JP2014528464A - 増殖性疾患の治療のためのｈｓｐ９０阻害剤と組み合わせた２−カルボキサミドシクロアミノウレア誘導体 - Google Patents

Abstract

本発明は、式（Ｉ）の２−カルボキサミドシクロアミノウレア誘導体化合物および熱ショックタンパク質９０の阻害剤を含む医薬的な組合せ、ならびに増殖性疾患、より具体的にはＰＩ３Ｋ依存性疾患、より具体的にはＰＩ３Ｋ−α依存性疾患の治療におけるこのような組合せの使用に関する。

Description

発明の分野
本発明は、式（Ｉ）の２−カルボキサミドシクロアミノウレア誘導体化合物および熱ショックタンパク質９０の阻害剤を含む医薬的な組合せ（pharmaceutical combination）、ならびに増殖性疾患、より具体的にはＰＩ３Ｋ依存性疾患、より具体的にはＰＩ３Ｋ−α依存性疾患の治療におけるこのような組合せの使用に関する。

発明の背景
ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路は、正常細胞のための重要で厳密に調節された生存経路である。ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ類（ＰＩ３Ｋ）は、イノシトール脂質のＤ−３’位へのリン酸の移動を触媒して、ホスホイノシトール−３−リン酸（ＰＩＰ）、ホスホイノシトール−３，４−二リン酸（ＰＩＰ_２）およびホスホイノシトール−３，４，５−三リン酸（ＰＩＰ_３）を生じさせる、広範に発現される脂質キナーゼである。これらのＰＩ３Ｋで触媒される反応の産物は、セカンドメッセンジャーとして作用し、かつ細胞の成長、分化、移動、増殖および生存を含む鍵となる細胞内プロセスにおいて、中心的役割を有する。

クラス１の２種のＰＩ３Ｋの中で、クラス１ＡのＰＩ３Ｋは、ｐ８５α、ｐ５５α、ｐ５０α、ｐ８５βまたはｐ５５γでよい調節サブユニットと構成的に会合している触媒サブユニットｐ１１０（α、β、δアイソフォーム）から構成されたヘテロ二量体である。クラス１Ｂのサブクラスは、２種の調節サブユニットｐ１０１またはｐ８４の１つと会合している触媒サブユニットｐ１１０γから構成されたヘテロ二量体である１つのファミリーメンバーを有する（Fruman et al.,Annu Rev.Biochem.67:481(1998)；Suire et al.,Curr.Biol.15:566(2005)）。

多くの場合、ＰＩＰ２およびＰＩＰ３は、成長および生存にとって重要な多くの細胞内シグナル伝達経路のための節点として作用する形質膜にＡＫＴを補充する（Fantl et al.,Cell 69:413〜423(1992)；Bader et al.,Nature Rev.Cancer 5:921(2005)；Vivanco and Sawyer,Nature Rev.Cancer 2:489(2002)）。ＡＫＴの活性化を介して生存を増進することの多いＰＩ３Ｋの異常調節は、ヒトのがんにおける最も一般的な事象の１つであり、多様なレベルで生じることが示されている。ホスホイノシチドをイノシトール環の３’位で脱リン酸化し、そうすることでＰＩ３Ｋの活性に拮抗する腫瘍抑制遺伝子ＰＴＥＮは、種々の腫瘍で機能的に除去される。その他の腫瘍において、ｐ１１０αアイソフォーム、ＰＩＫ３ＣＡに関する、およびＡＫＴに関する遺伝子が増幅され、それらの遺伝子産物のタンパク質発現の増大が、ヒトのいくつかのがんで立証されている。さらに、下流のシグナル伝達経路を活性化するＰＩＫ３ＣＡの体細胞ミスセンス変異が、ヒトの広範で多様ながんに関してかなりの頻度で記載されている（Kang et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102:802(2005)；Samuels et al.,Science 304:554(2004)；Samuels et al.,Cancer Cell 7:561〜573(2005)）。このように、ＰＩ３Ｋαの阻害剤は、増殖性疾患およびその他の障害の治療においてとりわけ価値があることが知られている。

