JP2016113452A - 注射液調製方法 - Google Patents

Abstract

【課題】注射液調製方法を提供すること。
【解決手段】（１）血液試料と２価カチオンキレート剤との混合液を２〜１２℃の雰囲気下で３〜７２時間静置することによって、当該混合液を２層または２層以上の分離層であって（すなわち、混合液が２つまたは２つ以上の分離層を形成させる）、そのうち一つの分離層の液体は例えばＳＢ細胞を含む分離層を取得する工程と、（２）混合液から当該液体を収集または取得する工程と、（３）当該液体を収集又は取得した後、当該液体とカルシウムイオンの存在しない（Ｃａ^２＋）溶液と混合して、当該注射液を形成する方法と、を含む。この注射液は例えば、強直性脊椎炎、リウマチ性関節炎またはグレーブス病などの自己免疫疾患を治療できる。
【選択図】図１

Description

本発明は細胞を含む溶液の調整方法に関し、特に一種の（体性）幹細胞を含む注射液調製方法に関する。

幹細胞は自己複製（ｓｅｌｆ−ｒｅｎｅｗａｌ）の能力を有しているため、より多くの幹細胞を形成して、かつほとんどの種の特異性細胞（ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ ｃｅｌｌ）に変えることができる。幹細胞は生物医学これらかのもっとも重要な分野の一つであり、そのうえ近年は関連産業もすばやく成長を見せており、人の幹細胞の医療応用のニーズが浮彫りにされている。

本発明の主な目的は、幹細胞溶液（または幹細胞溶液という）の準備又は製造の方法を提供することである。

本発明のもう一つの目的は、自己免疫性疾患の治療方法を提供することである。

前述の目的を達成するため、本発明は幹細胞溶液（または幹細胞溶液という）の準備又は製造の方法を提供する。
当該溶液は自己免疫性疾患（例えば、強直性脊椎炎、リウマチ性関節炎またはグレーブス病）治療の注射液に使用できる。当該方法は、（１）血液試料と２価カチオンキレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸）とを均一に混合して形成する第１混合液を温度２〜１２℃（好ましくは２〜７℃）の環境にて３〜７２時間、３〜６時間、６〜７２時間、６〜４８時間、１６〜７２時間、１６〜４８時間、３６〜６０時間または４８〜７２時間を静置し、第１混合液を２層または２層以上に分離させ、すなわち第１混合液に２つまたはそれ以上の分離層を形成（例えば、上部分離層と下部分離層とを含む）し、そのうち一つの分離層（例えば、上部分離層または最上層の分離層）の液体（例えば、上清液）に血小板（大きさは例えば、６ミクロン（μｍ）以下）を含む、一種又は多種の体性幹細胞（例えば、ＣＤ３４９（＋）体性幹細胞とＬｇｒ５（＋）体性幹細胞）と、２価カチオンキレート剤と成長因子と、を含む取得ステップと、（２）第１混合液から当該液体を取得するステップと、（３）当該液体を取得した後、当該液体とカルシウムを有しないイオン（Ｃａ^２＋）の溶液または培養液とを混合して、第２混合液を形成するステップと、を含む。カルシウムを有しないイオンの溶液または培養液は例えば、マグネシウムイオン（Ｍｇ^２＋）いずれか他の２価イオンを含有しなくても良い。カルシウムを有しないイオンの溶液または培養液は例えば、生理食塩水（ｎｏｒｍａｌ ｓａｌｉｎｅ）であっても良い。第２混合液は例えば、前述した幹細胞溶液であっても良い。もしくは、前述方法は、第２混合液をろ過して幹細胞溶液の準備又は製造する方法をさらに含めることができる。

前述の目的を達成するため、本発明は幹細胞溶液（または幹細胞溶液という）の準備又は製造の方法を提供する。
当該溶液は自己免疫性疾患（例えば、強直性脊椎炎、リウマチ性関節炎またはグレーブス病）治療の注射液に使用できる。この方法は、（１）血液試料と２価カチオンキレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸）を温度２〜１２℃（好ましくは２〜７℃）の環境にて所定期間（例えば、３〜７２時間、３〜６時間、６〜７２時間、６〜４８時間、１６〜７２時間、１６〜４８時間、３６〜６０時間または４８〜７２時間）を培養又は育成し、血液試料を２層または２層以上に分離させる、すなわち血液試料２つまたはそれ以上の分離層（例えば、上部分離層と下部分離層とを含む）を形成するステップと、（２）それら一つの分離層を取得し、幹細胞溶液とするステップと、を含む。取得した分離層は血小板（大きさは６μｍ以下）、体性幹細胞（ＣＤ３４９（＋）体性幹細胞と、Ｌｇｒ５（＋）体性幹細胞とを含む）と、２価カチオンキレート剤と、成長因子と、を含む。または前述方法は、取得した分離層を一種のカルシウムを有しないイオン（Ｃａ^２＋）溶液または培養液と混合して、幹細胞溶液を形成する方法をさらに含めても良い。カルシウムを有しないイオンの溶液または培養液は例えば、マグネシウムイオン（Ｍｇ^２＋）いずれか他の２価イオンを含有しなくても良い。カルシウムを有しないイオンの塩溶液、例えば生理食塩水であっても良い。

前述した２種方法のうち、体性幹細胞の大きさ（例えば大きさ）は例えば１μｍ〜６μｍ、１または２μｍ以上から６μｍ以下が好ましい。体性幹細胞は、大きさが２μｍ以上から６μｍ以下のＣＤ６６ｅ（＋）体性幹細胞（つまり、類卵割球幹細胞）を含めても良い。ＣＤ３４９（＋）体性幹細胞もＣＤ９（＋）であり、かつ大きさが２μｍ以上から６μｍ以下である。Ｌｇｒ５（＋）体性幹細胞はＯｃｔ４（＋）とＮａｎｏｇ（＋）、およびＣＤ１３３（−）、ＣＤ６６ｅ（−）、Ｓｏｘ２（−）、ＣＤ４（−）、ＣＤ８（−）、ＣＤ９（−）、ＣＤ１０（−）、ＣＤ１１（−）、ＣＤ１６（−）、ＣＤ１７（−）、ＣＤ１８（−）、ＣＤ１９（−）、ＣＤ２０（−）、ＣＤ２１（−）、ＣＤ３１（−）、ＣＤ４２（−）、ＣＤ６３（−）、ＣＤ３４（−）、Ｌｉｎ（−）、ＣＤ３８（−）、ＣＤ９０（−）、ＣＤ４５（−）とＣＤ３４９（−）でもある。ＣＤ３４９（＋）体性幹細胞の大きさが２μｍ以上から６μｍ以下であっても良い。幹細胞溶液のうち、Ｌｇｒ５（＋）体性幹細胞は大きさが２μｍ以上から６μｍ以下の細胞に占める百分比は４％または５％以上（好ましくは４．５％〜１０％）、ＣＤ３４９（＋）体性幹細胞が２μｍ以上から６μｍ以下の細胞に占める百分比は４％または５％以上（好ましくは４．５％〜１０％）、白血球は大きさが２μｍ以上から２０μｍ以下の細胞に占める百分比は２％以下（好ましくは１％、０．５％または０．１％以下）、赤血球は大きさが２μｍ以上から１０μｍ以下の細胞に占める百分比は３％以下（好ましくは２％、１％または０．５％以下）である。このほか、幹細胞溶液のうち、１％以下の細胞からＣＤ１３３が表現される。幹細胞溶液は塩類、例えば塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）であっても良い。幹細胞駆動剤（例えば、フコイダンを含む化合物）を個体（例えば、ヒトまたは動物）に所定期間（例えば、１〜６時間）を投与する場合、血液試料は当該個体の末梢血より採取することができる。

前述の目的を達成するため、本発明は自己免疫性疾患（例えば、強直性脊椎炎、リウマチ性関節炎またはグレーブス病）治療の注射液を提供する。
当該注射液（すなわち前述の幹細胞溶液）は大きさが２μｍ以上から６μｍ以下ＣＤ３４９（＋）体性幹細胞（すなわちＳＢ−１細胞）と、大きさが２μｍ以上から６μｍ以下Ｌｇｒ５（＋）体性幹細胞（すなわちＳＢ−２細胞）および大きさが２μｍ以上から６μｍ以下ＣＤ６６ｅ（＋）体性幹細胞（すなわち類卵割球幹細胞）を含む。注射液は２価カチオンキレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸）、成長因子および／または塩類（例えば、塩化ナトリウム）を更に含むこともできる。注射液のうち、Ｌｇｒ５（＋）体性幹細胞の大きさが２μｍ以上から６μｍ以下の細胞に占める百分比は４％または５％以上（好ましくは４．５％〜１０％）、ＣＤ３４９（＋）体性幹細胞が２μｍ以上から６μｍ以下の細胞に占める百分比は４％または５％以上（好ましくは４．５％〜１０％）、ＣＤ６６ｅ（＋）は大きさ２μｍ以上から６μｍ以下の細胞に占める百分比は６％以下（好ましくは５％または４．５％以下）、白血球は大きさ２μｍ以上から２０μｍ以下の細胞に占める百分比は２％以下（好ましくは１％、０．５％または０．１％以下）、赤血球は大きさ２μｍ以上から１０μｍ以下の細胞に占める百分比は３％以下（好ましくは２％、１％または０．５％以下）。このほか、注射液のうち、１％以下の細胞以下の細胞からＣＤ１３３が表現される。

前述の目的を達成するため、本発明は人類個体の自己免疫性疾患（例えば、強直性脊椎炎、リウマチ性関節炎またはグレーブス病）治療の注射液を提供する。
この方法は、当該人類個体の自己免疫疾患を治療するため、有効量の前述注射液を需要のある人類個体に投与することを含む。注射液のうちＬｇｒ５（＋）体性幹細胞と、ＣＤ３４９（＋）体性幹細胞と、ＣＤ６６ｅ（＋）体性幹細胞は当該人類個体から由来する。前述した人類個体への注射液投与は例えば、カルシウムを有しないイオン（Ｃａ^２＋）の溶液または培養液と混合した注射液を静脈注射により、当該人類個体に注射するステップを含めても良い。カルシウムを有しないイオンの溶液または培養液は例えば、マグネシウムイオン（Ｍｇ^２＋）いずれか他の２価イオンを含有しなくても良い。カルシウムを有しないイオンの塩溶液、例えば生理食塩水であっても良い。

