CN105189546A - 环糊精和抗体-药物偶联物制剂 - Google Patents

环糊精和抗体-药物偶联物制剂 Download PDF

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Abstract

公开了包含苯并二氮杂革抗体一药物偶联物(ADC)和环糊精的制剂，包括液体和冻干制剂。也公开了纯化包含苯并二氮杂革抗体一药物偶联物和过程药物相关杂质的混合物的方法。

Description

环糊精和抗体-药物偶联物制剂
本申请要求于2013年3月13日提交的美国临时申请第61/780,185号和2013年3月14日提交的美国临时申请第61/782,231号的权益，各申请都通过引用全文纳入本文以用于所有目的。
背景
抗体-药物偶联物(ADC)可提供一种将药物递送到组织或生物体内的靶向位点的有效手段。由抗体识别靶标如肿瘤最小化非靶标组织对毒性化疗药物的暴露并且限制了与“游离”药物(即，未与载体如抗体结合)的毒性关联的不良影响。可通过多种技术制备ADC。在给予人或其他对象之前，纯化偶联物以去除游离药物和其他杂质。
由于含苯并二氮杂(benzodiazepine)的药物有非常高的效力，从包含苯并二氮杂ADC和苯并二氮杂药物相关杂质的混合物中去除药物相关杂质需要是高度有效的。本发明解决了这些和其他需求。
附图说明
图1显示在25℃下储存的各种h2H12-1制剂中存在的高分子量物质百分比(％HMW)。在0、7天和14天的时间点处测定％HMW。
图2显示在25℃下储存的各种h1F6-1制剂中存在的高分子量物质百分比(％HMW)。在0、7天和14天的时间点处测定％HMW。
图3显示在40℃下储存的各种h2H12-3制剂中存在的高分子量物质百分比(％HMW)。在0、3天和7天的时间点处测定％HMW。
图4显示在40℃下储存的各种h1F6-3制剂中存在的高分子量物质百分比(％HMW)。在0、3天和7天的时间点处测定％HMW。
图5显示在40℃下储存的各种h2H12-2制剂中存在的高分子量物质百分比(％HMW)。在0、3天和7天的时间点处测定％HMW。
图6显示在40℃下储存的各种h1F6-2制剂中存在的高分子量物质百分比(％HMW)。在0、3天和7天的时间点处测定％HMW。
图7显示在25℃下储存的各种h2H12-1制剂中存在的酸性物质百分比。在0、7天和14天的时间点处测定酸性物质百分比。
图8显示在25℃下储存的各种h21F6-1制剂中存在的酸性物质百分比。在0、7天和14天的时间点处测定酸性物质百分比。
图9显示在40℃下储存的各种h2H12-3制剂中存在的酸性物质百分比。在0、3天和7天的时间点处测定酸性物质百分比。
图10显示在40℃下储存的各种h1F6-3制剂中存在的酸性物质百分比。在0、3天和7天的时间点处测定酸性物质百分比。
图11显示在40℃下储存的各种h2H12-2制剂中存在的酸性物质百分比。在0、3天和7天的时间点处测定酸性物质百分比。
图12显示在40℃下储存的各种h21F6-2制剂中存在的酸性物质百分比。在0、3天和7天的时间点处测定酸性物质百分比。
图13显示在25℃下储存的各种h1F6-1制剂中存在的高分子量物质百分比(％HMW)。在0和7天的时间点处测定％HMW。
图14显示渗滤过程期间羟丙基β环糊精的浓度。渗滤缓冲液含3％w/v环糊精。数据显示，膜可透过环糊精。
图15显示从猝灭的偶联反应混合物中清除猝灭的药物-接头同时保持10％w/v环糊精(菱形)或3％w/v环糊精(正方形)的浓度的。
图16显示从猝灭的偶联反应混合物中清除猝灭的药物-接头同时保持3％w/v环糊精的浓度。
图17显示从猝灭的偶联反应混合物中清除猝灭的药物-接头同时保持3％w/v环糊精的浓度。
图18显示从猝灭的偶联反应混合物中清除猝灭的药物-接头同时保持3％w/v环糊精的浓度。
概述
本发明部分基于以下发现：由于苯并二氮杂药物的性质，从包含苯并二氮杂ADC和苯并二氮杂药物相关杂质(本文中也称为ADC混合物)的混合物中去除苯并二氮杂药物相关杂质是低效的，并且向混合物中加入环糊精可高效清除苯并二氮杂药物相关杂质。发明人发现，但不限于，在进行切向流过滤之前向包含苯并二氮杂ADC和苯并二氮杂药物相关杂质的混合物中加入环糊精可高效清除苯并二氮杂药物相关杂质。
本发明也部分基于以下发现：与不含环糊精的制剂相比，苯并二氮杂ADC的含环糊精制剂显示出优异的稳定性。例如，可由以下的一种或多种来证明改善的稳定性：(i)聚集速率和程度降低，(ii)酸性物质增加的减缓和(iii)药物的化学降解降低。
发明内容
本文提供了使用环糊精通过切向流过滤从包含苯并二氮杂ADC和苯并二氮杂药物相关杂质的混合物中去除苯并二氮杂药物相关杂质的方法。这些方法包括对包含苯并二氮杂ADC和苯并二氮杂药物相关杂质的混合物进行切向流过滤。过滤期间使用环糊精在分离过程中起到促进作用。因此，本文提供了从包含苯并二氮杂ADC和苯并二氮杂药物相关杂质的混合物中去除苯并二氮杂药物相关杂质的方法，这些方法包括对包含苯并二氮杂ADC和苯并二氮杂药物相关杂质的混合物进行切向流过滤，其中使用环糊精以在纯化过程中起到促进作用。在优选的方面中，加入足量的环糊精以基本维持ADC混合物中组分的溶解性并防止聚集。环糊精可以是，例如，在切向流过滤过程开始时存在于混合物中，或者在切向流过滤开始之后首次加入混合物中(优选在大量去除任何杂质之前)。在一些方面中，这些方法包括对包含苯并二氮杂ADC和苯并二氮杂药物相关杂质的混合物进行切向流过滤同时在混合物中维持至少约1％w/v环糊精、至少约2％w/v环糊精、或至少约3％w/v环糊精的浓度。本发明也提供了包括提供包含苯并二氮杂ADC、苯并二氮杂药物相关杂质和环糊精的混合物的方法，其中环糊精的存在浓度为至少约1％w/v，并且对所述混合物进行切向流过滤同时将混合物中环糊精的浓度维持在至少约1％w/v；这些方法包括提供包含苯并二氮杂ADC、苯并二氮杂药物相关杂质和环糊精的混合物的方法，其中环糊精的存在浓度为至少约2％w/v，并且使所述混合物经过切向流过滤同时混合物中环糊精的浓度维持在至少约2％w/v；且包括提供包含苯并二氮杂ADC、苯并二氮杂药物相关杂质和环糊精的混合物的方法，其中环糊精的存在浓度为至少约3％w/v，并且使所述混合物经过切向流过滤同时混合物中环糊精的浓度维持在至少约3％w/v。
切向流过滤可以是，例如，恒容渗滤或非连续渗滤。切向流过滤装置可包括，例如，泵、具有入口的过滤盛放器、滤液出口、滞留物出口、孔径为50Kd或更小的超滤膜(该膜将过滤支架分成上游隔室和下游隔室，使得所有的滤液必须进入入口并在通过滤液出口离开过滤盛放器之前通过超滤膜)、用于盛放偶联反应混合物的样品储器和与样品储器流体连通的缓冲液储器。在优选的方面中，缓冲液储器包含至少约1％w/v环糊精，至少约2％w/v环糊精，或至少约3％w/v环糊精。超滤膜的孔径范围可包括，例如，约30Kd的孔径。超滤膜可由许多材料制成，包括再生纤维素。
待由切向流过滤纯化的混合物可以是偶联反应混合物，包括本文所述的偶联反应混合物中的任一种。苯并二氮杂药物相关杂质可以是本文所述的杂质中的任一种。苯并二氮杂药物相关杂质可以是猝灭的或未猝灭的。例如，这些方法可包括在足以形成包含苯并二氮杂ADC的偶联反应混合物的条件下将抗体或抗体-接头与苯并二氮杂药物-接头接触的步骤。任选地，该偶联反应混合物可与猝灭剂接触以形成猝灭的偶联反应混合物。对未猝灭或猝灭的偶联混合物进行切向流过滤，如本文所述。或者，这些方法可包括在足以形成包含苯并二氮杂ADC的偶联反应混合物的条件下将抗体或抗体-接头与游离药物接触的步骤。任选地，该偶联反应混合物可与猝灭剂接触以形成猝灭的偶联反应混合物。对未猝灭或猝灭的偶联混合物进行切向流过滤，如本文所述。苯并二氮杂药物相关杂质可以是，例如，猝灭或未猝灭的药物-接头或者猝灭或未猝灭的药物。本发明的方法可有效地去除苯并二氮杂药物相关杂质。优选地，苯并二氮杂药物相关杂质降低至约1μM或更低、0.5μM或更低、0.1μM或更低或0.05μM或更低的水平。
β和γ环糊精，包括化学改性的β和γ环糊精在本发明的使用中是特别有效的。该环糊精可以是，例如，羟丙基β环糊精或磺基丁基醚β环糊精。在一些方面中，当该环糊精是γ环糊精时，该环糊精在切向流过滤期间维持在至少约1％w/v的浓度下，并且当该环糊精是β环糊精时，该环糊精在切向流过滤期间维持在至少约2％w/v或至少约3％w/v的浓度下。
本文也提供了药物制剂，其包含浓度为约3％w/v至约30％w/v，优选浓度为约5％w/v或6％w/v至约30％w/v或者约6％w/v至约10％w/v的环糊精和苯并二氮杂ADC。这些制剂可以是水性或非水性形式。这些制剂可包含其他赋形剂，如冻干保护剂(优选糖，例如，蔗糖)。冻干保护剂可以是有效发挥作用的任意浓度，例如，约4％至约8％(w/v)，优选约6％(w/v)。制剂的pH是生理上合适的pH。示例性的pH值是约6.0至约8.0或约6.5至7.5、或约7至7.5。这些制剂通常包含缓冲剂。该缓冲剂可选自各种缓冲剂，包括Tris、乙酸盐、组氨酸、柠檬酸盐、磷酸盐和琥珀酸盐。例如，Tris的浓度可以是约20mM。制剂中苯并二氮杂ADC的浓度可广泛变化。在优选的方面中，ADC的浓度为约0.5mg/ml至约30mg/ml、约0.5mg/ml至约10mg/ml、约1mg/ml至约10mg/ml、约2mg/ml至约10mg/ml、约2mg/ml至约5mg/ml、优选约3mg/ml。β和γ环糊精在本发明的使用中是特别有效的，包括化学改性的β和γ环糊精。该环糊精可以是，例如，羟丙基β环糊精或磺基丁基醚β环糊精。
本文提供了包含PBDADC(其中ADC的浓度为约2mg/ml至约5mg/mol)；浓度为约5％w/v至约10％w/v的羟丙基环糊精；浓度为约4％至约8％的糖；和至少一种缓冲剂的药物制剂；该制剂存在于水溶液中并且该至少一种缓冲剂的浓度可有效维持生理上合适的pH(例如，约6至约8，更优选约7至约8或者约7至约7.5)。
本文提供了包含PBDADC(其中ADC的浓度为约3mg/ml)；浓度为约6％的羟丙基环糊精；浓度为约6％的蔗糖的，浓度为约20mM的Tris的药物制剂，且该制剂的pH为约7至约7.5(例如，约7.3)。
在本文提供的制剂和方法中，ADC可以具有本文所述的任何式。ADC可以是例如PBDADC。例如，ADC可具有下式或其药学上可接受的盐：
其中Ab是单克隆抗体并且p表示每抗体药物-接头分子平均数，并且约为2。在其他方面中，ADC可包含单克隆抗体偶联吲哚苯并二氮杂二聚体，或者单克隆抗体偶联噁唑苯并二氮杂二聚体。在本文所述的制剂和方法中，抗体可以是任意抗体，包括任意单克隆抗体，包括本文所述的人源化2H12或1F6抗体。抗体与药物-接头的偶联可通过本领域已知的任意方法进行，包括通过引入的半胱氨酸残基的硫原子进行偶联。
本文也提供了用于制备稳定化、冻干的抗体-药物偶联物制剂的方法。这些方法可包括提供本文所述的水性制剂；并且冻干水溶液以形成冻干的抗体-药物偶联物制剂。本文也提供了如此制备的稳定化、冻干的抗体-药物偶联物制剂。
本文也提供了防止与抗体连接的苯并二氮杂药物-接头发生化学降解和片段化的方法。如本文提供的任意实施方式所述，这些方法可包括将与抗体连接的苯并二氮杂药物-接头与至少约6％w/v的γ-环糊精或化学改性的β-环糊精一起配制。
定义
除非另有限定，在此使用的所有技术和科学术语均与本领域普通技术人员相对于所述方法和组合物的通常理解一致。本文所用的以下术语和短语具有属于它们自身的涵义，除非另有说明。
术语“杂环”指具有3-14个环原子(也称为环成员)的单环、双环或多环系统，其中至少一个环中的至少一个环原子是选自N、O、P或S的杂原子(包括其间的碳原子和杂原子的范围和具体数目的所有组合和亚组合)。杂环可具有独立地选自N、O、P或S的1-4个环杂原子。杂环中的一个或多个N、C或S原子可以被氧化。单环杂环优选具有3-7个环原子(如2-6个碳原子和1-3个独立选自N、O、P或S的杂原子)，双环杂环优选具有5-10个环成员(如4-9个碳原子和1-3个独立选自N、O、P或S的杂原子)。包含杂原子的环可以是芳环或非芳环。
术语“碳环”指具有3-14个环原子(以及其间的碳原子范围和碳原子具体数目的所有组合和亚组合)且所有环原子都是碳原子的饱和或不饱和的非芳族单环、双环或多环系统。单环碳环优选具有3-6个环原子，更优选具有5或6个环原子。碳环优选具有3-8个碳环原子。
本文使用的短语“药学上可接受的盐”指化合物的药学上可接受的有机或无机盐。该化合物可含有至少一个氨基，并且因此可与氨基形成酸加成盐。示例性的盐包括但不限于：硫酸盐、三氟乙酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸性磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸性柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、丹宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、延胡索酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和扑酸盐(即1，1’-亚甲基-双(2-羟基-3-萘甲酸盐))。药学上可接受的盐可以包含例如乙酸根离子、琥珀酸根离子、或其他抗衡离子的另一个分子。该抗衡离子可以是稳定母体化合物上电荷的任何有机或无机部分。另外，药学上可接受的盐可在结构中具有超过一个的带电原子。其中多个带电原子是药学上可接受的盐的一部分的示例能有多个抗衡离子。因此，药学上可接受的盐能有一个或多个带电原子和/或一个或多个抗衡离子。
“多肽”或“多肽链”是氨基酸残基通过肽键连接而成的聚合物，可为天然或合成产生。少于约10个氨基酸残基的多肽通常称作“肽”。
“蛋白质”是包含一条或多条多肽链的大分子。蛋白还可包含非肽组分，如碳水化合物基团。碳水化合物和其它非肽取代基可由产生蛋白的细胞加入到蛋白中，其会随细胞类型而变化。本文在其氨基酸主链结构方面限定蛋白；取代基(例如碳水化合物基团)通常未指定，但是可以存在。
本文使用的术语“氨基末端”和“羧基末端”指多肽中的位置。上下文允许时，这些术语根据多肽特定序列或部分使用以表示附近或相对位点。例如，多肽中相对参照序列位于羧基末端的某些序列位于参照序列的羧基末端附近，但并不必需在完整多肽的羧基末端。
本文所用术语“抗体”指因抗原存在产生应答而由身体生产且结合该抗原的免疫球蛋白，以及其抗原结合片段和经工程改造的变体。因此，术语“抗体”包括例如包含全长免疫球蛋白重链和轻链的完整单克隆抗体(如使用杂交瘤技术产生的抗体)和结合抗原的抗体片段(如F(ab′)2和Fab片段)。还包括遗传工程改造的完整抗体和片段，如嵌合抗体、人源化抗体、单链Fv片段、单链抗体、双抗体、小抗体、线性抗体、多价或多特异性(如双特异性)杂交抗体等。因此，术语“抗体”广义地用于包括含有抗体的抗原结合位点且能够特异性结合其抗原的任何蛋白。
