに実質的に由来するヒト化ＶＨドメインまたはヒト化ＶＬドメインの特定のバリエーションでは、ヒト化ＶＨドメインまたはヒト化ＶＬドメインのＣＤＲは、６以下（例えば、５以下、４以下、３以下、２以下、または１以下）のアミノ酸置換を、対応する非ヒトＶＨまたはＶＬのＣＤＲに対する全ての３つのＣＤＲにわたって有する。抗体のＶＨドメインまたはＶＬドメインの可変領域フレームワーク配列、あるいは、存在するならば免疫グロブリン定常領域の配列は、Ｋａｂａｔによって定義される対応する残基の少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％が同一である場合、ヒトＶＨフレームワーク配列またはヒトＶＬフレームワーク配列あるいはヒト定常領域に、それぞれ「実質的に由来」する。したがって、おそらくＣＤＲを除き、ヒト化抗体の全ての部分は、天然のヒト免疫グロブリン配列の対応する部分に全体的または実質的に由来する。
抗体のその標的抗原への特異的結合は、少なくとも１０６、１０７、１０８、１０９、または１０１０Ｍ−１のアフィニティを意味する。特異的結合は、少なくとも１つの無関係な標的に対して起こる非特異的結合から、規模において検出可能なほど高く、区別可能である。特異的結合は、特定の官能基の間の結合または特定の空間的適合（例えば、鍵と鍵穴型）の形成の結果であり得るが、それに対して、非特異的結合は、通常ファンデルワールス力の結果である。しかしながら、特異的結合は、モノクローナル抗体がただ１つの標的に結合していることを必ずしも示唆するものではない。
本明細書で説明されるタンパク質に関して、配列番号で特定されるアミノ酸残基と対応するアミノ酸残基への参照は、そのような残基の翻訳後改変体を含む。
本明細書に記載の抗体−薬物結合体製剤の文脈における用語「安定化された」は、中にある抗体−薬物結合体が、保存時にその物理的および化学的な同一性および完全性を本質的に保持する製剤をいう。タンパク質の安定性を測定する様々な分析技術が、当該分野において利用可能である（例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、２４７〜３０１頁（Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．、ニューヨーク、ニューヨーク州、１９９１年刊行）、およびＪｏｎｅｓ、Ａｄｖ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．、１０巻：２９〜９０頁、１９９３年参照）。タンパク質の安定性を測定する例示的な技術については、本明細書にも記載する（後の実施例を参照）。安定性は、選択された温度にて選択された時間にわたって測定され得る。迅速な試験のため、製剤を、より高いまたは「促進された」温度、例えば４０℃に、１週間から１カ月またはそれ超保ち、その時点で安定性を測定してもよい。例示的な実施態様において、製剤は、構成成分の抗体タンパク質の副生物、例えば、高分子量の凝集生成物、低分子量の分解もしくは断片化生成物、酸性種、化学的分解物またはそれらの混合物の形成に対処することが難しい。用語「安定性」は、抗体などの分子種が、その元来の化学的同一性、例えば、一次、二次および／または三次構造を保持する時間の長さをいう。
用語「副生物」には、所与の製剤中で治療のための抗体−薬物結合体の割合を減じるまたは少なくする、望まれない生成物が含まれる。典型的な副生物には、抗体−薬物結合体の凝集体、抗体−薬物結合体の断片（例えば、アミド分解もしくは加水分解による抗体タンパク質の分解または薬物リンカーの化学的分解および断片化によって生成するもの）、抗体−薬物結合体の酸性改変体、またはそれらの混合物が含まれる。
抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）は、細胞傷害性薬物に典型的にはリンカーを介して結合体化した抗体である。リンカーは、切断可能なユニットを含んでもよく、または切断不可能であってもよい。切断可能なユニットには、例えば、ジスルフィド交換を通じて切断可能であるジスルフィド含有リンカー、酸性ｐＨにて切断可能な酸不安定性リンカー、およびヒドロラーゼ（例えば、グルクロニダーゼなどのグリコシルヒドロラーゼ）、エステラーゼおよびペプチダーゼによって切断可能なリンカー（例えば、ペプチドリンカーおよびグルクロニドリンカー）が含まれる。切断不可能なリンカーは、タンパク質分解性抗体の分解メカニズムを介して薬物を放出すると考えられている。
用語「高分子量凝集体」には、抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）の凝集体のほか、ＡＤＣの断片（例えば、加水分解などによるポリペプチドの分解によって生成されるもの）を含む凝集体、およびＡＤＣとそのような断片との混合物を含む凝集体が含まれる。高分子量凝集体の存在は、例えばサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定してもよい。典型的には、高分子量凝集体は、治療のための単量体ＡＤＣより大きい分子量を有する複合体である。抗体構成成分が、免疫グロブリン鎖の２つの同一のペアからなりそれぞれのペアが１つの軽鎖および１つの重鎖を有する（例えばＩｇＧアイソタイプ）４量体であるＡＤＣの場合、そのような凝集体は約１５０ｋＤより大きい。しかしながら、抗体構成成分が、２つの免疫グロブリン軽鎖および２つの免疫グロブリン重鎖からなる典型的な単一特異性のテトラマー抗体タンパク質より大きいまたは小さい分子量を有する（例えば、単鎖抗体または二重特異性抗体）ＡＤＣの場合、このような凝集体のサイズは、それに従って変化し得る。
用語「低分子量分解生成物」には、例えば抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）の断片、例えば、アミド分解または加水分解によってもたらされる断片などが含まれる。低分子量分解生成物の存在は、例えばサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定してもよい。典型的には、低分子量分解生成物は、治療のための単量体ＡＤＣより小さい分子量を有する。抗体構成成分が、免疫グロブリン鎖の２つの同一のペアからなりそれぞれのペアが１つの軽鎖および１つの重鎖を有する（例えばＩｇＧアイソタイプ）４量体であるＡＤＣの場合、そのような分解生成物は約１５０ｋＤより小さい。しかしながら、抗体構成成分が、２つの免疫グロブリン軽鎖および２つの免疫グロブリン重鎖からなる典型的な単一特異性の４量体抗体タンパク質より大きいまたは小さい分子量を有する（例えば、単鎖抗体または二重特異性抗体）ＡＤＣの場合、このような分解生成物のサイズは、それに従って変化し得る。
目的の抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）の「酸性異形体」は、ＡＤＣの実験的なＰＩより酸性なＡＤＣ異形体である。酸性異形体の存在は、例えばカチオン交換クロマトグラフィーまたはイメージングキャピラリーＩＥＦ（ｉｃＩＥＦ）によって決定してもよい。酸性異形体の例は、アミド分解された異形体である。タンパク質分子がアミド分解された異形体は、１つまたは複数の中性アミド側鎖が、全体として酸性の特徴を有する残基に転換されたもの（例えば、元のポリペプチドの１つまたは複数のアスパラギン残基が、アスパラギン酸塩に転換したもの）である。
本明細書において使用される用語「希釈剤」は、本明細書に記載されている例示的なまたは適宜な濃度（単数または複数）を変更するまたは達成するのに適した溶液をいう。
用語「容器」は、例えば保存のために、その中に物体または液体を置くまたは収容することができるもの（例えば、ホルダー、入れ物、器など）をいう。
用語「投与経路」には、治療のためのタンパク質を送達するための、当該分野において認識されている投与経路、例えば、非経口、静脈内、筋肉内または皮下などが含まれる。がんの処置のためのＡＤＣの投与には、静脈内または皮下投与による体循環への投与が望まれる場合がある。固形腫瘍によって特徴付けられるがんの処置には、所望に応じて、投与は腫瘍へ直接、局所的であり得る。
用語「処置」は、疾患を治す、癒す、緩和する、遅延させる、和らげる、変える、矯正する、回復させる、改善するまたは作用することを目的とする疾患を有する患者への、治療薬剤の投与をいう。
「患者」という用語は、予防的または治療的処置のいずれかを受けるヒトおよび他の哺乳動物の被験体を含む。
「有効量」、「効果的な用量」または「効果的な投与量」という用語は、所望の効果を達成するかまたは少なくとも部分的に達成するのに十分である量、例えば、疾患または障害の発生を妨げるか、または疾患もしくは障害の１つもしくは１つより多くの症状を改善するのに十分である量をいう。医薬組成物の有効量は、「効果的なレジメン」（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｒｅｇｉｍｅ）において投与される。「効果的なレジメン」という用語は、疾患または障害の予防的または治療的処置を実現するために適切な、投与される組成物の量および投薬頻度の組み合わせをいう。
本明細書において使用される用語「投与量単位形態」（または「単位投与量形態」）は、処置されるべき患者のための単位投与量として適した、物理的に分離された単位をいい、各単位は、望まれる治療効果を生成するように計算された所定量の行性化合物（本発明に従ったＡＤＣ）を、必要な薬学的な担体、希釈剤または添加剤と共に含有する。本発明の投与量単位形態の仕様は、行性化合物特有の特性および達成されるべき特定の治療効果ならびにそのような行性化合物を患者の処置のために配合することについての当該分野固有の制限によって規定されかつそれらに直接依存する。
本発明の製剤中におけるＡＤＣの実際の投与量レベルは、特定の患者のために望まれる治療応答、組成および投与様式を達成するのに効果的なＡＤＣの量を得ることができるように、患者に毒性がないようにして変化してもよい。選択された投与量レベルは、採用した本発明の特定の組成物の行性、投与経路、投与時間、採用した特定の化合物の排出率、処置期間、採用した特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物および／または材料、処置される患者の年齢、性別、体重、状態、全体的な健康状態およびこれまでの病歴、ならびにこれらに類する医療分野において周知の因子を含めた、様々な薬物動態因子に依存することになる。
「細胞傷害性効果」は、標的細胞の除去、消滅および／または死滅をいう。「細胞傷害性作用物質」は、細胞に対して細胞傷害性効果を有する作用物質をいう。
「細胞増殖抑制効果」は、細胞の増殖の阻害をいう。「細胞増殖抑制作用物質」は、細胞に対して細胞増殖抑制効果を有し、それにより、細胞の特定のサブセットの成長および／または拡大を阻害する作用物質をいう。
２つのアミノ酸配列のアミノ酸残基が、最大限一致するように整列された際に同一である場合、２つのアミノ酸配列は、「１００％のアミノ酸配列同一性」を有する。配列比較は、標準的なソフトウェアプログラム（例えば、ＤＮＡＳＴＡＲ（Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）によって製作された、ＬＡＳＥＲＧＥＮＥバイオインフォマティクスコンピューター処理スイートに含まれるプログラム）を用いて行うことができる。最適整列を決定することにより、２つの核酸配列またはアミノ酸配列を比較する他の方法は、当業者に周知である。（例えば、Ｐｅｒｕｓｋｉ ａｎｄ Ｐｅｒｕｓｋｉ，Ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎｅｔ ａｎｄ ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ Ｇｅｎｏｍｉｃ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＡＳＭ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ． １９９７）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｇｅｎｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２３−１５１中の、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），“Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｕｐｅｒｈｉｇｈｗａｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｄａｔａｂａｓｅｓ ｏｆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，”（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ． １９９７）；Ｂｉｓｈｏｐ（ｅｄ．），Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ（２ｎｄ ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ． １９９８）を参照。）２つのアミノ酸配列は、２つの配列が互いに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する場合、「実質的配列同一性」を有すると考えられる。
パーセント配列同一性は、Ｋａｂａｔナンバリング規定によって最大限整列された抗体配列によって決定される。整列の後、対象の抗体領域（例えば、重鎖または軽鎖の可変領域全体）がリファレンス抗体の同一の領域と比較された場合、対象の抗体領域およびリファレンス抗体領域の間のパーセント配列同一性は、対象の抗体領域およびリファレンス抗体領域両方において同一のアミノ酸に占められる位置の数を、ギャップはカウントせずに、２つの領域の整列された位置の総数で割り、パーセントに変換するために１００を掛けたものである。
用語「医薬製剤」は、行性成分の生物学的行性が有効となることを可能にする（被験体へ投与されたときに）ような形態にあり、製剤が投与される被験体に許容されない毒性のある追加の構成成分を含有しない調合物をいう。そのような製剤は、無菌である。
１つ以上の言及された要素を「含む」組成物または方法は、特に言及されていない他の要素を含み得る。例えば、抗体を含む組成物は、抗体を単独で、または他の成分と組み合わせて含み得る。
本明細書における数値範囲への言及（例えば「ＸからＹ（Ｘ ｔｏ Ｙ）」または「ＸからＹ（ｆｒｏｍ Ｘ ｔｏ Ｙ）」）は、範囲を定義する端点、および範囲内にある全ての値を含む。
文脈から異なることが明らかでない限り、値が「約（ａｂｏｕｔ）」Ｘまたは「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」Ｘとして表現される場合、Ｘの述べられた値は、±１０％までの正確さであることが理解される。
例示的な実施態様の説明
ベンゾジアゼピン抗体−薬物結合体