本発明の一実施例による自己免疫性疾患治療のフロー図である。 あるフコイダン補助剤の内容／成分情報である。 幹細胞溶液の調製または準備のフロー図である。 ６名のヒト被験者にフコイダン補助剤を経口に服用させる前と服用させた後の幹細胞データである。 ヒト被験者の顆粒球コロニー刺激因子（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−ｃｏｌｏｎｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ，ＧＣＳＦ）の注射治療前の流動細胞計測データ（ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｄａｔａ）である。 ヒト被験者の顆粒球コロニー刺激因子（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−ｃｏｌｏｎｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ，ＧＣＳＦ）の注射治療後の流動細胞計測データ（ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｄａｔａ）である。 前方散乱係数（ｆｏｒｗａｒｄ ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ＦＳＣ）対側方散乱係数（ｓｉｄｅ ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ＳＳＣ）のフローサイトメトリーのドットプロット（ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｄｏｔ ｐｌｏｔ）である。 フローサイトメトリー解析（ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ａｎａｌｙｓｉｓ）によって、得られた蛍光ヒストグラムである。 前方散乱係数対側方散乱係数のフローサイトメトリーのドットプロットである（その１）。 前方散乱係数対側方散乱係数のフローサイトメトリーのドットプロットである（その２）。 フローサイトメトリー解析によって、得られた蛍光ヒストグラムである。 フローサイトメトリー解析によって、得られた蛍光ヒストグラムである。 フローサイトメトリー解析によって、得られた蛍光ヒストグラムである。 フローサイトメトリー解析によって、得られた蛍光ヒストグラムである。 フローサイトメトリー解析によって、得られた蛍光ヒストグラムである。 フローサイトメトリー解析によって、得られた蛍光ヒストグラムである。

以下で実施例と、付属図面と、特許請求の範囲について、詳しく説明することによって、本発明の構成品、ステップ、特徴、効果と優位性を明確化にする。

[実施例]
図面には本発明を説明する目的の実施例を開示しているが、すべての実施例の説明ではなく、そのほか、または他の実施例に代替えすることができる。内容の重複を避けて、より効率的な説明を図るため、明らかなもの及び必要でない細部説明を省略する。それに対して、詳細な説明の代りに実施例を説明する。同じ素子番号が異なる図面に示される場合は、同じまたは類似する構成品あるいはステップを示している。
以下の説明を添付図面と合わせて参照することによって、本発明の態様をより詳しく理解できる。ただし、係る添付図面はあくまでも説明を目的としており、これに制限されるべきでない。

まず、本発明の用語の定義とその記述を説明し、引き続き本発明の実施例を詳しく説明する。

＜細胞の大きさ（Ｚ）の定義＞

本発明において、以下の段落で触れる大きさ（Ｚ）は、細胞（例えば、幹細胞または生体細胞）の大きさを指す。大きさ（Ｚ）は例えば（ただし、限定ではない）、（１）細胞生物学分野で細胞の大きさまたは長さを代表する従来の定義と、（２）細胞の直径（特に細胞の形状が実質上球体のとき）と、（３）細胞長軸の長さ（特に細胞の形状が実質上楕円体のとき）と、（４）細胞の幅（細胞の形状が立方体に近いとき）と、（５）細胞の長さ（細胞の形状が直方体に近いとき）または（６）細胞の最大断面または横方向の大きさを記述または定義に関わる。光学顕微鏡または電子顕微鏡（例えば、走査型電子顕微鏡）から得られた細胞画像、またはフローサイトメーター（ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）より獲得されたデータ（例えば、二次元の点、プロファイルまたは密度図）は、大きさ（ｚ）（直径、長さ、幅或いは最大の横断面または横方向の大きさのいずれか）の判定・測定に利用することができる。光学顕微鏡または電子顕微鏡から獲得された細胞映像は、例えば細胞の二次元の断面図または立体構造のいずれでも良い。
一例として、光学顕微鏡または電子顕微鏡（例えば、走査型電子顕微鏡）を用いて、まず二次元の断面画像を得てから、係る二次元の断面画像における細胞最大の横断面または横方向の大きさを測定することを用いて、細胞の大きさ（Ｚ）が得られる。

＜幹細胞の定義＞

体性幹細胞（ｓｏｍａｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）は、成体幹細胞（ａｄｕｌｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）ともいう。骨髄、脂肪または末梢血等の器官あるいは組織で見つかり、かつすべての幹細胞と同様な基本特徴を有する。体性幹細胞は、特殊化していない細胞（ｕｎｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ ｃｅｌｌ）または未分化細胞（ｕｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｃｅｌｌ）であり、しかも分化または特殊化可能な細胞種をいう。”体性幹細胞”という用語は、本案において、胚性幹細胞（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）に属しないかまたは含まない。言い換えれば本案において、体性幹細胞は胚胎または胚胎組織から由来または取得したものではない。

体性幹細胞は、全能性幹細胞（ｔｏｔｉｐｏｔｅｎｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）、多能性幹細胞（ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）、多分化能幹細胞（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）や前駆幹細胞（ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）などのさまざまな種類が数多くある。
前駆幹細胞は、特異的な幹細胞または単能性幹細胞（ｕｎｉｐｏｔｅｎｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）ともいう。類卵割球幹細胞（ｂｌａｓｔｏｍｅｒｅ−ｌｉｋｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ，ＢＬＳＣ）は、全能性幹細胞または多功能幹細胞に属する。類卵割球幹細胞（ｅｒｙ ｓｍａｌｌ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ−ｌｉｋｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ，ＶＳＥＬ）は、多能性幹細胞に属する。ＳＢ−１細胞と、ＳＢ−２細胞は、全能性幹細胞または多能性幹細胞に属する。間葉系幹細胞（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ，ＭＳＣ）、造血幹細胞（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ，ＨＳＣ）、多能性成体前駆細胞（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ａｄｕｌｔ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ，ＭＡＰＣ）、骨髄由来多能性細胞（ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ，ＢＭＳＣ）、多能性成体幹細胞（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ａｄｕｌｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ，ＭＡＳＣ）などは、いずれも多分化能幹細胞に属する。さらに、神経幹細胞（ｎｅｕｒａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）、網膜幹細胞（ｒｅｔｉｎａ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）、嗅球幹細胞（ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｂｕｌｂｓ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）、表皮幹細胞（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）、筋肉幹細胞（ｍｕｓｃｌｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）、腸管幹細胞（ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）、膵臓幹細胞（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）、心臓幹細胞（ｈｅａｒｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）、肝臓幹細胞（ｌｉｖｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）、腎臓幹細胞（ｋｉｄｎｅｙ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）、μ皮幹細胞（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）、脂肪または脂肪由来幹細胞（ａｄｉｐｏｃｙｔｅ ｏｒ ａｄｉｐｏｓｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）、骨髄から単離した成人の多系統誘導性細胞（ｍａｒｒｏｗ−ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｄｕｌｔ ｍｕｌｔｉｌｉｎｅａｇｅ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ （ＭＩＡＭＩ）ｃｅｌｌ）、前間葉系幹細胞（ｐｒｅ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ，ｐｒｅ−ＭＳＣ）、間葉系前駆細胞（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ）、造血前駆細胞（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ，ＨＰＣ）、多能性前駆細胞（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ，ＭＰＰ）、系統限定前駆細胞（ｌｉｎｅａｇｅ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ，ＬＲＰ）、通常骨髄前駆細胞（ｃｏｍｍｏｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ，ＣＭＰ）や通常リンパ球系前駆細胞（ｃｏｍｍｏｎ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ，ＣＬＰ）などは、いずれも前駆幹細胞に属する。

以降の段落において、細胞（表面）マーカーの後ろに付けた符号「＋」とは、（例えば幹細胞には）この細胞（表面）マーカーを表現することができることを指す。つまり、フローサイトメーターは（特定マーカー用）抗原によって、幹細胞の表面に存在する細胞（表面）マーカーを検出することができる。
細胞（表面）マーカーの後ろに付けた符号「−」とは、（例えば幹細胞には）当該種の細胞（表面）マーカーを表現することができない。つまり、この種の細胞（表面）マーカーは幹細胞の表面に存在しておらず、かつフローサイトメーターがある種の（特定マーカー用）抗体によって、この種の幹細胞表面の（表面）マーカーを検出することもできない。
よって、プラス符号「＋」は細胞（例えば、幹細胞）にとって、細胞（表面）マーカーを表現し、マイナス符号「−」は細胞（例えば、幹細胞）にとって、細胞（表面）マーカーを表現されない。

ＳＢ−１細胞は細胞核を有する多機能または多能性幹細胞であり、かつＣＤ３４９（＋）細胞である。ＣＤ３４９（＋）体性幹細胞（すなわちＳＢ−１細胞）は、ＣＤ９（＋）、Ｏｃｔ４（＋）とＮａｎｏｇ（＋）、およびＣＤ１３３（−）、ＣＤ９０（−）、ＣＤ３４（−）とＳｏｘ２（−）であることが分かる。
一例として、ＣＤ３４９（＋）体性幹細胞の大きさ（前述細胞の大きさ（Ｚ）の定義を参照する）は、４マイクロメータ、５マイクロメータまたは６マイクロメータ以下または等しい。一例として、０．１〜６マイクロメータ、０．５〜６マイクロメータ、１〜６マイクロメータ、０．１〜５マイクロメータ、０．５〜５マイクロメータ、１〜５マイクロメータ、０．１〜４マイクロメータ、０．５〜４マイクロメータまたは１〜４マイクロメータのいずれかの範囲であっても良い。好ましくは、ＳＢ−１細胞の大きさ２ミクロン以上から６ミクロン以下である。ＳＢ−１細胞は細胞（表面）マーカーＣＤ３４９を表現できるため、ＣＤ３４９（＋）によって、その特徴を記述することができる。

