JP2016190824A - 血小板製剤の製造方法および製造装置、およびこの製造方法またはこの製造装置で製造された血小板製剤 - Google Patents

Abstract

【課題】巨核球と血小板とが含まれる液体から効率的に血小板のみを回収、濃縮および洗浄できる血小板製剤の製造方法および製造装置、およびこの製造方法またはこの製造装置で製造された血小板製剤を提供することである。【解決手段】液体中にある分離部材である分離膜７に巨核球と血小板とが含まれる液体である培養液を通過させ、分離膜７により巨核球を捕捉して巨核球と血小板とを分離する分離工程と、液体中にある濃縮ユニット１３の中空糸膜１５ａに分離工程で分離した血小板が含まれる培養液を通過させ、濃縮ユニット１３の中空糸膜１５ａにより血小板を捕捉した後に回収用の液体である回収液で捕捉した血小板を回収することで単位体積中に含まれる血小板数を増加させる濃縮工程と、濃縮工程に供給する血小板が含まれる液体の量を調整する供給量調整工程と、からなる。【選択図】図１

Description

本発明は、血小板製剤の製造方法、製造装置および血小板製剤に関する。詳しくは、ｉＰＳ細胞から誘導された巨核球から産生された血小板からなる血小板製剤を製造する方法および製造装置、およびこの製造方法またはこの製造装置で製造された血小板製剤に関する。

従来、体液や組織から採取した細胞の中から有用な細胞を分離し、増殖させる方法や装置が公知である。例えば特許文献１の如くである。特許文献１に記載の細胞培養装置は、細胞分離キットによって分離した特定の細胞を細胞培養容器で培養し、細胞回収キットによって洗浄、濃縮するものである。

一方、巨核球から血小板を産生する技術が知られている。血小板は、無核細胞であるため、血小板のみを培養して増殖させることができない。このため、有核細胞である巨核球をｉＰＳ細胞から分化誘導により生成し、培養により増殖させた後に巨核球から血小板を産生させている。従って、血小板は、巨核球の培養液中で産生されるので、血小板を産生せずに残留している巨核球と混在した状態で存在している。特許文献に記載の技術は、分離した特定の有核細胞を培養により増殖させて回収する技術であるため、血小板のような無核細胞を異なる種類の細胞である巨核球と混在している培養液中から効率よく回収できない点で不利であった。

国際公開第２０１２／００２４９７号

本発明の目的は、巨核球と血小板とが含まれる液体から効率的に血小板のみを回収、濃縮および洗浄できる血小板製剤の製造方法および製造装置、およびこの製造方法またはこの製造装置で製造された血小板製剤を提供することである。

本発明の解決しようとする課題は以上の如くであり、次にこの課題を解決するための手段を説明する。

即ち、本発明は、液体中にある分離部材に巨核球と血小板とが含まれる液体を通過させ、分離部材により巨核球を捕捉して巨核球と血小板とを分離する分離工程と、液体中にある濃縮部材に分離工程で分離した血小板が含まれる液体を通過させ、濃縮部材により血小板を捕捉した後に回収用の液体で捕捉した血小板を回収することで単位体積中に含まれる血小板数を増加させる濃縮工程と、濃縮工程に供給する血小板が含まれる液体の量を調整する供給量調整工程と、からなる血小板製剤の製造方法である。

本発明は、前記分離工程において、前記分離部材により巨核球を捕捉して巨核球と血小板とを分離するとともに巨核球に液体の流れによる外力を加えて巨核球から血小板を産生させるものである。

本発明は、前記分離工程において、巨核球と血小板とが含まれる液体の供給が完了した後に液体を供給して前記分離部材を通過していない巨核球と血小板とが含まれる液体を分離部材に通過させるものである。

本発明は、前記濃縮工程において、前記濃縮部材である中空糸膜の内部に分離した血小板が含まれる液体を供給し、中空糸膜によって血小板を捕捉した後に液体を中空糸膜の内部に供給して捕捉した血小板を洗浄するものである。

本発明は、前記濃縮工程において、前記濃縮部材である中空糸膜の内部に分離した血小板が含まれる液体を供給し、中空糸膜によって血小板を捕捉した後に液体を中空糸膜の内部に供給して捕捉した血小板を回収するものである。

本発明は、前記濃縮工程において、中空糸膜の外部の液体を排出した状態で中空糸膜の内部に液体を供給することによって捕捉した血小板を回収し、更に中空糸膜の内部に空気を供給して残留している血小板を回収するものである。

本発明は、前記濃縮工程によって単位体積中に含まれる血小板数を増加させた液体を液体中にある再分離部材に通過させることによって残留している巨核球を捕捉して巨核球と血小板とを分離する再分離工程をさらに実施するものである。

本発明は、前記供給量調整工程によって濃縮工程に供給する血小板が含まれる液体の量を調整し、前記分離工程と前記濃縮工程とを並行して実施するものである。

本発明は、液体中に巨核球を捕捉可能な分離部材が設けられ、液体中に供給された巨核球と血小板とが含まれる液体を分離部材に通過させることで巨核球を捕捉して巨核球と血小板とを分離する分離手段と、巨核球と血小板とが含まれる液体および血小板を回収する液体を分離手段に供給する分離供給手段と、液体中に血小板を捕捉可能な濃縮部材である中空糸膜が設けられ、液体に供給された血小板が含まれる液体を中空糸膜の内部に通過させることで血小板を捕捉して血小板数を増加させる濃縮手段と、血小板数を増加させた液体、血小板を洗浄する液体および血小板を回収する液体を中空糸膜の内部に供給する濃縮供給手段と、分離手段と濃縮手段とに接続され、分離手段から回収した血小板が含まれる液の量と濃縮手段の稼働状態から濃縮手段に供給する血小板が含まれる液の量を調整する供給量調整手段と、からなるものである。

本発明は、上述の血小板製剤の製造方法または上述の血小板製剤の製造装置で製造された血小板製剤である。

本発明は、以下に示すような効果を奏する。

本発明においては、分離および濃縮を効率的に行い、血小板製剤に不要な巨核球や不純物の除去と血小板の濃縮とが並行して連動するように行われる。これにより、巨核球と血小板とが含まれる液体から効率的に血小板のみを回収、濃縮および洗浄することができる。

本発明においては、分離後の液体中に含まれる血小板の数が増加する。これにより、巨核球と血小板とが含まれる液体から効率的に血小板のみを回収、濃縮および洗浄することができる。

本発明においては、分離されない血小板の数が減少する。これにより、巨核球と血小板とが含まれる液体から効率的に血小板のみを回収、濃縮および洗浄することができる。

本発明においては、血小板の濃縮時に不純物の除去が行われる。これにより、巨核球と血小板とが含まれる液体から効率的に血小板のみを回収、濃縮および洗浄することができる。

本発明においては、中空糸膜の内部に残留する血小板が減少する。これにより、巨核球と血小板とが含まれる液体から効率的に血小板のみを回収、濃縮および洗浄することができる。

本発明においては、中空糸膜の内部に残留する血小板がさらに減少する。これにより、巨核球と血小板とが含まれる液体から効率的に血小板のみを回収、濃縮および洗浄することができる。

本発明においては、残留している巨核球が短時間に除去される。これにより、巨核球と血小板とが含まれる液体から効率的に血小板のみを回収、濃縮および洗浄することができる。

本発明においては、血小板の濃縮工程での滞留時間が短縮されるとともに生産量が増加する。これにより、巨核球と血小板とが含まれる液体から効率的に血小板のみを回収、濃縮および洗浄することができる。