さらに、熱ショックタンパク質９０（Ｈｓｐ９０）は、抗がん標的として認識されている。Ｈｓｐ９０は、クライアントタンパク質の立体配座安定性、形状および機能を確実にするための分子シャペロンとして機能する、高度に豊富で必須なタンパク質である。Ｈｓｐ９０ファミリーのシャペロンは、４種のメンバー：双方とも細胞質ゾル中にあるＨｓｐ９０αおよびＨｓｐ９０β、小胞体中のＧＲＰ９４、およびミトコンドリア中のＴＲＡＰ１、から構成される。Ｈｓｐ９０は、全タンパク質の約１％〜２％を構成する豊富な細胞内シャペロンである。

ストレスタンパク質の中でＨｓｐ９０は独特のものであり、なぜならば、ほとんどのポリペプチドの生合成のために要求されないからである。Ｈｓｐ９０は、成長制御、細胞生存および組織発育で決定的に重要な役割を演じる、立体配座的に不安定なシグナル伝達因子である「クライアントタンパク質」と呼ばれる発癌タンパク質と複合体を形成する。このような結合は、これらのクライアントタンパク質の分解を妨げる。Ｈｓｐ９０クライアントタンパク質のサブセット、例えば、Ｒａｆ、ＡＫＴ、ホスホ−ＡＫＴ、ＣＤＫ４およびＥＧＦＲファミリー（ＥｒｂＢ２を含む）は、がん細胞においてすべて重要なプロセスである細胞の成長、分化およびアポトーシスに決定的に関与する発癌性シグナル伝達分子である。Ｈｓｐ９０の内因性ＡＴＰアーゼ活性を阻害すると、Ｈｓｐ９０−クライアントタンパク質の相互作用が撹乱され、ユビキチンプロテアソーム経路を介してそれらの分解をもたらす。

Ｈｓｐ９０シャペロンは、それらのＮ−末端ドメインに保存性ＡＴＰ−結合部位を所持し、ＤＮＡギラーゼ、Ｈｓｐ９０、ヒスチジンキナーゼおよびＭｕｔＬ（ＧＨＫＬ）サブファミリーとして知られている小さなＡＴＰアーゼサブファミリーに属する。Ｈｓｐ９０のシャペロニング（フォールディング）活性は、単離酵素に対して弱いそのＡＴＰアーゼ活性に依存する。しかし、Ｈｓｐ９０のＡＴＰアーゼ活性は、コシャペロン（co-chaperones）として知られるタンパク質とのその会合により増強されることが示されている。したがって、インビボで、Ｈｓｐ９０タンパク質は、大きな動的タンパク質複合体のサブユニットとして作用する。Ｈｓｐ９０は、真核細胞の生存にとって必須であり、多くの腫瘍において過剰に発現される。

増殖性疾患の患者のための多くの治療選択肢にもかかわらず、有効かつ安全な治療薬に対する必要性、および併用療法（combination therapy）におけるそれらの優先的使用に対する必要性が相変わらず存在する。驚くべきことに、国際公開第２０１０／０２９０８２号に記載の式（Ｉ）の特異的な２−カルボキサミドシクロアミノウレア誘導体化合物が、Ｈｓｐ９０阻害剤との組合せで強力な抗増殖活性およびインビボでの抗腫瘍反応を誘発することが見出された。Ｈｓｐ９０阻害剤およびＰＩ３Ｋ阻害剤、とりわけ式（Ｉ）の高度に特異的なＰＩ３Ｋα阻害剤化合物を用いるがん細胞の併用治療（co-treatment）は、それが、受容体チロシンキナーゼ（Ｈｓｐ９０の阻害を介して主として標的化される）などの近位経路成分の阻害を、シグナル伝達カスケードの頂点近くでも作用する別の阻害剤（ＰＩ３Ｋ阻害剤）と組み合わせるので、とりわけ効果的である。Ｈｓｐ９０の阻害のさらなる利点は、例えばＡＫＴおよびｐＡＫＴに対するような、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路内の他のシグナル伝達成分に対するその効果、ならびに多くのクライアントタンパク質に対するその広範な効果に由来する可能性がある。

