JP2016510327A - ｐ５３再活性化のためのオリゴオキソピペラジン - Google Patents

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Abstract

本発明は、ｐ５３を再活性化するためのオリゴオキソピペラジンに関する。オリゴオキソピペラジンを使用する方法もまた開示される。

Description

本出願は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１３年１月１９日出願の米国仮特許出願第６１／７５４，５７５号の優先権の利益を主張する。
本発明は、国立衛生研究所により授与された助成金番号Ｒ０１ＣＡ１３５０９６及びＲ０１ＧＭ０７３９４３の下での政府援助によりなされた。政府は、本発明においてある特定の権利を有する。
発明の分野
本発明は、概して、Ｅ６−ｐ３００相互作用を標的化するためのオリゴオキソピペラジンに関する。
ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）は、上皮に感染する微小な二本鎖ＤＮＡウイルスである。１００を超えるＨＰＶ型が特定されている。それらは、外側カプシドタンパク質Ｌ１の遺伝子配列により区別される。ほとんどのＨＰＶ型は、皮膚上皮に感染し、一般的な皮膚のイボをもたらす。約４０の型は粘膜上皮に感染するが、これらはその子宮頸がんとの疫学的関連性に従って分類される。６型及び１１型等の低リスクまたは非発がん性の型への感染は、良性または低悪性度の頸部細胞異常、陰部疣贅及び喉頭乳頭腫を引き起こし得る。高リスクまたは発がん性のＨＰＶ型は、子宮頸がん及び他の肛門性器がんの発症における発がん性物質として作用する。高リスクの型（現在、１６、１８、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９、６８、６９、７３、８２型を含む）は、低悪性度の頸部細胞異常、がんの前駆体である高悪性度の頸部細胞異常、及び肛門性器がんを引き起こし得る。高リスクＨＰＶ型は、子宮頸がんの９９％において検出されている。１６型は、世界の子宮頸がんの約５０％の原因であり、１６型及び１８型は、合わせて子宮頸がんの約７０％に相当する。
頭頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）は、６番目に一般的ながんであり、世界で約６００，０００の新たな症例が見られる（Ｋａｍａｎｇａｒ ｅｔ ａｌ．，"Ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ，Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ，ａｎｄ Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ Ａｃｒｏｓｓ Ｆｉｖｅ Ｃｏｎｔｉｎｅｎｔｓ：Ｄｅｆｉｎｉｎｇ Ｐｒｉｏｒｉｔｉｅｓ ｔｏ Ｒｅｄｕｃｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｐａｒｉｔｉｅｓ ｉｎ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ Ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｗｏｒｌｄ，"Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２４（１４）：２１３７−５０（２００６））。ＨＰＶ感染は、ＨＮＳＣＣのサブセットである口腔咽頭ＳＣＣの発症の主要な危険因子として認識されている。ＨＰＶ１６は、最も広まっている亜型であり、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣの約９０％に相当する（Ｇｉｌｌｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，"Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ａ Ｃａｕｓａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｂｅｔｗｅｅｎ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ ａｎｄ ａ Ｓｕｂｓｅｔ ｏｆ Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｃａｎｃｅｒｓ，"Ｊ．Ｎａｔ'ｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．９２（９）：７０９−２０（２０００）；Ｋｌｕｓｓｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，"Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐ１６ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ａ Ｄｉｓｔｉｎｃｔ Ｅｎｔｉｔｙ ｏｆ Ｔｏｎｓｉｌｌａｒ Ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｗｉｔｈ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ，"Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６２（３）：７４７−５３（２００３））。疫学的データは、米国及びヨーロッパにおいてＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣの罹患率が過去３０年間で約３倍増加したことを示している（Ｌｉｃｉｔｒａ ｅｔ ａｌ．，"Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｃｈａｎｇｉｎｇ Ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ Ａｅｔｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｃａｎｃｅｒｓ，"Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ．Ｈｅａｄ Ｎｅｃｋ Ｓｕｒｇ．１４（２）：９５−９９（２００６）；Ｓｈｉｂｏｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｏｎｇｕｅ ａｎｄ Ｔｏｎｓｉｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ：Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｕ．Ｓ．Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ Ａｇｅｓ ２０−４４ Ｙｅａｒｓ，"Ｃａｎｃｅｒ １０３（９）：１８４３−４９（２００５）；Ｓｔｕｒｇｉｓ ＆ Ｃｉｎｃｉｒｉｐｉｎｉ，"Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｉｎ Ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ Ｓｍｏｋｉｎｇ Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ：Ａｎ Ｅｍｅｒｇｉｎｇ Ｅｐｉｄｅｍｉｃ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｃａｎｃｅｒｓ？"Ｃａｎｃｅｒ １１０（７）：１４２９−３５（２００７））。スウェーデンがん登録（Ｓｗｅｄｉｓｈ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ）から得られたデータは、１９７０年から２００２年の間に、ストックホルム領域において口腔咽頭ＳＣＣの発生率が２．８倍増加したことを示した。興味深いことに、同じ期間にわたって、ＨＰＶ陽性口腔咽頭ＳＣＣの発生率は、１９７０年代の２３％から２０００年代の６８％まで約３倍増加した（Ｈａｍｍａｒｓｔｅｄｔ ｅｔ ａｌ．，"Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ ａｓ ａ Ｒｉｓｋ Ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｏｆ Ｔｏｎｓｉｌｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ，"Ｉｎｔ'ｌ Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １１９（１１）：２６２０−２３（２００６）。これらの警戒すべき数に基づき、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣの流行が近い将来発生するであろうことが示唆されている（Ｓｔｕｒｇｉｓ ＆ Ｃｉｎｃｉｒｉｐｉｎｉ，"Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｉｎ Ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ Ｓｍｏｋｉｎｇ Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ：Ａｎ Ｅｍｅｒｇｉｎｇ Ｅｐｉｄｅｍｉｃ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｃａｎｃｅｒｓ？"Ｃａｎｃｅｒ １１０（７）：１４２９−３５（２００７）；Ｈａｍｍａｒｓｔｅｄｔ ｅｔ ａｌ．，"Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ ａｓ ａ Ｒｉｓｋ Ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｏｆ Ｔｏｎｓｉｌｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ，"Ｉｎｔ'ｌ Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １１９（１１）：２６２０−２３（２００６））。
ＨＰＶワクチンであるガーダシルは、ＨＰＶ陽性子宮頸がん、膣がん、及び外陰がんからの保護を提供するという明確な臨床データがある（Ｇｒｏｕｐ ＦＩＳ，"Ｑｕａｄｒｉｖａｌｅｎｔ Ｖａｃｃｉｎｅ Ａｇａｉｎｓｔ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ ｔｏ Ｐｒｅｖｅｎｔ Ｈｉｇｈ−Ｇｒａｄｅ Ｃｅｒｖｉｃａｌ Ｌｅｓｉｏｎｓ，"Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５６（１９）：１９１５−２７（２００７））。ＨＰＶワクチンは、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣからの保護を提供すると思われるが、この推測を裏付ける臨床的証拠はない。疾病対策センターは、２００６年、９歳から２６歳の間の年齢層の女性への高リスクＨＰＶに対する予防接種の奨励を発表したが、女性におけるＨＰＶワクチンの接種率は低い。２０１０年度国民健康聞き取り調査を使用した研究では、該当する女性約３０％及び１５％のみが、それぞれＨＰＶワクチンの１回の投薬及び全３回の一連の投薬を受けたことが示された（Ｌａｚ ｅｔ ａｌ．，"Ａｎ Ｕｐｄａｔｅ ｏｎ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｕｐｔａｋｅ Ａｍｏｎｇ １１−１７ Ｙｅａｒ Ｏｌｄ Ｇｉｒｌｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｈｅａｌｔｈ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｓｕｒｖｅｙ，２０１０，"Ｖａｃｃｉｎｅ ３０（２４）：３５３４−４０（２０１２））。ガーダシルは、２００９年、９歳から２６歳の男性に対して認可されたが、ワクチン接種率は２％と著しく低いことが報告された（Ｒｅｉｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，"ＨＰＶ Ｖａｃｃｉｎｅ ａｎｄ Ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔ Ｍａｌｅｓ，"Ｖａｃｃｉｎｅ ２９（３４）：５５９５−６０２（２０１２））。年齢が適合した女性及び男性の多数が予防接種されておらず、その生涯においてＨＮＳＣＣを含むＨＰＶ陽性がんに対し依然として保護されていない可能性があることは明確である。ガーダシルは、ＨＰＶ感染ナイーブ個人において子宮頸がんに対する保護を提供するのに極めて効果的であるが、ＨＰＶ１６を含む高リスクＨＰＶにすでに曝露された個人には、はるかに制限された利益を提供することが示された（Ｍｕｎｏｚ ｅｔ ａｌ．，"Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ（ＨＰＶ）−６／１１／１６／１８ Ｖａｃｃｉｎｅ ｏｎ Ａｌｌ ＨＰＶ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｇｅｎｉｔａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｉｎ Ｙｏｕｎｇ Ｗｏｍｅｎ，"Ｊ．Ｎａｔ'ｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．１０２（５）：３２５−３９（２０１０）；Ｓｉｇｕｒｄｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ＨＰＶ １６／１８ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ｏｎ Ｓｅｘｕａｌｌｙ Ａｃｔｉｖｅ １８−２３ Ｙｅａｒ Ｏｌｄ Ｗｏｍｅｎ ａｎｄ ｔｈｅ Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ＨＰＶ Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｏｎ Ｏｒｇａｎｉｚｅｄ Ｃｅｒｖｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，"Ａｃｔａ Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｓｃａｎｄ．８８（１）：２７−３５（２００９））。ＨＰＶ予防接種は、２６歳を超える成人には推奨されないが、これは、これらの個人がすでに高リスクＨＰＶに曝露している可能性があるためである。したがって、すでに高リスクＨＰＶに曝露している、または２６歳を超えるいくつかの世代の個人は、日常的に予防接種されないか、または、予防接種されたとしても、ＨＮＳＣＣを含むＨＰＶ陽性がんに対する保護は僅かである。これらの点に照らして、予測される増加する数のＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣ患者を管理するために、代替の治療戦略を開発する臨床的必要性がある。
ＨＰＶ陰性ＨＮＳＣＣとは対照的に、ｐ５３は、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおいて主に野生型である（Ｂａｌｚ ｅｔ ａｌ．，"Ｉｓ ｔｈｅ ｐ５３ Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｉｎ Ｓｑｕａｍｏｕｓ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｕｎｄｅｒｅｓｔｉｍａｔｅｄ？Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐ５３ Ｅｘｏｎｓ ２−１１ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ １６／１８ Ｅ６ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ ｉｎ １２３ Ｕｎｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｔｕｍｏｒ Ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ，"Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６３（６）：１１８８−９１（２００３）；Ａｇｒａｗａｌ ｅｔ ａｌ．，"Ｅｘｏｍｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｏｆ Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｓｑｕａｍｏｕｓ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｒｅｖｅａｌｓ Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ＮＯＴＣＨ１，"Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３３（６０４６）：１１５４−５７（２０１１）；Ｓｔｒａｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｌａｎｄｓｃａｐｅ ｏｆ Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｓｑｕａｍｏｕｓ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，"Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３３（６０４６）：１１５７−６０（２０１１））。しかしながら、高リスクＨＰＶ Ｅ６は、２つの異なる機構を介してｐ５３を不活性化する。Ｅ６は、Ｅ６ＡＰと結合してプロテアソーム経路を介してｐ５３を分解し、ｐ３００と結合してｐ３００が媒介するｐ５３のアセチル化を遮断する（Ｈｕｉｂｒｅｇｔｓｅ ｅｔ ａｌ．，"Ａ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｅｄｉａｔｅｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ Ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｅ６ Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅｓ １６ ｏｒ １８，"ＥＭＢＯ Ｊ．（１３）：４１２９−３５（１９９１）；Ｓｃｈｅｆｆｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ ＨＰＶ−１６ Ｅ６ ａｎｄ Ｅ６−ＡＰ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ａｓ ａ Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｌｉｇａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｐ５３，"Ｃｅｌｌ ７５（３）：４９５−５０５（１９９３）；Ｔａｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｅ６ＡＰ ｉｎ ｔｈｅ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ（ＨＰＶ）−Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ＨＰＶ−Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｃｅｌｌｓ，"Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３（１１）：６４３９−４５（１９９８）；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ １６ Ｅ６ Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｃａｎ Ｄｏｗｎ−Ｒｅｇｕｌａｔｅ ｐ５３ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｂｙ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ Ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ ＣＢＰ／ｐ３００，"Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７３（８）：６２０９−１９（１９９９）；Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ Ｅ６ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ １６ Ｂｉｎｄｓ ｔｏ ａｎｄ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｃｏ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ＣＢＰ ａｎｄ ｐ３００，"ＥＭＢＯ Ｊ．１８（１８）：５０６１−７２（１９９９）；Ｔｈｏｍａｓ ＆ Ｃｈｉａｎｇ，"Ｅ６ Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｐｒｅｓｓｅｓ ｐ５３−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｇｅｎｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｖｉａ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ ｏｆ Ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｐ５３ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，"Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ １７（２）：２５１−６４（２００５））。ｐ５３のアセチル化は、ｐ５３安定性及び転写活性を高める（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ １６ Ｅ６ Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｃａｎ Ｄｏｗｎ−Ｒｅｇｕｌａｔｅ ｐ５３ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｂｙ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ Ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ ＣＢＰ／ｐ３００，"Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７３（８）：６２０９−１９（１９９９）；Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ Ｅ６ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ １６ Ｂｉｎｄｓ ｔｏ ａｎｄ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｃｏ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ＣＢＰ ａｎｄ ｐ３００，"ＥＭＢＯ Ｊ．１８（１８）：５０６１−７２（１９９９）；Ｔｈｏｍａｓ ＆ Ｃｈｉａｎｇ，"Ｅ６ Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｐｒｅｓｓｅｓ ｐ５３−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｇｅｎｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｖｉａ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ ｏｆ Ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｐ５３ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，"Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ １７（２）：２５１−６４（２００５）；Ｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，"ＭＤＭ２−ＨＤＡＣ１−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｄｅａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ Ｉｓ Ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ Ｉｔｓ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，"ＥＭＢＯ Ｊ．２１（２２）：６２３６−４５（２００２）；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，"Ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｉｔｓ Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ ｂｙ Ｍｄｍ２，"Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（５２）：５０６０７−１１（２００２））。Ｅ６によるｐ５３の不活性化は、ＨＰＶが媒介する腫瘍形成に不可欠であり、これは、ｐ５３の再活性化がＨＰＶ陽性がん細胞を除去するための戦略となり得ることを示唆している。ｐ５３を再活性化するためのいくつかの遺伝的及び化学的戦略が、ＨＰＶ陽性子宮頸がんにおいて実証されている。これらのアプローチのほとんどは、ｐ５３安定性及び蓄積を増加させるためのＥ６レベル、Ｅ６ＡＰレベル、またはＥ６−Ｅ６ＡＰの結合の標的化に重点を置いていた（Ｂｅｅｒｈｅｉｄｅ ｅｔ ａｌ．，"Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｄｒｕｇｓ Ａｇａｉｎｓｔ Ｃｅｒｖｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ：Ｚｉｎｃ−Ｅｊｅｃｔｉｎｇ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ １６ Ｅ６ Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，"Ｊ．Ｎａｔ'ｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．９１（１４）：１２１１−２０（１９９９）；Ｂｅｅｒｈｅｉｄｅ ｅｔ ａｌ．，"Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ−１６ Ｅ６ Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｂｙ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅｓ，"Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．８（１１）：２５４９−６０（２０００）；Ｃｏｕｒｔｅｔｅ ｅｔ ａｌ．，"Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｒｖｉｃａｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ ｂｙ Ｉｎｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ Ｃｏｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ａｎｔｉ−Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｅ６ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｎｄ Ｓｍａｌｌ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ，"Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．６（６）：１７２８−３５（２００７）；Ｂｅｅｒ−Ｒｏｍｅｒｏ ｅｔ ａｌ．，"Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｅ６ＡＰ Ｅｌｅｖａｔｅｓ ｐ５３ ｉｎ ＨＰＶ−Ｉｎｆｅｃｔｅｄ Ｃｅｌｌｓ ｂｕｔ Ｎｏｔ ｉｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｅｌｌｓ，"Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １４（５）：５９５−６０２（１９９７）；Ｋｏｉｖｕｓａｌｏ ｅｔ ａｌ．，"Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ ｉｎ Ｃｅｒｖｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ ｂｙ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ Ｅ６ ＲＮＡ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ Ｉｓ Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ，ｂｕｔ Ｃａｎ Ｂｅ Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｂｙ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｅｘｐｏｒｔ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐ５３ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ，"Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６（２４）：１１８１７−２４（２００６）；Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，"Ｒｅｓｃｕｅ ｏｆ ｐ５３ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｓｍａｌｌ−Ｍｏｌｅｃｕｌｅ ＲＩＴＡ ｉｎ Ｃｅｒｖｉｃａｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｂｙ Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｅ６−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，"Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７０（８）：３３７２−８１（２０１０）。
増加する数のＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣ患者（及び他のＨＰＶ関連がんに罹患した患者）を管理するために、代替の治療戦略を開発する臨床的必要性がある。本発明は、当該技術分野におけるこれらの、及び他の欠陥を克服することを目的とする。
本発明の第１の態様は、対象において、Ｅ６とＣＲＥＢ結合タンパク質及び／またはｐ３００との相互作用により媒介される障害を治療または予防する方法であって、障害を治療または予防するのに効果的な条件下で、低酸素誘導因子１αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンを対象に投与する段階を含む方法に関する。
本発明の第２の態様は、細胞のアポトーシスを誘導する方法であって、細胞のアポトーシスを誘導するのに効果的な条件下で、細胞を、ＨＩＦ１αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンと接触させる段階を含む方法に関する。
本発明の第３の態様は、細胞の生存及び／または増殖を減少させる方法であって、細胞の生存及び／または増殖を減少させるのに効果的な条件下で、細胞を、ＨＩＦ１αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンと接触させる段階を含む方法に関する。
本発明の第４の態様は、細胞内でのｐ５３の不活性化を予防するまたは元に戻す方法であって、細胞におけるｐ５３の不活性化を予防するまたは元に戻すのに効果的な条件下で、細胞を、ＨＩＦ１αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンと接触させる段階を含む方法に関する。
本発明の第５の態様は、細胞における、ｐ３００が媒介する転写因子のアセチル化を阻害する方法であって、細胞における、ｐ３００が媒介する転写因子のアセチル化を阻害するのに効果的な条件下で、細胞を、ＨＩＦ１αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンと接触させる段階を含む方法に関する。
本研究において、我々は新規なアプローチをとり、Ｅ６とｐ３００との間の相互作用を遮断することにより、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおいてｐ５３を機能的に再活性化した。ｐ３００のＣＨ１ドメインの異所性発現は、Ｅ６を抑えてＥ６−ｐ３００の結合を妨害し、ｐ５３のアセチル化、蓄積、及び活性の増加をもたらした。外因性のＣＨ１は、がん起始細胞（ＣＩＣ）集団の低減に一部起因して、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおける多面的な抗がん効果を促進した。ＣＨ１ドメイン阻害剤は、ｐ５３を再活性化し、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおけるシスプラチンの有効性を劇的に増強した。総合すると、我々の研究は、他のＨＰＶ陽性がんに移行することが予測されるＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおいてｐ５３を再活性化するための、新薬開発につながるようなアプローチを明らかにした。