ＳＢ−２細胞は細胞核を有する多機能または多能性幹細胞であり、かつＬｇｒ５（＋）細胞である。Ｌｇｒ５（＋）体性幹細胞（すなわちＳＢ−２細胞）はＯｃｔ４（＋）とＮａｎｏｇ（＋）、およびＣＤ１３３（−）、ＣＤ６６ｅ（−）、Ｓｏｘ２（−）、ＣＤ４（−）、ＣＤ８（−）、ＣＤ９（−）、ＣＤ１０（−）、ＣＤ１１（−）、ＣＤ１６（−）、ＣＤ１７（−）、ＣＤ１８（−）、ＣＤ１９（−）、ＣＤ２０（−）、ＣＤ２１（−）、ＣＤ３１（−）、ＣＤ４２（−）、ＣＤ６３（−）、ＣＤ３４（−）、Ｌｉｎ（−）、ＣＤ３８（−）、ＣＤ９０（−）、ＣＤ４５（−）とＣＤ３４９（−）であることが分かる。
一例として、ある種の間葉系幹細胞はの大きさ（前述細胞の大きさ（Ｚ）の定義を参照する）は、４マイクロメータ、５マイクロメータまたは６マイクロメータ以下または等しい。一例として、０．１〜６マイクロメータ、０．５〜６マイクロメータ、１〜６マイクロメータ、０．１〜５マイクロメータ、０．５〜５マイクロメータ、１〜５マイクロメータ、０．１〜４マイクロメータ、０．５〜４マイクロメータまたは１〜４マイクロメータのいずれかの範囲であっても良い。好ましくは、ＳＢ−２細胞の大きさ２ミクロン以上から６ミクロン以下である。ＳＢ−２細胞は細胞（表面）マーカーＬｇｒ５を表現できるため、Ｌｇｒ５（＋）によって、その特徴を記述することができる。本案において、ＳＢ細胞はＣＤ３４９（＋）体性幹細胞（すなわちＳＢ−１細胞）と、Ｌｇｒ５（＋）体性幹細胞（すなわちＳＢ−２細胞）と、を含む。

卵割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）は、細胞核を含む多能性幹細胞であると共に、ＣＤ６６ｅ（＋）細胞である。
一例として、ＣＤ６６ｅ（＋）体性幹細胞（すなわち、類卵割球幹細胞）の大きさ（前述細胞の大きさ（Ｚ）の定義を参照する）は、４マイクロメータ、５マイクロメータまたは６マイクロメータ以下または等しい。一例として、０．１〜６マイクロメータ、０．５〜６マイクロメータ、１〜６マイクロメータ、０．１〜５マイクロメータ、０．５〜５マイクロメータ、１〜５マイクロメータ、０．１〜４マイクロメータ、０．５〜４マイクロメータまたは１〜４マイクロメータのいずれかの範囲であっても良い。好ましくは、類卵割球幹細胞の大きさ２ミクロン以上から６ミクロン以下である。類卵割球幹細胞は細胞（表面）マーカーＣＤ６６ｅを表現できるため、ＣＤ６６ｅ（＋）によって、その特徴を記述することができる。

超小型胚様幹細胞（ＶＳＥＬ）は、細胞核を含む多能性幹細胞であると共にＣＤ１３３（＋）と、ＣＤ１３３（＋）体性幹細胞であっても良い。超小型胚様幹細胞ＣＤ１３３（＋）に属する体性幹細胞と、ＣＤ３４（＋）体性幹細胞は、ＣＤ４５（−）と、Ｌｉｎ（−）であることが分かる。
一例として、ＣＤ３４（＋）体性幹細胞の大きさ（前述細胞の大きさ（Ｚ）の定義を参照する）は、４マイクロメータ、５マイクロメータまたは６マイクロメータ以下または等しい。一例として、０．１〜６マイクロメータ、０．５〜６マイクロメータ、１〜６マイクロメータ、０．１〜５マイクロメータ、０．５〜５マイクロメータ、１〜５マイクロメータ、０．１〜４マイクロメータ、０．５〜４マイクロメータまたは１〜４マイクロメータのいずれかの範囲であっても良い。好ましくは、ＣＤ１３３（＋）体性幹細胞と、ＣＤ３４（＋）体性幹細胞の大きさが２ミクロン以上から６ミクロン以下である。
ＣＤ１３３（＋）、ＣＤ４５（−）、Ｌｉｎ（−）多能性幹細胞の例として、この種の超小型胚様幹細胞には、ＣＤ１３３の細胞（表面）マーカーを表現することができるが、ただし、ＣＤ４５とＬｉｎとの２種の細胞（表面）マーカーを表現することができない。さらに、超小型胚様幹細胞はＣＤ１３３（＋）、ＣＤ４５（−）とＬｉｎ（−）によって、その特徴を記述することができる。ＣＤ１３３（＋）、ＣＤ４５（−）、Ｌｉｎ（−）体性幹細胞の例として、この種の超小型胚様幹細胞には、ＣＤ３４の細胞（表面）マーカーを表現することができるが、ただし、ＣＤ４５とＬｉｎとの２種の細胞（表面）マーカーを表現することができない。さらに、超小型胚様幹細胞はＣＤ１３３（＋）、ＣＤ４５（−）とＬｉｎ（−）によって、その特徴を記述することができる。

間葉系幹細胞（ＭＳＣ）は細胞核を含む多能性幹細胞であり、かつＣＤ１３（＋）体性幹細胞、ＣＤ２９（＋）体性幹細胞、ＣＤ４４（＋）体性幹細胞、ＣＤ７３（＋）体性幹細胞、ＣＤ９０（＋）体性幹細胞またはＣＤ１０５（＋）体性幹細胞であっても良い。間葉系幹細胞は、ＣＤ１３（＋）体性幹細胞、ＣＤ２９（＋）体性幹細胞、ＣＤ４４（＋）体性幹細胞、ＣＤ７３（＋）体性幹細胞、ＣＤ９０（＋）体性幹細胞、またはＣＤ１０５（＋）体性幹細胞であっても良い。
間葉系幹細胞は、以下ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０とＣＤ１０５に示す一種または複数種の細胞（表面）マーカーを表現することができる。従って、間葉系幹細胞はＣＤ１３（＋）、ＣＤ２９（＋）、ＣＤ４４（＋）、ＣＤ７３（＋）、Ｃ９０（＋）とＣＤ１０５（＋）のいずれかの一種または複数種の特徴を有しても良い。
間葉系幹細胞は、各種のそれぞれ異なる細胞群体を有しているため、様々な大きさと形状を有している。一例として、ある種の間葉系幹細胞はの大きさ（前述細胞の大きさ（Ｚ）の定義を参照する）は、４マイクロメータ、５マイクロメータまたは６マイクロメータ以下または等しい。一例として、０．１〜６マイクロメータ、０．５〜６マイクロメータ、１〜６マイクロメータ、０．１〜５マイクロメータ、０．５〜５マイクロメータ、１〜５マイクロメータ、０．１〜４マイクロメータ、０．５〜４マイクロメータまたは１〜４マイクロメータのいずれかの範囲であっても良い。さらに、その他タイプの間葉系幹細胞の大きさ（前述細胞の大きさ（Ｚ）の定義を参照する）は、６マイクロメータ、７マイクロメータまたは１０マイクロメータ以上である。

造血幹細胞（ＨＳＣ）は細胞核を有する多分化能幹細胞であり、かつＣＤ１５０（＋）、ＣＤ２４４（−）、ＣＤ４８（−）細胞とＣＤ３４（＋）、ｃＫｉｔ（−）、ＣＤ３８（−）、Ｌｉｎ（−）細胞であっても良い。
一例として、造血幹細胞ＣＤ１５０（＋）、ＣＤ２４４（−）、ＣＤ４８（−）体性幹細胞と、ＣＤ３４（＋）、ｃＫｉｔ（−）、ＣＤ３８（−）、Ｌｉｎ（−）体性幹細胞の大きさ（前述細胞の大きさ（Ｚ）の定義を参照する）は、４マイクロメータ、５マイクロメータまたは６マイクロメータ以下かまたは等しい。一例として、０．１〜６マイクロメータ、０．５〜６マイクロメータ、１〜６マイクロメータ、０．１〜５マイクロメータ、０．５〜５マイクロメータ、１〜５マイクロメータ、０．１〜４マイクロメータ、０．５〜４マイクロメータまたは１〜４マイクロメータのいずれかの範囲であっても良い。ＣＤ１３３（＋）、ＣＤ４５（−）、Ｌｉｎ（−）体性幹細胞の例として、この種の造血幹細胞には、ＣＤ３４の細胞（表面）マーカーを表現することができるが、ただし、ｃＫｉｔ、ＣＤ３８、Ｌｉｎと３種の細胞（表面）マーカーを表現することができない。よって、この種の幹細胞はＣＤ３４（＋）、ｃＫｉｔ（−）、ＣＤ３８（−）と、Ｌｉｎ（−）によって、その特徴を記述することができる。
ＣＤ１５０（＋）、ＣＤ２４４（−）、ＣＤ４８（−）体性幹細胞の例として、この種の造血幹細胞には、ＣＤ１５０の細胞（表面）マーカーを表現することができるが、ただし、ＣＤ２４４とＣＤ４８の細胞（表面）マーカーを表現することができない。よって、この種の幹細胞はＣＤ１５０（＋）、ＣＤ２４４（−）と、ＣＤ４８（−）によって、その特徴を記述することができる。

＜行為または方法（Ｘ）に関する説明＞

以下にて、行為または方法（Ｘ）の範例を挙げる。これらの行為または方法は個体（例えば、ヒトの体または非ヒトの体）の体内のある種または特定の数種の幹細胞の数を増やせることが認められている。非ヒトの体は例えば、動物であっても良い。

