JP2015199714A - 特定の波長域を有する光を照射して栽培したチャービルの抽出物を含有する皮膚外用剤や内用剤 - Google Patents
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Abstract
Description
セラミドとの関連性が高い皮膚疾患として、例えば、扁平上皮癌、乾癬及びアトピー性皮膚炎等が挙げられる。これらのことから、皮膚におけるセラミドの産生を促進することによって、扁平上皮癌、乾癬及びアトピー性皮膚炎等の皮膚疾患を治療及び予防することが可能である。
(2)波長域570〜730nmと400〜515nmとの光合成光量子束密度(PPFD)比が、4:1〜2:1であることを特徴とする請求項1記載の皮膚外用剤。
(3)波長域570〜730nmと400〜515nmとの光合成光量子束密度(PPFD)比が8:1〜1:1の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したチャービルと比較して、抗酸化効果、コラーゲン生成促進効果、マトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)阻害効果、美白効果及びセラミド産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めることを特徴とするチャービル。
(4)波長域570〜730nmと400〜515nmとの光合成光量子束密度(PPFD)比が8:1〜1:1の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したチャービルと比較して、抗酸化効果、コラーゲン生成促進効果、マトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)阻害効果、美白効果及びセラミド産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めたチャービル又は、水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒によって抽出される抽出物を含有することを特徴とする医薬品。
(5)波長域570〜730nmと400〜515nmとの光合成光量子束密度(PPFD)比が8:1〜1:1の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したチャービルと比較して、抗酸化効果、コラーゲン生成促進効果、マトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)阻害効果、美白効果及びセラミド産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めたチャービル又は、水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒によって抽出される抽出物を含有することを特徴とする食品。
(6)波長域570〜730nm及び/又は400〜515nmの光を照射して栽培したチャービルの、水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒によって抽出される抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
(7)波長域570〜730nm及び/又は400〜515nmの光を照射して栽培したチャービル、又は、そのチャービルの水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒によって抽出される抽出物。
1:0〜0:1が効果の面で好ましく、8:1〜0:1がより好ましい。その中でも特に、赤色と青色の光量比が2:1〜0:1が最も好ましい。
水分を含んだメッシュにチャービルの種子を播種し、温度22〜24℃・暗所で発芽させ、これをスポンジに包み、22〜24℃で24時間白色蛍光灯下で栽培し、育苗した。その後、水耕栽培装置を用いて、室温21〜23℃で24時間、植物の真上30cmの位置から、青色LED(ピーク波長450nm)及び赤色LED(ピーク波長660nm)を同時に照射し、赤色と青色LEDの合計光合成有効光量子束密度100μmol・m−2s−1となるように、赤色と青色の光量比を1:0〜0:1にして、栽培を行った。また、比較例1として光合成有効光量子束密度100μmol・m−2s−1となるように白色蛍光灯下で栽培を行い、比較例2として太陽光下で栽培を行った。なお、栽培中は光量比を変えなかった。4週間栽培した後、収穫し、生チャービルを得た。これを約60℃で温風乾燥させることで、チャービルの乾燥物を得た(表1)。
製造例1A 熱水抽出物
乾燥物10gに精製水200mLを加え、95〜100℃で2時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して熱水抽出物を得た(表2)。
乾燥物10gに50%エタノール200mLを加え、常温で7日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、50%エタノール抽出物を得た(表2)。
乾燥物10gにエタノール200mLを加え、常温で7日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、エタノール抽出物を得た(表2)。
フリーラジカル捕捉除去作用の評価を行った。陽性対照としてはアスコルビン酸を用いた。フリーラジカルのモデルとしては、安定なフリーラジカルであるα,α−ジフェニル−β−ピクリルヒドラジル(以下DPPHとする)を用い、試料と一定の割合で一定時間反応させ、減少するラジカルの量を波長517nmの吸光度の減少量から測定した。