図１Ａ〜Ｃは、ＣＨ１阻害剤ＣＨ１ｉＡ（図１Ａ）、ＣＨ１ｉＢ（図１Ｂ）、及びＣＨ１ｉＢ−ｍｕｔ（図１Ｃ）の分析ＨＰＬＣトレースを示すグラフである。 図２Ａ〜Ｅは、外因性ＣＨ１が、ＨＰＶ１６ Ｅ６とｐ３００との間の結合を遮断することによりｐ５３を再活性化することを示す図である。安定なポリクローナルＵＭＳＣＣ４７／空、ＵＭＳＣＣ４７／ＣＨ１、ＳＣＣ９０／空、及びＳＣＣ９０／ＣＨ１細胞は、トランスフェクション及び抗生物質選択により生成された。図２Ａは、ＨＰＶ１６ Ｅ６−ｐ３００の結合を示すウェスタンブロットの対である。細胞溶解物が抽出され、抗Ｅ６（左パネル）または抗ｐ３００（右パネル）抗体により免疫沈降され、抗Ｖ５、抗Ｅ６、または抗ｐ３００抗体により免疫ブロットされた。細胞溶解物は、インプット対照用の抗Ｖ５、抗Ｅ６、または抗ｐ３００抗体により免疫ブロットされた。図２Ｂは、全及びアセチル化ｐ５３レベルのウェスタンブロットである。細胞溶解物は、抗ｐ５３または抗アセチル化［Ｋ３８２］−ｐ５３抗体により免疫ブロットされた。図２Ｃは、ｐ５３転写活性のグラフである。細胞に、ｐ５３蛍ルシフェラーゼレポータープラスミド及び対照ウミシイタケルシフェラーゼプラスミドをコトランスフェクトした。蛍ルシフェラーゼ活性は、トランスフェクション効率を照合するために、ウミシイタケルシフェラーゼ活性に対して正規化された。データは、空ベクター細胞に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、ｎ＝４である。図２Ｄは、ＵＭＳＣＣ４７（上パネル）及びＳＣＣ９０（下パネル）細胞におけるｐ３００及びｐ５３発現のグラフの対である。図２Ｅは、ＵＭＳＣＣ４７（上パネル）及びＳＣＣ９０（下パネル）細胞におけるｐ２１、ｍｉＲ−３４ａ、及びｍｉＲ−２００ｃ発現のグラフの対である。ｍＲＮＡ発現は、検証されたＴａｑＭａｎアッセイと共にｑＰＣＲを使用して決定された。データは、空ベクター対照細胞に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、ｎ＝３である。 図３Ａ〜Ｈは、外因性ＣＨ１が、ＨＰＶ１６陽性ＨＮＳＣＣ細胞における多面的抗がん効果を有することを示す図である。図３Ａは、細胞増殖のグラフの対である。ＵＭＳＣＣ４７（左パネル）及びＳＣＣ９０（右パネル）細胞は、対照（ビヒクル）またはシスプラチン（１０μＭ）で２４、４８、及び７２時間処理された。データは、０日目に正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１、シスプラチン、またはＣＨ１＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１またはシスプラチン対ＣＨ１＋シスプラチン、ｎ＝６である。図３Ｂは、コロニー形成生存のグラフである。ＵＭＳＣＣ４７（左パネル）及びＳＣＣ９０（右パネル）は、対照（ビヒクル）またはシスプラチン（１０μＭ）で処理された。コロニーは、クリスタルバイオレット溶液で染色された。データは、空／対照細胞に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１、シスプラチン、またはＣＨ１＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１またはシスプラチン対ＣＨ１＋シスプラチン、ｎ＝３である。図３Ｃは、アポトーシスのグラフである。ＵＭＳＣＣ４７（左パネル）及びＳＣＣ９０（右パネル）は、対照（ビヒクル）またはシスプラチン（１０μＭ）で処理された。アネキシンＶ陽性アポトーシス細胞を定量するために、ＦＡＣＳが使用された。データは、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１、シスプラチン、またはＣＨ１＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１またはシスプラチン対ＣＨ１＋シスプラチン、ｎ＝３である。図３Ｄは、インビボ腫瘍発生の表である。ＵＭＳＣＣ４７／空及びＵＭＳＣＣ４７／ＣＨ１細胞の３×１０５または３×１０４の２つの異なる希釈物が、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスの脇腹に移植された。腫瘍細胞移植後４９日間、腫瘍発生が監視された。＊Ｐ＜０．０２、ｎ＝８である。図３Ｅは、インビボ腫瘍成長のグラフである。腫瘍は、デジタルキャリパーを使用して毎週測定され、腫瘍体積が計算された。データは、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、ｎ＝６である。図３Ｆは、ＡＬＤＨ（左パネル）及びＣＤ４４（右パネル）のグラフの対である。ＡＬＤＨｈｉｇｈ細胞は、ＡＬＤＥＦＬＵＯＲアッセイを使用して定量された。データは、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、ｎ＝３である。ＣＤ４４強度は、抗ＰＥ−ＣＤ４４抗体によるＦＡＣＳを使用して決定され、ヒストグラムとして示された。図３Ｇは、腫瘍塊形成効率（左パネル）及び直径（右パネル）のグラフの対である。腫瘍塊形成効率は、形成された腫瘍塊（直径≧５０μｍ）の数を、播種された細胞の元の数で除したものとして計算された。腫瘍塊直径は、ＮＩＳ−Ｅｌｅｍｅｎｔｓソフトウェアを使用して測定された。データは、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、ｎ＝６である。図３Ｈは、単一腫瘍塊のインビボ腫瘍発生の代表例を示す画像の対である。ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに、単一ＵＭＳＣＣ４７腫瘍塊（平均直径６０〜８０μｍ、約１００細胞）または１×１０３ ＵＭＳＣＣ４７細胞が移植された。代表的なＵＭＳＣＣ４７腫瘍塊（左画像）及びＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおいて成長した最終的な腫瘍（右画像）が示されている。腫瘍発生は、６ヶ月の期間にわたり監視された。＊Ｐ＜０．００５、単一ＵＭＳＣＣ４７腫瘍塊に対してはｎ＝１１、１×１０３ ＵＭＳＣＣ４７細胞に対してはｎ＝１０である。 図４Ａ〜Ｆは、外因性ＣＨ１が、ＨＰＶ陰性ＨＮＳＣＣにおける多面的抗がん効果を有することを示す図である。安定なポリクローナルＵＭＳＣＣ７４Ａ／空及びＵＭＳＣＣ７４Ａ／ＣＨ１細胞は、トランスフェクション及び抗生物質選択により生成された。図４Ａは、全及びアセチル化ｐ５３レベルを示すウェスタンブロットである。細胞溶解物は、抗Ｖ５、抗ｐ５３、または抗アセチル化［Ｋ３８２］−ｐ５３抗体により免疫ブロットされた。図４Ｂは、ｐ５３転写活性のグラフである。細胞に、ｐ５３蛍ルシフェラーゼレポータープラスミド及び対照ウミシイタケルシフェラーゼプラスミドをコトランスフェクトした。蛍ルシフェラーゼ活性は、トランスフェクション効率を照合するために、ウミシイタケルシフェラーゼ活性に対して正規化された。データは、空ベクター細胞に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、ｎ＝４である。図４Ｃは、ＭＤＭ２−ｐ３００の結合を示すウェスタンブロットである。細胞溶解物が抽出され、抗ｐ３００抗体により免疫沈降され、抗ＭＤＭ２により免疫ブロットされた。細胞溶解物は、インプット対照用の抗ＭＤＭ２または抗ｐ３００抗体により免疫ブロットされた。図４Ｄは、細胞増殖のグラフである。細胞は、対照（ビヒクル）またはシスプラチン（１０μＭ）で２４時間及び４８時間処理された。データは、０日目に正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１またはシスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１またはシスプラチン対ＣＨ１＋シスプラチン、ｎ＝４である。図４Ｅは、コロニー形成生存のグラフである。細胞は、対照（ビヒクル）またはシスプラチン（１０μＭ）で処理された。コロニーは、クリスタルバイオレット溶液で染色された。データは、空／対照細胞に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１、シスプラチン、またはＣＨ１＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１またはシスプラチン対ＣＨ１＋シスプラチンである。図４Ｆは、アポトーシスのグラフである。細胞は、対照（ビヒクル）またはシスプラチン（１０μＭ）で処理された。アネキシンＶ陽性アポトーシス細胞を定量するために、ＦＡＣＳが使用された。データは、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０５、対照対ＣＨ１、シスプラチン、またはＣＨ１＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０５ ＣＨ１またはシスプラチン対ＣＨ１＋シスプラチンである。 図５Ａ〜Ｇは、ＣＨ１ｉＢがＨＰＶ１６陽性ＨＮＳＣＣにおいてｐ５３を優先的に再活性化することを示す図である。図５Ａは、ＣＨ１が２つの異なる標的部位を有することを示す概略図である。ＨＩＦ１−α／ｐ３００構造は、ｐ３００のＣＨ１ドメイン上の部位Ａ及び部位Ｂを標的指向するヘリックス模倣物を設計するためのガイドとして使用された。図５Ｂは、合成ヘリックスの構造を示す。ＣＨ１ｉＡ及びＣＨ１ｉＢは、ＨＩＦ−１αのＣ末端ドメインからの２つのヘリックスを模倣するように設計された。ペプチドは、水素結合代替法によりヘリックス構造に固定された。図５Ｃは、ｐ５３活性のグラフである。ＵＭＳＣＣ４７（左）及びＵＭＳＣＣ７４Ａ（右）細胞に、ｐ５３蛍ルシフェラーゼレポータープラスミド及び対照ウミシイタケルシフェラーゼプラスミドをコトランスフェクトした。２４時間後、細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＡ（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）で２４時間処理された。蛍ルシフェラーゼ活性は、トランスフェクション効率を照合するために、ウミシイタケルシフェラーゼ活性に対して正規化された。データは、対照に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０５、ｎ＝３である。図５Ｄは、全及びアセチル化ｐ５３レベルを示すウェスタンブロットである。ＵＭＳＣＣ４７（左）及びＵＭＳＣＣ７４Ａ（右）細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＡ（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）で２４時間処理された。細胞溶解物は、抗ｐ５３または抗アセチル化［Ｋ３８２］−ｐ５３抗体により免疫ブロットされた。図５Ｅは、ｐ３００、ｐ５３、ｐ２１、ｍｉＲ−３４ａ、及びｍｉＲ−２００ｃ発現のグラフの対である。ＵＭＳＣＣ４７（上パネル）及びＵＭＳＣＣ７４Ａ（下パネル）細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＡ（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）で２４時間処理された。ｍＲＮＡ発現は、検証されたＴａｑＭａｎアッセイと共にｑＰＣＲを使用して決定された。データは、対照細胞に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１ｉＢ、ｎ＝３である。図５Ｆは、ＨＰＶ１６ Ｅ６−ｐ３００の結合を示すウェスタンブロットである。ＵＭＳＣＣ４７細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＡ（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）で２４時間処理された。細胞溶解物が抽出され、抗ｐ３００抗体により免疫沈降され、抗Ｅ６抗体により免疫ブロットされた。細胞溶解物は、インプット対照用の抗Ｅ６または抗ｐ３００抗体により免疫ブロットされた。図５Ｇは、細胞増殖のグラフの組である。ＵＭＳＣＣ４７（左上パネル）、ＵＭＳＣＣ７４Ａ（右上パネル）、及びＩＭＲ９０（ヒト正常線維芽細胞）（下パネル）細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＡ（１０μＭ）、ＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）、シスプラチン（１０μＭ）、ＣＨ１ｉＡ（１０μＭ）及びシスプラチン（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）及びシスプラチン（１０μＭ）で、２４、４８、または７２時間処理された。データは、０日目に正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１ｉＢまたはシスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１ｉＢまたはシスプラチン対ＣＨ１ｉＢ及びシスプラチン、ｎ＝６である。 図６Ａ〜Ｆは、ＣＨ１ｉＢがＨＰＶ１６陽性ＨＮＳＣＣにおいてシスプラチンの有効性を増強することを示す図である。図６Ａは、全及びアセチル化ｐ５３レベルを示すウェスタンブロットである。ＵＭＳＣＣ４７細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）、シスプラチン（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）及びシスプラチン（１０μＭ）で２４時間処理された。細胞溶解物は、抗ｐ５３または抗アセチル化［Ｋ３８２］−ｐ５３抗体により免疫ブロットされた。図６Ｂは、ｐ５３転写活性のグラフである。ＵＭＳＣＣ４７細胞に、ｐ５３蛍ルシフェラーゼレポータープラスミド及び対照ウミシイタケルシフェラーゼプラスミドをコトランスフェクトした。２４時間後、細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）、シスプラチン（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）及びシスプラチン（１０μＭ）で２４時間処理された。蛍ルシフェラーゼ活性は、トランスフェクション効率を照合するために、ウミシイタケルシフェラーゼ活性に対して正規化された。データは、対照に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１ｉＢ、シスプラチンまたはＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１ｉＢまたはシスプラチン対ＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、ｎ＝５である。図６Ｃは、ｐ３００、ｐ５３、ｐ２１、ｍｉＲ−３４ａ、及びｍｉＲ−２００ｃ発現のグラフである。ＵＭＳＣＣ４７細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）、シスプラチン（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）及びシスプラチン（１０μＭ）で２４時間処理された。ｍＲＮＡ発現は、検証されたＴａｑＭａｎアッセイと共にｑＰＣＲを使用して決定された。データは、対照細胞に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１ｉＢ、シスプラチンまたはＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１ｉＢまたはシスプラチン対ＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、ｎ＝３である。図６Ｄは、アポトーシスのグラフの対である。ＵＭＳＣＣ４７細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）、シスプラチン（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）及びシスプラチン（１０μＭ）で２４時間処理された。アネキシンＶ陽性アポトーシス細胞を定量するために、ＦＡＣＳが使用された（左パネル）。データは、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１ｉＢ、シスプラチンまたはＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１ｉＢまたはシスプラチン対ＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、ｎ＝３である。図６Ｅは、コロニー形成生存の一連の画像及びグラフである。ＵＭＳＣＣ４７細胞は、０日目に対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）、シスプラチン（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）及びシスプラチン（１０μＭ）で処理され、１４日目にコロニーがクリスタルバイオレット溶液で染色された。データは、対照に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１ｉＢ、シスプラチンまたはＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１ｉＢまたはシスプラチン対ＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、ｎ＝３である。図６Ｆは、腫瘍塊形成効率（上パネル）及び直径（下パネル）のグラフの対である。ＵＭＳＣＣ４７細胞は、低付着プレート上に播種され、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）、シスプラチン（３μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）及びシスプラチン（３μＭ）で処理された。腫瘍塊形成効率は、７日で形成された腫瘍塊（直径≧５０μｍ）の数を、播種された細胞の元の数で除したものとして計算された。腫瘍塊直径は、ＮＩＳ−Ｅｌｅｍｅｎｔｓソフトウェアを使用して測定された。データは、対照に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１ｉＢ、シスプラチンまたはＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１ｉＢまたはシスプラチン対ＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、ｎ＝８である。 図７Ａ〜Ｂは、ＣＨ１ｉＢの不活性類似体であるＣＨ１ｉＢ−ｍｕｔの、ｐ５３転写活性及び細胞増殖に対する効果に関する図である。図７Ａは、ｐ５３転写活性のグラフである。ＵＭＳＣＣ４７細胞に、ｐ５３蛍ルシフェラーゼレポータープラスミド及び対照ウミシイタケルシフェラーゼプラスミドをコトランスフェクトした。２４時間後、細胞は、対照（ビヒクル）またはＣＨ１ｉＢ−ｍｕｔ（１０μＭ）で２４時間処理された。蛍ルシフェラーゼ活性は、トランスフェクション効率を照合するために、ウミシイタケルシフェラーゼ活性に対して正規化された。データは、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０５、ｎ＝５である。図７Ｂは、細胞増殖のグラフである。ＵＭＳＣＣ４７細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＢ−ｍｕｔ（１０μＭ）、シスプラチン（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ−ｍｕｔ（１０μＭ）及びシスプラチン（１０μＭ）で２４時間または４８時間処理された。データは、０日目に正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照またはＣＨ１ｉＢ−ｍｕｔ対シスプラチンまたはシスプラチン＋ＣＨ１ｉＢ−ｍｕｔ、ｎ＝６である。 ＢＢ２−１２５の分析ＨＰＬＣトレースである。勾配：３０分で５％から９５％アセトニトリル／水。 ＢＢ２−１６２の分析ＨＰＬＣトレースである。勾配：３０分で５％から９５％アセトニトリル／水。 ＢＢ２−１６４の分析ＨＰＬＣトレースである。勾配：３０分で５％から９５％アセトニトリル／水。 ｐ５３転写活性のグラフである。ＵＭＳＣＣ４７細胞に、ｐ５３蛍ルシフェラーゼレポータープラスミド及び対照ウミシイタケルシフェラーゼプラスミドをコトランスフェクトした。２４時間後、細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）、またはＢＢ２−１６２（「ＯＯＰ１」）（１０μＭ）で２４時間処理された。 アミノ酸誘導オリゴオキソピペラジンの設計を示す図である（Ｔｏｓｏｖｓｋａ ＆ Ａｒｏｒａ，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．１２：１５８８（２０１０））。オリゴオキソピペラジンは、図示されるように、ペプチド内の隣接アミド窒素原子をエチレン架橋により連結させることにより得られる。 マイクロ波補助固相合成を使用してオリゴオキソピペラジンを作製するための一般的合成スキームである。 モデルオリゴオキソピペラジン二量体Ａ〜Ｃ及びモデルオリゴオキソピペラジン三量体の設計及び構造を示す図である。各モデルオリゴオキソピペラジン及びその標的αヘリックスの予測される構造の重なりもまた示されている。 ＨＩＦ−１αのαＢヘリックスを模倣するモデルオリゴオキソピペラジン二量体Ｂの設計及び構造を示す図である。 ＨＩＦ−１αのαＢヘリックスを模倣するモデルオリゴオキソピペラジン二量体Ｃの設計及び構造を示す図である。 オリゴオキソピペラジンＢＢ２−１６４、ＢＢ２−１６２、ＢＢ２−１２５、及びＢＢ２−２８２を示す図である。 オリゴオキソピペラジンＢＢ２−１６２の設計を示す図である。ヘリックスαＢの配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）はまた、各ホットスポット残基を囲むボックスで示されている。 様々な濃度のオリゴオキソピペラジンＢＢ２−１２５またはＢＢ２−１６２への曝露後の細胞生存性のグラフである。
ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）陽性頭頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）の発生率は、過去３０年にわたり急速に増加し、流行が差し迫っている可能性があることを示唆せざるを得なくなっている。したがって、増加する数のＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣ患者、及び他のＨＰＶ関連がん患者を管理するために、代替の治療戦略を開発する臨床的必要性がある。高リスクＨＰＶ血清型の発がん性タンパク質であるＥ６は、Ｅ６ＡＰと結合してｐ５３を分解する、ならびにｐ３００と結合してｐ３００が媒介するｐ５３のアセチル化及び活性化を遮断するという、２つの異なる機構を介してｐ５３を不活性化する。本明細書に記載のように、Ｅ６−ｐ３００相互作用の標的化は、ＨＰＶ陽性がんにおいてｐ５３を再活性化する効果的なアプローチである。ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおけるｐ３００のＣＨ１ドメインの異所性発現は、Ｅ６とｐ３００との間の結合を遮断し、全及びアセチル化ｐ５３レベルを増加させ、ｐ５３転写活性を高める。さらに、ｐ２１、ｍｉＲ−３４ａ、及びｍｉＲ−２００ｃの発現が増加し、これは機能的ｐ５３再活性化を示す。ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおけるＣＨ１過剰発現は、広範囲の抗がん効果を有し、細胞増殖及びコロニー形成生存の低下、ならびにアポトーシスの増加をもたらす。ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣのインビボ腫瘍開始能力は、１つにはがん開始細胞集団の低減を介して、ＣＨ１過剰発現により大幅に損なわれる。ｐ３００のＣＨ１ドメインを標的指向するオリゴオキソピペラジンは、Ｅ６−ｐ３００相互作用を妨害してｐ５３を再活性化し、ＨＰＶ陽性がん細胞におけるシスプラチンの抗がん活性を増強する。本明細書に記載のオリゴオキソピペラジンは、ＨＰＶ陽性がん患者を管理するためのｐ５３再活性化治療薬のクラスである。
本発明の一態様は、対象において、Ｅ６とＣＲＥＢ結合タンパク質及び／またはｐ３００との相互作用により媒介される障害を治療または予防する方法であって、障害を治療または予防するのに効果的な条件下で、低酸素誘導因子１αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンを対象に投与する段階を含む方法に関する。
この態様及び全ての態様による好適なオリゴオキソピペラジンは、式Ｉ：
Figure 2016510327
のオリゴオキソピペラジンであり、
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のそれぞれは、独立して、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒは、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
各Ｒ６は、独立して、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒは、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ａは、Ｘ１またはＣであり、
Ｘ１は、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'は、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｃは、式
Figure 2016510327
部分であり、
式中、
各Ｘ'は、独立して、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、Ｎ（Ｒ''）２、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ'は、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
各Ｒ''は、独立して、Ｈ、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ０は、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒは、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｒ６は、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒは、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールである；
Ｂは、ＹまたはＤであり、
Ｙは、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''）２、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ'は、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
各Ｒ'''は、独立して、Ｈ、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｄは、式
Figure 2016510327
部分であり、
式中、
Ｒ５は、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒは、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｒ６は、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒは、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｅは、Ｘ２またはＦであり、
Ｘ２は、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'は、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｆは、式
Figure 2016510327
部分であり、
式中、
Ｒ６は、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒは、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｒ７は、アミノ酸側鎖であり；
Ｙは、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''）２、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ'は、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
各Ｒ'''は、独立して、Ｈ、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグである。
本発明のこの態様及び全ての態様によるアミノ酸側鎖は、アルファアミノ酸、ベータアミノ酸、ガンマアミノ酸、Ｌ−アミノ酸及びＤ−アミノ酸を含む、天然または非天然アミノ酸由来の任意のアミノ酸側鎖であってもよい。
本明細書において使用されるように、「アルキル」という用語は、鎖内に約１個から約６個の炭素原子を有する、直鎖または分岐鎖であってもよい脂肪族炭化水素を意味する。分岐鎖は、メチル、エチル、またはプロピル等の１つ以上の低級アルキル基が、直線アルキル鎖に結合していることを意味する。例示的なアルキル基は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、及び３−ペンチルを含む。
本明細書において使用される場合、「シクロアルキル」という用語は、３個から６個の炭素原子を含有してもよく、また少なくとも１つの二重結合を含んでもよい、非芳香族飽和または不飽和単環式または多環式環系を指す。例示的なシクロアルキル基は、これらに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、ａｎｔｉ−ビシクロプロパン、またはｓｙｎ−ビシクロプロパンを含む。
本明細書において使用される場合、「アリール」という用語は、６個から１９個の炭素原子を含有する芳香族単環式または多環式環系を指し、環系は、随意に置換されていてもよい。本発明のアリール基は、これらに限定されないが、フェニル、ナフチル、アズレニル、フェナントレニル、アントラセニル、フルオレニル、ピレニル、トリフェニレニル、クリセニル、及びナフタセニルを含む。
「アリールアルキル」という用語は、式−ＲａＲｂの基を指し、式中、Ｒａは、上で定義されたようなアルキル基であり、Ｒｂは、上で定義されたようなアリール基である）。アルキル基及びシクロアルキル基は、上で定義されたように随意に置換されていてもよい。
本明細書において使用される場合、「ヘテロアリール」は、炭素原子、ならびに窒素、酸素及び硫黄からなる群から選択される１個から５個のヘテロ原子からなる芳香環基を指す。ヘテロアリール基の例は、これらに限定されないが、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、フリル、チオフェニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、チアジアゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、トリアジニル、チエノピロリル、フロピロリル、インドリル、アザインドリル、イソインドリル、インドリニル、インドリジニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、イミダゾピリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンズオキサゾリル、ベンズオキサジアゾリル、ベンゾチアゾリル、ピラゾロピリジニル、トリアゾロピリジニル、チエノピリジニル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチオフェニル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリル、シンノリニル、キナゾリニル、キノリジリニル、フタラジニル、ベンゾトリアジニル、クロメニル、ナフチリジニル、アクリジニル、フェナンジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、プテリジニル、及びプリニルを含む。追加のヘテロアリールは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｔｈｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（Ｋａｔｒｉｔｚｋｙ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，１９８４）に記載されている。
式Ｉのオリゴオキソピペリジンは、アミンまたはカルボン酸の保護に好適な保護基を含んでもよい。そのような保護基は、主に官能基の反応性を保護またはマスクするように機能する。アミン基の保護に好適な保護基は、当該技術分野において周知であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＴＨＥＯＤＯＲＡ Ｗ．ＧＲＥＥＮＥ ＆ ＰＥＴＥＲ Ｇ．Ｍ．ＷＵＴＳ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ４９４−６１５（１９９９）に記載のように、カルバメート、アミド、Ｎ−アルキル及びＮ−アリールアミン、イミン誘導体、エナミン誘導体、及びＮ−ヘテロ原子誘導体を含むが、これらに限定されない。カルボン酸の保護に好適な保護基もまた、当該技術分野において周知である。好適なカルボン酸保護基は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＴＨＥＯＤＯＲＡ Ｗ．ＧＲＥＥＮＥ ＆ ＰＥＴＥＲ Ｇ．Ｍ．ＷＵＴＳ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ３７２−４５０（１９９９）により説明されているように、エステル（例えば、置換メチルエステル、２−置換エチルエステル、２，６−ジアルキルフェニルエステル、置換ベンジルエステル、シリルエステル、及びスタンニルエステル）、アミド、及びヒドラジドを含むが、これらに限定されない。アミン及びカルボン酸を保護及び脱保護する方法は、選択された保護基に依存して変動するが、これらの方法は、当該技術分野において周知であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＴＨＥＯＤＯＲＡ Ｗ．ＧＲＥＥＮＥ ＆ ＰＥＴＥＲ Ｇ．Ｍ．ＷＵＴＳ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ３７２−４５０及び４９４−６１５（１９９９）に記載されている。
「タグ」は、本明細書において使用される場合、本発明の化合物の検出、定量、分離、及び／または精製を容易化する任意の標識化部分を含む。好適なタグは、精製タグ、放射性または蛍光標識、及び酵素タグを含む。
ポリ−ヒスチジン（Ｈｉｓ６−）、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ−）、またはマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ−）等の精製タグは、化合物精製または分離を補助し得るが、後に除去され得、すなわち、回収後に化合物から切断され得る。精製タグの除去を容易化するために、プロテアーゼ特異的切断部位が使用され得る。所望の生成物は、切断された精製タグを除去するためにさらに精製され得る。
他の好適なタグは、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、または９９ＴＣ等の放射性標識を含む。化合物を放射性標識化する方法は、当該技術分野において知られており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎらに対する米国特許第５，８３０，４３１号に記載されている。放射能は、シンチレーションカウンターまたはオートラジオグラフィーを使用して検出及び定量される。代替として、化合物は、蛍光タグと結合され得る。好適な蛍光タグは、これらに限定されないが、キレート（ユーロピウムキレート）、フルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、リサミン、フィコエリスリン、ならびにテキサスレッドを含む。蛍光標識は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｃｏｌｉｇｅｎ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，１９９１）に開示されている技術を使用して、化合物と結合され得る。蛍光は、蛍光光度計を使用して検出及び定量され得る。
酵素タグは、一般に、様々な技術を使用して測定され得る発色基質の化学的改質を触媒する。例えば、酵素は、分光光度法で測定され得る基質における色の変化を触媒し得る。代替として、酵素は、基質の蛍光または化学発光を改質し得る。好適な酵素タグの例は、ルシフェラーゼ（例えば、蛍ルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ；例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｗｅｎｇらに対する米国特許第４，７３７，４５６号を参照されたい）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、リンゴ酸脱水素酵素、ウレアーゼ、ペルオキシダーゼ（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リソザイム、サッカリドオキシダーゼ（例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ）、ヘテロ環式オキシダーゼ（例えば、ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ）、ラクトペルオキシダーゼ、ミクロペルオキシダーゼ等を含む。酵素をタンパク質及びペプチドと結合するための技術は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｏ'Ｓｕｌｌｉｖａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ−Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｆｏｒ Ｕｓｅ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １４７−６６（Ｌａｎｇｏｎｅ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，１９８１）に記載されている。
本発明による標的指向部分は、（ｉ）オリゴオキソピペラジンの細胞取り込みを促進する、（ｉｉ）オリゴオキソピペラジンを特定の細胞もしくは組織型（例えばシグナル伝達ペプチド配列）に標的指向させる、または（ｉｉｉ）細胞取り込み後にオリゴオキソピペラジンを特定の細胞内の場所（例えば輸送ペプチド配列）に標的指向させるように機能する。
本発明のオリゴオキソピペラジンの細胞取り込みを促進するために、標的指向部分は、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）であってもよい。ＣＰＰは、表面的にはエネルギー非依存的経路により真核細胞の原形質膜を通って転移し、それ自体よりも数倍高い分子量を有する抗体、ペプチド、タンパク質、及び核酸を含む巨大分子の細胞内送達に成功裏に使用されている。ポリアルギニン、トランスポータント、プロタミン、マウロカルシン及びＭ９１８を含むいくつかの一般的に使用されるＣＰＰは、本発明における使用に好適な標的指向部分であり、当該技術分野において周知である（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｔｅｗａｒｔ ｅｔ ａｌ．，"Ｃｅｌｌ−Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｓ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｖｅｈｉｃｌｅｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，"Ｏｒｇａｎｉｃ Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈｅｍ ６：２２４２−２２５５（２００８）を参照されたい）。さらに、ＣＰＰを作製する方法は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｈａｌｌｂｒｉｎｋらに対する米国特許出願公開第２００８０２３４１８３号に記載されている。
化合物の細胞取り込みを高めるために有用な別の好適な標的指向部分は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｉｎらに対する米国特許第６，０４３，３３９号により開示されているような、「移入に適格な」シグナルペプチドである。移入に適格なシグナルペプチドは、一般に約１０から約５０アミノ酸残基（典型的には疎水性残基）の長さであり、化合物が細胞膜を介して細胞の外側から細胞の内側に浸透することができるようにする。例示的な移入に適格なシグナルペプチドは、カポジ線維芽細胞成長因子からのシグナルペプチドを含む（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｉｎらに対する米国特許第６，０４３，３３９号を参照されたい）。他の好適なペプチド配列は、ＳＩＧＰＥＰデータベースから選択され得る（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ Ｇ．，"ＳＩＧＰＥＰ：Ａ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａｂａｓｅ ｆｏｒ Ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ Ｓｉｇｎａｌ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，"Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑ．Ｄａｔａ Ａｎａｌ．１（１）：４１−４２（１９８７）を参照されたい）。
別の好適な標的指向部分は、オリゴオキソピペラジンを特定の組織または細胞型に標的指向させることができるシグナルペプチド配列である。シグナル伝達ペプチドは、リガンド結合タンパク質の少なくとも一部を含み得る。好適なリガンド結合タンパク質は、高親和性抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ'及びＦ（ａｂ'）２）、単鎖Ｆｖ抗体断片）、ナノボディもしくはナノボディ断片、フルオロボディ、またはアプタマーを含む。他のリガンド結合タンパク質は、ビオチン結合タンパク質、脂質結合タンパク質、ペリプラズム結合タンパク質、レクチン、血清アルブミン、酵素、リン酸塩及び硫酸塩結合タンパク質、イムノフィリン、メタロチオネインまたは様々な他の受容体タンパク質を含む。細胞特異的標的指向のためには、シグナル伝達ペプチドは、好ましくは、細胞特異的膜受容体のリガンド結合ドメインである。したがって、修飾オリゴオキソピペラジンが静脈内送達または別様に血液もしくはリンパに導入された場合、オリゴオキソピペラジンは、標的化細胞に吸着し、標的化細胞は、オリゴオキソピペラジンを内部移行させる。例えば、標的化細胞ががん細胞である場合、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｔａｙｌｏｒらに対する米国特許第６，５７２，８５６号により開示されるように、オリゴオキソピペラジンは、抗Ｃ３Ｂ（Ｉ）抗体と結合され得る。代替として、オリゴオキソピペラジンは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｍｏｒｏに対する米国特許第６，５１４，６８５号により開示されているように、アルファフェトタンパク質受容体に、または、Ｈｏｓｏｋａｗａに対する米国特許第５，８３７，８４５号により開示されているように、モノクローナルＧＡＨ抗体と結合され得る。心臓細胞に対するオリゴオキソピペラジンの標的指向のためには、オリゴオキソピペラジンは、エラスチン微細繊維インターフェイサー（ＥＭＩＬＩＮ２）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｖａｎ Ｈｏｏｆ ｅｔ ａｌ．，"Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｓｕｒｆａｃｅ ｆｏｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｂａｓｅｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ−Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ，"Ｊ Ｐｒｏｔｅｏｍ Ｒｅｓ ９：１６１０−１８（２０１０））、心臓トロポニンＩ、コネキシン−４３、または当該技術分野において知られている任意の心臓細胞表面膜受容体を認識する抗体と結合され得る。肝細胞に対するオリゴオキソピペラジンの標的指向のためには、シグナル伝達ペプチドは、肝細胞特異的アシアロ糖タンパク質受容体に特異的なリガンドドメインを含み得る。そのようなキメラタンパク質及びペプチドを調製する方法は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｈｅａｒｔｌｅｉｎらに対する米国特許第５，８１７，７８９号に記載されている。
