JP2015030702A

JP2015030702A - 新規化合物及びその利用

Info

Publication number: JP2015030702A
Application number: JP2013161407A
Authority: JP
Inventors: 田中　克典; Katsunori Tanaka; 克典田中; 恭良渡辺; Yasuyoshi Watanabe; 聡野崎; Satoshi Nozaki; 浩一深瀬; Koichi Fukase
Original assignee: Osaka University NUC; RIKEN Institute of Physical and Chemical Research
Current assignee: Osaka University NUC; RIKEN Institute of Physical and Chemical Research
Priority date: 2013-08-02
Filing date: 2013-08-02
Publication date: 2015-02-16
Anticipated expiration: 2033-08-02
Also published as: JP6327547B2

Abstract

【課題】ＤＯＴＡ（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸）などの配位子を含有する化合物に⁶⁸Ｇａ等を配位させた後に、生体分子のアミノ基等への⁶⁸Ｇａ−ＤＯＴＡ標識等を実施可能な化合物の提供を可能とする。
【解決手段】下記一般式（Ｉ）で表される化合物またはその塩。
【化１】

【選択図】図３

Description

本発明は、新規な化合物及びその利用に関するものである。

生体を非侵襲のままで診断する方法として、従来、ＰＥＴ（陽電子放射断層画像)イメージング、蛍光イメージング、ＭＲＩ（磁気共鳴映像法）等が用いられている。これらの方法では、生体内に存在する、タンパク質、抗体、ペプチド、糖鎖等の分子を標識化、例えば放射性標識を用いて標識化し、その標識を検出することにより、生体における前記分子の分布等をイメージングする。このイメージングを用いて、前記生体の疾患等を診断することが可能である。

⁶⁸Ｇａは、ＰＥＴイメージングの標識に使用されるポジトロン放出核種である。¹⁸Ｆや¹¹Ｃ、あるいは⁶⁴Ｃｕを代表とする他のポジトロン放出核種はサイクロトロンを用いて調製されるが、⁶⁸Ｇａは⁶⁸Ｇｅの減衰を利用して、ジェネレーターから簡単に得られるため、次世代のＰＥＴ核種として大きな興味が持たれている。実際の標識では、生体分子のアミノ基等に対して、まずＤＯＴＡ（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸）などの配位子を導入した後、⁶⁸Ｇａを配位させることにより⁶⁸Ｇａ−ＤＯＴＡ標識が実施されている（例えば、特許文献１）。実際に、⁶⁸Ｇａ−ＤＯＴＡで標識したソマトスタチン（ペプチド）の代謝安定化合物であるオクタレオチドは、アメリカでは癌の診断に用いられている。しかし、ＤＯＴＡへの⁶⁸Ｇａ導入には、８０℃以上の加温が必要であり、ソマトスタチンなどの安定なペプチドにしか、この方法を適応することができず、⁶⁸Ｇａ−ＤＯＴＡを用いるＰＥＴイメージングの懸案事項であった。

国際公開第２００８／０９６７６０号パンフレット

そこで、本発明は、ペプチド、タンパク質又は細胞表面に、金属錯体又は蛍光化合物を容易に導入するのに有用な化合物の提供を目的とする。

本発明は、下記一般式（Ｉ）で表される化合物またはその塩である。

式（Ｉ）中、
Ｚは、１，４−フェニレン、１，３−フェニレンまたは１，２−フェニレンであり、
Ｒ¹は、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、１以上の置換基で置換された炭素数１〜６のアルキル基、炭素数７〜１８のアラルキル基、１以上の置換基で置換された炭素数７〜１８のアラルキル基、炭素数６〜１２のアリール基、または１以上の置換基で置換された炭素数６〜１２のアリール基であり、
Ｒ²は、−ＣＨＯ、−ＣＨ₂ＯＨまたは−ＣＨ₂ＯＲ¹⁰である（Ｒ¹⁰は、水酸基の保護基であり、
Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷、およびＲ¹⁸は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、飽和もしくは不飽和の炭化水素基、アリール基、アルコキシ基、アラルキル基、アリールオキシ基、複素環基、アミノ基、ニトロ基またはシアノ基であり、
Ｌ¹は、式−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ₂）_m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、式−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ₂）_m−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ₂）_m−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（前記式中、ｍは、１〜２０の整数である。）で表される基であり、
Ｌ²は、式−（ＣＨ₂）_n1−、式−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−、式−（ＣＨ₂）_n1−ＣＯＮＨ−、式−ＣＯＮＨ−（ＣＨ₂）_n1−、式−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−、式−ＮＨ−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−、式−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−ＮＨ−、式−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−Ｏ−（ＣＨ₂）_n4−、式−ＮＨ−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−Ｏ−（ＣＨ₂）_n4−、または、式−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−Ｏ−（ＣＨ₂）_n4−ＮＨ−（前記式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３およびｎ４は、それぞれ独立して１〜２０の整数である。）で表わされる基であり、
Ａは、以下の式（ｉ）〜（ｉｉｉ）で表される基にＭが配位した基(ＭはＧａ、Ｇｄ、Ｃｕ、Ｙ、Ｉｎ、Ｌｕ、Ｔｂ、Ｅｕ、ＹｂまたはＥｒのイオンである）、または、式（ｉｖ）〜（ｘｉｉ）で表される基である。

本発明の化合物は、ペプチド、タンパク質又は細胞表面に、金属錯体又は蛍光化合物を導入するのに有用である。

式（Ｉ−１）の化合物の精製時のＨＰＬＣチャートである。式（Ｘ−１）の化合物の精製時のＨＰＬＣチャートである。式（Ｉ−１）の化合物を用いたＰＥＴイメージングの画像である。式（Ｉ−２）の化合物の精製時のＨＰＬＣチャートである。式（Ｘ−２）の化合物の精製時のＨＰＬＣチャートである。式（Ｉ−３）の化合物によるタンパク質の蛍光標識を示すチャートである。式（Ｉ−４）の化合物によるタンパク質の蛍光標識を示すチャートである。

本発明者らは、アセチレン誘導体とアジド基とのクリック型反応を利用し、種々検討した結果、以下のような化合物が、ペプチド、タンパク質又は細胞表面に、金属錯体又は蛍光化合物を導入可能であることを見出し、本発明を完成した。前記反応を利用するため、本発明の化合物は製造が容易である。