発明の要旨
本発明は、
（ａ）式（Ｉ）の化合物

［式中、
Ａは、

からなる群から選択されるヘテロアリールを表し、
Ｒ^１は、次の置換基：（１）非置換または置換された、好ましくは置換されたＣ_１〜Ｃ_７−アルキル、ここで、前記置換基は、１つまたは複数の、好ましくは１〜９個の次の部分：重水素、フルオロ、または１〜２個の次の部分Ｃ_３〜Ｃ_５−シクロアルキルから独立に選択される、（２）必要に応じて置換されたＣ_３〜Ｃ_５−シクロアルキル、ここで、前記置換基は、１つまたは複数の、好ましくは１〜４個の次の部分：重水素、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル（好ましくはメチル）、フルオロ、シアノ、アミノカルボニルから独立に選択される、（３）必要に応じて置換されたフェニル、ここで、前記置換基は、１つまたは複数の、好ましくは１〜２個の次の部分：重水素、ハロ、シアノ、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキルアミノ、ジ（Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル）アミノ、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキルアミノカルボニル、ジ（Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル）アミノカルボニル、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルコキシから独立に選択される、（４）必要に応じてモノまたはジ置換されたアミン、ここで、前記置換基は、次の部分：重水素、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル（これは、非置換であるか、重水素、フルオロ、クロロ、ヒドロキシからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で置換されている）、フェニルスルホニル（これは、非置換であるか、１つまたは複数の、好ましくは１つのＣ_１〜Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルコキシ、ジ（Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル）アミノ−Ｃ_１〜Ｃ_７−アルコキシで置換されている）から独立に選択される、（５）置換されたスルホニル、ここで、前記置換基は、次の部分：Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル（これは、非置換であるか、重水素、フルオロの群から選択される１つまたは複数の置換基で置換されている）、ピロリジノ（これは、非置換であるか、重水素、ヒドロキシ、オキソの群から選択される１つまたは複数の置換基、とりわけ１つのオキソで置換されている）から選択される、（６）フルオロ、クロロ、
のうちの１つを表し、
Ｒ^２は、水素を表し、
Ｒ^３は、（１）水素、（２）フルオロ、クロロ、（３）必要に応じて置換されたメチル、ここで、前記置換基は、１つまたは複数の、好ましくは１〜３個の次の部分：重水素、フルオロ、クロロ、ジメチルアミノから独立に選択される、を表す］
であって、
ただし、（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛５−［２−（ｔｅｒｔ−ブチル）−ピリミジン−４−イル］−４−メチル−チアゾール−２−イル｝−アミド）を除く、化合物、
またはその医薬的に許容される塩、および（ｂ）少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤またはその医薬的に許容される塩を含む医薬的な組合せに関する。このような組合せは、増殖性疾患を治療するために、同時に、別個に、または逐次に使用することができる。

好ましい実施形態において、本発明の医薬的な組合せは、（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「化合物Ａ」）またはその医薬的に許容される塩から選択される式（Ｉ）の化合物を含む。

本発明の医薬的な組合せは、Ｈｓｐ９０の内因性ＡＴＰアーゼ活性を標的とする、低下させる、もしくは阻害する、および／またはユビキチンプロテオソーム経路を介してＨｓｐ９０クライアントタンパク質を分解する、標的とする、低下させる、もしくは阻害する少なくとも１種の化合物を含む。このような化合物は、「熱ショックタンパク質９０阻害剤」または「Ｈｓｐ９０阻害剤」と呼ばれる。本発明で使用するのに適したＨｓｐ９０阻害剤の例には、限定はされないが、ゲルダナマイシン誘導体であるタネスピマイシン（１７−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン）（ＫＯＳ−９５３および１７−ＡＡＧとしても知られている）；ラディシコール；６−クロロ−９−（４−メトキシ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−アミン・メタンスルホン酸塩（amine methanesulfonate）（ＣＮＦ２０２４としても知られている）；ＩＰＩ５０４；ＳＮＸ５４２２；５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−４−（４−モルホリン−４−イルメチル−フェニル）−イソキサゾール−３−カルボン酸エチルアミド（ＡＵＹ９２２）；および（Ｒ）−２−アミノ−７−［４−フルオロ−２−（６−メトキシ−ピリジン−２−イル）−フェニル］−４−メチル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−５−オン（ＨＳＰ９９０）が含まれる。