术语“遗传工程改造的抗体”指其中氨基酸序列不同于天然抗体的抗体。由于抗体生成中重组DNA技术的相关性，无需限制于天然抗体中发现的氨基酸的序列；可以重新设计抗体以获得所需的特性。可能的变化形式有很多且范围为从改变仅一个或一些氨基酸到完全重新设计例如可变区或恒定区。通常进行恒定区中的变化以改进或改变诸如补体固定、与细胞相互作用和其他效应功能的特性。通常，进行可变区中的变化以改进抗原结合特性、改进可变区稳定性或降低免疫原性的风险。
“抗体的抗原结合位点”是足以结合其抗原的抗体的一部分。最小的这类区域通常是可变结构域或其遗传改造的变体。单结构域结合位点可来自驼科动物抗体(参见Muyldermans和Lauwereys，J.Mol.Recog.12：131-140，1999；Nguyen等，EMBOJ.19：921-930，2000)或来自其他物种的VH结构域以生成单结构域抗体(“dAb”；参见Ward等，Nature341：544-546，1989；Winter等的美国专利号6,248,516)。在某些变化形式中，抗原结合位点是具有天然或非天然(如诱变)产生的重链可变结构域或轻链可变结构域或其组合的仅2个互补决定区(CDR)的多肽区域(参见例如Pessi等，Nature362：367-369，1993；Qiu等，NatureBiotechnol.25：921-929，2007)。更常见的，抗体的抗原结合位点包含与共同表位结合的重链可变(VH)结构域和轻链可变(VL)结构域。在本发明的上下文内，抗体除抗原结合位点外还可包含一种或多种组分，例如抗体的第二抗原结合位点(其可结合相同或不同的表位或者相同或不同的抗原)、肽接头、免疫球蛋白恒定区、免疫球蛋白铰链、两亲螺旋(参见Pack和Pluckthun，Biochem.31：1579-1584，1992)、非肽接头、寡核苷酸(参见Chaudri等，FEBSLetters450：23-26，1999)、细胞生长抑制性药物或细胞毒性药物等，且可以是单亚基或多亚基蛋白。包含抗体的抗原结合位点的分子的示例是本领域已知的且包括例如Fv、单链Fv(scFv)、Fab、Fab′、F(ab′)2、F(ab)c、双抗体、dAbs，小抗体、纳米抗体、Fab-scFv融合体、双特异性(scFv)4-IgG和双特异性(scFv)2-Fab(参见例如Hu等，CancerRes.56：3055-3061，1996；Atwell等，MolecularImmunology33：1301-1312，1996；Carter和Merchant，Curr.Opin.Biotechnol.8：449-454，1997；Zuo等，ProteinEngineering13：361-367，2000；以及Lu等，J.Immunol.Methods267：213-226，2002)。
本文所用术语“免疫球蛋白”指由一种或多种多肽组成的蛋白，所述一种或多种多肽基本由免疫球蛋白基因编码。免疫球蛋白的一种形式构成了脊椎动物中天然(即自然)抗体的基本结构单元。该形式是四聚体且由两个相同的免疫球蛋白链的对组成，各对具有一条轻链和一条重链。在各对中，轻链和重链可变区(VL和VH)共同主要负责结合抗原，且恒定区主要负责抗体效应功能。在较高等的脊椎动物中已鉴定到了五种类别的免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM、IgD和IgE)。IgG是主要类别；其通常以血浆中发现的第二丰富蛋白的形式存在。人中，IgG由四个称为IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的亚类组成。IgG类的重链恒定区被确定为希腊字母γ。例如，IgG1亚类的免疫球蛋白含有γ1重链恒定区。各免疫球蛋白重链都具有由恒定区蛋白结构域(CH1、铰链、CH2和CH3；IgG3还含有CH4结构域)组成的恒定区，所述恒定区蛋白结构域对于某物种中给定的亚类而言基本不变。编码人和非人免疫球蛋白链的DNA序列为本领域熟知。(参见例如Ellison等，DNA1：11-18，1981；Ellison等，NucleicAcidsRes.10：4071-4079，1982；Kenten等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA79：6661-6665，1982；Seno等，Nuc.AcidsRes.11：719-726，1983；Riechmann等，Nature332：323-327，1988；Amster等，Nuc.AcidsRes.8：2055-2065，1980；Rusconi和Kohler，Nature314：330-334，1985；Boss等，Nuc.AcidsRes.12：3791-3806，1984；Bothwell等，Nature298：380-382，1982；vanderLoo等，Immunogenetics42：333-341，1995；Karlin等，J.Mol.Evol.22：195-208，1985；Kindsvogel等，DNA1：335-343，1982；Breiner等，Gene18：165-174，1982；Kondo等，Eur.J.Immunol.23：245-249，1993；以及GenBank登录号J00228)。对于免疫球蛋白结构和功能的综述，参见Putnam，ThePlasmaProteins(《血浆蛋白质》)，卷V，学术出版社公司(AcademicPress，Inc.)，49-140，1987；以及Padlan，Mol.Immunol.31：169-217，1994。术语“免疫球蛋白”在本文中以其常用含义使用，指完整的抗体、其组成链或链的片段(取决于上下文)。
全长免疫球蛋白“轻链”(约25kDa或214个氨基酸)在氨基末端处由可变区基因编码(编码约110个氨基酸)且在羧基末端处由κ或λ恒定区基因编码。全长免疫球蛋白“重链”(约50Kd或446个氨基酸)由可变区基因(编码约116个氨基酸)和γ、μ、α、δ或ε恒定区基因(编码约330个氨基酸)编码，后者分别将抗体的同种型限定为IgG、IgM、IgA、IgD或IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过约12或更多个氨基酸的“J”区接合，其中重链还包含约10或更多个氨基酸的“D”区(通常参见FundamentalImmunology(《基础免疫学》)(Paul编，雷文出版社(RavenPress)，纽约，第2版，1989)第7章)。
免疫球蛋白轻链或重链可变区(在本文中也分别称为“轻链可变区结构域”(“VL结构域”)或“重链可变区结构域”(“VH结构域”))由被三个高变区(也称为“互补决定区”或“CDR”)间断的“框架”区组成。框架区的功能是将用于特异性结合的CDR与抗原的表位对齐。因此，术语“高变区”或“CDR”指主要负责抗原结合的抗体的氨基酸残基。从氨基末端至羧基末端，VL和VH结构域都包含以下框架区(FR)和CDR区：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。各结构域氨基酸的分配与Kabat，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest(《免疫学感兴趣蛋白的序列》)(马里兰州贝塞斯达的国立卫生研究院(NationalInstitutesofHealth)(1987和1991))或Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987)；Chothia等，Nature342：878-883(1989)的定义一致。Kabat还提供了广泛使用的编号惯例(Kabat编号)，其中为不同重链之间或不同轻链之间相应的残基分配了相同的编号。VL结构域的CDR1、2和3在本文中还分别称作CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；VH结构域的CDR1、2和3在本文中还分别称作CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3。
除非上下文另有说明，否则本文所用术语“单克隆抗体”不限于通过杂交瘤技术产生的抗体。术语“单克隆抗体”指衍生自单个克隆，包括真核、原核或噬菌体克隆的抗体，而非其产生方法。
术语“嵌合抗体”是指具有衍生自第一物种的可变结构域和衍生自第二物种的恒定区的抗体。例如，可通过遗传工程由属于不同物种的免疫球蛋白基因片段构建嵌合免疫球蛋白或抗体。下文定义的术语“人源化抗体”并不旨在包括嵌合抗体。如本文所述，虽然人源化抗体在其构建中是嵌合的(即，包含来自超过一个物种的蛋白的区域)，但是它们包括其他未在嵌合免疫球蛋白或抗体中发现的特征(即，包括供体CDR残基和受体框架残基的可变区)。
术语“人源化VH结构域”或“人源化VL结构域”指包含完全或基本来自非人供体免疫球蛋白(如小鼠或大鼠)的一些或全部CDR和完全或基本来自人免疫球蛋白序列的可变区框架序列的免疫球蛋白VH或VL结构域。提供CDR的非人免疫球蛋白称作“供体“且提供框架区的人免疫球蛋白称作”受体“。在一些情况下，人源化抗体会保留人可变结构域框架区内的一些非人残基以增强适当的结合特性(例如，当抗体是人源化的时候，需要框架区中的突变以保留结合亲和力)。
“人源化抗体”是包含人源化VH结构域和人源化VL结构域之一或全部两个的抗体。无需存在免疫球蛋白恒定区，但如果存在，其完全或基本来自于人免疫球蛋白恒定区。
人源化抗体中CDR“基本来自”非人抗体中相应CDR的前提是至少60％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的相应残基(由Kabat所定义)在各CDR之间相同。在其中各CDR基本都来自非人免疫球蛋白的人源化VH或VL结构域的特定变化形式中，相对于相应非人VH或VLCDR，人源化VH或VL结构域的CDR在全部三个CDR中具有不超过六个(例如不超过五个、不超过四个、不超过三个、不超过两个或不超过一个)氨基酸取代。抗体VH或VL结构域的可变区框架序列或免疫球蛋白恒定区的序列(如果存在)分别“基本来自”人VH或VL框架区序列或人恒定区的前提是至少85％、至少90％、至少95％或100％的相应残基(由Kabat所定义)是相同的。因此，可能除CDR外，人源化抗体的所有部分都全部或基本来自天然人免疫球蛋白序列的相应部分。
抗体与其目标抗原的特异性结合指亲和力为至少106、107、108、109或1010M-1。特异性结合在幅度上可检测地高于与至少一个不相关靶标之间的非特异性结合并可与之区分。特异性结合可以是特定空间拟合(如锁和钥匙类型)或特定官能团之间键形成的结果，而非特异性结合通常是范德华力的结果。然而，特异性结合并不必然表示单克隆抗体结合一个且仅结合一个靶标。
关于本文所述的蛋白，与SEQIDNO所指定氨基酸残基对应的氨基酸残基包括这类残基的翻译后修饰。
在本文所述的抗体-药物偶联物制剂的内容中，“稳定化”是指其中的抗体-药物偶联物在储存后基本保留其物理和化学相同性和完整性。本领域中可使用多种测定蛋白稳定性的分析技术(参见例如《肽和蛋白质药物递送》(PeptideandProteinDrugDelivery)，247-301，VincentLee编，MC公司(MarcelDekker，Inc.)，纽约州纽约出版(1991)和Jones，A.Adv.DrugDeliveryRev.10：29-90，1993)。本文也描述了用于测定蛋白稳定性的示例性技术(参见下面的实施例)。可以在所选温度下储存所选时间，以测定稳定性。对于快速测量，该制剂可保持在较高或“加速”的温度下，例如，40℃保持1周至1个月或更长时间，其间测量稳定性。在示例性实施方式中，该制剂难以形成组分抗体蛋白的副产物，例如，高分子量聚集产物、低分子量聚集产物或片段化产物、酸性物质、化学降解产物或其混合物。术语“稳定性”是指分子物质如抗体保留其原始化学特性(例如，一级、二级和/或三级结构)的时间长度。
术语“副产物”包括不需要的产物，其降低或减少给定制剂中治疗性抗体-药物偶联物的比例。一般的副产物包括抗体-药物偶联物的聚集体、抗体-药物偶联物的片段(例如，由药物-接头的脱酰胺、或水解或化学降解和片段化导致的抗体蛋白的降解产生)、抗体-药物偶联物的酸性变体或其混合物。
抗体-药物偶联物(ADC)是一般通过接头与细胞毒性药物偶联的抗体。接头可包括可切割单元或者可能是不可切割的。可切割单元包括，例如含有可通过二硫交换切割的接头的二硫化物，可在酸性pH下切割的对酸不稳定接头，和可由水解酶(例如，糖基水解酶如葡糖醛酸糖苷酶)、酯酶和肽酶(例如，肽接头和葡糖苷酸接头)切割的接头。不可切割接头被认为通过蛋白水解抗体降解机制释放药物。
术语“高分子量聚集体”包括抗体-药物偶联物(ADC)的聚集体，以及包含ADC片段的聚集体(例如，由多肽的降解所产生，例如通过水解)以及包含ADC和这类片段的混合物的聚集体。可通过例如尺寸排阻色谱(SEC)确定高分子量聚集体的存在。一般地，高分子量聚集体是分子量超过治疗性单体ADC的复合物。对于其中抗体组分是由2对相同的免疫球蛋白链组成的四聚体的ADC(各对具有一条轻链和一条重链(例如，IgG同种型的))，这类聚集体超过约150kD。然而，对于其中抗体组分的分子量大于或小于一般的单特异性、四聚体抗体蛋白(由2条免疫球蛋白轻链和2条免疫球蛋白重链组成(例如，单链抗体或双特异性抗体))的ADC，这类聚集体的大小可相应变化。
术语“低分子量降解产物”包括，例如，抗体-药物偶联物(ADC)的片段，诸如由脱酰胺或水解生成的片段。可通过例如尺寸排阻色谱(SEC)确定低分子量降解产物的存在。一般而言，低分子量降解产物的分子量低于治疗性单体ADC。对于其中抗体组分是由2对相同的免疫球蛋白链组成的四聚体(各对具有一条轻链和一条重链(例如，IgG同种型的))的ADC，这类降解产物低于约150kD。然而，对于其中抗体组分的分子量大于或小于一般的单特异性、四聚体抗体蛋白(由2条免疫球蛋白轻链和2条免疫球蛋白重链组成(例如，单链抗体或双特异性抗体))的ADC，这类降解产物的大小可相应变化。
感兴趣的抗体-药物偶联物(ADC)的“酸性变体”是比ADC的实验性PI更偏酸性的ADC变体。可通过例如阳离子交换色谱或成像毛细管IEF(icIEF)确定酸性变体的存在。酸性变体的示例是脱酰胺的变体。蛋白分子的脱酰胺变体中一个或多个中性酰胺侧链被转化为具有整体酸性特征的残基(例如，原始多肽的一个或多个天冬酰胺残基被转化成天冬氨酸)。
本文使用的术语“稀释剂”是指适用于改变或达到本文所述的示例性或合适浓度的溶液。
术语“容器”是指其中可放置或包含物体或液体例如用于储存的东西(例如，盛放器、容器、器皿等)。
术语“给药途径”包括用于递送治疗性蛋白的本领域公认的给药途径，例如，胃肠外、静脉内、肌内或皮下。对于用于治疗癌症的ADC的给药，可能需要通过静脉内或皮下给药来向全身循环中给药。对于由实体瘤表征的癌症的治疗，如果需要，可直接对肿瘤进行局部给药。