式（Ｉ）中、
Ｚは、１，４−フェニレン、１，３−フェニレンまたは１，２−フェニレンであり、
Ｒ¹は、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、１以上の置換基で置換された炭素数１〜６のアルキル基、炭素数７〜１８のアラルキル基、１以上の置換基で置換された炭素数７〜１８のアラルキル基、炭素数６〜１２のアリール基、または１以上の置換基で置換された炭素数６〜１２のアリール基であり、
Ｒ²は、−ＣＨＯ、−ＣＨ₂ＯＨまたは−ＣＨ₂ＯＲ¹⁰である（Ｒ¹⁰は、水酸基の保護基であり、
Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷、およびＲ¹⁸は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、飽和もしくは不飽和の炭化水素基、アリール基、アルコキシ基、アラルキル基、アリールオキシ基、複素環基、アミノ基、ニトロ基またはシアノ基であり、
Ｌ¹は、式−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ₂）_m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、式−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ₂）_m−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ₂）_m−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（前記式中、ｍは、１〜２０の整数であり、好ましくは１〜１０の整数であり、より好ましくは１〜５の整数であり、さらに好ましくは１〜２の整数である。）で表される基であり、
Ｌ²は、式−（ＣＨ₂）_n1−、式−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−、式−（ＣＨ₂）_n1−ＣＯＮＨ−、式−ＣＯＮＨ−（ＣＨ₂）_n1−、式−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−、式−ＮＨ−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−、式−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−ＮＨ−、式−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−Ｏ−（ＣＨ₂）_n4−、式−ＮＨ−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−Ｏ−（ＣＨ₂）_n4−、または、式−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−Ｏ−（ＣＨ₂）_n4−ＮＨ−（前記式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３およびｎ４は、それぞれ独立して１〜２０の整数であり、好ましくは１〜１０の整数であり、より好ましくは１〜５の整数であり、さらに好ましくは１〜２の整数である。）で表わされる基であり、
Ａは、以下の式（ｉ）〜（ｉｉｉ）で表される基にＭが配位した基(ＭはＧａ、Ｇｄ、Ｃｕ、Ｙ、Ｉｎ、Ｌｕ、Ｔｂ、Ｅｕ、ＹｂまたはＥｒのイオンである）、または、式（ｉｖ）〜（ｘｉｉ）で表される基である。

前記一般式（Ｉ）で表される化合物またはその塩は、式中、Ｒ¹は、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、または１以上の置換基で置換された炭素数１〜６のアルキル基であり、
Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷、およびＲ¹⁸は、水素原子であり、
Ｌ¹は、式−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ₂）_m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−で表される基であり（前記式中、ｍは、１〜１０の整数である。）、
Ｌ²は、式−ＮＨ−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−Ｏ−（ＣＨ₂）_n4−、または、式−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−Ｏ−（ＣＨ₂）_n4−ＮＨ−（前記式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３およびｎ４は、それぞれ独立して１〜１０の整数である。）で表わされる基であり、
Ａは、式（ｉ）で表される基にＭが配位した基(ＭはＧａ、Ｇｄ、Ｃｕ、Ｙ、Ｉｎ、Ｌｕ、Ｔｂ、Ｅｕ、ＹｂまたはＥｒのイオンである）または式（ｉｘ）もしくは式（ｖ）で表される基であるのが好ましい。

前記一般式（Ｉ）で表される化合物またはその塩は、式中、Ｒ¹は、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、または１以上の置換基で置換された炭素数１〜６のアルキル基であり、
Ｒ²が−ＣＨＯであり、
Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷、およびＲ¹⁸は、水素原子であり、
Ｌ¹は、式−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ₂）_m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−で表される基であり（前記式中、ｍは、１〜５の整数である。）、
Ｌ²は、式−ＮＨ−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−Ｏ−（ＣＨ₂）_n4−、または、式−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−Ｏ−（ＣＨ₂）_n4−ＮＨ−（前記式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３およびｎ４は、それぞれ独立して１〜２の整数である。）で表わされる基であり、
Ａは、式（ｉ）で表される基にＭが配位した基(ＭはＧａ、Ｇｄ、Ｃｕ、Ｙ、Ｉｎ、Ｌｕ、Ｔｂ、Ｅｕ、ＹｂまたはＥｒのイオンである）または式（ｉｘ）もしくは式（ｖ）で表される基であるのがより好ましい。

本願明細書において用いる種々の用語の定義およびその例示は以下のとおりである。

本発明において、「低級」は、特に指示がなければ、炭素原子１〜６個、好ましくは炭素原子１〜４個を意味する。

本発明において、化合物の塩は、好ましくは無毒性で医薬として許容しうる慣用の塩であり、例えばナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属との塩、アンモニウム塩などの無機塩基との塩、及びトリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンアミンなどの有機アミンとの塩、及び塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸などの無機酸との塩、及びギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸、酒石酸などの有機カルボン酸との塩、及びメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などのスルホン酸の付加塩、及びアルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸などの塩基性又は酸性アミノ酸といった塩基との塩又は酸付加塩が挙げられる。

「炭素数１〜６のアルキル基」および「炭素数７〜１８のアラルキル基」における「アルキル」部分としては、炭素数１〜６のアルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル等のような直鎖状もしくは分岐鎖状の炭素数１〜６のアルカンの残基を意味する。前記アルキル基および前記アルキル部分の好ましい例としては、炭素数１〜５のアルキルが挙げられる。好ましい炭素数１〜５のアルキルとしては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチル等が挙げられる。

「アリール基」としては、フェニル、ナフチル、インデニル、アントリル、フェナントレニル、ピレニルなどのアリール基が挙げられる。好ましくは、炭素数６〜２２のアリール基、より好ましくは前記炭素数６〜１２のアリール基が挙げられる。

また、「炭素数６〜１２のアリール基」および「炭素数７〜１８のアラルキル基」における「アル」部分としては、フェニル、ナフチル、ジヒドロナフチル（例えば１，２−ジヒドロナフチル、１，４−ジヒドロナフチルなど）、テトラヒドロナフチル（例えば１，２，３，４−テトラヒドロナフチルなど）、インデニル、アントリルなどの炭素数６〜１２のアリール基が挙げられる。中でも、アリール基およびアル部分として好ましいのは、炭素数６〜１０のアリールであり、より好ましいのはフェニル、ナフチルである。

また、「アラルキル基」は、前記アルキルの任意の炭素原子に、前記アリール基が結合したものを意味する。前記アラルキル基の例としては、炭素数１〜６のアルキルに炭素数６〜１２のアリールが結合したものが挙げられる。前記炭素数１〜６のアルキルに炭素数６〜１２のアリールが結合したものの例としては、ベンジル、フェネチル、３−フェニルプロピル、ベンズヒドリル、トリチル等が挙げられる。前記アラルキル基は、好ましくはベンジル、トリチル等である。

