JP2016504041A - 高解像能融解の較正の改善 - Google Patents
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Abstract
Description
HRM実験を特定の機器で実行する前に別個の温度較正を特別な較正板によって実行する。全ての位置でのブロックに特有の温度データを機器のソフトウェアに保存し、その後、全ての位置の温度差を補正するためにHRM実験に使用する。この方法は、例えば、Applied Biosystems 7500及び7900HTリアルタイムPCRシステム(例えば、MeltDoctor(登録商標)HRM較正板、カタログ番号PN4425618)、及びBiorad CFXリアルタイムPCRシステム(例えば、融解較正キット、カタログ番号184-5020)に対して確立されている。
本明細書の第5の側面は、上述したようにPCR実験における温度較正を行うための方法を実行するためのコンピュータプログラムに関する。
用語「a」、「an」、及び「the」は、一般に、文脈上明確に指示する場合を除き、複数形を含む。
用語「核酸」又は「ポリヌクレオチド」は、互換的に使用でき、リボース核酸(ribose nucleic acid:RNA)又はデオキシリボース核酸(deoxyribose nucleic acid:DNA)重合体、又はそれらの類似体に相当する重合体を指す。これは、RNA及びDNA等のヌクレオチド、合成形態、及びそれらの修飾(例えば、化学的又は生化学的修飾)形態の重合体、並びに混合重合体(例えば、RNA及びDNAサブユニットを含む)を含む。修飾の例としては、メチル化、類似体による天然に存在する1個以上のヌクレオチドの置換、非荷電結合(メチルホスホン酸、リン酸トリエステル、アミドリン酸エステル、カルバミン酸エステル等)等のヌクレオチド間修飾、懸垂部分(ポリペプチド等)、挿入剤(例えば、アクリジン、ソラレン等)、キレート剤、アルキル化剤、並びに修飾結合(例えば、α―アノマー核酸等)を含む。また、水素結合及び他の化学的相互作用によって指定された配列に結合する能力においてポリヌクレオチドを模倣した合成分子も含まれる。典型的には、ヌクレオチド単量体はリン酸ジエステル結合を介して連結できるが、核酸の合成形態は他の結合を含むこともできる(例えば、ニールセン等、Science 254:1497-1500, 1991に記載のペプチド核酸)。核酸は、例えば、染色体若しくは染色体部分、ベクター(例えば、発現ベクター)、発現カセット、裸のDNA又はRNA重合体、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)産物、オリゴヌクレオチド、プローブ及びプライマーであるか、これらを含んでもよい。核酸は、例えば、一本鎖、二本鎖、又は三本鎖であってよく、特定の長さには限定されない。特に断らない限り、特定の核酸配列は明示された全ての配列に加えて相補配列を含む、又はそれらをコードする。
特定の態様では、蛍光性非共有結合二本鎖DNA結合色素の光の波長及びドナー発色団又はアクセプター発色団の光の波長は互いに分離され、それらの融解温度とは無関係に両方の融解事象の検出が可能となる。このことによる利点は、蛍光性非共有結合二本鎖DNA結合色素の発光波長及びドナー発色団又はアクセプター発色団の発光波長を、標的核酸及び二本鎖オリゴヌクレオチドの融解温度が同一又は少なくとも非常に近い場合でも識別できるということである。
配列番号01 5’-Cy5-TGG GGG TGG GGG TGG GGG TGG GGG T-P-3’
配列番号02 5’-ACC ACC CCC CCC ACC ACC CCC CCC A-BHQ-3-3’
既に述べたように、二本鎖オリゴヌクレオチドの融解温度の値の少なくとも一部が、増幅された特定の標的核酸の融解温度値の少なくとも一部と同じになるように、二本鎖オリゴヌクレオチド(較正物質)を設計するのが有利である。従って、較正物質は、増幅されて分析される標的核酸に依存する任意の配列を含むことができる。配列番号01及び配列番号02は、本実施例1〜3の較正物質として適しているとわかっている1つの可能性と考えなければならない。
特定の態様では、蛍光性非共有結合二本鎖DNA結合色素は、LightCycler(登録商標)480 Resolight Dyeである。一態様では、ドナー発色団はCy5である。一態様では、アクセプター色素は消光剤分子である。特定の態様では、消光剤分子は、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3、及びBHQ-4からなる群から選択される暗消光剤である。より特定の態様では、消光剤分子はBHQ-3である。