別の好適な標的指向部分は、化合物が標的細胞または組織により内部移行されると化合物の細胞内区画化を誘導する輸送ペプチドである。例えば、小胞体（ＥＲ）への輸送のためには、化合物は、ＥＲ輸送ペプチド配列と結合され得る。いくつかのそのようなシグナルペプチドは当該技術分野において知られており、シグナルペプチド
Figure 2016510327
を含む。他の好適なＥＲシグナルペプチドは、酵素１７β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素１１型のＮ末端小胞体標的指向配列（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｈｏｒｉｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，"Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＥＲ／Ｌｉｐｉｄ Ｄｒｏｐｌｅｔ−Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｎ １７β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ Ｔｙｐｅ １１，"Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．４７９（２）：１２１−３０（２００８））、または参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｒｅｅｄらに対する米国特許出願公開第２００８０２５０５１５号において開示されているＥＲシグナル伝達ペプチド（ＥＲシグナルペプチドをコードする核酸配列を含む）のいずれかを含む。さらに、本発明の化合物は、保留シグナルＫＥＤＬ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）等のＥＲ保留シグナルを含有し得る。ＥＲへの化合物の局在化のために輸送ペプチドを組み込むように本発明の化合物を修飾する方法は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｒｅｅｄらに対する米国特許出願公開第２００８０２５０５１５号に記載のように実行され得る。
核への輸送のために、本発明の化合物は、核局在化輸送シグナルを含み得る。好適な核輸送ペプチド配列は、当該技術分野において知られており、核輸送ペプチドＰＰＫＫＫＲＫＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）を含む。他の核局在化輸送シグナルは、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｉｎらに対する米国特許第６，０４３，３３９号により開示されているように、酸性線維芽細胞成長因子の核局在化配列及び転写因子ＮＦ−ＫＢ ｐ５０の核局在化配列を含む。当該技術分野において知られている他の核局在化ペプチド配列もまた、本発明の化合物における使用に好適である。
ミトコンドリアを標的指向するための好適な輸送ペプチド配列は、
Figure 2016510327
を含む。本発明の化合物をミトコンドリアに選択的に標的指向させるのに適した他の好適な輸送ペプチド配列は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｗｉｐｆに対する米国特許出願公開第２００７０１６１５４４号に開示されている。
少なくとも１つの実施形態において、オリゴオキソピペラジンは、式Ｉのオリゴオキソピペラジンであり、式中、（ｉ）Ｒ１及びＲ２は、疎水性であり、Ｒ４は、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であるか、または、Ａは、式
Figure 2016510327
部分であり、Ｒ０及びＲ３は、疎水性であり、Ｒ４は、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であり；（ｉｉ）各Ｒ''は、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；（ｉｉｉ）Ｂは、Ｄではない。水素結合受容基は、電気陰性原子上のプロトンと相互作用する孤立電子対を有する原子を含有する。好適な例は、これらに限定されないが、カルボニル基及び芳香族アミン、例えばピリジン及びイミダゾールを含む。水素結合供与基は、共有する少なくとも１つのプロトンを有する電気陰性原子を含有する。好適な例は、これらに限定されないが、アミン、アミド、カルボン酸、ヒドロキシル、及びチオール官能基を含む。
本発明の一実施形態において、式Ｉのオリゴオキソピペラジンは、式ＩＡ：
Figure 2016510327
の式を有する。一実施形態において、式ＩＡのオリゴオキソピペラジンのＲ１、Ｒ２、Ｒ４、及びＲ５は、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋４、ｉ＋６、及びｉ＋７のアミノ酸側鎖を模倣する。
本発明の別の実施形態において、式Ｉのオリゴオキソピペラジンは、式ＩＢ：
Figure 2016510327
の式を有する。一実施形態において、式ＩＢのオリゴオキソピペラジンのＲ１、Ｒ２、及びＲ４は、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋４、及びｉ＋７のアミノ酸側鎖を模倣する。
本発明の別の実施形態において、式Ｉのオリゴオキソピペラジンは、式ＩＣ：
Figure 2016510327
の式を有する。一実施形態において、式ＩＣのオリゴオキソピペラジンのＲ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋２、ｉ＋３、ｉ＋４、及びｉ＋７のアミノ酸側鎖を模倣する。
式Ｉの例示的オリゴオキソピペラジン化合物は、これらに限定されないが、ＢＢ２−１２５、ＢＢ２−１６２、及びＢＢ２−１６４を含む。
本発明における使用のためのオリゴオキソピペラジンは、当該技術分野における方法を使用して作製され得る。好適な方法は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第１２／９１７，１７６号に記載のものを含む。
Ｅ６とＣＲＥＢ結合タンパク質及び／またはｐ３００との相互作用により媒介される障害は、例えば、ＨＰＶ関連がんを含む。ＨＰＶ関連がんは、高リスクまたは発がん性のＨＰＶ型、例えば、ＨＰＶ−１６、ＨＰＶ−１８、ＨＰＶ−３１、ＨＰＶ−３３、ＨＰＶ−３５、ＨＰＶ−３９、ＨＰＶ−４５、ＨＰＶ−５１、ＨＰＶ−５２、ＨＰＶ−５６、ＨＰＶ−５８、ＨＰＶ−５９、ＨＰＶ−６８、ＨＰＶ−６９、ＨＰＶ−７３、及びＨＰＶ−８２により（少なくとも部分的に）引き起こされるものである。これらのがんは、子宮頸がん、外陰がん、膣がん、陰茎がん、肛門がんを含む肛門性器がん、ならびにＨＮＳＣＣ及び口腔咽頭がんを含む頭頸部のがんを含む。
本発明のこの態様による対象は、好ましくは、ヒト対象である。
本発明の化合物は、経口的に、非経口的に、例えば皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内に、鼻腔内点滴により、または粘膜、例えば鼻、喉、及び気管支の粘膜への適用により投与され得る。それらは、単独で、または好適な薬学的担体と共に投与されてもよく、また、錠剤、カプセル、粉末、溶液、懸濁液またはエマルション等の固体または液体形態であってもよい。
本発明の活性化合物は、例えば、不活性希釈剤と共に、もしくは吸収可能な可食担体と共に経口投与されてもよく、または、それらは、硬質もしくは軟質シェルカプセル内に封入されてもよく、または、それらは、錠剤に圧縮されてもよく、または、それらは、食生活における食品と共に直接組み込まれてもよい。経口治療薬投与の場合、これらの活性化合物は、賦形剤と共に組み込まれてもよく、錠剤、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ等の形態で使用されてもよい。そのような組成物及び調製物は、少なくとも０．１％の活性化合物を含有すべきである。これらの組成物中の化合物のパーセンテージは、当然ながら変動し得、好都合には、単位の重量の約２％から約６０％の間であってもよい。そのような治療上有用な組成物中の活性化合物の量は、好適な用量が得られるような量である。本発明による好ましい組成物は、経口投薬単位が約１ｍｇから２５０ｍｇの間の活性化合物を含有するように調製される。
錠剤、カプセル等はまた、トラガカントガム、アカシア、トウモロコシデンプンまたはゼラチン等の結合剤；第二リン酸カルシウム等の賦形剤；トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸等の崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム等の滑剤；及びスクロース、ラクトースまたはサッカリン等の甘味剤を含有してもよい。投薬単位形態がカプセルである場合、カプセルは、上記の種類の材料に加えて、脂肪油等の液体担体を含有してもよい。
様々な他の材料が、コーティングとして、または投薬単位の物理的形態を変更するために存在してもよい。例えば、錠剤は、セラック、糖またはその両方でコーティングされてもよい。シロップは、活性成分に加えて、甘味剤としてのスクロース、保存剤としてのプロピルパラベン、染料、及びチェリーまたはオレンジフレーバー等の香味剤を含有してもよい。
これらの活性化合物はまた、非経口投与されてもよい。これらの活性化合物の溶液または懸濁液は、ヒドロキシプロピルセルロース等の界面活性剤と好適に混合された水中で調製され得る。グリセロール、液体ポリエチレングリコール、及びそれらの油中混合物中の分散液を調製することもできる。例示的な油は、石油、動物、植物、または合成起源のもの、例えば落花生油、大豆油、または鉱物油である。一般に、水、生理食塩水、デキストロース水溶液及び関連した糖溶液、ならびにプロピレングリコールまたはポリエチレングリコール等のグリコールが、特に注射溶液に好ましい液体担体である。通常の保存及び使用条件下では、これらの調製物は、微生物の増殖を予防するために保存剤を含有する。
注射用途に好適な薬学的形態は、無菌注射溶液または分散液の即座の調製のための、無菌水溶液または分散液及び無菌粉末を含む。全ての場合において、形態は無菌でなければならず、容易な注射可能性が存在する程度に流動的でなければならない。これは製造及び保存条件下で安定でなければならず、細菌や真菌等の微生物の汚染作用に対し保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコール）、それらの好適な混合物、ならびに植物油を含有する溶媒または分散媒であってもよい。
本発明の化合物はまた、エアロゾルの形態で気道に直接投与されてもよい。エアロゾルとしての使用のために、溶液または懸濁液中の本発明の化合物は、従来のアジュバントを含む好適な噴射剤、例えばプロパン、ブタン、またはイソブタン等の炭化水素噴射剤と共に、加圧エアロゾル容器内に封入されてもよい。本発明の材料はまた、例えば噴霧器またはアトマイザー内で、非加圧形態で投与されてもよい。
当業者に明らかなように、オリゴオキソピペラジンは、上述のオキソオリゴピペラジンのいずれか及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物の形態で投与されてもよい。許容される薬学的担体は、溶液、懸濁液、エマルション、賦形剤、粉末、または安定剤を含む。担体は、所望の送達様式に好適であるべきである。
さらに、薬学的製剤は、投与形態の性質及び投薬形態に依存して、１種以上の薬学的に許容される希釈剤、アジュバント、賦形剤またはビヒクル、例えば、保存剤、充填剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、甘味剤、香味剤、芳香剤、抗菌剤、抗真菌剤、滑剤及び分注剤をさらに含んでもよい。懸濁剤の例は、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天及びトラガカント、またはそれらの物質の混合物を含む。微生物の活動の防止は、様々な抗菌及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等により確実とすることができる。等張剤、例えば糖、塩化ナトリウム等を含めることもまた望ましくなり得る。注射用薬学形態の持続的吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの使用によりもたらすことができる。好適な担体、希釈剤、溶媒、またはビヒクルの例は、水、エタノール、ポリオール、それらの好適な混合物、植物油（オリーブ油等）、及びオレイン酸エチル等の注射可能な有機エステルを含む。賦形剤の例は、ラクトース、乳糖、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、及び第二リン酸カルシウムを含む。崩壊剤の例は、デンプン、アルギン酸、及びある特定の複合ケイ酸塩を含む。滑剤の例は、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク、及び高分子量ポリエチレングリコールを含む。
以下の実施例１８により示されるように、本発明における使用のためのオリゴオキソピペラジン等のＥ６−ｐ３００相互作用を妨害する薬剤は、他の抗がん剤の抗がん作用を増強し得る。したがって、いくつかの実施形態において、オリゴオキソピペラジンは、１種以上の他の抗がん剤と共に使用される。好適な薬剤は、これらに限定されないが、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、２−ＣｄＡ、２−クロロデオキシアデノシン、５−アザシチジン、５−フルオロウラシル、５−ＦＵ、６−メルカプトプリン、６−ＭＰ、６−ＴＧ、６−チオグアニン、アブラキサン、アキュテイン、アクチノマイシン−Ｄ、アドセトリス、アドリアマイシン、アドルシル、アフィニトール、アグリリン、Ａｌａ−Ｃｏｒｔ、アルデスロイキン、アレムツズマブ、ＡＬＩＭＴＡ、アリトレチノイン、アルカバン−ＡＱ、アルケラン、オールトランスレチノイン酸、アルファインターフェロン、アルトレタミン、アメトプテリン、アミホスチン、アミノグルテチミド、アナグレリド、Ａｎａｎｄｒｏｎ（登録商標）、アナストロゾール、アラビノシルシトシン、Ａｒａ−Ｃ、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）、Ａｒｅｄｉａ（登録商標）、Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）、Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標）、Ａｒｒａｎｏｎ（登録商標）、三酸化ヒ素、Ａｒｚｅｒｒａ（商標）、アスパラギナーゼ、ＡＴＲＡ、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）、アキシチニブ、アザシチジン、ＢＣＧ、ベンダムスチン、ベバシズマブ、ベキサロテン、ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ、Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標）、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ボシュリフ、ボスチニブ、ブレンツキシマブベドチン、ブスルファン、Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標）、Ｃ２２５、カバジタキセル、カボザンチニブ、カルシウムロイコボリン、Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）、Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標）、カンプトテシン−１１、カペシタビン、カプレルサ、Ｃａｒａｃ（商標）、カルボプラチン、カルフィルゾミブ、カルムスチン、カルムスチンウエハ、Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標）、ＣＣ−５０１３、ＣＣＩ−７７９、ＣＣＮＵ、ＣＤＤＰ、ＣｅｅＮＵ、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標）、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、シスプラチナム、シトロボラム因子、クラドリビン、コメトリク、コルチゾン、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標）、ＣＰＴ−１１、クリゾチニブ、シクロホスファミド、Ｃｙｔａｄｒｅｎ（登録商標）、シタラビン、シタラビンリポソーム、Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標）、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、デカルバジン、ダコゲン、ダクチノマイシン、ダルベポエチンアルファ、ダサチニブ、ダウノマイシン、ダウノルビシン、ダウノルビシン塩酸塩、ダウノルビシンリポソーム、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標）、デカドロン、デシタビン、Ｄｅｌｔａ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）、Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ（登録商標）、デニロイキンディフティトックス、デノスマブ、ＤｅｐｏＣｙｔ（商標）、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、デキサメタゾンリン酸ナトリウム、デキサゾン、デキスラゾキサン、ＤＨＡＤ、ＤＩＣ、ディオデックス、ドセタキセル、ドキソルビシン、ドキソルビシンリポソーム、Ｄｒｏｘｉａ（商標）、ＤＴＩＣ、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）、Ｄｕｒａｌｏｎｅ（登録商標）、エクリズマブ、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標）、Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標）、Ｅｌｏｘａｔｉｎ（商標）、Ｅｌｓｐａｒ（登録商標）、Ｅｍｃｙｔ（登録商標）、エピルビシン、エポエチンアルファ、エルビタックス、エリブリン、エリベッジ、エルロチニブ、エルウイニアＬ−アスパラギナーゼ、エストラムスチン、エチヨル、エトポホス、エトポシド、リン酸エトポシド、Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標）、エベロリムス、Ｅｖｉｓｔａ（登録商標）、エキセメスタン、Ｆａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）、Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標）、Ｆｅｍａｒａ（登録商標）、フィルグラスチム、フロクスウリジン、Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標）、フルダラビン、Ｆｌｕｏｒｏｐｌｅｘ（登録商標）、フルオロウラシル、フルオロウラシル（クリーム）、フルオキシメステロン、フルタミド、フォリン酸、フォロチン、ＦＵＤＲ（登録商標）、フルベストラント、Ｇ−ＣＳＦ、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブオゾガマイシン、ジェムザール、Ｇｌｅｅｖｅｃ（商標）、Ｇｌｉａｄｅｌ Ｗａｆｅｒ（登録商標）、ＧＭ−ＣＳＦ、ゴセレリン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、Ｈａｌａｖｅｎ（登録商標）、Ｈａｌｏｔｅｓｔｉｎ（登録商標）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、ヘキサドロール、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）、ヘキサメチルメラミン、ＨＭＭ、Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標）、Ｈｙｄｒｅａ（登録商標）、Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔ Ａｃｅｔａｔｅ（登録商標）、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンリン酸ナトリウム、ヒドロコルチゾンコハク酸ナトリウム、リン酸ヒドロコルトン、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブ、イブリツモマブチウキセタン、イダマイシン、ＩＣＬＵＳＩＧ（登録商標）、Ｉｆｅｘ（登録商標）、ＩＦＮ−アルファ、イホスファミド、ＩＬ−１１、ＩＬ−２、メシル酸イマチニブ、イミダゾールカルボキサミド、Ｉｎｌｙｔａ（登録商標）、インターフェロン−アルファ、インターフェロンアルファ−２ｂ（ＰＥＧ結合体）、インターロイキン−２、インターロイキン−１１、Ｉｎｔｒｏｎ Ａ（登録商標）（インターフェロンアルファ−２ｂ）、イピリムマブ、イリノテカン、イソトレチノイン、イストダックス、イクサベピロン、ジェブタナ、キドロラーゼ、キプロリス、ラナコート、ラパチニブ、Ｌ−アスパラギナーゼ、ＬＣＲ、レナリドマイド、レトロゾール、ロイコボリン、リューケラン、リューキン、リュープロリド、ロイロクリスチン、ロイスタチン、リポソームＡｒａ−Ｃ、液体プレド、ロムスチン、Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシン、リュープロン、リュープロンデポ、マルキボ、マチュレーン、マキシデックス、メクロレタミン、メクロレタミン塩酸塩、メドラロン、メドロール、メゲース、メゲストロール、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メスネックス、メトトレキサート、メトトレキサートナトリウム、メチルプレドニゾロン、メチコルテン、マイトマイシン、マイトマイシン−Ｃ、ミトキサントロン、Ｍ−プレドニゾール、ＭＴＣ、ＭＴＸ、ムスタルゲン、ムスチン、ムタマイシン、ミレラン、マイロセル、マイロターグ、ナベルビン、ネララビン、ネオサール、ニューラスタ、ニューメガ、ニューポゲン、ネクサバール、ニランドロン、ニロチニブ、ニルタミド、ニペント、ナイトロジェンマスタード、ノバルデックス、ノバントロン、Ｎｐｌａｔｅ、オクトレオチド、酢酸オクトレオチド、オファツムマブ、オンコスパール、オンコビン、オンタック、オンキサール、オプレベルキン、オラプレド、オラゾン、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルタンパク質結合物、パミドロネート、パニツムマブ、パンレチン、パラプラチン、パゾパニブ、ペディアプレド、ＰＥＧインターフェロン、ペガスパルゲース、ペグフィルグラスチム、ＰＥＧ−ＩＮＴＲＯＮ、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、ＰＥＭＥＴＲＥＸＥＤ、ペントスタチン、パージェタ、ペルツズマブ、フェニルアラニンマスタード、プラチノール、プラチノール−ＡＱ、ポナチニブ、プララトレキサート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレロン、プロカルバジン、ＰＲＯＣＲＩＴ、プロロイキン、プロリア、カルムスチンインプラントを伴うプロリフェプロスパン２０、プロベンジ、プリネトール、ラロキシフェン、レゴラフェニブ、レブリミド、リューマトレックス、リツキサン、リツキシマブ、ロフェロン−Ａ（インターフェロンアルファ−２ａ）、ロミデプシン、ロミプロスチム、ルベックス、ルビドマイシン塩酸塩、サンドスタチン、サンドスタチンＬＡＲ、サルグラモスチム、シプロイセル−Ｔ、ソリリス、ソル−コーテフ、ソル−メドロール、ソラフェニブ、ＳＰＲＹＣＥＬ、ＳＴＩ−５７１、スチバーガ、ストレプトゾシン、ＳＵ１１２４８、スニチニブ、スーテント、タモキシフェン、タルセバ、タルグレチン、タシグナ、タキソール、タキソテール、テモダール、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、ＴＥＳＰＡ、サリドマイド、サロミド、ＴｈｅｒａＣｙｓ、チオグアニン、チオグアニンタブロイド、チオホスホアミド、チオプレックス、チオテパ、ＴＩＣＥ、トポサール、トポテカン、トレミフェン、トリセル、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレンダ、トレチノイン、トレキソール、トリセノックス、ＴＳＰＡ、ＴＹＫＥＲＢ、バルルビシン、バルスター、バンデタニブ、ＶＣＲ、ベクティビックス、ベルバン、ベルケード、ＶｅＰｅｓｉｄ、ベサノイド、ビアデュール、ビダザ、ビンブラスチン、硫酸ビンブラスチン、ビンカサールＰｆｓ、ビンクリスチン、ビンクリスチンリポソーム、ビノレルビン、酒石酸ビノレルビン、ビスモデギブ、ＶＬＢ、ＶＭ−２６、ボリノスタット、ボトリエント、ＶＰ−１６、ブモン、ザーコリカプセル、キセロダ、Ｘｇｅｖａ、エルボイ、ザルトラップ、ザノサール、ゼルボラフ、ゼバリン、ジネカード、Ｚｉｖ−アフリベルセプト、ゾラデックス、ゾレドロン酸、ゾリンザ、及びゾメタを含む。
本発明の別の態様は、細胞のアポトーシスを誘導する方法であって、細胞のアポトーシスを誘導するのに効果的な条件下で、細胞を、ＨＩＦ１αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンと接触させる段階を含む方法に関する。
好適なオリゴオキソピペラジンは、上述のものを含む。
本発明のこの態様及び全ての態様による好適な細胞は、これに限定されないが、哺乳動物細胞を含む。好ましくは、細胞は、ヒト細胞である。少なくとも１つの実施形態において、細胞は、がん細胞である。好適ながん細胞は、例えば、子宮頸がん細胞、外陰がん細胞、膣がん細胞、陰茎がん細胞、肛門がん細胞を含む肛門性器がん細胞、ならびにＨＮＳＣＣ細胞及び口腔咽頭がん細胞を含む頭頸部のがん細胞を含む。少なくとも１つの実施形態において、細胞は、上述のような高リスクＨＰＶに感染している。
本発明の別の態様は、細胞の生存及び／または増殖を減少させる方法であって、細胞の生存及び／または増殖を減少させるのに効果的な条件下で、細胞を、ＨＩＦ１αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンと接触させる段階を含む方法に関する。
好適なオリゴオキソピペラジン及び好適な細胞は、上述のものを含む。
本発明の別の態様は、細胞内でのｐ５３の不活性化を予防するまたは元に戻す方法であって、細胞におけるｐ５３の不活性化を予防するまたは元に戻すのに効果的な条件下で、細胞を、ＨＩＦ１αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンと接触させる段階を含む方法に関する。
好適なオリゴオキソピペラジン及び好適な細胞は、上述のものを含む。
本発明のさらに別の態様は、細胞における、ｐ３００が媒介する転写因子のアセチル化を阻害する方法であって、細胞における、ｐ３００が媒介する転写因子のアセチル化を阻害するのに効果的な条件下で、細胞を、ＨＩＦ１αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンと接触させる段階を含む方法に関する。
本発明のこの態様による好適な転写因子は、ｐ３００によってアセチル化が媒介される、任意の転写因子を含む。少なくとも１つの実施形態において、転写因子は、ｐ５３である。
好適なオリゴオキソピペラジン及び好適な細胞は、上述のものを含む。
細胞を１種以上のオリゴオキソピペラジンに接触させる段階を含む方法に関する本発明の全ての態様において、接触は、当業者に明らかな方法を使用して実行することができ、またインビトロまたはインビボで実行することができる。
薬剤を細胞内に送達するための１つのアプローチは、リポソームの使用を含む。基本的に、これは、送達される薬剤（複数種可）を含むリポソームを提供し、次いで、細胞、組織、または器官への薬剤の送達に効果的な条件下で、標的細胞、組織、または器官をリポソームと接触させる段階を含む。
このリポソーム送達系はまた、能動的標的指向化を介して（例えば、リポソームビヒクルの表面上に抗体またはホルモンを組み込むことにより）、標的器官、組織、または細胞に蓄積するように作製され得る。これは、既知の方法に従って達成され得る。
タンパク質またはポリペプチド含有薬剤（例えば、１つ以上のタンパク質またはポリペプチド側鎖を含有する、本発明における使用のためのオリゴオキソピペラジン）の送達のための代替のアプローチは、結合したタンパク質またはポリペプチドの酵素分解を回避するために安定化されたポリマーへの、所望の薬剤の結合を含む。この種類の結合タンパク質またはポリペプチドは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｅｋｗｕｒｉｂｅに対する米国特許第５，６８１，８１１号に記載されている。
薬剤の送達のためのさらに別のアプローチは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｈｅａｒｔｌｅｉｎらに対する米国特許第５，８１７，７８９号によるキメラ薬剤の調製を含む。キメラ薬剤は、リガンドドメイン及び薬剤（例えば、本発明のオリゴオキソピペラジン）を含み得る。リガンドドメインは、標的細胞上に位置する受容体に特異的である。したがって、キメラ薬剤が静脈内送達または別様に血液もしくはリンパに導入された場合、キメラ薬剤は、標的化細胞に吸着し、標的化細胞は、キメラ薬剤を内部移行させる。
本発明における使用のためのオリゴオキソピペラジンは、標的化細胞／組織／器官に直接送達され得る。
追加的に、及び／または代替として、オリゴオキソピペラジンは、標的化組織、器官、または細胞への（及び／またはそれらによる）オリゴオキソピペラジンの移動を促進する１種以上の薬剤と共に、非標的化領域に投与されてもよい。当業者に明らかとなるように、オリゴオキソピペラジン自体は、血液脳関門を介したその輸送を含む、標的組織、器官、もしくは細胞へのその輸送を促進するように、及び／または、標的細胞によるその取り込み（例えば、細胞膜を介したその輸送）を促進するように修飾され得る。
インビボ投与は、上述のように、対象への全身投与により、または罹患組織、器官、及び／もしくは細胞への標的指向投与により達成され得る。典型的には、治療薬剤（すなわち、本発明のオリゴオキソピペラジン）は、治療薬剤（複数種可）を標的細胞、組織、または器官に送達するビヒクル中で、患者に投与される。典型的には、治療薬剤は、上述のもの等の薬学的製剤として投与される。
例示的な投与経路は、これらに限定されないが、経口的、局所的、経皮的、非経口的、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、脳室内、及び病巣内；気管内接種、吸引、気道点滴、エアロゾル化、噴霧化、鼻腔内点滴、経口または経鼻胃点滴、腹腔内注射、血管内注射、静脈注射、動脈注射（例えば肺動脈を介した）、筋肉内注射、及び胸膜内注入によるもの；粘膜（例えば鼻、喉及び気管支、性器ならびに／または肛門の粘膜）への適用によるもの；ならびに徐放ビヒクルの移植によるものを含む。
エアロゾルとしての使用のために、溶液または懸濁液中の本発明のオリゴオキソピペラジンは、従来のアジュバントを含む好適な噴射剤、例えばプロパン、ブタン、またはイソブタン等の炭化水素噴射剤と共に、加圧エアロゾル容器内に封入されてもよい。本発明における使用のためのオリゴオキソピペラジンはまた、非加圧形態で投与されてもよい。
例示的送達デバイスは、これらに限定されないが、噴霧器、アトマイザー、リポソーム（能動的及び受動的薬物送達技術の両方を含む）（それぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｗａｎｇ ＆ Ｈｕａｎｇ，"ｐＨ−Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓ Ｍｅｄｉａｔｅ Ｔａｒｇｅｔ−ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ Ｆｏｒｅｉｇｎ Ｇｅｎｅ ｉｎ Ｍｏｕｓｅ，"Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ'ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：７８５１−５（１９８７）；Ｂａｎｇｈａｍ ｅｔ ａｌ．，"Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｏｆ Ｕｎｉｖａｌｅｎｔ Ｉｏｎｓ Ａｃｒｏｓｓ ｔｈｅ Ｌａｍｅｌｌａｅ ｏｆ Ｓｗｏｌｌｅｎ Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ，"Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３：２３８−５２（１９６５）；Ｈｓｕに対する米国特許第５，６５３，９９６号；Ｌｅｅらに対する米国特許第５，６４３，５９９号；Ｈｏｌｌａｎｄらに対する米国特許第５，８８５，６１３号；Ｄｚａｕ及びＫａｎｅｄａに対する米国特許第５，６３１，２３７号；ならびにＬｏｕｇｈｒｅｙらに対する米国特許第５，０５９，４２１号；Ｗｏｌｆｆ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉ−Ｔｈｙ１ ＩｇＧ１ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｔｏ ＡＫＲ−Ａ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ Ｖｉｖｏ，"Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ８０２：２５９−７３（１９８４））、経皮パッチ、インプラント、移植可能または注射可能なタンパク質デポー組成物、及び注射器を含む。当業者に知られている他の送達システムもまた、インビボでの所望の器官、組織または細胞へのオリゴオキソピペラジンの所望の送達を達成して、本発明のこの態様を達成するために使用され得る。
接触（インビボ投与を含む）は、必要なだけ頻繁に、及び所望の効果を提供するのに好適な期間行うことができる。例えば、接触は、１回または複数回行われてもよく、またインビボ投与は、単一の徐放投薬製剤で、または複数の（例えば毎日の）投薬で行われてもよい。
投与される量は、当然ながら、具体的な状態及び治療計画に依存して変動する。所望の効果を得るために必要な量／用量は、薬剤、製剤、細胞型、培養条件（生体外の実施形態の場合）、治療が望ましい期間、及び、インビボの実施形態においては薬剤が投与される個人に依存して変動し得る。
効果的な量は、当業者により経験的に決定され得る。例えば、これは、様々な量の本発明のオリゴオキソピペラジンが培養物中の細胞に投与され、所望の結果を得るのに効果的な濃度が計算されるアッセイを含んでもよい。また、インビボ投与のための効果的な量の決定は、様々な用量の薬剤が培養物中の細胞に投与され、インビボで必要な濃度を計算するために、所望の結果を達成するのに効果的な薬剤の濃度が決定されるインビトロアッセイを含んでもよい。効果的な量はまた、インビボ動物試験に基づいてもよい。
以下の実施例を参照することにより、本発明がさらに例示され得る。
実施例１-材料及び方法：細胞株
ＵＭＳＣＣ４７及びＵＭＳＣＣ７４Ａは、ミシガン大学のＴｈｏｍａｓ Ｃａｒｅｙ博士から入手した。ＵＰＣＩ：ＳＣＣ０９０は、ピッツバーグ大学のＳｕｓａｎｎｅ Ｇｏｌｌｉｎ博士により提供された（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｄｅｍｏｇｒａｐｈｉｃ Ｒｉｓｋ Ｆａｃｔｏｒｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｓｑｕａｍｏｕｓ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅｓ，"Ｏｒａｌ Ｏｎｃｏｌ．４３（７）：７０１−１２（２００７））。ＵＭＳＣＣ４７、ＵＭＳＣＣ７４Ａ、及びＵＰＣＩ：ＳＣＣ０９０細胞は、１０％ＦＢＳ、２ｍＭグルタミン、１００ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン及び１００Ｕ／ｍＬペニシリンを含有するＤＭＥＭ中で増殖させ、３７℃で５％ＣＯ２の加湿雰囲気中で維持した。
実施例２-材料及び方法：プラスミド構築及びトランスフェクション
ｐ３００のＣＨ１ドメイン（ヌクレオチド３３２〜４１７）を、ＰＣＲ
Figure 2016510327
により増幅し、ｐｃＤＮＡ３．１のＢａｍＨＩ及びＸｈｏｌ制限酵素部位の間に挿入した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を使用して、ＵＭＳＣＣ４７、ＵＭＵＰＣＩ：ＳＣＣ０９０、及びＵＭＳＣＣ７４Ａ細胞に、ｐｃＤＮＡ３．１／空またはｐｃＤＮＡ３．１／ＣＨ１をトランスフェクトした。安定なポリクローナル集団を選択し、Ｇ４１８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の存在下で維持した。
実施例３-材料及び方法：ウェスタンブロット
全細胞溶解物を、Ｌａｅｍｍｌｉローディング緩衝液と混合し、煮沸し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、ニトロセルロース膜に移した。その後、Ｖ５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐ５３（ｓｃ−１２６、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、ＣＡ）、またはアセチル化［Ｋ３８２］−ｐ５３（２５２５、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）に特異的な抗体を使用して、免疫ブロット分析を行った。ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ Ｋｉｔ（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を使用して、シグナルを増幅した。
実施例４-材料及び方法：ｐ５３転写活性
Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００を使用して、細胞に、１００ｎｇのＣｉｇｎａｌ ｐ５３レポーター（ＳＡＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）をトランスフェクトした。Ｃｉｇｎａｌ ｐ５３レポーターは、ｐ５３コンセンサス転写応答要素のタンデム反復を含有する。４８時間後、細胞を冷ＰＢＳで洗浄し、Ｐａｓｓｉｖｅ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ）中に溶解し、Ｄｕａｌ−Ｌｉｇｈｔ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）を使用した照度計において、蛍／ウミシイタケ二重ルシフェラーゼ活性について測定した。ウミシイタケルシフェラーゼ活性は、トランスフェクション効率を照合するために、蛍ルシフェラーゼ活性に対して正規化された。化合物処理のために、プロトコルの変更を使用した。ＵＭＳＣＣ４７細胞に１００ｎｇのＣｉｇｎａｌ ｐ５３レポーターをトランスフェクトした。２４時間後、細胞をビヒクル、ＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）、シスプラチン（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）及びシスプラチン（１０μＭ）の組み合わせで処理し、処理から２４時間後に蛍／ウミシイタケ二重ルシフェラーゼ活性について測定した。
実施例５-材料及び方法：定量リアルタイムＰＣＲ
ＴＲＩｚｏｌ（登録商標）試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）またはＴａｑＭａｎ ＰｒｅＡｍｐ Ｃｅｌｌｓ−ｔｏ−ＣＴキット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、全ＲＮＡのために細胞を抽出した。ｐ３００、ｐ５３、ｐ２１、ｍｉＲ−３４ａ及びｍｉＲ−２００ｃの発現を、検証されたＴａｑＭａｎ遺伝子発現分析（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）と共にＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ７９００ＨＴ Ｆａｓｔ Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍを使用して決定した。ｐ５３、ｐ３００、及びｐ２１発現は、△△Ｃｔ法を用いてＧＡＤＰＨに対して正規化され、ｍｉＲ−３４ａ及びｍｉＲ−２００ｃ発現は、ＲＮＵ４４に対して正規化された。
実施例６-材料及び方法：免疫沈降
細胞を、１×Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｒｏｃｈｅ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を含有するＮＰ緩衝液［５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．５％デオキシコール酸塩、０．１％ＳＤＳ、及び１．０％ＮＰ−４０］により、４℃で１５分間の穏やかな振盪と共に溶解した。非特異的結合を遮断するために、使用前にＮＰ緩衝液で事前洗浄された５０μＬのプロテインＡ／Ｇアガロースビーズ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて、上澄みを事前に浄化した。同量の抗Ｅ６抗体（Ａｂｃａｍ）、抗ｐ３００抗体（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、またはＩｇＧ抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を、各試料に添加した。４℃で４時間のインキュベーション後、事前洗浄されたプロテインＡ／Ｇ−アガロースビーズ５０μＬを各管に添加し、４℃で一晩の振盪により免疫沈降を行った。免疫沈降した複合体をＮＰ緩衝液で洗浄し、次いで２ＸＳＤＳ試料緩衝液を使用して溶出した。抗Ｅ６、抗ｐ３００、または抗Ｖ５抗体によるウェスタンブロット分析のために、溶出された試料及び投入物の１０％をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分解した。
実施例７-材料及び方法：細胞増殖、コロニー形成生存、及びアポトーシス
代謝活性細胞を検出するためにＭＴＴ試薬（Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｎｕｔｌｅｙ、ＮＪ）を使用して細胞増殖を評価した。一晩のインキュベーション後、Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ １９０ ＥＬＩＳＡリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）において５７０ｎｍで吸光度を測定した。コロニー形成生存に関して、ウェル当たり２００細胞を完全成長培地中に播種し、視認できるコロニーが形成されるまで（１４日間）増殖させた。細胞コロニーを冷メタノールで固定し、２５％メタノール中の０．２５％クリスタルバイオレット溶液で染色し、洗浄し、空気乾燥させた。アポトーシスに関して、細胞を採取し、冷ＰＢＳで洗浄し、製造者のプロトコル（ＡｐｏＡｌｅｒｔ Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ−ＦＩＴＣ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ Ｋｉｔ；Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）に従ってアネキシンＶ及びヨウ化プロピジウムで同時染色した。Ｔｈｅ Ｏｈｉｏ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｃｏｒｅにおいて、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）を使用してアポトーシス細胞を分析した。
実施例８-材料及び方法：無胸腺ヌードマウスにおける腫瘍発生及び成長
ＵＭＳＣＣ４７／空及びＵＭＳＣＣ４７／ＣＨ１細胞を、５０：５０ ＤＭＥＭ：Ｍａｔｒｉｇｅｌ中に懸濁させ、それぞれ６週齢の無胸腺ヌードマウス（８匹のマウス／群）の左及び右脇腹に皮下移植した。３週間後、デジタルキャリパーを使用して週１回腫瘍を測定し、式：ｄ１×ｄ２×ｄ３×０．５２３６（式中、「ｄ」は、３つの直交する直径を表す）を使用して腫瘍体積を計算した。腫瘍細胞移植後４９日間、腫瘍成長及び発生を監視した。
実施例９-材料及び方法：ＡＬＤＨ及びＣＤ４４
製造者のプロトコル（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｃｏｌｕｍｂｉａ、Ｃａｎａｄａ）に従いＡＬＤＥＦＬＵＯＲキットを使用して、ＡＬＤＨ活性に関して細胞を評価した。ＡＬＤＨ基質（ｂｉｄｉｐｙ−アミノアセトアルデヒド、１×１０６細胞当たり１μＭ）を含有するＡＬＤＥＦＬＵＯＲアッセイ緩衝液に細胞を懸濁させ、３７℃で４０分間インキュベートした。各実験において、細胞の試料を、５０ｍＭの特異的ＡＬＤＨ阻害剤ジエチルアミノベンズアルデヒド（ＤＥＡＢ）と共にインキュベートし、陰性対象とした。ＣＤ４４発現に関して、細胞を採取し、氷上で５０分間、ＰＥ−ＣＤ４４抗体（Ａｂｃａｍ）またはマウスＰＥ−ＩｇＧ（Ａｂｃａｍ）を含むインキュベーション緩衝液中に再懸濁させた。懸濁液を、４℃で５分間３００×ｇで遠心分離し、分析のために０．５ｍＬの１％パラホルムアルデヒド溶液中に再懸濁させた。Ｔｈｅ Ｏｈｉｏ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｃｏｒｅにおいて、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒを使用して蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）分析を行った。
実施例１０-材料及び方法：腫瘍塊形成
腫瘍塊に関して、細胞を採取し、低付着プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）において上皮成長因子、塩基性線維芽細胞成長因子、インスリン、及びヒドロコルチゾンが添加されたＫＳＦ培地からなる無血清合成培地中に播種した。腫瘍塊形成効率は、７日で形成された腫瘍塊（直径≧５０μｍ）の数を、播種された細胞の元の数で除したものとして計算された。腫瘍塊直径は、ＮＩＳ−Ｅｌｅｍｅｎｔｓソフトウェアを使用して測定された。
実施例１１-材料及び方法：単一腫瘍塊による腫瘍発生
ＵＭＳＣＣ４７細胞から得られる腫瘍塊を生成し、ＮＩＳ−Ｅｌｅｍｅｎｔｓソフトウェアを使用して測定した。単一腫瘍塊（直径６０〜８０μｍ）を、５０：５０ ＫＳＦ：Ｍａｔｒｉｇｅｌ中に懸濁させ、６週齢ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（ｎ＝１１）の脇腹内に皮下移植した。別個の組の動物において、親ＵＭＳＣＣ４７細胞（１×１０３）を、５０：５０ ＤＭＥＭ：Ｍａｔｒｉｇｅｌ中に懸濁させ、６週齢ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（ｎ＝１０）の脇腹内に皮下移植した。腫瘍塊または腫瘍細胞移植後１８０日間、腫瘍発生を監視した。
実施例１２-材料及び方法：阻害剤の合成
合成ヘリックスを、以前に説明されたように合成した（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｈｅｎｃｈｅｙ ｅｔ ａｌ．，"Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｙｐｏｘｉａ Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ Ｆａｃｔｏｒ １−Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｙ ａ Ｈｙｄｒｏｇｅｎ Ｂｏｎｄ Ｓｕｒｒｏｇａｔｅ Ａｌｐｈａ−Ｈｅｌｉｘ，"Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３２（３）：９４１−４３（２０１０）；Ｐａｔｇｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，"Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｓｈｏｒｔ Ａｌｐｈａ−Ｈｅｌｉｃｅｓ Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｈｙｄｒｏｇｅｎ Ｂｏｎｄ Ｓｕｒｒｏｇａｔｅ Ａｐｐｒｏａｃｈ，"Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．５（１１）：１８５７−６５（２０１０））。化合物を逆相ＨＰＬＣにより精製し（図１Ａ〜Ｃを参照されたい）、以下の表１に示されるようにＥＳＩ−ＭＳにより特性決定した。
（表１）ＣＨ１阻害剤の質量分光法による特性決定
Figure 2016510327
Ｘは４−ペンテン酸を示し；Ａ＊＝Ｎ−アリルアラニンである。
実施例１３-材料及び方法：統計分析
データを、両側スチューデントｔ検定により分析した。Ｐ値＜０．０５を有意とみなした。
実施例１４-外因性ＣＨ１は、ＨＰＶ１６ Ｅ６とｐ３００との間の結合を遮断することによりｐ５３を再活性化する
高リスクＨＰＶ Ｅ６は、ｐ３００と結合してｐ３００が媒介するｐ５３アセチル化を阻害することが報告されている（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ １６ Ｅ６ Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｃａｎ Ｄｏｗｎ−Ｒｅｇｕｌａｔｅ ｐ５３ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｂｙ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ Ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ ＣＢＰ／ｐ３００，"Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７３（８）：６２０９−１９（１９９９）；Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ Ｅ６ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ １６ Ｂｉｎｄｓ ｔｏ ａｎｄ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｃｏ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ＣＢＰ ａｎｄ ｐ３００，"ＥＭＢＯ Ｊ．１８（１８）：５０６１−７２（１９９９）；Ｔｈｏｍａｓ ＆ Ｃｈｉａｎｇ，"Ｅ６ Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｐｒｅｓｓｅｓ ｐ５３−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｇｅｎｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｖｉａ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ ｏｆ Ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｐ５３ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，"Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ １７（２）：２５１−６４（２００５））。アセチル化は、ｐ５３安定性及び転写活性を制御するための重要な調節機構である（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ １６ Ｅ６ Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｃａｎ Ｄｏｗｎ−Ｒｅｇｕｌａｔｅ ｐ５３ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｂｙ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ Ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ ＣＢＰ／ｐ３００，"Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７３（８）：６２０９−１９（１９９９）；Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ Ｅ６ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ １６ Ｂｉｎｄｓ ｔｏ ａｎｄ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｃｏ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ＣＢＰ ａｎｄ ｐ３００，"ＥＭＢＯ Ｊ．１８（１８）：５０６１−７２（１９９９）；Ｔｈｏｍａｓ ＆ Ｃｈｉａｎｇ，"Ｅ６ Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｐｒｅｓｓｅｓ ｐ５３−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｇｅｎｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｖｉａ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ ｏｆ Ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｐ５３ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，"Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ １７（２）：２５１−６４（２００５）；Ｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，"ＭＤＭ２−ＨＤＡＣ１−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｄｅａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ Ｉｓ Ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ Ｉｔｓ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，"ＥＭＢＯ Ｊ．２１（２２）：６２３６−４５（２００２）；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，"Ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｉｔｓ Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ ｂｙ Ｍｄｍ２，"Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（５２）：５０６０７−１１（２００２））。したがって、Ｅ６−ｐ３００相互作用の標的化は、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおいてｐ５３を再活性化するための新規なアプローチとなり得る。発表されている研究では、高リスクＨＰＶ Ｅ６が、ｐ３００のＣＨ１、ＣＨ３、及びＣ末端ドメインに結合することが示された（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ Ｅ６ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ １６ Ｂｉｎｄｓ ｔｏ ａｎｄ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｃｏ−Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ＣＢＰ ａｎｄ ｐ３００，"ＥＭＢＯ Ｊ．１８（１８）：５０６１−７２（１９９９））。したがって、我々は、接触部位の１つであるＣＨ１ドメインの標的化が、Ｅ６とｐ３００との間の結合を遮断し、ｐ５３を再活性化するための扱いやすいアプローチであるかを決定した。図２Ａに示されるように、２つのＨＰＶ１６陽性ＨＮＳＣＣ細胞株であるＵＭＳＣＣ４７及びＵＰＣＩ：ＳＣＣ０９０において、外因性ＣＨ１は、Ｅ６を抑えてＥ６とｐ３００との間の結合を低減させた。全ｐ５３の蓄積及びアセチル化ｐ５３の増加が、ＣＨ１過剰発現ＵＭＳＣＣ４７（ＵＭＳＣＣ４７／ＣＨ１）及びＵＰＣＩ：ＳＣＣ０９０（ＳＣＣ０９０／ＣＨ１）細胞において明らかとなった（図２Ｂ）。ｐ５３転写活性は、ＵＭＳＣＣ４７／ＣＨ１及びＵＰＣＩ：ＳＣＣ０９０／ＣＨ１細胞において、それぞれ８５％（Ｐ＜０．０１）及び５０％（Ｐ＜０．０１）上昇した（図２Ｃ）。ＣＨ１の過剰発現は、ｐ５３及びｐ３００発現に対する影響を有さなかったが、３つのよく知られたｐ５３標的の発現を向上させた。ｐ２１、ｍｉＲ−３４ａ、及びｍｉＲ−２００ｃ発現は、それぞれ、ＵＭＳＣＣ４７／ＣＨ１細胞において１１４％、３２３％、及び８０％（Ｐ＜０．０１）、ＵＰＣＩ：ＳＣＣ０９０／ＣＨ１細胞において３９％、１３４％、及び４９％（Ｐ＜０．０１）増加した（図２Ｅ）。これらの結果は、Ｅ６−ｐ３００相互作用の遮断が、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおいて、ｐ５３の蓄積及びアセチル化を通してｐ５３を再活性化するための効率的なアプローチであることを示している。
実施例１５-外因性ＣＨ１は、ＨＰＶ１６陽性ＨＮＳＣＣにおいて多面的抗がん効果を有する
我々は、ｐ５３の再活性化がＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣ細胞において抗腫瘍反応を促進するのに十分であるかを決定した。細胞増殖及びコロニー形成生存は、それぞれ、ＵＭＳＣＣ４７／ＣＨ１細胞において２０％及び５５％、ＵＭＵＰＣＩ：ＳＣＣ０９０／ＣＨ１細胞において１１％及び５８％低減された（図３Ａ及び３Ｂ）。さらに、ＣＨ１過剰発現は、ＵＭＳＣＣ４７細胞において６０％、ＵＰＣＩ：ＳＣＣ０９０細胞において２７％増加した（図３Ｃ）。細胞増殖、コロニー形成生存、及びアポトーシスにおける同様の反応が、単剤シスプラチン（１０μＭ）で処理された空ベクタートランスフェクトＵＭＳＣＣ４７及びＵＰＣＩ：ＳＣＣ０９０細胞に対して観察された。ＵＭＳＣＣ４７／ＣＨ１及びＵＰＣＩ：ＳＣＣ０９０／ＣＨ１細胞は、ＵＭＳＣＣ４７／空及びＵＰＣＩ：ＳＣＣ０９０／空細胞よりも、シスプラチン（１０μＭ）に対して劇的により反応性であった。ＣＨ１過剰発現及びシスプラチン処理の組み合わせは、ＵＭＳＣＣ４７及びＵＰＣＩ：ＳＣＣ０９０において、それぞれ細胞増殖を４６％及び２３％低減させ、コロニー形成生存を８５％及び７７％低減させ、アポトーシスを１９４％及び１５７％向上させた（Ｐ＜０．０１）。我々の結果は、ｐ５３の再活性化が、広範な抗腫瘍反応を促進するのに十分であり、さらに、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣ細胞におけるシスプラチンの有効性を向上させたことを示している。
次に、我々は、ＣＨ１過剰発現がＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣ細胞のインビボ腫瘍原性を調節するかを決定した。ＵＭＳＣＣ４７／空及びＵＭＳＣＣ４７／ＣＨ１細胞の３×１０５または３×１０４である２つの異なる希釈物を、無胸腺ヌードマウスの脇腹に移植した（図３Ｄ）。３×１０５細胞である希釈の場合、腫瘍発生率は、ＵＭＳＣＣ４７／空細胞とＵＭＳＣＣ４７／ＣＨ１細胞との間で同じであったが、腫瘍体積における差（Ｐ＜０．０１、ｎ＝６）が観察された。平均腫瘍体積は、ＵＭＳＣＣ４７／空において１４２ｍｍ３、ＵＭＳＣＣ４７／ＣＨ１において６７ｍｍ３であった（図３Ｅ）。興味深いことに、３×１０４細胞である希釈の場合、腫瘍発生率は、ＵＭＳＣＣ４７／空においては５０％（４／８）であったが、ＵＭＳＣＣ４７／ＣＨ１においては０％（０／８）であった（Ｐ＜０．０２）。この観察は、ＣＩＣ集団が、ｐ５３再活性化の後で、ＨＰＶ１６陽性ＨＮＳＣＣにおいて減弱され得ることを示唆している。ＣＩＣは、腫瘍内のがん細胞のサブセットであり、ＣＩＣプールを分裂及び増加させる、または、腫瘍のバルクを構成する不均一な非腫瘍原性細胞に分化する唯一の能力を有する。ＣＩＣは、疾患の再発及び／または転移を担う唯一の細胞であると想定される。したがって、ＣＩＣの排除は、がん患者を最適に管理するために不可欠となり得る。ＡＬＤＨ及びＣＤ４４は、ＨＮＳＣＣにおけるＣＩＣ集団を特定するために使用される２つのマーカーである（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｐｒｉｎｃｅ ｅｔ ａｌ．，"Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌｓ Ｗｉｔｈ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｉｎ Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｓｑｕａｍｏｕｓ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，"Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ'ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０４（３）：９７３−７８（２００７）；Ｃｌａｙ ｅｔ ａｌ．，"Ｓｉｎｇｌｅ−Ｍａｒｋｅｒ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｓｑｕａｍｏｕｓ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｗｉｔｈ Ａｌｄｅｈｙｄｅ Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，"Ｈｅａｄ Ｎｅｃｋ ３２（９）：１１９５−２０１（２０１０）；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，"Ａｌｄｅｈｙｄｅ Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ １ Ｉｓ ａ Ｐｕｔａｔｉｖｅ Ｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｓｑｕａｍｏｕｓ Ｃａｎｃｅｒ，"Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３８５（３）：３０７−１３（２００９））。図３Ｆに示されるように、ＣＨ１過剰発現は、ＵＭＳＣＣ４７細胞において、ＡＬＤＨｈｉｇｈ集団を４６％（Ｐ＜０．０１）、ＣＤ４４ｈｉｇｈ集団を３１％低減させた（Ｐ＜０．０１）。さらに、ＦＡＣＳ分析は、ＵＭＳＣＣ４７／空細胞と比較して、ＵＭＳＣＣ４７／ＣＨ１細胞においてＣＤ４４レベルが３３％低減されることを示した。腫瘍塊形成は、ＣＩＣ集団を評価するためのインビトロアッセイである。ＵＭＳＣＣ４７細胞におけるＣＨ１の過剰発現は、腫瘍塊形成効率を４２％阻害し（Ｐ＜０．０１）、腫瘍塊直径を２５％低減させた（Ｐ＜０．０１）（図３Ｇ）。腫瘍塊の腫瘍開始能を確認するために、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに、単一腫瘍塊（平均直径６０〜８０μｍ、約１００細胞）を移植し、６ヶ月の期間にわたり腫瘍発生に関して監視した（図３Ｈ）。単一腫瘍塊を移植されたマウスは、５５％の腫瘍発生率を有していた（６／１１）。対照的に、１×１０３のＵＭＳＣＣ４７細胞を移植されたマウスは全て、６ヶ月の期間にわたり腫瘍を形成しなかった。我々の研究は、ｐ５３の再活性化が、一部ＣＩＣ集団の低減により、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣのインビボ腫瘍原性を抑制することを示している。
実施例１６-外因性ＣＨ１は、ＨＰＶ陰性ＨＮＳＣＣにおいて多面的抗がん効果を有する
ｐ３００は、ＭＤＭ２が媒介するｐ５３分解に不可欠であるという証拠がある（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｇｒｏｓｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，"ｐ３００／ＭＤＭ２ Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ Ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅ ｉｎ ＭＤＭ２−Ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐ５３ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，"Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ ２（４）：４０５−１５（１９９８）；Ｋｏｂｅｔ ｅｔ ａｌ．，"ＭＤＭ２ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｐ３００−Ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐ５３ Ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ Ｆｏｒｍｉｎｇ ａ Ｔｅｒｎａｒｙ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｔｗｏ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，"Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ'ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９７（２３）：１２５４７−５２（２０００））。ＭＤＭ２はｐ３００のＣＨ１ドメインに結合し、ＣＨ１の過剰発現はｐ５３野生型ヒト骨肉種Ｕ２ＯＳ細胞におけるｐ５３安定性を向上させるのに十分であることが示されている（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｇｒｏｓｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，"ｐ３００／ＭＤＭ２ Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ Ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅ ｉｎ ＭＤＭ２−Ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐ５３ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，"Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ ２（４）：４０５−１５（１９９８）；Ｋｏｂｅｔ ｅｔ ａｌ．，"ＭＤＭ２ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｐ３００−Ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐ５３ Ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ Ｆｏｒｍｉｎｇ ａ Ｔｅｒｎａｒｙ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｔｗｏ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，"Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ'ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９７（２３）：１２５４７−５２（２０００））。これらの観察と一致して、ＣＨ１の異所性発現は、ｐ５３野生型ＨＰＶ陰性ＵＭＳＣＣ７４Ａ ＨＮＳＣＣ細胞における全及びアセチル化ｐ５３を増加させた（図４Ａ）。ｐ５３転写活性は、ＵＭＳＣＣ７４Ａ／空細胞と比較して、ＵＭＳＣＣ７４Ａ／ＣＨ１において６８％上昇した（Ｐ＜０．０５）（図４Ｂ）。図４Ｃにおいて示されるように、ＵＭＳＣＣ７４Ａ細胞におけるｐ３００とＭＤＭ２との間の相互作用は、ＣＨ１の導入により妨害された。ＣＨ１の過剰発現は、細胞増殖（４８％、Ｐ＜０．０１）及びコロニー形成生存（７０％、Ｐ＜０．０１）を阻害し、ＵＭＳＣＣ７４Ａ細胞においてアポトーシス（９５％、Ｐ＜０．０５）を増加させた。さらに、ＵＭＳＣＣ７４Ａ／ＣＨ１細胞は、ＵＭＳＣＣ７４Ａ／空細胞よりもシスプラチン（１０μＭ）の抗腫瘍効果に反応性であった。我々の研究は、外因性ＣＨ１がｐ３００−ＭＤＭ２相互作用を遮断し、ｐ５３活性を向上させ、ＨＰＶ陰性ＨＮＳＣＣ細胞において広範な抗腫瘍反応を促進したことを示している。
実施例１７-小分子ＣＨ１阻害剤ＣＨ１ｉＢは、ＨＰＶ１６陽性ＨＮＳＣＣにおいてｐ５３を優先的に再活性化する
我々の結果は、外因性ＣＨ１がＨＰＶ陽性及びＨＰＶ陰性ＨＮＳＣＣにおいてｐ５３を再活性化することを示した。我々は、小分子ＣＨ１リガンドが、ｐ３００上のＥ６及びＭＤＭ２結合部位をマスクし、Ｅ６−ｐ３００及びＭＤＭ２−ｐ３００の結合を遮断するための競合阻害剤として機能し得るかを決定した。ＨＩＦ−１αは、動員してｐ３００のＣＨ１ドメインに結合し、ＨＩＦ−１αが媒介する標的遺伝子の転写を促進する（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｄａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，"Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂａｓｉｓ ｆｏｒ Ｈｉｆ−１ Ａｌｐｈａ／ＣＢＰ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｈｙｐｏｘｉｃ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ，"Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ'ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９（８）：５２７１−７６（２００２）；Ｆｒｅｅｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，"Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂａｓｉｓ ｆｏｒ Ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ ｏｆ ＣＢＰ／ｐ３００ ｂｙ Ｈｙｐｏｘｉａ−Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ Ｆａｃｔｏｒ−１ Ａｌｐｈａ，"Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ'ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９（８）：５３６７−７２（２００２））。水素結合代替法により制約される、ＨＩＦ−１α（ＣＨ１ｉＡ）の安定化されたα−ヘリックス模倣体（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｐａｔｇｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，"Ａ Ｈｙｄｒｏｇｅｎ Ｂｏｎｄ Ｓｕｒｒｏｇａｔｅ Ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒ Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｈｏｒｔ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｉｎ Ａｌｐｈａ−Ｈｅｌｉｃａｌ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，"Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．４１（１０）：１２８９−３００（２００８））は、ＣＨ１阻害剤として機能し、ｐ３００に関して外因性ＨＩＦ−１αと競合し、ＨＩＦ−１αが媒介する血管内皮成長因子の転写の低減をもたらすことが報告されている（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｈｅｎｃｈｅｙ ｅｔ ａｌ．，"Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｙｐｏｘｉａ Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ Ｆａｃｔｏｒ １−Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｙ ａ Ｈｙｄｒｏｇｅｎ Ｂｏｎｄ Ｓｕｒｒｏｇａｔｅ Ａｌｐｈａ−Ｈｅｌｉｘ，"Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３２（３）：９４１−４３（２０１０））。ｐ３００のＣＨ１ドメインは、個々のα−ヘリックスに対する複数の結合部位を備え（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｄａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，"Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂａｓｉｓ ｆｏｒ Ｈｉｆ−１ Ａｌｐｈａ／ＣＢＰ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｈｙｐｏｘｉｃ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ，"Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ'ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９（８）：５２７１−７６（２００２）；Ｆｒｅｅｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，"Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂａｓｉｓ ｆｏｒ Ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ ｏｆ ＣＢＰ／ｐ３００ ｂｙ Ｈｙｐｏｘｉａ−Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ Ｆａｃｔｏｒ−１ Ａｌｐｈａ，"Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ'ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９（８）：５３６７−７２（２００２））、これは、異なるＣＨ１結合相手が可能となり得ることを示唆している。我々は、ＨＰＶ陰性及びＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおけるＣＨ１内の結合部位Ａ及び部位Ｂを標的指向する合成ヘリックスの能力を試験した（図５Ｂ）。ＣＨ１ｉＡ及びＣＨ１ｉＢは、ＵＭＳＣＣ７４Ａ、ＨＰＶ陰性、ｐ５３野生型ＨＮＳＣＣ細胞株におけるｐ５３活性及びレベルを調整しなかった（図５Ｃ及び５Ｄ）。ｐ３００、ｐ５３、及びｐ５３調節遺伝子の発現は、ＵＭＳＣＣ７４Ａ細胞において、ＣＨ１ｉＡまたはＣＨ１ｉＢ処理後に変化しなかった（図５Ｅ）。ＨＰＶ陽性ＵＭＳＣＣ４７細胞において、ＣＨ１ｉＡは効果を有さず、一方ＣＨ１ｉＢはｐ５３活性（７１％の増加、Ｐ＜０．０１）、ｐ５３の蓄積及びアセチル化ｐ５３レベルを向上させた。ｐ２１、ｍｉＲ−３４ａ、及びｍｉＲ−２００ｃ発現の控えめであるが有意な増加が、ＣＨ１ｉＢ処理後に示された（図５Ｅ）。さらに、Ｅ６とｐ３００との間の結合は、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣ細胞においてＣＨ１ｉＢにより低減されたが、ＣＨ１ｉＡ処理によっては低減されなかった（図５Ｆ）。これらの結果は、Ｅ６とＣＨ１との間の重要な結合接触が、ＣＨ１ドメインの結合部位Ｂ内に、またはそれに近接して位置することを明らかにしている。図５Ｇにおいて、ＣＨ１ｉＡは不活性であったが、ＣＨ１ｉＢは、単一薬剤としてＨＰＶ陽性ＵＭＳＣＣ４７細胞の増殖を阻害し、シスプラチンの抗増殖有効性を増強した。ＣＨ１ｉＡ及びＣＨ１ｉＢは、ＨＰＶ陰性ＵＭＳＣＣ７４Ａ細胞及びヒト正常ＩＭＲ９０線維芽細胞の増殖に対して効果を有さず、シスプラチンの有効性を強化しなかった。総合すると、我々の研究は、ＣＨ１における結合部位ＢのＣＨ１ｉＢによる標的指向が、Ｅ６とｐ３００との間の結合を妨害することにより、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣ細胞においてｐ５３を優先的に再活性化することを示している。