术语“治疗”是指向患病的患者给予治疗剂，目的在于治愈、愈合、缓解、延缓、释放、改变、补救、减轻、改善或影响疾病。
术语“患者”包括接受预防性或治疗性治疗的人和其他哺乳动物对象。
术语“有效量”或“有效剂量”是指足以实现或至少部分实现所需效果的量，即足以抑制疾病或病症的一种或多种症状的出现或使其缓解的量。以“有效方案”给予有效量的药物组合物。术语“有效方案”指适于实现对疾病的预防性或治疗性治疗的剂量频率和给予的组合物量的组合。
本文所用的术语“剂量单位形式”(或“单位剂型”)是指对于待治疗的患者而言适合用作单一剂量的物理离散单位，各单位含有预定量的活性化合物(本发明所述的ADC)，其经计算产生与所需的药物运载体、稀释剂或赋形剂关联的所需治疗效果。本发明中剂量单位形式的规格取决于或直接依赖于活性化合物的独特特性和待实现的具体治疗效果，以及复合这种活性化合物用于治疗患者的领域中的固有限制。
可改变本发明的制剂中ADC的实际剂量水平，从而获得就具体患者、组合物与给药方式有效实现所需治疗应答且对患者无毒性的ADC的量。所选剂量水平取决于多种药代动力学因素，包括所用的本发明特定组合物的活性，给药途径，给药时间，所用特定化合物的排泄率，治疗持续时间，与所用特定组合物联用的其他药物、化合物和/或材料，所治疗病人的年龄、性别、体重、病症、整体健康状况、先前病史以及医学领域熟知的类似因素。
“细胞毒性效果”指靶标细胞的缺失、消除和/或死亡。“细胞毒剂”指对细胞有细胞毒性效果的试剂。
“细胞生长抑制效果”指细胞增殖的抑制。“细胞生长抑制剂”指对细胞具有细胞生长抑制效果，从而抑制细胞的特定子集生长和/或扩增的试剂。
如果以最大对应性进行比对时两种氨基酸序列的氨基酸残基是相同的，则这两种氨基酸序列具有“100％氨基酸序列相同性”。可使用标准软件程序(如DNASTAR公司(威斯康星州麦迪逊)生产的LASERGENE生物信息学计算套件中包括的那些)来进行序列比较。用于通过确定最佳比对来比较两种核苷酸或氨基酸序列的其他方法是本领域技术人员熟知的。(参见例如Peruski和Peruski，TheInternetandtheNewBiology：ToolsforGenomicandMolecularResearch(《因特网和新生物学：用于基因组和分子研究的工具》)(ASM出版社公司，1997)；Wu等(编)，“InformationSuperhighwayandComputerDatabasesofNucleicAcidsandProteins(《核酸和蛋白质的信息超高速公路和计算机数据库》)”刊于MethodsinGeneBiotechnology(《基因生物技术方法》)123-151(CRC出版社公司，1997)；Bishop(编)，GuidetoHumanGenomeComputing(《人基因组计算指南》)(第2版，学术出版社公司，1998)。)如果两条氨基酸序列相对彼此至少80％、至少85％、至少90％或至少95％相同，则认为这两条序列具有“大体序列相同性”。
通过Kabat编号惯例对抗体序列进行最大程度的比对以确定序列相同性百分比。比对后，如果比较的是对象抗体区域(如重链或轻链的整个可变结构域)与参考抗体的相同区域，则对象和参考抗体区域之间的序列相同性百分比为对象和参考抗体区域中被相同氨基酸所占据的位置数目除以两个区域经排列位置的总数，不计算缺口，乘以100以转化为百分数。
术语“药物制剂”指此类形式的制剂：所述制剂允许其中所含活性成分的生物学活性有效(当给予对象时)，并且不含对于待给予该制剂的对象而言具有不可接受毒性的额外成分。这类制剂是无菌的。
“包含”一种或多种所列元素的组合物或方法可包含未特别列出的其他元素。
本文中涉及数值范围(例如，“X至Y”或“从X至Y”)包括限定范围的端点和落入该范围的所有值。
除非上下文中另有明确说明，当某一数值表达为“约”X或“大约”X时，所示X的数值应理解为精确至±10％。
实施方式描述
苯并二氮杂抗体-药物偶联物
苯并二氮杂抗体-药物偶联物是指一般但不必须通过接头与苯并二氮杂二聚体偶联的抗体。苯并二氮杂药物-接头是指与接头连接的苯并二氮杂二聚体。苯并二氮杂药物-接头的接头组分一般将具有用于与抗体连接的反应性基团。苯并二氮杂化合物在其核心中具有与二氮杂环稠合的苯环。与二氮杂环稠合的苯环的示例性环结构如下：
苯并二氮杂化合物在两个环上取代基的位置、类型和数量上并且在二氮杂环的饱和度上不同。它们也在与苯和/或二氮杂环稠合的其他环的数量上不同。苯并二氮杂化合物的定义包括苯环或二氮杂环与一个或多个芳族或非芳族碳环或杂环稠合。苯并二氮杂二聚体是已经通过联接臂(tether)联接两个苯并二氮杂单元形成的化合物。
苯并二氮杂抗体-药物偶联物的抗体组分可与一个或多个苯并二氮杂药物-接头偶联，例如1至20个药物-接头。在一些方面中，苯并二氮杂抗体-药物偶联物的抗体组分可与1、2、3或4个药物-接头偶联。可通过抗体上的不同位置进行偶联。在一些方面中，将通过半胱氨酸残基的硫原子进行偶联。在一些方面中，半胱氨酸残基是抗体的链间二硫键的半胱氨酸残基。在其他方面中，半胱氨酸残基经工程改造到抗体中。在一些方面中，半胱氨酸残基在由EU索引(Kabat，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest(《免疫学感兴趣的蛋白质的序列》)(马里兰州贝塞斯达的国立卫生研究院，1987和1991))确定的239位(人IgG1)处工程改造到抗体中。在一些方面中，在苯并二氮杂ADC混合物或制剂中每抗体有平均2个药物-接头，并且药物-接头将偶联至半胱氨酸残基，该半胱氨酸残基在由EU索引(Kabat，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest(《免疫学感兴趣的蛋白质的序列》)(马里兰州贝塞斯达的国立卫生研究院，1987和1991))确定的239位(人IgG1)处引入抗体中。
在一个方面中，苯并二氮杂二聚体是吡咯并苯并二氮杂(PBD)二聚体。PBD具有以下通用结构：
PBD在其芳族A环和吡咯C环中取代基的位置、类型和数量上以及C环的饱和度上不同。在B-环中，在N10-C11位置处有亚胺(N＝C)、甲醇胺(NH-CH(OH))或甲醇胺醚(NH-CH(OR))，其是负责烷基化DNA的亲电中心。所有已知的天然产物在手性C11a位置处有(S)-构型，其在从C环向A环观察时向它们提供了右手螺旋。这使它们与B-型DNA小沟产生异螺旋性的合适三维形状，导致在结合位点处的滑动配合。PBD在小沟中形成加合物的能力使得它们干扰DNA处理，因此可用作抗肿瘤剂。可通过，例如，将2个PBD单元接合在一起来强化这些分子的生物活性(例如，通过柔性亚烷基接头的C8/C’-羟基官能团)。PBD二聚体被认为形成序列选择性DNA损伤，例如回文5’-Pu-GATC-Py-3’链间交联，其被认为主要负责它们的生物活性。
待用作偶联物的示例性PBD二聚体为以下物质或其盐(例如，药学上可接受的盐)。：
PBD二聚体可在适于与接头偶联的任意位置处与抗体连接。例如，在一些实施方式中，PBD二聚体将在C2位置处具有取代基(例如，伯胺或仲胺)，其提供了用于将化合物与抗体连接的锚。在上述所示的示例性结构中用箭头标记C2位置。在替代性实施方式中，PBD二聚体的N10位置将提供用于将化合物与抗体连接的锚。
在另一个方面中，苯并二氮杂二聚体是吲哚苯并二氮杂二聚体或噁唑苯并二氮杂二聚体。吲哚苯并二氮杂(IBD)和噁唑苯并二氮杂(OBD)具有以下通用结构：
吲哚苯并二氮杂和噁唑苯并二氮杂在其环上的取代基的位置、类型和数量上不同。对于PBD，两个吲哚苯并二氮杂或两个噁唑苯并二氮杂单元可接合在一起形成二聚体，例如，通过两个单体单元的A环之间的醚官能团。对于PBD，吲哚苯并二氮杂二聚体或噁唑苯并二氮杂二聚体可在适合与接头偶联的任意位置上连接到抗体。
包含PBD二聚体作为药物组分的苯并二氮杂ADC也可称为PBDADC。类似地，包含吲哚苯并二氮杂二聚体作为药物组分的苯并二氮杂ADC也可称为IBDADC，并且包含噁唑苯并二氮杂二聚体作为药物组分的ADC也可称为OBDADC。一般地，苯并二氮杂ADC(包括PBDADC、IBDADC和OBDADC)包含在苯并二氮杂和抗体之间的接头。接头可包括可切割单元(例如，作为酶的靶标底物的氨基酸或连续氨基酸序列)或不可切割接头(例如，通过抗体降解释放的接头)。接头还可包括用于与抗体连接的马来酰亚胺基团，例如，马来酰亚胺己酰基。接头可包括用于与抗体连接的替代性基团，包括，例如，N-羟基琥珀酰亚胺基酯或不稳定二硫化物，包括，例如，硫代吡啶二硫化物。PBD二聚体、IBD二聚体、OBD二聚体、接头及其偶联物是本领域已知的。参见，例如，WO2010/091150、WO2012/112708、WO2012/128868、WO2011/023883和WO2009/016516。
用于连接抗体与苯并二氮杂二聚体的示例性接头包括本文所述的那些中的任意接头，并且如下所示，其中波浪线表示与药物连接的位点并且抗体通过马来酰亚胺基团连接。
示例性PBD-基抗体-药物偶联物包括以下所示的抗体-药物偶联物或其盐(例如，药学上可接受的盐)：
其中Ab是抗体(例如，单克隆抗体)并且p表示药物加载，每抗体药物-接头分子数量。根据上下文，p可代表每抗体药物-接头分子平均数量，也称作平均药物加载。p的范围为1至20，优选为1至8。在一些方面中，当p表示平均药物加载时，p的范围为约2至约5。在一些方面中，p为约2、约3、约4或约5。在一些方面中，抗体通过半胱氨酸残基的硫原子与药物接头偶联。在一些方面中，半胱氨酸残基是抗体的链间二硫键的半胱氨酸残基。在其他方面中，半胱氨酸残基经工程改造到抗体中。在一些方面中，半胱氨酸残基在由EU索引(Kabat，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest(《免疫学感兴趣的蛋白质的序列》)(马里兰州贝塞斯达的国立卫生研究院，1987和1991))确定的239位(IgG1)处工程改造到抗体中。在一些这类方面中，p是约2。制备这类ADC的方法是本领域已知的(参见，例如，国际公开号WO2011/130613)。
偶联反应
本发明涉及，但不限于用于从包含苯并二氮杂ADC和苯并二氮杂相关杂质的混合物中去除苯并二氮杂药物相关杂质的方法。苯并二氮杂药物相关杂质是由抗体与苯并二氮杂二聚体或苯并二氮杂药物-接头的偶联反应生成的任何药物相关杂质。苯并二氮杂药物相关杂质可包括，例如，不含苯并二氮杂二聚体的药物、苯并二氮杂药物-接头、猝灭的苯并二氮杂药物-接头或苯并二氮杂药物-接头降解产物。苯并二氮杂药物-相关杂质不是与抗体偶联的苯并二氮杂或与抗体偶联的药物-接头。
在本发明的一些方面中，抗体在足以形成包含苯并二氮杂ADC和苯并二氮杂相关杂质的混合物(本文中也称为偶联反应混合物)的条件下与苯并二氮杂药物-接头接触。在其他方面中，抗体-接头(与接头偶联的抗体)在足以形成包含苯并二氮杂ADC和苯并二氮杂药物相关杂质的混合物(本文中也称为偶联反应混合物)的条件下与不含苯并二氮杂的药物接触。在其他方面中，抗体-接头在足以形成包含苯并二氮杂ADC和苯并二氮杂药物相关杂质的混合物(本文中也称为偶联反应混合物)的条件下与苯并二氮杂药物-接头接触。将抗体与接头或药物-接头偶联的一般方法是本领域已知的并且不再本文中详细描述。在一些方面中，将与抗体的赖氨酸残基进行偶联。在其他方面中，将与抗体上存在的天然或经工程改造的半胱氨酸进行偶联(例如，链间二硫化物的半胱氨酸或引入抗体的重链或轻链的半胱氨酸残基)。在一些方面中，将与抗体上存在的经工程改造的半胱氨酸进行偶联，将在与苯并二氮杂药物-接头接触之前还原该抗体，该抗体将会部分再氧化(即，对链间二硫化物再氧化，而不是对引入的半胱氨酸)并且苯并二氮杂药物-接头会偶联至部分再氧化的抗体上的经工程改造的半胱氨酸。在一些这类方面中，经工程改造的半胱氨酸将会在239位(IgG1，如Kabat所述的EU索引编码)上。
本领域技术人员会理解，用于将抗体或抗体-接头与药物或药物-接头偶联的条件将部分取决于药物和接头的特性。通常，在约0℃至约40℃的温度下进行偶联反应。在一些实施方式中，在约4℃下进行偶联反应。在一些实施方式中，在约25℃下进行偶联反应。在一些实施方式中，在约37℃下进行偶联反应。偶联反应可进行任何合适的时间长度。通常，可在合适的条件下将偶联反应混合物孵育几分钟至数小时之间的任意时间。这些反应可进行，例如，约1分钟、或约5分钟、或约30分钟、或约11/2小时、或约4小时、或约12小时或约24小时。通常，可以约6至约9或约7至约8的pH范围形成偶联反应混合物。可使用多种缓冲剂来维持特定pH。合适的缓冲剂的示例包括，但不限于，2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)、2-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]乙磺酸(HEPES)、3-吗啉基丙-1-磺酸(MOPS)、2-氨基-2-羟甲基-丙-1，3-二醇(TRIS)、柠檬酸钠、乙酸钠和硼酸钠。需要时也可包含共溶剂(例如，二甲基乙酰胺、丙二醇、二甲亚砜、二甲基甲酰胺、乙醇、甲醇、四氢呋喃、丙酮和乙酸)、盐(例如，NaCl、KCl、CaCl2、以及Mn2+和Mg2+的盐)、螯合剂(例如，乙二醇-双(2-氨基乙基醚)-N，N，N′，N′-四乙酸(EGTA)、2-({2-[双(羧甲基)氨基]乙基}(羧甲基)氨基)乙酸(EDTA)和1，2-双(邻氨基苯氧基)乙烷-N，N，N′，N′-四乙酸(BAPTA))。可以任意合适的浓度使用缓冲剂、共溶剂、盐和螯合剂，其可由本领域技术人员容易地确定。通常，反应混合物中包含的缓冲剂、共溶剂、盐和螯合剂的浓度范围为约1μM至约1M或甚至更高(例如，0-50％v/v，取决于共溶剂)。任意合适量的苯并二氮杂药物或药物-接头都可用于偶联。
在一些方面中，在偶联反应(例如，抗体与药物-接头偶联)之后，并且在切向流过滤之前，通过使用猝灭剂将使过量的苯并二氮杂药物相关杂质变得没有反应性。猝灭剂是除了抗体以外能够通过与反应部分共价结合来破坏反应部分的反应性的试剂。本领域技术人员将理解，将基于药物或接头的性质来选择猝灭剂。例如，可使用含硫醇的试剂(如B-巯基乙醇或N-乙酰半胱氨酸)来猝灭含有马来酰亚胺或另一种硫醇反应基团的过量药物-接头化合物。诸如甘氨酸的胺可用于猝灭含N-羟基琥珀酰亚胺基酯的过量接头-药物化合物。一般地，使用相对于抗体和药物-接头过量的猝灭剂。
在一些方面中，苯并二氮杂药物相关杂质将是猝灭的苯并二氮杂药物-接头。猝灭的偶联反应混合物是指偶联反应(例如，抗体与药物-接头的偶联、抗体-接头与药物-接头的偶联、或抗体-接头与药物的偶联)、引入猝灭剂并猝灭苯并二氮杂药物相关杂质之后的反应混合物。一般地，术语猝灭的偶联反应混合物是指任何纯化步骤之前的混合物。