本発明の第一実施形態に係る血小板製剤製造装置の全体構成を示す概略図。 本発明の第一実施形態に係る血小板製剤製造装置における制御構成を示すブロック図。 本発明の第一実施形態に係る血小板製剤製造装置における分離ユニットの構成を示す概略図。 （ａ）本発明の第一実施形態に係る血小板製剤製造装置における濃縮ユニットの構成を示す概略図（ｂ）同じく中空糸膜におけるろ過の状態を示す模式図。 本発明の第一実施形態に係る血小板製剤製造装置において巨核球が分離膜に接触した状態を示す模式図。 本発明の第一実施形態に係る血小板製剤製造装置において旋回流によって一部の巨核球が血小板を産生している状態を示す模式図。 （ａ）本発明の第一実施形態に係る血小板製剤製造装置における分離工程を表すフローチャートを示す図（ｂ）濃縮工程（１回洗浄）を表すフローチャートを示す図。 本発明の第一実施形態に係る血小板製剤製造装置の制御態様を表すフローチャートを示す図。 本発明の第一実施形態に係る血小板製剤製造装置の分離工程の制御態様を表すフローチャートを示す図。 本発明の第一実施形態に係る血小板製剤製造装置の濃縮工程の制御態様を表すフローチャートを示す図。 本発明の第二実施形態に係る血小板製剤製造装置の全体構成を示す概略図。 本発明の第二実施形態に係る血小板製剤製造装置における濃縮工程（複数回洗浄）を表すフローチャートを示す図。 本発明の第二実施形態に係る血小板製剤製造装置の濃縮工程の制御態様を表すフローチャートを示す図。 本発明の第三実施形態に係る血小板製剤製造装置の全体構成を示す概略図。

まず、図１から図４を用いて、本発明に係る血小板製剤の製造装置の第一実施形態である血小板製剤製造装置１について説明する。なお、以下の各実施形態において、血小板製剤製造装置１を構成する各部材は、特に記載がない限り、非反応性ポリマー、生体親和性金属、ガラス等のうち用途や強度から適切な材料によって構成されている。具体的には、非反応性ポリマーとしては、アクリロニトリルブタジエンスチレンターポリマー等のアクリロニトリルポリマー、ポリ塩化ビニル等のハロゲン化ポリマー、ポリアミド、ポリイミドポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン等である。また、生体親和性金属としては、ステンレス鋼、チタン、白金およびこれらの合金、コバルトクロミウム合金等である。

また、本実施形態における血小板製剤製造装置１は、巨核球と巨核球から産生された血小板とが含まれる液体である培養液から血小板製剤を製造するものとする。なお、培養液は、ｉＰＳ細胞由来の未熟巨核球前駆細胞から巨核球を培養する培養工程と、巨核球から血小板を産生する産生工程とを経て製造される。培養工程において、巨核球は、未熟巨核球前駆細胞を播種した培地に二酸化炭素と酸素とを供給しながら撹拌、振盪することで培養される。巨核球は、段階的に培地の容量を増加させて所定数に到達するまで培養される。そして、産生工程にて、血小板は、培養された巨核球が封入された容器である培養液バッグ２に二酸化炭素と酸素とを供給しながら振盪することで産生される。培養液バッグ２は、産生工程終了後に二酸化炭素と酸素とが排気される。

図１に示すように、血小板製剤製造装置１は、培養液から血小板を分離し、濃縮および洗浄するものである。血小板製剤製造装置１は、培養液バッグ２、分離系流路３、分離供給手段である分離供給ポンプ４、分離手段である分離ユニット５、供給量調整手段である分離回収バッグ８、濃縮系流路９、濃縮供給手段である濃縮供給ポンプ１２、濃縮手段である濃縮ユニット１３、洗浄液バッグ１９、回収液バッグ２４、廃液バッグ２７、濃縮回収バッグ２９および制御装置３０（図２参照）を具備している。洗浄液バッグ１９、回収液バッグ２４、廃液バッグ２７、濃縮回収バッグ２９等は、分流型の三方弁を介して分離系流路３や濃縮系流路９に接続されている。

培養液バッグ２は、成熟した巨核球と成熟した巨核球から産生された血小板とが含まれる液体（以下、単に「培養液」と記す）を貯留するものである。培養液バッグ２は、培養液が封入されている。また、培養液バッグ２は、図示しない培養装置等に接続され、培養液を供給できるように構成されていてもよい。培養液バッグ２は、分離系流路３が着脱できるように接続されている。培養液バッグ２には、培養液バッグ２内の培養液の残量Ｃ１を検出する培養液量センサ２ａが設けられている。

分離系流路３は、培養液の流路である。分離系流路３は、分離供給ポンプ４を介して培養液バッグ２と分離ユニット５とを接続するように構成されている。また、分離系流路３は、分離ユニット５と分離回収バッグ８とを接続するように構成されている。すなわち、培養液バッグ２の培養液は、分離供給ポンプ４によって分離系流路３を通じて分離ユニット５に供給され、分離回収バッグ８に回収されるように構成されている。

分離供給手段である分離供給ポンプ４は、培養液や洗浄液を分離ユニット５に供給するものである。分離供給ポンプ４は、例えばローラーポンプまたは連続シリンジポンプから構成されるがこれに限定するものではない。分離供給ポンプ４は、分離系流路３の途中部に設けられている。分離供給ポンプ４は、培養液バッグ２の培養液を分離ユニット５に供給するように構成されている。分離供給ポンプ４は、任意の流量で培養液を分離ユニット５に供給できるように構成されている。なお、本実施形態において、血小板製剤製造装置１は、分離供給ポンプ４によって培養液を供給する構成としたがこれに限定されるものではなく、重力滴下方式等でもよい。

分離手段である分離ユニット５は、培養液に含まれる巨核球と血小板とを分離するとともに、巨核球から血小板を産生させるものである。図３に示すように、分離ユニット５は、分離用筐体６と分離部材である分離膜７とから構成されている。分離用筐体６には、分離供給口６ａと分離排出口６ｂとが形成され、分離系流路３がそれぞれ接続されている。分離用筐体６は、分離系流路３を通じて分離供給口６ａから培養液バッグ２の培養液が供給されるとともに、分離排出口６ｂから分離系流路３を通じて供給量調整手段である分離回収バッグ８に培養液が排出されるように構成されている。本実施形態において、分離用筐体６は、略円筒状に形成されている。分離用筐体６は、その軸心が垂直方向に延びるようにして配置され、下面に分離供給口６ａが形成され上面に分離排出口６ｂが形成されている。つまり、分離ユニット５は、培養液が下面から上面に向かって重力に逆らうように供給される（図３における矢印参照）。

分離膜７は、巨核球と血小板とを分離するものである。分離膜７は、複数の不織布や網目状素材を板状に積層させたフィルター７ａが培養液の流れに対抗できる程度の十分な強度を有するサポートスクリーン７ｂに支持されて構成されている。分離膜７は、分離用筐体６の分離供給口６ａと分離排出口６ｂとの間に分離用筐体６を仕切るようにして分離用筐体６の内部に配置されている。本実施形態において、分離膜７は、円筒状に形成されている。分離膜７は、その側面（曲面部分）からのみ培養液が通過できるように構成されている。分離膜７は、分離供給口６ａと分離排出口６ｂとの間を複数の区画に仕切るように配置してもよい。分離用筐体６に設けられる分離膜７の大きさや数は、分離ユニット５における培養液の流れを阻害しない程度であれば特に限定されるものではない。