ベンゾジアゼピン抗体−薬物結合体は、ベンゾジアゼピン２量体に、典型的にはリンカーを介して結合体化した抗体をいうが、リンカーは必ずしも必要ではない。ベンゾジアゼピン薬物リンカーは、リンカーに付いたベンゾジアゼピン２量体をいう。ベンゾジアゼピン薬物リンカーのリンカー構成成分は、典型的には、抗体に付くための反応性基を有する。ベンゾジアゼピン化合物は、ジアゼピン環へ縮合したベンゼン環をその中心に有する。ジアゼピン環へ縮合したベンゼン環の例示的な環構造は以下の通りである。
Figure 2016512540
ベンゾジアゼピン化合物は、両方の環上の置換基の数、種類および位置ならびにジアゼピン環の飽和度において異なる。それらはまた、ベンゼンおよび／またはジアゼピン環へ縮合する追加の環の数においても異なる。ベンゼンまたはジアゼピン環が、１つまたは複数の芳香族もしくは非芳香族炭素環またはヘテロ環に縮合したものは、ベンゾジアゼピン化合物の定義に含まれる。ベンゾジアゼピン２量体は、２つのベンゾジアゼピン単位が繋ぎ鎖を介して一緒になって繋がることによって形成された化合物である。
ベンゾジアゼピン抗体−薬物結合体の抗体構成成分は、１つまたは複数のベンゾジアゼピン薬物リンカー、例えば１から２０個の薬物リンカーと結合され得る。いくつかの局面において、ベンゾジアゼピン抗体−薬物結合体の抗体構成成分は、１、２、３または４個の薬物リンカーと結合される。結合体化は、抗体上の異なる位置を介し得る。いくつかの局面において、結合体化は、システイン（ｃｙｔｅｉｎｅ）残基の硫黄原子を介する。いくつかの局面において、システイン残基は、抗体の鎖間ジスルフィドのシステイン残基である。他の局面において、システイン残基は、抗体中へ組み込み操作される。いくつかの局面において、システイン残基は、ＥＵインデックス（Ｋａｂａｔ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（アメリカ国立衛生研究所、ベセスダ、メリーランド州、１９８７年および１９９１年））によって決定して２３９位（ヒトＩｇＧ１）において、抗体中へ組み込み操作される。いくつかの局面において、ベンゾジアゼピンＡＤＣ混合物または製剤中の抗体当たり、平均して２つの薬物リンカーがあり、薬物リンカーは、ＥＵインデックス（Ｋａｂａｔ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（アメリカ国立衛生研究所、ベセスダ、メリーランド州、１９８７年および１９９１年））によって決定して２３９位（ヒトＩｇＧ１）で抗体に導入されたシステイン残基と結合する。
一局面において、ベンゾジアゼピン２量体は、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）２量体である。ＰＢＤは、一般構造
Figure 2016512540
のものである。ＰＢＤは、その芳香族Ａ環およびピロロＣ環の両方における置換基の数、種類および位置ならびにＣ環の飽和度において異なる。Ｂ環には、Ｎ１０−Ｃ１１位に、イミン（Ｎ＝Ｃ）、カルビノールアミン（ＮＨ−ＣＨ（ＯＨ））またはカルビノールアミンエーテル（ＮＨ−ＣＨ（ＯＲ））のいずれかがあり、これはＤＮＡのアルキル化の要因である求電子性の中心である。公知の天然物の全ては、キラルなＣ１１ａ位における（Ｓ）−配置を有し、このことは、Ｃ環からＡ環へ向かって見たときに右旋性をＰＢＤにもたらす。これは、ＰＢＤに、Ｂ型ＤＮＡの小さな溝を伴う、等螺旋性に適した三次元形状を与え、このことによって結合部位にぴったりと合うようになる。小さな溝の中に付加物を形成するＰＢＤの能力は、ＰＢＤがＤＮＡプロセシングを妨げることを可能にし、それ故、抗腫瘍剤としてのそれらの使用を可能にする。これらの分子の生物学的行性は、例えば、２つのＰＢＤ単位を一緒に繋げる（例えば、柔軟なアルキレンリンカーを介したＣ８／Ｃ’−ヒドロキシル官能基を通じて）ことによって増強され得る。ＰＢＤ２量体は、それらの生物学的行性の主な要因であると考えられている回帰性５’−Ｐｕ−ＧＡＴＣ−Ｐｙ−３’ストランド間架橋などの配列選択的ＤＮＡ傷害を形成すると考えられている。
結合体として使用される例示的なＰＢＤ２量体は、以下のもの
Figure 2016512540
Figure 2016512540
Figure 2016512540
Figure 2016512540
またはそれらの塩（例えば、薬学的に許容可能な塩）である。
ＰＢＤ２量体は、リンカーと結合するのに適した任意の位置において、抗体と結合することができる。例えば、いくつかの実施態様において、ＰＢＤ２量体は、化合物を抗体へ結合するためのアンカーを提供する置換基をＣ２位に有する（例えば、一級または二級アミン）。Ｃ２位は、上に示した例示的構造において矢印によって印が付けられている。代替の実施態様において、ＰＢＤ２量体のＮ１０位は、化合物を抗体へ結合するためのアンカーを提供する。
別の局面において、ベンゾジアゼピン２量体は、インドリノベンゾジアゼピン２量体またはオキサゾリジノベンゾジアゼピン２量体である。インドリノベンゾジアゼピン（ＩＢＤ）およびオキサゾリジノベンゾジアゼピン（ＯＢＤ）は、一般構造
Figure 2016512540
のものである。
インドリノベンゾジアゼピンおよびオキサゾリジノベンゾジアゼピンは、それらの環の置換基の数、種類および位置において異なる。ＰＢＤについては、２つのインドリノベンゾジアゼピンまたは２つのオキサゾリジノベンゾジアゼピン単位は、一緒になって繋がり、例えば、２つの単量体単位のＡ環の間のエーテル官能基を通じた、２量体を形成することができる。ＰＢＤについては、インドリノベンゾジアゼピン２量体またはオキサゾリジノベンゾジアゼピン２量体は、リンカーと結合するのに適した任意の位置で抗体に結合することができる。
薬物構成成分としてのＰＢＤ２量体を含むベンゾジアゼピンＡＤＣは、ＰＢＤ ＡＤＣということもできる。同様に、薬物構成成分としてのインドリノベンゾジアゼピン２量体を含むベンゾジアゼピンＡＤＣは、ＩＢＤ ＡＤＣということができ、薬物構成成分としてのオキサゾリジノベンゾジアゼピン２量体を含むＡＤＣは、ＯＢＤ ＡＤＣということができる。典型的には、ＰＢＤ ＡＤＣ、ＩＢＤ ＡＤＣおよびＯＢＤ ＡＤＣを含めたベンゾジアゼピンＡＤＣは、ベンゾジアゼピン薬物と抗体との間にリンカーを含む。リンカーは、切断可能な単位（例えば、酵素の標的基質である、アミノ酸もしくはアミノ酸の連続配列）または切断不可能なリンカー（例えば、抗体の分解によって放出されるリンカー）を含んでもよい。リンカーは、抗体への結合のためのマレイミド基、例えばマレイミドカプロイルをさらに含んでもよい。リンカーは、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル（ｈｙｄｒｏｘｙｕｓｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ）エステル、または例えばチオピリジルジスルフィドを含めた不安定性のジスルフィドを含めた、抗体への結合のための代替基を含んでもよい。ＰＢＤ２量体、ＩＢＤ２量体、ＯＢＤ２量体、リンカーおよびそれらの結合体は、当該分野において公知である。例えば、ＷＯ２０１０／０９１１５０、ＷＯ２０１２／１１２７０８、ＷＯ２０１２／１２８８６８、ＷＯ２０１１／０２３８８３およびＷＯ２００９／０１６５１６を参照のこと。
本明細書に記載の任意のものを含めたベンゾジアゼピン２量体への抗体の結合のための例示的なリンカーは、以下の通りであり、波線は薬物に付く部位を示し、抗体はマレイミド基を介して結合する。
Figure 2016512540
例示的なＰＢＤ系抗体−薬物結合体には、下記に示す抗体−薬物結合体
Figure 2016512540
またはその塩（例えば、薬学的に許容可能な塩）が含まれ、式中、Ａｂは抗体（例えばモノクローナル抗体）であり、薬物負荷は、抗体当たりの薬物リンカー分子の数であるｐで表される。文脈によって、ｐは、平均薬物負荷とも呼ばれる、抗体当たりの薬物リンカー分子の平均数を表し得る。ｐは、１から２０の範囲であり、好ましくは１から８である。いくつかの局面において、ｐが平均薬物負荷を表す場合、ｐは約２から約５の範囲である。いくつかの局面において、ｐは、約２、約３、約４または約５である。いくつかの局面において、抗体は、システイン残基の硫黄原子を介して薬物リンカーと結合する。いくつかの局面において、システイン残基は、抗体の鎖間ジスルフィドのシステイン残基である。他の局面において、システイン残基は、抗体中へ組み込み操作される。いくつかの局面において、システイン残基は、ＥＵインデックス（Ｋａｂａｔ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（アメリカ国立衛生研究所、ベセスダ、メリーランド州、１９８７年および１９９１年））によって決定して２３９位（ＩｇＧ１）において、抗体中へ組み込み操作される。いくつかのこのような局面において、ｐは約２である。このようなＡＤＣを作製する方法は、当該分野において公知である（例えば、国際公開第ＷＯ２０１１／１３０６１３号を参照のこと）。
結合体化反応
本発明は、特に、ベンゾジアゼピンＡＤＣおよびベンゾジアゼピン関連不純物を含む混合物からベンゾジアゼピン薬物関連不純物を除去する方法を対象とする。ベンゾジアゼピン薬物関連不純物は、抗体とベンゾジアゼピン２量体またはベンゾジアゼピン薬物リンカーとの結合体化反応から生じる任意の薬物関連不純物である。ベンゾジアゼピン薬物関連不純物には、例えば、ベンゾジアゼピン２量体遊離薬物、ベンゾジアゼピン薬物リンカー、クエンチされたベンゾジアゼピン薬物リンカー、またはベンゾジアゼピン薬物リンカー分解生成物が含まれ得る。ベンゾジアゼピン薬物関連不純物は、抗体と結合体化したベンゾジアゼピン薬物でも抗体と結合体化した薬物リンカーでもない。
本発明のいくつかの局面において、抗体は、ベンゾジアゼピンＡＤＣおよびベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含む混合物（本明細書において、結合体化反応混合物ともいう）を形成するのに十分な条件下で、ベンゾジアゼピン薬物リンカーと接触する。他の局面において、抗体リンカー（リンカーと結合体化した抗体）は、ベンゾジアゼピンＡＤＣおよびベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含む混合物（本明細書において、結合体化反応混合物ともいう）を形成するのに十分な条件下で、ベンゾジアゼピン遊離薬物と接触する。他の局面において、抗体リンカーは、ベンゾジアゼピンＡＤＣおよびベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含む混合物（本明細書において、結合体化反応混合物ともいう）を形成するのに十分な条件下で、ベンゾジアゼピン薬物リンカーと接触する。抗体をリンカーまたは薬物リンカーと結合する一般的な方法は、当該分野において公知であり、本明細書に詳細には記載しない。いくつかの局面において、結合体化は、抗体のリシン残基へのものである。他の局面において、結合体化は、抗体上に存在する元々のまたは組み込み操作されたシステイン（例えば、鎖間ジスルフィドのシステイン、または抗体の重鎖もしくは軽鎖へ導入されたシステイン残基）へのものである。いくつかの局面において、結合体化は、抗体上に存在する組み込み操作されたシステインへのものであり、抗体は、ベンゾジアゼピン薬物リンカーと接触する前に還元され、抗体は部分的に再酸化され（すなわち、鎖間ジスルフィドについて再酸化され、導入したシステインについては再酸化しない）、ベンゾジアゼピン薬物リンカーは、部分的に再酸化された抗体上の組み込み操作されたシステインと結合される。いくつかのこのような局面において、組み込み操作されたシステインは、２３９位（ＩｇＧ１、Ｋａｂａｔに記載されたＥＵインデックスのナンバリング）である。
当業者は、抗体または抗体リンカーを薬物または薬物リンカーと結合するために使用する条件は、薬物およびリンカーの本質に一部で依存することを理解する。一般的に、結合体化反応は、約０℃から約４０℃の温度にて行われる。いくつかの実施態様において、結合体化反応は約４℃にて行われる。いくつかの実施態様において、結合体化反応は約２５℃にて行われる。いくつかの実施態様において、結合体化反応は約３７℃にて行われる。結合体化反応は、任意の適した長さの時間にわたって行われ得る。一般的に、結合体化反応混合物は、数分から数時間の間の任意の適した条件下でインキュベートされる。反応は、例えば、約１分または約５分または約３０分または約１時間半または約４時間または約１２時間または約２４時間行われ得る。一般的に、結合体化反応混合物は、約６から約９、または約７から約８の範囲のｐＨで形成される。特定のｐＨを維持するために、様々なバッファー剤を使用することができる。適したバッファー剤の例には、限定されるものではないが、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、３−モルホリノプロパン−１−スルホン酸（ＭＯＰＳ）、２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−プロパン−１，３−ジオール（トリス）、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、およびホウ酸ナトリウムが含まれる。共溶媒（例えば、ジメチルアセトアミド、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、エタノール、メタノール、テトラヒドロフラン、アセトンおよび酢酸）、塩（例えば、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＣａＣｌ２、ならびにＭｎ２＋およびＭｇ２＋の塩）、キレート剤（例えば、エチレングリコール−ビス（２−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＧＴＡ）、２−（｛２−［ビス（カルボキシメチル）アミノ］エチル｝（カルボキシメチル）アミノ）酢酸（ＥＤＴＡ）、および１，２−ビス（ｏ−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＢＡＰＴＡ））も必要に応じて含めることができる。バッファー、共溶媒、塩およびキレート剤は、任意の適した濃度にて使用することができ、それは当業者によって容易に決定することができる。一般的に、バッファー、共溶媒、塩およびキレート剤は、約１μＭから約１Ｍまたはさらに高い範囲の濃度（例えば、共溶媒によっては０〜５０％ｖ／ｖ）で反応混合物に含まれる。任意の適量のベンゾジアゼピン薬物または薬物リンカーが、結合体化のために使用され得る。
いくつかの局面において、結合体化反応（例えば、薬物リンカーへの抗体の結合体化）の後、接線流ろ過の前に、過剰のベンゾジアゼピン薬物関連不純物は、クエンチング剤を用いることによって非反応性にされる。クエンチング剤は、反応性部分へ共役結合することによって反応性部分の反応性を消すことができる、抗体以外の試薬である。当業者は、クエンチング剤は、薬物またはリンカーの特質に基づいて選択されるということを理解する。例えば、Ｂ−メルカプトエタノールまたはＮ−アセチルシステインなどのチオール含有薬剤は、マレイミド基または別のチオール反応性基を含有する過剰の薬物リンカー化合物をクエンチするために使用することができる。グリシンなどのアミンは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルを含有する過剰のリンカー薬物化合物をクエンチするために使用することができる。典型的には、クエンチング剤は、抗体および薬物リンカーに対して過剰に使用される。