「１以上の置換基で置換されたアルキル基」、「１以上の置換基で置換されたアラルキル基」および「１以上の置換基で置換されたアリール基」における置換基としては、イミノ基、アミノ基、保護されたアミノ基、モノ（またはジ）低級アルキルアミノ基、Ｎ−低級アルキル−保護されたアミノ基、低級アルキル、ヒドロキシ基、保護されたヒドロキシ基、アシルオキシ基、低級アルコキシ基、アシル基、アミノ（低級）アルキル基、保護されたアミノ（低級）アルキル基、ヘテロアリール基、ヒドロキシ基を有するアリール基、カルボキシ基、保護されたカルボキシ基、スルファニル基、保護されたスルファニル基等が挙げられる。

「ハロゲン原子」は、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子である。
「飽和もしくは不飽和の炭化水素基」としては、アルキル基、アルケニル基または、アルキニル基が挙げられる。アルキル基としては、炭素数１〜２０のアルキル基が挙げられ、炭素数１〜１５のアルキル基が好ましい。アルケニル基としては、炭素数２〜２０のアルケニル基が挙げられ、炭素数２〜１５のアルケニル基が好ましい。アルキニル基としては、炭素数２〜２０のアルキニル基が挙げられ、炭素数２〜１５のアルキニル基が好ましい。

「アルコキシ基」としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、第三級ブトキシ、ペンチルオキシ、第三級ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ等が挙げられる。

「アリールオキシ基」としては、アリールにエーテル結合が結合したものが挙げられる。前記アリールにエーテル結合が結合したものの例としては、フェノキシ、ナフチルオキシ、インデニルオキシ、アントリルオキシ、フェナントレニルオキシ、ピレニルオキシ等が挙げられる。前記アリールオキシ基は、好ましくはフェノキシである。

「複素環基」としては、窒素原子、硫黄原子および酸素原子から選択される１種以上の原子を１つ以上有する、３〜８員、好ましくは５または６員の複素単環または縮合複素環が挙げられる。

一般式（Ｉ）で表される化合物またはその塩は、例えば、以下の方法により製造することができる。

本発明は、下記一般式（ＩＩ）の化合物と下記一般式（ＩＶ）の化合物とを反応させる工程を含む製造方法である。

前記式(ＩＩ)および（ＩＶ）中、Ａ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷、Ｒ¹⁸、Ｌ¹、Ｌ²およびＺの定義は、前記の式（Ｉ）におけるＡ、Ｒ¹、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷、Ｒ¹⁸、Ｌ¹、Ｌ²およびＺの定義と同様である。

前記一般式（ＩＩ）の化合物と前記一般式（ＩＶ）の化合物とを反応させる工程は、例えば２５〜２００℃、好ましくは７０〜１２０℃で行うことができる。また、前記反応は、極性溶媒、例えばジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、アルコール(メタノール、エタノール等）、ジクロロメタン、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）等中で行うことできる。

得られた一般式（Ｉ）の化合物は、ＨＰＬＣ等で精製してもよいし、そのまま、次の反応に用いてもよい。

なお、前記式（ＩＩ）で表わされる化合物は、市販で入手してもよいし、公知文献を利用して自家製造してもよい。

一例として、式（ＩＩ）の化合物は、以下のようにして製造することができる。Ａが式（ｉ）で表される基にＭが配位した基(ＭはＧａ、Ｇｄ、Ｃｕ、Ｙ、Ｉｎ、Ｌｕ、Ｔｂ、Ｅｕ、ＹｂまたはＥｒのイオンである）である式（ＩＩ）の化合物（下記式（ＩＩ−１））は、一般式（ＩＩＩ−１）の化合物にＭを反応させて、得ることができる。なお、下記式（ＩＩ−１）は、Ｍが配位数４の場合を例示している。

一般式（ＩＩＩ−１）の化合物にＭを反応させる工程は、例えば、一般式（ＩＩＩ−１）の化合物に金属クロリド（ＭＣｌｘ）、または相当する金属塩を反応させることにより、行うことができる。前記式中、ｘは、Ｍの配位数を表す。

得られた一般式（ＩＩ−１）の化合物は、ＨＰＬＣ等で精製してもよいし、そのまま、次の反応に用いてもよい。この場合、Ａが式（ｉ）で表される基にＭが配位した基である式（ＩＩ）の化合物を原料に、Ａが式（ｉ）で表される基にＭが配位した基である式（Ｉ）の化合物を製造することができるため、このような式（Ｉ）の化合物を容易に製造できるという利点がある。

別の一例として、Ａが式（ｉｘ）で表される基であり、Ｌ²が式−ＮＨ−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−Ｏ−（ＣＨ₂）_n4−で表される基である式（ＩＩ）の化合物（下記式（ＩＩ−２））は、一般式（Ｖ）の化合物に式（ＶＩ）の化合物を反応させて、得ることができる。

また、本発明は、下記一般式（ＩＶ）で表される化合物またはその塩である。

式（ＩＶ）中、
Ｚは、１，４−フェニレン、１，３−フェニレンまたは１，２−フェニレンであり、
Ｒ¹は、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、１以上の置換基で置換された炭素数１〜６のアルキル基、炭素数７〜１８のアラルキル基、１以上の置換基で置換された炭素数７〜１８のアラルキル基、炭素数６〜１２のアリール基、または１以上の置換基で置換された炭素数６〜１２のアリール基であり、
Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷、およびＲ¹⁸は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、飽和もしくは不飽和の炭化水素基、アリール基、アルコキシ基、アラルキル基、アリールオキシ基、複素環基、アミノ基、ニトロ基またはシアノ基であり、
Ｌ¹は、式−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ₂）_m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、式−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ₂）_m−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ₂）_m−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（前記式中、ｍは、１〜２０の整数である。）で表される基であり、
Ｒ²は、−ＣＨＯ、−ＣＨ₂ＯＨまたは−ＣＨ₂ＯＲ¹⁰である（Ｒ¹⁰は、水酸基の保護基である。

Ｒ²がＣＨＯである前記式（ＩＶ）の化合物は、例えば、以下のスキームに従い、Ｒ²が−ＣＨ₂ＯＲ¹⁰または−ＣＨ₂ＯＨである前記式（ＩＶ）の化合物から得ることができる。

Ｒ²が−ＣＨ₂ＯＲ¹⁰である前記式（ＩＶ）で表される化合物は、予め、Ｒ¹⁰を脱離（すなわち、脱保護）させて、Ｒ²が−ＣＨ₂ＯＨである前記式（ＩＶ）で表される化合物を得るのが好ましい。Ｒ²が−ＣＨ₂ＯＨである前記式（ＩＶ）で表される化合物を酸化することにより、Ｒ²が−ＣＨＯである前記式（ＩＶ）で表される化合物、すなわち、式（ＩＶ）で表される化合物を得ることができる。