分離膜７は、フィルター７ａが分離用筐体６の分離供給口６ａ側になるように配置されている。分離供給口６ａから供給された培養液は、分離膜７を通過した後に分離用筐体６の分離排出口６ｂから排出される。このように構成することで、分離供給ポンプ４によって分離ユニット５に供給されている培養液の流れの中にある分離膜７のフィルター７ａ側（上流側）は、分離供給ポンプ４によって分離ユニット５に供給されている培養液の流れから受ける力(以下、単に「培養液の流れから受ける力」と記す)が加わっている。

分離膜７のフィルター７ａは、培養液に含まれる血小板が十分に通過でき、培養液に含まれる巨核球が通過を抑制される大きさの隙間が形成されている（図５参照）。分離膜７のサポートスクリーン７ｂは、格子状に形成され、フィルター７ａを通過した血小板や培養液の流れを阻害しない十分な隙間を有するように構成されている。これにより、分離膜７は、培養液の流れによる力を受け止めつつ培養液に含まれる巨核球をフィルター７ａで捕捉し、巨核球と血小板とを分離することができる。また、サポートスクリーン７ｂの形状は格子状に限定されるものではなく、フィルター７ａを支持でき、かつ血小板や培養液の流れを阻害しない十分な隙間を有するものであればよい。

供給量調整手段である分離回収バッグ８は、分離ユニット５で巨核球が分離された培養液を回収するものである。分離回収バッグ８は、分離系流路３が着脱できるように接続されている。分離回収バッグ８は、分離系流路３を通じて分離ユニット５から排出された培養液が供給されるように構成されている。さらに、分離回収バッグ８は、濃縮系流路９が接続されている。分離回収バッグ８は、濃縮系流路９を通じて培養液が濃縮手段である濃縮ユニット１３に排出されるように構成されている。従って、分離ユニット５で処理された培養液は、一旦分離回収バッグ８で貯留された後に濃縮ユニット１３に供給される。これにより、分離回収バッグ８は、分離ユニット５で巨核球が分離された培養液を回収する回収手段としての機能と濃縮ユニット１３に供給される培養液の流量を調整する供給量調整手段（バッファ）としての機能とを有する。つまり、分離回収バッグ８は、上流工程である分離工程（分離ユニット５）の処理能力と下流工程である濃縮工程（濃縮ユニット１３）の処理能力との差を調整する供給量調整工程を担っている。分離回収バッグ８には、分離回収バッグ８内の培養液の回収量Ｃ２を検出する分離回収量センサ８ａが設けられている。

濃縮系流路９は、巨核球が分離された培養液の流路である。濃縮系流路９は、濃縮供給ポンプ１２を介して分離回収バッグ８と濃縮ユニット１３とを接続するように構成されている。また、濃縮系流路９は、濃縮ユニット１３と濃縮回収バッグ２９とを接続するように構成されている。すなわち、分離回収バッグ８の培養液は、濃縮系流路９を通じて濃縮ユニット１３に供給され、濃縮回収バッグ２９に回収されるように構成されている。濃縮系流路９には、空気用三方弁１０を介して空気流路１１が接続されている。空気流路１１には、無菌化されたエアフィルタ１１ａが取り付けられている。濃縮系流路９は、空気用三方弁１０を開状態に切り替えることによって分離回収バッグ８との連通が遮断され、空気流路１１に連通される。これにより、濃縮系流路９には、空気用三方弁１０の切り替えによって空気流路１１を通じてエアフィルタ１１ａから空気が供給されるように構成されている。

濃縮供給手段である濃縮供給ポンプ１２は、培養液、洗浄液、回収液および空気を濃縮ユニット１３に供給するものである。濃縮供給ポンプ１２は、例えばローラーポンプまたは連続シリンジポンプから構成されるがこれに限定するものではない。濃縮供給ポンプ１２は、濃縮系流路９の途中部であって空気用三方弁１０よりも下流側に設けられている。濃縮供給ポンプ１２は、分離回収バッグ８の培養液を濃縮ユニット１３に供給するように構成されている。濃縮供給ポンプ１２は、任意の流量で培養液を濃縮ユニット１３に供給できるように構成されている。なお、本実施形態において、血小板製剤製造装置１は、濃縮供給ポンプ１２によって培養液を供給する構成としたがこれに限定されるものではなく、重力滴下方式等でもよい。

濃縮手段である濃縮ユニット１３は、培養液に含まれる血小板を濃縮するものである。図４（ａ）に示すように、濃縮ユニット１３は、濃縮用筐体１４と濃縮部材である中空糸膜モジュール１５とから構成されている。濃縮用筐体１４には、中空糸膜供給口１４ａと中空糸膜排出口１４ｂとが形成されている。中空糸膜供給口１４ａには、濃縮系流路９が接続されている。濃縮用筐体１４は、濃縮系流路９を通じて中空糸膜供給口１４ａから分離回収バッグ８の培養液が供給される。図１に示すように、中空糸膜排出口１４ｂには、濃縮排出用二方弁１６を介して濃縮系流路９が接続されている。中空糸膜排出口１４ｂは、濃縮排出用二方弁１６を開状態に切り替えることによって中空糸膜モジュール１５の中空糸膜１５ａの内部の液体や血小板を外部に排出する状態に変更できるように構成されている。これにより、濃縮用筐体１４は、濃縮排出用二方弁１６の切り替えによって中空糸膜排出口１４ｂから濃縮系流路９を通じて濃縮回収バッグ２９に血小板が排出されるように構成されている。

さらに、図１と図４（ａ）とに示すように、濃縮用筐体１４には、筐体供給口１４ｃと筐体排出口１４ｄとが形成されている。筐体供給口１４ｃには、濃縮筐体用三方弁１７を介して濃縮供給ポンプ１２よりも下流側に濃縮筐体流路１８が接続されている。筐体排出口１４ｄには、廃液流路２８が接続されている。濃縮用筐体１４は、濃縮筐体流路１８を通じて筐体供給口１４ｃから洗浄液が供給されるとともに（図４白塗矢印参照）、筐体排出口１４ｄから廃液流路２８を通じて培養液や洗浄液が排出されるように構成されている（薄墨矢印参照）。濃縮系流路９は、濃縮筐体用三方弁１７を開状態に切り替えることによって中空糸膜モジュール１５との連通が遮断され、濃縮用筐体１４に連通される。これにより、濃縮用筐体１４には、濃縮筐体用三方弁１７の切り替えによって筐体供給口１４ｃから濃縮筐体流路１８を通じて洗浄液が供給されるように構成されている。つまり、濃縮用筐体１４は、濃縮筐体用三方弁１７が閉状態の場合、濃縮系流路９と中空糸膜供給口１４ａとが連通されて中空糸膜供給口１４ａから培養液、洗浄液、回収液および空気が供給できるようになる。一方、濃縮用筐体１４は、濃縮筐体用三方弁１７が開状態の場合、濃縮筐体流路１８を介して濃縮系流路９と筐体供給口１４ｃとが連通されて筐体供給口１４ｃから洗浄液や空気が供給可能になる。本実施形態において、濃縮用筐体１４は、略円筒状に形成されている。濃縮用筐体１４は、その軸心が垂直方向に延びるようにして配置されている。濃縮用筐体１４の上面には、中空糸膜供給口１４ａが形成され、下面には、中空糸膜排出口１４ｂが形成されている。さらに、濃縮用筐体１４の中空糸膜排出口１４ｂ側の側面には、筐体供給口１４ｃが形成され、中空糸膜供給口１４ａ側の側面には、筐体排出口１４ｄが形成されている。