行為または方法（Ｘ）は、下記の項目を含む。

１．薬物の服用、例えば合成薬物または自然抽出物を含む薬物。

２．薬草または漢方薬の服用、例えば冬虫夏草、朝鮮人参、枸杞、霊芝、ベニクスノキタケ及び／またはアガリクス茸などである。

３．栄養品または栄養補助食品（ｄｉｅｔａｒｙ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）の服用、係る栄養錠剤または粉末には、以下に示すビタミン（例えばビタミンＡ、ビタミンＢ、ビタミンＢグループ、ビタミンＢ１２、ビタミンＤ、ビタミンＤ３、ビタミンＥなど）、大量または微量な鉱物質（例えばカルシウム、ナトリウム、カリウム、フッ素、臭素、クロミウム、ヨウ素、珪素、セレニウム、ベリリウム、コバルト、バナジウム、ニッケルなど）、多糖（ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）、高分子量フコース含有の糖蛋白質（ｈｉｇｈ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｆｕｃｏｓｅ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）、藻類（クロレラ、藍藻、褐藻など）、フコース（ｆｕｃｏｓｅ）、褐藻の特殊成分 − フコイダン（ｆｕｃｏｉｄａｎ）、小分子オリゴフコイダン（ｏｌｉｇｏ ｆｕｃｏｉｄａｎ）、藻類、褐藻オリゴを含める褐藻（例えば、沖縄県に生息する褐藻）、もずく（Ｍｏｚｕｋｕ）、クロレラ、藍藻、褐藻（もずく、昆布（ｋｅｌｐ）、若布（ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ）、ヒジキ（ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｆｕｓｉｆｏｒｍｅ）など）、植物化学物質（ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ）（例えば、イソフラボン（ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｓ）、植物エストロゲン（ｐｈｙｔｏｅｓｔｒｏｇｅｎ）など）、リコペン（ｌｙｃｏｐｅｎｅ）、没食子酸エピガロカテキン（ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ， ＥＧＣＧ）、緑茶エッセンス（ｇｒｅｅｎ ｔｅａ ｅｓｓｅｎｃｅ）、糖鎖栄養素（ｇｌｕｃｏｎｕｔｒｉｅｎｔｓ）（例えば、ガラクトース（Ｇａｌａｃｔｏｓｅ）、キシロース（Ｘｙｌｏｓｅ）、グルコース（Ｇｌｕｃｏｓｅ）、マンノース（Ｍａｎｎｏｓｅ）、Ｎ−アセチルグルコサミン（Ｎ−ａｃｅｔｙｌ ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ）、アセチルガラクトサミン（Ｎ−ａｃｅｔｙｌ ｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ）、アセチルノイラミン酸（Ｎ−ａｃｅｔｙｌ ｎｅｕｒａｍｉｎｉｃ ａｃｉｄ）など）、魚油、チャンチン、植物、葉っぱ、果実、野菜、魚、海藻、または藻類の栄養素いずれかの一種または複数種の物質或いは成分を含まれている。

４．精進食飲食の励行。

５．健康食品または有機食品の摂取。

６．代替（非伝統的な）薬品の服用

７．代替療法または代替治療（例えば、ゲルソン治療（Ｇｅｒｓｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ）、ブルース癌症療法（ｔｈｅ Ｂｒｅｕｓｓ ｃａｎｃｅｒ ｃｕｒｅ）など）の受け入れ。

８．鍼治療の受け入れ。

９．マッサージ（例えば、足裏マッサージ）の受け入れ。

１０．運動する（例えば、歩行、ジョギング、ダンス、体操、ヨガー、有酸素運動及び／または太極拳など）。

１１．睡眠（その目的は睡眠品質の評価）を取る。

１２．瞑想。

１３．個人、保健専門家または医師が設計した健康改善計画または疾病治療計画の進行。

１４．体内器官を改善できる栄養補助食品の服用、例えば、前立腺の健康状態を改善できるリコペンの服用。

１５．怪我の治療、治療手術による創傷治療または疾病の治療をするために、リハビリテーション計画の進行。

１６．薬用酒の飲用（薬用酒は一種または複数種の薬材を酒に所定の期間を漬けて作られる）、例えば、朝鮮人参薬用酒（朝鮮人参薬用酒は朝鮮人参を高アルコール濃度の米酒に１か月漬けて作られる）。

１７．政府部門または機関（例えば、米国食品医薬品局）が認可された特定の疾患治療（例えば、癌症、皮膚病、腎臓病など）一種又は多種薬物の服用。

１８．政府部門が認可された特定の疾患治療（例えば、癌症、皮膚病、腎臓病など）一種又は多種方法の受け入れ。

１９．祈祷または神様への礼拝などの宗教活動の取り組みや参与。

２０．太陽光（または日光）の直接または間接照射を受け、照射を受ける時間は例えば、（１）日出前１０分間から日出後５０分間まで（この時間帯に大量な赤外線を有する）の朝時間帯、（２）午前１１時３０分（１１：３０ ＡＭ）から午後１２時３０分（１２：３０ ＰＭ）まで（この時間帯に大量な紫外線を有する）の昼時間帯、または（３）日没前５０分間から日没後１０分間まで（この時間帯に大量な赤外線を有する）の午後の時間帯。

２１．可視光のフルスペクトル（ｓｐｅｃｔｒｕｍ）、赤外線のフルスペクトル、赤光のフルスペクトル、緑光のフルスペクトル、青光のフルスペクトル、紫外線のフルスペクトルまたは前述一種以上が混合された光線のフルスペクトルを含む蛍光灯または発光ダイオードの出射光源の照射。

２２．病気の後、けがの後または手術後に体の治癒力に用いる方法または治療（例えば、高濃度酸素治療）など、体の治癒力改善の計画、治療、方法、機器及び／またはシステムの進行、受け入れ。

２３．コーヒーの摂取（例えば、ブラックコーヒー）。

２４．お茶の摂取（例えば、緑茶、紅茶またはジャスミン茶）。

２５．赤ワインの摂取。

２６．メラトニン（ｍｅｌａｔｏｎｉｎ）の服用。

２７．音楽の鑑賞、例えばモーツァルトの交響曲または交響曲或ベートーヴェン交響曲。

２８．フコイダンまたは小分子フコイダンを含む物質の注射を受ける、例えば、フコイダンまたは小分子フコイダンを含む栄養品または健康補助食品。

２９．ホルモン補助剤の服用または注射。

３０．顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）の注射を受ける。係る因子はサイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）またはホルモン（糖蛋白質）であり、骨髄を刺激して果粒球白血球（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ）と幹細胞を生成し、これを血液に放出する。

３１．顆粒球コロニー刺激因子の注射治療を受ける。

３２．（１）各種のアミノ酸（例えば、アルギニン（Ａｒｇｉｎｉｎｅ）、ヒスチジン（Ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ）、リシン（Ｌｙｓｉｎｅ）、アスパラギン酸（Ａｓｐａｒｔｉｃ ａｃｉｄ）、グルタミン酸（Ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ）、セリン（Ｓｅｒｉｎｅ）、トレオニン（またはスレオニン、Ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ）、アスパラギン（Ａｓｐａｒａｇｉｎｅ）、グルタミン（Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ）、システイン（Ｃｙｓｔｅｉｎｅ）、セレノシスチン（Ｓｅｌｅｎｏｃｙｓｔｅｉｎｅ）、グリシン（Ｇｌｙｃｉｎｅ）、プロリン（Ｐｒｏｌｉｎｅ）、トリプトファン（Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ）、アラニン（Ａｌａｎｉｎｅ）、バリン（Ｖａｌｉｎｅ）、イソロイシン（Ｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ）、ロイシン（Ｌｅｕｃｉｎｅ）、メチオニン（Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）、チロシン（Ｔｙｒｏｓｉｎｅ）など）、（２）均衡アミノ酸（ｂａｌａｎｃｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ）、または（３）９種の体に必要なアミノ酸（ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、トリプトファンと、バリン）などの栄養補助食品、栄養製品、栄養エキス、栄養飲料、栄養補充剤または栄養食品の摂取。

ステップ（ａ）の例として、（ａ）小豆、緑豆または黒豆を含む発酵製品、（ｂ）一種または複数種の果物（甜菜（ｓｕｇａｒ ｂｅｅｔ）、リンゴ、グアバ、キーウィフルーツ、ぶどう、パイナップル、ドラゴンフルーツ、青パパイヤ、トマト、アボカドなど）を含む発酵物の液体、飲料またドリンクや（ｃ）一種または複数種の薬材を酒に所定の期間を漬けて作られた薬用酒、例えば、朝鮮人参を高アルコール濃度の米酒に１か月を漬けて作られる朝鮮人参薬用酒などが挙げられる。

[実施例]
図１の、本発明の一実施例による自己免疫性疾患治療（例えば、強直性脊椎炎、リウマチ性関節炎またはグレーブス病）のフロー図を参照する。本実施例において、グレーブス病（Ｇｒｏｖｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）は、一過性棘融解性皮膚症（ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ａｃａｎｔｈｏｌｙｔｉｃ ｄｅｒｍａｔｏｓｉｓ）ともいう。
図１に示すように、ステップ１０において、例えば前述した行為または方法（Ｘ）のいずれかの一つを被治療者（すなわち、個体）に所定の行為または方法を行わせる。被治療者は例えばヒト（例えば子供、青少年、成年男子、成年女子または老人）または動物（例えば哺乳動物）であっても良い。係る動物は、霊長類動物（例えば、猿またはゴリラ）、犬、げっ歯動物（例えば、ねずみまたはテンジクネズミ）、ねこ、馬、牛、羊、豚、にわとり、鴨、鵞鳥、鳥または象を含む。

例えば、ステップ１０において、被治療者にフコイダンを含む化合物の幹細胞駆動剤を服用又は摂取させる。係るフコイダンを含む化合物は、例えば褐藻補助剤である。
図２の、フコイダン補助剤の内容／成分情報を参照する。
図２に示すように、一錠のフコイダン補助剤に含むものは、８０重量パーセントのもずく粉末（ｍｏｚｕｋｕ ｐｏｗｄｅｒ）と、１５重量パーセントの結晶セルロース（ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）と、３重量パーセントのショ糖脂肪酸エステル（ｓｕｃｒｏｓｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｅｓｔｅｒｓ）と、２重量パーセントの精細シリカを含む。もずく粉末は例えば、日本の沖縄県周辺海域で生息しているもずく褐藻（一種の海藻）から抽出または（取り出す）するものである。引き続き、もずく粉末に結晶セルロースと、ショ糖脂肪酸エステルと、精細シリカとを混合すれば、フコイダン補助剤（０．１グラムのフコイダンを含む）の錠剤を獲得するうことができる。ステップ１０において、被治療者に２０錠または以上（例えば少なくとも３０錠）のフコイダン補助剤を服用又は摂取させる。つまり、被治療者に２グラムまたは以上（例えば、少なくとも３グラム）のフコイダンを服用又は摂取させる。あるいは、ステップ１０において、被治療者に顆粒球コロニー刺激因子（一種の幹細胞駆動剤）を注射させるか、または顆粒球コロニー刺激因子の注射治療を受けさせる。