各試料を、最終濃度0.1〜1.0mg/mL(アスコルビン酸は0.01mg/mL)となるように加えた0.1M酢酸緩衝液(pH5.5)2mLに無水エタノール2mL及び0.5mM DPPH無水エタノール溶液1mLを加えて反応液とした。その後、37℃で30分間反応させ、水を対照として波長517nmの吸光度を測定した。また、ブランクとして試料の代わりに精製水を加えた反応液を用いて吸光度を測定した。ブランクと比較して、吸光度が50%減少したときの試料の濃度(IC50)を算出した。
I型コラーゲン(COL1A)、MMP−1及びMMP−2 mRNA発現量の測定を行った。ヒト皮膚線維芽細胞(NB1RGB)を60mm dishに1×105個播種し、10%FBSを含むDMEM培養液にて、37℃、5%CO2条件下で培養した。コンフルエントな状態になったところで、COL1A mRNA発現量測定では各試料を最終濃度1μg/mLを添加し、MMP−1 mRNA発現量測定では各試料を最終濃度10μg/mLを添加し、MMP−2 mRNA発現量測定では各試料を最終濃度10μg/mLを添加したDMEM培養液にて、24時間培養した後、総RNAの抽出を行った。細胞からの総RNAの抽出はTRIZOL Reagent(Invitrogen)を用いて行い、総RNA量は分光光度計(NanoDrop)を用いて260nmにおける吸光度により求めた。mRNA発現量の測定は、細胞から抽出した総RNAを基にしてリアルタイムRT−PCR法により行った。リアルタイムRT−PCR法には、SuperScriptIII Platinum Two−Step qRT−PCR Kit with SYBR Green(Invitrogen)を用いた。すなわち、500ngの総RNAを逆転写反応後、PCR反応(95℃:15秒間、60℃:30秒間、40cycles)を行った。その他の操作は定められた方法に従い、COL1A、MMP−1及びMMP−2 mRNAの発現量を、内部標準であるβ―actin mRNAの発現量に対する割合として求めた。COL1A発現量は、コントロールのCOL1A mRNAの発現量に対する試料添加群のCOL1A mRNAの発現量の比率として算出した。MMP発現量についても、同様に算出した。尚、各遺伝子の発現量の測定に使用したプライマーは次の通りである。
AGGACAAGAGGCATGTCTGGTT(配列番号1)
TTGCAGTGGTAGGTGATGTTCTG(配列番号2)
MMP−1用のプライマーセット
GGGAGATCATCGGGACAACTC(配列番号3)
TGAGCATCCCCTCCAATACC(配列番号4)
MMP−2用のプライマーセット
CCGTCGCCCATCATCAA(配列番号5)
CTTCTGCATCTTCTTTAGTGTGTCCTT(配列番号6)
β―Actin用のプライマーセット
CACTCTTCCAGCCTTCCTTCC(配列番号7)
GTGTTGGCGTACAGGTCTTTG(配列番号8)
対数増殖期にあるB16マウスメラノーマ細胞を60mm dishに3×104個播種し、各試料(最終濃度100μg/mL)を含むEagles’MEM(10%牛胎児血清含有)培地にて、37℃、5%CO2条件下で5日間培養した。次に、細胞をdishから剥離し、超音波破砕した後、4N NaOHを加え60℃で2時間の処理を行い、分光光度計でO.D.475nmを測定した。尚、超音波処理後の細胞破砕液についてLowryの方法(J.Biol.Chem.,193,265−275,1951)にてタンパク定量し、タンパク量当りのメラニン量を算出、試料未添加のメラニン生成量をコントロールとし、コントロールに対する試料添加時のメラニン生成量の値からメラニン生成抑制率を算出した。
セラミド合成における律速酵素遺伝子であるserine palmitoyltransferase long chain base subunit 1 (SPTLC1)のmRNA発現量を指標として評価した。すなわち、ケラチノサイト由来HaCaT細胞を6wellプレートに1wellあたり5×104個播種し、10%FBSを含むDMEM培養液にて、37℃、5%CO2条件下で4日間培養した。次に、各試料(最終濃度1μg/mL)を添加したDMEM培養液にて、24時間培養した後、総RNAの抽出を行った。細胞からの総RNAの抽出はTRIZOL Reagent(Invitrogen)を用いて行い、総RNA量は分光光度計(NanoDrop)を用いて260nmにおける吸光度により求めた。mRNA発現量の測定は、細胞から抽出した総RNAを基にしてリアルタイムRT−PCR法により行った。リアルタイムRT−PCR法には、SuperScriptIII Platinum Two−Step qRT−PCR Kit with SYBR Green(Invitrogen)を用いた。すなわち、500ngの総RNAを逆転写反応後、PCR反応(95℃:15秒間、60℃:30秒間、40cycles)を行った。その他の操作は定められた方法に従い、SPTLC1 mRNAの発現量を、内部標準であるGAPDH mRNAの発現量に対する割合として求めた。SPTLC1発現量は、コントロールのSPTLC1 mRNAの発現量に対する試料添加群のSPTLC1 mRNAの発現量の比率として算出した。尚、各遺伝子の発現量の測定に使用したプライマーは次の通りである。
TGGTCACGGTGGAACAAACA(配列番号9)
GCCTGGGCTACCTCCTTGA(配列番号10)
GAPDH用のプライマーセット
TGCACCACCAACTGCTTAGC(配列番号11)
TCTTCTGGGTGGCAGTGATG(配列番号12)
処方 配合量(部)
1.製造例3Aの抽出物 1.0
2.1,3‐ブチレングリコール 8.0
3.グリセリン 2.0
4.キサンタンガム 0.02
5.クエン酸 0.01
6.クエン酸ナトリウム 0.1
7.エタノール 5.0
8.パラオキシ安息香酸メチル 0.1
9.ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油(40E.O.) 0.1