中空糸膜モジュール１５は、培養液から血小板をろ過するものである。中空糸膜モジュール１５は、中空糸膜１５ａおよび隔壁部材１５ｂ等から構成されている。中空糸膜１５ａは、例えばポリスルホン製中空糸膜１５ａから形成され、必要な膜交換性能および透過抵抗を考慮して構成されている。図４（ｂ）に示すように、中空糸膜１５ａは、膜交換性能を確保するために必要な分量を束にして濃縮用筐体１４の内部に配置されている。中空糸膜１５ａには、血小板の大きさよりも小さい孔が形成されており、血小板のみが中空糸膜１５ａの内部に残留するように構成されている。中空糸膜１５ａの両端部は、その両端面が開口した状態で隔壁部材１５ｂに固定されている。本実施形態において、中空糸膜１５ａは、隔壁部材１５ｂから構成される円筒状のモジュール内に配置され、その両端から培養液を中空糸の内部に供給できるように構成されている。

図４（ａ）に示すように、中空糸膜モジュール１５は、濃縮用筐体１４の内部に着脱自在に設けられている。中空糸膜モジュール１５は、両端の隔壁部材１５ｂが濃縮用筐体１４の中空糸膜供給口１４ａ側端部と中空糸膜排出口１４ｂ側端部とに配置されている。隔壁部材１５ｂは、水密性を有する状態で濃縮用筐体１４の内部を仕切るように固定されている。これにより、濃縮ユニット１３は、濃縮用筐体１４の中空糸膜供給口１４ａ側端部に隔壁部材１５ｂによって供給室１４ｅが構成され、濃縮用筐体１４の中空糸膜排出口１４ｂ側端部に隔壁部材１５ｂによって排出室１４ｆが構成されている。つまり、濃縮ユニット１３は、濃縮用筐体１４の内部に中空糸膜モジュール１５を挟むようにして中空糸膜供給口１４ａが形成されている供給室１４ｅと中空糸膜排出口１４ｂが形成されている排出室１４ｆとが構成されている。濃縮ユニット１３の供給室１４ｅと排出室１４ｆとは中空糸膜１５ａによって連通されている。従って、濃縮ユニット１３は、供給室１４ｅ内の培養液が中空糸膜１５ａの内部を通じて排出室１４ｆに流入するように構成されている。また、濃縮ユニット１３は、中空糸膜モジュール１５が配置されている部分に筐体供給口１４ｃと筐体排出口１４ｄとが形成されている。

洗浄液バッグ１９は、洗浄液であるリンゲル液を貯留するものである。洗浄液バッグ１９には、分離ユニット流路２０が着脱できるように接続されている。分離ユニット流路２０は、分離供給ポンプ４よりも上流側の分離系流路３に分離ユニット用三方弁２１を介して接続されている。同様に、洗浄液バッグ１９には、濃縮ユニット流路２２が接続されている。濃縮ユニット流路２２は、濃縮供給ポンプ１２よりも上流側の濃縮系流路９に濃縮ユニット用三方弁２３を介して接続されている。分離系流路３は、分離ユニット用三方弁２１を開状態に切り替えることによって培養液バッグ２との連通が遮断され、洗浄液バッグ１９に連通される。また、濃縮系流路９は、濃縮ユニット用三方弁２３を開状態に切り替えることによって分離回収バッグ８との連通が遮断され、洗浄液バッグ１９に連通される。これにより、分離系流路３には、分離ユニット用三方弁２１の切り替えにより培養液バッグ２からの培養液と洗浄液バッグ１９からの洗浄液とのうちいずれか一方が選択的に供給される。同様に、濃縮系流路９には、濃縮ユニット用三方弁２３の切り替えにより分離回収バッグ８からの培養液と洗浄液バッグ１９からの洗浄液とのうちいずれか一方が選択的に供給される。

回収液バッグ２４は、回収液であるリンゲル液と抗凝固剤との混合液を貯留するものである。回収液バッグ２４には、回収液流路２５が着脱できるように接続されている。回収液流路２５は、濃縮供給ポンプ１２よりも上流側の濃縮系流路９に回収液用三方弁２６を介して接続されている。濃縮系流路９は、回収液用三方弁２６を開状態に切り替えることによって分離回収バッグ８との連通が遮断され、回収液バッグ２４に連通される。これにより、濃縮系流路９には、回収液用三方弁２６の切り替えにより分離回収バッグ８からの培養液と回収液バッグ２４からの洗浄液とのうちいずれか一方が選択的に供給される。

廃液バッグ２７は、濃縮ユニット１３で中空糸膜１５ａの外部に排出された培養液や洗浄液を回収するものである。廃液バッグ２７は、廃液流路２８が着脱できるように接続されている。廃液流路２８は、濃縮ユニット１３の筐体排出口１４ｄに接続されている。廃液バッグ２７には、濃縮ユニット１３に供給される培養液の量に応じて濃縮ユニット１３内に充填されている洗浄液と中空糸膜１５ａの外部に排出された培養液とが排出される。

濃縮回収バッグ２９は、濃縮ユニット１３で中空糸膜１５ａの内部に残留した血小板を回収するものである。濃縮回収バッグ２９は、濃縮系流路９が着脱できるように接続されている。濃縮系流路９は、濃縮ユニット１３の中空糸膜排出口１４ｂに接続されている。濃縮回収バッグ２９には、回収液とともに血小板が排出される。

図２に示すように、制御装置３０は、分離供給ポンプ４、空気用三方弁１０、濃縮供給ポンプ１２、濃縮排出用二方弁１６、濃縮筐体用三方弁１７、分離ユニット用三方弁２１、濃縮ユニット用三方弁２３および回収液用三方弁２６等を制御するものである。制御装置３０は、実体的には、ＣＰＵ、ＲＯＭ、ＲＡＭ、ＨＤＤ等がバスで接続される構成であってもよく、あるいはワンチップのＬＳＩ等からなる構成であってもよい。制御装置３０は、分離供給ポンプ４、空気用三方弁１０、濃縮供給ポンプ１２、濃縮排出用二方弁１６、濃縮筐体用三方弁１７、分離ユニット用三方弁２１、濃縮ユニット用三方弁２３および回収液用三方弁２６等を制御するために種々のプログラムやデータが格納されている。

制御装置３０は、分離供給ポンプ４と濃縮供給ポンプ１２とに接続され、分離供給ポンプ４と濃縮供給ポンプ１２をそれぞれ制御することができる。

制御装置３０は、分流型の三方弁である空気用三方弁１０、濃縮排出用二方弁１６、濃縮筐体用三方弁１７、分離ユニット用三方弁２１、濃縮ユニット用三方弁２３および回収液用三方弁２６に接続され、空気用三方弁１０、濃縮排出用二方弁１６、濃縮筐体用三方弁１７、分離ユニット用三方弁２１、濃縮ユニット用三方弁２３および回収液用三方弁２６をそれぞれ制御することができる。

制御装置３０は、培養液量センサ２ａに接続され、培養液量センサ２ａが検出する培養液バッグ２に貯留されている培養液の残量Ｃ１についての情報を取得することができる。

制御装置３０は、分離回収量センサ８ａに接続され、分離回収量センサ８ａが検出する分離回収バッグ８に貯留されている培養液の回収量Ｃ２についての情報を取得することができる。