本発明は、さらに、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩、および少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤またはその医薬的に許容される塩を含む医薬組成物に関する。一実施形態において、本発明のこの医薬組成物は、増殖性疾患の治療に使用するためのものである。

本発明は、さらに、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩、および少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤またはその医薬的に許容される塩を含む医薬的な組合せの、増殖性疾患を治療するための医薬を調製するための使用に関する。

本発明は、さらに、対象に治療有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩、および少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤またはその医薬的に許容される塩を投与する工程を含む、治療を必要とする対象における増殖性疾患の治療方法に関する。本発明によれば、式（Ｉ）の化合物およびＨｓｐ９０阻害剤は、単一の医薬組成物として、別個の組成物として、または逐次的に、のいずれかで投与することができる。

本発明は、さらに、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩、および少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤またはその医薬的に許容される塩を含むキットに関する。

図１は、ＰＩＫ３ＣＡ変異種の胃がん株化細胞ＨＧＣ−２７に対する化合物Ａの抗腫瘍活性を示す図である。 図２は、ＨＧＣ−２７を所持するマウスのビヒクルおよび化合物Ａで処置された群の平均（mean）体重を示す図である。 図１および２のインビボ試験に関し、ＨＧＣ−２７の皮下異種移植片を所持する雌性無胸腺マウスは、指示された用量およびスケジュールの化合物Ａ（Ｃｍｐｄ Ａ）またはビヒクルで処置される。処置は、腫瘍細胞の移植後１２日目に開始され、連続して１２日間継続される。腫瘍体積の変化に関する統計学を、一元ＡＮＯＶＡ、事後ダネット検定を用いて実施する（ビヒクル対照に対して＊ｐ＜０．０５）。 図３は、ビヒクル；経口（p.o.）で１日１回（ｑｄ）、１２．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの単剤；静脈内（i.v.）で週２回（２ｑｗ）、５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２の単剤、および化合物ＡとＡＵＹ９２２との組合せの、ＰＩＫ３ＣＡ変異種の胃がん株化細胞ＨＧＣ−２７に対する抗腫瘍活性を示す図である。値は平均±ＳＥＭであり；サンプルサイズ（群当たりｎ＝１０匹のマウス）。（*ｐ＜０．０５、ビヒクル対照群および単剤処置に比較して有意な阻害（マン・ホイットニー順位和検定、事後スチューデント・ニューマン・クールズ検定）。 図４は、ＰＩＫ３ＣＡ変異種の胃がん株化細胞ＨＧＣ−２７を所持するマウスにおける、ビヒクル、１２．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２、および２５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａと５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２との組合せで処置された群の補正済の平均体重変化（mean corrected changes in body weight）［各動物個体に関するパーセンテージで表現される、測定当日の体重と１２日目の初期体重（双方とも初期腫瘍重量を控除することによって補正）の比率で表される］を示す図である。 図５は、ビヒクル；経口で１日１回、２５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの単剤；静脈内で週２回、５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２の単剤、および化合物ＡとＡＵＹ９２２との組合せの、ＰＩＫ３ＣＡ変異種の胃がん株化細胞ＨＧＣ−２７に対する抗腫瘍活性を示す図である。値は平均±ＳＥＭであり；サンプルサイズ（群当たりｎ＝１０匹のマウス）。（*ｐ＜０．０５、ビヒクル対照群および単剤処置に比較して有意な阻害（マン・ホイットニー順位和検定、事後ダン検定）。 図６は、ＰＩＫ３ＣＡ変異種の胃がん株化細胞ＨＧＣ−２７を所持するマウスにおける、ビヒクル、２５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２、および２５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａと５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２との組合せで処置された群の補正済の平均体重変化［各動物個体に関するパーセンテージで表現される、測定当日の体重と１２日目の初期体重（双方とも初期腫瘍重量を控除することによって補正）の比率で表される］を示す図である。 図７は、ビヒクル；経口で１日１回、５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの単剤；静脈内で週２回、５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２の単剤、および化合物ＡとＡＵＹ９２２との組合せの、ＰＩＫ３ＣＡ変異種の胃がん株化細胞ＨＧＣ−２７に対する抗腫瘍活性を示す図である。値は平均±ＳＥＭであり；サンプルサイズ（群当たりｎ＝１０匹のマウス）。（*ｐ＜０．０５、ビヒクル対照群および単剤処置に比較して有意な阻害（マン・ホイットニー順位和検定、事後スチューデント・ニューマン・クールズ検定）。 図８は、ＰＩＫ３ＣＡ変異種の胃がん株化細胞ＨＧＣ−２７を所持するマウスにおける、ビヒクル、５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２、および５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａと５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２との組合せで処置された群の補正済の平均体重変化［各動物個体に関するパーセンテージで表現される、測定当日の体重と１２日目の初期体重（双方とも初期腫瘍重量を控除することによって補正）の比率で表される］を示す図である。 図９は、ビヒクル／プラセボ（ｎ＝５）、経口で１日１回、４０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの単剤（ｎ＝７）；静脈内で週２回、５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２の単剤（ｎ＝８）、および経口で１日１回、４０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａと５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２との組合せ（ｎ＝５）のＡ３７５黒色腫の腫瘍株化細胞に対する、（ａ）腫瘍片の増殖（fractional tumor growth）および（ｂ）平均体重変化を示す図である。