本发明的苯并二氮杂二聚体是天然疏水的。发明人惊讶地发现，即使在苯并二氮杂药物相关杂质和ADC溶于ADC混合物的情况中，仍难以从ADC混合物中去除高度疏水性的苯并二氮杂药物相关杂质。本发明已经发现，与SlogP值高于7.50的苯并二氮杂药物相关杂质相比，使用本发明的方法更易于从ADC混合物中去除SlogP值低于7.50的苯并二氮杂药物相关杂质。因此，在优选的实施方式中，苯并二氮杂药物相关杂质的SlogP值将不超过7.50，SlogP值更优选不超过7.0，SlogP甚至更优选不超过6.5或6.0，或甚至5.8。
发明人还发现可使用猝灭剂来降低苯并二氮杂药物相关杂质的疏水性，从而辅助纯化作用。通过选择降低与其结合的化合物的疏水性的猝灭剂，可改善ADC混合物中苯并二氮杂药物相关杂质的清除率。因此，特别优选的猝灭剂是当与待猝灭的化合物结合时发挥作用降低所得化合物疏水性的那些猝灭剂。例如，特别优选的猝灭剂将降低与之连接的苯并二氮杂药物相关杂质(例如，药物或药物-接头)的疏水性。在一些优选的方面中，淬灭的苯并二氮杂药物相关杂质的SlogP值将不超过7.50，SlogP值更优选不超过7.0，SlogP甚至更优选不超过6.5或6.0，或甚至5.8。在一些这类方面中，未猝灭的苯并二氮杂药物相关杂质的SlogP值高于猝灭的苯并二氮杂药物相关杂质。
SlogP是对疏水性的测量。SlogP被定义为辛醇/水分配系数的对数(包括隐含的氢)并且可使用来自化学计算组(ChemicalComputinggroup)(使用Wildman，S.A.，Crippen，G.M.；PredictionofPhysiochemicalParametersbyAtomicContributions(通过原子贡献来预测物理化学参数)；J.Chem.Inf.Comput.Sci.39No.5(1999)868-873来计算SlogP值)的程序MOE来计算。
作用是降低所结合化合物疏水性的猝灭剂包括带电荷的猝灭剂以及不带电荷的猝灭剂，然而其是亲水的。亲水性猝灭剂包括硫醇-糖，如硫醇-葡萄糖，和PEG化的猝灭剂如PEG化的硫醇。
作为PBD药物-接头合成的示例，WO2011/130613描述了合成PBD药物-接头之后将PBD药物-接头与抗体偶联的方法。简而言之，在37℃下用三(羧基乙基)盐酸膦(TCEP)还原在含50mM硼酸钠的pH7.4的PBS中的抗体。通过用脱氢抗坏血酸氧化，使得可以使用药物接头对巯基形式的经工程改造的半胱氨酸进行烷基化，从而重新形成抗体链间二硫键。然后用每个抗体巯基约1.5当量的马来酰亚胺药物-接头使还原的抗体烷基化，从而在足量的共溶剂存在的情况下溶解该药物-接头。在约90分钟之后，通过加入相对于药物-接头约3当量的N-乙酰基半胱氨酸来猝灭反应。
无论使用何种偶联方法，混合物中都将存在苯并二氮杂药物相关杂质。一般但不总是，苯并二氮杂药物相关杂质将以约10至100μM的水平存在于混合物中。在一些方面中，苯并二氮杂药物相关杂质将是猝灭或未猝灭的药物-接头，例如，N-乙酰基半胱氨酸猝灭的药物-接头。在其他方面中，苯并二氮杂药物相关杂质将是猝灭或未猝灭的游离苯并二氮杂药物(即，不与接头或抗体连接的药物)。在其他方面中，苯并二氮杂药物相关杂质将是苯并二氮杂药物-接头降解产物，例如，药物-接头的氧化或水解衍生物。
切向流过滤(TFF)
一般地，在偶联反应和任选的猝灭之后，对包含苯并二氮杂ADC和苯并二氮杂药物相关杂质的混合物进行切向流过滤(TFF)。发明人已经发现，为了从混合物中有效去除苯并二氮杂药物相关杂质，优选使用环糊精并在整个过滤期间保持最低水平的环糊精。为了优化苯并二氮杂药物相关杂质的清除，环糊精保持在一定水平下，该水平基本保持ADC混合物组分(例如，ADC)的溶解性。优选在过滤过程开始之前(例如，在偶联和任选的猝灭之后但在切向流过滤启动之前)或在过滤过程开始(或启动)时向混合物中加入环糊精。在一些方面中，将在过滤过程开始之后但在杂质的任意明显去除之前将环糊精加入ADC混合物中。在进行切向流过滤之前，优选将增溶剂(例如，环糊精)加入混合物中。环糊精的水平优选在整个过滤期间保持在最低水平。
发明人已经发现环糊精是特别优选的使用的增溶剂，由于其加入不仅改善了苯并二氮杂药物相关杂质的去除，其纳入配制的药物-产物中也改善了配制产物的稳定性。在偶联反应和任选的猝灭之后，可向包含苯并二氮杂ADC和苯并二氮杂药物相关杂质的混合物中加入环糊精。在一些方面中，向偶联反应混合物中加入至少约1％w/v环糊精(即，10g/L)。在一些方面中，向偶联反应混合物中加入至少约2％w/v环糊精(即，20g/L)。在一些方面中，向偶联反应混合物中加入至少约3％w/v环糊精(即，30g/L)。在一些方面中，向环糊精混合物中加入约1％w/v环糊精至约10％w/v环糊精、约2％w/v环糊精至约10％w/v环糊精、或约3％w/v环糊精至约10％w/v环糊精、或约3％w/v环糊精至约6％w/v环糊精或者约3％w/v环糊精至约4％w/v环糊精。
切向流过滤是指待纯化的样品经再循环切向通过半透膜表面的过滤过程。太大而难以通过膜孔的大分子保留在膜的上游侧(滞留物侧)并且足够小以通过孔的分子通过进入滤液侧。一般地，确定哪些分子被去除至滤液中并且哪些分子保留在滞留物侧主要取决于分子量、溶解性和过滤器孔径。其他因素，如进料流速、跨膜压力、膜类型或组成、流体混合物中组分的浓度、流体混合物的温度和粘度可能影响清除的速率和程度。使用切向流过滤装置并进行切向流过滤以从偶联反应混合物中清除药物相关杂质的一般方法是本领域已知的并且可使用本发明的启示与本领域公知尝试来优化以用于清除苯并二氮杂药物相关杂质。
在一些方面中，切向流过滤的模式将是渗滤。在渗滤期间，导入缓冲剂同时移去滤液。渗滤可以是，例如，恒容渗滤或非连续渗滤。在优选的实施方式中，在整个渗滤期间保持恒定水平的环糊精。在优选的实施方式中，在过滤过程开始之前或开始时向包含苯并二氮杂ADC和苯并二氮杂药物相关杂质的混合物中加入环糊精。在一些方面中，过滤中保持至少约1％w/v水平的环糊精。在一些这类方面中，在过滤过程开始之前或开始时用环糊精补充ADC混合物使其具有至少约1％w/v环糊精的浓度并且渗滤缓冲液包含至少约1％w/v环糊精。在一些方面中，过滤中保持至少约2％w/v水平的环糊精。在一些这类方面中，在过滤过程开始之前或开始时用环糊精补充ADC混合物使其具有至少约2％w/v环糊精的浓度并且渗滤缓冲液包含至少约2％w/v环糊精。在一些方面中，过滤中保持至少约3％w/v水平的环糊精。在一些这类方面中，在过滤过程开始之前或开始时用环糊精补充ADC混合物使其具有至少约3％w/v环糊精的浓度并且渗滤缓冲液包含至少约3％w/v环糊精。在一些方面中，过滤中保持至少约1％w/v、至少约2％w/v、至少超过3％w/v的水平的环糊精。在一些这类方面中，在过滤过程开始之前或开始时用环糊精补充ADC混合物使其具有至少约1％、2％或3％w/v环糊精的浓度并且渗滤缓冲液包含至少约1％、2％或3％w/v环糊精。在其他方面中，在整个过滤期间保持约1％w/v环糊精至约10％w/v环糊精、约2％w/v环糊精至约10％w/v环糊精、或约3％w/v环糊精至约10％w/v环糊精、或约3％w/v环糊精至约6％w/v环糊精或者约3％w/v环糊精至约4％w/v环糊精。优选地，在过滤过程开始之前或开始时向ADC混合物中加入环糊精，虽然也考虑在过滤过程开始之后，但是优选在杂质的任何明显去除之前首先向ADC混合物中导入环糊精。例如，可通过渗滤缓冲液来添加环糊精。术语“整个过滤期间保持”表示所示浓度的环糊精存在于过滤过程期间。在一些方面中，诸如在过滤过程启动之后(优选在杂质的任何明显去除之前)加入环糊精的方面中，在过滤过程开始时将不存在环糊精，但是在导入环糊精之后其将保持在所示的浓度下。
如上所述，渗滤缓冲液可包括至少约1％、至少约2％、至少约3％w/v环糊精或至少约4％w/v环糊精。在一些方面中，渗滤缓冲液将含有约1％w/v环糊精至约10％w/v环糊精、约2％w/v环糊精至约10％w/v环糊精、或约3％w/v环糊精至约10％w/v环糊精、或约3％w/v环糊精至约6％w/v环糊精或者约3％w/v环糊精至约4％w/v环糊精。一般地，渗滤缓冲液不会另外包含缓冲剂。合适的缓冲剂包括但不限于，乙酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、琥珀酸盐缓冲剂、组氨酸缓冲剂、HEPES和MOPS。在一个方面中，缓冲剂将是Tris(2-氨基-2-(羟基甲基)-1，3-丙二醇)。用作渗滤缓冲液的缓冲液的示例性浓度包括约5mM至约100mM、约50mM、约10mM至约40mM、或约20mM的浓度。对于某些实施方式，包含约5mM至约50mM、约10mM至约40mM、或约20mM的Tris。渗滤缓冲剂的合适pH范围一般为约6.0至约8.0，但可更高或更低。在一些方面中，pH的范围为约6.5至约7.5或约7至7.4。在一些方面中，pH为约7.3或约7.2。
在一些方面中，当使用β环糊精时，整个过滤期间保持至少约2％、至少约3％或至少约4％环糊精的浓度。在一些方面中，当使用γ环糊精时，整个过滤期间保持至少约1％的浓度。
本发明提供了使用切向流过滤从ADC混合物中去除苯并二氮杂药物相关杂质的方法。在一些方面中，切向流过滤装置包括具有入口的过滤盛放器、滤液出口(也称为渗透液出口)、滞留物出口、半透超滤膜和泵。滤膜将盛放器分为上游隔室和下游隔室，使得所有滤液必须进入入口并在通过滤液出口离开盛放器之前通过膜。待使用的滤膜可由任何材料或适合与ADC混合物一起使用的材料组合制成。示例性膜包括由再生纤维素或聚醚砜制成的超滤膜(例如，密理博(Millipore)或膜)。膜的孔径是指过滤器中孔的平均尺寸。为了在本发明中使用，膜的孔径通常小于100kD，更通常低于约50kD，或约30kD。因此，在一些方面中，滤膜将是孔径小于100kD，更通常低于约50kD或约30kD的再生纤维素或聚醚砜超滤膜。
在一些方面中，切向流过滤系统还将包含用于盛放偶联反应混合物的样品储器和与缓冲液储器流体连通的缓冲液储器。在一些方面中，缓冲液的目的是以与滤液流相同的速率置换滤液体积，使得系统中的体积保持恒定。将从样品储器中泵送待纯化的混合物，通过滤膜并且回到样品储器。在一些方面中，流动路径将含有阀门，其可用于阻止混合物回到样品储器。部分关闭阀门使一部分的流体通过膜至废液(滤液)，同时大部分流体回到样品储器(滞留物)。进入废液的滤液含有缓冲剂和足够小以通过膜中的各孔的那些溶质分子。向系统中加入渗滤缓冲液以取代滤液形式的缓冲液损失，使得系统中的总体积保持恒定。由于渗滤缓冲液不含正在去除的溶质，溶质的浓度逐渐降低。
如本文所述，在本发明的一些方面中，恒容渗滤是用于纯化ADC混合物并清除苯并二氮杂药物相关杂质的切向流过滤的模式。在恒容渗滤中，渗滤体积(diavolume)是指任一时间时的总溶液体积，尤其是起始的混合物体积。在一些方面中，在一个或多个渗滤体积后移去样品，以测量苯并二氮杂药物相关杂质的浓度。通常进行一定数量的渗滤体积的渗滤，该数量由之前的实验确定以提供至所需目标水平的清除。通常，一旦苯并二氮杂药物相关杂质的浓度达到目标水平，即终止渗滤。在一些方面中，目标清除水平是约1μM或更低、优选约0.5μM或更低、0.2μM或者甚至0.1μM或更低。
在一些方面中，滞留液将包含约3mg/ml至约10mg/ml苯并二氮杂ADC、约10mM至约30mMTris、约3％至约10％w/v环糊精，pH为约6.5至约7.5。在一些方面中，滞留液将包含约3mg/ml苯并二氮杂ADC、约20mMTris、约3％环糊精或约4％环糊精，pH为约7.3。
环糊精
环糊精是从淀粉产生的非还原环状葡萄糖寡糖。有三种常见的环糊精，具有通过α-1，4糖苷键连接的6、7或8个葡萄糖单元(分别是α-、β-和γ-环糊精)。环糊精通过在其内腔中捕获客体分子(guestmolecular)从而形成包合物来发挥分子容器的作用。α-环糊精具有较小的腔而β-和γ-环糊精有较大的腔。
适用于本发明的环糊精包括α-、β-和γ-环糊精，但由于内腔较大，优选β-和γ-环糊精。已经对环糊精进行了化学改性，尤其是β-环糊精，以改善母体环糊精的溶解性。羟乙基β-环糊精、羟丙基β-环糊精(例如，2-羟丙基-β-环糊精)、甲基化的β-环糊精、葡糖基β-环糊精和磺基丁基醚β-环糊精是经化学改性来改善其溶解性的环糊精的示例。在本发明的一些方面中，将使用包括化学改性的β-环糊精的β-环糊精。在一些方面中，化学改性的β-环糊精将是羟丙基β-环糊精或磺基丁基醚β-环糊精。在一些方面中，环糊精将是γ环糊精，包括化学改性的γ环糊精。在一些方面中，环糊精是羟丙基环糊精(例如，HP4.3-β-环糊精、HP5.5-β-环糊精、HP7.6-β-环糊精和HP4.5-γ-环糊精)。在其他方面中，环糊精将是磺基丁基醚β-环糊精(例如，SBE6.6-β-环糊精、SBE6.7-β-环糊精、SBE6.8-β-环糊精、SBE4.1-β-环糊精和SBE4.6Et3.5-β-环糊精)。在其他方面中，环糊精将是磺基丁基醚γ-环糊精(例如，SBE4.3-γ-环糊精、SBE4.6-γ-环糊精、SBE5.2-γ-环糊精和SBE5.6Et6.3-γ-环糊精)。本文所用的“化学改性的β环糊精”是已经化学改性以至少具有与其母体环糊精(即，未改性的环糊精)相比改善的溶解性的β环糊精。
制剂
本发明提供了包含苯并二氮杂ADC和苯并二氮杂药物相关杂质的混合物(包括偶联反应混合物和猝灭的偶联反应混合物)、TFF滞留物制剂和包含苯并二氮杂ADC和环糊精的药物制剂。TFF滞留物制剂指已经使用TFF但未最终配制的ADC混合物。
通常以至少约1％w/v、至少约2％w/v环糊精、至少约3％w/v环糊精或至少约4％w/v环糊精(例如，1％w/v、2％w/v、3％w/v或4％w/v)的水平向ADC混合物中加入环糊精。在一些方面中，本发明提供了包含至少约1％、至少约2％w/v环糊精、至少约3％w/v环糊精、至少约3％w/v环糊精的偶联反应混合物，包含至少约1％、至少约2％w/v环糊精或至少约3％w/v环糊精的猝灭的偶联反应混合物，和/或包含至少约1％、至少约2％w/v环糊精或至少约3％w/v环糊精的TFF滞留物制剂。在一些方面中，环糊精以约2％或约3％w/v环糊精至约30％w/v环糊精、约2％或约3％w/v环糊精至约15％w/v环糊精、约2％或约3％w/v环糊精至约10％w/v环糊精的水平存在于ADC混合物(包括偶联反应混合物和猝灭的偶联反应混合物)和TFF滞留物制剂中。在环糊精是β环糊精的一些方面中，在ADC混合物或TFF滞留物制剂中存在至少约2％或约3％环糊精。在环糊精是γ环糊精的一些方面中，在ADC混合物或TFF滞留物制剂中存在至少约1％或约2％环糊精或约3％环糊精。