次に、図１、図３、図５および図６を用いて、血小板製剤製造装置１における分離膜７による血小板分離の態様について具体的に説明する。

図１に示すように、血小板製剤製造装置１は、分離供給ポンプ４によって、培養液バッグ２の培養液を分離系流路３に供給する。これにより、培養液に含まれる巨核球と巨核球からすでに産生された血小板とが分離系流路３を通じて分離ユニット５に供給される。分離供給口５ｂから分離ユニット５に供給された全ての培養液は、分離供給ポンプ４の作用により一定の流量で分離膜７を通過する。

図５に示すように、培養液に含まれている巨核球Ｘ・Ｙは、培養液が分離膜７を通過する際に分離膜７に接触する。巨核球Ｘ・Ｙの粒径は、分離膜７の隙間よりも大きい。従って、分離膜７に接触した巨核球Ｘ・Ｙは、分離膜７の隙間の通過が抑制され分離膜７に捕捉される。一方、血小板Ｚの粒径は、分離膜７の隙間よりも小さい。従って、分離膜７に接触した血小板Ｚは、分離膜７の隙間を通過するので分離膜７に捕捉されない。

図３に示すように、分離ユニット５に供給された培養液には、分離供給ポンプ４による分離供給口６ａから上昇する流れと下降する流れとによる旋回流と分離膜７に向かう流れ（矢印参照）とが生じる。培養液は、分離ユニット５において旋回しながら分離膜７に到達する。分離膜７に到達した培養液の旋回流は、上昇または下降しながら分離膜７の表面を沿うようにして流れる。分離膜７に捕捉されている巨核球Ｘ・Ｙには、旋回する培養液の流れから受ける力（矢印参照）が外力として加わる。これにより、分離膜７に捕捉されていた巨核球Ｘ・Ｙの一部である巨核球Ｘは、分離膜７から離間する。

図６に示すように、旋回する培養液の流れから受ける力（矢印参照）によって分離膜７から離間しない巨核球Ｙには、培養液の流れから受ける力および旋回する培養液からの力と分離膜７からの反力とによってせん断応力が発生する。巨核球Ｙは、せん断応力が発生している箇所を起点として巨核球Ｙを形成している細胞質の一部分がせん断される。つまり、巨核球Ｙは、培養液の流れから受ける力と培養液の旋回流による力とによってその細胞質の一部分が分離して血小板Ｚが産生される。産生された血小板は、培養液中に混入して培養液とともに分離膜７を通過する。分離膜７に捕捉されている巨核球Ｙは、培養液の流れから受ける力と培養液の旋回流による力からせん断応力が発生している間、血小板の産生が続けられる。巨核球Ｙは、血小板の産生により形状が変形することで分離膜７から離間する。また、分離ユニット５において分離膜７に再び捕捉された巨核球Ｙは、培養液の流れから受ける力によって分離膜７から離間され、または培養液の流れから受ける力とからせん断応力が発生して血小板Ｚの産生を再開する。

このようにして、血小板製剤製造装置１は、分離ユニット５で発生する培養液の流れから受ける力により分離膜７に付着した巨核球から血小板を産生させるとともに、分離膜７に付着した巨核球を分離膜７から離間させる。これにより、血小板製剤製造装置１は、分離膜７を通過する血小板の量を増加させて、巨核球と血小板とが含まれる培養液から効率的に血小板を分離させることができる。

次に、図７を用いて、本発明に係る血小板製剤製造装置１による血小板製剤の製造方法について説明する。本発明に係る血小板製剤の製造方法は、分離工程、供給量調整工程および濃縮工程を含む。なお、血小板製剤製造装置１の分離系流路３には、巨核球と血小板とが含まれる培養液が封入された培養液バッグ２が接続されているものとする。

図７（ａ）に示すように、分離工程の工程Ｋ１１０において、血小板製剤製造装置１は、分離供給ポンプ４によって洗浄液バッグ１９から分離ユニット５に洗浄液を供給する。血小板製剤製造装置１は、分離ユニット５の分離膜７が全て洗浄液に浸かるまで洗浄液を供給する。これにより、分離ユニット５は、内部の空気が外部に排出される。

工程Ｋ１２０において、血小板製剤製造装置１は、分離供給ポンプ４によって培養液バッグ２から分離ユニット５に培養液を供給する。分離ユニット５に供給された培養液は、分離ユニット５の内部で旋回しながら分離膜７を通過する。この際、培養液に含まれる巨核球は、分離膜７に捕捉される。一方、培養液に含まれる血小板は、分離膜７を通過して分離ユニット５から排出される。

工程Ｋ１３０において、捕捉された巨核球は、培養液の流れから受ける力（外力）によって血小板を産生する。分離ユニット５から排出された血小板を含む培養液は、分離回収バッグ８に供給される。

工程Ｋ１４０において、血小板製剤製造装置１は、培養液バッグ２内の培養液の供給完了後に、分離供給ポンプ４によって洗浄液バッグ１９から分離ユニット５に洗浄液を供給する。これにより、分離ユニット５に残留していた培養液は、洗浄液によって分離回収バッグ８に送り出される。

次に、図７（ｂ）に示すように、濃縮工程の工程Ｋ２１０において、血小板製剤製造装置１は、濃縮筐体用三方弁１７を開状態と閉状態とに切り替えて濃縮供給ポンプ１２によって洗浄液バッグ１９から濃縮ユニット１３の濃縮用筐体１４内であって中空糸膜モジュール１５を構成する中空糸膜１５ａの内部と外部とに洗浄液を供給する。血小板製剤製造装置１は、中空糸膜１５ａが全て洗浄液に浸かるまで洗浄液を供給する。これにより、濃縮ユニット１３は、内部の空気が外部に排出される。

工程Ｋ２２０において、血小板製剤製造装置１は、濃縮ユニット１３の濃縮排出用二方弁１６を閉状態に切り替えて濃縮供給ポンプ１２によって分離回収バッグ８から中空糸膜モジュール１５の中空糸膜１５ａを構成する中空糸の内部に培養液を供給する。この際、培養液に含まれる血小板は、中空糸膜１５ａに捕捉されてその内部に堆積する。また、培養液やタンパク質等の不純物は、中空糸膜１５ａの外部に排出され、濃縮用筐体１４内の洗浄液とともに廃液バッグ２７に排出される。血小板製剤製造装置１は、培養液の供給量Ｃ３が規定値Ｍに到達すると培養液の供給を停止する。

工程Ｋ２３０（１回洗浄）において、血小板製剤製造装置１は、濃縮ユニット１３の濃縮排出用二方弁１６を閉状態に切り替えて濃縮供給ポンプ１２によって洗浄液バッグ１９から中空糸膜モジュール１５の中空糸膜１５ａの内部に洗浄液を供給する。これにより、中空糸膜１５ａの内部に堆積された血小板は、洗浄液によって洗浄される。血小板に付着していたタンパク質等の不純物は、中空糸膜１５ａの外部に排出され、濃縮用筐体１４内の洗浄液とともに廃液バッグ２７に排出される。その後、血小板製剤製造装置１は、中空糸膜１５ａの内部に回収液を供給し、中空糸膜１５ａの内部の洗浄液を回収液に入れ替える。

工程Ｋ２４０において、血小板製剤製造装置１は、濃縮供給ポンプ１２によって濃縮ユニット１３の濃縮用筐体１４内であって中空糸膜１５ａの外部にエアフィルタ１１ａを通過した空気を供給する。これにより、濃縮ユニット１３内の洗浄液は、空気の圧力によって廃液バッグ２７に排出される。