実施例１８-ＣＨ１ｉＢは、ＨＰＶ１６陽性ＨＮＳＣＣにおけるシスプラチンの有効性を増強する
我々の結果は、ＣＨ１の導入が、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおいて、細胞増殖、コロニー形成生存、及びアポトーシスに対するシスプラチンの効果を増強することを示した。さらに、ＣＨ１ｉＢは、ＵＭＳＣＣ４７細胞におけるシスプラチンの抗増殖作用を向上させた。図６Ａ〜Ｆに示されるように、ＣＨ１ｉＢは、ｐ５３の蓄積、アセチル化、及び活性に対するシスプラチンの効果を増強した。ｐ２１、ｍｉＲ−３４ａ、及びｍｉＲ−２００ｃの発現は、いずれかの単剤治療よりも、併用治療において劇的により高かった（Ｐ＜０．０１）（図６Ｃ）。ビヒクルで処理されたＵＭＳＣＣ４７細胞と比較して、ＣＨ１ｉＢは、コロニー形成生存を３５％、腫瘍塊形成を２０％低減し、アポトーシスを３５３％向上させた（Ｐ＜０．０１）。さらに、併用レジメンは、極めて活性であり、ＨＰＶ１６陽性ＨＮＳＣＣ細胞のコロニー形成生存をほぼ完全に無くした（９１％阻害、Ｐ＜０．０１）。併用治療により誘導されたアポトーシスは、ＣＨ１ｉＢ及びシスプラチンと比較して、それぞれ９８４％（Ｐ＜０．０１）及び４４３％（Ｐ＜０．０１）増加した（図６Ｄ）。さらに、腫瘍塊形成は、併用レジメンによって、単剤ＣＨ１ｉＢまたはシスプラチンよりも高い程度まで抑制された（図６Ｆ）。エネルギー的に重要なロイシン残基がアラニンに変異した、ＣＨ１ｉＢの設計された特異性対照であるＣＨ１ｉＢ−ｍｕｔは、ｐ５３活性において最小限ではあるが有意な増加を示した（１４％の増加、Ｐ＜０．０５）が、重要なことには、単剤として、またはシスプラチンと組み合わせて、ＵＭＳＣＣ４７細胞における細胞増殖を阻害する効果を有さなかった（図７Ａ〜Ｂ）。これらの結果は、ＣＨ１阻害剤ＣＨ１ｉＢが、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおけるシスプラチンの抗腫瘍活性を増強することを示している。
実施例１〜１８の考察
高リスクＨＰＶは、肛門性器及び頭頸部扁平上皮がんの発症の病因として認識されている。ＨＰＶ Ｅ６は、２つの異なる独立した経路によりｐ５３を不活性化する。Ｅ６は、Ｅ６ＡＰと結合して活性Ｅ３−ユビキチンリガーゼを形成し、プロテアソーム依存性タンパク質分解に関してｐ５３を標的指向することが十分認識されている（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｔａｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｅ６ＡＰ ｉｎ ｔｈｅ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ（ＨＰＶ）−Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ＨＰＶ−Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｃｅｌｌｓ，"Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３（１１）：６４３９−４５（１９９８））。それよりははるかに認められていないが、第２の機構は、Ｅ６がｐ３００−ｐ５３複合体と結合し、ｐ３００が媒介するｐ５３のアセチル化及び活性化を遮断するというものである（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｔｈｏｍａｓ ＆ Ｃｈｉａｎｇ，"Ｅ６ Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｐｒｅｓｓｅｓ ｐ５３−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｇｅｎｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｖｉａ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ ｏｆ Ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｐ５３ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，"Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ １７（２）：２５１−６４（２００５））。ｐ３００は、Ｋ３７０、３７２、３８１、及び３８２を含む複数のリジン残基でｐ５３をアセチル化する（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｇｕ ＆ Ｒｏｅｄｅｒ，"Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＤＮＡ Ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｙ Ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐ５３ Ｃ−Ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｄｏｍａｉｎ，"Ｃｅｌｌ ９０（４）：５９５−６０６（１９９７））。アセチル化は、タンパク質安定性の増加、四量体化、ＤＮＡ結合、及び共活性化因子動員を含む複数の機構によりｐ５３機能を制御することが示されている（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｔｈｏｍａｓ ＆ Ｃｈｉａｎｇ，"Ｅ６ Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｐｒｅｓｓｅｓ ｐ５３−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｇｅｎｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｖｉａ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ ｏｆ Ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｐ５３ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，"Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ １７（２）：２５１−６４（２００５）；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，"Ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｉｔｓ Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ ｂｙ Ｍｄｍ２，"Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（５２）：５０６０７−１１（２００２）；Ｇｕ ＆ Ｒｏｅｄｅｒ，"Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＤＮＡ Ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｙ Ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐ５３ Ｃ−Ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｄｏｍａｉｎ，"Ｃｅｌｌ ９０（４）：５９５−６０６（１９９７））。
いくつかのグループは、ＨＰＶ陽性子宮頸がんにおいて、ｐ５３の再活性化が、Ｅ６またはＥ６ＡＰレベルを低減する異なる戦略を使用して達成され得ることを報告している（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｂｅｅｒｈｅｉｄｅ ｅｔ ａｌ．，"Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｄｒｕｇｓ Ａｇａｉｎｓｔ Ｃｅｒｖｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ：Ｚｉｎｃ−Ｅｊｅｃｔｉｎｇ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ １６ Ｅ６ Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，"Ｊ．Ｎａｔ'ｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．９１（１４）：１２１１−２０（１９９９）；Ｂｅｅｒｈｅｉｄｅ ｅｔ ａｌ．，"Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ−１６ Ｅ６ Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｂｙ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅｓ，"Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．８（１１）：２５４９−６０（２０００）；Ｃｏｕｒｔｅｔｅ ｅｔ ａｌ．，"Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｒｖｉｃａｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ ｂｙ Ｉｎｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ Ｃｏｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ａｎｔｉ−Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｅ６ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｎｄ Ｓｍａｌｌ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ，"Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．６（６）：１７２８−３５（２００７）；Ｂｅｅｒ−Ｒｏｍｅｒｏ ｅｔ ａｌ．，"Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｅ６ＡＰ Ｅｌｅｖａｔｅｓ ｐ５３ ｉｎ ＨＰＶ−Ｉｎｆｅｃｔｅｄ Ｃｅｌｌｓ ｂｕｔ Ｎｏｔ ｉｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｅｌｌｓ，"Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １４（５）：５９５−６０２（１９９７）；Ｋｏｉｖｕｓａｌｏ ｅｔ ａｌ．，"Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ ｉｎ Ｃｅｒｖｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ ｂｙ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ Ｅ６ ＲＮＡ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ Ｉｓ Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ，ｂｕｔ Ｃａｎ Ｂｅ Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｂｙ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｅｘｐｏｒｔ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐ５３ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ，"Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６（２４）：１１８１７−２４（２００６）；Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，"Ｒｅｓｃｕｅ ｏｆ ｐ５３ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｓｍａｌｌ−Ｍｏｌｅｃｕｌｅ ＲＩＴＡ ｉｎ Ｃｅｒｖｉｃａｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｂｙ Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｅ６−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，"Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７０（８）：３３７２−８１（２０１０））。Ｅ６ＡＰアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理は、ｐ５３を蓄積したが、アポトーシスを促進しなかった（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｂｅｅｒ−Ｒｏｍｅｒｏ ｅｔ ａｌ．，"Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｅ６ＡＰ Ｅｌｅｖａｔｅｓ ｐ５３ ｉｎ ＨＰＶ−Ｉｎｆｅｃｔｅｄ Ｃｅｌｌｓ ｂｕｔ Ｎｏｔ ｉｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｅｌｌｓ，"Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １４（５）：５９５−６０２（１９９７））。これらの著者は、ｐ５３が媒介するアポトーシスには閾値レベルのｐ５３レベルが必要となり得ることを示唆している。代替の説明は、ｐ３００が媒介するｐ５３のアセチル化及び活性化を抑制するのにＥ６がまだ利用可能であるため、Ｅ６ＡＰの除去がｐ５３を再活性化するには不十分である可能性があるというものである。ＨＰＶ１６ Ｅ６抗体及びＥ６ ｓｉＲＮＡの同時送達は、ｐ５３レベルを向上させ、コロニー形成生存を減少させたが、アポトーシス反応は検出されなかった（参照によりその全体が組み込まれる、Ｃｏｕｒｔｅｔｅ ｅｔ ａｌ．，"Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｒｖｉｃａｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ ｂｙ Ｉｎｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ Ｃｏｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ａｎｔｉ−Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｅ６ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｎｄ Ｓｍａｌｌ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ，"Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．６（６）：１７２８−３５（２００７））。興味深い研究では、ｓｉＲＮＡが媒介するＥ６の除去が、持続的なＥ６ノックダウンにかかわらず、ｐ５３タンパク質及び活性の一時的な増加をもたらすことが示され、代償性のｐ５３分解及び／または不活性化機構が、これらの実験条件下でＨＰＶ陽性子宮頸がん細胞において急速に誘導されることを示唆している（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｋｏｉｖｕｓａｌｏ ｅｔ ａｌ．，"Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ ｉｎ Ｃｅｒｖｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ ｂｙ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ Ｅ６ ＲＮＡ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ Ｉｓ Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ，ｂｕｔ Ｃａｎ Ｂｅ Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｂｙ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｅｘｐｏｒｔ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐ５３ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ，"Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６（２４）：１１８１７−２４（２００６））。
Ｅ６−ｐ３００の結合の妨害は、ＨＰＶ陽性がんにおいてｐ５３を再活性化するために利用されていないアプローチである。アセチル化は、安定性及び転写活性化を含む複数の機構によりｐ５３機能を制御するため、ｐ３００が媒介するｐ５３のアセチル化の修復は、理想的な戦略となり得る。安定なＣＨ１過剰発現ＨＮＳＣＣ細胞に関する我々の結果は、Ｅ６−ｐ３００相互作用の標的化が、上昇したｐ５３の蓄積、アセチル化、及び活性化を際限なく維持するのに十分であることを示している。外因性ＣＨ１は、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおいて、細胞増殖及びコロニー形成生存を阻害し、アポトーシスを向上させる。重要なことに、ＵＭＳＣＣ４７／ＣＨ１細胞のインビボ腫瘍原性は、一部ＣＩＣ集団の低減により高度に減弱される。したがって、我々のデータは、ｐ３００が媒介するｐ５３アセチル化の修復が、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおいて、持続的ｐ５３再活性化及び抗腫瘍反応を誘導することを示した。
ｐ３００は、ＭＤＭ２及びｐ５３の足場として機能して、ＭＤＭ２が媒介するｐ５３の分解を促進することが報告されている（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｇｒｏｓｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，"ｐ３００／ＭＤＭ２ Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ Ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅ ｉｎ ＭＤＭ２−Ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐ５３ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，"Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ ２（４）：４０５−１５（１９９８））。ｐ３００のＣＨ１ドメインの過剰発現は、おそらくはｐ３００とＭＤＭ２との間の物理的相互作用を遮断することにより、ヒト骨肉種Ｕ２ＯＳ細胞におけるｐ５３蓄積を向上させた（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｇｒｏｓｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，"ｐ３００／ＭＤＭ２ Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ Ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅ ｉｎ ＭＤＭ２−Ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐ５３ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，"Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ ２（４）：４０５−１５（１９９８））。また、ｐ３００−ｐ５３複合体へのＭＤＭ２の結合は、ｐ３００が媒介するｐ５３のアセチル化及び活性化を遮断した（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｋｏｂｅｔ ｅｔ ａｌ．，"ＭＤＭ２ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｐ３００−Ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐ５３ Ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ Ｆｏｒｍｉｎｇ ａ Ｔｅｒｎａｒｙ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｔｗｏ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，"Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ'ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９７（２３）：１２５４７−５２（２０００））。これらの結果は、ＭＤＭ２−ｐ３００−ｐ５３複合体が、ｐ５３の代謝回転、アセチル化、及び活性化に密接に関与することを示している。直接的な裏付けとして、我々の結果は、外因性ＣＨ１がＭＤＭ２−ｐ３００の結合を妨害し、ｐ５３野生型ＨＰＶ陰性ＵＭＳＣＣ７４Ａ ＨＮＳＣＣ細胞において、ｐ５３レベル及び活性を増加させることを示した。さらに、ＣＨ１過剰発現は、ＵＭＳＣＣ７４Ａ細胞をシスプラチンの抗腫瘍有効性に対して増感させた。これらの結果は、ｐ３００のＣＨ１ドメインの標的化が、異なる機構を介してではあるが、ＨＰＶ状態に関わらず、野生型ｐ５３によりＨＮＳＣＣ細胞におけるｐ５３活性を向上させる扱いやすいアプローチとなり得ることを示している。ＣＨ１ｉＡではないが、ＣＨ１ｉＢは、Ｅ６−ｐ３００の結合を遮断し、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおいてｐ５３を再活性化したが、これは、ＣＨ１ドメイン内の結合部位Ｂが、Ｅ６及びｐ３００相互作用のための重要な接触を含有することを示している。興味深いことに、ＣＨ１ｉＡ及びＣＨ１ｉＢによるＣＨ１ドメインの選択的標的指向は、ＵＭＳＣＣ７４Ａ細胞においてｐ５３蓄積及び活性を向上させなかった。ＨＰＶ陰性ＨＮＳＣＣを超えるＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣに対するＣＨ１ｉＢの優先的活性は、Ｅ６に対するＣＨ１結合界面が、ＭＤＭ２に対するＣＨ１結合界面とは異なり得ることを示唆している。別の可能性は、ＭＤＭ２が、Ｅ６よりも強固なｐ３００への結合的関連を有し得ること、ひいては、ＣＨ１ｉＢ及びＣＨ１ｉＡがｐ３００結合に関してＭＤＭ２に対しうまく競合することができなかったことである。いずれにしても、我々の研究は、ＣＨ１ｉＢがＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣ細胞において優先的にｐ５３活性を再活性化することを明らかにし、ｐ３００のＣＨ１ドメインの個別の化学的標的化が実現され得ることの最初の証拠を提供する。
正常な幹細胞の調節におけるｐ５３の役割は、確立されており、ＣＩＣに対して使用され始めている。ｐ５３の阻害は、分化細胞の人工多能性幹細胞への転換効率を劇的に向上させた（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，"Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｅ ｐ５３−ｐ２１ Ｐａｔｈｗａｙ，"Ｎａｔｕｒｅ ４６０（７２５９）：１１３２−３５（２００９）；Ｋａｗａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，"Ｌｉｎｋｉｎｇ ｔｈｅ ｐ５３ Ｔｕｍｏｕｒ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ Ｐａｔｈｗａｙ ｔｏ Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ，"Ｎａｔｕｒｅ ４６０（７２５９）：１１４０−４４（２００９）；Ｕｔｉｋａｌ ｅｔ ａｌ．，"Ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｅｌｉｍｉｎａｔｅｓ ａ Ｒｏａｄｂｌｏｃｋ Ｄｕｒｉｎｇ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ Ｉｎｔｏ ｉＰＳ Ｃｅｌｌｓ，"Ｎａｔｕｒｅ ４６０（７２５９）：１１４５−４８（２００９））。ｐ５３の損失は、乳房幹細胞の自己再生対称細胞分化に有利であり、幹細胞集団の増加をもたらした（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｃｉｃａｌｅｓｅ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ Ｔｕｍｏｒ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｐ５３ Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ Ｐｏｌａｒｉｔｙ ｏｆ Ｓｅｌｆ−Ｒｅｎｅｗｉｎｇ Ｄｉｖｉｓｉｏｎｓ ｉｎ Ｍａｍｍａｒｙ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ，"Ｃｅｌｌ １３８（６）：１０８３−９５（２００９））。２つのｐ５３標的、つまりｍｉＲ−３４ａ及びｐ２１は、人工多能性幹細胞のｐ５３抑制に寄与することが示された（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，"Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｅ ｐ５３−ｐ２１ Ｐａｔｈｗａｙ，"Ｎａｔｕｒｅ ４６０（７２５９）：１１３２−３５（２００９）；Ｋａｗａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，"Ｌｉｎｋｉｎｇ ｔｈｅ ｐ５３ Ｔｕｍｏｕｒ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ Ｐａｔｈｗａｙ ｔｏ Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ，"Ｎａｔｕｒｅ ４６０（７２５９）：１１４０−４４（２００９）；Ｃｈｏｉ ｅｔ ａｌ．，"ｍｉＲ−３４ ｍｉＲＮＡｓ Ｐｒｏｖｉｄｅ ａ Ｂａｒｒｉｅｒ ｆｏｒ Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ，"Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１３（１１）：１３５３−６０（２０１１））。さらに、ｍｉＲ−３４ａは、前立腺ＣＩＣの増加を遮断した（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ ＭｉｃｒｏＲＮＡ ｍｉＲ−３４ａ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｂｙ Ｄｉｒｅｃｔｌｙ Ｒｅｐｒｅｓｓｉｎｇ ＣＤ４４，"Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１７（２）：２１１−１５（２０１１））。乳房上皮細胞におけるｐ５３の損失は、低減されたｍｉＲ−２００ｃ発現をもたらし、ＥＭＴ関連ＣＩＣ集団の増加をもたらした（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，"ｐ５３ Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ−Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｔｈｒｏｕｇｈ Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｍｉＲＮＡｓ，"Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１３（３）：３１７−２３（２０１１））。我々の結果は、これらの研究と一致しており、ｐ５３とＣＩＣとの間の関連性を裏付けている。我々は、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおけるｐ５３の再活性化が、ｐ２１、ｍｉＲ−３４ａ、及びｍｉＲ−２００ｃの発現を増加させ、ＣＩＣ集団を減少させることを示す。これらの観察は、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおいて、再プログラムまたは自己再生による正常幹細胞増加を制限するためのｐ５３−ｐ２１／ｍｉＲ−３４ａ／ｍｉＲ−２００ｃ回路が誘導されて、ｐ５３再活性化によりＣＩＣ増加を遮断することを示唆している。この時点では、ＣＩＣ集団の低減が、非対称なＣＩＣの分裂及び／またはＣＩＣの分化に有利な変化に起因するかは不明である。この疑問に対処するためには、またＣＩＣ集団の制御におけるｐ２１、ｍｉＲ−３４ａ、及びｍｉＲ−２００ｃの寄与を分析するためには、さらなる研究が必要であろう。
高用量シスプラチンベース療法は、ＨＰＶ陽性がんの決定的治療のための標準治療であるが、高い毒性に関連し、患者が耐えるのは困難である（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｐａｎ ｅｔ ａｌ．，"Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｓｑｕａｍｏｕｓ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，"Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．１０（１４）：２２９１−３０２（２００９））。高用量シスプラチンベース療法に由来する治療関連毒性は、大きな問題であり、代替の治療または治療の弱化がＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣ集団に提供されるべきであるかの大きな議論が余儀なくされた。この時点ではＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣに対する臨床的選択肢が限られていることを考慮すると、代替の治療戦略が極めて必要とされている。我々は、ＣＨ１阻害剤ＣＨ１ｉＢが、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおいてｐ５３を再活性化することを示す。単剤ＣＨ１ｉＢは、ＵＭＳＣＣ４７及びＵＰＣＩ：ＳＣＣ０９０細胞において、細胞増殖及びコロニー形成生存を抑制し、アポトーシスを向上させる、広範な抗がん活性を示す。興味深いことに、ＣＨ１ｉＢは、シスプラチンが媒介するｐ５３活性及び抗腫瘍効果を増強する。ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣ細胞は、ＣＨ１ｉＢ及びシスプラチンの組み合わせによる処理後に、ほぼ完全に排除される。これらの結果に基づいて、我々は、シスプラチンのより少ないサイクルまたは低減した用量が、ＣＨ１阻害剤の存在下において、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣ患者をより良好な毒性プロファイルで効果的に管理するのに十分となり得ると考える。我々のデータは、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣのｐ５３再活性化治療薬としてのＣＨ１阻害剤のさらなる開発を強く裏付けている。
Ｅ６ウイルスタンパク質は、ＨＰＶ血清型にわたり保存される（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｃｈｅｆｆｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ Ｅ６ Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｃｏｄｅｄ ｂｙ Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅｓ １６ ａｎｄ １８ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｔｈｅ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｐ５３，"Ｃｅｌｌ ６３（６）：１１２９−３６（１９９０））。したがって、我々の結果は、Ｅ６−ｐ３００の結合の標的化が、ＨＰＶ陽性がん細胞、例えばＨＮＳＣＣにおいてｐ５３を再活性化するための新規なアプローチであることを明らかにしている。小分子ＣＨ１阻害剤ＣＨ１ｉＢは、ｐ５３を再活性化し、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣ細胞におけるシスプラチンの抗腫瘍活性を増強する。我々の研究は、本明細書に記載のもの等のＣＨ１ドメイン阻害剤が、ＨＰＶ陽性がんに対するｐ５３再活性化治療薬の新規なクラスであることを示している。
実施例１９-オリゴオキソピペラジンの合成
オリゴオキソピペラジンは、以下のスキーム１に示されるように、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ａｒｏｒａらに対する米国特許出願公開第１２／９１７，１７６号に記載の通り、固相合成を介して合成された。
Figure 2016510327
固相反応槽内のＫｎｏｒｒ樹脂上での標準的Ｆｍｏｃ固相ペプチド合成により、ジペプチド１を合成した。ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中２０％ピペリジンによる処理によりＦｍｏｃ基を除去し、樹脂を、ＤＭＦ、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、メタノール（ＭｅＯＨ）、及びジエチルエーテルで順番に洗浄し、真空下で乾燥させた。ｏ−ニトロベンゼンスルホニルクロリド（Ｎｓ−Ｃｌ、１０当量）及びコリジン（１０当量）を、無水ＤＣＭ中に溶解し、反応槽に添加した。混合物を２３℃で２時間振盪すると、２が得られた。次いで、２を含有する樹脂を、ＤＭＦ、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、及びジエチルエーテルで順番に洗浄し、真空下で１２時間乾燥させた。
２を含有する樹脂を、ガラス製マイクロ波管（ＣＥＭ）に移した。トリフェニルホスフィン（ＰＰｈ３、５当量）を添加し、管を窒素で３０分間洗浄した。テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ、１０当量）、及び２−ブロモエタノール（１０当量）を添加し、反応混合物を１００℃で１０分間マイクロ波照射（２００ワット、２５０ｐｓｉ）に供した。樹脂を、ＴＨＦ、ＤＭＦ、及びＤＣＭで順番に洗浄した。次に、樹脂を固相槽に移し、ＴＨＦ中で２時間、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）で処理し、次いで、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ＤＣＭ、及びジエチルエーテルで洗浄し、３０分間乾燥させ、ＤＭＦ中のＤＢＵ及び２−メルカプトエタノールで２時間処理した。ここで３を含有する樹脂を、ＤＭＦ、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、及びジエチルエーテルで洗浄し、乾燥させた。
所望の事前活性化Ｆｍｏｃ−アミノ酸（Ｆｍｏｃ−ＡＡ−ＯＨ）を、３を含有する樹脂に添加し、混合物を２３℃で１２時間振盪した。９５％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、２．５％の水、及び２．５％のトリイソプロピルシラン（ＴＩＰＳ）による樹脂からの切断後に、オキソピペラジン二量体ＢＢ２−１２５及びＢＢ２−１６２を得るために、ノシル保護及び環形成ステップを反復した。ＢＢ２−１６４の形成のために、樹脂が結合したオキソピペラジン二量体６を、ＤＭＦ中の事前活性化Ｆｍｏｃ−アミノ酸で処理し、樹脂から切断した。ＢＢ２−１２５、ＢＢ２−１６２、及びＢＢ２−１６４の分析ＨＰＬＣトレースを、それぞれ図８、図９、及び図１０に示す。
実施例２０-ＭＴＴ細胞生存性
ヒト乳がん（ＭＣＦ７）またはヒト肺がん（Ａ５４９）細胞を、ウェル当たり２００μＬの新鮮培地中５，０００〜１０，０００細胞の密度で９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）に播種した；１０％ＦＢＳ（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含むＲＰＭＩ培地（Ｇｉｂｃｏ）中にＭＣＦ７細胞、２％ＦＢＳ（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含むＦ−１２Ｋ培地（ＡＴＣＣ）中にＡ５４９細胞（ＡＴＣＣ）。次いで、プレートを、所望の密集度（約７０％）に達するまで（約２４〜７２時間）、インキュベータ（３７℃、５〜１０％ＣＯ２）内に設置した。その後、全てのウェルの培地を、適切な培地中のＢＢ２−１２５またはＢＢ２−１６２の溶液（それぞれ、４８時間試験においては１５０μＬ、７２時間試験においては２００μＬ）と置換した。次いで、プレートを、インキュベータ内で３７℃、５〜１０％ ＣＯ２で４８時間または７２時間維持した。化合物との４８（または７２）時間のインキュベーション後、ＭＴＴ（ＰＢＳ中５ｍｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を全てのウェルに添加し（１０％ｖ／ｖ）、慎重及び十分に混合した。プレートを３７℃及び５〜１０％ ＣＯ２でさらに３〜４時間インキュベートし、次いで培地を慎重及び完全に除去した。得られた紫色の沈殿物をＤＭＳＯ（２００μＬ／ウェル）中に溶解し、マイクロプレートリーダー（Ｓｙｎｅｒｇｙ ＩＩ、ＢｉｏＴｅｋ，Ｉｎｃ）を使用して各ウェルの吸光度を５６２ｎｍで測定した。
実施例２１-ＢＢ２−１６２は、ＨＰＶ１６陽性ＨＮＳＣＣにおいてｐ５３を優先的に再活性化する
我々は、ＣＨ１における結合部位Ｂを標的指向するオリゴオキソピペラジンであるＢＢ２−１６２の、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおけるｐ５３転写活性を調節する能力を試験した（図１１）。ＢＢ２−１６２は、ＵＭＳＣＣ７４において、ＣＨ１ｉＢによるものよりさらに高い程度までｐ５３活性を向上させた。
実施例１９〜２１の考察