図１のステップ１１において、被治療者に前述行為または方法を行わせたかまたは受け入れさせた後、例えば１５〜６０分、２０〜１００分、３０分〜４時間、６０〜９０分、０．５分〜３時間、１〜６時間、１〜１２時間、１２〜３６または３６〜５０時間の所定（予定の）時間を待機させる。
ステップ１０とステップ１１によって、一種又は多種の特定の体性幹細胞（例えばＳＢ細胞）を被治療者の骨髄から被治療者の末梢血に流せて、被治療者の末梢血を前述した種又は多種の特定の体性幹細胞（以下、「特定体性幹細胞」という。）をたくさん含ませる。特定体性幹細胞は例えば、前述「幹細胞定義」した一種又は多種の幹細胞かまたはこれを含む。例えば、特定体性幹細胞は大きかが６μｍ以下（好ましくは、１〜２μｍ以上から６μｍ以下）の体性幹細胞、例えばＣＤ３４９（＋）体性幹細胞（すなわちＳＢ−１細胞）及び／またはＬｇｒ５（＋）体性幹細胞（すなわちＳＢ−２細胞）を含むことができる。または特定体性幹細胞は例えば、大きさ１μｍ〜６μｍの体性幹細胞、例えば、ＳＢ−１細胞、ＳＢ−２細胞、類卵割球幹細胞、超小型胚様幹細胞、間葉系幹細胞および／または造血幹細胞を含むことができる。

図４に示すものは、ある実験において、６名のヒト被験者Ｃ、Ｌ、Ｍ、Ｗ、ＹとＰの幹細胞資料を示す図であり、これらの幹細胞資料は被験者Ｃ、Ｌ、Ｍ、Ｗ、ＹとＰの末梢血から採取したものである。この実験において、被験者Ｃ、Ｌ、Ｍ、ＷとＹにそれぞれ２０錠の図２に記述したフコイダン補助剤を経口に服用させる。言い換えれば、被験者Ｃ、Ｌ、Ｍ、ＷとＹにそれぞれ経口方式により、少なくとも２グラムのフコイダンを服用させる。
被験者Ｐは、この実験において対照群（コントロール群）としており、よって、前述のフコイダン補助剤を服用していない。図４において、０ｈｒは被験者Ｃ、Ｌ、Ｍ、ＷとＹにとって、「フコイダン服用前」を言い、被験者Ｐにとって、「対照試験開始するとき」を言う。１．５ｈｒは被験者Ｃ、Ｌ、Ｍ、ＷとＹにとって、「フコイダン服用後１．５時間」を言い、被験者Ｐにとって「対照試験開始後１．５時間」を言う。２４ｈｒは被験者Ｃ、Ｌ、Ｍ、ＷとＹにとって、「フコイダン服用後２４時間」を言い、被験者Ｐにとって「対照試験開始後２４時間」を言う。
図４に示すように、ＣＤ３４９（＋）細胞とＬｇｒ５（＋）細胞（すなわちＳＢ細胞）の数量はフコイダン服用後１５時間じ顕著な増加を示しているのに対して、一方、ＣＤ３４９（＋）細胞とＬｇｒ５（＋）細胞の数量は対照試験開始後１．５時間に顕著な増加は見られない。従って、フコイダンを服用または摂取することによって（例えば、フコイダン補助剤）ＳＢ細胞（例えば、ＣＤ３４９（＋）細胞と、Ｌｇｒ５（＋）細胞）を駆動し、末梢血または血液に流せて、末梢血または血液にＳＢ細胞をたくさん含ませることができる。

図５Ａにおいて、第１血液試料のうち、Ｌｇｒ５（＋）細胞（すなわちＳＢ−２細胞）のフローサイトメーター数値を示す。そのうち、第１血液試料はヒト被験者が錠粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）の注射治療を受ける前の末梢血から採取される。
図５Ｂにおいて、第２血液試料のうち、Ｌｇｒ５（＋）細胞のフローサイトメーター数値を示す。そのうち、第２血液試料はヒト被験者が錠粒球コロニー刺激因子の注射治療を受けた後の末梢血から採取される。
前述の錠粒球コロニー刺激因子の注射治療は、５日を連続して１日体重１キロ当たりに５マイクログラム（すなわち５ｍｉｃｒｏｇｒａｍｓ／ｋｇ／ｄａｙ）分量の錠粒球コロニー刺激因子を注射する。この実験において、ヒト被験者５日に連続して、毎日に１回の分量は５ｍｉｃｒｏｇｒａｍｓ／ｋｇ／ｄａｙの錠粒球コロニー刺激因子を注射する。第２血液試料は、被験者が最後の回に錠粒球コロニー刺激因子を注射後３．５時間の末梢血から採取される。
図５Ａと図５Ｂの、フローサイトメーターから得られた結果または数値を参照する。図５Ａと図５Ｂにおいて、ゾーンＱ５−ＬＲのうち、黒点はＬｇｒ５（＋）細胞を示す。第１血液試料より得られた図５Ａにおいて、ゾーンＱ５−ＬＲのＬｇｒ５（＋）細胞数量がゾーンＱ５−ＵＬ、Ｑ５−ＵＲ、Ｑ５ＬＬとＱ５ＬＲのすべての粒子または細胞数量に占める百分比は１．６％である。第２血液試料より得られた図５Ｂにおいて、ゾーンＱ５−ＬＲのＬｇｒ５（＋）細胞数量がゾーンＱ５−ＵＬ、Ｑ５−ＵＲ、Ｑ５ＬＬとＱ５ＬＲのすべての粒子または細胞数量に占める百分比は８％である。従って、錠粒球コロニー刺激因子を注射することによって、ＳＢ細胞（特にＬｇｒ５（＋）細胞）を駆動し末梢血または血液に流せて、末梢血または血液にＳＢ細胞をたくさん含ませることができる。

前述した結果または数値から分かるように、ステップ１０の行為または方法（例えば、フコイダン補助剤の摂取または錠粒球コロニー刺激因子の注射治療を受ける）は、特定体性幹細胞（例えば、ＳＢ細胞）を被治療者の末梢血に駆動させ、被治療者の末梢血が前述した行為または方法を行わせるかまたは受け入れさせた後のある時点（例えば、１．５時間または１〜６時間）に特定体性幹細胞の数量を増加させることができる。よって、ステップ１０とステップ１１によって、被治療者の末梢血に特定体性幹細胞、例えば、ＳＢ−１細胞および／またはＳＢ−２細胞をたくさん含ませることができる。

図１を参照する。ステップ１２において、ステップ１１を完了した被治療者の末梢血から血液試料をただちに取り出し、採取、獲得または抽出して、一つ又は多数の２価カチオンキレート剤を含む第１容器（例えば、一つの保存バッグ、一つまたは多数の注射器、一つまたは多数の採血管）に入れた後、血液試料と２価カチオンキレート剤を均一に混合させ、第１容器に血液試料と２価カチオンキレート剤の第１混合液を形成する。本案において、治療者の末梢血は非胚性組織である。２価カチオンキレート剤は抗凝固剤（ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔ）である。本案において、２価カチオンキレート剤は例えば、Ｋ２ ＥＤＴＡ抗凝固剤またはＫ３ ＥＤＴＡ抗凝固剤、あるいはクエン酸ナトリウム（ｃｉｔｒａｔｅ）などのエチレンジアミン四酢酸（ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ，ＥＤＴＡ）である。
各第１容器には７０ミリグラム（ｍｉｌｌｉｇｒａｍ，ｍｇ）以上の２価カチオンキレート剤、例えば、９０〜９００ミリグラムの２価カチオンキレート剤を含む、１２０〜４５０ミリグラムの２価カチオンキレート剤または１５０〜４００ミリグラムの２価カチオンキレート剤を含む。血液試料には大きさ６ミクロン以下または等しい小細胞と、大きさは６ミクロン以上大きい細胞を含む細胞がたくさん含まれている。小さい細胞は例えば、血小板（その大きさは６ミクロン以下）と、小体性感細胞（その大きさは６ミクロン以下または等しい、好ましくは１または２ミクロン以上６ミクロン以下または等しい）と、を含む。例えば、小体性感細胞は、特定体性幹細胞（例えば、ＳＢ細胞）、類卵割球幹細胞（すなわちＣＤ６６ｅ（＋）体性幹細胞）、超小型胚様幹細胞（すなわちＣＤ１３３（＋）体性幹細胞とＣＤ３４（＋）体性幹細胞）、間葉系幹細胞および造血幹細胞を含む。大きい細胞は例えば、大きさは６ミクロン以上大体性感細胞および赤血球と、白血球等の細胞系譜（ｌｉｎｅａｇｅ ｃｅｌｌ）と、を含む。
血液試料の量（体積）は、２０、３０または４５ミリリットル以上または等しい、例えば、２０〜２５０ミリリットル、６０〜５００ミリリットル、８０〜２５０ミリリットルまたは１００〜２００ミリリットル。第１混合液を獲得または形成するため、１ミリリットルの血液試料には１．５ミリグラムまたは以上（好ましくは１．６〜２．０ミリグラム）の２価カチオンキレート剤（例えば、Ｋ２ ＥＤＴＡ、Ｋ３ ＥＤＴＡまたはクエン酸ナトリウム）を混合しても良い。