工程Ｋ２５０において、血小板製剤製造装置１は、濃縮ユニット１３の濃縮排出用二方弁１６を開状態に切り替えて濃縮供給ポンプ１２によって回収液バッグ２４から中空糸膜１５ａの内部にさらに回収液を供給する。これにより、中空糸膜１５ａの内部に堆積された血小板は、回収液とともに濃縮回収バッグ２９に排出（回収）される。この際、中空糸膜１５ａの外部には、空気が供給されているので回収液とともに不純物が含まれる洗浄液が回収液とともに回収されない。

工程Ｋ２６０において、血小板製剤製造装置１は、濃縮供給ポンプ１２によって中空糸膜１５ａの内部にエアフィルタ１１ａを通過した空気を供給する。これにより、中空糸膜１５ａの内部に残留していた血小板は、空気とともに濃縮回収バッグ２９に排出（回収）される。

次に、供給量調整工程において、血小板製剤製造装置１は、分離回収バッグ８に貯留されている培養液の回収量Ｃ２が上限値Ｕ未満の場合、分離供給ポンプ４によって培養液バッグ２から分離ユニット５に培養液を供給する。一方、血小板製剤製造装置１は、分離回収バッグ８に貯留されている培養液の回収量Ｃ２が上限値Ｕ以上の場合、濃縮供給ポンプ１２によって分離回収バッグ８から濃縮ユニット１３に培養液を供給しつつ、分離供給ポンプ４による培養液バッグ２から分離ユニット５への培養液の供給を停止する。つまり、血小板製剤製造装置１は、分離供給ポンプ４による培養液の供給を停止することで濃縮工程において濃縮ユニット１３に供給する培養液の量に対する分離工程において分離ユニット５に供給する培養液の量を調整する。

以下では、図８から図１０を用いて、本発明に係る血小板製剤製造装置１における第一実施形態である血小板製剤製造装置１の制御態様について具体的に説明する。なお、本実施形態において、血小板製剤製造装置１の分離系流路３には、巨核球と血小板とが含まれる培養液が封入された培養液バッグ２が接続されているものとする。また、制御開始時において、分離ユニット流路２０は、分離系流路３と遮断されているものとする。同様に、空気流路１１、濃縮筐体流路１８、濃縮ユニット流路２２、回収液流路２５および濃縮回収バッグ２９は、濃縮系流路９と遮断されているものとする。

図８に示すように、供給量調整工程制御であるステップＳ１１０において、血小板製剤製造装置１の制御装置３０は、分離回収量センサ８ａから分離回収バッグ８に貯留されている培養液の回収量Ｃ２についての情報を取得し、ステップをステップＳ１２０に移行させる。

ステップＳ１２０において、制御装置３０は、分離回収量センサ８ａから取得した培養液の回収量Ｃ２についての情報から分離回収バッグ８に貯留されている培養液の回収量Ｃ２が上限値Ｕ未満か否か判定する。
その結果、分離回収バッグ８に貯留されている培養液の回収量Ｃ２が上限値Ｕ未満であると判定した場合、制御装置３０はステップをステップＳ１３０に移行させる。
一方、分離回収バッグ８に貯留されている培養液の回収量Ｃ２が上限値Ｕ未満でないと判定した場合、すなわち、分離回収バッグ８に貯留されている培養液の回収量Ｃ２が上限値Ｕに到達していると判断した場合、制御装置３０はステップをステップＳ１４０に移行させる。

ステップＳ１３０において、制御装置３０は、分離供給ポンプ４を作動させて、ステップをステップＳ２００に移行させる。

ステップＳ１４０において、制御装置３０は、分離供給ポンプ４を停止させて、ステップをステップＳ３００に移行させる。

ステップＳ２００において、制御装置３０は、分離工程制御Ａを開始し、ステップをステップ２１０に移行させる（図９参照）。そして、分離工程制御Ａが終了するとステップをステップＳ３００に移行させる。

ステップＳ３００において、制御装置３０は、濃縮工程制御Ｂを開始し、ステップをステップ３１０に移行させる（図１０参照）。そして、濃縮工程制御Ｂが終了するとステップをステップＳ１１０に移行させる。

図９に示すように、分離工程制御ＡのステップＳ２１０において、制御装置３０は、培養液量センサ２ａから取得した培養液の残量Ｃ１についての情報から培養液バッグ２に貯留されている培養液の残量Ｃ１がゼロか否か判定する。
その結果、培養液バッグ２に貯留されている培養液の残量Ｃ１がゼロであると判定した場合、制御装置３０はステップをステップＳ２２０に移行させる。
一方、培養液バッグ２に貯留されている培養液の残量Ｃ１がゼロでないと判定した場合、すなわち、培養液バッグ２に培養液が残っていると判定した場合、制御装置３０はステップをステップＳ２４０に移行させる。

ステップＳ２２０において、制御装置３０は、分離ユニット用三方弁２１（以下、各図において、二方弁、三方弁を単に「弁」と記す）を開状態に切り替えて洗浄液バッグ１９から分離ユニット５に洗浄液を供給し、ステップをステップＳ２３０に移行させる。

ステップＳ２３０において、制御装置３０は、分離供給ポンプ４の動作時間から分離ユニット用三方弁２１を閉状態に切り替えるとともに分離供給ポンプ４を停止し、分離工程制御Ａを終了してステップをステップＳ３００に移行させる（図８参照）。

ステップＳ２４０において、制御装置３０は、培養液バッグ２から分離ユニット５に培養液を供給し、分離工程制御Ａを終了してステップをステップＳ３００に移行させる（図８参照）。

図１０に示すように、濃縮工程制御Ｂ（１回洗浄工程）のステップ３１０において、制御装置３０は、分離回収量センサ８ａから取得した培養液の回収量Ｃ２についての情報から分離回収バッグ８に貯留されている培養液の回収量Ｃ２が下限値Ｌ以上か否か判定する。
その結果、分離回収バッグ８に貯留されている培養液の回収量Ｃ２が下限値Ｌ以上であると判定した場合、制御装置３０はステップをステップＳ３２０に移行させる。
一方、分離回収バッグ８に貯留されている培養液の回収量Ｃ２が下限値Ｌ以上でないと判定した場合、すなわち、分離回収バッグ８に貯留されている培養液の回収量Ｃ２では濃縮ユニット１３に供給できないと判定した場合、制御装置３０は濃縮工程制御Ｂを終了してステップをステップＳ１１０に移行させる（図８参照）。

ステップＳ３２０において、制御装置３０は、濃縮供給ポンプ１２を作動させ、ステップをステップＳ２３０に移行させる。

ステップＳ３３０において、制御装置３０は、濃縮筐体用三方弁１７と濃縮ユニット用三方弁２３とを所定時間だけ開状態に切り替えて洗浄液バッグ１９から濃縮ユニット１３の中空糸膜１５ａの外部に洗浄液を供給し、ステップをステップＳ３４０に移行させる。

ステップＳ３４０において、制御装置３０は、濃縮筐体用三方弁１７と濃縮ユニット用三方弁２３とを閉状態に切り替えて分離回収バッグ８から濃縮ユニット１３の中空糸膜１５ａの内部に培養液を供給し、ステップをステップＳ３５０に移行させる。