オリゴオキソピペラジンは、キラル骨格を備える非ペプチドヘリックス模倣物である（図１２）。これらの化合物は、α−アミノ酸から容易に合成され、足場の急速な多様化を可能にする。α−アミノ酸で構成されるオキソピペラジン二量体及び三量体の配座解析は、これらの化合物が、７〜１０量体α−ヘリックスの長さにわたっていることを示唆している。オキソピペラジン足場の配座をより良く理解するために、関連化合物の結晶構造、量子力学的計算、及び分子力学的シミュレーションが使用されている。結果は、オリゴオキソピペラジンが安定で構造的に適切なヘリックス模倣物を提供するという仮説を裏付けている。
図１３に示されるように、オキソピペラジンオリゴマーの効率的なマイクロ波補助固相合成が開発されている（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ａｒｏｒａらに対する米国特許出願公開第１２／９１７，１７６号）。合成における重要なステップは閉環を含み、ノシル保護アミノ酸残基を用いた光延条件が、最も高い収率を提供することが判明した。
図１４に示されるように、二周するヘリックスの１つの面上の官能基を模倣するオリゴオキソピペラジンの設計のための、予測される最低エネルギー配座に基づく４つの可能性のある選択肢が企図された。これらの配座は、図１４において、「二量体Ａ〜Ｃ」及び「三量体」と呼ばれる。二量体構成は、基準ヘリックスへのオキソピペラジン残基の重なりにおいて互いに異なり；二量体Ｃは、余分なＮ末端残基を含有する。二量体Ａ及びＢにおいては、オキソピペラジン位置Ｒ１及びＲ２が、ｉ及びｉ＋４残基上に重なり、一方二量体Ｃにおいては、位置Ｒ１及びＲ３が、これらの位置に重なる。二量体Ａ及びＢは、オキソピペラジン足場の軸の相対位置において異なり；それらの重なりは、Ｒ４がｉ＋６またはｉ＋７残基と整列し得ることを示唆している。二量体Ｃ設計は、異なる整列を使用し、Ｎ末端アミノ酸残基が第１の接触を提供する。
本明細書に記載のように、ならびに図１５及び図１６に示されるように、二量体Ｂ（図１０）及び二量体Ｃ（図１１）のヘリックスの重なりに対するＨＩＦ−１α模倣物が設計されている。図１７に示されるように、コンピュータ分析に基づいて４つの類似体が設計された。ＢＢ２−１６４オリゴオキソピペラジンは、二量体Ｃ設計に基づいている。ＢＢ２−１６２は、二量体Ｂ設計に基づいている。ＢＢ２−１２５は、ＢＢ２−１６２の陰性対照であり、グルタミン残基がアラニン基で置き換えられている。ＢＢ２−２８２もまた陰性対照であり、重要な残基を示さない。図１８に示されるように、模倣物を設計する上で、ＨＩＦ−１αのヘリックスαＢの天然アミノ酸配列（ＰＤＢコード１Ｌ８Ｃ、残基１３９−１４７）が利用された。図１８は、オリゴオキソピペラジンＢＢ２−１６２及びヘリックスαＢの重なりを示す。
細胞生存性ＭＴＴアッセイを行って、オリゴオキソピペラジンの毒性を評価した。図１９に示されるように、オリゴオキソピペラジンは、２０μＭの濃度までＨｅＬａ細胞に対して毒性効果を示さず、ＧＩ５０値は３０μＭである。
ＢＢ２−１６２を、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣ細胞においてｐ５３を再活性化するその能力に関して評価した。ＢＢ２−１６２は、ＣＨ１ｉＢよりもさらにより効果的であることが判明した。これは、ヘリックスαＢを模倣するオリゴオキソピペラジンもまた、ｐ５３活性の修復に好適なＣＨ１ドメイン阻害剤であることを示している。したがって、本明細書に記載のもの等のＨＩＦ１αのヘリックスαＢを模倣するオリゴオキソピペラジンもまた、ＨＰＶ陽性がんのｐ５３再活性化治療薬として使用され得ることが期待される。
本明細書において、好ましい実施形態を詳細に描写及び説明したが、本発明の主旨から逸脱せずに様々な修正、追加、置換等を行うことができ、したがって、これらが以下の特許請求の範囲において定義されるような本発明の範囲内であるとみなされることが、当業者に明らかである。
本研究において、我々は新規なアプローチをとり、Ｅ６とｐ３００との間の相互作用を遮断することにより、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおいてｐ５３を機能的に再活性化した。ｐ３００のＣＨ１ドメインの異所性発現は、Ｅ６を抑えてＥ６−ｐ３００の結合を妨害し、ｐ５３のアセチル化、蓄積、及び活性の増加をもたらした。外因性のＣＨ１は、がん起始細胞（ＣＩＣ）集団の低減に一部起因して、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおける多面的な抗がん効果を促進した。ＣＨ１ドメイン阻害剤は、ｐ５３を再活性化し、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおけるシスプラチンの有効性を劇的に増強した。総合すると、我々の研究は、他のＨＰＶ陽性がんに移行することが予測されるＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおいてｐ５３を再活性化するための、新薬開発につながるようなアプローチを明らかにした。
[本発明1001]
対象において、Ｅ6とＣＲＥＢ結合タンパク質及び／またはｐ300との相互作用により媒介される障害を治療または予防する方法であって、
前記障害を治療または予防するのに効果的な条件下で、低酸素誘導因子1αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンを前記対象に投与する段階を含む、前記方法。
[本発明1002]
前記オリゴオキソピペラジンが、式Ｉ：
Figure 2016510327
のオリゴオキソピペラジンであり、
式中、
Ｒ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 3 、及びＲ 4 のそれぞれが、独立して、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
各Ｒ 6 が、独立して、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ａが、Ｘ 1 またはＣであり、
Ｘ 1 が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｃが、式
Figure 2016510327
部分であり、
式中、
各Ｘ'が、独立して、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、Ｎ（Ｒ''） 2 、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
各Ｒ''が、独立して、Ｈ、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ 0 が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｒ 6 が、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｂが、ＹまたはＤであり、
Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''） 2 、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｄが、式
Figure 2016510327
部分であり、
式中、
Ｒ 5 が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｒ 6 が、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｅが、Ｘ 2 またはＦであり、
Ｘ 2 が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｆが、式
Figure 2016510327
部分であり、
式中、
Ｒ 6 が、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｒ 7 が、アミノ酸側鎖であり；
Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''） 2 、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグである、本発明1001の方法。
[本発明1003]
（ｉ）Ｒ 1 及びＲ 2 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であるか、または、Ａが、式
Figure 2016510327
部分であり、Ｒ 0 及びＲ 3 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であり；
（ｉｉ）各Ｒ''が、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
（ｉｉｉ）Ｂが、Ｄではない、本発明1002の方法。
[本発明1004]
Ｒ 1 及びＲ 2 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基または水素結合供与基である、本発明1003の方法。
[本発明1005]
前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ2−125またはＢＢ2−162である、本発明1004の方法。
[本発明1006]
Ａが、式
Figure 2016510327
部分であり、Ｒ 0 及びＲ 3 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基または水素結合供与基である、本発明1003の方法。
[本発明1007]
前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ2−164である、本発明1006の方法。
[本発明1008]
前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＡ：
Figure 2016510327
の式を有する、本発明1002の方法。
[本発明1009]
式ＩＡの前記オリゴオキソピペラジンのＲ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 4 、及びＲ 5 が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋4、ｉ＋6、及びｉ＋7のアミノ酸側鎖を模倣する、本発明1008の方法。
[本発明1010]
前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＢ：
Figure 2016510327
の式を有する、本発明1002の方法。
[本発明1011]
式ＩＢの前記オリゴオキソピペラジンのＲ 1 、Ｒ 2 、及びＲ 4 が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋4、及びｉ＋7のアミノ酸側鎖を模倣する、本発明1010の方法。
[本発明1012]
前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＣ：
Figure 2016510327
の式を有する、本発明1002の方法。
[本発明1013]
式ＩＣの前記オリゴオキソピペラジンのＲ 0 、Ｒ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 3 、及びＲ 4 が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋2、ｉ＋3、ｉ＋4、及びｉ＋7のアミノ酸側鎖を模倣する、本発明1012の方法。
[本発明1014]
前記障害が、ＨＰＶ関連がんである、本発明1001の方法。
[本発明1015]
前記ＨＰＶが、ＨＰＶ−16、ＨＰＶ−18、ＨＰＶ−31、ＨＰＶ−33、ＨＰＶ−35、ＨＰＶ−39、ＨＰＶ−45、ＨＰＶ−51、ＨＰＶ−52、ＨＰＶ−56、ＨＰＶ−58、ＨＰＶ−59、ＨＰＶ−68、ＨＰＶ−69、ＨＰＶ−73、及びＨＰＶ−82からなる群から選択される、本発明1001の方法。
[本発明1016]
前記ＨＰＶ関連がんが、肛門性器がん、子宮頸がん、外陰がん、膣がん、陰茎がん、肛門がん、口腔咽頭がん、及び頭頸部扁平上皮がんの群から選択される、本発明1001の方法。
[本発明1017]
1種以上の抗がん剤を前記対象に投与する段階をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1018]
前記1種以上の抗がん剤が、13−ｃｉｓ−レチノイン酸、2−ＣｄＡ、2−クロロデオキシアデノシン、5−アザシチジン、5−フルオロウラシル、5−ＦＵ、6−メルカプトプリン、6−ＭＰ、6−ＴＧ、6−チオグアニン、アブラキサン、アキュテイン、アクチノマイシン−Ｄ、アドセトリス、アドリアマイシン、アドルシル、アフィニトール、アグリリン、Ａｌａ−Ｃｏｒｔ、アルデスロイキン、アレムツズマブ、ＡＬＩＭＴＡ、アリトレチノイン、アルカバン−ＡＱ、アルケラン、オールトランスレチノイン酸、アルファインターフェロン、アルトレタミン、アメトプテリン、アミホスチン、アミノグルテチミド、アナグレリド、Ａｎａｎｄｒｏｎ（登録商標）、アナストロゾール、アラビノシルシトシン、Ａｒａ−Ｃ、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）、Ａｒｅｄｉａ（登録商標）、Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）、Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標）、Ａｒｒａｎｏｎ（登録商標）、三酸化ヒ素、Ａｒｚｅｒｒａ（商標）、アスパラギナーゼ、ＡＴＲＡ、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）、アキシチニブ、アザシチジン、ＢＣＧ、ベンダムスチン、ベバシズマブ、ベキサロテン、ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ、Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標）、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ボシュリフ、ボスチニブ、ブレンツキシマブベドチン、ブスルファン、Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標）、Ｃ225、カバジタキセル、カボザンチニブ、カルシウムロイコボリン、Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）、Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標）、カンプトテシン−11、カペシタビン、カプレルサ、Ｃａｒａｃ（商標）、カルボプラチン、カルフィルゾミブ、カルムスチン、カルムスチンウエハ、Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標）、ＣＣ−5013、ＣＣＩ−779、ＣＣＮＵ、ＣＤＤＰ、ＣｅｅＮＵ、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標）、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、シスプラチナム、シトロボラム因子、クラドリビン、コメトリク、コルチゾン、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標）、ＣＰＴ−11、クリゾチニブ、シクロホスファミド、Ｃｙｔａｄｒｅｎ（登録商標）、シタラビン、シタラビンリポソーム、Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標）、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、デカルバジン、ダコゲン、ダクチノマイシン、ダルベポエチンアルファ、ダサチニブ、ダウノマイシン、ダウノルビシン、ダウノルビシン塩酸塩、ダウノルビシンリポソーム、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標）、デカドロン、デシタビン、Ｄｅｌｔａ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）、Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ（登録商標）、デニロイキンディフティトックス、デノスマブ、ＤｅｐｏＣｙｔ（商標）、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、デキサメタゾンリン酸ナトリウム、デキサゾン、デキスラゾキサン、ＤＨＡＤ、ＤＩＣ、ディオデックス、ドセタキセル、ドキソルビシン、ドキソルビシンリポソーム、Ｄｒｏｘｉａ（商標）、ＤＴＩＣ、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）、Ｄｕｒａｌｏｎｅ（登録商標）、エクリズマブ、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標）、Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標）、Ｅｌｏｘａｔｉｎ（商標）、Ｅｌｓｐａｒ（登録商標）、Ｅｍｃｙｔ（登録商標）、エピルビシン、エポエチンアルファ、エルビタックス、エリブリン、エリベッジ、エルロチニブ、エルウイニアＬ−アスパラギナーゼ、エストラムスチン、エチヨル、エトポホス、エトポシド、リン酸エトポシド、Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標）、エベロリムス、Ｅｖｉｓｔａ（登録商標）、エキセメスタン、Ｆａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）、Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標）、Ｆｅｍａｒａ（登録商標）、フィルグラスチム、フロクスウリジン、Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標）、フルダラビン、Ｆｌｕｏｒｏｐｌｅｘ（登録商標）、フルオロウラシル、フルオロウラシル（クリーム）、フルオキシメステロン、フルタミド、フォリン酸、フォロチン、ＦＵＤＲ（登録商標）、フルベストラント、Ｇ−ＣＳＦ、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブオゾガマイシン、ジェムザール、Ｇｌｅｅｖｅｃ（商標）、Ｇｌｉａｄｅｌ Ｗａｆｅｒ（登録商標）、ＧＭ−ＣＳＦ、ゴセレリン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、Ｈａｌａｖｅｎ（登録商標）、Ｈａｌｏｔｅｓｔｉｎ（登録商標）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、ヘキサドロール、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）、ヘキサメチルメラミン、ＨＭＭ、Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標）、Ｈｙｄｒｅａ（登録商標）、Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔ Ａｃｅｔａｔｅ（登録商標）、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンリン酸ナトリウム、ヒドロコルチゾンコハク酸ナトリウム、リン酸ヒドロコルトン、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブ、イブリツモマブチウキセタン、イダマイシン、ＩＣＬＵＳＩＧ（登録商標）、Ｉｆｅｘ（登録商標）、ＩＦＮ−アルファ、イホスファミド、ＩＬ−11、ＩＬ−2、メシル酸イマチニブ、イミダゾールカルボキサミド、Ｉｎｌｙｔａ（登録商標）、インターフェロン−アルファ、インターフェロンアルファ−2ｂ（ＰＥＧ結合体）、インターロイキン−2、インターロイキン−11、Ｉｎｔｒｏｎ Ａ（登録商標）（インターフェロンアルファ−2ｂ）、イピリムマブ、イリノテカン、イソトレチノイン、イストダックス、イクサベピロン、ジェブタナ、キドロラーゼ、キプロリス、ラナコート、ラパチニブ、Ｌ−アスパラギナーゼ、ＬＣＲ、レナリドマイド、レトロゾール、ロイコボリン、リューケラン、リューキン、リュープロリド、ロイロクリスチン、ロイスタチン、リポソームＡｒａ−Ｃ、液体プレド、ロムスチン、Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシン、リュープロン、リュープロンデポ、マルキボ、マチュレーン、マキシデックス、メクロレタミン、メクロレタミン塩酸塩、メドラロン、メドロール、メゲース、メゲストロール、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メスネックス、メトトレキサート、メトトレキサートナトリウム、メチルプレドニゾロン、メチコルテン、マイトマイシン、マイトマイシン−Ｃ、ミトキサントロン、Ｍ−プレドニゾール、ＭＴＣ、ＭＴＸ、ムスタルゲン、ムスチン、ムタマイシン、ミレラン、マイロセル、マイロターグ、ナベルビン、ネララビン、ネオサール、ニューラスタ、ニューメガ、ニューポゲン、ネクサバール、ニランドロン、ニロチニブ、ニルタミド、ニペント、ナイトロジェンマスタード、ノバルデックス、ノバントロン、Ｎｐｌａｔｅ、オクトレオチド、酢酸オクトレオチド、オファツムマブ、オンコスパール、オンコビン、オンタック、オンキサール、オプレベルキン、オラプレド、オラゾン、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルタンパク質結合物、パミドロネート、パニツムマブ、パンレチン、パラプラチン、パゾパニブ、ペディアプレド、ＰＥＧインターフェロン、ペガスパルゲース、ペグフィルグラスチム、ＰＥＧ−ＩＮＴＲＯＮ、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、ＰＥＭＥＴＲＥＸＥＤ、ペントスタチン、パージェタ、ペルツズマブ、フェニルアラニンマスタード、プラチノール、プラチノール−ＡＱ、ポナチニブ、プララトレキサート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレロン、プロカルバジン、ＰＲＯＣＲＩＴ、プロロイキン、プロリア、カルムスチンインプラントを伴うプロリフェプロスパン20、プロベンジ、プリネトール、ラロキシフェン、レゴラフェニブ、レブリミド、リューマトレックス、リツキサン、リツキシマブ、ロフェロン−Ａ（インターフェロンアルファ−2ａ）、ロミデプシン、ロミプロスチム、ルベックス、ルビドマイシン塩酸塩、サンドスタチン、サンドスタチンＬＡＲ、サルグラモスチム、シプロイセル−Ｔ、ソリリス、ソル−コーテフ、ソル−メドロール、ソラフェニブ、ＳＰＲＹＣＥＬ、ＳＴＩ−571、スチバーガ、ストレプトゾシン、ＳＵ11248、スニチニブ、スーテント、タモキシフェン、タルセバ、タルグレチン、タシグナ、タキソール、タキソテール、テモダール、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、ＴＥＳＰＡ、サリドマイド、サロミド、ＴｈｅｒａＣｙｓ、チオグアニン、チオグアニンタブロイド、チオホスホアミド、チオプレックス、チオテパ、ＴＩＣＥ、トポサール、トポテカン、トレミフェン、トリセル、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレンダ、トレチノイン、トレキソール、トリセノックス、ＴＳＰＡ、ＴＹＫＥＲＢ、バルルビシン、バルスター、バンデタニブ、ＶＣＲ、ベクティビックス、ベルバン、ベルケード、ＶｅＰｅｓｉｄ、ベサノイド、ビアデュール、ビダザ、ビンブラスチン、硫酸ビンブラスチン、ビンカサールＰｆｓ、ビンクリスチン、ビンクリスチンリポソーム、ビノレルビン、酒石酸ビノレルビン、ビスモデギブ、ＶＬＢ、ＶＭ−26、ボリノスタット、ボトリエント、ＶＰ−16、ブモン、ザーコリカプセル、キセロダ、Ｘｇｅｖａ、エルボイ、ザルトラップ、ザノサール、ゼルボラフ、ゼバリン、ジネカード、Ｚｉｖ−アフリベルセプト、ゾラデックス、ゾレドロン酸、ゾリンザ、及びゾメタからなる群から選択される、本発明1017の方法。
[本発明1019]
細胞のアポトーシスを誘導する方法であって、
前記細胞のアポトーシスを誘導するのに効果的な条件下で、前記細胞を、ＨＩＦ1αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンと接触させる段階
を含む、前記方法。
[本発明1020]
前記オリゴオキソピペラジンが、式Ｉ：
Figure 2016510327
のオリゴオキソピペラジンであり、
式中、
Ｒ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 3 、及びＲ 4 のそれぞれが、独立して、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
各Ｒ 6 が、独立して、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ａが、Ｘ 1 またはＣであり、
Ｘ 1 が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｃが、式
Figure 2016510327
部分であり、
式中、
各Ｘ'が、独立して、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、Ｎ（Ｒ''） 2 、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
各Ｒ''が、独立して、Ｈ、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ 0 が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｒ 6 が、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｂが、ＹまたはＤであり、
Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''） 2 、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｄが、式
Figure 2016510327
部分であり、
式中、
Ｒ 5 が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｒ 6 が、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｅが、Ｘ 2 またはＦであり、
Ｘ 2 が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｆが、式
Figure 2016510327
部分であり、
式中、
Ｒ 6 が、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｒ 7 が、アミノ酸側鎖であり；
Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''） 2 、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグである、本発明1019の方法。
[本発明1021]
（ｉ）Ｒ 1 及びＲ 2 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であるか、または、Ａが、式
Figure 2016510327
部分であり、Ｒ 0 及びＲ 3 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であり；
（ｉｉ）各Ｒ''が、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
（ｉｉｉ）Ｂが、Ｄではない、本発明1020の方法。
[本発明1022]
Ｒ 1 及びＲ 2 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基または水素結合供与基である、本発明1021の方法。
[本発明1023]
前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ2−125またはＢＢ2−162である、本発明1022の方法。
[本発明1024]
Ａが、式
Figure 2016510327
部分であり、Ｒ 0 及びＲ 3 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基または水素結合供与基である、本発明1021の方法。
[本発明1025]
前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ2−164である、本発明1024の方法。
[本発明1026]
前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＡ：
Figure 2016510327
の式を有する、本発明1020の方法。
[本発明1027]
式ＩＡの前記オリゴオキソピペラジンのＲ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 4 、及びＲ 5 が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋4、ｉ＋6、及びｉ＋7のアミノ酸側鎖を模倣する、本発明1026の方法。
[本発明1028]
前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＢ：
Figure 2016510327
の式を有する、本発明1020の方法。
[本発明1029]
式ＩＢの前記オリゴオキソピペラジンのＲ 1 、Ｒ 2 、及びＲ 4 が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋4、及びｉ＋7のアミノ酸側鎖を模倣する、本発明1028の方法。
[本発明1030]
前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＣ：
Figure 2016510327
の式を有する、本発明1020の方法。
[本発明1031]
式ＩＣの前記オリゴオキソピペラジンのＲ 0 、Ｒ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 3 、及びＲ 4 が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋2、ｉ＋3、ｉ＋4、及びｉ＋7のアミノ酸側鎖を模倣する、本発明1030の方法。
[本発明1032]
細胞の生存及び／または増殖を減少させる方法であって、
前記細胞の生存及び／または増殖を減少させるのに効果的な条件下で、前記細胞を、ＨＩＦ1αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンと接触させる段階
を含む、前記方法。
[本発明1033]
前記細胞が、がん性である、またはがん性細胞を含有する組織の内皮血管内に含有される、本発明1032の方法。
[本発明1034]
前記オリゴオキソピペラジンが、式Ｉ：
Figure 2016510327
のオリゴオキソピペラジンであり、
式中、
Ｒ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 3 、及びＲ 4 のそれぞれが、独立して、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
各Ｒ 6 が、独立して、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ａが、Ｘ 1 またはＣであり、
Ｘ 1 が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｃが、式
Figure 2016510327
部分であり、
式中、
各Ｘ'が、独立して、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、Ｎ（Ｒ''） 2 、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
各Ｒ''が、独立して、Ｈ、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ 0 が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｒ 6 が、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｂが、ＹまたはＤであり、
Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''） 2 、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｄが、式
Figure 2016510327
部分であり、
式中、
Ｒ 5 が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｒ 6 が、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｅが、Ｘ 2 またはＦであり、
Ｘ 2 が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｆが、式
Figure 2016510327
部分であり、
式中、
Ｒ 6 が、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｒ 7 が、アミノ酸側鎖であり；
Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''） 2 、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグである、本発明1032の方法。
[本発明1035]
（ｉ）Ｒ 1 及びＲ 2 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であるか、または、Ａが、式
Figure 2016510327
部分であり、Ｒ 0 及びＲ 3 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であり；
（ｉｉ）各Ｒ''が、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
（ｉｉｉ）Ｂが、Ｄではない、本発明1034の方法。
[本発明1036]
Ｒ 1 及びＲ 2 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基または水素結合供与基である、本発明1035の方法。
[本発明1037]
前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ2−125またはＢＢ2−162である、本発明1036の方法。
[本発明1038]
Ａが、式
Figure 2016510327
部分であり、Ｒ 0 及びＲ 3 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基または水素結合供与基である、本発明1035の方法。
[本発明1039]
前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ2−164である、本発明1038の方法。
[本発明1040]
前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＡ：
Figure 2016510327
の式を有する、本発明1034の方法。
[本発明1041]
式ＩＡの前記オリゴオキソピペラジンのＲ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 4 、及びＲ 5 が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋4、ｉ＋6、及びｉ＋7のアミノ酸側鎖を模倣する、本発明1040の方法。
[本発明1042]
前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＢ：
Figure 2016510327
の式を有する、本発明1034の方法。
[本発明1043]
式ＩＢの前記オリゴオキソピペラジンのＲ 1 、Ｒ 2 、及びＲ 4 が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋4、及びｉ＋7のアミノ酸側鎖を模倣する、本発明1042の方法。
[本発明1044]
前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＣ：
Figure 2016510327
の式を有する、本発明1034の方法。
[本発明1045]
式ＩＣの前記オリゴオキソピペラジンのＲ 0 、Ｒ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 3 、及びＲ 4 が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋2、ｉ＋3、ｉ＋4、及びｉ＋7のアミノ酸側鎖を模倣する、本発明1044の方法。
[本発明1046]
細胞内でのｐ53の不活性化を予防するまたは元に戻す方法であって、
細胞におけるｐ53の不活性化を予防するまたは元に戻すのに効果的な条件下で、前記細胞を、ＨＩＦ1αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンと接触させる段階
を含む、前記方法。
[本発明1047]
前記オリゴオキソピペラジンが、式Ｉ：
Figure 2016510327
のオリゴオキソピペラジンであり、
式中、
Ｒ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 3 、及びＲ 4 のそれぞれが、独立して、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
各Ｒ 6 が、独立して、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ａが、Ｘ 1 またはＣであり、
Ｘ 1 が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｃが、式
Figure 2016510327
部分であり、
式中、
各Ｘ'が、独立して、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、Ｎ（Ｒ''） 2 、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
各Ｒ''が、独立して、Ｈ、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ 0 が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｒ 6 が、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｂが、ＹまたはＤであり、
Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''） 2 、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｄが、式
Figure 2016510327
部分であり、
式中、
Ｒ 5 が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｒ 6 が、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｅが、Ｘ 2 またはＦであり、
Ｘ 2 が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｆが、式
Figure 2016510327
部分であり、
式中、