いくつかの局面において、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物は、クエンチされたベンゾジアゼピン薬物リンカーである。クエンチされた結合体化反応混合物は、結合体化反応（例えば、抗体と薬物リンカーとの結合体化、抗体リンカーと薬物リンカーとの結合体化、または抗体リンカーと薬物との結合体化）、クエンチング剤の導入およびベンゾジアゼピン薬物関連不純物のクエンチの後の反応混合物をいう。典型的には、クエンチされた結合体化反応混合物という用語は、任意の精製工程の前の混合物をいう。
本発明のベンゾジアゼピン２量体は、本質的に疎水性である。本発明者らは、驚くべきことに、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物およびＡＤＣがＡＤＣ混合物中に可溶化されている場合であっても、疎水性の高いベンゾジアゼピン薬物関連不純物はＡＤＣ混合物から除去することが困難である場合があるということを発見した。本発明は、７．５０未満のＳｌｏｇＰ値を有するベンゾジアゼピン薬物関連不純物は、７．５０超のＳｌｏｇＰ値を有するベンゾジアゼピン薬物関連不純物より、本発明の方法を使用してＡＤＣ混合物から除去することが容易であるということを発見した。したがって、好ましい実施態様において、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物は、７．５０を超えないＳｌｏｇＰ値、より好ましくは７．０を超えないＳｌｏｇＰ値、より一層好ましくは、６．５もしくは６．０、またはさらには５．８を超えないＳｌｏｇＰ値を有する。
本発明者らは、クエンチング剤を使用して、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物の疎水性を低下させて、それによって精製の成果を補助することができるということをさらに発見した。それが結合する化合物の疎水性を低減するように作用するクエンチング剤を選択することによって、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物のＡＤＣ混合物からの排除が改善され得る。したがって、特に好ましいクエンチング剤は、クエンチするべき化合物に結合体化したときに、結果として得られる化合物の疎水性を低減するように作用するものである。例えば、特に好ましいクエンチング剤は、それが付いたベンゾジアゼピン薬物関連不純物（例えば、薬物または薬物リンカー）の疎水性を低減する。いくつかの好ましい局面において、クエンチされたベンゾジアゼピン薬物関連不純物は、７．５０を超えないＳｌｏｇＰ値、より好ましくは７．０を超えないＳｌｏｇＰ値、より一層好ましくは、６．５もしくは６．０、またはさらには５．８を超えないＳｌｏｇＰ値を有する。いくつかのそのような局面において、クエンチされていないベンゾジアゼピン薬物関連不純物は、クエンチされたベンゾジアゼピン薬物関連不純物より高いＳｌｏｇＰ値を有する。
ＳｌｏｇＰは、疎水性の尺度である。ＳｌｏｇＰは、オクタノール／水分配係数（潜在的な水素も含めて）のｌｏｇとして定義され、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐからのプログラムＭＯＥを使用して計算することができる（ＳｌｏｇＰ ｖａｌｕｅｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｕｓｉｎｇ Ｗｉｌｄｍａｎ， Ｓ．Ａ．， Ｃｒｉｐｐｅｎ， Ｇ．Ｍ．：Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｂｙ Ａｔｏｍｉｃ Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ；Ｊ． Ｃｈｅｍ． Ｉｎｆ． Ｃｏｍｐｕｔ． Ｓｃｉ．、３９巻、５号（１９９９年）８６８〜８７３頁）。
結合体化した化合物の疎水性を低減するように作用するクエンチング剤には、荷電したクエンチング剤のほか、荷電していないにもかかわらず親水性であるクエンチング剤が含まれる。親水性のクエンチング剤には、チオールグルコースなどのチオール糖、およびＰＥＧ化チオールなどのＰＥＧ化クエンチング剤が含まれる。
ＰＢＤ薬物リンカー合成の例として、ＷＯ２０１１／１３０６１３には、ＰＢＤ薬物リンカーを合成した後、ＰＢＤ薬物リンカーを抗体と結合させる方法が記載されている。端的に言うと、５０ｍＭのホウ酸ナトリウムを含むｐＨ７．４のＰＢＳ中の抗体が、トリス（カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）を用いて３７℃で還元される。抗体鎖間ジスルフィドが、デヒドロアスコルビン酸を用いた酸化によって再形成され、組み込み操作されたシステインは、薬物リンカーを用いたアルキル化に利用可能なチオール形態で残る。還元された抗体は、その後、薬物リンカーを可溶化するのに十分な共溶媒の存在下で、抗体チオール当たり約１．５当量のマレイミド薬物リンカーを用いてアルキル化される。約９０分後、反応は、薬物リンカーに対して約３当量のＮ−アセチルシステインの添加によってクエンチされる。
使用した結合体化方法にかかわらず、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物は、混合物中に存在する。常にではないが一般的に、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物は、約１０から約１００μＭのレベルで混合物中に存在する。いくつかの局面において、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物は、クエンチされたまたはクエンチされていない薬物リンカー、例えばＮ−アセチルシステインでクエンチされた薬物リンカーである。他の局面において、ベンンゾジアゼピン薬物関連不純物は、クエンチされたまたはクエンチされていない遊離のベンゾジアゼピン薬物（すなわち、リンカーまたは抗体に付いていない薬物）である。他の局面において、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物は、ベンゾジアゼピン薬物リンカー分解生成物、例えば、薬物リンカーの酸化または加水分解誘導体などである。
接線流ろ過（ＴＦＦ）
典型的には、結合体化反応および任意選択のクエンチの後、ベンゾジアゼピンＡＤＣおよびベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含む混合物は、接線流ろ過（ＴＦＦ）に供される。本発明者らは、混合物から薬物関連不純物を効果的に除去するためには、シクロデキストリンを使用し、ろ過の間を通じてシクロデキストリンの最小レベルを維持することが好ましいということを見出した。ベンゾジアゼピン関連不純物の排除を最適化するために、シクロデキストリンは、ＡＤＣ混合物の構成成分（例えばＡＤＣ）の溶解性を実質的に維持するレベルに維持される。シクロデキストリンは、ろ過プロセスの開始の前（例えば、結合体化および任意選択のクエンチの後であるが接線流ろ過を始める前）に、またはろ過プロセスの開始（もしくは始まり）時に、混合物に好ましくは添加される。いくつかの局面において、シクロデキストリンは、ろ過プロセスの開始後であるが不純物の実質的な除去の前に、ＡＤＣ混合物へ添加される。可溶化剤（例えばシクロデキストリン）は、混合物が接線流ろ過に供される前に、混合物に好ましくは添加される。シクロデキストリンのレベルは、ろ過の間を通じて最小レベルに好ましくは維持される。
本発明者らは、シクロデキストリンは、その添加がベンゾジアゼピン薬物関連不純物の除去を改善するのみならず、製剤化された薬物製品にそれが組み込まれることによって、製剤化された製品の安定性が改善するため、使用に特に有利な可溶化剤であるということを見出した。シクロデキストリンを、ベンゾジアゼピンＡＤＣおよびベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含む混合物に添加した後、結合体化反応および任意選択のクエンチを行うことができる。いくつかの局面において、少なくとも約１％ｗ／ｖ（すなわち、１リットル当たり１０ｇ）のシクロデキストリンが、結合体化反応混合物に添加される。いくつかの局面において、少なくとも約２％ｗ／ｖ（すなわち、１リットル当たり２０ｇ）のシクロデキストリンが、結合体化反応混合物に添加される。いくつかの局面において、少なくとも約３％ｗ／ｖ（すなわち、１リットル当たり３０ｇ）のシクロデキストリンが、結合体化反応混合物に添加される。いくつかの局面において、シクロデキストリン約１％ｗ／ｖからシクロデキストリン約１０％ｗ／ｖ、シクロデキストリン約２％ｗ／ｖからシクロデキストリン約１０％ｗ／ｖ、またはシクロデキストリン約３％ｗ／ｖからシクロデキストリン約１０％ｗ／ｖ、またはシクロデキストリン約３％ｗ／ｖからシクロデキストリン約６％ｗ／ｖ、またはシクロデキストリン約３％ｗ／ｖからシクロデキストリン約４％ｗ／ｖが、シクロデキストリン混合物へ添加される。
接線流ろ過は、精製されるべきサンプルが、再循環されて半透過性膜の表面を接線方向に通過するろ過プロセスをいう。大き過ぎて膜の孔を通過できない高分子は、膜の上流側（被保持物側）に保持され、孔を通過するのに十分小さい分子はろ液側へ通過する。一般的に、どの分子がろ液中へ除去され、どの分子が被保持物中に保持されるかは、分子量、溶解性およびフィルター孔サイズに主に依存して決まる。供給流速、通過膜圧、膜のタイプまたは組成、流体混合物中の構成成分の濃度、温度および流体混合物の粘度などのその他の因子は、排除の速度および程度に影響し得る。接線流ろ過装置を使用し、結合体化反応混合物から薬物関連不純物を清浄化するための接線流ろ過を行う一般的な方法は、当該分野において公知であり、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物の清浄化において使用するため、本発明の教示を当該分野における知識と組み合わせて使用して最適化することができる。
いくつかの局面において、接線流ろ過の様式は、ダイアフィルトレーションである。ダイアフィルトレーションの間、ろ液を除去しながら、バッファーが導入される。ダイアフィルトレーションは、例えば、定容ダイアフィルトレーションまたは不連続ダイアフィルトレーションであり得る。好ましい実施態様において、一定レベルのシクロデキストリンが、ダイアフィルトレーションの間を通じて維持される。好ましい実施態様において、シクロデキストリンは、ろ過プロセスの開始前または開示時に、ベンゾジアゼピンＡＤＣおよびベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含む混合物へ添加される。いくつかの局面において、少なくとも約１％ｗ／ｖのシクロデキストリンレベルが、ろ過の間を通じて維持される。いくつかのこのような局面において、ＡＤＣ混合物には、少なくとも約１％ｗ／ｖのシクロデキストリン濃度を有するように、ろ過プロセスの開始前または開始時にシクロデキストリンが補充され、ダイアフィルトレーションバッファーは、少なくとも約１％ｗ／ｖのシクロデキストリンを含む。いくつかの局面において、少なくとも約２％ｗ／ｖのシクロデキストリンレベルが、ろ過の間を通じて維持される。いくつかのそのような局面において、ＡＤＣ混合物には、少なくとも約２％ｗ／ｖのシクロデキストリン濃度を有するように、ろ過プロセスの開始前または開始時にシクロデキストリンが補充され、ダイアフィルトレーションバッファーは、少なくとも約２％ｗ／ｖのシクロデキストリンを含む。いくつかの局面において、少なくとも約３％ｗ／ｖのシクロデキストリンレベルが、ろ過の間を通じて維持される。いくつかのそのような局面において、ＡＤＣ混合物には、少なくとも約３％ｗ／ｖのシクロデキストリン濃度を有するように、ろ過プロセスの開始前または開始時にシクロデキストリンが補充され、ダイアフィルトレーションバッファーは、少なくとも約３％ｗ／ｖのシクロデキストリンを含む。いくつかの局面において、少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％ｗ／ｖのシクロデキストリンレベルが、ろ過の間を通じて維持される。いくつかのそのような局面において、ＡＤＣ混合物には、少なくとも約１％、２％または３％ｗ／ｖのシクロデキストリン濃度を有するように、ろ過プロセスの開始前または開始時にシクロデキストリンが補充され、ダイアフィルトレーションバッファーは、少なくとも約１％、２％または３％ｗ／ｖのシクロデキストリンを含む。他の局面において、シクロデキストリン約１％ｗ／ｖからシクロデキストリン約１０％ｗ／ｖ、シクロデキストリン約２％ｗ／ｖからシクロデキストリン約１０％ｗ／ｖ、またはシクロデキストリン約３％ｗ／ｖからシクロデキストリン約１０％ｗ／ｖ、またはシクロデキストリン約３％ｗ／ｖからシクロデキストリン約６％ｗ／ｖ、またはシクロデキストリン約３％ｗ／ｖからシクロデキストリン約４％ｗ／ｖのレベルが、ろ過の間を通じて維持される。シクロデキストリンは、ろ過プロセスの開始後であるが好ましくは不純物の実質的な除去の前に、ＡＤＣ混合物中へ初めて導入されることも考えられるが、好ましくは、シクロデキストリンは、ろ過プロセスの開始前または開始時にＡＤＣ混合物へ添加される。シクロデキストリンの添加は、例えば、ダイアフィルトレーションバッファーを介することができる。「ろ過の間を通じて維持される」という表現は、シクロデキストリンの示された濃度が、ろ過プロセスの間に存在することを意味する。ろ過プロセスが始まった後（好ましくは、不純物の実質的な除去の前に）シクロデキストリンが添加される場合などのいくつかの局面において、シクロデキストリンは、ろ過プロセスの開始時には存在しないが、シクロデキストリンの導入に続いて、示された濃度が維持される。
上に述べたように、ダイアフィルトレーションバッファーは、少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％ｗ／ｖのシクロデキストリン、または少なくとも約４％ｗ／ｖのシクロデキストリンを含むことができる。いくつかの局面において、ダイアフィルトレーションバッファーは、シクロデキストリン約１％ｗ／ｖからシクロデキストリン約１０％ｗ／ｖ、シクロデキストリン約２％ｗ／ｖからシクロデキストリン約１０％ｗ／ｖ、またはシクロデキストリン約３％ｗ／ｖからシクロデキストリン約１０％ｗ／ｖ、またはシクロデキストリン約３％ｗ／ｖからシクロデキストリン約６％ｗ／ｖ、またはシクロデキストリン約３％ｗ／ｖからシクロデキストリン約４％ｗ／ｖを含有する。典型的には、ダイアフィルトレーションバッファーは、バッファー剤を追加的に含む。適したバッファーには、限定されるものではないが、酢酸塩バッファー、リン酸塩バッファー、コハク酸塩バッファー、ヒスチジンバッファー、ＨＥＰＥＳおよびＭＯＰＳが含まれる。一局面において、バッファー剤は、トリス（２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール）である。ダイアフィルトレーションバッファーのためのバッファーの例示的な濃度には、約５ｍＭから約１００ｍＭ、約５０ｍＭ、約１０ｍＭから約４０ｍＭ、または約２０ｍＭの濃度が含まれる。ある特定の実施態様では、トリスは、約５ｍＭから約５０ｍＭ、約１０ｍＭから約４０ｍＭ、または約２０ｍＭで含まれる。ダイアフィルトレーションバッファーに適したｐＨは、一般的に、約６．０から約８．０の範囲であるが、より高くてもより低くてもよい。いくつかの局面において、ｐＨは、約６．５から約７．５、または約７から７．４の範囲である。いくつかの局面において、ｐＨは約７．３または約７．２である。