また、本発明は、HiLyte Fluoro（登録商標）750 Bis-NHSエステルまたはHiLyte Fluoro（登録商標）647-NHSエステルをアジド体に変換し、得られたアジド体と下記式（ＩＶ）の化合物とを反応させて得られる縮合体またはその塩である。

式（ＩＶ）中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷、Ｒ¹⁸、Ｌ¹およびＺの定義は、式（Ｉ）に記載のとおりである。

また、本発明は、HiLyte Fluoro（登録商標）750 Bis-NHSエステルまたはHiLyte Fluoro（登録商標）647-NHSエステルをアジド体に変換し、得られたアジド体と前記式（ＩＶ）の化合物とを反応させる工程を含む、前記縮合体またはその塩の製造方法である。

また、本発明は、一般式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩または前記縮合体もしくはその塩を含む標識用組成物である。

また、本発明は、アミノ基を有する化合物又は細胞表面に、金属錯体又は蛍光化合物を導入する方法であって、前記一般式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩または前記縮合体もしくはその塩を、アミノ基を有する化合物又は細胞表面のタンパク質の遊離アミノ基と反応させる工程を含む方法である。前記反応させる工程は、例えば、一般式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩または前記縮合体もしくはその塩と、アミノ基を有する化合物（具体的には、ペプチド、タンパク質、アミノ基を有する核酸誘導体等）又は細胞（スキーム中、式（ＩＸ）で示す）とを溶液（例えば水、緩衝液の溶液）中で例えば室温で混合することにより、前記一般式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩または前記縮合体もしくはその塩と、前記アミノ基を有する化合物又は細胞とを反応させ、前記アミノ基を有する化合物又は細胞に前記一般式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩または前記縮合体もしくはその塩を導入することができる。

以下のスキームは、Ｚが１，４−フェニレン、Ｒ¹¹〜Ｒ¹⁸が水素原子、Ｒ²が−ＣＨＯである一般式（Ｉ）（スキーム中、式（Ｉ’）で表す）で表される化合物の場合の反応を例示した。

前記導入方法において、前記アミノ基を有する化合物としてはペプチド、タンパク質が好ましい。ペプチド、タンパク質又は細胞におけるアミノ基は、好ましくはアミノ酸残基の遊離アミノ基、より好ましくはリジン残基の遊離アミノ基である。

前記導入方法において、前記タンパク質としては限定されないが、例えば、サイトカイン、糖タンパク質、膜レセプター等が挙げられる。前記タンパク質の導入方法において、前記タンパク質はアミノ基を含有するタンパク質であるのが好ましく、リジン残基のアミノ基を含有するタンパク質であるのがより好ましい。前記タンパク質としては、限定されないが、血清タンパク質、膜タンパク質、抗体、抗体を生物工学的に修飾した部分構造が挙げられる。前記ペプチドとしては、限定されないが、癌細胞を検出するペプチド（例えばサイクリックＲＧＫ）、ＲＧＤ誘導体、ソマトスタチンまたはその誘導体（例えばオクトレオチド）、ボンベシン誘導体、インスリン等が挙げられる。前記細胞としては、限定されないが、例えば、癌免疫療法に使用されるＮＫ、ＬＡＫ、ＴＬ、ＣＴＬやＴＩＬ細胞など各種のＴ−細胞やＢ−細胞、またはマクロファージ、樹状細胞、リンパ球、さらにはがん細胞や、細胞移植において重要となるＥＳ細胞やｉＰＳ細胞などが挙げられる。

なお、前記ペプチドとして、癌細胞を検出するペプチド、例えば、サイクリックＲＧＫを用いて得られる化合物（ＸＡ）を用いる場合、検体動物（人間を含む）に注入し、ＰＥＴ（陽電子放射断層画像)イメージングにより、体内の癌細胞を検出することができる。

また、本発明は、前記導入方法により、金属錯体又は蛍光化合物が導入された、ペプチド、タンパク質又は細胞である。

また、本発明は、一般式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩または前記縮合体もしくはその塩を含む検査用組成物である。

前記検査用組成物は、ＰＥＴ（陽電子放射断層画像)イメージング、蛍光イメージング、核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）またはオートラジオグラフィーにより行われる検査用であるのが好ましい。前記検査であれば、簡便および高速に生体高分子などの分子のアミノ基を標識化可能であり、イメージングに適当だからである。

また、本発明は、下記一般式（ＩＩ）で表される化合物及び下記一般式（ＩＶ）で表される化合物を含む、前記一般式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩を含む前記標識用組成物または前記一般式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩を含む前記検査用組成物を合成するためのキットである。

式（ＩＩ）および（ＩＶ）中、Ａ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷、Ｒ¹⁸、Ｌ¹、Ｌ²およびＺの定義は、一般式（Ｉ）に記載のとおりである。

また、本発明は、HiLyte Fluoro（登録商標）750 Bis-NHSエステルまたはHiLyte Fluoro（登録商標）647-NHSエステルをアジド体に変換することにより得られたアジド体と、下記一般式(ＩＶ)で表される化合物を含む、前記縮合体もしくはその塩を含む前記標識用組成物または前記縮合体もしくはその塩を含む前記検査用組成物を合成するためのキットである。

式（ＩＶ）中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷、Ｒ¹⁸、およびＬ¹の定義は、一般式（Ｉ）に記載のとおりである。

本明細書中、以下の略語を使用することがある。
ＨＥＰＥＳ：４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＴＨＰ：２−テトラヒドロピラニル基
Ｂｏｃ：ｔ−ブトキシカルボニル

＜式（Ｉ−１）の化合物の製造＞
（１）工程１−１：式（ＩＩＩ−１ａ）の化合物の製造

ＤＯＴＡ−ＮＨＳ（３．０ｍｇ、６μｍｏｌ）／ＤＭＦ溶液１００μＬに対して、１の化合物を（１．３ｍｇ，６μｍｏｌ）作用させ、一晩室温で反応させた。反応後、減圧濃縮してＤＭＦを除去し、これをＨＰＬＣ（カラム：５Ｃ１８−ＡＲ−３００，ナカライテスク株式会社製、４．６ｘ２５０ｍｍ、溶離液Ａ：Ｈ₂Ｏ、溶離液Ｂ：アセトニトリル、３０分間にわたってＢ０〜８０％、１ｍＬ／分、式（ＩＩＩ−１ａ）の化合物の保持時間：１３．０分）で精製することにより式（ＩＩＩ−１ａ）の化合物を得た。
MALDI-TOF-MS m/z calcd for C₂₄H₄₅N₈O₁₀ ⁺ (M+H)+ 605.33, found 605.91.