Ｒ 6 が、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｒ 7 が、アミノ酸側鎖であり；
Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''） 2 、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグである、本発明1046の方法。
[本発明1048]
（ｉ）Ｒ 1 及びＲ 2 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であるか、または、Ａが、式
Figure 2016510327
部分であり、Ｒ 0 及びＲ 3 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であり；
（ｉｉ）各Ｒ''が、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
（ｉｉｉ）Ｂが、Ｄではない、本発明1047の方法。
[本発明1049]
Ｒ 1 及びＲ 2 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基または水素結合供与基である、本発明1048の方法。
[本発明1050]
前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ2−125またはＢＢ2−162である、本発明1049の方法。
[本発明1051]
Ａが、式
Figure 2016510327
部分であり、Ｒ 0 及びＲ 3 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基または水素結合供与基である、本発明1048の方法。
[本発明1052]
前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ2−164である、本発明1051の方法。
[本発明1053]
前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＡ：
Figure 2016510327
の式を有する、本発明1047の方法。
[本発明1054]
式ＩＡの前記オリゴオキソピペラジンのＲ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 4 、及びＲ 5 が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋4、ｉ＋6、及びｉ＋7のアミノ酸側鎖を模倣する、本発明1053の方法。
[本発明1055]
前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＢ：
Figure 2016510327
の式を有する、本発明1047の方法。
[本発明1056]
式ＩＢの前記オリゴオキソピペラジンのＲ 1 、Ｒ 2 、及びＲ 4 が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋4、及びｉ＋7のアミノ酸側鎖を模倣する、本発明1055の方法。
[本発明1057]
前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＣ：
Figure 2016510327
の式を有する、本発明1047の方法。
[本発明1058]
式ＩＣの前記オリゴオキソピペラジンのＲ 0 、Ｒ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 3 、及びＲ 4 が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋2、ｉ＋3、ｉ＋4、及びｉ＋7のアミノ酸側鎖を模倣する、本発明1057の方法。
[本発明1059]
細胞における、ｐ300が媒介する転写因子のアセチル化を阻害する方法であって、
前記細胞における、ｐ300が媒介する前記転写因子のアセチル化を阻害するのに効果的な条件下で、前記細胞を、ＨＩＦ1αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンと接触させる段階
を含む、前記方法。
[本発明1060]
前記転写因子が、ｐ53である、本発明1059の方法。
[本発明1061]
前記オリゴオキソピペラジンが、式Ｉ：
Figure 2016510327
のオリゴオキソピペラジンであり、
式中、
Ｒ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 3 、及びＲ 4 のそれぞれが、独立して、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
各Ｒ 6 が、独立して、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ａが、Ｘ 1 またはＣであり、
Ｘ 1 が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｃが、式
Figure 2016510327
部分であり、
式中、
各Ｘ'が、独立して、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、Ｎ（Ｒ''） 2 、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
各Ｒ''が、独立して、Ｈ、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ 0 が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｒ 6 が、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｂが、ＹまたはＤであり、
Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''） 2 、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｄが、式
Figure 2016510327
部分であり、
式中、
Ｒ 5 が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｒ 6 が、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｅが、Ｘ 2 またはＦであり、
Ｘ 2 が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
Ｆが、式
Figure 2016510327
部分であり、
式中、
Ｒ 6 が、Ｈ、Ｎ（Ｒ） 2 、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
Ｒ 7 が、アミノ酸側鎖であり；
Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''） 2 、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ 2 Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグである、本発明1059の方法。
[本発明1062]
（ｉ）Ｒ 1 及びＲ 2 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であるか、または、Ａが、式
Figure 2016510327
部分であり、Ｒ 0 及びＲ 3 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であり；
（ｉｉ）各Ｒ''が、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
（ｉｉｉ）Ｂが、Ｄではない、本発明1061の方法。
[本発明1063]
Ｒ 1 及びＲ 2 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基または水素結合供与基である、本発明1062の方法。
[本発明1064]
前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ2−125またはＢＢ2−162である、本発明1063の方法。
[本発明1065]
Ａが、式
Figure 2016510327
部分であり、Ｒ 0 及びＲ 3 が、疎水性であり、Ｒ 4 が、水素結合受容基または水素結合供与基である、本発明1062の方法。
[本発明1066]
前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ2−164である、本発明1065の方法。
[本発明1067]
前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＡ：
Figure 2016510327
の式を有する、本発明1061の方法。
[本発明1068]
式ＩＡの前記オリゴオキソピペラジンのＲ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 4 、及びＲ 5 が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋4、ｉ＋6、及びｉ＋7のアミノ酸側鎖を模倣する、本発明1067の方法。
[本発明1069]
前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＢ：
Figure 2016510327
の式を有する、本発明1061の方法。
[本発明1070]
式ＩＢの前記オリゴオキソピペラジンのＲ 1 、Ｒ 2 、及びＲ 4 が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋4、及びｉ＋7のアミノ酸側鎖を模倣する、本発明1069の方法。
[本発明1071]
前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＣ：
Figure 2016510327
の式を有する、本発明1061の方法。
[本発明1072]
式ＩＣの前記オリゴオキソピペラジンのＲ 0 、Ｒ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 3 、及びＲ 4 が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋2、ｉ＋3、ｉ＋4、及びｉ＋7のアミノ酸側鎖を模倣する、本発明1071の方法。
図１Ａ〜Ｃは、ＣＨ１阻害剤ＣＨ１ｉＡ（図１Ａ）、ＣＨ１ｉＢ（図１Ｂ）、及びＣＨ１ｉＢ−ｍｕｔ（図１Ｃ）の分析ＨＰＬＣトレースを示すグラフである。 図２Ａ〜Ｅは、外因性ＣＨ１が、ＨＰＶ１６ Ｅ６とｐ３００との間の結合を遮断することによりｐ５３を再活性化することを示す図である。安定なポリクローナルＵＭＳＣＣ４７／空、ＵＭＳＣＣ４７／ＣＨ１、ＳＣＣ９０／空、及びＳＣＣ９０／ＣＨ１細胞は、トランスフェクション及び抗生物質選択により生成された。図２Ａは、ＨＰＶ１６ Ｅ６−ｐ３００の結合を示すウェスタンブロットの対である。細胞溶解物が抽出され、抗Ｅ６（左パネル）または抗ｐ３００（右パネル）抗体により免疫沈降され、抗Ｖ５、抗Ｅ６、または抗ｐ３００抗体により免疫ブロットされた。細胞溶解物は、インプット対照用の抗Ｖ５、抗Ｅ６、または抗ｐ３００抗体により免疫ブロットされた。図２Ｂは、全及びアセチル化ｐ５３レベルのウェスタンブロットである。細胞溶解物は、抗ｐ５３または抗アセチル化［Ｋ３８２］−ｐ５３抗体により免疫ブロットされた。図２Ｃは、ｐ５３転写活性のグラフである。細胞に、ｐ５３蛍ルシフェラーゼレポータープラスミド及び対照ウミシイタケルシフェラーゼプラスミドをコトランスフェクトした。蛍ルシフェラーゼ活性は、トランスフェクション効率を照合するために、ウミシイタケルシフェラーゼ活性に対して正規化された。データは、空ベクター細胞に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、ｎ＝４である。図２Ｄは、ＵＭＳＣＣ４７（上パネル）及びＳＣＣ９０（下パネル）細胞におけるｐ３００及びｐ５３発現のグラフの対である。図２Ｅは、ＵＭＳＣＣ４７（上パネル）及びＳＣＣ９０（下パネル）細胞におけるｐ２１、ｍｉＲ−３４ａ、及びｍｉＲ−２００ｃ発現のグラフの対である。ｍＲＮＡ発現は、検証されたＴａｑＭａｎアッセイと共にｑＰＣＲを使用して決定された。データは、空ベクター対照細胞に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、ｎ＝３である。 図３Ａ〜Ｈは、外因性ＣＨ１が、ＨＰＶ１６陽性ＨＮＳＣＣ細胞における多面的抗がん効果を有することを示す図である。図３Ａは、細胞増殖のグラフの対である。ＵＭＳＣＣ４７（左パネル）及びＳＣＣ９０（右パネル）細胞は、対照（ビヒクル）またはシスプラチン（１０μＭ）で２４、４８、及び７２時間処理された。データは、０日目に正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１、シスプラチン、またはＣＨ１＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１またはシスプラチン対ＣＨ１＋シスプラチン、ｎ＝６である。図３Ｂは、コロニー形成生存のグラフである。ＵＭＳＣＣ４７（左パネル）及びＳＣＣ９０（右パネル）は、対照（ビヒクル）またはシスプラチン（１０μＭ）で処理された。コロニーは、クリスタルバイオレット溶液で染色された。データは、空／対照細胞に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１、シスプラチン、またはＣＨ１＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１またはシスプラチン対ＣＨ１＋シスプラチン、ｎ＝３である。図３Ｃは、アポトーシスのグラフである。ＵＭＳＣＣ４７（左パネル）及びＳＣＣ９０（右パネル）は、対照（ビヒクル）またはシスプラチン（１０μＭ）で処理された。アネキシンＶ陽性アポトーシス細胞を定量するために、ＦＡＣＳが使用された。データは、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１、シスプラチン、またはＣＨ１＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１またはシスプラチン対ＣＨ１＋シスプラチン、ｎ＝３である。図３Ｄは、インビボ腫瘍発生の表である。ＵＭＳＣＣ４７／空及びＵＭＳＣＣ４７／ＣＨ１細胞の３×１０５または３×１０４の２つの異なる希釈物が、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスの脇腹に移植された。腫瘍細胞移植後４９日間、腫瘍発生が監視された。＊Ｐ＜０．０２、ｎ＝８である。図３Ｅは、インビボ腫瘍成長のグラフである。腫瘍は、デジタルキャリパーを使用して毎週測定され、腫瘍体積が計算された。データは、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、ｎ＝６である。図３Ｆは、ＡＬＤＨ（左パネル）及びＣＤ４４（右パネル）のグラフの対である。ＡＬＤＨｈｉｇｈ細胞は、ＡＬＤＥＦＬＵＯＲアッセイを使用して定量された。データは、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、ｎ＝３である。ＣＤ４４強度は、抗ＰＥ−ＣＤ４４抗体によるＦＡＣＳを使用して決定され、ヒストグラムとして示された。図３Ｇは、腫瘍塊形成効率（左パネル）及び直径（右パネル）のグラフの対である。腫瘍塊形成効率は、形成された腫瘍塊（直径≧５０μｍ）の数を、播種された細胞の元の数で除したものとして計算された。腫瘍塊直径は、ＮＩＳ−Ｅｌｅｍｅｎｔｓソフトウェアを使用して測定された。データは、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、ｎ＝６である。図３Ｈは、単一腫瘍塊のインビボ腫瘍発生の代表例を示す画像の対である。ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに、単一ＵＭＳＣＣ４７腫瘍塊（平均直径６０〜８０μｍ、約１００細胞）または１×１０３ ＵＭＳＣＣ４７細胞が移植された。代表的なＵＭＳＣＣ４７腫瘍塊（左画像）及びＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおいて成長した最終的な腫瘍（右画像）が示されている。腫瘍発生は、６ヶ月の期間にわたり監視された。＊Ｐ＜０．００５、単一ＵＭＳＣＣ４７腫瘍塊に対してはｎ＝１１、１×１０３ ＵＭＳＣＣ４７細胞に対してはｎ＝１０である。 図４Ａ〜Ｆは、外因性ＣＨ１が、ＨＰＶ陰性ＨＮＳＣＣにおける多面的抗がん効果を有することを示す図である。安定なポリクローナルＵＭＳＣＣ７４Ａ／空及びＵＭＳＣＣ７４Ａ／ＣＨ１細胞は、トランスフェクション及び抗生物質選択により生成された。図４Ａは、全及びアセチル化ｐ５３レベルを示すウェスタンブロットである。細胞溶解物は、抗Ｖ５、抗ｐ５３、または抗アセチル化［Ｋ３８２］−ｐ５３抗体により免疫ブロットされた。図４Ｂは、ｐ５３転写活性のグラフである。細胞に、ｐ５３蛍ルシフェラーゼレポータープラスミド及び対照ウミシイタケルシフェラーゼプラスミドをコトランスフェクトした。蛍ルシフェラーゼ活性は、トランスフェクション効率を照合するために、ウミシイタケルシフェラーゼ活性に対して正規化された。データは、空ベクター細胞に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、ｎ＝４である。図４Ｃは、ＭＤＭ２−ｐ３００の結合を示すウェスタンブロットである。細胞溶解物が抽出され、抗ｐ３００抗体により免疫沈降され、抗ＭＤＭ２により免疫ブロットされた。細胞溶解物は、インプット対照用の抗ＭＤＭ２または抗ｐ３００抗体により免疫ブロットされた。図４Ｄは、細胞増殖のグラフである。細胞は、対照（ビヒクル）またはシスプラチン（１０μＭ）で２４時間及び４８時間処理された。データは、０日目に正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１またはシスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１またはシスプラチン対ＣＨ１＋シスプラチン、ｎ＝４である。図４Ｅは、コロニー形成生存のグラフである。細胞は、対照（ビヒクル）またはシスプラチン（１０μＭ）で処理された。コロニーは、クリスタルバイオレット溶液で染色された。データは、空／対照細胞に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１、シスプラチン、またはＣＨ１＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１またはシスプラチン対ＣＨ１＋シスプラチンである。図４Ｆは、アポトーシスのグラフである。細胞は、対照（ビヒクル）またはシスプラチン（１０μＭ）で処理された。アネキシンＶ陽性アポトーシス細胞を定量するために、ＦＡＣＳが使用された。データは、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０５、対照対ＣＨ１、シスプラチン、またはＣＨ１＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０５ ＣＨ１またはシスプラチン対ＣＨ１＋シスプラチンである。 図５Ａ〜Ｇは、ＣＨ１ｉＢがＨＰＶ１６陽性ＨＮＳＣＣにおいてｐ５３を優先的に再活性化することを示す図である。図５Ａは、ＣＨ１が２つの異なる標的部位を有することを示す概略図である。ＨＩＦ１−α／ｐ３００構造は、ｐ３００のＣＨ１ドメイン上の部位Ａ及び部位Ｂを標的指向するヘリックス模倣物を設計するためのガイドとして使用された。図５Ｂは、合成ヘリックスの構造を示す。ＣＨ１ｉＡ及びＣＨ１ｉＢは、ＨＩＦ−１αのＣ末端ドメインからの２つのヘリックスを模倣するように設計された。ペプチドは、水素結合代替法によりヘリックス構造に固定された。図５Ｃは、ｐ５３活性のグラフである。ＵＭＳＣＣ４７（左）及びＵＭＳＣＣ７４Ａ（右）細胞に、ｐ５３蛍ルシフェラーゼレポータープラスミド及び対照ウミシイタケルシフェラーゼプラスミドをコトランスフェクトした。２４時間後、細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＡ（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）で２４時間処理された。蛍ルシフェラーゼ活性は、トランスフェクション効率を照合するために、ウミシイタケルシフェラーゼ活性に対して正規化された。データは、対照に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０５、ｎ＝３である。図５Ｄは、全及びアセチル化ｐ５３レベルを示すウェスタンブロットである。ＵＭＳＣＣ４７（左）及びＵＭＳＣＣ７４Ａ（右）細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＡ（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）で２４時間処理された。細胞溶解物は、抗ｐ５３または抗アセチル化［Ｋ３８２］−ｐ５３抗体により免疫ブロットされた。図５Ｅは、ｐ３００、ｐ５３、ｐ２１、ｍｉＲ−３４ａ、及びｍｉＲ−２００ｃ発現のグラフの対である。ＵＭＳＣＣ４７（上パネル）及びＵＭＳＣＣ７４Ａ（下パネル）細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＡ（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）で２４時間処理された。ｍＲＮＡ発現は、検証されたＴａｑＭａｎアッセイと共にｑＰＣＲを使用して決定された。データは、対照細胞に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１ｉＢ、ｎ＝３である。図５Ｆは、ＨＰＶ１６ Ｅ６−ｐ３００の結合を示すウェスタンブロットである。ＵＭＳＣＣ４７細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＡ（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）で２４時間処理された。細胞溶解物が抽出され、抗ｐ３００抗体により免疫沈降され、抗Ｅ６抗体により免疫ブロットされた。細胞溶解物は、インプット対照用の抗Ｅ６または抗ｐ３００抗体により免疫ブロットされた。図５Ｇは、細胞増殖のグラフの組である。ＵＭＳＣＣ４７（左上パネル）、ＵＭＳＣＣ７４Ａ（右上パネル）、及びＩＭＲ９０（ヒト正常線維芽細胞）（下パネル）細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＡ（１０μＭ）、ＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）、シスプラチン（１０μＭ）、ＣＨ１ｉＡ（１０μＭ）及びシスプラチン（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）及びシスプラチン（１０μＭ）で、２４、４８、または７２時間処理された。データは、０日目に正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１ｉＢまたはシスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１ｉＢまたはシスプラチン対ＣＨ１ｉＢ及びシスプラチン、ｎ＝６である。 図６Ａ〜Ｆは、ＣＨ１ｉＢがＨＰＶ１６陽性ＨＮＳＣＣにおいてシスプラチンの有効性を増強することを示す図である。図６Ａは、全及びアセチル化ｐ５３レベルを示すウェスタンブロットである。ＵＭＳＣＣ４７細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）、シスプラチン（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）及びシスプラチン（１０μＭ）で２４時間処理された。細胞溶解物は、抗ｐ５３または抗アセチル化［Ｋ３８２］−ｐ５３抗体により免疫ブロットされた。図６Ｂは、ｐ５３転写活性のグラフである。ＵＭＳＣＣ４７細胞に、ｐ５３蛍ルシフェラーゼレポータープラスミド及び対照ウミシイタケルシフェラーゼプラスミドをコトランスフェクトした。２４時間後、細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）、シスプラチン（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）及びシスプラチン（１０μＭ）で２４時間処理された。蛍ルシフェラーゼ活性は、トランスフェクション効率を照合するために、ウミシイタケルシフェラーゼ活性に対して正規化された。データは、対照に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１ｉＢ、シスプラチンまたはＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１ｉＢまたはシスプラチン対ＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、ｎ＝５である。図６Ｃは、ｐ３００、ｐ５３、ｐ２１、ｍｉＲ−３４ａ、及びｍｉＲ−２００ｃ発現のグラフである。ＵＭＳＣＣ４７細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）、シスプラチン（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）及びシスプラチン（１０μＭ）で２４時間処理された。ｍＲＮＡ発現は、検証されたＴａｑＭａｎアッセイと共にｑＰＣＲを使用して決定された。データは、対照細胞に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１ｉＢ、シスプラチンまたはＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１ｉＢまたはシスプラチン対ＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、ｎ＝３である。図６Ｄは、アポトーシスのグラフの対である。ＵＭＳＣＣ４７細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）、シスプラチン（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）及びシスプラチン（１０μＭ）で２４時間処理された。アネキシンＶ陽性アポトーシス細胞を定量するために、ＦＡＣＳが使用された（左パネル）。データは、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１ｉＢ、シスプラチンまたはＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１ｉＢまたはシスプラチン対ＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、ｎ＝３である。図６Ｅは、コロニー形成生存の一連の画像及びグラフである。ＵＭＳＣＣ４７細胞は、０日目に対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）、シスプラチン（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）及びシスプラチン（１０μＭ）で処理され、１４日目にコロニーがクリスタルバイオレット溶液で染色された。データは、対照に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１ｉＢ、シスプラチンまたはＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１ｉＢまたはシスプラチン対ＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、ｎ＝３である。図６Ｆは、腫瘍塊形成効率（上パネル）及び直径（下パネル）のグラフの対である。ＵＭＳＣＣ４７細胞は、低付着プレート上に播種され、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）、シスプラチン（３μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）及びシスプラチン（３μＭ）で処理された。腫瘍塊形成効率は、７日で形成された腫瘍塊（直径≧５０μｍ）の数を、播種された細胞の元の数で除したものとして計算された。腫瘍塊直径は、ＮＩＳ−Ｅｌｅｍｅｎｔｓソフトウェアを使用して測定された。データは、対照に対して正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照対ＣＨ１ｉＢ、シスプラチンまたはＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、＊＊Ｐ＜０．０１ ＣＨ１ｉＢまたはシスプラチン対ＣＨ１ｉＢ＋シスプラチン、ｎ＝８である。 図７Ａ〜Ｂは、ＣＨ１ｉＢの不活性類似体であるＣＨ１ｉＢ−ｍｕｔの、ｐ５３転写活性及び細胞増殖に対する効果に関する図である。図７Ａは、ｐ５３転写活性のグラフである。ＵＭＳＣＣ４７細胞に、ｐ５３蛍ルシフェラーゼレポータープラスミド及び対照ウミシイタケルシフェラーゼプラスミドをコトランスフェクトした。２４時間後、細胞は、対照（ビヒクル）またはＣＨ１ｉＢ−ｍｕｔ（１０μＭ）で２４時間処理された。蛍ルシフェラーゼ活性は、トランスフェクション効率を照合するために、ウミシイタケルシフェラーゼ活性に対して正規化された。データは、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０５、ｎ＝５である。図７Ｂは、細胞増殖のグラフである。ＵＭＳＣＣ４７細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＢ−ｍｕｔ（１０μＭ）、シスプラチン（１０μＭ）、またはＣＨ１ｉＢ−ｍｕｔ（１０μＭ）及びシスプラチン（１０μＭ）で２４時間または４８時間処理された。データは、０日目に正規化され、平均±ＳＥＭとして示されている。＊Ｐ＜０．０１、対照またはＣＨ１ｉＢ−ｍｕｔ対シスプラチンまたはシスプラチン＋ＣＨ１ｉＢ−ｍｕｔ、ｎ＝６である。 ＢＢ２−１２５の分析ＨＰＬＣトレースである。勾配：３０分で５％から９５％アセトニトリル／水。 ＢＢ２−１６２の分析ＨＰＬＣトレースである。勾配：３０分で５％から９５％アセトニトリル／水。 ＢＢ２−１６４の分析ＨＰＬＣトレースである。勾配：３０分で５％から９５％アセトニトリル／水。 ｐ５３転写活性のグラフである。ＵＭＳＣＣ４７細胞に、ｐ５３蛍ルシフェラーゼレポータープラスミド及び対照ウミシイタケルシフェラーゼプラスミドをコトランスフェクトした。２４時間後、細胞は、対照（ビヒクル）、ＣＨ１ｉＢ（１０μＭ）、またはＢＢ２−１６２（「ＯＯＰ１」）（１０μＭ）で２４時間処理された。 アミノ酸誘導オリゴオキソピペラジンの設計を示す図である（Ｔｏｓｏｖｓｋａ ＆ Ａｒｏｒａ，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．１２：１５８８（２０１０））。オリゴオキソピペラジンは、図示されるように、ペプチド内の隣接アミド窒素原子をエチレン架橋により連結させることにより得られる。 マイクロ波補助固相合成を使用してオリゴオキソピペラジンを作製するための一般的合成スキームである。 モデルオリゴオキソピペラジン二量体Ａ〜Ｃ及びモデルオリゴオキソピペラジン三量体の設計及び構造を示す図である。各モデルオリゴオキソピペラジン及びその標的αヘリックスの予測される構造の重なりもまた示されている。 ＨＩＦ−１αのαＢヘリックスを模倣するモデルオリゴオキソピペラジン二量体Ｂの設計及び構造を示す図である。 ＨＩＦ−１αのαＢヘリックスを模倣するモデルオリゴオキソピペラジン二量体Ｃの設計及び構造を示す図である。 オリゴオキソピペラジンＢＢ２−１６４、ＢＢ２−１６２、ＢＢ２−１２５、及びＢＢ２−２８２を示す図である。 オリゴオキソピペラジンＢＢ２−１６２の設計を示す図である。ヘリックスαＢの配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）はまた、各ホットスポット残基を囲むボックスで示されている。 様々な濃度のオリゴオキソピペラジンＢＢ２−１２５またはＢＢ２−１６２への曝露後の細胞生存性のグラフである。
実施例２-材料及び方法：プラスミド構築及びトランスフェクション
ｐ３００のＣＨ１ドメイン（ヌクレオチド３３２〜４１７）を、ＰＣＲ
Figure 2016510327
により増幅し、ｐｃＤＮＡ３．１のＢａｍＨＩ及びＸｈｏｌ制限酵素部位の間に挿入した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を使用して、ＵＭＳＣＣ４７、ＵＭＵＰＣＩ：ＳＣＣ０９０、及びＵＭＳＣＣ７４Ａ細胞に、ｐｃＤＮＡ３．１／空またはｐｃＤＮＡ３．１／ＣＨ１をトランスフェクトした。安定なポリクローナル集団を選択し、Ｇ４１８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の存在下で維持した。
本明細書に記載のように、ならびに図１５及び図１６に示されるように、二量体Ｂ（図１５）及び二量体Ｃ（図１６）のヘリックスの重なりに対するＨＩＦ−１α模倣物が設計されている。図１７に示されるように、コンピュータ分析に基づいて４つの類似体が設計された。ＢＢ２−１６４オリゴオキソピペラジンは、二量体Ｃ設計に基づいている。ＢＢ２−１６２は、二量体Ｂ設計に基づいている。ＢＢ２−１２５は、ＢＢ２−１６２の陰性対照であり、グルタミン残基がアラニン基で置き換えられている。ＢＢ２−２８２もまた陰性対照であり、重要な残基を示さない。図１８に示されるように、模倣物を設計する上で、ＨＩＦ−１αのヘリックスαＢの天然アミノ酸配列（ＰＤＢコード１Ｌ８Ｃ、残基１３９−１４７）が利用された。図１８は、オリゴオキソピペラジンＢＢ２−１６２及びヘリックスαＢの重なりを示す。

Claims (72)

  1. 対象において、Ｅ６とＣＲＥＢ結合タンパク質及び／またはｐ３００との相互作用により媒介される障害を治療または予防する方法であって、
    前記障害を治療または予防するのに効果的な条件下で、低酸素誘導因子１αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンを前記対象に投与する段階を含む、前記方法。
  2. 前記オリゴオキソピペラジンが、式Ｉ：
    Figure 2016510327
    のオリゴオキソピペラジンであり、
    式中、
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のそれぞれが、独立して、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    各Ｒ６が、独立して、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ａが、Ｘ１またはＣであり、
    Ｘ１が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｃが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、
    式中、
    各Ｘ'が、独立して、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、Ｎ（Ｒ''）２、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    各Ｒ''が、独立して、Ｈ、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ０が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｒ６が、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｂが、ＹまたはＤであり、
    Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''）２、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｄが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、
    式中、
    Ｒ５が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｒ６が、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｅが、Ｘ２またはＦであり、
    Ｘ２が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｆが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、
    式中、
    Ｒ６が、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｒ７が、アミノ酸側鎖であり；
    Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''）２、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグである、請求項１に記載の方法。
  3. （ｉ）Ｒ１及びＲ２が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であるか、または、Ａが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、Ｒ０及びＲ３が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であり；
    （ｉｉ）各Ｒ''が、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    （ｉｉｉ）Ｂが、Ｄではない、請求項２に記載の方法。
  4. Ｒ１及びＲ２が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基または水素結合供与基である、請求項３に記載の方法。
  5. 前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ２−１２５またはＢＢ２−１６２である、請求項４に記載の方法。
  6. Ａが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、Ｒ０及びＲ３が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基または水素結合供与基である、請求項３に記載の方法。
  7. 前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ２−１６４である、請求項６に記載の方法。
  8. 前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＡ：
    Figure 2016510327
    の式を有する、請求項２に記載の方法。
  9. 式ＩＡの前記オリゴオキソピペラジンのＲ１、Ｒ２、Ｒ４、及びＲ５が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋４、ｉ＋６、及びｉ＋７のアミノ酸側鎖を模倣する、請求項８に記載の方法。
  10. 前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＢ：
    Figure 2016510327
    の式を有する、請求項２に記載の方法。
  11. 式ＩＢの前記オリゴオキソピペラジンのＲ１、Ｒ２、及びＲ４が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋４、及びｉ＋７のアミノ酸側鎖を模倣する、請求項１０に記載の方法。