环糊精通常以约3％w/v或更高的水平存在于药物制剂中。在一些方面中，环糊精以约5％w/v或更高、或约6％w/v或更高的水平存在于药物制剂中。在一些方面中，环糊精以3％w/v环糊精、约5％w/v环糊精或约6％w/v环糊精至约30％％w/v环糊精，或约3％w/v环糊精、约5％w/v环糊精或约6％w/v环糊精至约15％％w/v环糊精，或约3％w/v环糊精、约5％w/v环糊精或约6％w/v环糊精至约10％％w/v环糊精，或约3％w/v环糊精、约5％w/v环糊精、或约6％w/v环糊精至约8％％w/v环糊精的水平存在于药物制剂中。在一些实施方式中，环糊精以约3％w/v的浓度存在。在其他实施方式中，环糊精以约4％w/v的浓度存在。在其他实施方式中，环糊精以约5％w/v、约6％w/v、约7％w/v或约8％w/v的浓度存在。在一些方面中，本文所述的药物制剂包含1μM或更低、0.5μM或更低、0.1μM或更低或者0.05μM或更低的苯并二氮杂药物相关杂质。
在一些方面中，本文提供包含1μM或更低、0.5μM或更低、0.1μM或更低或者0.05μM或更低的苯并二氮杂药物相关杂质的苯并二氮杂ADC药物制剂和TFF滞留物制剂。环糊精可以约1％、约2％或约3％w/v环糊精至约30％w/v环糊精，约1％、约2％或约3％w/v环糊精至约15％w/v环糊精，约1％、约2％或约3％w/v环糊精至约10％w/v环糊精的水平存在于这类苯并二氮杂ADC制剂中。在一些方面中，环糊精以约5％或更高或约6％或更高的水平存在于包含1μM或更低、0.5μM或更低、0.1μM或更低或者0.05μM或更低的苯并二氮杂药物相关杂质的苯并二氮杂ADC药物制剂和TFF滞留物制剂中。在一些方面中，环糊精以约1％、约2％、约3％w/v环糊精、约5％w/v环糊精或约6％w/v环糊精至约30％％w/v环糊精，或约3％w/v环糊精、约5％w/v环糊精、或约6％w/v环糊精至约15％％w/v环糊精，或约3％w/v环糊精、约5％w/v环糊精或约6％w/v环糊精至约10％％w/v环糊精，或约3％w/v环糊精、约5％w/v环糊精或约6％w/v环糊精至约8％％w/v环糊精的水平存在于这类制剂中。在一些实施方式中，环糊精以约1％w/v的浓度存在。在一些实施方式中，环糊精以约2％w/v的浓度存在。在一些实施方式中，环糊精以约3％w/v的浓度存在。在其他实施方式中，环糊精以约4％w/v的浓度存在。在其他实施方式中，环糊精以约5％w/v、约6％w/v、约7％w/v或约8％w/v的浓度存在。
药物制剂
本发明提供了包含苯并二氮杂ADC和环糊精的药物制剂。发明人已经发现含有约2％w/v或更高环糊精的含环糊精制剂与制剂中含有0.5％w/v或更低环糊精的制剂相比显示聚集速率和程度降低，并且与不含环糊精的制剂相比显示酸性物质增加的减缓。发明人也已经发现含约6％w/v或更高环糊精的制剂与制剂中含2％w/v或更低环糊精的制剂相比显示苯并二氮杂药物-接头的化学降解的减少。因此，本发明部分基于以下发现：包含约6％w/v环糊精的苯并二氮杂ADC与含较少量环糊精或完全不含环糊精的制剂相比显示改善的稳定性。例如，可由以下的一种或多种来证明改善的稳定性：(i)聚集速率和程度降低，(ii)酸性物质增加的减缓和(iii)药物的化学降解减少。在某些方面中，本发明提供了用于治疗用途的稳定化的液体或冻干苯并二氮杂ADC制剂。具体地，提供了稳定化的制剂，使得治疗性苯并二氮杂ADC在延长的时间段中稳定并且可通过多种给药途径给予。这类制剂特别可用于，例如，指定用于疾病或病症治疗(例如，癌症治疗)的苯并二氮杂ADC，所述治疗通过在表达由ADC的抗体组分识别的抗原的靶标细胞上发挥细胞毒性或细胞生长抑制效果进行。
在一个方面中，本发明提供包含苯并二氮杂ADC、环糊精和任选的至少一种缓冲剂的苯并二氮杂ADC制剂，其中缓冲剂以一定量存在以维持生理上合适的pH。环糊精可以是本文所述的任意环糊精，但优选是β或γ环糊精，并且更优选是已经化学改性以与其母体分子相比改善其溶解性的β环糊精。在一些方面中，环糊精是γ环糊精。在一些方面中，γ环糊精已经化学改性以与其母体分子相比改善其溶解性。特别优选的环糊精是羟丙基β环糊精或磺基丁基醚β环糊精。环糊精可以本文所述的任意浓度存在于制剂中。在一些方面中，环糊精将是以约3％w/v、约4％w/v、约5％w/v或约6％w/v或更高的水平存在于制剂中的γ环糊精(未改性的或化学改性的分子)或化学改性的β环糊精(例如，甲基化的β环糊精、葡糖基β环糊精、羟丙基β环糊精或磺基丁基醚β环糊精)。在一些方面中，环糊精将是以3％w/v环糊精、约5％w/v环糊精或约6％w/v环糊精至约30％％w/v环糊精，或约3％w/v环糊精、约5％w/v环糊精或约6％w/v环糊精至约15％％w/v环糊精，或约3％w/v环糊精、约5％w/v环糊精或约6％w/v环糊精至约10％％w/v环糊精，或约3％w/v环糊精、约5％w/v环糊精或约6％w/v环糊精至约8％％w/v环糊精的水平存在于制剂中的γ环糊精(未改性的或化学改性的分子)或化学改性的β环糊精(例如，甲基化的β环糊精、葡糖基β环糊精、羟丙基β环糊精或磺基丁基醚β环糊精)。
如上所述，本发明的水性苯并二氮杂ADC制剂任选地包含缓冲剂以维持水性溶液中的生理上合适的pH。本文所述的稳定化的水性制剂的合适pH包括，例如，约6.0至约8.0或约6.5至约7.5的pH范围。在某些实施方式中，可能需要在约6.8至约7.5；更通常约7.0至约7.5、约7.1至约7.5、约7.2至约7.5、或约7.3至约7.5的pH下配制ADC。在一个具体变化中，pH为约7.3。在一个具体变化中，pH为约7.2。合适的缓冲剂包括Tris(2-氨基-2-(羟甲基)-1，3-丙二醇)和柠檬酸盐，以及在所示pH范围内有效并且使溶液在配制期间(包括重建冻干制剂以形成本文所述的水溶液后)达到大致生理pH的其他生理上可接受的缓冲剂。这类缓冲剂的示例包括乙酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐和组氨酸。用于本发明所述制剂的缓冲剂的示例性浓度为约5mM至约100mM、约50mM、约10mM至约40mM，或约20mM。对于某些实施方式，包含约5mM至约50mM、约10mM至约40mM，或约20mM的Tris。可易于由本领域普通技术人员确定用于本发明所述制剂的缓冲剂的其他合适浓度。
在某些变化中，这些制剂(如适用于冻干、从冻干形式重建、或用于重建成本文所述的水性制剂的冻干制剂的那些)可含有一种或多种稳定剂以保护抗体-药物偶联物。稳定剂在本文中也指冻干保护剂。通常，合适的稳定剂是糖或氨基酸。示例性的稳定剂包括蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨糖醇、右旋糖、麦芽糖、葡聚糖、精氨酸、甘氨酸和组氨酸。通常，制剂中稳定剂(例如，冻干保护剂)的量使得重建后所得的制剂将基本是等张的。另外，冻干保护剂的量不能太低，使得在冻干后出现不可接受量的ADC降解/聚集。在冻干保护剂是糖(例如，蔗糖或海藻糖)的情况中，水性制剂中示例性的冻干保护剂浓度的范围可以是约1％至约10％(w/v)、更通常约2％至约8％(w/v)、并且甚至更通常约4％至约8％(w/v)。在一个具体变化中，冻干保护剂是浓度为约6％(w/v)的蔗糖。
在一些方面中，制剂中有0.5M或更低的精氨酸。在一些方面中，制剂中有0.2M或0.1M或更低的精氨酸。在一些方面中，制剂中没有精氨酸。在一些方面中，制剂中没有氨基酸。
制剂中使用的其他赋形剂包括，例如，盐(例如，氯化钠)，表面活性剂(例如，聚山梨酯80、聚山梨酯20、泊洛沙姆)，抗氧化剂(例如，抗坏血酸、甲硫氨酸、苹果酸)和其他赋形剂如聚乙二醇、丙二醇、羧甲基纤维素和吡咯烷酮。
本发明的药物制剂中的ADC浓度的一般范围为约0.1mg/ml或0.5mg/ml至约50mg/ml或者约1mg/ml至约30mg/ml。更具体地，ADC的存在浓度为约1mg/ml至约5mg/ml，至约10mg/ml，或至约15mg/ml；或者浓度为约2mg/ml至约5mg/ml或至约10mg/ml。在一些方面中ADC的存在浓度为约0.6mg/ml至约3mg/ml。在具体变化中，ADC的存在浓度为约1mg/ml、约2mg/ml、约3mg/ml、约4mg/ml、约5mg/ml、约6mg/ml、约7mg/ml、约8mg/ml、约9mg/ml或约10mg/ml。
在一些实施方式中，本文所述的ADC混合物、偶联反应混合物、猝灭的偶联反应混合物、TFF滞留物制剂和包含苯并二氮杂ADC和环糊精的药物制剂中ADC的抗体组分选自以下的单克隆抗体：由2对相同的免疫球蛋白链组成的四聚体，各对具有一条轻链和一条重链；抗体Fv片段；抗体Fab片段；抗体Fab’(2)片段，抗体Fd片段，单链抗体(例如，scFv或scFv-Fc融合体)；或单结构域抗体片段(Dab)。在具体的变化中，抗体包含第一和第二多肽链，其中第一多肽链包含在其羧基末端与轻链恒定区融合的轻链可变(VL)结构域，并且其中第二多肽链包含在其羧基末端与重链恒定区融合的重链可变(VH)结构域。在这类变化中，单克隆抗体一般是由两对相同的免疫球蛋白链组成的四聚体，各对具有一条轻链和一条重链。重链恒定区可以是的天然产生的或天然人恒定区的突变形式(其相对于天然人恒定区具有降低的与Fcγ受体结合)的。在一些实施方式中，抗体是选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的同种型。在具体变化中，重链恒定区是IgG1同种型。
用于生成抗体，包括单克隆抗体的各种方法是本领域熟知的并且不在本文中详细描述。用于本发明的抗体可以是完整的抗体或其抗原结合片段。优选的抗体是人或人源化抗体，具体是人或人源化单克隆抗体。在一些方面中，该抗体将特异性结合在癌细胞表面上表达的癌细胞抗原。在其他方面中，抗体将结合与自身免疫疾病状态关联的激活的淋巴细胞。在一些方面中，该抗体会特异性结合CD19、CD20、CD30、CD33、CD70、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、Liv-1或LewisY抗原。
在具体的实施方式中，抗体是特异性结合人CD33的胞外结构域的抗-CD33抗体。示例性人CD33序列对应Swiss-Prot登录号P20138。在某些实施方式中，抗-CD33抗体包含命名为2H12的鼠抗-CD33单克隆抗体的轻链和/或重链可变结构域互补决定区(分别是SEQIDNO：1和2中显示的VL和VH结构域氨基酸序列)。因此，在一些变体中，抗-CD33抗体的轻链可变(VL)结构域包含SEQIDNO：5所示的CDR-L1氨基酸序列、SEQIDNO：6所示的CDR-L2氨基酸序列和SEQIDNO：7所示的CDR-L3氨基酸序列；和/或其重链可变(VH)结构域包含SEQIDNO：8所示的CDR-H1氨基酸序列、SEQIDNO：9所示的CDR-H2氨基酸序列和SEQIDNO：10所示的CDR-H3氨基酸序列。在一些实施方式中，该抗-CD33抗体是人源化抗体。例如，在包含上述的VL和/或VH结构域的抗-CD33抗体的某些变化中，VL结构域是衍生自具有SEQID：1所示的氨基酸序列的鼠2H12VL结构域的人源化VL结构域，和/或VH结构域是衍生自具有SEQIDNO：2所示的氨基酸序列的鼠2H12VH结构域的人源化VH结构域。特别合适的VL和VH结构域的氨基酸序列分别与SEQIDNO：3和SEQIDNO：4至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同。在某些实施方式中，抗-CD33抗体包括第一和第二多肽链，其中第一多肽链包含在与羧基末端与轻链恒定区(例如，具有SEQIDNO：21的氨基酸序列的轻链恒定区)融合的VL结构域并且第二多肽链包含在其羧基末端与重链恒定区(例如，具有SEQIDNO：22或SEQIDNO：23的氨基酸序列的重链恒定区)融合的VH结构域。在这类变化中，抗-CD33抗体一般是由两对相同的免疫球蛋白链组成的四聚体，各对具有一条轻链和一条重链。适用于本发明的示例性抗-CD33抗体也描述于2012年5月18日提交的美国临时申请号61/649,110，其内容通过引用全文纳入本文用于所有目的。
在其他实施方式中，抗体是特异性结合人CD70的胞外结构域的抗-CD70抗体。示例性人CD70序列对应Swiss-Prot登录号P32970.2。在某些实施方式中，抗-CD70抗体包含命名为1F6的鼠抗-CD70单克隆抗体的轻链和/或重链可变结构域互补决定区(分别是SEQIDNO：11和12中显示的VL和VH结构域氨基酸序列)。在一些这类变体中，抗-CD70抗体的轻链可变(VL)结构域包含SEQIDNO：15所示的CDR-L1氨基酸序列、SEQIDNO：16所示的CDR-L2氨基酸序列和SEQIDNO：17所示的CDR-L3氨基酸序列；且其重链可变(VH)结构域包含SEQIDNO：18所示的CDR-H1氨基酸序列、SEQIDNO：19所示的CDR-H2氨基酸序列和SEQIDNO：20所示的CDR-H3氨基酸序列。在一些实施方式中，该抗-CD70抗体是人源化抗体。例如，在包含上述的VL和/或VH结构域的抗-CD70抗体的某些变化中，VL结构域是衍生自具有SEQID：11所示的氨基酸序列的鼠1F6VL结构域的人源化VL结构域，和/或VH结构域是衍生自具有SEQIDNO：12所示的氨基酸序列的鼠1F6VH结构域的人源化VH结构域。特别合适的VL和VH结构域的氨基酸序列分别与SEQIDNO：13和SEQIDNO：14至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同。在某些实施方式中，抗-CD70抗体包括第一和第二多肽链，其中第一多肽链包含在与羧基末端与轻链恒定区融合的VL结构域(例如，具有SEQIDNO：21的氨基酸序列的轻链恒定区)并且第二多肽链包含在其羧基末端与重链恒定区融合的VH结构域(例如，具有SEQIDNO：22的氨基酸序列的重链恒定区)。在这类变化中，抗-CD70抗体一般是由两对相同的免疫球蛋白链组成的四聚体，各对具有一条轻链和一条重链。适用于本发明的示例性抗-CD70抗体也描述于美国专利号8,067,546，其内容通过引用全文纳入本文用于所有目的。
示例性的抗-CD33和抗-CD70可变结构域和CDR序列，以及示例性免疫球蛋白轻链和重链恒定区示于下表1。
表1
如前所述，本发明的示例性药物制剂显示(i)与制剂中含0.5％w/v或更低环糊精的制剂相比降低的聚集速率和程度，(ii)与不含环糊精的制剂相比减缓的酸性物质增加和/或(iii)与制剂中含2％w/v或更低环糊精的制剂相比药物-接头(例如，苯并二氮杂药物)的化学降解减少。因此，本发明提供了制备制剂的方法，该制剂具有以下中的至少一种：(i)与制剂中含2％w/v或更低环糊精的制剂相比改善的对苯并二氮杂药物的化学降解的耐性，(ii)与制剂中含0.5％w/v环糊精或更低的制剂相比改善的对聚集的耐性，和(iii)与不含环糊精的制剂相比改善的对酸性物质增加的耐性。因此，在一些方面中，包含约5％或约6％w/v或更高环糊精的本发明的药物制剂显示以下至少一种：(i)与制剂中含2％或更低环糊精的制剂相比改善的对苯并二氮杂药物的化学降解的耐性，(ii)与制剂中含0.5％或更低环糊精的制剂相比改善的对聚集的耐性，和(iii)与不含环糊精的制剂相比改善的对酸性物质增加的耐性。因此，在一些方面中，包含约5％或约6％w/v或更高环糊精的本发明的药物制剂显示(i)与制剂中含2％w/v或更低环糊精的制剂相比改善的对苯并二氮杂药物的化学降解的耐性以及(ii)与制剂中含0.5％w/v或更低环糊精的制剂相比改善的对聚集的耐性。在其他方面中，包含约5％或约6％w/v或更高环糊精的本发明的药物制剂显示(i)与制剂中含2％或更低环糊精的制剂相比改善的对苯并二氮杂药物的化学降解的耐性，(ii)与制剂中含0.5％或更低环糊精的制剂相比改善的对聚集的耐性，和(iii)与不含环糊精的制剂相比改善的对酸性物质增加的耐性。