ステップＳ３５０において、制御装置３０は、濃縮供給ポンプ１２の動作時間から濃縮ユニット１３の中空糸膜１５ａの内部に供給した培養液の供給量Ｃ３が規定値Ｍ以上か否か判断する。
その結果、中空糸膜１５ａの内部に供給した培養液の供給量Ｃ３が規定値Ｍ以上であると判定した場合、制御装置３０はステップをステップＳ３６０に移行させる。
一方、中空糸膜１５ａの内部に供給した培養液の供給量Ｃ３が規定値Ｍ以上でないと判定した場合、すなわち、中空糸膜１５ａの内部に供給した培養液の供給量Ｃ３が規定値Ｍに到達していないと判定した場合、濃縮工程制御Ｂを終了してステップをステップＳ１１０に移行させる（図８参照）。

ステップＳ３６０において、制御装置３０は、濃縮ユニット用三方弁２３を所定時間だけ開状態に切り替えて洗浄液バッグ１９から濃縮ユニット１３の中空糸膜１５ａの内部に洗浄液を供給し、ステップをステップＳ３７０に移行させる。

ステップＳ３７０において、制御装置３０は、空気用三方弁１０と濃縮筐体用三方弁１７とを開状態に切り替え、濃縮ユニット用三方弁２３を閉状態に切り替えて外部からエアフィルタ１１ａを介して濃縮ユニット１３の中空糸膜１５ａの外部に空気を供給し、ステップをステップＳ３８０に移行させる。

ステップＳ３８０において、制御装置３０は、空気用三方弁１０と濃縮筐体用三方弁１７とを閉状態に切り替え、濃縮排出用二方弁１６と回収液用三方弁２６とを開状態に切り替えて回収液バッグ２４から濃縮ユニット１３の中空糸膜１５ａの内部に回収液を所定量だけ供給し、ステップをステップＳ３９０に移行させる。

ステップＳ３９０において、制御装置３０は、濃縮筐体用三方弁１７と回収液用三方弁２６とを閉状態に切り替え、空気用三方弁１０を開状態に切り替えて外部からエアフィルタ１１ａを介して濃縮ユニット１３の中空糸膜１５ａの内部に空気を供給し、ステップをステップＳ４００に移行させる。

ステップＳ４００において、制御装置３０は、濃縮排出用二方弁１６と回収液用三方弁２６とを閉状態に切り替えて濃縮ユニット１３と濃縮回収バッグ２９との連通を遮断して濃縮工程制御Ｂを終了し、ステップをステップＳ１１０に移行させる（図８参照）。

以下では、図１１から図１３を用いて、本発明に係る血小板分離装置の第二実施形態における血小板製剤製造装置４０について説明する。なお、以下の実施形態において、既に説明した実施形態と同様の点に関してはその具体的説明を省略し、相違する部分を中心に説明する。

図１１に示すように、血小板製剤製造装置４０は、濃縮工程において血小板を複数回洗浄する工程（複数洗浄工程）を実施するものである。血小板製剤製造装置４０は、仮回収バッグ４１、上流側仮回収用三方弁４２および下流側仮回収用三方弁４３を更に備える。仮回収バッグ４１は、濃縮された血小板を含む洗浄液を貯留するものである。仮回収バッグ４１は、濃縮ユニット１３よりも上流側の濃縮系流路９に上流側仮回収用三方弁４２を介して接続されている。また、仮回収バッグ４１は、濃縮ユニット１３よりも下流側の濃縮系流路９に下流側仮回収用三方弁４３を介して接続されている。濃縮系流路９は、上流側仮回収用三方弁４２を開状態に切り替えることによって分離回収バッグ８との連通が遮断され、仮回収バッグ４１に連通される状態に変更できるように構成されている。濃縮系流路９は、下流側仮回収用三方弁４３を開状態に切り替えることによって回収バッグとの連通が遮断され、仮回収バッグ４１に連通される状態に変更できるように構成されている。

制御装置３０は、上流側仮回収用三方弁４２および下流側仮回収用三方弁４３をそれぞれ制御することができる。

次に、図１２を用いて、本発明に係る血小板製剤製造装置４０による血小板製剤の製造方法における濃縮工程において血小板を複数回洗浄する工程（複数回洗浄）について説明する。

濃縮工程の血小板を複数回洗浄する工程Ｋ３１０において、血小板製剤製造装置４０は、回収洗浄液による血小板の最初の洗浄後（工程Ｋ２３０）、濃縮排出用二方弁１６と下流側仮回収用三方弁４３とを開状態に切り替えて、濃縮供給ポンプ１２によって洗浄液バッグ１９から濃縮ユニット１３の中空糸膜１５ａの内部に洗浄液を供給する。これにより、中空糸膜１５ａの内部に堆積された血小板は、洗浄液とともに仮回収バッグ４１に排出（仮回収）される。

工程Ｋ３２０において、血小板製剤製造装置１は、濃縮排出用二方弁１６を閉状態に切り替えて上流側仮回収用三方弁４２を開状態に切り替えて濃縮供給ポンプ１２によって仮回収バッグ４１から中空糸膜１５ａの内部に血小板が含まれる洗浄液を供給する。この際、洗浄液に含まれる血小板は、中空糸膜１５ａに捕捉されてその内部に堆積する。

工程Ｋ３３０において、血小板製剤製造装置１は、上流側仮回収用三方弁４２を閉状態に切り替えて濃縮供給ポンプ１２によって洗浄液バッグ１９から中空糸膜１５ａの内部に洗浄液を供給する。これにより、中空糸膜１５ａの内部に堆積された血小板は、洗浄液によって再洗浄される。血小板に付着していたタンパク質等の不純物は、中空糸膜１５ａの外部に排出され、濃縮用筐体内の洗浄液とともに廃液バッグ２７に排出される。このようにして、血小板製剤製造装置１は、任意の回数だけ血小板を洗浄する。

また、本発明に係る血小板製剤の製造方法において、濃縮工程によって回収した血小板が含まれる回収液を分離工程と同様の工程によって回収した回収液中に残留している巨核球を再分離する工程を更に含めてもよい。

次に、図１３を用いて、本発明に係る血小板製剤製造装置１における第二実施形態である血小板製剤製造装置４０の制御態様について具体的に説明する。なお、以下の実施形態において、血小板を複数回洗浄する濃縮工程制御ＢのステップＳ３６１からステップＳ３６３まで以外の構成は既に説明した構成と同一の構成であるため、同様の点に関してはその具体的説明を省略し、相違する部分を中心に説明する。

図１３に示すように、ステップＳ３６０において、制御装置３０は、濃縮ユニット用三方弁２３を所定時間だけ開状態に切り替えて洗浄液バッグ１９から濃縮ユニット１３の中空糸膜１５ａの内部に洗浄液を所定量だけ供給し、ステップをステップＳ３６１に移行させる。

ステップＳ３６１において、制御装置３０は、濃縮排出用二方弁１６と下流側仮回収用三方弁４３とを開状態に切り替えて洗浄液バッグ１９から濃縮ユニット１３の中空糸膜１５ａの内部に洗浄液を所定量だけ供給して仮回収バッグ４１に血小板が含まれる洗浄液を回収し、ステップをステップＳ３６２に移行させる。

ステップＳ３６２において、制御装置３０は、濃縮排出用二方弁１６を閉状態に切り替えて上流側仮回収用三方弁４２を開状態に切り替えて仮回収バッグ４１から濃縮ユニット１３の濃縮ユニット１３の中空糸膜１５ａの内部に血小板が含まれる洗浄液を供給し、ステップをステップＳ３６３に移行させる。