いくつかの局面において、ベータシクロデキストリンを使用するとき、少なくとも約２％、少なくとも約３％または少なくとも約４％のシクロデキストリン濃度が、ろ過の間を通じて維持される。いくつかの局面において、ガンマシクロデキストリンを使用するとき、少なくとも約１％の濃度が、ろ過の間を通じて維持される。
本発明は、接線流ろ過を使用してＡＤＣ混合物からベンゾジアゼピン薬物関連不純物を除去する方法を提供する。いくつかの局面において、接線流ろ過装置は、入口、ろ液出口（透過物出口ともいう）、被保持物出口を有するろ過ホルダー、半透過性限外ろ過膜、およびポンプを含む。ろ過膜は、ろ液出口を通ってホルダーから出る前に全てのろ液が入口に入り膜を通り抜けるように、ホルダーを上流区画と下流区画とに分ける。使用されるろ過膜は、ＡＤＣ混合物と共に使用するのに適した任意の材料または材料の組合せから作製され得る。例示的な膜には、再生セルロースまたはポリエーテルスルホンから作製された限外ろ過膜（例えば、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ＵＬＴＲＡＣＥＬ（登録商標）、またはＢＩＯＭＡＸ（登録商標）Ｍｅｍｂｒａｎｅｓ）が含まれる。膜の孔サイズとは、フィルターの平均孔サイズをいう。本発明における使用には、膜は、典型的には１００ｋＤ未満、より典型的には約５０ｋＤ未満、または約３０ｋＤの孔サイズを有する。したがって、いくつかの局面において、ろ過膜は、１００ｋＤ未満、より典型的には約５０ｋＤ未満、または約３０ｋＤの孔サイズを有する、再生セルロースまたはポリエーテルスルホン限外ろ過膜である。
いくつかの局面において、接線流ろ過系は、結合体化反応混合物を保持するためのサンプル貯留槽、およびバッファー貯留槽と流体連通しているバッファー貯留槽をさらに含む。いくつかの局面において、バッファーの目的は、系内の容量を一定に維持するように、ろ液流と同じ速度でろ液容量を置き換えることにある。精製される混合物は、サンプル貯留槽からポンプでくみ出され、ろ過膜を通り、サンプル貯留槽に戻る。いくつかの局面において、流路は、混合物がサンプル貯留槽へ戻ることを制限するために使用することができるバルブを含む。バルブを部分的に閉じることによって、流れの大部分をサンプル貯留槽に戻しながら（被保持物）、流れの小部分を膜に通して廃棄する（ろ液）。廃棄へと向かうろ液は、バッファー、および膜中の孔を通過するのに十分小さな溶質分子を含有する。ダイアフィルトレーションバッファーが、系に添加されて、ろ液としてのバッファーの損失に取って替わるので、系内の総容量は一定に維持される。ダイアフィルトレーションバッファーは、除去される溶質を含有しないため、溶質の濃度は次第に下降する。
説明したように、本発明のいくつかの局面において、定容ダイアフィルトレーション（ｄｉａｆｉｌｔａｔｉｏｎ）は、接線流ろ過の様式であり、これは、ＡＤＣ混合物を精製し、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物を清浄化するために使用される。定容ダイアフィルトレーションにおいて、ダイアフィルトレーション容量は、任意の１回での総溶液容量、特に開始時の混合物の総容量をいう。いくつかの局面において、サンプルは、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物の濃度を測定するために、１つまたは複数のダイアフィルトレーション容量の後に除去される。ダイアフィルトレーションは、典型的には、予めの実験によって決定されたいくつかのダイアフィルトレーション容量で行われて、望まれる目標レベルまでの排除を達成する。典型的には、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物の濃度が目標レベルに一旦達したら、ダイアフィルトレーションを終結させる。いくつかの局面において、目標排除レベルは、約１μＭもしくはそれ未満、好ましくは約０．５μＭもしくはそれ未満、０．２μＭ、またはさらに０．１μＭもしくはそれ未満である。
いくつかの局面において、被保持物は、約３ｍｇ／ｍｌから約１０ｍｇ／ｍｌのベンゾジアゼピンＡＤＣ、約１０ｍＭから約３０ｍＭのトリス、約３％から約１０％ｗ／ｖのシクロデキストリンを含み、ｐＨが約６．５から約７．５である。いくつかの局面において、被保持物は、約３ｍｇ／ｍｌのベンゾジアゼピンＡＤＣ、約２０ｍＭのトリス、約３％のシクロデキストリンまたは約４％のシクロデキストリンを含み、ｐＨが約７．３である。
シクロデキストリン
シクロデキストリンは、デンプンから製造される非還元環状グルコースオリゴ糖である。α−１，４グリコシド結合によって連結した６、７または８個のグルコース単位を有する３種の一般的なシクロデキストリンがある（それぞれ、α−、β−およびγ−シクロデキストリン）。シクロデキストリンは、ゲスト分子をそれらの内部空洞内に捕捉して、それによって包摂複合体を形成することによって、分子容器として作用することができる。α−シクロデキストリンはより小さな空洞を有するのに対し、β−およびγ−シクロデキストリンはより大きな空洞を有する。
本発明において使用するのに適したシクロデキストリンには、アルファ、ベータおよびガンマシクロデキストリンが含まれるが、ベータおよびガンマシクロデキストリンが、それらのより大きな内部空洞をもたらすため好ましい。親シクロデキストリンの溶解性を改善するため、シクロデキストリン、特にβ−シクロデキストリンには、化学修飾がなされる。ヒドロキシエチルβ−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン（例えば、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）、メチル化β−シクロデキストリン、グルコシルβ−シクロデキストリン、およびスルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンは、それらの溶解性を改善するために化学修飾されたシクロデキストリンの例である。本発明のいくつかの局面において、化学修飾されたβ−シクロデキストリンを含めたβ−シクロデキストリンが使用される。いくつかの局面において、化学修飾されたβ−シクロデキストリンは、ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリンまたはスルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンである。いくつかの局面において、シクロデキストリンは、化学修飾されたガンマシクロデキストリンを含めたガンマシクロデキストリンである。いくつかの局面において、シクロデキストリンは、ヒドロキシプロピルシクロデキストリン（例えば、ＨＰ４．３−β−シクロデキストリン、ＨＰ５．５−β−シクロデキストリン、ＨＰ７．６−β−シクロデキストリン、およびＨＰ４．５−γ−シクロデキストリン）である。他の局面において、シクロデキストリンは、スルホブチルエーテル（ｓｕｌｆｏｂｕｙｔｌｅｔｈｅｒ）β−シクロデキストリン（例えば、ＳＢＥ６．６−β−シクロデキストリン、ＳＢＥ６．７−β−シクロデキストリン、ＳＢＥ６．８−β−シクロデキストリン、ＳＢＥ４．１−β−シクロデキストリン、およびＳＢＥ４．６Ｅｔ３．５−β−シクロデキストリン）である。また他の局面において、シクロデキストリンは、スルホブチルエーテルγ−シクロデキストリン（例えば、ＳＢＥ４．３−γ−シクロデキストリン、ＳＢＥ４．６−γ−シクロデキストリン、ＳＢＥ５．２−γ−シクロデキストリン、およびＳＢＥ５．６Ｅｔ６．３−γ−シクロデキストリン）である。本明細書において使用する場合、「化学修飾されたベータシクロデキストリン」は、その親シクロデキストリン（すなわち、修飾されていないシクロデキストリン）と比較して、少なくとも改善された溶解性を有するように化学修飾されたベータシクロデキストリンである。
製剤
本発明は、ベンゾジアゼピンＡＤＣおよびベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含む混合物（結合体化反応混合物およびクエンチされた結合体化反応混合物を含む）、ＴＦＦ被保持物製剤、ならびにベンゾジアゼピンＡＤＣおよびシクロデキストリンを含む医薬製剤を提供する。ＴＦＦ被保持物製剤とは、ＴＦＦを使用して精製されたが最終的な製剤化がなされていないＡＤＣ混合物をいう。
シクロデキストリンは、少なくとも約１％ｗ／ｖ、少なくとも約２％ｗ／ｖのシクロデキストリン、少なくとも約３％ｗ／ｖのシクロデキストリン、または少なくとも約４％ｗ／ｖのシクロデキストリン（例えば、１％ｗ／ｖ、２％ｗ／ｖ、３％ｗ／ｖ、もしくは４％ｗ／ｖ）のレベルで、ＡＤＣ混合物に典型的に添加される。いくつかの局面において、本発明は、少なくとも約１％、少なくとも約２％ｗ／ｖのシクロデキストリン、少なくとも約３％ｗ／ｖのシクロデキストリン、少なくとも約３％ｗ／ｖのシクロデキストリンを含む結合体化反応混合物、少なくとも約１％、少なくとも約２％ｗ／ｖのシクロデキストリン、もしくは少なくとも約３％ｗ／ｖのシクロデキストリンを含むクエンチされた結合体化反応混合物、および／または少なくとも約１％、少なくとも約２％ｗ／ｖのシクロデキストリン、もしくは少なくとも約３％ｗ／ｖのシクロデキストリンを含むＴＦＦ被保持物製剤を提供する。いくつかの局面において、シクロデキストリンは、ＡＤＣ混合物（結合体化反応混合物、およびクエンチされた結合体化反応混合物を含む）ならびにＴＦＦ被保持物製剤中に、シクロデキストリン約２％または約３％ｗ／ｖからシクロデキストリン約３０％ｗ／ｖ、シクロデキストリン約２％または約３％ｗ／ｖからシクロデキストリン約１５％ｗ／ｖ、シクロデキストリン約２％または約３％ｗ／ｖからシクロデキストリン約１０％ｗ／ｖのレベルで存在する。いくつかの局面において、シクロデキストリンがベータシクロデキストリンである場合、少なくとも約２％または約３％のシクロデキストリンが、ＡＤＣ混合物またはＴＦＦ被保持物製剤中にある。いくつかの局面において、シクロデキストリンがガンマシクロデキストリンである場合、少なくとも約１％もしくは約２％のシクロデキストリンまたは約３％のシクロデキストリンが、ＡＤＣ混合物またはＴＦＦ被保持物製剤中にある。
シクロデキストリンは、約３％ｗ／ｖまたはそれより多いシクロデキストリンのレベルで医薬製剤中に典型的に存在する。いくつかの局面において、シクロデキストリンは、約５％ｗ／ｖもしくはそれより多い、または約６％ｗ／ｖもしくはそれより多いレベルで、医薬製剤中に存在する。いくつかの局面において、シクロデキストリンは、シクロデキストリン３％ｗ／ｖ、シクロデキストリン約５％ｗ／ｖもしくはシクロデキストリン約６％ｗ／ｖから、シクロデキストリン約３０％％ｗ／ｖのレベルで、またはシクロデキストリン約３％ｗ／ｖ、シクロデキストリン約５％ｗ／ｖもしくはシクロデキストリン約６％ｗ／ｖから、シクロデキストリン約１５％％ｗ／ｖのレベルで、またはシクロデキストリン約３％ｗ／ｖ、シクロデキストリン約５％ｗ／ｖもしくはシクロデキストリン約６％ｗ／ｖから、シクロデキストリン約１０％％ｗ／ｖのレベルで、またはシクロデキストリン約３％ｗ／ｖ、シクロデキストリン約５％ｗ／ｖもしくはシクロデキストリン約６％ｗ／ｖから、シクロデキストリン約８％％ｗ／ｖのレベルで、医薬製剤中に存在する。いくつかの実施態様において、シクロデキストリンは、約３％ｗ／ｖの濃度で存在する。他の実施態様において、シクロデキストリンは、約４％ｗ／ｖの濃度で存在する。さらに他の実施態様において、シクロデキストリンは、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖまたは約８％ｗ／ｖの濃度で存在する。いくつかの局面において、本明細書に記載の医薬製剤は、１μＭもしくはそれ未満、０．５μＭもしくはそれ未満、０．１μＭもしくはそれ未満、または０．０５μＭもしくはそれ未満のベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含む。
いくつかの局面において、本発明は、１μＭもしくはそれ未満、０．５μＭもしくはそれ未満、０．１μＭもしくはそれ未満、または０．０５μＭもしくはそれ未満のベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含むベンゾジアゼピンＡＤＣ医薬製剤およびＴＦＦ被保持物製剤を提供する。シクロデキストリンは、そのようなベンゾジアゼピンＡＤＣ製剤中に、シクロデキストリン約１％、約２％または約３％ｗ／ｖから、シクロデキストリン約３０％ｗ／ｖのレベルで、シクロデキストリン約１％、約２％または約３％ｗ／ｖから、シクロデキストリン約１５％ｗ／ｖのレベルで、シクロデキストリン約１％、約２％または約３％ｗ／ｖから、シクロデキストリン約１０％ｗ／ｖのレベルで存在し得る。いくつかの局面において、シクロデキストリンは、１μＭもしくはそれ未満、０．５μＭもしくはそれ未満、０．１μＭもしくはそれ未満、または０．０５μＭもしくはそれ未満のベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含むベンゾジアゼピンＡＤＣ医薬製剤およびＴＦＦ被保持物製剤中に、約５％もしくはそれより多いレベルで、または約６％もしくはそれより多いレベルで存在する。いくつかの局面において、シクロデキストリンは、そのような製剤中に、約１％、約２％、シクロデキストリン約３％ｗ／ｖ、シクロデキストリン約５％ｗ／ｖもしくはシクロデキストリン約６％ｗ／ｖから、シクロデキストリン約３０％％ｗ／ｖのレベルで、またはシクロデキストリン約３％ｗ／ｖ、シクロデキストリン約５％ｗ／ｖもしくはシクロデキストリン約６％ｗ／ｖから、シクロデキストリン約１５％％ｗ／ｖのレベルで、またはシクロデキストリン約３％ｗ／ｖ、シクロデキストリン約５％ｗ／ｖもしくはシクロデキストリン約６％ｗ／ｖから、シクロデキストリン約１０％％ｗ／ｖのレベルで、またはシクロデキストリン約３％ｗ／ｖ、シクロデキストリン約５％ｗ／ｖもしくはシクロデキストリン約６％ｗ／ｖから、シクロデキストリン約８％％ｗ／ｖのレベルで存在する。いくつかの実施態様において、シクロデキストリンは、約１％ｗ／ｖの濃度で存在する。いくつかの実施態様において、シクロデキストリンは、約２％ｗ／ｖの濃度で存在する。いくつかの実施態様において、シクロデキストリンは、約３％ｗ／ｖの濃度で存在する。他の実施態様において、シクロデキストリンは、約４％ｗ／ｖの濃度で存在する。また他の実施態様において、シクロデキストリンは、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖまたは約８％ｗ／ｖの濃度で存在する。
医薬製剤