（２）工程１−２：式（ＩＶ−１）の化合物の製造

化合物２に対して６ＭＨＣｌを室温で２時間作用させてＴＨＰ基とＢｏｃ基を同時に脱保護した得た化合物３（２４．９ｍｇ，８２μｍｏｌ）のＤＭＦ（８００μＬ）中溶液に対して、化合物４（２５．２ｍｇ、６６μｍｏｌ）を作用させ、一晩室温で反応させた。反応液を減圧濃縮してＤＭＦを除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂：９．０ｇ、ＣＨＣｌ₃：ＭｅＯＨ＝４０：１）で精製することにより化合物（ＩＶ−２）を得た（２４．４ｍｇ、６８％）。化合物（ＩＶ−２）（２．２２ｍｇ、４μｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（５００μＬ）中溶液に対して、Dess-Martin periodinane（ＤＭＰ）（５．１ｍｇ、１２μｍｏｌ）を作用させ、室温で２０分間反応させることにより、定量的に目的の化合物（ＩＶ−１）を得た（シリカゲルカラムクロマトグラフィー：ＳｉＯ₂ ２．０ｇ、ヘキサン：ＡｃＯＥｔ＝１：１）。なお、化合物２はＷＯ２００８／０９６７６０に記載の方法により製造することができる。

化合物（ＩＶ−２）：
(E,E)-4-hydroxy-2-[4-(5,6-dihydro-11,12-didehydro-dibenzo[a,e]cyclooctenyl-5-oxcarbonylaminoacetamide)styryl]but-2-enoate
¹H NMR (500MHz, CDCl₃) δ= 8.29 (s, 1H), 7.49-7.24 (m, 12H), 6.82 (t, 1H, J=6.2 Hz), 6.79 (d, 1H, J=16.7 Hz), 6.74 (d, 1H, J=16.3 Hz), 5.96 (s, 1H), 5.55 (m, 1H), 4.55 (d, 2H, J=4.3 Hz), 4.29 (q, 2H, J=7.1 Hz), 4.02 (d, 2H, J=4.9 Hz), 3.20 (d, 1H, J=14.9 Hz), 2.92 (dd, 1H, J=15.1, 3.8 Hz), 1.35 (t, 3H, J=7.1 Hz);
¹³C NMR (125MHz, CDCl₃)（回転異性体の多重シグナルのため、代表的なシグナルを示す）δ= 166.9, 151.4, 150.8, 140.3, 134.4, 131.0, 129.9, 128.14, 128.11, 127.27, 127.23, 126.4, 126.1, 123.8, 123.6, 121.2, 120.1, 119.9, 113.1, 109.9, 77.9, 77.2, 61.1, 59.9, 46.0, 45.5, 14.3;
HRESI-MS m/z calcd for C₃₃H₃₀N₂O₆Na⁺ (M+Na)+ 573.1997, found 573.1995。

化合物（ＩＶ−１）：
(E,E)-4-oxo-2-[4-(5,6-dihydro-11,12-didehydro-dibenzo[a,e]cyclooctenyl-5-oxcarbonylaminoacetamide)styryl]but-2-enoate
¹H NMR (500MHz, CDCl₃) δ= 10.16 (d, 1H, J = 7.0 Hz), 8.35 (s, 1H), 7.54-7.26 (m, 13H), 7.06 (d, 1H, J = 16.7 Hz), 6.67 (d, 1H, J = 7.1 Hz), 5.93 (s, 1H), 5.56 (m, 1H), 4.37 (q, 2H, J = 7.1 Hz), 4.05 (d, 2H, J = 3.9 Hz), 3.21 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 2.94 (dd, 1H, J = 16.0, 4.0 Hz), 1.39 (t, 3H, J = 7.2 Hz);
¹³C NMR (125MHz, CDCl₃)（回転異性体の多重シグナルのため、代表的なシグナルを示す） δ= 191.3, 167.0, 156.1, 151.4, 150.7, 141.0, 133.3, 131.0, 129.9, 128.5, 128.1, 127.4, 127.3, 126.4, 126.1, 123.8, 123.6, 121.2, 119.9, 113.1, 109.9, 78.0, 77.2, 62.1, 46.1, 45.7, 11.0;
HRESI-MS m/z calcd for C₃₃H₂₈N₂O₆Na⁺ (M+Na)+ 571.1845, found 571.1834。

（３）工程２：式（ＩＩ−１ａ）の化合物の製造

Ｇｅ／Ｇａジェネレーターから溶出されるＧａＣｌ₃溶液１ｍＬ（Ｇａ：５ｎｍｏｌ，ＧａＣｌ₃／９０％アセトン溶液，０．１ＭＨＣｌ、10 mCi, Eckert & Ziegler Eurotope, Berlin, Germany製）に対して、アルゴンガスを１０分間吹きかけることにより、溶液を１００μＬまで濃縮した（ｐＨ＜１．０）。前記工程１で得た式（ＩＩ−１ａ）の化合物の溶液（１：１０ｎｍｏｌ，１．０ＭＨＥＰＥＳ緩衝溶液（ｐＨ＝７．２，１５０μＬ）を作用させ（ｐＨ＝３．５）、マイクロウェーブ照射下で１２０℃に加温し１０分間反応させた。このようにして得られた全溶液量をＨＰＬＣにより精製することにより（カラム：５Ｃ１８−ＡＲ−３００，ナカライテスク株式会社製、４．６ｘ２５０ｍｍ、溶離液Ａ：Ｈ₂Ｏ、溶離液Ｂ：アセトニトリル、１０分間にわたってＢ１０〜１００％、１ｍＬ／分、式（ＩＩ−１ａ）の化合物の保持時間：７．８分）で精製することにより、式（ＩＩ−１ａ）の化合物の溶液を得た。
MALDI-TOF-MS：m/z calcd for C₂₄H₄₃N₈O₁₀Ga (M+H)⁺ 672.2, found 672.8.