ステップＳ３６３において、制御装置３０は、濃縮ユニット用三方弁２３を開状態に切り替えて上流側仮回収用三方弁４２を閉状態に切り替えて洗浄液バッグ１９から濃縮ユニット１３の中空糸膜１５ａの内部に洗浄液を所定量だけ供給し、ステップをステップＳ３７０に移行させる。

ステップＳ３７０において、制御装置３０は、濃縮ユニット用三方弁２３を閉状態に切り替え、空気用三方弁１０と濃縮筐体用三方弁１７とを開状態に切り替えて外部からエアフィルタ１１ａを介して濃縮ユニット１３の中空糸膜１５ａの外部に空気を供給し、ステップをステップＳ３８０に移行させる。

このように構成することで、分離工程において、巨核球と血小板とが含まれる培養液中から血小板を分離するとともに、巨核球に外力を加えることで更に血小板が産生される。さらに、洗浄液を分離ユニット５内に供給することで血小板を含んだ培養液が分離ユニット５内から効率的に排出される。また、濃縮工程において、培養液中の血小板が濃縮されるとともに、血小板に付着している不純物が除去される。さらに、濃縮ユニット１３の中空糸膜１５ａの内部に回収液を供給した後に空気による押し出し行うことで中空糸膜１５ａの内部から血小板が効率的に排出される。また、供給量調整工程において、濃縮ユニット１３における培養液の処理量に対する分離ユニット５における培養液の処理量との差が分離回収バッグ８によって吸収される。加えて、分離回収バッグ８の貯留量に基づいて分離ユニット５の稼働状態が制御される。つまり、分離工程における巨核球やタンパク質等の不純物の除去と濃縮工程における血小板の濃縮とが並行して連動するように行われる。これにより、巨核球と血小板とが含まれる培養液から効率的に血小板のみを回収、濃縮および洗浄することができる。つまり、血小板の製造効率が向上し、求められる基準を満たした血小板製剤を製造することができる。

以下では、図１４を用いて、本発明に係る血小板分離装置の第三実施形態における血小板製剤製造装置５０について説明する。なお、以下の実施形態において、既に説明した実施形態と同様の点に関してはその具体的説明を省略し、相違する部分を中心に説明する。

図１４に示すように、血小板製剤製造装置５０は、濃縮ユニット１３に加えて濃縮ユニット５１を具備している。

血小板製剤製造装置５０の培養液を分離する構成は、前述の第一実施形態にかかる血小板製剤製造装置１の構成と同一である。

血小板製剤製造装置５０は、分離回収バッグ８に２つの濃縮ユニット１３・５１が濃縮系流路９を介して接続されている。濃縮ユニット１３・５１には、濃縮回収バッグ２９が接続されている。つまり、血小板製剤製造装置５０は、一の分離ユニット５によって処理された培養液を２つの濃縮ユニット１３・５１が処理するように構成されている。

このように構成することで、血小板製剤製造装置５０は、複数の濃縮ユニット１３・５１における培養液の処理量に対する分離ユニット５における培養液の処理量との差を二つの濃縮ユニット１３・５１が作動することによって吸収される。加えて、分離回収バッグ８の貯留量に基づいて分離ユニット５の稼働状態が制御される。つまり、分離工程における巨核球やタンパク質等の不純物の除去と濃縮工程における血小板の濃縮とが並行して連動するように行われる。これにより、巨核球と血小板とが含まれる培養液から効率的に血小板のみを回収、濃縮および洗浄することができる。つまり、血小板の製造効率が向上し、求められる基準を満たした血小板製剤を製造することができる。

１ 血小板製剤製造装置
５ 分離ユニット
７ 分離膜
８ 分離回収バッグ
１３ 濃縮ユニット
１５ 中空糸膜モジュール

Claims (10)

1. 液体中にある分離部材に巨核球と血小板とが含まれる液体を通過させ、分離部材により巨核球を捕捉して巨核球と血小板とを分離する分離工程と、液体中にある濃縮部材に分離工程で分離した血小板が含まれる液体を通過させ、濃縮部材により血小板を捕捉した後に回収用の液体で捕捉した血小板を回収することで単位体積中に含まれる血小板数を増加させる濃縮工程と、濃縮工程に供給する血小板が含まれる液体の量を調整する供給量調整工程と、からなる血小板製剤の製造方法。
2. 前記分離工程において、前記分離部材により巨核球を捕捉して巨核球と血小板とを分離するとともに巨核球に液体の流れによる外力を加えて巨核球から血小板を産生させる請求項１に記載の血小板製剤の製造方法。
3. 前記分離工程において、巨核球と血小板とが含まれる液体の供給が完了した後に液体を供給して前記分離部材を通過していない巨核球と血小板とが含まれる液体を分離部材に通過させる請求項１または請求項２に記載の血小板製剤の製造方法。
4. 前記濃縮工程において、前記濃縮部材である中空糸膜の内部に分離した血小板が含まれる液体を供給し、中空糸膜によって血小板を捕捉した後に液体を中空糸膜の内部に供給して捕捉した血小板を洗浄する請求項１から請求項３のいずれか一項に記載の血小板製剤の製造方法。
5. 前記濃縮工程において、前記濃縮部材である中空糸膜の内部に分離した血小板が含まれる液体を供給し、中空糸膜によって血小板を捕捉した後に液体を中空糸膜の内部に供給して捕捉した血小板を回収する請求項１から請求項４のいずれか一項に記載の血小板製剤の製造方法。
6. 前記濃縮工程において、中空糸膜の外部の液体を排出した状態で中空糸膜の内部に液体を供給することによって捕捉した血小板を回収し、更に中空糸膜の内部に空気を供給して残留している血小板を回収する請求項４または請求項５に記載の血小板製剤の製造方法。
7. 前記濃縮工程によって単位体積中に含まれる血小板数を増加させた液体を液体中にある再分離部材に通過させることによって残留している巨核球を捕捉して巨核球と血小板とを分離する再分離工程をさらに実施する請求項１から請求項６のいずれか一項に記載の血小板製剤の製造方法。
8. 前記供給量調整工程によって濃縮工程に供給する血小板が含まれる液体の量を調整し、前記分離工程と前記濃縮工程とを並行して実施する請求項１から請求項７のいずれか一項に記載の血小板製剤の製造方法。
9. 液体中に巨核球を捕捉可能な分離部材が設けられ、液体中に供給された巨核球と血小板とが含まれる液体を分離部材に通過させることで巨核球を捕捉して巨核球と血小板とを分離する分離手段と、
   巨核球と血小板とが含まれる液体および血小板を回収する液体を分離手段に供給する分離供給手段と、
   液体中に血小板を捕捉可能な濃縮部材である中空糸膜が設けられ、液体に供給された血小板が含まれる液体を中空糸膜の内部に通過させることで血小板を捕捉して血小板数を増加させる濃縮手段と、
   血小板数を増加させた液体、血小板を洗浄する液体および血小板を回収する液体を中空糸膜の内部に供給する濃縮供給手段と、
   分離手段と濃縮手段とに接続され、分離手段から回収した血小板が含まれる液の量と濃縮手段の稼働状態から濃縮手段に供給する血小板が含まれる液の量を調整する供給量調整手段と、からなる血小板製剤の製造装置。
10. 請求項１から請求項８のいずれか一項に記載の血小板製剤の製造方法または請求項９に記載の血小板製剤の製造装置で製造された血小板製剤。

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