本発明は、ベンゾジアゼピンＡＤＣおよびシクロデキストリンを含む医薬製剤を提供する。本発明者らは、約２％ｗ／ｖまたはそれ超のシクロデキストリンを含有するシクロデキストリン含有製剤は、製剤中に０．５％ｗ／ｖまたはそれ未満のシクロデキストリンを含有する製剤と比較して、凝集の速度および程度の低減を奏し、シクロデキストリンを含有しない製剤と比較して、酸性種の増大の低減を奏するということを発見した。本発明者らは、約６％ｗ／ｖまたはそれより多いシクロデキストリンを含有する製剤は、製剤中に２％ｗ／ｖまたはそれ未満のシクロデキストリンを含有する製剤と比較して、ベンゾジアゼピン薬物リンカーの化学的分解の低減を奏するということも発見した。したがって、一部において、本発明は、約６％ｗ／ｖのシクロデキストリンを含むベンゾジアゼピンＡＤＣは、より少量のシクロデキストリンを含有する製剤またはシクロデキストリンを全く含有しない製剤と比較して、改善された安定性を奏するという発見に基づいている。改善された安定性は、例えば、以下の１つまたは複数によって実証され得る：（ｉ）凝集の速度および程度の低減、（ｉｉ）酸性種の増大の低減、および（ｉｉｉ）薬物の化学的分解の低減。ある特定の局面において、本発明は、治療に使用するための安定化された液体または凍結乾燥ベンゾジアゼピンＡＤＣ製剤を提供する。特に、治療のためのベンゾジアゼピンＡＤＣが、長期間にわたって安定で、様々な投与経路を通じて投与され得るように安定化された製剤を提供する。そのような製剤は、例えば、ＡＤＣの抗体構成成分によって認識される抗原を発現する標的細胞に対して細胞傷害性または細胞増殖抑制効果を発揮することによる疾患または障害の処置（例えば、がんの処置）において使用する予定のベンゾジアゼピンＡＤＣにとりわけ有用である。
一局面において、本発明は、ベンゾジアゼピンＡＤＣ、シクロデキストリンおよび任意選択の少なくとも１種のバッファー剤を含み、バッファー剤が、生理学的に適したｐＨを維持する量で存在する、ベンゾジアゼピンＡＤＣ製剤を提供する。シクロデキストリンは、本明細書に記載のシクロデキストリンのいずれかであってよいが、好ましくは、ベータまたはガンマシクロデキストリン、より好ましくは、その親分子と比較してその溶解性を改善するために化学修飾されたベータシクロデキストリンである。いくつかの局面において、シクロデキストリンは、ガンマシクロデキストリンである。いくつかの局面において、ガンマシクロデキストリンは、その親分子と比較してその溶解性を改善するために化学修飾されている。特に好ましいシクロデキストリンは、ヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンまたはスルホブチルエーテルベータシクロデキストリンである。シクロデキストリンは、本明細書に記載の任意の濃度で製剤中に存在し得る。いくつかの局面において、シクロデキストリンは、約３％ｗ／ｖ、約４％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖもしくは約約６％ｗ／ｖまたはそれ超のレベルで製剤中に存在する、ガンマシクロデキストリン（修飾されていないもしくは化学修飾された分子）または化学修飾されたベータシクロデキストリン（例えば、メチル化ベータシクロデキストリン、グルコシルベータシクロデキストリン、ヒドロキシプロピルベータシクロデキストリン、もしくはスルホブチルベータシクロデキストリン）である。いくつかの局面において、シクロデキストリンは、シクロデキストリン３％ｗ／ｖ、シクロデキストリン約５％ｗ／ｖもしくはシクロデキストリン約６％ｗ／ｖから、シクロデキストリン約３０％％ｗ／ｖまでのレベルで、またはシクロデキストリン約３％ｗ／ｖ、シクロデキストリン約５％ｗ／ｖもしくはシクロデキストリン約６％ｗ／ｖから、シクロデキストリン約１５％％ｗ／ｖまでのレベルで、またはシクロデキストリン約３％ｗ／ｖ、シクロデキストリン約５％ｗ／ｖもしくはシクロデキストリン約６％ｗ／ｖから、シクロデキストリン約１０％％ｗ／ｖまでのレベルで、またはシクロデキストリン約３％ｗ／ｖ、シクロデキストリン約５％ｗ／ｖもしくはシクロデキストリン約６％ｗ／ｖから、シクロデキストリン約８％％ｗ／ｖまでのレベルで製剤中に存在する、ガンマシクロデキストリン（修飾されていないもしくは化学修飾された分子）または化学修飾されたベータシクロデキストリン（例えば、メチル化ベータシクロデキストリン、グルコシルベータシクロデキストリン、ヒドロキシプロピルベータシクロデキストリン、もしくはスルホブチルベータシクロデキストリン）である。
上述したように、本発明の水性ベンゾジアゼピンＡＤＣ製剤は、水溶液中で生理学的に適したｐＨを維持するためのバッファー剤を任意選択で含む。本明細書に記載の安定化された水性製剤に適したｐＨには、例えば、約６．０から約８．０、または約６．５から約７．５の範囲のｐＨが含まれる。ある特定の実施態様において、約６．８から約７．５、より典型的には、約７．０から約７．５、約７．１から約７．５、約７．２から約７．５、または約７．３から約７．５のｐＨで、ＡＤＣを製剤化することが望ましい場合がある。特定のバリエーションにおいて、ｐＨは約７．３である。特定のバリエーションにおいて、ｐＨは約７．２である。適したバッファーには、トリス（２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール）およびクエン酸塩のほか、記載したｐＨ範囲内で効果的であり、本明細書に記載の水溶液を形成するための凍結乾燥製剤の再構成時を含めて製剤化中に溶液が生理学的なｐＨにおおよそ達することを可能にする、他の生理学的に許容可能なバッファーが含まれる。そのようなバッファーの例には、酢酸塩、リン酸塩、コハク酸塩およびヒスチジンが含まれる。本発明に従った製剤のためのバッファーの例示的な濃度は、約５ｍＭから約１００ｍＭ、約５０ｍＭ、約１０ｍＭから約４０ｍＭ、または約２０ｍＭである。ある特定の実施態様について、トリスは、約５ｍＭから約５０ｍＭ、約１０ｍＭから約４０ｍＭ、または約２０ｍＭで含まれる。本発明に従った製剤のためのバッファーの他の適した濃度は、当業者によって容易に決定され得る。
ある特定のバリエーションにおいて、製剤（本明細書に記載の、凍結乾燥に適したもの、凍結乾燥形態から再構成されたもの、または水性製剤へ再構成するための凍結乾燥製剤など）は、抗体−薬物結合体を保護するための１種または複数の安定化剤を含有してもよい。安定化剤は、本明細書において、凍結乾燥用保護剤ともいう。典型的には、適した安定化剤は、糖またはアミノ酸である。例示的な安定化剤には、スクロース、トレハロース、マンニトール、ソルビトール、デキストロース、マルトース、デキストラン、アルギニン、グリシンおよびヒスチジンが含まれる。典型的には、製剤中の安定化剤（例えば、凍結乾燥用保護剤）の量は、再構成時に、結果として得られる製剤が実質的に等張性になるような量である。加えて、凍結乾燥用保護剤の量は、凍結乾燥時に、許容できない量のＡＤＣの分解／凝集が起こるような少な過ぎる量であってはならない。凍結乾燥用保護剤が糖（例えば、スクロースまたはトレハロース）である場合、水性製剤中での例示的な凍結乾燥用保護剤濃度は、約１％から約１０％（ｗ／ｖ）、より典型的には約２％から約８％（ｗ／ｖ）、より一層典型的には約４％から約８％（ｗ／ｖ）の範囲であってよい。特定のバリエーションにおいて、凍結乾燥用保護剤は、約６％（ｗ／ｖ）濃度のスクロースである。
いくつかの局面において、製剤中には、０．５Ｍまたはそれ未満のアルギニンがある。いくつかの局面において、製剤中には、０．２Ｍもしくは０．１Ｍまたはそれ未満のアルギニンがある。いくつかの局面において、製剤中にアルギニンはない。いくつかの局面において、製剤中にアミノ酸はない。
製剤中で使用するための追加的な添加剤には、例えば、塩（例えば塩化ナトリウム）、界面行性剤（例えば、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポロキサマー）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メチオニン、リンゴ酸）、ならびにポリエチレングリコール、プロピレングリコール、カルボキシメチルセルロースおよびピロリドンなどのその他の添加剤が含まれる。
本発明の医薬製剤中におけるＡＤＣ濃度は、典型的には、約０．１ｍｇ／ｍｌもしくは０．５ｍｇ／ｍｌから約５０ｍｇ／ｍｌまで、または約１ｍｇ／ｍｌから約３０ｍｇ／ｍｌまでの範囲である。より典型的には、ＡＤＣは、約１ｍｇ／ｍｌから、約５ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌもしくは約１５ｍｇ／ｍｌの濃度、または約約２ｍｇ／ｍｌから、約５ｍｇ／ｍｌもしくは約１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの局面において、ＡＤＣは、約０．６ｍｇ／ｍｌから約３ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。特定のバリエーションにおいて、ＡＤＣは、約１ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ、約３ｍｇ／ｍｌ、約４ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約６ｍｇ／ｍｌ、約７ｍｇ／ｍｌ、約８ｍｇ／ｍｌ、約９ｍｇ／ｍｌ、または約１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。
いくつかの実施態様において、本明細書に記載のＡＤＣ混合物、結合体化反応混合物、クエンチされた結合体化反応混合物、ＴＦＦ被保持物製剤ならびにベンゾジアゼピンＡＤＣおよびシクロデキストリンを含む医薬製剤中のＡＤＣの抗体構成成分は、以下から選択されるモノクローナル抗体である：それぞれのペアが１つの軽鎖および１つの重鎖を有する、免疫グロブリン鎖の２つの同一のペアからなる４量体；抗体Ｆｖ断片；抗体Ｆａｂ断片；抗体Ｆａｂ’（２）断片、抗体Ｆｄ断片、単鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖまたはｓｃＦｖ−Ｆｃ融合体）；または単一ドメイン抗体断片（Ｄａｂ）。特定のバリエーションにおいて、抗体は、第一および第二のポリペプチド鎖を含み、第一のポリペプチド鎖は、そのカルボキシル末端において軽鎖定常領域へ融合した軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含み、第二のポリペプチド鎖は、そのカルボキシル末端において重鎖定常領域へ融合した重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含む。このようなバリエーションにおいて、モノクローナル抗体は、典型的には、それぞれのペアが１つの軽鎖および１つの重鎖を有する、免疫グロブリン鎖の２つの同一のペアからなる４量体である。重鎖定常領域は、天然のヒト定常領域に対するＦｃγレセプターへの還元された結合を有する天然のヒト定常領域の天然発生形態または突然変異形態であってもよい。いくつかの実施態様において、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４から選択されるアイソタイプのものである。特定のバリエーションにおいて、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。
モノクローナル抗体を含めた抗体を生じる様々な方法は、当該分野において周知であり、本明細書に詳細には記載しない。本発明において使用する抗体は、インタクトな抗体またはその抗原結合断片であり得る。好ましい抗体は、ヒトまたはヒト化抗体、特にヒトまたはヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの局面において、抗体は、がん細胞の表面に発現されたがん細胞抗原に特異的に結合する。他の局面において、抗体は、自己免疫疾患状態に関連する、行性化したリンパ球に結合する。いくつかの局面において、抗体は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ７０、グリピカン−３、Ｌｉｖ−１またはＬｅｗｉｓ Ｙ抗原に特異的に結合する。
特定の実施態様において、抗体は、ヒトＣＤ３３の細胞外ドメインに特異的に結合する抗ＣＤ３３抗体である。例示的なヒトＣＤ３３配列には、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ２０１３８が割り当てられている。ある特定の実施態様において、抗ＣＤ３３抗体は、２Ｈ１２と呼ばれるマウス抗ＣＤ３３モノクローナル抗体の軽鎖および／または重鎖可変ドメイン相補性決定領域（それぞれ、配列番号１および２に示されているＶＬおよびＶＨドメインアミノ酸配列）を含む。したがって、いくつかのバリエーションにおいて、抗ＣＤ３３抗体は、配列番号５に示されているＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列、配列番号６に示されているＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列および配列番号７に示されているＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、ならびに／または配列番号８に示されているＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列、配列番号９に示されているＣＤＲ−Ｈ２アミノ酸配列および配列番号１０に示されているＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含む。いくつかの実施態様において、抗ＣＤ３３抗体は、ヒト化抗体である。例えば、上のようなＶＬおよび／またはＶＨドメインを含む抗ＣＤ３３抗体のある特定のバリエーションにおいて、ＶＬドメインは、配列番号１に示されているアミノ酸配列を有するマウス２Ｈ１２ＶＬドメインに由来するヒト化ＶＬドメインであり、かつ／またはＶＨドメインは、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するマウス２Ｈ１２ＶＨドメインに由来するヒト化ＶＨドメインである。特に好適なＶＬおよびＶＨドメインは、配列番号３および配列番号４とそれぞれ、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を有する。ある特定の実施態様において、抗ＣＤ３３抗体は、第一および第二のポリペプチド鎖を含み、第一のポリペプチド鎖は、そのカルボキシル末端において軽鎖定常領域（例えば、配列番号２１のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域）へ融合したＶＬドメインを含み、第二のポリペプチド鎖は、そのカルボキシル末端において重鎖定常領域（例えば、配列番号２２または配列番号２３のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域）へ融合したＶＨドメインを含む。そのようなバリエーションにおいて、抗ＣＤ３３抗体は、典型的には、それぞれのペアが１つの軽鎖および１つの重鎖を有する、免疫グロブリン鎖の２つの同一のペアからなる４量体である。本発明に従って使用するのに適した例示的な抗ＣＤ３３抗体は、２０１２年５月１８日出願の米国仮出願第６１／６４９，１１０号にも記載されており、その開示は、全ての目的のために参考としてその全体が本明細書において援用される。