（４）工程３：式（Ｉ−１）の化合物の製造

得られた式（ＩＩ−１ａ）の化合物の溶液を８０℃に加温しながらアルゴンガスを吹きかけることにより、溶媒が無くなるまで濃縮した。式（ＩＩ−１ａ）の化合物をジメチルスルホキシド（２μＬ）に溶解し、前記工程１−２において得られた式（ＩＶ−１）の化合物（化合物名：Dibenzocyclooctyne-(E)-3-alkoxycarbonyl-5-phenyl-2,4-dienal）の溶液（１０μＬのアセトニトリル中５ｎｍｏｌ）を室温で作用させ、その後、７５℃で加温することによってアセトニトリルを蒸発させながら１５分間反応させることにより、定量的に式（Ｉ−１）の化合物を得た（式（Ｉ−１）の化合物の保持時間：１１．２分。ＨＰＬＣ条件：カラム：５Ｃ１８−ＡＲ−３００，ナカライテスク株式会社製、４．６ｘ２５０ｍｍ、溶離液Ａ：Ｈ₂Ｏ，溶離液Ｂ：アセトニトリル、１０分間にわたってＢ：１０〜１００％、１ｍＬ／分、ＵＶ検出：２４５ｎｍ）。分析時のHPLC分析を図１に示す。
MALDI-TOF-MS：m/z calcd for C₅₇H₇₁N₁₀O₁₆Ga (M+H)⁺ 1220.4, found 1220.5.

＜式（Ｉ−１）の化合物とペプチドとの結合＞

式（Ｉ−１）の化合物の溶液にcyclic Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lysペプチドの溶液（２μｌのジメチルスルホキシド中、5nmol）を37℃で25分間作用させることにより、式（Ｘ−１）の化合物を得た(式（Ｘ−１）の化合物の保持時間１０．０分。ＨＰＬＣ条件：カラム:５Ｃ１８−ＡＲ−３００，ナカライテスク株式会社製、4.6×250mm;溶離液Ａ：Ｈ₂Ｏ，溶離液Ｂ：アセトニトリル、１０分間にわたってＢ：１０〜１００％、1mL/分、UV検出：245nm)。分析時のHPLC分析を図２に示す。
MALDI-TOF-MS：m/z calcd for C₈₄H₁₁₀N₁₉O₂₃Ga (M+H)⁺ 1821.7, found 1821.9.

前記反応により、本発明の式（Ｉ）の化合物は、ペプチドを速やかに標識可能であることが確認できた。

＜式（Ｉ−１）の化合物のＰＥＴイメージング＞
式（１−１）の化合物をラット（ウィスターラット８Ｗ、オス、２５ｇ）に注射した（10MBq）。ラットの尾の静脈にプロフォールを４０ｍｇ／ｋｇの速度で投与し続けて鎮静されておき、ＰＥＴトレーサーを前記ラットの尾の静脈に投与した。そのラットのＰＥＴ画像を図３に示す。

図３に示すように、式（１−１）の化合物は、ラットの腫瘍を標識することが可能であることが、確認できた。

＜式（Ｉ−２）の化合物の製造＞
（１）工程１：式（ＩＩ−１ｂ）の化合物の製造

ＧｄＣｌ₃（６Ｈ₂Ｏ）／１ＭＨＣｌ（１ｍｇ／ｍＬ）溶液（キシダ化学株式会社製）１５μＬ（Ｇｄ：４０ｎｍｏｌ）に対して、＜式（Ｉ−１）の化合物の製造＞の工程１−１において得られた式（ＩＩＩ−１ａ）の化合物の溶液（１：４０ｎｍｏｌ、０．５ＭＨＥＰＥＳ緩衝溶液（ｐＨ＝７．２、８０μＬ）を作用させ（ｐＨ＝３．５）、８０℃で４０分間反応させた。このようにして得られた全溶液量をＨＰＬＣ（カラム：５Ｃ１８−ＡＲ−３００，ナカライテスク株式会社製、４．６ｘ２５０ｍｍ、溶離液Ａ：Ｈ₂Ｏ，溶離液Ｂ：アセトニトリル、１０分間にわたってＢ：１０〜１００％、１ｍＬ／分、式（ＩＩ−１ｂ）の化合物の保持時間：７．４分）、で精製することにより、式（ＩＩ−１ｂ）の化合物の溶液を得た。

（２）工程２：式（Ｉ−２）の化合物の製造

得られた式（ＩＩ−１ｂ）の化合物の溶液を８０℃に加温しながらアルゴンガスを吹きかけることにより、溶媒が無くなるまで濃縮した。式（ＩＩ−１ｂ）の化合物をジメチルスルホキシド（２μＬ）に溶解し、＜式（Ｉ−１）の化合物の製造＞の工程１−２において得られた式（ＩＶ−１）の化合物（化合物：Dibenzocyclooctyne-(E)-3-alkoxycarbonyl-5-phenyl-2,4-dienal）の溶液（８μＬのアセトニトリル中４０ｎｍｏｌ）を室温で作用させ、その後、７０℃で加温することによってアセトニトリルを蒸発させながら１５分間反応させることにより、定量的に式（Ｉ−２）の化合物を得た（式（Ｉ−２）の化合物の保持時間：１１．２分。ＨＰＬＣ条件：カラム：５Ｃ１８−ＡＲ−３００，ナカライテスク株式会社製、４．６ｘ２５０ｍｍ、溶離液Ａ：Ｈ₂Ｏ，溶離液Ｂ：アセトニトリル、１０分間にわたってＢ：１０〜１００％、１ｍＬ／分、ＵＶ検出：２４５ｎｍ）。分析時のHPLC分析を図４に示す。
MALDI-TOF-MS：m/z calcd for C₅₇H₇₁N₁₀O₁₆Gd (M+H)⁺ 1309.4, found 1309.6.

＜式（Ｉ−２）の化合物とペプチドとの結合＞

式（Ｉ−２）の化合物の溶液にcyclic Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lysペプチドの溶液（９μｌのジメチルスルホキシド中、45nmol）を37℃で25分間作用させることにより、式（Ｘ−２）の化合物を得た(式（Ｘ−２）の化合物の保持時間１０．３分、ＨＰＬＣ条件：カラム：５Ｃ１８−ＡＲ−３００，ナカライテスク株式会社製、４．６ｘ２５０ｍｍ、溶離液Ａ：Ｈ₂Ｏ，溶離液Ｂ：アセトニトリル、１０分間にわたってＢ：１０〜１００％、１ｍＬ／分、ＵＶ検出：２４５ｎｍ)。分析時のHPLC分析を図５に示す。
MALDI-TOF-MS：m/z calcd for C₈₄H₁₁₀N₁₉O₂₃Gd (M+H)⁺ 1910.7, found 1910.1。