在本文所述的任意制剂或混合物(包括药物制剂)中，如本文所述，苯并二氮杂ADC可包含与PBD二聚体1、PBD二聚体2、PBD二聚体3、PBD二聚体4、PBD二聚体5、PBD二聚体6、PBD二聚体7、PBD二聚体8、PBD二聚体9、PBD二聚体10、PBD二聚体11、PBD二聚体12、PBD二聚体13、PBD二聚体14、PBD二聚体15、PBD二聚体16或PBD二聚体17偶联的人源化2H12或人源化1F6抗体。在一些方面中，PBD二聚体将通过经工程改造到抗体中的半胱氨酸残基与抗体偶联。在一些方面中，半胱氨酸残基在由EU索引(Kabat，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest(《免疫学感兴趣的蛋白质的序列》)(马里兰州贝塞斯达的国立卫生研究院，1987和1991))确定的239位(人IgG1)处工程改造到抗体中。在一些方面中，制剂中每个抗体将有平均2个药物-接头。
在一些实施方式中，本发明的药物制剂提供了ADC(例如，抗-CD33或抗-CD70ADC)的浓缩制剂，通常用作原料药产品。此外，在某些实施方式中，本发明的药物制剂对冷冻、冻干和/或重建稳定。
在一些方面中，本文所述的药物制剂储存在约-80℃至约8℃的温度下。通常，在这些范围内，药物制剂是稳定的并且保持生物活性。在某些方面中，当暴露于胁迫条件(例如，在25℃或40℃下储存延长的时间，如7天和14天)时，与不含环糊精的制剂相比，本文所述的制剂具有改善的稳定性。
本发明的药物制剂适用于通过多种给药途径递送。在某些实施方式中，通过胃肠外，如静脉内、肌内或皮下给予药物制剂。对于用于治疗癌症的ADC的给药，可通过静脉内或皮下给药来向全身循环中递送药物制剂。在具体的实施方式中，配制药物制剂用于静脉内递送。静脉内给药可以是例如输注一段时间(如30-90分钟)或单次推注注射。在一些方面中，将通过在外周插入的中央导管中的缓慢的静脉内推注(即超过30-60秒)来给药。
本发明的药物制剂的有效剂量可根据许多不同的因素变化，包括给药方式、目标位点、患者的生理状态、患者是人还是动物、给予的其他药物和治疗是预防性还是治疗性。通常，患者是人，但也可治疗非人哺乳动物。需要对治疗剂量进行滴定以优化安全性和功效。
本发明的ADC制剂的示例性剂量包括约1.0μg/kg至约5mg/kg、约10μg/kg至约3mg/kg、约10μg/kg至约2mg/kg、约1.0μg/kg至1.0mg/kg或约1.0μg/kg至500.0μg/kg对象体重。
给药频率取决于抗体-药物偶联物在循环中的半衰期、患者的病症和给药途径等因素。该频率可以是响应患者病症的变化或所治疗病症(例如，癌症)的进展进行每天、每周、每月、每季度或不规则间隔给药。在一段持续治疗过程中，静脉内给药的一个示例性频率为介于一周两次和每季度一次之间，但也可采用更高或更低频率的剂量。在一段持续治疗过程中，静脉内给药的其他示例性频率为介于一周一次和每月一次之间，但也可采用更高或更低频率的剂量。对于皮下给药，示例性剂量频率为每天至每月，但也可采用更高或更低频率的剂量。
尤其优选的是单位剂型形式的本发明的制剂以便于剂量的均匀和给药。本发明的制剂可以液体或冻干形式存在于例如，胶囊、玻璃瓶、安瓿、多剂量容器等中。单位剂型可包括本文所述的任意制剂。在一些方面中，ADC会是储存于一次性琥珀色玻璃瓶中用于静脉内给药重建的冻干饼或粉末。重建使用合适的稀释剂(例如，注射用水)至所需的浓度。通常用足量的稀释剂来进行重建，使得重建的溶液的组分浓度通常与冻干前的制剂相同。根据待给予患者的剂量水平，还可进一步稀释重建产物。进一步稀释可使用，例如，注射用氯化钠。在本发明的一些方面中，在重建或任选的进一步稀释之后，立即通过静脉内(例如，缓慢静脉内推注)向中央静脉可及装置的合适注射部分给予ADC。通常用盐水冲洗输注线。
在一些方面中，本发明提供了包含药物单位剂型的治疗产品，该剂型包含本发明的稳定化ADC制剂(例如，如本文所述，含液体或冻干形式的ADC制剂的密封容器)。治疗产品还可包含使用标签。在一些实施方式中，以药盒形式提供的治疗产品还包含，例如，使用在患者中达到治疗剂量所必需的合适体积的说明。可设计单位剂型、容器或药盒以提供多次使用的足够制剂或用于单次使用。在一些实施方式中，该药盒还包含稀释剂。
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实施例
在WO2011/130613中描述了PBD二聚体1-4及其合成。可使用WO2011/130613A1中所述的方法来合成PBD二聚体5-10和16。简而言之，可通过WO2011/130613A1中的C3-连接的双-三氟甲磺酸酯中间体8a获得PBD二聚体9和16。所需的C2芳基基团如硼酸或硼酸频哪醇酯在随后的铃木(Suzuki)偶联中被引入，之后是SEM双内酰胺还原以展现亚胺官能团。以相同的方式从WO2011/130613A1中的C5-连接的双-三氟甲磺酸酯中间体8b制备PBD二聚体5-8和10。可采用WO2011/130613A1中所述的方法稍作改动得到在C2芳基中含酯或羧酸的PBD二聚体11-15。可从WO2011/130613A1中的C3-连接的双-三氟甲磺酸酯中间体8a制备PBD二聚体13。使用合适的官能化的硼酸或硼酸频哪醇酯通过铃木偶联对双-三氟甲磺酸酯去对称化(desymmetrized)以将C2芳基设置为含有氨基官能团。然后用三乙基硼氢化锂将所得的单三氟甲磺酸酯还原成SEM甲醇，其然后用于第二次铃木偶联以将C2芳基设置为含有甲酯。最后，如WO2011/130613A1所述，通过在硅胶上搅拌3天将SEM甲醇转化成亚胺。以相同的方式从WO2011/130613A1中的C5-连接的双-三氟甲磺酸酯中间体8b制备PBD二聚体12和14。可通过皂化来实现PBD酯向游离羧酸(11和15)的转化。在US20100158909中一般地描述了IgG1mAb的半胱氨酸突变体的制备。
在下文实施例中使用的PBD药物-接头如下。在WO2011/130613A1中描述了药物-接头与抗体的偶联。
下文实施例中提及的猝灭的药物-接头具有以下结构：
PBD药物接头通过重链239位与h2H12ec抗体或h1F6ec偶联(抗体名称中“ec”是指抗体在239位处有经工程改造的半胱氨酸)。简而言之，在239位(EU索引编码)处引入半胱氨酸的h2H12和h1F6经还原，部分再氧化(即，对链间二硫键的再氧化)，并使用WO2011/130613中所述的方法偶联至PBD药物-接头以形成ADC。PBD药物-接头通过引入的半胱氨酸残基偶联至经部分再氧化的抗体(每抗体平均2个药物-接头)。h2H12-1指与化合物1偶联的人源化2H12ec抗体，而h1F6-1指与化合物1偶联的人源化1F6ec抗体。h2H12-2指与化合物2偶联的人源化2H12ec抗体，而h1F6-2指与化合物2偶联的人源化1F6ec抗体。h2H12-3指与化合物3偶联的人源化2H12ec抗体，而h1F6-3指与化合物3偶联的人源化1F6ec抗体。使用通过239位处引入的半胱氨酸与化合物1偶联的h2H12ec或h1F6ec来进行实施例4-7。
实施例1：环糊精基制剂降低了全部6种PBDADC的聚集速率和程度
通过采用透析、缓冲液交换柱或离心过滤将原料缓冲液交换成测试制剂缓冲液来制备制剂。在附图说明中显示了制剂。所示的精氨酸浓度为0.5M。由UV光谱确定最终的ADC浓度范围为1.3mg/mL至3.1mg/mL。将配制的ADC填充至预灭菌的管中并在以下ICH条件下储存：2-8℃，25℃/65％RH和/或40℃/75％RH。使用尺寸排阻色谱来监测％HMW。图1制剂含h2H12-1并在25℃下储存；图2制剂含h1F6-1并在25℃下储存；图3制剂含h2H12-3并在40℃下储存；图4制剂含h1F6-3并在40℃下储存；图5制剂含h2H12-2并在40℃下储存；图6制剂含h1F6-2并在40℃下储存；图13制剂含h1F6-1并在25℃下储存。
实施例2：基于HPBCD的制剂减缓了6个PBDADC中5个的酸性物质增加。
通过采用透析、缓冲液交换柱或离心过滤将原料缓冲液交换成测试制剂缓冲液来制备制剂。在附图说明中显示了制剂。所示的精氨酸浓度为0.5M。由UV光谱确定最终的ADC浓度范围为1.3mg/mL至3.1mg/mL。将制剂填充至预灭菌的管中并在以下ICH条件下储存：2-8℃，25℃/65％RH和/或40℃/75％RH。通过图像毛细管等电聚焦分析样品的电荷分布(酸性％、主要％、碱性％)。图7制剂含h2H12-1并在25℃下储存；图8制剂含h1F6-1并在25℃下储存；图9制剂含h2H12-3并在40℃下储存；图10制剂含h1F6-3并在40℃下储存；图11制剂含h2H12-2并在40℃下储存；图12制剂含h1F6-2并在40℃下储存。
实施例3：基于HPBCD的制剂降低了药物-接头的化学降解
通过采用透析、缓冲液交换柱或离心过滤将原料缓冲液交换成测试制剂缓冲液来制备制剂。通常，制剂包含作为对照的初始制剂(最常用精氨酸)、缓冲剂、3％环糊精和6％环糊精。由UV光谱确定最终的ADC浓度范围为1.3mg/mL至3.1mg/mL。将制剂填充至预灭菌的管中并在以下ICH条件下储存：2-8℃，25℃/65％RH和/或40℃/75％RH。通过使用还原型PLRP/MS通过降解产物％或使用胃蛋白酶消化图通过完整药物接头％来测量药物-接头稳定性。结果如下，各制剂列于左栏。表2显示在40℃下一周后含6％环糊精的制剂比含2％环糊精的制剂显示较少的药物接头降解。表3显示含6％环糊精的h2H12-1制剂在25℃下一周后显示较少的药物接头降解并且表4显示含6％hpb环糊精的h1F6-1制剂在40℃下一周后维持较高水平的完整药物接头。
表2
表3
表4
实施例4：环糊精浓度曲线。
该实验测试了3％w/v的羟丙基-β-环糊精(hpb-CD)作为渗滤缓冲液在渗滤期间防止包含h2H12-1的猝灭的偶联反应混合物(QCR)聚集的实用性。该实验的初步目标是确定待用于渗滤的膜对于hpb-CD是否是可透的。如果膜对于hpb-CD是弱可透的，则其在批料中的浓度会增加到渗滤缓冲液的浓度以上，而如果其是易透的，则批料中的hpb-CD浓度会达到渗滤缓冲液中的浓度并保持在该水平上。
渗滤(DF)过程使用来自密理博的具有30kD分子量孔径的88cm2的UltracelPellicon3盒。DF的批料体积是250mL，整个过程中的进料流速为40ml/分钟，并且调节滞留物阀门以将跨膜压力保持在约20psi上。用于维持恒定的批料体积的渗滤缓冲液的添加速率从9mL/分钟开始，但是在大部分过程中保持在13-14ml/分钟。在完成各渗滤体积之后移出样品。使用配备的蒸发光散射检测器的RPHPLC测试来测量各样品中hbp-CD的浓度。
结果显示hbp-CD的浓度在5个渗滤体积中从渗滤开始时的0达到2.8-2.9重量％，然后在另外5个渗滤体积中保持恒定(图14)。hpb-CD的浓度曲线与对使用的超滤膜易透的试剂的曲线一致。
实施例5：用3％和10％w/v环糊精的切向流过滤
在该实验中，采用的QCR在50mMTris/5mMEDTA(pH8.0)中含h2H12-1，50w/w％丙二醇，猝灭的药物-接头(化合物4)和NAC。通过加入25％体积含50w/v％hpb-CD的50mMTris/5mMEDTA，pH8.0溶液来使混合物达到10w/v％hpb-CD。然后在与实施例4相似但适当放大的条件下对混合物进行渗滤。在各渗滤体积后移出样品，并冻干直至分析。确定各样品中猝灭的药物-接头的浓度。猝灭的药物-接头的浓度在渗滤期间以一定方式降低，使得建立恒容渗滤中清除的模型，如ln(C/C0)和渗滤体积数量之间的线性关系：C/C0＝exp(-SN)。C和C0是测量的分析物浓度，N是渗滤体积的数量，并且S是筛分系数，其定义为膜的透过物侧分析物的浓度除以膜的滞留物侧分析物的浓度。起始浓度为16.3μM并且最终浓度为0.14μM。
在10w/v％hpb-CD存在下，在该渗滤过程中有效清除了猝灭的PBD药物-接头(图15)。与之前的没有hpb-CD下在一定数量的渗滤体积之后清除实验停止不同，在该实验中，清除有效地达到了非常低的水平。实验证明可在测试的条件下实现有效和完全清除。
用较低浓度的hpb-CD来重复该实验(图15)。当用3w/v％hpb-CD代替10％时观察到基本上相同的清除。
实施例6：从QCR混合物中清除药物相关杂质
实施例4和5中所述的实验显示可使用环糊精通过渗滤过程从混合物中去除猝灭的PBD药物-接头。本实验的目的在于确定该方法是否可从具有较高的猝灭的PBD药物-接头初始浓度的QCR中成功清除猝灭的药物-接头。
将储存的冷冻的经还原抗体(239位但不是链间二硫键还原的h2H12)解冻。加入丙二醇(PG)，然后加入药物-接头-PG/DMA(化合物1)以形成偶联反应混合物。该混合物含有50％(v/v)PG和过量的药物-接头(化合物4)。反应进行约90分钟，之后加入3.0当量(相对于药物-接头)NAC，并且使猝灭反应进行约30分钟。
加入足量的50w/w％hpb-CD母液以将猝灭的偶联反应hpb-CD浓度变为3％。通过打开TFF进料泵，使用88cm2再生纤维素膜来启动TFF过程。如之前的含高百分比PG的溶液的TFF过程那样，初始流速由于高的跨膜压力而受到限制，但是在第一渗滤体积期间，进料流速可逐渐增加至膜的推荐操作范围。此后，调节滞留物阀门以维持20psi的TMP。加入渗滤缓冲液以保持恒定体积。该过程持续20个渗滤体积，并且在各渗滤体积之后取样并冷冻用于随后的分析。
对整个纯化过程中所取的样品中溶液中猝灭的PBD药物-接头(化合物4)的浓度的测量显示通过TFF过程清除了该材料。初始浓度为27.47μM并且在20个渗滤体积之后降至0.03μM，显示可通过TFF从QCR溶液中清除猝灭的PBD药物-接头(图16)。对最终产物样品的分析显示平均药物加载量和分布、二硫键完整性、电荷分布和UV光谱没有受到该过程的不利影响(数据未显示)。
实施例7：从包含2H12ADC或h1F6ADC的QCR混合物中清除药物相关杂质
使用30kDMW截留0.1m2UltracelPellicon3膜(密理博)对猝灭的偶联反应混合物进行TFF过程。开始通过流速，然后通过滞留物阀门来将TMP保持在20psi。TFF过程运行20个渗滤体积，每2个渗滤体积收集样品。测定各样品中猝灭的PBD药物-接头的浓度。