引き続き、図１のステップ１３において、第１混合液に対して、図３に示すステップ２１〜ステップ２３を実行して、幹細胞溶液（または幹細胞混合液という）を形成する。引き続き図３を参照する。
ステップ２１において、第１混合液を温度２〜１２〜１２℃（好ましくは２〜７℃または約４℃）の設備に所定時間例えば、３〜７２時間、好ましくは３〜６時間、６〜７２時間、６〜４８時間、１６〜７２時間、１６〜４８時間、３６〜６０時間または４８〜７２時間を静置する。前述設備は例えば、冷蔵庫または物品を低温に維持させる装置である。
前述の所定時間を静置した第１混合液のうち、特定体性幹細胞（例えば、ＳＢ細胞）は２価カチオンキレート剤（例えば、Ｋ２ ＥＤＴＡ、Ｋ３ ＥＤＴＡまたはクエン酸ナトリウム）によって活性化される。言い換えれば、特定体性幹細胞の細胞周期はＧ０期から（またはに進行という）Ｇ１期に活性化される。係る活性化作用は、２価カチオンキレート剤（例えば、Ｋ２ ＥＤＴＡまたはＫ３ ＥＤＴＡ）によるｐ５３機能の抑制能力（キレートＺｎ^２＋による）と関係あり、ｐ５３の抑制機能によって、特定体性幹細胞をＧ０静止期から細胞周期Ｇ１に進行される。Ｐ５３タンパク質はＺｎ^２＋を取り入れなければ機能タンパク質を適切に折り畳むことはできない。よって、２価カチオンキレート剤によってＺｎ^２＋をキレートすることは、特定体性幹細胞活性化のキーステップである。このほか、２価カチオンキレート剤は、他の２価イオン（例えば、Ｃａ^２＋）のキレートによって、特定体性幹細胞を活性化させることもできる。

第１混合液がすでに前述温度を前述の所定時間で維持された後、第１混合液は重力により、２層または以上に分ける。すなわち、第１混合液に２つまたは以上の分離層が形成（例えば、上部分離層と下部分離層）される。これらの分離層の一つ例えば、上部分離層または最上層の分離層は、上清液（ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｌｉｑｕｉｄ）であり、かつ血小板（大きさは例えば６ミクロン以下）と、血清（ｓｅｒｕｍ）と、小体性感細胞と、３つの部分に分けられる。そのうち、小体性感細胞は、特定体性幹細胞（例えば、ＳＢ細胞）、類卵割球幹細胞（すなわちＣＤ６６ｅ（＋）体性幹細胞）、超小型胚様幹細胞（すなわちＣＤ１３３（＋）体性幹細胞とＣＤ３４（＋）体性幹細胞）、間葉系幹細胞と造血幹細胞を含む。
上清液の量（体積）は例えば、２０ミリリットル〜２５０ミリリットル、４０ミリリットル〜１２５ミリリットルまたは５０ミリリットル〜１００ミリリットルである。上清液の量（体積）は例えば、前述分離層のうち、上清液は２価カチオンキレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸）及び／または成長因子を含めても良い。これらの分離層のもう一つの層、例えば、下部分離層は第１混合液の大多数または非常に高い百分比の大きい細胞（赤血球と白血球等の系譜細胞および大体性感細胞を含む）を含む。例えば、係るもう一つの分離層に第１混合液の９５％、９８％、９９％または以上の大きい細胞を含む。よって、上清液は大体大きい細胞（例えば、赤血球と白血球）を含まないか、または第１混合液のうち、０．５％、１％、２％または５％以下の大きい細胞を含む。例えば、上清液は第１混合液に１％または２％以下の赤血球と、第１混合液に１％または２％以下の白血球を含む。第１混合液は少なくとも９８％または９９％の赤血球と、第１混合液に少なくとも９８％または９９％の白血球は前述もう一つの分離層に集合される。上清液の量（体積）を血液試料または第１混合液の量（体積）に割り計算して、得られた比は１／３〜１／２である。
以上をまとめると、ステップ１２とステップ２１によれば、被治療者由来の血液試料と２価カチオンキレート剤を前述温度で前述の所定時間を培養または育成し、血液試料を２層または以上に分ける。すなわち血液試料に２つまたはそれ以上の分離層を形成（それらの分離層は上清液を含む）する。

引き続き、ステップ２２において、ほとんどの部分またはほぼすべての上清液を第２容器（例えば、一つの保存バッグ、一つのバイアルまたは一つの注射器）に集合または移す。第２容器の上清液（以下、「第２混合液」という）に例えば、血小板と小体性感細胞、そのうち、小体性感細胞は特定体性幹細胞を含む（例えば、ＳＢ細胞）、類卵割球幹細胞（すなわちＣＤ６６ｅ（＋）体性幹細胞）、超小型胚様幹細胞（すなわちＣＤ１３３（＋）体性幹細胞とＣＤ３４（＋）体性幹細胞）、間葉系幹細胞と造血幹細胞などの小さい細胞を含む。大きさ２ミクロン以上６ミクロン以下体性幹細胞が第２混合液における数量は、１０００万個または３０００万個以上かまたは等しい。好ましくは２５００万〜３００００万個、３０００万〜５００００万個または１０００万〜５００００万個である。
第２混合液は例えば、２価カチオンキレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸）及び／または成長因子を含めても良い。第２混合液において、大きい細胞の数量がすべての粒子または細胞の数量に占める百分比は５％、１％、または０．５％（好ましくは０．１％または０．０１％以下）以下、小さい細胞の数量がすべての粒子または細胞の数量に占める百分比は９５％、９９％または９９．５％（好ましくは９９．９％または９９．９９％以上）以上である。

図６Ａと図６Ｂの資料に基づき、１ミリリットルの第２混合液の赤血球数を算出できる。
図６Ａはフローサイトメーターを用いて、１０マイクロリットル（ｍｉｃｒｏｌｉｔｅｒ，μｌ）の第２混合液を分析して得られた。赤血球はすなわちＣＤ２３５ａ（＋）細胞であり、図６ＡのゾーンＲ３に分布されている。ゾーンＲ３の細胞総数は２５０００である。図６Ｂ、ゾーンＲ３に関連するすべての細胞のＣＤ２３５ａ蛍光強度分布を示す。図６Ｂにおいて、蛍光直方図が垂線２ａ（すなわち参考線）によって、低い蛍光強度ゾーンＶ３−Ｌと、高い蛍光強度ゾーンＶ３−Ｒに分けられている。図６ＢのゾーンＶ３−Ｒは細胞がＣＤ２３５ａ染色に対して陽性を示す、すなわち赤血球である。図６ＢのゾーンＶ３−Ｌは細胞がＣＤ２３５ａ染色に対して陰性を示す。
図６Ｂの結果から、ゾーンＲ３の赤血球数がゾーンＲ３の細胞総数に占める百分比は０．１％を示す。ゾーンＲ３の細胞総数（すなわち２５０００）をゾーンＲ３の赤血球数がゾーンＲ３の細胞総数に占める百分比（すなわち０．１％）を乗じて、１０マイクロリットル第２混合液の赤血球数（２５）を算出する。その後、１０マイクロリットル第２混合液の赤血球数を用いて、１ミリリットルの第２混合液の赤血球数を計算する。算出した数量は２５００である。
前述の結果から分かるように、１ミリリットルの第２混合液の赤血球数は１０^５または１０^４以下である。好ましくは、１ミリリットルの第２混合液の赤血球数は１０^３以下である。このほか、第２混合液において、赤血球の大きさが２ミクロン以上１０ミクロン以下の細胞に占める百分比は３％以下、好ましくは２％、１％または０．５％以下である。

図６Ｃのフローサイトメーター資料に基づき、１ミリリットルの第２混合液の白血球数を算出できる。
図６Ｃのフローサイトメーター資料は、フローサイトメーターを用いて、５０マイクロリットルの第２混合液を分析して得られたものである。図６Ｃにおいて、ゾーンＲ１は、白血球分析するために設けられた通門（ｇａｔｉｎｇ）である。５０マイクロリットルの第２混合液に含む白血球数は、図６Ｃのフローサイトメーター資料より獲得し、算出した数は３０である。その後、５０マイクロリットル第２混合液の白血球数を用いて、１ミリリットルの第２混合液の２を計算し、算出した数量は６００である。前述結果から分かるように、１ミリリットルの第２混合液の白血球数は１０^４または１０^３以下である。好ましくは、１ミリリットルの第２混合液の白血球数は１０^２以下。このほか、第２混合液において、白血球の大きさが２ミクロン以上２０ミクロン以下の細胞に占める百分比は２％以下、好ましくは１％、０．１％または０．５％以下である。

図７Ａの、前方散乱係数（ｆｏｒｗａｒｄ ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ＦＳＣ）対側方散乱係数（ｓｉｄｅ ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ＳＳＣ）のフローサイトメトリーのドットプロット（ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｄｏｔ ｐｌｏｔ）を参照する。
図７Ａのドットプロットは、フローサイトメトリーを用いて、５．６マイクロリットルの第２混合液を分析して得られたものである。図７Ａにおいて、大きさが２ミクロン以上６ミクロン以下の細胞はゾーンＲ５に分布されている。言い換えれば、ゾーンＲ５すべての細胞の大きさは、２ミクロン以上から６ミクロン以下である。
図７Ｂに、ゾーンＲ５に関連するすべての細胞のＣＤ６１蛍光強度分布を示す。図７Ｂにおいて、蛍光直方図が垂線（すなわち参考線）によって、低い蛍光強度ゾーンＶ１−Ｌと、高い蛍光強度ゾーンＶ１−Ｒに分けられている。図７ＢのゾーンＶ１−Ｒは細胞がＣＤ６１染色に対して陽性を示す、すなわち赤血球である。図７ＢのゾーンＶ１−Ｌは細胞がＣＤ６１染色に対して陰性を示す。
図７Ｂの結果から、ゾーンＲ５の赤血球数がゾーンＲ５の細胞総数に占める百分比は８０．５％を示す。よって、第２混合液において、血小板の大きさが２ミクロン以上６ミクロン以下の細胞に占める百分比は７５％または８０％以上、好ましくは７５％〜８５％である。