発明の詳細な説明
以下の一般的定義は、本発明のよりよい理解のために提供される：
「ハロゲン」（または「ハロ」）は、フッ素、臭素、塩素またはヨウ素、とりわけフッ素、塩素を意味する。ハロゲンで置換された基および部分、例えば、ハロゲンで置換されたアルキル（ハロアルキル）は、モノ−、ポリ−または過ハロゲン化されていてよい。

「ヘテロ原子」は、炭素および水素以外の原子、好ましくは窒素（Ｎ）、酸素（Ｏ）、または硫黄（Ｓ）、とりわけ窒素である。

「炭素含有基」、「炭素含有部分」または「炭素含有分子」は、１〜７個、好ましくは１〜６個、より好ましくは１〜４個、最も好ましくは１または２個の炭素原子を含有する。１個を超える炭素原子を有する任意の非環式炭素含有基または部分は、直鎖または分枝鎖である。

接頭辞「低級」または「Ｃ_１〜Ｃ_７」は、最大で７個までの（最大値７個を含む）、特に最大で４個までの（最大値４個を含む）炭素原子を有する基を意味し、当該基は、直鎖であるか、１つまたは複数の分枝を有する分枝鎖のいずれかである。

「アルキル」は、直鎖または分枝鎖のアルキル基を指し、好ましくは直鎖または分枝鎖のＣ_１〜１２アルキルを表し、とりわけ好ましくは直鎖または分枝鎖のＣ_１〜７アルキル、例えば、メチル、エチル、ｎ−もしくはｉｓｏ−プロピル、ｎ−、ｉｓｏ−、ｓｅｃ−もしくはｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシル、ｎ−ウンデシル、ｎ−ドデシルを表し、とりわけ好ましいのは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉｓｏ−プロピル、ならびにｎ−ブチル、およびｉｓｏ−ブチルである。アルキルは、非置換でも、置換されていてもよい。典型的な置換基には、限定はされないが、重水素、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロおよびアミノが含まれる。置換されたアルキルの例がトリフルオロメチルである。シクロアルキルも、アルキルに対する置換基であり得る。このような事例の例が、部分（アルキル）−シクロプロピルまたはアルカンジイル−シクロプロピル、例えば、−ＣＨ_２−シクロプロピルである。Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキルは、好ましくは、１個（１個を含む）から最大７個まで（７個を含む）、好ましくは１個（１個を含む）から４個まで（４個を含む）のアルキルであり、直鎖または分枝鎖であり、好ましくは、低級アルキルは、ブチル（ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｉｓｏブチル、ｔｅｒｔ−ブチルなど）、プロピル（ｎ−プロピルまたはｉｓｏプロピルなど）、エチル、または好ましくはメチルである。