在使用包含2H12ADC的QCR混合物的一个实验中，猝灭的PBD药物-接头(化合物4)的浓度在TFF过程期间从29.56mM降至0.02mM。清除曲线是线性的，筛分系数为约0.4。没有TFF步骤期间回收的数据，但是ADC的总产率＞95％，因此TFF过程期间的损失＜5％(图17)。
在3％hpb-CD存在下，TFF对于猝灭的PBD药物-接头的清除而言与碳-过滤一样有效。基于TFF过程期间药物相关杂质的检验，估计14个渗滤体积足以确保达到足够低的杂质水平。
在使用包含h1F6ADC的QCR混合物的一个实验中，猝灭的PBD药物-接头(化合物4)的浓度在TFF过程期间从21.2mM降至0.1uM。清除曲线是线性的，筛分系数为约0.6。(图18)
实施例8-在没有环糊精的情况下使用切向流过滤来纯化苯并二氮杂ADC
使用恒容渗滤来从QCR中纯化猝灭的药物-接头(化合物4)。将猝灭的偶联反应混合物导入切向流过滤装置。猝灭的偶联反应混合物包含Tris、NaCl和50％丙二醇。切向流过滤缓冲液也包含Tris、NaCl和50％丙二醇。在超滤/渗滤顺序之后，混合物中剩余1.1uM苯并二氮杂药物相关杂质，且清除在4个渗滤体积之后停止。(数据未显示)
实施例9-细胞毒性
进行细胞毒性研究以确定含6％环糊精的ADC制剂是否保留细胞毒性。结果证明ADC制剂保留细胞毒性(数据未显示)。
实施例10-从未猝灭的偶联反应混合物中清除药物相关杂质
使用恒容渗滤从未猝灭的偶联反应混合物中纯化SlogP值为7.57的未猝灭的PBD药物-接头(化合物1)。环糊精保持在3％。令人惊讶地，未猝灭的PBD接头的清除(数据未显示)并没有如之前的实施例中所示的猝灭的PBD药物-接头的清除那样高效。本实验证明降低PBD药物-接头的疏水性(化合物4的SlogP值为5.76)改善了清除。

Claims (64)

1.一种从包含苯并二氮杂ADC和苯并二氮杂药物相关杂质的混合物中去除苯并二氮杂药物相关杂质的方法，所述方法包括对包含苯并二氮杂ADC和苯并二氮杂药物相关杂质的混合物进行切向流过滤同时在所述混合物中保持至少约1％w/v的环糊精浓度。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述环糊精在切向流过滤开始时存在于所述混合物中。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在苯并二氮杂药物相关杂质的任何明显去除之前向所述混合物中加入环糊精，并且此后所述混合物中所述环糊精的浓度保持在至少约1％w/v。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，在所述混合物中保持至少约2％的环糊精浓度。
5.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，在所述混合物中保持至少约3％的浓度。
6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述切向流过滤是恒容渗滤。
7.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述切向流过滤装置包括泵、具有入口的过滤盛放器、滤液出口、滞留物出口、孔径为约50Kd或更小的超滤膜、用于盛放偶联反应混合物的样品储器和与所述样品储器流体连通的缓冲液储器，所述超滤膜将所述过滤盛放器分成上游隔室和下游隔室使得所有的滤液必须进入所述入口并在通过所述滤液出口排出所述过滤盛放器之前通过所述超滤膜，所述缓冲液储器中的缓冲液包含至少约1％w/v环糊精、至少约2％w/v环糊精或至少约3％w/v环糊精。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述缓冲液以与所述滤液流相同的速率置换过滤体积，使得所述切向流过滤装置中的体积保持恒定。
9.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，所述过滤是非连续渗滤。
10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：(i)将抗体与苯并二氮杂药物-接头在足以形成包含苯并二氮杂ADC的偶联反应混合物的条件下接触，以及(ii)将所述反应混合物与猝灭剂接触以形成猝灭的偶联反应混合物，进行切向流过滤的所述混合物是猝灭的偶联反应混合物。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其特征在于，所述苯并二氮杂药物相关杂质是猝灭的苯并二氮杂药物-接头。
12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述猝灭的苯并二氮杂药物-接头的SlogP值不超过7.50或不超过6.5。
13.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述苯并二氮杂药物相关杂质降低至约1μM或更低、0.5μM或更低、0.1μM或更低，或0.05μM或更低的水平。
14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述环糊精是化学改性的β环糊精。
15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述环糊精是羟丙基β环糊精或磺基丁基醚β环糊精。
16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述环糊精是羟丙基β环糊精。
17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述苯并二氮杂ADC为单克隆抗体偶联吡咯并苯并二氮杂二聚体。
18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述吡咯并苯并二氮杂二聚体是以下物质或其盐：
19.如权利要求18所述的方法，其特征在于，所述苯并二氮杂ADC是以下物质或其盐：
其中，Ab是单克隆抗体并且p表示所述混合物中每抗体药物-接头分子平均数并且约为2。
20.如权利要求18或19所述的方法，其特征在于，所述苯并二氮杂药物相关杂质是猝灭的药物-接头，猝灭前所述药物-接头是具有下式的物质或其盐：
21.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其特征在于，所述苯并二氮杂ADC是单克隆抗体偶联吲哚苯并二氮杂二聚体或噁唑苯并二氮杂二聚体。
22.一种使用如前述权利要求中任一项所述的方法纯化的混合物。
23.一种苯并二氮杂ADC制剂，所述制剂中包含0.1μM或更低的苯并二氮杂药物相关杂质。
24.一种药物制剂，其包含：
苯并二氮杂ADC；和
浓度为约3％w/v至约30％w/v的环糊精。
25.如权利要求24所述的药物制剂，其特征在于，所述制剂还包含至少一种缓冲剂；所述制剂是水溶液并且所述至少一种缓冲剂的浓度能够有效地保持生理上合适的pH。
26.如权利要求24或25所述的药物制剂，其特征在于，所述环糊精存在的浓度为约5％w/v或约6％w/v至约30％w/v。
27.如权利要求26所述的药物制剂，其特征在于，所述环糊精存在的浓度为约6％w/v至约10％w/v。
28.如权利要求24-27中任一项所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂还包含冻干保护剂。
29.如权利要求28所述的药物制剂，其特征在于，至少一种冻干保护剂是糖。
30.如权利要求29所述的药物制剂，其特征在于，所述糖是蔗糖。
31.如权利要求28-30中任一项所述的药物制剂，其特征在于，所述冻干保护剂存在的浓度为约4％w/v至约8％w/v。
32.如权利要求31所述的药物制剂，其特征在于，所述冻干保护剂存在的浓度为约6％w/v。
33.如权利要求24-32中任一项所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂的pH为约6.0至约8.0。
34.如权利要求33所述的制剂，其特征在于，所述制剂的pH为6.5至7.5。
35.如权利要求34所述的制剂，其特征在于，所述制剂的pH为约7.3。
36.如权利要求25-35中任一项所述的制剂，其特征在于，所述至少一种缓冲剂选自：Tris、乙酸盐、组氨酸、柠檬酸盐、磷酸盐和琥珀酸盐。
37.如权利要求36所述的制剂，其特征在于，所述至少一种缓冲剂是浓度为约20mM的Tris。
38.如权利要求24-37中任一项所述的制剂，其特征在于，所述苯并二氮杂ADC存在的浓度为约0.5mg/ml至约30mg/ml。
39.如权利要求38所述的制剂，其特征在于，所述苯并二氮杂ADC存在的浓度为约0.5mg/ml、1mg/ml或2mg/ml至约10mg/ml。
40.如权利要求39所述的制剂，其特征在于，所述苯并二氮杂ADC的浓度为约2mg/ml至约5mg/ml。
41.如权利要求40所述的制剂，其特征在于，所述苯并二氮杂ADC的浓度为约3mg/ml。
42.如权利要求23-41中任一项所述的制剂，其特征在于，所述环糊精是化学改性的β环糊精。
43.如权利要求42所述的制剂，其特征在于，所述环糊精是羟丙基β环糊精或磺基丁基醚β环糊精。
44.如权利要求42所述的制剂，其特征在于，所述环糊精是羟丙基β环糊精。
45.如权利要求23-44中任一项所述的制剂，其特征在于，所述苯并二氮杂ADC是单克隆抗体偶联吡咯并苯并二氮杂二聚体。
46.如权利要求45所述的制剂，其特征在于，所述吡咯并苯并二氮杂二聚体是以下物质或其药学上可接受的盐：
47.如权利要求46所述的制剂，其特征在于，所述苯并二氮杂ADC是以下物质或其药学上可接受的盐：
其中，Ab是单克隆抗体并且p表示所述制剂中每抗体药物-接头分子平均数并且约为2。
48.如权利要求23-44中任一项所述的制剂，其特征在于，所述苯并二氮杂ADC是单克隆抗体偶联吲哚苯并二氮杂二聚体或噁唑苯并二氮杂二聚体。
49.如权利要求23-48中任一项所述的制剂，其特征在于，所述ADC的抗体组分是与人CD33或人CD70的胞外结构域特异性结合的抗体。
50.如权利要求49所述的制剂，其特征在于，所述抗体是h2H12或h1F6抗体。
51.如权利要求50所述的制剂，其特征在于，人源化2H12抗体的可变轻链序列包含SEQIDNO：3所示的氨基酸序列且可变重链序列包含SEQIDNO：4所示的氨基酸序列，并且人源化1F6抗体的可变轻链序列包含SEQIDNO：13所示的氨基酸序列且可变重链序列包含SEQIDNO：14所示的氨基酸序列。
52.如权利要求23-51中任一项所述的制剂，其特征在于，所述ADC的抗体组分包含IgG1型重链恒定区。
53.一种药物制剂，所述药物制剂包含：
PBDADC，其中ADC的浓度为约2mg/ml至约5mg/mol；
浓度为约5％w/v至约10％w/v的羟丙基环糊精；和
浓度为约4％至约8％的糖；以及
至少一种缓冲剂；
其中，所述制剂是水溶液并且所述至少一种缓冲剂的浓度能够有效地保持生理上合适的pH。
54.如权利要求53所述的制剂，其特征在于，
所述抗体-药物偶联物的浓度为约3mg/ml；
HPβCD的浓度为约6％；
所述糖是浓度为约6％的蔗糖；并且
所述至少一种缓冲剂是浓度为约20mM的Tris；并且
pH为约7.0至约7.5，优选7.2或7.3。
55.如权利要求53或54所述的制剂，其特征在于，所述ADC是具有下式的物质或其药学上可接受的盐：
其中，Ab是单克隆抗体并且p表示所述制剂中每抗体药物-接头分子平均数并且约为2。
56.如权利要求23-55中任一项所述的制剂，其特征在于，所述ADC的苯并二氮杂药物组分通过所述抗体上存在的经工程改造的半胱氨酸残基与所述抗体偶联，并且所述抗体的链间二硫键链是基本完整的。
57.如权利要求56所述的制剂，其特征在于，所述半胱氨酸残基位于IgGl重链的239位，其中根据Kabat所示的EU索引进行编号。
58.如权利要求53-57中任一项所述的制剂，其特征在于，所述抗体是h2H12或h1F6抗体。
59.如权利要求58所述的制剂，其特征在于，人源化2H12抗体的可变轻链序列包含SEQIDNO：3所示的氨基酸序列且可变重链序列包含SEQIDNO：4所示的氨基酸序列，并且人源化1F6抗体的可变轻链序列包含SEQIDNO：13所示的氨基酸序列且可变重链序列包含SEQIDNO：14所示的氨基酸序列。
60.一种制备稳定化、冻干的抗体-药物偶联物制剂的方法，所述方法包括：
提供如权利要求25-29中任一项所述的制剂；并且
冻干水溶液以形成所述冻干的抗体-药物偶联物制剂。
61.一种通过权利要求60所述的方法制备的稳定化、冻干的抗体-药物偶联物制剂。
62.一种稳定化、冻干的抗体-药物偶联物制剂，所述制剂能重建成权利要求25-59中任一项所述的水性制剂。
63.一种防止与抗体连接的苯并二氮杂药物-接头的化学降解或片段化的方法，所述方法包括将所述与抗体连接的苯并二氮杂与至少约6％w/v的γ环糊精或化学改性的β环糊精一起配制。
64.如权利要求23-59中任一项所述的制剂，所述制剂具有改善的稳定性，与具有2％w/v或更低的环糊精的苯并二氮杂药物接头相比，经测量所述制剂中苯并二氮杂药物接头的化学降解减少。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022268050A1 (zh) * 2021-06-22 2022-12-29 荣昌生物制药(烟台)股份有限公司 一种药物组合及其用途

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130309223A1 (en) * 2012-05-18 2013-11-21 Seattle Genetics, Inc. CD33 Antibodies And Use Of Same To Treat Cancer
TW201709932A (zh) 2015-06-12 2017-03-16 西雅圖遺傳學公司 Ｃｄ１２３抗體及其共軛物
US11027021B2 (en) 2016-03-15 2021-06-08 Seagen Inc. Combinations of PBD-based antibody drug conjugates with Bcl-2 inhibitors
EP3463463A4 (en) 2016-06-03 2020-01-15 Seattle Genetics, Inc. COMBINATION OF CD33 ANTIBODY-ACTIVE SUBSTANCE CONJUGATES WITH CHEMOTHERAPEUTICS
EP3469001A4 (en) 2016-06-09 2020-05-06 Seattle Genetics, Inc. COMBINATIONS OF PBD-BASED ANTIBODY CONJUGATES WITH FLT3 INHIBITORS