＜式（Ｉ−３）の化合物の製造＞
（１）工程１：式（ＩＩ−２ａ）の化合物の製造

式（Ｖ）の化合物（１０μｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１５０μＬ）に対して、式（ＶＩ−１）の化合物（１０μｍｏｌ）を作用させ、一晩室温で反応させた。反応液を減圧濃縮してＤＭＦを除去し、残渣を３０％ＭｅＣＮ溶液に溶解させたものをＨＰＬＣで精製することにより（ＨＰＬＣ条件：カラム：５Ｃ１８−ＡＲ−３００，ナカライテスク株式会社製、４．６ｘ２５０ｍｍ、溶離液Ａ：Ｈ₂Ｏ，溶離液Ｂ：アセトニトリル、１５分間にわたってＢ：３０〜１００％、１ｍＬ／分、ＵＶ検出：２４５ｎｍ、式（ＩＩ−２ａ）の化合物の保持時間：１０．０分。）、式（ＩＩ−２ａ）の化合物を得た。
MALDI-TOF-MS：m/z calcd for C₂₉H₂₉N₄O₉ ⁺ (M+H)⁺577.6、found 578.1。

（２）工程２：式（Ｉ−３）の化合物の製造

式（ＩＩ−２ａ）の化合物（６０ｎｍｏｌ）の溶液（６μＬのＤＭＳＯ）に対して、式（ＩＶ−１）の化合物（５４ｍｍｏｌ）の溶液（１２μＬＣＨ₃ＣＮ）を作用させ、７０℃で加温することによってＣＨ₃ＣＮを蒸発させながら１５分間反応させることにより、定量的に式（Ｉ−３）の化合物を得た（ＨＰＬＣ条件：カラム：５Ｃ１８−ＡＲ−３００，ナカライテスク株式会社製、４．６ｘ２５０ｍｍ、溶離液Ａ：Ｈ₂Ｏ，溶離液Ｂ：アセトニトリル、１５分間にわたってＢ：３０〜１００％、１ｍＬ／分、ＵＶ検出：２４５ｎｍ、式（Ｉ−３）の化合物の保持時間：１１．８分。）。
MALDI-TOF-MS：m/z calcd for C₆₂H₅₆N₆O₁₅Na⁺ (M+Na)⁺1148.1、found 1148.5。

＜式（Ｉ−３）の化合物とペプチドとの結合＞

式（Ｉ−３）の化合物の溶液にcyclic Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lysペプチドの溶液（５μｌのジメチルスルホキシド中、60nmol）を37℃で25分間作用させることにより、式（Ｘ−３）の化合物を得た(式（Ｘ−３）の化合物の保持時間１０．０分、ＨＰＬＣ条件：カラム：５Ｃ１８−ＡＲ−３００，ナカライテスク株式会社製、４．６ｘ２５０ｍｍ、溶離液Ａ：Ｈ₂Ｏ，溶離液Ｂ：アセトニトリル、１０分間にわたってＢ：３０〜１００％、１ｍＬ／分、ＵＶ検出：２４５ｎｍ)。
MALDI-TOF-MS：m/z calcd for C₈₉H₉₆N₁₅O₂₂ ⁺ (M+H)⁺ 1727.8, found 1727.2

＜式（Ｉ−３）の化合物とタンパク質との結合＞

式（Ｉ−３）の化合物（約５０ｎｍｏｌ）の５μLのＤＭＳＯ溶液に、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ、分子量６６，５００、０．４５ｎｍｏｌ）の水（４５μｌ）溶液を３７℃で３０分間反応させた。得られた生成物の分子量を図６に示す。図６中、「ＨＳＡ」はヒト血清アルブミンの質量分析であり、「（Ｉ−３）＋ＨＳＡ」は、得られた生成物の質量分析である。「（Ｉ−３）＋ＨＳＡ」のピークと「ＨＳＡ」のピークは、質量８，５００の差がある。この差は、ＨＳＡへ式（Ｉ−３）の化合物が７〜８個、標識したためと考えられる。

前記反応により、本発明の式（Ｉ）の化合物は、タンパク質を速やかに標識可能であることが確認できた。

＜式（Ｉ−４）の化合物の製造＞
（１）工程１：式（ＩＩ−３）の化合物の製造

化合物５（８．８μｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１００μＬ）に対して、化合物１（８．８μｍｏｌ）を作用させ、一晩室温で反応させた。反応液を減圧濃縮してＤＭＦを除去し、残渣を３０％ＭｅＣＮ溶液に溶解させたものをＨＰＬＣで精製することにより（式（ＩＩ−３）の化合物の保持時間９．９分、ＨＰＬＣ条件：カラム：５Ｃ１８−ＡＲ−３００，ナカライテスク株式会社製、４．６ｘ２５０ｍｍ、溶離液Ａ：Ｈ₂Ｏ，溶離液Ｂ：アセトニトリル、１０分間にわたってＢ：１０〜１００％、１ｍＬ／分、ＵＶ検出：２４５ｎｍ）、式（ＩＩ−３）の化合物を得た。
MALDI-TOF-MS：m/z calcd for C₁₈H₃₂N₆O₅SNa⁺ (M+H)⁺467.2、found 467.9。

（２）化合物（Ｉ−４）の製造

式（ＩＩ−３）の化合物（５０ｎｍｏｌ）の溶液（３μＬＤＭＳＯ）に対して、式（ＩＶ−１）の化合物（４０ｎｍｏｌ）の溶液（８μＬＣＨ₃ＣＮ）を作用させ、７０℃で加温することによってＣＨ₃ＣＮを蒸発させながら１５分間反応させることにより、定量的に式（Ｉ−４）の化合物を得た（式（Ｉ−４）の化合物の保持時間１１．８分、ＨＰＬＣ条件：カラム：５Ｃ１８−ＡＲ−３００，ナカライテスク株式会社製、４．６ｘ２５０ｍｍ、溶離液Ａ：Ｈ₂Ｏ，溶離液Ｂ：アセトニトリル、１０分間にわたってＢ：２０〜１００％、１ｍＬ／分、ＵＶ検出：２４５ｎｍ。
MALDI-TOF-MS：m/z calcd for C₅₁H₆₀N₈O₁₁SNa⁺ (M+H)⁺1015.4、found 1016.0。

＜式（Ｉ−４）の化合物とペプチドとの結合＞

式（Ｉ−４）の化合物の溶液にcyclic Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lysペプチドの溶液（５μｌのジメチルスルホキシド中、60nmol）を37℃で25分間作用させることにより、式（Ｘ−４）の化合物を得た(式（Ｘ−４）の化合物の保持時間９．９分、ＨＰＬＣ条件：カラム：５Ｃ１８−ＡＲ−３００，ナカライテスク株式会社製、４．６ｘ２５０ｍｍ、溶離液Ａ：Ｈ₂Ｏ，溶離液Ｂ：アセトニトリル、
１０分間にわたってＢ：２０〜１００％、１ｍＬ／分、ＵＶ検出：２４５ｎｍ)。
MALDI-TOF-MS：m/z calcd for C₇₈H₁₀₀N₁₇O₁₈S⁺ (M+H)⁺ 1594.7, found 1594.7。