10.香料 適量
11.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分1〜6及び11と、成分7〜10をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
処方 配合量(部)
1.製造例4Aの抽出物 0.5
2.スクワラン 5.5
3.オリーブ油 3.0
4.ステアリン酸 2.0
5.ミツロウ 2.0
6.ミリスチン酸オクチルドデシル 3.5
7.ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.) 3.0
8.ベヘニルアルコール 1.5
9.モノステアリン酸グリセリン 2.5
10.香料 0.1
11.パラオキシ安息香酸メチル 0.25
12.1,3‐ブチレングリコール 8.5
13.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分2〜9を加熱溶解して混合し、70℃に保ち油相とする。成分1及び11〜13を加熱溶解して混合し、75℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、45℃で成分10を加え、更に30℃まで冷却して製品とする。
処方 配合量(部)
1.製造例2Aの抽出物 1.0
2.スクワラン 5.0
3.オリーブ油 5.0
4.ホホバ油 5.0
5.セタノール 1.5
6.モノステアリン酸グリセリン 2.0
7.ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.) 3.0
8.ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート(20E.O.) 2.0
9.香料 0.1
10.プロピレングリコール 1.0
11.グリセリン 2.0
12.パラオキシ安息香酸メチル 0.2
13.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分2〜8を加熱溶解して混合し、70℃に保ち油相とする。成分1及び10〜13を加熱溶解して混合し、75℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、45℃で成分9を加え、更に30℃まで冷却して製品とする。
処方 配合量(部)
1.製造例4Cの抽出物 0.001
2.エタノール 5.0
3.パラオキシ安息香酸メチル 0.1
4.ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油(60E.O.) 0.1
5.香料 適量
6.1,3‐ブチレングリコール 5.0
7.グリセリン 5.0
8.キサンタンガム 0.1
9.カルボキシビニルポリマー 0.2
10.水酸化カリウム 0.2
11.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分2〜5と、成分1及び6〜11をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
処方 配合量(部)
1.製造例5Aの抽出物 0.1
2.製造例5Bの抽出物 0.1
3.ポリビニルアルコール 12.0
4.エタノール 5.0
5.1,3‐ブチレングリコール 8.0
6.パラオキシ安息香酸メチル 0.2
7.ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油(20E.O.) 0.5
8.クエン酸 0.1
9.クエン酸ナトリウム 0.3
10.香料 適量
11.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分1〜11を均一に溶解し製品とする。
処方 配合量(部)
1.製造例3Aの抽出物 1.0
2.ステアリン酸 2.4
3.ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート(20E.O.) 1.0
4.ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.) 2.0
5.セタノール 1.0
6.液状ラノリン 2.0
7.流動パラフィン 3.0
8.ミリスチン酸イソプロピル 6.5
9.カルボキシメチルセルロースナトリウム 0.1
10.ベントナイト 0.5
11.プロピレングリコール 4.0
12.トリエタノールアミン 1.1
13.パラオキシ安息香酸メチル 0.2
14.二酸化チタン 8.0
15.タルク 4.0
16.ベンガラ 1.0
17.黄酸化鉄 2.0
18.香料 適量
19.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分2〜8を加熱溶解し、80℃に保ち油相とする。成分19に成分9をよく膨潤させ、続いて、成分1及び10〜13を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分14〜17を加え、ホモミキサーで撹拌し75℃に保ち水相とする。この油相に水相をかき混ぜながら加え、乳化する。その後冷却し、45℃で成分18を加え、かき混ぜながら30℃まで冷却して製品とする。
処方 配合量(部)
1.製造例6Aの抽出物 5.0
2.製造例6Bの抽出物 1.0
3.炭酸水素ナトリウム 50.0
4.黄色202号(1) 適量
5.香料 適量
6.硫酸ナトリウムにて全量を100とする
[製造方法]成分1〜6を均一に混合し製品とする。
処方 配合量(部)
1.製造例4Bの抽出物 0.5
2.ポリオキシエチレンセチルエーテル(30E.O.) 2.0
3.モノステアリン酸グリセリン 10.0
4.流動パラフィン 5.0
5.セタノール 6.0
6.パラオキシ安息香酸メチル 0.1
7.プロピレングリコール 10.0