他の実施態様において、抗体は、ヒトＣＤ７０の細胞外ドメインに特異的に結合する抗ＣＤ７０抗体である。例示的なヒトＣＤ７０配列には、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ３２９７０．２が割り当てられている。ある特定の実施態様において、抗ＣＤ７０抗体は、１Ｆ６と呼ばれるマウス抗ＣＤ７０モノクローナル抗体の軽鎖および／または重鎖可変ドメイン相補性決定領域（それぞれ、配列番号１１および１２に示されているＶＬおよびＶＨドメインアミノ酸配列）を含む。いくつかのそのようなバリエーションにおいて、抗ＣＤ７０抗体は、配列番号１５に示されているＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列、配列番号１６に示されているＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列および配列番号１７に示されているＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、ならびに配列番号１８に示されているＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列、配列番号１９に示されているＣＤＲ−Ｈ２アミノ酸配列および配列番号２０に示されているＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含む。いくつかの実施態様において、抗ＣＤ７０抗体は、ヒト化抗体である。例えば、上のようなＶＬおよびＶＨドメインを含む抗ＣＤ７０抗体のある特定のバリエーションにおいて、ＶＬドメインは、配列番号１１に示されているアミノ酸配列を有するマウス１Ｆ６ ＶＬドメインに由来するヒト化ＶＬドメインであり、かつ／またはＶＨドメインは、配列番号１２に示されているアミノ酸配列を有するマウス１Ｆ６ ＶＨドメインに由来するヒト化ＶＨドメインである。特に好適なＶＬおよびＶＨドメインは、配列番号１３および配列番号１４とそれぞれ、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を有する。ある特定の実施態様において、抗ＣＤ７０抗体は、第一および第二のポリペプチド鎖を含み、第一のポリペプチド鎖は、そのカルボキシル末端において軽鎖定常領域（例えば、配列番号２１のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域）へ融合したＶＬドメインを含み、第二のポリペプチド鎖は、そのカルボキシル末端において重鎖定常領域（例えば、配列番号２２のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域）へ融合したＶＨドメインを含む。そのようなバリエーションにおいて、抗ＣＤ７０抗体は、典型的には、それぞれのペアが１つの軽鎖および１つの重鎖を有する、免疫グロブリン鎖の２つの同一のペアからなる４量体である。本発明に従って使用するのに適した例示的な抗ＣＤ７０抗体は、米国特許第８，０６７，５４６号にも記載されており、その開示は、全ての目的のために参考としてその全体が本明細書において援用される。
例示的な抗ＣＤ３３および抗ＣＤ７０可変ドメインならびにＣＤＲ配列のほか、例示的な免疫グロブリン軽鎖および重鎖定常領域を、下記表１に示す。
Figure 2016512540
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前に述べた通り、例示的な本発明の医薬製剤は、（ｉ）製剤中にシクロデキストリンを０．５％ｗ／ｖもしくはそれ未満含有する製剤と比較したときの凝集の速度もしくは程度の低減、（ｉｉ）シクロデキストリンを含有しない製剤と比較したときの酸性種の増大の低減、および／または（ｉｉｉ）製剤中にシクロデキストリンを２％ｗ／ｖもしくはそれ未満含有する製剤と比較したときの薬物リンカー（例えばベンゾジアゼピン薬物）の化学的分解の低減を奏する。したがって、本発明は、（ｉ）製剤中にシクロデキストリンを２％ｗ／ｖまたはそれ未満含有する製剤と比較して改善された、ベンゾジアゼピン薬物の化学的分解に対する抵抗性、（ｉｉ）製剤中にシクロデキストリンを０．５％ｗ／ｖまたはそれ未満含有する製剤と比較して改善された、凝集に対する抵抗性、および（ｉｉｉ）シクロデキストリンを含有しない製剤と比較して改善された、酸性種の増大に対する抵抗性のうちの少なくとも１つを有する製剤を調製する方法を提供する。したがって、いくつかの局面において、約５％もしくは約６％ｗ／ｖまたはそれ超のシクロデキストリンを含む本発明の医薬製剤は、（ｉ）シクロデキストリンを２％またはそれ未満含有する製剤と比較して改善された、ベンゾジアゼピン薬物の化学的分解に対する抵抗性、（ｉｉ）シクロデキストリンを０．５％またはそれ未満含有する製剤と比較して改善された、凝集に対する抵抗性、および（ｉｉｉ）シクロデキストリンを０．５％またはそれ未満含有する製剤と比較して改善された、酸性種の増大に対する抵抗性のうちの少なくとも１つを奏する。したがって、いくつかの局面において、約５％もしくは約６％ｗ／ｖまたはそれ超のシクロデキストリンを含む本発明の医薬製剤は、（ｉ）シクロデキストリンを２％またはそれ未満含有する製剤と比較して改善された、ベンゾジアゼピン薬物の化学的分解に対する抵抗性、および（ｉｉ）シクロデキストリンを０．５％またはそれ未満含有する製剤と比較して改善された、凝集に対する抵抗性を奏する。他の局面において、約５％もしくは約６％ｗ／ｖまたはそれ超のシクロデキストリンを含む本発明の医薬製剤は、（ｉ）シクロデキストリンを２％またはそれ未満含有する製剤と比較して改善された、ベンゾジアゼピン薬物の化学的分解に対する抵抗性、（ｉｉ）シクロデキストリンを０．５％またはそれ未満含有する製剤と比較して改善された、凝集に対する抵抗性、および（ｉｉｉ）シクロデキストリンを０．５％またはそれ未満含有する製剤と比較して改善された、酸性種の増大に対する抵抗性を奏する。
本明細書に記載の混合物または製剤（医薬製剤を含む）のいずれかにおいて、ベンゾジアゼピンＡＤＣは、本明細書に記載のＰＢＤ２量体１、ＰＢＤ２量体２、ＰＢＤ２量体３、ＰＢＤ２量体４、ＰＢＤ２量体５、ＰＢＤ２量体６、ＰＢＤ２量体７、ＰＢＤ２量体８、ＰＢＤ２量体９、ＰＢＤ２量体１０、ＰＢＤ２量体１１、ＰＢＤ２量体１２、ＰＢＤ２量体１３、ＰＢＤ２量体１４、ＰＢＤ２量体１５、ＰＢＤ２量体１６またはＰＢＤ２量体１７と結合体化したヒト化２Ｈ１２またはヒト化１Ｆ６抗体を含むことができる。いくつかの局面において、ＰＢＤ２量体と抗体との結合化は、抗体中へ組み込み操作されたシステイン残基を介したものである。いくつかの局面において、システイン残基は、ＥＵインデックス（Ｋａｂａｔ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（アメリカ国立衛生研究所、ベセスダ、メリーランド州、１９８７年および１９９１年））によって決定して２３９位（ヒトＩｇＧ１）において、抗体中へ組み込み操作される。いくつかの局面において、製剤中の抗体当たり、平均して２つの薬物リンカーがある。
いくつかの実施態様において、本発明の医薬製剤は、バルク薬物製品としてしばしば有用な、ＡＤＣ（例えば、抗ＣＤ３３または抗ＣＤ７０ ＡＤＣ）の濃縮調合物を提供する。さらに、ある特定の実施態様において、本発明の医薬製剤は、凍結、凍結乾燥および／または再構成に対して安定である。
いくつかの局面において、本明細書に記載の医薬製剤は、約−８０℃から約８℃の温度にて保存される。一般的に、本医薬製剤は、これらの範囲で、安定であり生物学的行性を保持する。ある特定の局面において、本明細書に記載の製剤は、ストレスのある条件（例えば、２５℃または４０℃にて、７日間および１４日間などの長期間の保存）に曝露されたときに、シクロデキストリンを含有しない製剤と比較して、改善された安定性を有する。
本発明の医薬製剤は、様々な投与経路によって送達するのに適している。ある特定の実施態様において、医薬製剤は、静脈内、筋肉内または皮下などの非経口で投与される。がんの処置のためのＡＤＣの投与のため、医薬製剤は、静脈内または皮下投与によって体循環中へ送達してもよい。特定の実施態様において、医薬製剤は、静脈内送達用に製剤化される。静脈内投与は、例えば、３０〜９０分などの期間にわたる輸液、または単一のボーラス注射によるものであり得る。いくつかの局面において、投与は、末梢挿入中心カテーテル中へのゆっくりとしたＩＶプッシュ（すなわち、３０〜６０秒にわたる）を介する。
本発明の医薬製剤の効果的な用量は、投与手段、標的部位、患者の生理状態、患者がヒトであるか動物であるか、投与される他の薬、および処置が予防的であるか治療的であるかを含めた、多くの種々の因子に依存して変化する。通常、患者はヒトであるが、ヒトではない哺乳動物を処置することもできる。処置投与量は、安全性および有効性を最適化するため用量設定される必要がある。
本発明のＡＤＣ製剤のための例示的な投与量には、被験体の体重当たりで、約１．０μｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇから約３ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇから約２ｍｇ／ｋｇ、約１．０μｇ／ｋｇから１．０ｍｇ／ｋｇ、または約１．０μｇ／ｋｇから５００．０μｇ／ｋｇが含まれる。
投与の頻度は、因子の中でも、循環中の抗体−薬物結合体の半減期、患者の状態および投与の経路に依存する。頻度は、日ごと、週ごと、月ごと、四半期ごと、または患者の状態もしくは処置される状態（例えば、がん）の進行の変化に対応した不規則な間隔であり得る。静脈内投与の代表的な頻度は、連続的な一連の処置にわたって、週に２回と四半期ごととの間であるが、より高いもしくは低い頻度の投薬もまた可能である。静脈内投与の他の代表的な頻度は、連続的な一連の処置にわたって、週に１回または月に１回の間であるが、より高いもしくは低い頻度の投薬もまた可能であるが。皮下投与については、代表的な投薬頻度は、日ごとから月ごとであるが、より高いもしくは低い頻度の投薬もまた可能である。
容易な投与および投与量の均一性のための単位投与量形態の本発明の製剤を提供することは、とりわけ有利である。本発明の製剤は、例えば、カプセル、ガラスバイアル、アンプル、複数用量容器などに、液体または凍結乾燥形態のいずれで提示されてもよい。単位投与量形態は、本明細書に記載の任意の製剤を含んでもよい。いくつかの局面において、ＡＤＣは、凍結乾燥ケーキまたは粉末として、ＩＶ投与のための再構成用の単回使用のアンバーガラス中に保存される。再構成は、適切な希釈剤（例えば、注射用の水）を用いて、所望の濃度にされる。典型的には、再構成されたものは、再構成された溶液が、凍結乾燥する前の製剤と同じ構成成分濃度を有するように、十分な希釈剤を用いて再構成される。再構成された製品は、患者に投与されるべき用量レベルに応じて、さらに希釈してもよい。さらなる希釈は、例えば、注射のためには塩化ナトリウムを用いてなされる。本発明のいくつかの局面において、再構成または任意選択のさらなる希釈の直後に、ＡＤＣは、ＩＶ（例えば、ゆっくりとしたＩＶプッシュ）によって、中央静脈アクセス装置の適切な注入ポートへ投与される。輸液ラインは、典型的には、生理食塩水でフラッシュされる。
いくつかの局面において、本発明は、安定化された本発明のＡＤＣ製剤を含む医薬投与量単位形態を含む治療用製品（例えば、本明細書に記載の液体または凍結乾燥のいずれかの形態のＡＤＣ製剤を収容した密封容器）を提供する。治療用製品は、使用のためのラベリングをさらに含むことができる。いくつかの実施態様において、治療用製品は、例えば、患者において治療用量を達成するために必要な適切な容量を用いるための使用説明書をさらに含むキットとして提供される。単位投与量形態、容器またはキットは、複数回使用のために十分な製剤を提供するように設計されてもよく、または単回使用のためのものであってもよい。いくつかの実施態様において、キットは希釈剤をさらに含む。
異なる時点で、アクセッション番号に、異なるバージョンの配列が関連付けられている場合、本出願の有効な出願日においてアクセッション番号に関連付けられているバージョンを意味する。有効な出願日とは、該当する場合は、アクセッション番号に言及する、実際の出願日または優先権出願の早い方を意味する。同様に、異なる時点で刊行物の異なるバージョンが発行されていた場合、異なる指示がない限り、本出願の有効な出願日に最も近く発行されたバージョンを意味する。本発明の任意の特徴、工程、要素、実施態様、または局面は、特に異なって指示されない限り任意の他のものと組み合わせて用いられ得る。本発明は、明快さおよび理解のため、例証または例示の形で一部の詳細を説明されたが、添付された特許請求の範囲の範囲内で、特定の変化または改変を行い得るということが明らかである。上記または以下で言及される全ての特許出願、ウェブサイト、他の刊行物、アクセッション番号等は、それぞれの個々の項目が、具体的および個々にそのように参考として援用されることが示されている場合と同程度に、その全体が本明細書において全ての目的のために参考として援用される。
ＰＢＤ２量体１〜４およびそれらの合成は、ＷＯ２０１１／１３０６１３に記載されている。ＰＢＤ２量体５〜１０および１６は、ＷＯ２０１１／１３０６１３Ａ１に記載の方法を使用して合成することができる。簡潔に言うと、ＰＢＤ２量体９および１６は、ＷＯ２０１１／１３０６１３Ａ１におけるＣ３繋ぎ鎖で繋がれたビストリフレート中間体８ａを通じて達成可能である。ボロン酸またはピナコールボロネートとして望ましいＣ２アリール基は、一連の鈴木カップリングとイミン官能基を出現させるためのその後のＳＥＭジラクタム還元において導入される。ＰＢＤ２量体５〜８および１０は、ＷＯ２０１１／１３０６１３Ａ１におけるＣ５繋ぎ鎖で繋がれたビストリフレート中間体８ｂから、同様にして調製される。Ｃ２アリール基中にエステルまたはカルボン酸を含有するＰＢＤ２量体１１〜１５は、ＷＯ２０１１／１３０６１３Ａ１に記載の方法を、微少な改変を加えて用いて、達成され得る。ＰＢＤ２量体１３は、ＷＯ２０１１／１３０６１３Ａ１におけるＣ３繋ぎ鎖で繋がれたビストリフレート中間体８ａから調製され得る。ビストリフレートは、アミノ官能基を有するＣ２アリール基を組み込むため、適切に官能化されたボロン酸またはピナコールボロネートを用いた鈴木カップリングを介して脱対称化される。結果として得られたモノトリフレートは、その後、リチウムトリエチルボロヒドリドを用いてＳＥＭカルビノールへ還元され、これは、その後、メチルエステルを含有するＣ２アリール基を組み込むため、第二の鈴木カップリングへ送られる。最後に、ＳＥＭカルビノールは、ＷＯ２０１１／１３０６１３Ａ１に記載のように、シリカゲルを用いた３日間の撹拌を介して、イミンに転換される。ＰＢＤ２量体１２および１４は、ＷＯ２０１１／１３０６１３Ａ１におけるＣ５繋ぎ鎖で繋がれたビストリフレート８ｂから出発して、同じ方法で調製することができる。遊離カルボン酸（１１および１５）へのＰＢＤエステルの転換は、けん化を介して達成することができる。ＩｇＧ１ ｍＡｂのシステイン突然変異体の調製は、ＵＳ２０１００１５８９０９に一般化して記載されている。