＜式（Ｉ−４）の化合物とタンパク質との結合＞

式（Ｉ−４）の化合物（約５０ｎｍｏｌ）のＤＭＳＯ溶液（３μｌ）に、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ、分子量６６，５００、０．４７ｎｍｏｌ）の水（４５μｌ）溶液を３７℃で３０分間反応させた。得られた生成物の分子量を図７に示す。図７中、「ＨＳＡ」はヒト血清アルブミンの質量分析であり、「（Ｉ−４）＋ＨＳＡ」は、得られた生成物の質量分析である。「（Ｉ−４）＋ＨＳＡ」のピークと「ＨＳＡ」のピークは、質量４，５００の差がある。この差は、ＨＳＡへ式（Ｉ−４）の化合物が４〜５個、標識したためと考えられる。

本発明の化合物は、アミノ基の標識に利用可能であり、ＰＥＴイメージング用途にも適用できる。

Claims

下記一般式（Ｉ）で表される化合物またはその塩。
［式中、
Ｚは、１，４−フェニレン、１，３−フェニレンまたは１，２−フェニレンであり、
Ｒ¹は、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、１以上の置換基で置換された炭素数１〜６のアルキル基、炭素数７〜１８のアラルキル基、１以上の置換基で置換された炭素数７〜１８のアラルキル基、炭素数６〜１２のアリール基、または１以上の置換基で置換された炭素数６〜１２のアリール基であり、
Ｒ²は、−ＣＨＯ、−ＣＨ₂ＯＨまたは−ＣＨ₂ＯＲ¹⁰である（Ｒ¹⁰は、水酸基の保護基であり、
Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷、およびＲ¹⁸は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、飽和もしくは不飽和の炭化水素基、アリール基、アルコキシ基、アラルキル基、アリールオキシ基、複素環基、アミノ基、ニトロ基またはシアノ基であり、
Ｌ¹は、式−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ₂）_m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、式−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ₂）_m−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ₂）_m−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（前記式中、ｍは、１〜２０の整数である。）で表される基であり、
Ｌ²は、式−（ＣＨ₂）_n1−、式−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−、式−（ＣＨ₂）_n1−ＣＯＮＨ−、式−ＣＯＮＨ−（ＣＨ₂）_n1−、式−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−、式−ＮＨ−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−、式−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−ＮＨ−、式−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−Ｏ−（ＣＨ₂）_n4−、式−ＮＨ−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−Ｏ−（ＣＨ₂）_n4−、または、式−（ＣＨ₂）_n1−Ｏ−（ＣＨ₂）_n2−Ｏ−（ＣＨ₂）_n3−Ｏ−（ＣＨ₂）_n4−ＮＨ−（前記式中、ｎ１、ｎ２、ｎ３およびｎ４は、それぞれ独立して１〜２０の整数である。）で表わされる基であり、
Ａは、以下の式（ｉ）〜（ｉｉｉ）で表される基にＭが配位した基(ＭはＧａ、Ｇｄ、Ｃｕ、Ｙ、Ｉｎ、Ｌｕ、Ｔｂ、Ｅｕ、ＹｂまたはＥｒのイオンである）、または、式（ｉｖ）〜（ｘｉｉ）で表される基である。
］
HiLyte Fluoro（登録商標）750 Bis-NHSエステルまたはHiLyte Fluoro（登録商標）647-NHSエステルをアジド体に変換し、得られたアジド体と下記式（ＩＶ）の化合物とを反応させて得られる縮合体またはその塩。
式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷、Ｒ¹⁸、Ｌ¹およびＺの定義は、請求項１に記載のとおりである。
請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩および請求項２に記載の縮合体もしくはその塩の少なくとも一方を含む標識用組成物。
請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩および請求項２に記載の縮合体もしくはその塩の少なくとも一方を含む検査用組成物。
請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物またはその塩の製造方法であって、
下記一般式（ＩＩ）の化合物と下記一般式（ＩＶ）の化合物とを反応させる工程を含む製造方法。
式中、Ａ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷、Ｒ¹⁸、Ｌ¹、Ｌ²およびＺの定義は、請求項１に記載のとおりである。
下記一般式（II）で表される化合物及び下記一般式(ＩＶ)で表される化合物を含む、請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩を含む請求項３に記載の標識用組成物または請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩を含む請求項４に記載の検査用組成物を合成するためのキット。
式中、Ａ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷、Ｒ¹⁸、Ｌ¹、Ｌ²およびＺの定義は、請求項１に記載のとおりである。
HiLyte Fluoro（登録商標）750 Bis-NHSエステルまたはHiLyte Fluoro（登録商標）647-NHSエステルをアジド体に変換することにより得られたアジド体と、下記一般式(ＩＶ)で表される化合物を含む、請求項２に記載の縮合体もしくはその塩を含む請求項３に記載の標識用組成物または請求項２に記載の縮合体もしくはその塩を含む請求項４に記載の検査用組成物を合成するためのキット。
式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷、Ｒ¹⁸、Ｌ¹およびＺの定義は、請求項２に記載のとおりである。
アミノ基を有する化合物又は細胞表面に、金属錯体又は蛍光化合物を導入する方法であって、請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩または請求項２に記載の縮合体もしくはその塩を、アミノ基を有する化合物又は細胞表面のタンパク質の遊離アミノ基と反応させる工程を含む、方法。
請求項８に記載の方法により、金属錯体又は蛍光化合物が導入された、ペプチド、タンパク質又は細胞。
下記一般式（ＩＶ）で表される化合物またはその塩。
［式中、
Ｚは、１，４−フェニレン、１，３−フェニレンまたは１，２−フェニレンであり、
Ｒ¹は、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、１以上の置換基で置換された炭素数１〜６のアルキル基、炭素数７〜１８のアラルキル基、１以上の置換基で置換された炭素数７〜１８のアラルキル基、炭素数６〜１２のアリール基、または１以上の置換基で置換された炭素数６〜１２のアリール基であり、
Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷、およびＲ¹⁸は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、飽和もしくは不飽和の炭化水素基、アリール基、アルコキシ基、アラルキル基、アリールオキシ基、複素環基、アミノ基、ニトロ基またはシアノ基であり、
Ｌ¹は、式−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ₂）_m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、式−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ₂）_m−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ₂）_m−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（前記式中、ｍは、１〜２０の整数である。）で表される基であり、
Ｒ²は、−ＣＨＯ、−ＣＨ₂ＯＨまたは−ＣＨ₂ＯＲ¹⁰である（Ｒ¹⁰は、水酸基の保護基である。］