一態様で、ドナー発色団は二本鎖オリゴヌクレオチドの第1鎖内の位置で共有結合し、アクセプター発色団は二本鎖オリゴヌクレオチドの第2鎖内の位置で共有結合して、第1鎖内の位置と第2鎖内の位置が互いに近接している。特定の態様では、第1鎖内の位置と第2鎖内の位置は、二本鎖オリゴヌクレオチドの互いに反対の位置にある。
特定の態様では、蛍光性非共有結合二本鎖DNA結合色素は、LightCycler(登録商標)480 Resolight Dyeである。一態様では、ドナー発色団はCy5である。一態様では、アクセプター色素は消光剤分子である。特定の態様では、消光剤分子は、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3、及びBHQ-4からなる群から選択される暗消光剤である。より特定の態様では、消光剤分子はBHQ-3である。
特定の態様では、蛍光性非共有結合二本鎖DNA結合色素は、LightCycler(登録商標)480 Resolight Dyeである。一態様では、ドナー発色団はCy5である。一態様では、アクセプター色素は消光剤分子である。特定の態様では、消光剤分子は、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3、及びBHQ-4からなる群から選択される暗消光剤である。より特定の態様では、消光剤分子はBHQ-3である。
a)位置間の温度差は分析する標的の温度に依存するので、較正物質のTmは典型的な標的核酸のTmと同程度である必要がある。
b)標的の増幅効率を阻害しない。これは較正物質の存在によって全く影響を受けないPCR解析から客観的な結果を得るために重要である。
c)標的核酸及び較正物質の融解曲線形状の干渉を低減させるために蛍光性非共有結合DNA結合色素と較正物質との発光波長の重なりを最小にする。
d)較正物質のTmの信頼できる読み出し値を得るのに十分な融解信号強度を発生する。
較正物質の設計
較正物質は、2つの25量体の相補鎖で構成されている。一方の鎖の5’末端は蛍光色素Cy5で標識され、3’末端はリン酸化されている。他方の鎖の3’末端は暗消光剤BHQ-3(Biosearch Technologies社)で標識されている。
配列番号01 5’-Cy5-TGG GGG TGG GGG TGG GGG TGG GGG T-P-3’
配列番号02 5’-ACC ACC CCC CCC ACC ACC CCC CCC A-BHQ-3-3’
以下に示す実験は、各々、本明細書の較正物質を使用する場合と使用しない場合の両方で行われる。
実施例2
熱較正されていないPCRブロックでの較正物質使用による温度分解能の改善
2つの一塩基多型(SNP)領域を2ngヒトのゲノムDNA(異なるヒト血液試料から精製)から増幅した。
ADD1遺伝子領域を、以下のプライマー配列を用いて増幅した。
配列番号03 5’-GAT GGC TGA ACT CTG GC-3’
配列番号04 5’-CGA CTT GGG ACT GCT TC-3’
Cyp2C9遺伝子領域を、以下のプライマー配列を用いて増幅した。
配列番号05 5’-CGT TTC TCC CTC ATG ACG-3’
配列番号06 5’-TCA GTG ATA TGG AGT AGG GTC-3’
以下のPCR及び融解の手順をLightCycler(登録商標)96リアルタイムPCR機器(Roche Applied Science社の試作装置)を用いて実施した。
実施例3
事前に熱較正したPCRブロックで較正物質の使用により改良された温度分解能
1つの一塩基多型(SNP)領域を88の異なるヒトのゲノムDNA(異なるヒト血液試料から精製)から増幅した。
TNFα遺伝子領域を、以下のプライマー配列を用いて増幅した。
配列番号07 5’-GGG CTA TGG AAG TCG AGT A-3’
配列番号08 5’-CGT CCC CTG TAT CCA TAC C-3’
以下のPCR及び融解の手順をLightCycler(登録商標)96リアルタイムPCR機器(Roche Applied Science社の試作装置)を用いて実施した。
Claims (15)
- PCR実験における温度較正方法であって、下記工程を含む前記方法:
a)マルチウェルプレートの各ウェルに、蛍光性非共有結合二本鎖DNA結合色素を含む試料中の特定の標的核酸を増幅するための反応混合物を供給する工程、
b)ドナー発色団が二本鎖オリゴヌクレオチドの第1鎖に共有結合し、アクセプター発色団が二本鎖オリゴヌクレオチドの第2鎖に共有結合する二本鎖オリゴヌクレオチドを各ウェルに供給する工程、
c)特定の標的核酸を各ウェルで増幅させる工程、
d)増幅された特定の標的核酸を各ウェルで融解し、蛍光性非共有結合二本鎖DNA結合色素からの光の放出を減少させ、二本鎖オリゴヌクレオチドを各ウェルで融解し、ドナー発色団とアクセプター発色団とを空間的に分離することによって、ドナー発色団からの光の放出を増加させ、又はアクセプター発色団からの光の放出を減少させる工程、