図７Ｃと７Ａの、ゾーンＲ５に関連するすべての細胞のＣＤ１３３蛍光強度分布を示す。
図７Ｃにおいて、蛍光直方図が垂線（すなわち参考線）によって、低い蛍光強度ゾーンＶ３−Ｌと、高い蛍光強度ゾーンＶ３−Ｒに分けられている。図７ＣのゾーンＶ３−Ｒは細胞がＣＤ１３３染色に対して陽性を示す、すなわち赤血球である。図７ＣのゾーンＶ３−Ｌは細胞がＣＤ１３３染色に対して陰性を示す。
図７Ｃの結果から、ゾーンＲ５のＣＤ１３３（＋）細胞数がゾーンＲ５の細胞総数に占める百分比は０．３％を示す。前述から分かるように、第２混合液のうち、１％以下の細胞がＣＤ１３３を表現される。
図７Ｄと７Ａの、ゾーンＲ５に関連するすべての細胞のＣＤ３４蛍光強度分布を示す。図７Ｄにおいて、蛍光直方図が垂線（すなわち参考線）によって、低い蛍光強度ゾーンＶ１−Ｌと、高い蛍光強度ゾーンＶ１−Ｒに分けられている。図７ＤのゾーンＶ１−Ｒは細胞がＣＤ１３３染色に対して陽性を示す、すなわち超小型胚様幹細胞である。
図７ＤのゾーンＶ１−Ｒは細胞がＣＤ１３４染色に対して陰性を示す。図７Ｄの結果から、ゾーンＲ５のＣＤ３４（＋）細胞数がゾーンＲ５の細胞総数に占める百分比は０．４％を示す。このほか、第２混合液において、ＣＤ１３３（＋）細胞とＣＤ３４（＋）細胞は大きさが２ミクロン以上６ミクロン以下の細胞に占める百分比は２％以下、好ましくは１％、または０．５％以下である。

図７Ｅと７Ａの、ゾーンＲ５に関連するすべての細胞のＣＤ６６ｅ蛍光強度分布を示す。図７Ｅにおいて、蛍光直方図が垂線（すなわち参考線）によって、低い蛍光強度ゾーンＶ２−Ｌと、高い蛍光強度ゾーンＶ２−Ｒに分けられている。
図７ＥのゾーンＶ２−Ｒは細胞がＣＤ６６ｅ染色に対して陽性を示す、すなわち赤血球である。図７ＥのゾーンＶ２−Ｒは細胞がＣＤ６６ｅ染色に対して陰性を示す。図７Ｅの結果から、ゾーンＲ５のＣＤ６６ｅ（＋）細胞数がゾーンＲ５の細胞総数に占める百分比は４％を示す。このほか、第２混合液において、ＣＤ６６ｅ（＋）細胞は大きさが２ミクロン以上６ミクロン以下の細胞に占める百分比は６％以下、好ましくは５％、または４．５％以下である。

図７Ｆと７Ａの、ゾーンＲ５に関連するすべての細胞のＣＤ３４９蛍光強度分布を示す。図７Ｆにおいて、蛍光直方図が垂線（すなわち参考線）によって、低い蛍光強度ゾーンＶ３−Ｌと、高い蛍光強度ゾーンＶ３−Ｒに分けられている。
図７ＦのゾーンＶ３−Ｒは細胞がＣＤ３４９染色に対して陽性を示す、すなわちＳＢ−１細胞である。図７ＦのゾーンＶ３−Ｌは細胞がＣＤ３４９染色に対して陰性を示す。図７Ｃの結果から、ゾーンＲ５のＣＤ３４９（＋）細胞数がゾーンＲ５の細胞総数に占める百分比は５．６％を示す。このほか、第２混合液において、ＣＤ３４９（＋）細胞は大きさが２ミクロン以上６ミクロン以下の細胞に占める百分比は４％または５％以上、好ましくは４．５％〜１０％である。

図７Ｇと７Ａの、ゾーンＲ５に関連するすべての細胞のＬｇｒ５蛍光強度分布を示す。図７Ｇにおいて、蛍光直方図が垂線（すなわち参考線）によって、低い蛍光強度ゾーンＶ２−Ｌと、高い蛍光強度ゾーンＶ２−Ｒに分けられている。
図７ＧのゾーンＶ２−Ｒは細胞がＬｇｒ５染色に対して陽性を示す、すなわちＳＢ−２細胞である。図７ＧのゾーンＶ２−Ｌは細胞がＬｇｒ５染色に対して陰性を示す。図７Ｇの結果から、ゾーンＲ５のＣＤ３４（＋）細胞数がゾーンＲ５の細胞総数に占める百分比は５．４％を示す。このほか、第２混合液において、Ｌｇｒ５（＋）細胞は大きさが２ミクロン以上６ミクロン以下の細胞に占める百分比は４％または５％以上、好ましくは４．５％〜１０％である。

本実施例において、ステップ２２は一種の幹細胞の純化／分離の方法である。用語「純化／分離」は、混合液または血液試料のうち小さい細胞（ステップ１２の記述を参照し、例えば、大きさが２ミクロン以上６ミクロン以下の細胞）と大きい細胞（ステップ１２の記述を参照し、例えば、大きさが６ミクロン以上の細胞）の行為を言い、言い換えれば、係る混合液または血液試料の絶対部分またはほぼすべての大きい細胞を除去して、係る混合液または血液試料の小さい細胞を獲得する行為をいう。

引き続き、ステップ２３において、第２混合液（すなわち第２容器の上清液）を転移し、カルシウムを有しないイオン（Ｃａ^２＋）の溶液または培養液と混合して、幹細胞溶液（または幹細胞溶液という）が形成される。よって、幹細胞溶液に小さい細胞、例えば、血小板と小体性感細胞を含む、そのうち、小体性感細胞は特定体性幹細胞（例えば、ＳＢ細胞）、類卵割球幹細胞（すなわちＣＤ６６ｅ（＋）体性幹細胞）、超小型胚様幹細胞（すなわちＣＤ１３３（＋）体性幹細胞とＣＤ３４（＋）体性幹細胞）、間葉系幹細胞と造血幹細胞を含む。
カルシウムを有しないイオン溶液または培養液の量（体積）は４００ミリリットル以上、例えば、５００ミリリットル〜９００ミリリットルである。カルシウムを有しないイオンの溶液または培養液は例えば塩溶液のほか、ナグネシウムイオン（Ｍｇ^２＋）などいずれか他の２価イオンを含有しなくても良い。前述の塩溶液は塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を含む溶液、例えば、生理食塩水（ｎｏｒｍａｌ ｓａｌｉｎｅ）。生理食塩水は一般として、重量／体積百分比０．９％の塩化ナトリウム溶液を言い、約３００ｍＯｓｍ／Ｌまたは１リットルあたり９．０グラムである。
このほか、幹細胞溶液の不純物を除去するため、幹細胞溶液をさらに一つのろ過器を例えば、１７０ミクロンのろ過器にてろ過させる。ろ過済み幹細胞溶液に小さい細胞、例えば、血小板と小体性感細胞がなお含まれている。そのうち、小体性感細胞は特定体性幹細胞（例えば、ＳＢ細胞）、類卵割球幹細胞（すなわちＣＤ６６ｅ（＋）体性幹細胞）、超小型胚様幹細胞（すなわちＣＤ１３３（＋）体性幹細胞とＣＤ３４（＋）体性幹細胞）、間葉系幹細胞と造血幹細胞を含む。以下に説明する幹細胞溶液は場合によって、ろ過済み幹細胞溶液である。

図６Ａ〜図６Ｃと図７Ａ〜図７Ｇの結果から、以下の数値を算出、仮定、推測することができる。幹細胞溶液のうち、ＳＢ−１細胞は大きさが２ミクロン以上６ミクロン以下の細胞に占める百分比は４％または５％（好ましくは４．５％〜１０％）以上、ＳＢ−２細胞は大きさ２ミクロン以上６ミクロン以下の細胞に占める百分比は４％または５％（好ましくは４．５％〜１０％）以上、類卵割球幹細胞は大きさが２ミクロン以上６ミクロン以下の細胞に占める百分比は６％（好ましくは５％または４．５％以下）以下、超小型胚様幹細胞は大きさが２ミクロン以上６ミクロン以下の細胞に占める百分比は２％（好ましくは１％または０．５％以下）以下、血小板は大きさが２ミクロン以上６ミクロン以下の細胞に占める百分比は７５％または８０％（好ましくは７５％〜８５％）以上、白血球は大きさが２ミクロン以上２０ミクロン以下の細胞に占める百分比は２％（好ましくは１％、０．５％または０．１％以下）以下、赤血球は大きさが２ミクロン以上１０ミクロン以下の細胞に占める百分比は３％（好ましくは２％、１％または０．５％以下）以下である。
このほか、幹細胞溶液のうち、１％以下の細胞からＣＤ１３３が表現される。幹細胞溶液のうち、１ミリリットルの白血球数は１０４または１０３以下、好ましくは１０２以下。幹細胞溶液のうち、１ミリリットルの赤血球数は１０５または１０４以下、好ましくは１０３以下。幹細胞溶液は２価カチオンキレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸）、成長因子および／または塩類（例えば、塩化ナトリウム）を更に含むこともできる。

図１を参照する。ステップ１４において、有効量の幹細胞溶液を静脈注射方式によりにより、前述被治療者（以下、「第１個体」という）の体内（すなわち静脈自己体性幹細胞を注射）または他の被治療者（以下、「第２個体」という）の体内（すなわち静脈異体体性幹細胞を注射）に注射することにより、第１個体または第２個体の自己免疫疾患、例えば、強直性脊椎炎、リウマチ性関節炎または一過性棘融解性皮膚症（すなわちグレーブス病）を治療する。つまり、有効量の幹細胞溶液を第１個体に投与（例えば、静脈注射方式によりにより自己体性幹細胞を注射）または第２個体に投与（例えば、静脈注射方式によりにより異体体性幹細胞を注射）することにより、第１個体または第２個体の自己免疫疾患、例えば、強直性脊椎炎、リウマチ性関節炎またはグレーブス病を治療する。
第２個体は例えば、第１個体と同じ生体分類の種であり、かつ第１個体と同じ血液型を有する。「自己体性幹細胞」は個体自体の体性幹細胞から由来する。「異体体性幹細胞」は、同じ生体分類の種のもう一つの個体の体性幹細胞（遺伝子が異なる）から由来する。「有効量」は、被治療個体に、医学結果を形成する組成物の薬剤または物質（例えば、幹細胞溶液）の分量という。「治療」は、組成物、薬剤または物質（例えば幹細胞溶液）をある疾病（例えば自己免疫性疾患）を患う、または係る疾病に進展されるリスクを直面している個体に投与し、係る疾病の治癒、抑制、軽減、緩解、補償、発作を遅延、かかる疾病に続いて発作する疾病状態あるいは損傷／疾病の傾向を予防または改善をいう。