以下の実施例において使用されるＰＢＤ薬物リンカーは、以下の通りである。抗体への薬物リンカーの結合体化は、ＷＯ２０１１／１３０６１３Ａ１に記載の通りである。
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以下の実施例において言及されるクエンチされた薬物リンカーは、以下の構造を有する。
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ＰＢＤ薬物リンカーは、重鎖の２３９位を介してｈ２Ｈ１２ｅｃ抗体またはｈ１Ｆ６ｅｃと結合させた（抗体の名称の後の記号「ｅｃ」は、組み込み操作されたシステインを２３９位に有する抗体を指す）。簡潔に言うと、２３９位（ＥＵインデックスによるナンバリング）に導入されたシステインを有するｈ２Ｈ１２およびｈ１Ｆ６を、還元し、部分的に再酸化し（すなわち、鎖間ジスルフィドについて再酸化し）、ＷＯ２０１１／１３０６１３に記載の方法を使用してＰＢＤ薬物リンカーと結合してＡＤＣを形成した。ＰＢＤ薬物リンカーは、導入されたシステイン残基を介して、部分的に再酸化された抗体と結合された（平均して、抗体当たり２つの薬物リンカー）。ｈ２Ｈ１２−１は、化合物１と結合体化したヒト化２Ｈ１２ｅｃ抗体を指し、ｈ１Ｆ６−１は、化合物１と結合体化したヒト化１Ｆ６ｅｃ抗体を指す。ｈ２Ｈ１２−２は、化合物２と結合体化したヒト化２Ｈ１２ｅｃ抗体を指し、ｈ１Ｆ６−２は、化合物２と結合体化したヒト化１Ｆ６ｅｃ抗体を指す。ｈ２Ｈ１２−３は、化合物３と結合体化したヒト化２Ｈ１２ｅｃ抗体を指し、ｈ１Ｆ６−３は、化合物３と結合体化したヒト化１Ｆ６ｅｃ抗体を指す。実施例４〜７は、２３９位に導入されたシステインを介して化合物１と結合体化したｈ２Ｈ１２ｅｃまたはｈ１Ｆ６ｅｃ抗体のいずれかを使用して行われた。
（実施例１）６つのＰＢＤ ＡＤＣ全てについて凝集の速度および程度が低減したシクロデキストリン系製剤
透析、バッファー交換カラムまたは遠心ろ過を使用して出発物質を試験製剤バッファーへバッファー交換することによって、製剤を調製した。製剤は、図の凡例に示した通りである。存在すると示されている場合のアルギニンの濃度は、０．５Ｍである。最終ＡＤＣ濃度は、ＵＶ分光分析によって決定して１．３ｍｇ／ｍＬから３．１ｍｇ／ｍＬの範囲であった。製剤化したＡＤＣは、予め殺菌した試験管に充填し、以下のＩＣＨ条件にて保存した：２〜８℃、２５℃／６５％ＲＨ、および／または４０℃／７５％ＲＨ。％ＨＭＷは、サイズ排除クロマトグラフィーを使用してモニターした。図１の製剤はｈ２Ｈ１２−１を含有し、保存は２５℃であり、図２の製剤はｈ１Ｆ６−１を含有し、保存は２５℃であり、図３の製剤はｈ２Ｈ１２−３を含有し、保存は４０℃であり、図４の製剤はｈ１Ｆ６−３を含有し、保存は４０℃であり、図５の製剤はｈ２Ｈ１２−２を含有し、保存は４０℃であり、図６の製剤はｈ１Ｆ６−２を含有し、保存は４０℃であり、図１３の製剤はｈ１Ｆ６−１を含有し、保存は２５℃である。
（実施例２）６つのＰＢＤ ＡＤＣのうちの５つについて酸性種の増大が低減したＨＰＢＣＤ系製剤
透析、バッファー交換カラムまたは遠心ろ過を使用して出発物質を試験製剤バッファーへバッファー交換することによって、製剤を調製した。製剤は、図の凡例に示した通りである。存在すると示されている場合のアルギニンの濃度は、０．５Ｍである。最終ＡＤＣ濃度は、ＵＶ分光分析によって決定して１．３ｍｇ／ｍＬから３．１ｍｇ／ｍＬの範囲であった。製剤は、予め殺菌した試験管に充填し、以下のＩＣＨ条件にて保存した：２〜８℃、２５℃／６５％ＲＨ、および／または４０℃／７５％ＲＨ。サンプルは、イメージングキャピラリー等電点電気泳動によって、荷電分布（％酸性種、％主要部、％塩基性種）について分析した。図７の製剤はｈ２Ｈ１２−１を含有し、保存は２５℃であり、図８の製剤はｈ１Ｆ６−１を含有し、保存は２５℃であり、図９の製剤はｈ２Ｈ１２−３を含有し、保存は４０℃であり、図１０の製剤はｈ１Ｆ６−３を含有し、保存は４０℃であり、図１１の製剤はｈ２Ｈ１２−２を含有し、保存は４０℃であり、図１２の製剤はｈ１Ｆ６−２を含有し、保存は４０℃である。
（実施例３）薬物リンカーの化学的分解が低減したＨＰＢＣＤ系製剤
透析、バッファー交換カラムまたは遠心ろ過を使用して出発物質を試験製剤バッファーへバッファー交換することによって、製剤を調製した。概して、製剤としては、対照としての初期製剤（主にアルギニン）、バッファー、シクロデキストリン３％およびシクロデキストリン６％が含まれていた。最終ＡＤＣ濃度は、ＵＶ分光分析によって決定して１．３ｍｇ／ｍＬから３．１ｍｇ／ｍＬの範囲であった。製剤は、予め殺菌した試験管に充填し、以下のＩＣＨ条件にて保存した：２〜８℃、２５℃／６５％ＲＨ、および／または４０℃／７５％ＲＨ。薬物リンカーの安定性は、還元ＰＬＲＰ／ＭＳを使用した分解物の％、またはペプシン消化マップを使用した、インタクトな薬物リンカーの％によって測定された。結果は、左欄に挙げた製剤について、以下の通りである。表２は、シクロデキストリンを６％含有する製剤が、４０℃にて１週間後に、シクロデキストリンを２％含有する製剤より少ない薬物リンカー分解を示したということを実証している。表３は、シクロデキストリンを６％含有するｈ２Ｈ１２−１製剤が、２５℃にて１週間後に少ない薬物リンカー分解を示したということを実証しており、表４は、ｈｐｂシクロデキストリンを６％含有するｈ１Ｆ６−１製剤が、４０℃にて１週間のインキュベーション後に、インタクトな薬物リンカーを高いレベルで維持したということを実証している。
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（実施例４）シクロデキストリン濃度プロファイル
この実験は、ｈ２Ｈ１２−１を含むクエンチされた結合体化反応混合物（ＱＣＲ）のダイアフィルトレーション中の凝集を防ぐための、ダイアフィルトレーションバッファーの構成成分としてのヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ｈｐｂ−ＣＤ）３ｗ／ｖ％の有用性を試験したものである。この実験の第一の目的は、ダイアフィルトレーションに用いられる膜がｈｐｂ−ＣＤを透過させ得るか否かを決定することにあった。膜がｈｐｂ−ＣＤを透過させにくい場合は、バッチ中のその濃度は、ダイアフィルトレーションバッファー中の濃度を超えて増加することになるのに対し、透過させやすい場合は、バッチ中のｈｐｂ−ＣＤ濃度は、ダイアフィルトレーションバッファー中の濃度に達して、そのレベルを維持することになる。
ダイアフィルトレーション（ＤＦ）プロセスでは、３０ｋＤ分子量の孔サイズを有するＭｉｌｌｉｐｏｒｅの８８ｃｍ２のＵｌｔｒａｃｅｌ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ３カセットを使用した。ＤＦのバッチ容量は２５０ｍＬであり、供給流速はプロセス中を通じて４０ｍｌ／分であり、被保持物バルブは、透過膜圧約２０ｐｓｉを維持するように調整した。一定のバッチ容量を維持するためのダイアフィルトレーションバッファー添加速度は、９ｍＬ／分で始めたが、プロセスのほとんどを通じて１３〜１４ｍｌ／分に維持した。サンプルは、各ダイアフィルトレーション容量の完了後に取り出した。ｈｐｂ−ＣＤの濃度は、蒸発光散乱検出によるＲＰ ＨＰＬＣアッセイを使用して、各サンプル中で測定した。
結果は、ｈｐｂ−ＣＤの濃度が、ダイアフィルトレーションの開始時の０から、５個のダイアフィルトレーション容量にわたり２．８〜２．９重量％に増加し、その後、追加の５個のダイアフィルトレーション容量の間は一定を維持することを示した（図１４）。ｈｐｂ−ＣＤの濃度プロファイルは、使用する限外ろ過膜を透過しやすい試薬と一致する。
（実施例５）シクロデキストリン３％および１０％ｗ／ｖを用いた接線流ろ過
この実験においては、ｐＨ８．０のトリス５０ｍＭ／ＥＤＴＡ５ｍＭ中に、ｈ２Ｈ１２−１、プロピレングリコール５０ｗ／ｗ％、クエンチされた薬物リンカー（化合物４）およびＮＡＣを含有するＱＣＲを利用した。この混合物を、ｐＨ８．０のトリス５０ｍＭ／ＥＤＴＡ５ｍＭ中のｈｐｂ−ＣＤ５０ｗ／ｖ％溶液の２５体積％を添加することによって、ｈｐｂ−ＣＤ１０ｗ／ｖ％にした。その後、この混合物を、実施例４と同様の条件であるが適切な規模にしたダイアフィルトレーションに付した。サンプルを各ダイアフィルトレーション容量の後に取り出し、分析まで凍結した。クエンチされた薬物リンカーの濃度を、各サンプル中で決定した。クエンチされた薬物リンカーの濃度は、ｌｎ（Ｃ／Ｃ０）とダイアフィルトレーション容量＃との間の直線関係：Ｃ／Ｃ０＝ｅｘｐ（−ＳＮ）によって示される、定容ダイアフィルトレーションを通じた排除についての確立されたモデルに従うようにして、ダイアフィルトレーション全体を通じて下降した。ＣおよびＣ０は測定される被検体の濃度であり、Ｎはダイアフィルトレーション容量数であり、Ｓは、ふるい係数であって、膜の透過側の被検体濃度を膜の被保持物側の被検体濃度で割ったものとして定義される。開始濃度は１６．３μＭであり、最終濃度は０．１４μＭであった。
ｈｐｂ−ＣＤが１０ｗ／ｖ％存在すると、クエンチされたＰＢＤ薬物リンカーは、このダイアフィルトレーションプロセスにおいて効果的に排除される（図１５）。ｈｐｂ−ＣＤが存在しないとある一定のダイアフィルトレーション容量数の後に排除が止まった前の実験とは異なり、この実験においては、排除は非常に低いレベルに到り、効果的であった。実験は、試験した条件下で効果的で完全な排除を達成し得ることを実証している。
実験を、より低いｈｐｂ−ＣＤ濃度で繰り返した（図１５）。ｈｐｂ−ＣＤ３ｗ／ｖ％を１０％に置き換えると、本質的に同一の排除が観察された。
（実施例６）ＱＣＲ混合物からの薬物関連不純物の排除
実施例４および５に記載の実験は、シクロデキストリンを使用したダイアフィルトレーションプロセスによって、クエンチされたＰＢＤ薬物リンカーを混合物から除去し得ることを示した。この実験の目的は、この方法が、クエンチされたＰＢＤ薬物リンカーの出発濃度がより高いＱＣＲから、クエンチされた薬物リンカーをうまく清浄化できるかどうかを決定することにあった。
保存されていた凍結還元抗体（鎖間ジスルフィドではなく２３９位について還元されたｈ２Ｈ１２）を解凍した。プロピレングリコール（ＰＧ）、続いて薬物リンカーＰＧ／ＤＭＡ（化合物１）を添加して、結合体化反応混合物を形成した。混合物は、ＰＧ５０％（ｖ／ｖ）および過剰の薬物リンカー（化合物４）を含有していた。反応を約９０分進行させ、その後、ＮＡＣ３．０当量（薬物リンカーに対して）を添加し、クエンチ反応を約３０分進行させた。
十分なｈｐｂ−ＣＤ５０ｗ／ｗ％保存溶液を添加して、クエンチされた結合体化反応ｈｐｂ−ＣＤ濃度を３％とした。８８ｃｍ２の再生セルロース膜を使用して、ＴＦＦ供給ポンプをオンにすることによってＴＦＦプロセスを開始した。高いパーセントのＰＧを含有する溶液についての前のＴＦＦプロセスと同じように、初めの流速は、高い透過膜圧のため限定されていたが、最初のダイアフィルトレーション容量の間に、供給流速は、膜についての推奨される操作範囲まで徐々に増加し得た。その後、被保持物バルブを調整して、２０ｐｓｉのＴＭＰを維持した。ダイアフィルトレーションバッファーを添加して、一定容量を維持した。プロセスを２０個のダイアフィルトレーション容量について継続させ、各ダイアフィルトレーション容量の後にサンプルを取り、次の分析のために凍結した。
精製プロセスの間にわたって取られたサンプルにおける溶液中のクエンチされたＰＢＤ薬物リンカー（化合物４）の濃度の測定によって、材料がＴＦＦプロセスによって清浄化されたことが示された。濃度は２７．４７μＭで開始し、２０個のダイアフィルトレーション容量の後に０．０３μＭまで下降し、クエンチされたＰＢＤ薬物リンカーが、ＱＣＲ溶液からＴＦＦによって清浄化され得ることが示された（図１６）。最終生成物サンプルの分析では、平均薬物負荷および分布、ジスルフィド結合の完全性、電荷分布ならびにＵＶスペクトルは、このプロセスによって悪影響を受けないことが示された（データ示さず）。
（実施例７）２Ｈ１２ＡＤＣまたはｈ１Ｆ６ＡＤＣを含むＱＣＲ混合物からの薬物関連不純物の排除
ＴＦＦプロセスを、クエンチされた結合体化反応混合物に対して、分子量３０ｋＤをカットオフする０．１ｍ２のＵｌｔｒａｃｅｌ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ３膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して行った。初めは流速によって、その後は被保持物バルブによって、ＴＭＰを２０ｐｓｉに維持した。ＴＦＦプロセスは、２０個のダイアフィルトレーション容量で行い、２個のダイアフィルトレーション容量毎にサンプルを採取した。クエンチされたＰＢＤ薬物リンカーの濃度を、各サンプル中で決定した。
２Ｈ１２ ＡＤＣを含むＱＣＲ混合物を用いた１つの実験において、クエンチされたＰＢＤ薬物リンカー（化合物４）の濃度は、ＴＦＦプロセスの間に２９．５６ｍＭから０．０２ｍＭへ下降した。排除プロットは、ふるい係数が約０．４の直線であった。ＴＦＦ工程中の回収についてのデータは入手できないが、ＡＤＣについての全体の収量は９５％超であり、したがってＴＦＦプロセス中の損失は５％未満であった（図１７）。
ＴＦＦは、ｈｐｂ−ＣＤが３％存在すると、クエンチされたＰＢＤ薬物リンカーの排除に、カーボンろ過と同じくらい効果的である。ＴＦＦプロセス中の薬物関連不純物についての検討に基づくと、１４個のダイアフィルトレーション容量が、十分に低い不純物レベルを確実に達成するのに十分であると概算される。
ｈ１Ｆ６ ＡＤＣを含むＱＣＲ混合物を用いた１つの実験において、クエンチされたＰＢＤ薬物リンカー（化合物４）の濃度は、ＴＦＦプロセス中に２１．２ｍＭから０．１μＭまで下降した。排除プロットは、ふるい係数が約０．６の直線であった（図１８）。
（実施例８）シクロデキストリンなしでの接線流ろ過を使用したベンゾジアゼピンＡＤＣの精製
クエンチされた薬物リンカー（化合物４）を、定容ダイアフィルトレーションを使用して、ＱＣＲから精製した。クエンチされた結合体化反応混合物を、接線流ろ過装置内へ導入した。クエンチされた結合体化反応混合物は、トリス、ＮａＣｌ、およびプロピレングリコール５０％を含む。接線流ろ過バッファーも、トリス、ＮａＣｌ、およびプロピレングリコール５０％を含む。一連の限外ろ過／ダイアフィルトレーションの後、１．１μＭのベンゾジアゼピン薬物関連不純物が混合物中に残留し、その際、４個のダイアフィルトレーション容量の後に排除が失速した（データ示さず）。
（実施例９）細胞傷害性
シクロデキストリンを６％含有するＡＤＣ製剤が細胞傷害行性を保持しているかどうかを決定するため、細胞傷害性研究を行った。結果は、ＡＤＣ製剤が細胞傷害行性を保持していることを実証していた（データ示さず）。
（実施例１０）クエンチされていない結合体化反応混合物からの薬物関連不純物の排除
７．５７のＳｌｏｇＰ値を有するクエンチされていないＰＢＤ薬物リンカー（化合物１）を、定容ダイアフィルトレーションを使用して、クエンチされていない結合体化反応混合物から精製した。シクロデキストリンは、３％に維持した。驚くべきことに、クエンチされていないＰＢＤリンカーの排除（データ示さず）は、前の実施例に示したクエンチされたＰＢＤ薬物リンカーの排除ほど効率的ではなかった。この実験は、ＰＢＤ薬物リンカーの疎水性を低くすること（化合物４は５．７６のＳｌｏｇＰ値を有する）によって排除が改善されることを実証した。