e)蛍光性非共有結合二本鎖DNA結合色素からの光の放出の減少を検出することによって増幅された特定の標的核酸の融解温度値を各ウェルで監視し、ドナー発色団からの光の放出の増加又はアクセプター発色団からの光の放出の減少を検出することによって、二本鎖オリゴヌクレオチドの融解温度値を各ウェルで別々に監視する工程、及び、
f)二本鎖オリゴヌクレオチドの融解温度値のウェル間差に基づいて、増幅された特定の標的核酸に対する融解温度値を各ウェルで補正する工程。 - 特定の標的核酸が一塩基多型を含む、請求項1の方法。
- ドナー発色団が二本鎖オリゴヌクレオチドの第1鎖内のヌクレオチドに共有結合し、アクセプター発色団が二本鎖オリゴヌクレオチドの第2鎖内のヌクレオチドに共有結合し、第1鎖内のヌクレオチド及び第2鎖内のヌクレオチドが相補的な塩基対を形成する、請求項1又は2の方法。
- ドナー発色団が二本鎖オリゴヌクレオチドの第1鎖の5’末端に共有結合し、アクセプター発色団は二本鎖オリゴヌクレオチドの第2鎖の3’末端に共有結合しているか、又はドナー発色団は二本鎖オリゴヌクレオチドの第1鎖の3’末端に共有結合し、アクセプター発色団は二本鎖オリゴヌクレオチドの第2鎖の5’末端に共有結合している、請求項3の方法。
- 蛍光性非共有結合二本鎖DNA結合色素の光の波長及びドナー発色団の光の波長が互いに分離されている、請求項1〜4の方法。
- 蛍光性非共有結合二本鎖DNA結合色素が、LightCycler(登録商標)480 Resolight Dyeである、請求項1〜5の方法。
- ドナー発色団がCy5である、請求項1〜6の方法。
- アクセプター発色団が消光剤分子である、請求項1〜7の方法。
- 消光剤分子は、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3、及びBHQ-4からなる群から選択される暗消光剤である、請求項8の方法。
- 二本鎖オリゴヌクレオチドは、二本鎖オリゴヌクレオチドの融解温度と増幅された特定の標的核酸の融解温度との差が5℃以下であるように設計される、請求項1〜9の方法。
- 二本鎖オリゴヌクレオチドが、二本鎖オリゴヌクレオチドの融解温度と増幅された特定の標的核酸の融解温度が同一であるように設計される、請求項1〜9の方法。
- 請求項1〜11のPCR実験における温度較正を行うためのキットであって、下記を含む前記キット:
a)試料中の特定の標的核酸配列を増幅するために必要な全ての試薬、
b)蛍光性非共有結合二本鎖DNA結合色素、及び、
c)ドナー発色団が二本鎖オリゴヌクレオチドの第1鎖に共有結合し、アクセプター発色団が二本鎖オリゴヌクレオチドの第2鎖に共有結合する二本鎖オリゴヌクレオチド。 - 請求項1〜11のPCR実験における温度較正を行うための反応混合物であって、下記を含む前記反応混合物:
a)標的核酸配列、
b)特定の標的核酸配列を増幅するために必要な全ての試薬、
c)蛍光性非共有結合二本鎖DNA結合色素、及び、
d)ドナー発色団が二本鎖オリゴヌクレオチドの第1鎖に共有結合し、アクセプター発色団が二本鎖オリゴヌクレオチドの第2鎖に共有結合する二本鎖オリゴヌクレオチド。 - 請求項1〜11のPCR実験における温度較正を行うための装置。
- 請求項1〜11の方法を実行するコンピュータプログラム。
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Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH11155598A (ja) * | 1997-09-23 | 1999-06-15 | Becton Dickinson & Co | 蛍光消光による核酸の検出 |
JP2010504745A (ja) * | 2006-09-28 | 2010-02-18 | ビオメリュー | 新規な標識化オリゴヌクレオチド |
JP2011519570A (ja) * | 2008-05-06 | 2011-07-14 | キアゲン ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 反応における複数の核酸配列の同時検出 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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EP0232967B1 (en) * | 1986-01-10 | 1993-04-28 | Amoco Corporation | Competitive homogeneous assay |