SG10202104259RA (en) 2016-11-08 2021-06-29 Regeneron Pharma Steroids and protein-conjugates thereof
CN108452319A (zh) * 2017-02-20 2018-08-28 浙江特瑞思药业股份有限公司 靶向cd20的抗体偶联药物制剂
RU2019138507A (ru) 2017-05-02 2021-06-02 Мерк Шарп И Доум Корп. Составы антител против lag3 и совместные составы антител против lag3 и антител против pd-1
JOP20190260A1 (ar) * 2017-05-02 2019-10-31 Merck Sharp & Dohme صيغ ثابتة لأجسام مضادة لمستقبل الموت المبرمج 1 (pd-1) وطرق استخدامها
US11166985B2 (en) 2017-05-12 2021-11-09 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for engineering cells and uses thereof in immuno-oncology
IL270415B1 (en) 2017-05-12 2024-04-01 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for cell engineering and their uses in immuno-oncology
MX2019013690A (es) 2017-05-18 2020-01-27 Regeneron Pharma Conjugados de farmaco-proteina con ciclodextrina.
BR112020004126A2 (pt) 2017-09-29 2020-09-08 Daiichi Sankyo Company, Limited conjugado anticorpo-derivado de pirrolbenzodiazepina
EP3790899A1 (en) 2018-05-09 2021-03-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-msr1 antibodies and methods of use thereof
EP3790629A1 (en) 2018-05-11 2021-03-17 CRISPR Therapeutics AG Methods and compositions for treating cancer
EP3927729A4 (en) 2019-02-18 2023-10-11 Eli Lilly and Company THERAPEUTIC ANTIBODY FORMULATION
JPWO2020196474A1 (zh) * 2019-03-25 2020-10-01
JPWO2020196712A1 (zh) * 2019-03-27 2020-10-01
WO2020222176A1 (en) 2019-04-30 2020-11-05 Crispr Therapeutics Ag Allogeneic cell therapy of b cell malignancies using genetically engineered t cells targeting cd19

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120028944A1 (en) * 2005-07-22 2012-02-02 Oculis Ehf Cyclodextrin nanotechnology for ophthalmic drug delivery
US20120238731A1 (en) * 2011-02-15 2012-09-20 Immunogen, Inc. Methods of preparation of conjugates

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4659696A (en) 1982-04-30 1987-04-21 Takeda Chemical Industries, Ltd. Pharmaceutical composition and its nasal or vaginal use
DE3346123A1 (de) * 1983-12-21 1985-06-27 Janssen Pharmaceutica, N.V., Beerse Pharmazeutische praeparate von in wasser schwerloeslichen oder instabilen arzneistoffen und verfahren zu ihrer herstellung
US4727064A (en) 1984-04-25 1988-02-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Pharmaceutical preparations containing cyclodextrin derivatives
US6407079B1 (en) 1985-07-03 2002-06-18 Janssen Pharmaceutica N.V. Pharmaceutical compositions containing drugs which are instable or sparingly soluble in water and methods for their preparation
PT88490B (pt) 1987-09-14 1992-11-30 Novo Nordisk As Processo para a preparacao de composicoes farmaceuticas para libertacao nao-enterica trans-mucosa contendo monossacaridos ou oligossacaridos
DE68906942T3 (de) 1988-03-29 1999-05-12 Univ Florida Pharmazeutische Zusammensetzungen für die parenterale Anwendung.
US5997856A (en) 1988-10-05 1999-12-07 Chiron Corporation Method and compositions for solubilization and stabilization of polypeptides, especially proteins
US6699849B1 (en) 1998-02-23 2004-03-02 Cyclops, Ehf. Cyclodextrin complexes of benzodiazepines
DE60132094T3 (de) 2001-10-26 2012-02-02 Octoplus Polyactive Sciences B.V. Verfahren zur Herstellung von gereinigten Partikeln
DE10361599A1 (de) 2003-12-24 2005-07-28 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Flüssigformulierung von Antikörperkonjugaten
WO2005065709A2 (de) 2003-12-24 2005-07-21 Boehringer Ingelheim International Gmbh Gefriergetrocknete formulierung von antikörperkonjugaten
JP2009503105A (ja) 2005-08-03 2009-01-29 イミュノジェン・インコーポレーテッド 免疫複合体製剤
GB0819095D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
EP2358395A4 (en) 2008-11-17 2013-11-20 Hoffmann La Roche METHOD AND FORMULATION FOR REDUCING THE AGGREGATION OF A MACROMOLECULUM UNDER PHYSIOLOGICAL CONDITIONS
BRPI1008749B8 (pt) * 2009-02-05 2021-05-25 Immunogen Inc compostos derivados de benzodiazepina, seus conjugados, composição farmacêutica, seu uso e seus processos de preparação
US20110207764A1 (en) 2010-02-23 2011-08-25 Valery Alakhov Cyclopolysaccharide compositions
EP2789622B1 (en) 2010-04-15 2017-03-01 MedImmune Limited Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
KR101671360B1 (ko) 2010-04-15 2016-11-01 시애틀 지네틱스, 인크. 표적화된 피롤로벤조디아제핀 접합체
WO2012037643A1 (en) * 2010-09-13 2012-03-29 Blinq Wireless Inc. System and method for co-channel interference measurement and managed adaptive resource allocation for wireless backhaul
US20120321603A1 (en) 2011-06-16 2012-12-20 Nayan Patel Composition and method for stabilization and delivery of therapeutic molecules
EP2751111B1 (en) 2011-10-14 2017-04-26 MedImmune Limited Asymmetrical bis-(5H-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-one) derivatives for the treatment of proliferative or autoimmune diseases
JP6393617B2 (ja) 2011-10-14 2018-09-19 シアトル ジェネティクス，インコーポレーテッド ピロロベンゾジアゼピンおよび標的コンジュゲート
EP3309162A1 (en) 2011-10-14 2018-04-18 Seattle Genetics, Inc. Targeted conjugates of pyrrolobenzodiazepines
HUE042373T2 (hu) * 2013-03-13 2019-06-28 Seattle Genetics Inc Aktív szenes szûrés benzodiazepin ADC-k tisztítására

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120028944A1 (en) * 2005-07-22 2012-02-02 Oculis Ehf Cyclodextrin nanotechnology for ophthalmic drug delivery
US20120238731A1 (en) * 2011-02-15 2012-09-20 Immunogen, Inc. Methods of preparation of conjugates

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张玉忠 等编著: "《液体分离膜技术及应用》", 31 January 2004, 化学工业出版社 *
徐桂芬摘: "用环糊精包合物改进苯并二氮䓬类的溶解度和吸收性", 《国外医学 药学分册》 *
谢秀琼 主编: "《现代中药制剂新技术》", 30 June 2004, 化学工业出版社 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022268050A1 (zh) * 2021-06-22 2022-12-29 荣昌生物制药(烟台)股份有限公司 一种药物组合及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
KR102274714B1 (ko) 2021-07-09
AU2014248640A1 (en) 2015-08-27
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NZ711020A (en) 2020-11-27
AU2018201985B2 (en) 2019-07-18
IL273359B (en) 2021-12-01
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IL240598A0 (en) 2015-09-24
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US10391181B2 (en) 2019-08-27
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SG10201707618TA (en) 2017-10-30
US9610361B2 (en) 2017-04-04
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SG11201506372RA (en) 2015-09-29

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