8.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分2〜5を加熱溶解して混合し、70℃に保ち油相とする。成分1及び6〜8を加熱溶解して混合し、75℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら30℃まで冷却して製品とする。
処方 配合量(部)
1.製造例4Aの抽出物 20.0
2.乾燥コーンスターチ 30.0
3.微結晶セルロース 50.0
[製造方法]成分1〜3を混合し、散剤とする。
処方 配合量(部)
1.製造例4Aの抽出物 3.0
2.乾燥コーンスターチ 27.0
3.カルボキシメチルセルロースカルシウム 20.0
4.微結晶セルロース 40.0
5.ポリビニルピロリドン 7.0
6.タルク 3.0
[製造方法]成分1〜4を混合し、次いで成分5の水溶液を結合剤として加えて顆粒成形する。成形した顆粒に成分6を加えて打錠する。1錠0.52gとする。
処方 配合量(部)
1.製造例5Aの抽出物 0.5
2.乾燥コーンスターチ 50.0
3.エリスリトール 40.0
4.クエン酸 5.0
5.ショ糖脂肪酸エステル 3.0
6.香料 適量
7.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分1〜4及び7を混合し、顆粒成形する。成形した顆粒に成分5及び6を加えて打錠する。1粒1.0gとする。
処方 配合量(部)
1.製造例5Aの抽出物 2.0
2.果糖ブドウ糖液糖 12.5
3.クエン酸 0.1
4.香料 0.05
5.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分1〜5を混合し、飲料とする。
処方 配合量(部)
1.製造例7Aの抽出物 10.0
2.粉糖 65.0
3.粉末ピーチ果汁 15.0
4.L−アスコルビン酸 8.0
5.結晶クエン酸 1.2
6.クエン酸ナトリウム 0.75
7.アスパルテーム 0.02
8.粉末ピーチ香料 0.03
[製造方法]成分1〜8を混合し、粉末飲料とする。
処方 配合量(部)
1.チャービル乾燥物(比較例を除く実施例1の表1) 1.0
2.ペパーミント 0.5
3.ローズヒップ 0.5
[製造方法]成分1〜3を混合し、ティーバッグに2gを封入してハーブティーとする。
Claims (7)
- 波長域570〜730nmと400〜515nmとの光合成光量子束密度(PPFD)比が8:1〜1:1の光を照射して栽培したチャービルの、水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒による抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
- 波長域570〜730nmと400〜515nmとの光合成光量子束密度(PPFD)比が、4:1〜2:1であることを特徴とする請求項1記載の皮膚外用剤。
- 波長域570〜730nmと400〜515nmとの光合成光量子束密度(PPFD)比が8:1〜1:1の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したチャービルと比較して、抗酸化効果、コラーゲン生成促進効果、マトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)阻害効果、美白効果及びセラミド産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めることを特徴とするチャービル。
- 波長域570〜730nmと400〜515nmとの光合成光量子束密度(PPFD)比が8:1〜1:1の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したチャービルと比較して、抗酸化効果、コラーゲン生成促進効果、マトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)阻害効果、美白効果及びセラミド産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めたチャービル又は、水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒によって抽出される抽出物を含有することを特徴とする医薬品。
- 波長域570〜730nmと400〜515nmとの光合成光量子束密度(PPFD)比が8:1〜1:1の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したチャービルと比較して、抗酸化効果、コラーゲン生成促進効果、マトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)阻害効果、美白効果及びセラミド産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めたチャービル又は、水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒によって抽出される抽出物を含有することを特徴とする食品。
- 波長域570〜730nm及び/又は400〜515nmの光を照射して栽培したチャービルの、水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒によって抽出される抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
- 波長域570〜730nm及び/又は400〜515nmの光を照射して栽培したチャービル、又は、そのチャービルの水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒によって抽出される抽出物。
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