US20040022764A1 (en) * | 2002-07-31 | 2004-02-05 | Hanan Polansky | Inhibition of microcompetition with a foreign polynucleotide as treatment of chronic disease |
EP2772552B1 (en) | 2002-10-23 | 2018-10-10 | University of Utah Research Foundation | Amplicon melting analysis with saturation dyes |
US7785786B2 (en) * | 2006-01-23 | 2010-08-31 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Methods for detecting nucleic acids using multiple signals |
US9542526B2 (en) * | 2009-03-10 | 2017-01-10 | Canon U.S. Life Sciences, Inc. | Method and system for temperature correction in thermal melt analysis |
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH11155598A (ja) * | 1997-09-23 | 1999-06-15 | Becton Dickinson & Co | 蛍光消光による核酸の検出 |
JP2010504745A (ja) * | 2006-09-28 | 2010-02-18 | ビオメリュー | 新規な標識化オリゴヌクレオチド |
JP2011519570A (ja) * | 2008-05-06 | 2011-07-14 | キアゲン ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 反応における複数の核酸配列の同時検出 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
GUNDRY CN ET AL: "Base-pair neutral homozygotes can be discriminated by calibrated high-resolution melting of small am", NUCLEIC ACIDS RESEARCH, vol. 36, no. 10, JPN6017025441, 2008, pages 3401 - 3408, XP055059069, ISSN: 0003735949, DOI: 10.1093/nar/gkn204 * |
IDAHO TECHNOLOGY INC: "Small amplicon gentyping using internal temperature calibration and high-resolution melting", BIOTECHNIQUES, vol. 44, no. 4, JPN6017025443, 2008, pages 577 - 578, XP002695209, ISSN: 0003735950, DOI: 10.2144/000112882 * |
MARRAS SAE: "Selection of fluorophore and quencher pairs for fluorescent nucleic acid hybridization probes", METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY: FLUORESCENT ENERGY TRANSFER NUCLEIC ACID PROBES: DESIGNS AND PROTOCOLS, vol. 335, JPN6017025444, 2006, pages 3 - 16, XP055193619, ISSN: 0003735951, DOI: 10.1385/1-59745-069-3:3 * |
ZHOU L ET AL: "High-resolution DNA melting analysis for simultaneous mutation scanning and genotyping in solution", CLINICAL CHEMISTRY, vol. 51, no. 10, JPN6017025447, 2005, pages 1770 - 1777, XP008118572, ISSN: 0003735952, DOI: 10.1373/clinchem.2005.054924 * |
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