本案はステップ１０とステップ１１を省略することができる。言い換えれば、本案はステップ１２とステップ１３によって、幹細胞溶液またはろ過済み幹細胞溶液を獲得または準備した後、ステップ１４の記述に従い幹細胞溶液またはろ過済み幹細胞溶液を静脈注射方式により、第１個体体内または第２個体の体内に投与し、第１個体または第２個体の例えば、強直性脊椎炎、リウマチ性関節炎またはグレーブス病等自己免疫疾患を治療する。

本案はもう一つの実施例において、第２混合液（他の物質を有しない−−例えば、カルシウムを有しないイオンの溶液または培養液−−と混合する）を静脈注射方式により、第１個体の体内（すなわち静脈自己体性幹細胞を注射）または第２個体の体内（すなわち静脈異体体性幹細胞を注射）に投与し、第１個体または第２個体の例えば、強直性脊椎炎、リウマチ性関節炎またはグレーブス病等の自己免疫疾患を治療する。つまり、有効量の幹細胞溶液を第２個体に投与（例えば、静脈注射方式によりにより自己体性幹細胞を注射）または第２個体に投与（例えば、静脈注射方式によりにより異体体性幹細胞を注射）することにより、第１個体または第２個体の自己免疫疾患、例えば、強直性脊椎炎、リウマチ性関節炎またはグレーブス病を治療する。
本実施例において、第２混合液は幹細胞溶液（または幹細胞混合液という）を見なされる。言い換えれば、係る幹細胞溶液はステップ１０〜ステップ１２、ステップ２１とステップ２２によって準備し、またはステップ１２、ステップ２１とステップ２２によって準備する。

強直性脊椎炎（ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ）は発炎性の自己免疫性疾患に属する。この種の疾病は、主に中軸骨（ａｘｉａｌ ｓｋｅｌｅｔｏｎ）、骨盤の仙骨関節（ｓａｃｒｏｉｌｉａｃ ｊｏｉｎｔ）と、胸郭（ｔｈｏｒａｃｉｃ ｃａｇｅ）を浸潤または影響を与える。病状の進展に従って、強直性脊椎炎患者が疼痛と関節強直を経験し、ついに脊椎の活動能力を失われる。百万人を数えるヒトが強直性脊椎炎を患わっているため、安全、かつ有効な方法をもって、強直性脊椎炎を治療する必要がある。

本案において、幹細胞溶液、ろ過済み幹細胞溶液または第２混合液は、静脈注射または輸液用注射液（または注射剤）に用いることができる。係る注射液は、個体（例えばヒト）の例えば、関節炎または一過性棘融解性皮膚症（すなわちグレーブス病）等の自己免疫性疾患の治療に用いることができる。係る関節炎は、例えば、リウマチ性関節炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、乾癬性関節炎（ｐｓｏｒｉａｔｉｃ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）または強直性脊椎炎等である。

＜実験研究＞

第１の実験において、強直性脊椎炎疼痛を患う患者に図１に記述した治療方法を受けさせた。治療を受けた後、係る患者は４ヶ月を経過した現在、強直性脊椎炎による肋骨の疼痛の訴えはない。よって、図１に記述した治療方法によって、強直性脊椎炎による肋骨の疼痛を有効に緩解、抑制、治療または治癒できる。

第２の実験において、一過性棘融解性皮膚症を患う患者（体に紅斑性丘疹を見られる）に図１に記述した治療方法を受けさせた。その結果、紅斑性丘疹が患者の体から消えていたことに気づいた。よって、図１に記述した治療方法によって、一過性棘融解性皮膚症による症状を有効に緩解、抑制、治療または治癒できる。

第３の実験において、強直性脊椎炎疼痛と、乾癬性関節炎患う患者（女性、２６歳）に図１に記述した治療方法を受けさせた。治療を受けた後、係る女性患者から健康状況が改善と好転されている報告を受けた。係る女性患者は、より多くの日常活動ができるようになっている。係る女性患者の体の乾癬（ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）に悩まされていたいくつの箇所に改善が見られる。係る女性患者の報告によれば、精力がより多く、かつ、治療を受ける前の睡眠時間平均３時間に比べて、治療を受けた後の睡眠時間平均が６時間となった。このほか、治療を受けた後、再発から回復までの時間（再発したときは関節の活動が困難）は、４〜５日から２４時間に短縮されている。

第４の実験において、線維筋痛（ｆｉｂｒｏｍｙａｌｇｉａ）、関節炎と間質性肺疾患（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｌｕｎｇ ｄｉｓｅａｓｅ）を患う患者（女性、７０歳）に図１に記述した治療方法を受けさせた。治療を受けた後、係る女性患者の膝にはより多くの活動能力（治療前に比べて）が見られる。係る女性患者は２０１２年に間質性肺疾患と診断され、直近に診察を受けたとき、肺臓の混濁（ｃｌｏｕｄｉｎｅｓｓ）はすでに１０％の軽減が見られる。係る女性患者の呼気試験（ｂｒｅａｔｈａｌｙｚｅｒ ｔｅｓｔ）も、２０１２年の診断以来最も良い結果が得られている。

第５の実験において、グレーブス病と、関節炎患う患者（男性、６９歳）に図１に記述した治療方法を受けさせた。治療を受けた後、係る男性患者はグレーブス病による皮膚症が消え始めた（もともと医師に係る皮膚症は治癒できないと告げられた）。そのうえ、係る男性患者の視力は読書用眼鏡（例えば老眼鏡）の程度に改善されている。治療を受ける前の係る男性患者は、階段を歩くたびに疼痛を経験していた。治療を受けた後、膝と左足の疼痛が消えて、一週間を経ている。係る男性患の初回治療で非常に良い効果が得られた。係る男性患者と奥様は治療後に、連続して４５日のスキー運動をしていた。係る男性患者はスキーで腿部のけがによって、２回めの治療を受けた。

第６の実験において、強直性脊椎炎と高血圧を患う患者（男性、３３歳）に図１に記述した治療方法を受けさせた。治療を受けた後、係る男性患者の睡眠時間は治療を受ける前の睡眠時間に比べて長く、歩行距離も治療を受ける前に比べて遠くなっている。係る男性患者の手は周期的に痙攣しなくなり、炎症も明らかに降下している。合わせて高血圧薬を服用させ、係る男性患者の血圧が安定している。治療を受ける前に、係る男性患者は疼痛対策として、抗不安、痛み止め剤を服用していたが、現在は係る薬物の服用をすでに中止している。

よって、図１に記述した治療方法は、個体（例えば、ヒト）の例えば強直性脊椎炎、リウマチ性関節炎、乾癬性関節炎またはグレーブス病等の自己免疫疾患を治療できる。

以上は実施例をもって、本発明の特徴を説明した。当業者が本発明の内容を理解し、かつこれに基づいて実施を可能にすることを目的としており、本発明の特許請求範囲を制限されるべきでない。よって、本発明で開示された精神に基づいて完成された等効果の修飾または修正は、なお以下の述べる特許請求範囲に含む。

１０〜１４ ステップ
２１〜２３ ステップ

Claims (10)

1. 注射液調製方法であって、
   血液試料と２価カチオンキレート剤との混合液を２〜１２℃の雰囲気下で３〜７２時間静置することによって、当該混合液において、各々が１〜６μｍの大きさの複数の体性幹細胞を何れかの層の液体に含む複数の分離層を形成する工程と、
   前記混合液から、前記複数の体性幹細胞を含む液体を取得する工程と、
   前記複数の体性幹細胞を含む液体を取得する工程の後、当該液体とカルシウムイオンの存在しない液体とを混合する工程と、を備えたことを特徴とする、
   注射液調製方法。
2. 前記２価カチオンキレート剤はエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）であることを特徴とする請求項１に記載の注射液調製方法。
3. 当該注射液は強直性脊椎炎の治療用であることを特徴とする請求項１に記載の注射液調製方法。
4. 前記複数の体性幹細胞は、ＣＤ３４９（＋）幹細胞と、Ｌｇｒ５（＋）幹細胞とを含むことを特徴とする請求項１に記載の注射液調製方法。
5. 前記血液試料は、フコイダンを服用してから３０分間〜４時間経過した個体の末梢血由来であることを特徴とする請求項１に記載の注射液調製方法。
6. 幹細胞溶液調製方法であって、
   血液試料と２価カチオンキレート剤との混合液を２〜１２℃の雰囲気下で３〜７２時間静置することによって、当該混合液において、各々が１〜６μｍの大きさの複数の体性幹細胞を何れかの層の液体に含む複数の分離層を形成する工程と、
   前記混合液から、前記複数の体性幹細胞を含む液体を取得する工程と、を備え、当該幹細胞溶液が強直性脊椎炎の治療用であることを特徴とする、
   幹細胞溶液調製方法。
7. 前記複数の体性幹細胞は、ＣＤ３４９（＋）幹細胞と、Ｌｇｒ５（＋）幹細胞とを含むことを特徴とする請求項６に記載の注射液調製方法。
8. 前記２価カチオンキレート剤はエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）であることを特徴とする請求項６に記載の注射液調製方法。
9. 前記複数の体性幹細胞を含む液体は、前記２価カチオンキレート剤を含むことを特徴とする請求項６に記載の幹細胞溶液調製方法。
10. ２μｍより大であり且つ６μｍより小である大きさのＬｇｒ５（＋）体性幹細胞と、２μｍより大であり且つ６μｍより小である大きさのＣＤ３４９（＋）体性幹細胞と、を含むことを特徴とする強直性脊椎炎の治療用注射液。