  12. 前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＣ：
    Figure 2016510327
    の式を有する、請求項２に記載の方法。
  13. 式ＩＣの前記オリゴオキソピペラジンのＲ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋２、ｉ＋３、ｉ＋４、及びｉ＋７のアミノ酸側鎖を模倣する、請求項１２に記載の方法。
  14. 前記障害が、ＨＰＶ関連がんである、請求項１に記載の方法。
  15. 前記ＨＰＶが、ＨＰＶ−１６、ＨＰＶ−１８、ＨＰＶ−３１、ＨＰＶ−３３、ＨＰＶ−３５、ＨＰＶ−３９、ＨＰＶ−４５、ＨＰＶ−５１、ＨＰＶ−５２、ＨＰＶ−５６、ＨＰＶ−５８、ＨＰＶ−５９、ＨＰＶ−６８、ＨＰＶ−６９、ＨＰＶ−７３、及びＨＰＶ−８２からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
  16. 前記ＨＰＶ関連がんが、肛門性器がん、子宮頸がん、外陰がん、膣がん、陰茎がん、肛門がん、口腔咽頭がん、及び頭頸部扁平上皮がんの群から選択される、請求項１に記載の方法。
  17. １種以上の抗がん剤を前記対象に投与する段階をさらに含む、請求項１に記載の方法。
  18. 前記１種以上の抗がん剤が、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、２−ＣｄＡ、２−クロロデオキシアデノシン、５−アザシチジン、５−フルオロウラシル、５−ＦＵ、６−メルカプトプリン、６−ＭＰ、６−ＴＧ、６−チオグアニン、アブラキサン、アキュテイン、アクチノマイシン−Ｄ、アドセトリス、アドリアマイシン、アドルシル、アフィニトール、アグリリン、Ａｌａ−Ｃｏｒｔ、アルデスロイキン、アレムツズマブ、ＡＬＩＭＴＡ、アリトレチノイン、アルカバン−ＡＱ、アルケラン、オールトランスレチノイン酸、アルファインターフェロン、アルトレタミン、アメトプテリン、アミホスチン、アミノグルテチミド、アナグレリド、Ａｎａｎｄｒｏｎ（登録商標）、アナストロゾール、アラビノシルシトシン、Ａｒａ−Ｃ、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）、Ａｒｅｄｉａ（登録商標）、Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）、Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標）、Ａｒｒａｎｏｎ（登録商標）、三酸化ヒ素、Ａｒｚｅｒｒａ（商標）、アスパラギナーゼ、ＡＴＲＡ、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）、アキシチニブ、アザシチジン、ＢＣＧ、ベンダムスチン、ベバシズマブ、ベキサロテン、ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ、Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標）、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ボシュリフ、ボスチニブ、ブレンツキシマブベドチン、ブスルファン、Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標）、Ｃ２２５、カバジタキセル、カボザンチニブ、カルシウムロイコボリン、Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）、Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標）、カンプトテシン−１１、カペシタビン、カプレルサ、Ｃａｒａｃ（商標）、カルボプラチン、カルフィルゾミブ、カルムスチン、カルムスチンウエハ、Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標）、ＣＣ−５０１３、ＣＣＩ−７７９、ＣＣＮＵ、ＣＤＤＰ、ＣｅｅＮＵ、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標）、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、シスプラチナム、シトロボラム因子、クラドリビン、コメトリク、コルチゾン、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標）、ＣＰＴ−１１、クリゾチニブ、シクロホスファミド、Ｃｙｔａｄｒｅｎ（登録商標）、シタラビン、シタラビンリポソーム、Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標）、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、デカルバジン、ダコゲン、ダクチノマイシン、ダルベポエチンアルファ、ダサチニブ、ダウノマイシン、ダウノルビシン、ダウノルビシン塩酸塩、ダウノルビシンリポソーム、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標）、デカドロン、デシタビン、Ｄｅｌｔａ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）、Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ（登録商標）、デニロイキンディフティトックス、デノスマブ、ＤｅｐｏＣｙｔ（商標）、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、デキサメタゾンリン酸ナトリウム、デキサゾン、デキスラゾキサン、ＤＨＡＤ、ＤＩＣ、ディオデックス、ドセタキセル、ドキソルビシン、ドキソルビシンリポソーム、Ｄｒｏｘｉａ（商標）、ＤＴＩＣ、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）、Ｄｕｒａｌｏｎｅ（登録商標）、エクリズマブ、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標）、Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標）、Ｅｌｏｘａｔｉｎ（商標）、Ｅｌｓｐａｒ（登録商標）、Ｅｍｃｙｔ（登録商標）、エピルビシン、エポエチンアルファ、エルビタックス、エリブリン、エリベッジ、エルロチニブ、エルウイニアＬ−アスパラギナーゼ、エストラムスチン、エチヨル、エトポホス、エトポシド、リン酸エトポシド、Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標）、エベロリムス、Ｅｖｉｓｔａ（登録商標）、エキセメスタン、Ｆａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）、Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標）、Ｆｅｍａｒａ（登録商標）、フィルグラスチム、フロクスウリジン、Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標）、フルダラビン、Ｆｌｕｏｒｏｐｌｅｘ（登録商標）、フルオロウラシル、フルオロウラシル（クリーム）、フルオキシメステロン、フルタミド、フォリン酸、フォロチン、ＦＵＤＲ（登録商標）、フルベストラント、Ｇ−ＣＳＦ、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブオゾガマイシン、ジェムザール、Ｇｌｅｅｖｅｃ（商標）、Ｇｌｉａｄｅｌ Ｗａｆｅｒ（登録商標）、ＧＭ−ＣＳＦ、ゴセレリン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、Ｈａｌａｖｅｎ（登録商標）、Ｈａｌｏｔｅｓｔｉｎ（登録商標）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、ヘキサドロール、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）、ヘキサメチルメラミン、ＨＭＭ、Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標）、Ｈｙｄｒｅａ（登録商標）、Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔ Ａｃｅｔａｔｅ（登録商標）、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンリン酸ナトリウム、ヒドロコルチゾンコハク酸ナトリウム、リン酸ヒドロコルトン、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブ、イブリツモマブチウキセタン、イダマイシン、ＩＣＬＵＳＩＧ（登録商標）、Ｉｆｅｘ（登録商標）、ＩＦＮ−アルファ、イホスファミド、ＩＬ−１１、ＩＬ−２、メシル酸イマチニブ、イミダゾールカルボキサミド、Ｉｎｌｙｔａ（登録商標）、インターフェロン−アルファ、インターフェロンアルファ−２ｂ（ＰＥＧ結合体）、インターロイキン−２、インターロイキン−１１、Ｉｎｔｒｏｎ Ａ（登録商標）（インターフェロンアルファ−２ｂ）、イピリムマブ、イリノテカン、イソトレチノイン、イストダックス、イクサベピロン、ジェブタナ、キドロラーゼ、キプロリス、ラナコート、ラパチニブ、Ｌ−アスパラギナーゼ、ＬＣＲ、レナリドマイド、レトロゾール、ロイコボリン、リューケラン、リューキン、リュープロリド、ロイロクリスチン、ロイスタチン、リポソームＡｒａ−Ｃ、液体プレド、ロムスチン、Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシン、リュープロン、リュープロンデポ、マルキボ、マチュレーン、マキシデックス、メクロレタミン、メクロレタミン塩酸塩、メドラロン、メドロール、メゲース、メゲストロール、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メスネックス、メトトレキサート、メトトレキサートナトリウム、メチルプレドニゾロン、メチコルテン、マイトマイシン、マイトマイシン−Ｃ、ミトキサントロン、Ｍ−プレドニゾール、ＭＴＣ、ＭＴＸ、ムスタルゲン、ムスチン、ムタマイシン、ミレラン、マイロセル、マイロターグ、ナベルビン、ネララビン、ネオサール、ニューラスタ、ニューメガ、ニューポゲン、ネクサバール、ニランドロン、ニロチニブ、ニルタミド、ニペント、ナイトロジェンマスタード、ノバルデックス、ノバントロン、Ｎｐｌａｔｅ、オクトレオチド、酢酸オクトレオチド、オファツムマブ、オンコスパール、オンコビン、オンタック、オンキサール、オプレベルキン、オラプレド、オラゾン、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルタンパク質結合物、パミドロネート、パニツムマブ、パンレチン、パラプラチン、パゾパニブ、ペディアプレド、ＰＥＧインターフェロン、ペガスパルゲース、ペグフィルグラスチム、ＰＥＧ−ＩＮＴＲＯＮ、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、ＰＥＭＥＴＲＥＸＥＤ、ペントスタチン、パージェタ、ペルツズマブ、フェニルアラニンマスタード、プラチノール、プラチノール−ＡＱ、ポナチニブ、プララトレキサート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレロン、プロカルバジン、ＰＲＯＣＲＩＴ、プロロイキン、プロリア、カルムスチンインプラントを伴うプロリフェプロスパン２０、プロベンジ、プリネトール、ラロキシフェン、レゴラフェニブ、レブリミド、リューマトレックス、リツキサン、リツキシマブ、ロフェロン−Ａ（インターフェロンアルファ−２ａ）、ロミデプシン、ロミプロスチム、ルベックス、ルビドマイシン塩酸塩、サンドスタチン、サンドスタチンＬＡＲ、サルグラモスチム、シプロイセル−Ｔ、ソリリス、ソル−コーテフ、ソル−メドロール、ソラフェニブ、ＳＰＲＹＣＥＬ、ＳＴＩ−５７１、スチバーガ、ストレプトゾシン、ＳＵ１１２４８、スニチニブ、スーテント、タモキシフェン、タルセバ、タルグレチン、タシグナ、タキソール、タキソテール、テモダール、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、ＴＥＳＰＡ、サリドマイド、サロミド、ＴｈｅｒａＣｙｓ、チオグアニン、チオグアニンタブロイド、チオホスホアミド、チオプレックス、チオテパ、ＴＩＣＥ、トポサール、トポテカン、トレミフェン、トリセル、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレンダ、トレチノイン、トレキソール、トリセノックス、ＴＳＰＡ、ＴＹＫＥＲＢ、バルルビシン、バルスター、バンデタニブ、ＶＣＲ、ベクティビックス、ベルバン、ベルケード、ＶｅＰｅｓｉｄ、ベサノイド、ビアデュール、ビダザ、ビンブラスチン、硫酸ビンブラスチン、ビンカサールＰｆｓ、ビンクリスチン、ビンクリスチンリポソーム、ビノレルビン、酒石酸ビノレルビン、ビスモデギブ、ＶＬＢ、ＶＭ−２６、ボリノスタット、ボトリエント、ＶＰ−１６、ブモン、ザーコリカプセル、キセロダ、Ｘｇｅｖａ、エルボイ、ザルトラップ、ザノサール、ゼルボラフ、ゼバリン、ジネカード、Ｚｉｖ−アフリベルセプト、ゾラデックス、ゾレドロン酸、ゾリンザ、及びゾメタからなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
  19. 細胞のアポトーシスを誘導する方法であって、
    前記細胞のアポトーシスを誘導するのに効果的な条件下で、前記細胞を、ＨＩＦ１αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンと接触させる段階
    を含む、前記方法。
  20. 前記オリゴオキソピペラジンが、式Ｉ：
    Figure 2016510327
    のオリゴオキソピペラジンであり、
    式中、
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のそれぞれが、独立して、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    各Ｒ６が、独立して、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ａが、Ｘ１またはＣであり、
    Ｘ１が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｃが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、
    式中、
    各Ｘ'が、独立して、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、Ｎ（Ｒ''）２、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    各Ｒ''が、独立して、Ｈ、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ０が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｒ６が、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｂが、ＹまたはＤであり、
    Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''）２、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｄが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、
    式中、
    Ｒ５が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｒ６が、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｅが、Ｘ２またはＦであり、
    Ｘ２が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｆが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、
    式中、
    Ｒ６が、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｒ７が、アミノ酸側鎖であり；
    Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''）２、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグである、請求項１９に記載の方法。
  21. （ｉ）Ｒ１及びＲ２が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であるか、または、Ａが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、Ｒ０及びＲ３が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であり；
    （ｉｉ）各Ｒ''が、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    （ｉｉｉ）Ｂが、Ｄではない、請求項２０に記載の方法。
  22. Ｒ１及びＲ２が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基または水素結合供与基である、請求項２１に記載の方法。
  23. 前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ２−１２５またはＢＢ２−１６２である、請求項２２に記載の方法。
  24. Ａが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、Ｒ０及びＲ３が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基または水素結合供与基である、請求項２１に記載の方法。
  25. 前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ２−１６４である、請求項２４に記載の方法。
  26. 前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＡ：
    Figure 2016510327
    の式を有する、請求項２０に記載の方法。
  27. 式ＩＡの前記オリゴオキソピペラジンのＲ１、Ｒ２、Ｒ４、及びＲ５が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋４、ｉ＋６、及びｉ＋７のアミノ酸側鎖を模倣する、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＢ：
    Figure 2016510327
    の式を有する、請求項２０に記載の方法。
  29. 式ＩＢの前記オリゴオキソピペラジンのＲ１、Ｒ２、及びＲ４が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋４、及びｉ＋７のアミノ酸側鎖を模倣する、請求項２８に記載の方法。
  30. 前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＣ：
    Figure 2016510327
    の式を有する、請求項２０に記載の方法。
  31. 式ＩＣの前記オリゴオキソピペラジンのＲ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋２、ｉ＋３、ｉ＋４、及びｉ＋７のアミノ酸側鎖を模倣する、請求項３０に記載の方法。
  32. 細胞の生存及び／または増殖を減少させる方法であって、
    前記細胞の生存及び／または増殖を減少させるのに効果的な条件下で、前記細胞を、ＨＩＦ１αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンと接触させる段階
    を含む、前記方法。
  33. 前記細胞が、がん性である、またはがん性細胞を含有する組織の内皮血管内に含有される、請求項３２に記載の方法。
  34. 前記オリゴオキソピペラジンが、式Ｉ：
    Figure 2016510327
    のオリゴオキソピペラジンであり、
    式中、
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のそれぞれが、独立して、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    各Ｒ６が、独立して、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ａが、Ｘ１またはＣであり、
    Ｘ１が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｃが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、
    式中、
    各Ｘ'が、独立して、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、Ｎ（Ｒ''）２、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    各Ｒ''が、独立して、Ｈ、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ０が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｒ６が、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｂが、ＹまたはＤであり、
    Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''）２、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｄが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、
    式中、
    Ｒ５が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｒ６が、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｅが、Ｘ２またはＦであり、
    Ｘ２が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｆが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、
    式中、
    Ｒ６が、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｒ７が、アミノ酸側鎖であり；
    Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''）２、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグである、請求項３２に記載の方法。
  35. （ｉ）Ｒ１及びＲ２が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であるか、または、Ａが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、Ｒ０及びＲ３が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であり；
    （ｉｉ）各Ｒ''が、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    （ｉｉｉ）Ｂが、Ｄではない、請求項３４に記載の方法。
  36. Ｒ１及びＲ２が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基または水素結合供与基である、請求項３５に記載の方法。
  37. 前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ２−１２５またはＢＢ２−１６２である、請求項３６に記載の方法。
  38. Ａが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、Ｒ０及びＲ３が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基または水素結合供与基である、請求項３５に記載の方法。
  39. 前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ２−１６４である、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＡ：
    Figure 2016510327
    の式を有する、請求項３４に記載の方法。
  41. 式ＩＡの前記オリゴオキソピペラジンのＲ１、Ｒ２、Ｒ４、及びＲ５が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋４、ｉ＋６、及びｉ＋７のアミノ酸側鎖を模倣する、請求項４０に記載の方法。
  42. 前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＢ：
    Figure 2016510327
    の式を有する、請求項３４に記載の方法。
  43. 式ＩＢの前記オリゴオキソピペラジンのＲ１、Ｒ２、及びＲ４が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋４、及びｉ＋７のアミノ酸側鎖を模倣する、請求項４２に記載の方法。
  44. 前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＣ：
    Figure 2016510327
    の式を有する、請求項３４に記載の方法。
  45. 式ＩＣの前記オリゴオキソピペラジンのＲ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋２、ｉ＋３、ｉ＋４、及びｉ＋７のアミノ酸側鎖を模倣する、請求項４４に記載の方法。
  46. 細胞内でのｐ５３の不活性化を予防するまたは元に戻す方法であって、
    細胞におけるｐ５３の不活性化を予防するまたは元に戻すのに効果的な条件下で、前記細胞を、ＨＩＦ１αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンと接触させる段階
    を含む、前記方法。
  47. 前記オリゴオキソピペラジンが、式Ｉ：
    Figure 2016510327
    のオリゴオキソピペラジンであり、
    式中、
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のそれぞれが、独立して、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    各Ｒ６が、独立して、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ａが、Ｘ１またはＣであり、
    Ｘ１が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｃが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、
    式中、
    各Ｘ'が、独立して、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、Ｎ（Ｒ''）２、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    各Ｒ''が、独立して、Ｈ、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ０が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｒ６が、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｂが、ＹまたはＤであり、
    Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''）２、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｄが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、
    式中、
    Ｒ５が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｒ６が、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｅが、Ｘ２またはＦであり、
    Ｘ２が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｆが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、
    式中、
    Ｒ６が、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｒ７が、アミノ酸側鎖であり；
    Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''）２、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグである、請求項４６に記載の方法。
  48. （ｉ）Ｒ１及びＲ２が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であるか、または、Ａが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、Ｒ０及びＲ３が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であり；
    （ｉｉ）各Ｒ''が、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    （ｉｉｉ）Ｂが、Ｄではない、請求項４７に記載の方法。
  49. Ｒ１及びＲ２が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基または水素結合供与基である、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ２−１２５またはＢＢ２−１６２である、請求項４９に記載の方法。
  51. Ａが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、Ｒ０及びＲ３が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基または水素結合供与基である、請求項４８に記載の方法。
  52. 前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ２−１６４である、請求項５１に記載の方法。
  53. 前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＡ：
    Figure 2016510327
    の式を有する、請求項４７に記載の方法。
  54. 式ＩＡの前記オリゴオキソピペラジンのＲ１、Ｒ２、Ｒ４、及びＲ５が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋４、ｉ＋６、及びｉ＋７のアミノ酸側鎖を模倣する、請求項５３に記載の方法。
  55. 前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＢ：
    Figure 2016510327
    の式を有する、請求項４７に記載の方法。
  56. 式ＩＢの前記オリゴオキソピペラジンのＲ１、Ｒ２、及びＲ４が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋４、及びｉ＋７のアミノ酸側鎖を模倣する、請求項５５に記載の方法。
  57. 前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＣ：
    Figure 2016510327
    の式を有する、請求項４７に記載の方法。
  58. 式ＩＣの前記オリゴオキソピペラジンのＲ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋２、ｉ＋３、ｉ＋４、及びｉ＋７のアミノ酸側鎖を模倣する、請求項５７に記載の方法。
  59. 細胞における、ｐ３００が媒介する転写因子のアセチル化を阻害する方法であって、
    前記細胞における、ｐ３００が媒介する前記転写因子のアセチル化を阻害するのに効果的な条件下で、前記細胞を、ＨＩＦ１αのＣ末端トランス活性化ドメインのヘリックスαＢを実質的に模倣するオリゴオキソピペラジンと接触させる段階
    を含む、前記方法。
  60. 前記転写因子が、ｐ５３である、請求項５９に記載の方法。
  61. 前記オリゴオキソピペラジンが、式Ｉ：
    Figure 2016510327
    のオリゴオキソピペラジンであり、
    式中、
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のそれぞれが、独立して、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    各Ｒ６が、独立して、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ａが、Ｘ１またはＣであり、
    Ｘ１が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｃが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、
    式中、
    各Ｘ'が、独立して、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、Ｎ（Ｒ''）２、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    各Ｒ''が、独立して、Ｈ、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ０が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｒ６が、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｂが、ＹまたはＤであり、
    Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''）２、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｄが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、
    式中、
    Ｒ５が、アミノ酸側鎖、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｒ６が、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｅが、Ｘ２またはＦであり、
    Ｘ２が、Ｈ、ＣＯＲ'、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アミンの保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｆが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、
    式中、
    Ｒ６が、Ｈ、Ｎ（Ｒ）２、ＯＲ、ハロゲン、アルキル、またはアリールであり；各Ｒが、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールであり；
    Ｒ７が、アミノ酸側鎖であり；
    Ｙが、ＯＲ'、ＣＯＲ'、Ｎ（Ｒ'''）２、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、カルボン酸の保護のための保護基、標的指向部分、またはタグであり；
    Ｒ'が、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    各Ｒ'''が、独立して、Ｈ、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグである、請求項５９に記載の方法。
  62. （ｉ）Ｒ１及びＲ２が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であるか、または、Ａが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、Ｒ０及びＲ３が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基もしくは水素結合供与基であり；
    （ｉｉ）各Ｒ''が、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、標的指向部分、またはタグであり；
    （ｉｉｉ）Ｂが、Ｄではない、請求項６１に記載の方法。
  63. Ｒ１及びＲ２が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基または水素結合供与基である、請求項６２に記載の方法。
  64. 前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ２−１２５またはＢＢ２−１６２である、請求項６３に記載の方法。
  65. Ａが、式
    Figure 2016510327
    部分であり、Ｒ０及びＲ３が、疎水性であり、Ｒ４が、水素結合受容基または水素結合供与基である、請求項６２に記載の方法。
  66. 前記オリゴオキソピペラジンが、ＢＢ２−１６４である、請求項６５に記載の方法。
  67. 前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＡ：
    Figure 2016510327
    の式を有する、請求項６１に記載の方法。
  68. 式ＩＡの前記オリゴオキソピペラジンのＲ１、Ｒ２、Ｒ４、及びＲ５が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋４、ｉ＋６、及びｉ＋７のアミノ酸側鎖を模倣する、請求項６７に記載の方法。
  69. 前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＢ：
    Figure 2016510327
    の式を有する、請求項６１に記載の方法。
  70. 式ＩＢの前記オリゴオキソピペラジンのＲ１、Ｒ２、及びＲ４が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋４、及びｉ＋７のアミノ酸側鎖を模倣する、請求項６９に記載の方法。
  71. 前記オリゴオキソピペラジンが、式ＩＣ：
    Figure 2016510327
    の式を有する、請求項６１に記載の方法。
  72. 式ＩＣの前記オリゴオキソピペラジンのＲ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４が、それぞれ、α−ヘリックスの残基ｉ、ｉ＋２、ｉ＋３、ｉ＋４、及びｉ＋７のアミノ酸側鎖を模倣する、請求項７１に記載の方法。
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