Claims (64)

  1. ベンゾジアゼピンＡＤＣおよびベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含む混合物からベンゾジアゼピン薬物関連不純物を除去する方法であって、ベンゾジアゼピンＡＤＣおよびベンゾジアゼピン薬物関連不純物を含む混合物を、該混合物中で少なくとも約１％ｗ／ｖのシクロデキストリン濃度を維持しながら接線流ろ過に供する工程を含む、方法。
  2. 前記シクロデキストリンが、接線流ろ過の開始時に前記混合物中に存在する、請求項１に記載の方法。
  3. 前記シクロデキストリンが、ベンゾジアゼピン薬物関連不純物の実質的な除去の前に前記混合物に添加され、シクロデキストリンが、該混合物中で少なくとも約１％ｗ／ｖの濃度でその後維持される、請求項１に記載の方法。
  4. 少なくとも約２％のシクロデキストリン濃度が前記混合物中で維持される、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
  5. 少なくとも約３％の濃度が前記混合物中で維持される、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
  6. 前記接線流ろ過が、定容ダイアフィルトレーションである、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
  7. 接線流ろ過装置が、ポンプ；入口、ろ液出口、被保持物出口を有するろ過ホルダー；約５０Ｋｄまたはそれより小さい孔サイズを有する限外ろ過膜であって、該ろ液出口を通って該ろ過ホルダーから出る前に全てのろ液が該入口に入り該限外ろ過膜を通り抜けるように、該ろ過ホルダーを上流区画と下流区画とに分ける限外ろ過膜；結合体化反応混合物を保持するためのサンプル貯留槽；および該サンプル貯留槽と流体連通しているバッファー貯留槽を含み、該バッファー貯留槽中のバッファーが、少なくとも約１％ｗ／ｖのシクロデキストリン、少なくとも約２％ｗ／ｖのシクロデキストリン、または少なくとも約３％ｗ／ｖのシクロデキストリンを含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
  8. 前記バッファーが、ろ液流と同じ速度でろ過容量を置き換え、前記接線流ろ過装置中の容量を一定に維持する、請求項７に記載の方法。
  9. 前記ろ過が不連続ダイアフィルトレーションである、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
  10. （ｉ）ベンゾジアゼピンＡＤＣを含む結合体化反応混合物を形成するのに十分な条件下で、抗体をベンゾジアゼピン薬物リンカーと接触させる工程、および（ｉｉ）該反応混合物をクエンチング剤と接触させて、クエンチされた結合化反応混合物を形成する工程をさらに含み、接線流ろ過に供される前記混合物が、クエンチされた結合体化反応混合物である、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
  11. 前記ベンゾジアゼピン薬物関連不純物が、クエンチされたベンゾジアゼピン薬物リンカーである、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 前記クエンチされたベンゾジアゼピン薬物リンカーが、７．５０を超えないまたは６．５を超えないＳｌｏｇＰ値を有する、請求項１１に記載の方法。
  13. 前記ベンゾジアゼピン薬物関連不純物が、約１μＭもしくはそれ未満、０．５μＭもしくはそれ未満、０．１μＭもしくはそれ未満、または０．０５μＭもしくはそれ未満のレベルまで低減される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
  14. 前記シクロデキストリンが、化学修飾されたベータシクロデキストリンである、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
  15. 前記シクロデキストリンが、ヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンまたはスルホブチルエーテルベータシクロデキストリンである、請求項１４に記載の方法。
  16. 前記シクロデキストリンが、ヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンである、請求項１５に記載の方法。
  17. 前記ベンゾジアゼピンＡＤＣが、ピロロベンゾジアゼピン２量体と結合体化したモノクローナル抗体である、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
  18. 前記ピロロベンゾジアゼピン２量体が、
    Figure 2016512540
    またはその塩である、請求項１７に記載の方法。
  19. 前記ベンゾジアゼピンＡＤＣが、以下の通り
    Figure 2016512540
    （式中、Ａｂはモノクローナル抗体であり、ｐは、前記混合物中の抗体当たりの薬物リンカー分子の平均数を表し、約２である）
    またはその塩である、請求項１８に記載の方法。
  20. 前記ベンゾジアゼピン薬物関連不純物が、クエンチされた薬物リンカーであり、クエンチ前の該薬物リンカーが、式
    Figure 2016512540
    を有する、またはその塩である、請求項１８または１９に記載の方法。
  21. 前記ベンゾジアゼピンＡＤＣが、インドリノベンゾジアゼピン２量体またはオキサゾリジノベンゾジアゼピン２量体と結合体化したモノクローナル抗体である、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
  22. 前記請求項のいずれか一項に記載の方法を使用して精製された混合物。
  23. 製剤中にベンゾジアゼピン薬物関連不純物を０．１μＭまたはそれ未満含む、ベンゾジアゼピンＡＤＣ製剤。
  24. ベンゾジアゼピンＡＤＣ、および
    約３％ｗ／ｖから約３０％ｗ／ｖの濃度のシクロデキストリン
    を含む、医薬製剤。
  25. 少なくとも１種のバッファー剤をさらに含み、水溶液であり、該少なくとも１種のバッファー剤の濃度が生理学的に適したｐＨを維持するのに効果的である、請求項２４に記載の医薬製剤。
  26. 前記シクロデキストリンが、約５％ｗ／ｖまたは約６％ｗ／ｖから、約３０％ｗ／ｖまでの濃度で存在する、請求項２４または２５に記載の医薬製剤。
  27. 前記シクロデキストリンが、約６％ｗ／ｖから約１０％ｗ／ｖの濃度で存在する、請求項２６に記載の医薬製剤。
  28. 凍結乾燥用保護剤をさらに含む、請求項２４から２７のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  29. 前記少なくとも１種の凍結乾燥用保護剤が糖である、請求項２８に記載の医薬製剤。
  30. 前記糖がスクロースである、請求項２９に記載の医薬製剤。
  31. 前記凍結乾燥用保護剤が、約４％から約８％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、請求項２８から３０のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  32. 前記凍結乾燥用保護剤が、約６％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、請求項３１に記載の医薬製剤。
  33. 約６．０から約８．０のｐＨを有する、請求項２４から３２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  34. ６．５から７．５のｐＨを有する、請求項３３に記載の製剤。
  35. 約７．３のｐＨを有する、請求項３４に記載の製剤。
  36. 前記少なくとも１種のバッファー剤が、トリス、酢酸塩、ヒスチジン、クエン酸塩、リン酸塩およびコハク酸塩からなる群から選択される、請求項２５から３５のいずれか一項に記載の製剤。
  37. 前記少なくとも１種のバッファー剤が、約２０ｍＭの濃度のトリスである、請求項３６に記載の製剤。
  38. 前記ベンゾジアゼピンＡＤＣが、約０．５ｍｇ／ｍｌから約３０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項２４から３７のいずれか一項に記載の製剤。
  39. 前記ベンゾジアゼピンＡＤＣが、約０．５ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌまたは２ｍｇ／ｍｌから、約１０ｍｇ／ｍｌまでの濃度で存在する、請求項３８に記載の製剤。
  40. 前記ベンゾジアゼピンＡＤＣ濃度が、約２ｍｇ／ｍｌから約５ｍｇ／ｍｌである、請求項３９に記載の製剤。
  41. 前記ベンゾジアゼピンＡＤＣ濃度が、約３ｍｇ／ｍｌである、請求項４０に記載の製剤。
  42. 前記シクロデキストリンが、化学修飾されたベータシクロデキストリンである、請求項２３から４１のいずれか一項に記載の製剤。
  43. 前記シクロデキストリンが、ヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンまたはスルホブチルエーテルベータシクロデキストリンである、請求項４２に記載の製剤。
  44. 前記シクロデキストリンが、ヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンである、請求項４２に記載の製剤。
  45. 前記ベンゾジアゼピンＡＤＣが、ピロロベンゾジアゼピン２量体と結合体化したモノクローナル抗体である、請求項２３から４４のいずれか一項に記載の製剤。
  46. 前記ピロロベンゾジアゼピン２量体が、
    Figure 2016512540
    または薬学的に許容可能なその塩である、請求項４５に記載の製剤。
  47. 前記ベンゾジアゼピンＡＤＣが、以下の通り
    Figure 2016512540
    （式中、Ａｂはモノクローナル抗体であり、ｐは、前記製剤中の抗体当たりの薬物リンカー分子の平均数を表し、約２である）
    または薬学的に許容可能なその塩である、請求項４６に記載の製剤。
  48. 前記ベンゾジアゼピンＡＤＣが、インドリノベンゾジアゼピン２量体またはオキサゾリジノベンゾジアゼピン２量体と結合体化したモノクローナル抗体である、請求項２３から４４のいずれか一項に記載の製剤。
  49. 前記ＡＤＣの抗体構成成分が、ヒトＣＤ３３またはヒトＣＤ７０の細胞外ドメインに特異的に結合する抗体である、請求項２３から４８のいずれか一項に記載の製剤。
  50. 前記抗体がｈ２Ｈ１２またはｈ１Ｆ６抗体である、請求項４９に記載の製剤。
  51. 前記ヒト化２Ｈ１２抗体が、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列および配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を有し、前記ヒト化１Ｆ６抗体が、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列および配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を有する、請求項５０に記載の製剤。
  52. 前記ＡＤＣの前記抗体構成成分が、ＩｇＧ１アイソタイプの重鎖定常領域を含む、請求項２３から５１のいずれか一項に記載の製剤。
  53. ＡＤＣの濃度が約２ｍｇ／ｍｌから約５ｍｇ／ｍｏｌであるＰＢＤ ＡＤＣ、
    約５％ｗ／ｖから約１０％ｗ／ｖの濃度のヒドロキシプロピルシクロデキストリン、および
    約４％から約８％の濃度の糖、ならびに
    少なくとも１種のバッファー剤
    を含み、
    水溶液であり、該少なくとも１種のバッファー剤の濃度が生理学的に適したｐＨを維持するのに効果的である、医薬製剤。
  54. 抗体−薬物結合体の濃度が約３ｍｇ／ｍｌであり、
    ＨＰβＣＤの濃度が約６％であり、
    前記糖が、約６％の濃度のスクロースであり、
    前記少なくとも１種のバッファー剤が、約２０ｍＭの濃度のトリスであり、
    ｐＨが約７．０から約７．５（好ましくは７．２または７．３）である、
    請求項５３に記載の製剤。
  55. 前記ＡＤＣが、式
    Figure 2016512540
    （式中、Ａｂはモノクローナル抗体であり、ｐは、前記製剤中の抗体当たりの薬物リンカー分子の平均数を表し、約２である）
    を有し、または薬学的に許容可能なその塩である、請求項５３または５４に記載の製剤。
  56. 前記ＡＤＣのベンゾジアゼピン薬物構成成分が、抗体上に存在する組み込み操作されたシステイン残基を介して該抗体と結合しており、該抗体の鎖間ジスルフィド鎖が実質的にインタクトである、請求項２３から５５のいずれか一項に記載の製剤。
  57. Ｋａｂａｔに記載されているＥＵインデックスに従ってナンバリングすると、前記システイン残基がＩｇＧ１重鎖の２３９位にある、請求項５６に記載の製剤。
  58. 前記抗体がｈ２Ｈ１２またはｈ１Ｆ６抗体である、請求項５３から５７のいずれか一項に記載の製剤。
  59. 前記ヒト化２Ｈ１２抗体が、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列および配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を有し、前記ヒト化１Ｆ６抗体が、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列および配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を有する、請求項５８に記載の製剤。
  60. 請求項２５から５９のいずれか一項に記載の製剤を用意する工程、および
    水溶液を凍結乾燥して、凍結乾燥抗体−薬物結合体製剤を形成する工程
    を含む、安定化された凍結乾燥抗体−薬物結合体製剤を調製する方法。
  61. 請求項６０に記載の方法によって調製された、安定化された凍結乾燥抗体−薬物結合体製剤。
  62. 請求項２５から５９のいずれか一項に記載の水性製剤へ再構成することができる、安定化された凍結乾燥抗体−薬物結合体製剤。
  63. 抗体に付いたベンゾジアゼピン薬物リンカーの化学的分解および断片化を防止する方法であって、少なくとも約６％ｗ／ｖのガンマシクロデキストリンまたは化学修飾されたベータシクロデキストリンを用いて、該抗体に付いたベンゾジアゼピン薬物リンカーを製剤化する工程を含む、方法。
  64. 前記製剤中に存在するベンゾジアゼピン薬物リンカーの化学的分解の低減によって測定したとき、２％ｗ／ｖまたはそれ未満のシクロデキストリンを有するベンゾジアゼピン薬物リンカーと比較して、改善された安定性を有する、請求項２３から５９のいずれか一項に記載の製剤。
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