「アルコキシ」、「アルコキシアルキル」、「アルコキシカルボニル」、「アルコキシカルボニルアルキル」、「アルキルスルホニル」、「アルキルスルホキシル」、「アルキルアミノ」、「ハロアルキル」のような他の基の各アルキル部分は、「アルキル」に関する前述の定義中に記載したのと同様の意味を有するものとする。

「アルカンジイル」は、２つの異なる炭素原子によって部分に結合される直鎖または分枝鎖のアルカンジイル基を指し、好ましくは、直鎖または分枝鎖のＣ_１〜１２アルカンジイルを表し、とりわけ好ましくは直鎖または分枝鎖のＣ_１〜６アルカンジイル、例えば、メタンジイル（−ＣＨ_２−）、１，２−エタンジイル（−ＣＨ_２−ＣＨ_２−）、１，１−エタンジイル（（−ＣＨ（ＣＨ_３）−）、１，１−、１，２−、１，３−プロパンジイル、および１，１−、１，２−、１，３−、１，４−ブタンジイルを表し、とりわけ好ましいのは、メタンジイル、１，１−エタンジイル、１，２−エタンジイル、１，３−プロパンジイル、１，４−ブタンジイルである。

「アルケンジイル」は、２つの異なる炭素原子によって分子に結合される直鎖または分枝鎖のアルケンジイル基を指し、好ましくは、直鎖または分枝鎖のＣ_２〜６アルカンジイル、例えば、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ_３）−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ_２−、−Ｃ（ＣＨ_３）＝ＣＨ−ＣＨ_２−、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ_３）−ＣＨ_２−、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（ＣＨ_３）Ｈ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ（ＣＨ_３）＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ_３）−ＣＨ＝ＣＨ−を表し、とりわけ好ましいのは、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ_２−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−である。アルケンジイルは、置換されていても、非置換でもよい。

「シクロアルキル」は、炭素環当たり３〜１２個の環原子を有する、飽和もしくは部分飽和の単環式、縮合多環式、またはスピロ多環式炭素環を指す。シクロアルキル基の実例としては、次の部分：シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが挙げられる。シクロアルキルは、非置換でも、置換されていてもよく、典型的な置換基は、アルキルに関する定義の中に示されており、アルキルそれ自体（例えば、メチル）も含まれる。−（ＣＨ_３）シクロプロピルのような部分は、置換されたシクロアルキルとみなされる。

「アリール」は、６個以上の炭素原子を有する芳香族の同素環式環系（すなわち、環形成原子は炭素のみ）を指し、アリールは、好ましくは６〜１４個の環炭素原子、より好ましくは６〜１０個の環炭素原子を有する芳香族部分、例えば、フェニルまたはナフチル、好ましくはフェニルである。アリールは、非置換でもよく、あるいは、後記のような非置換または置換されたヘテロシクリル、特にピロリジニル（ピロリジノなど）、オキソピロリジニル（オキソピロリジノなど）、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル−ピロリジニル、２，５−ジ−（Ｃ_１〜Ｃ_７アルキル）ピロリジニル（２，５−ジ−（Ｃ_１〜Ｃ_７アルキル）−ピロリジノなど）、テトラヒドロフラニル、チオフェニル、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキルピラゾリジニル、ピリジニル、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキルピペリジニル、ピペリジノ、アミノまたはＮ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−［低級アルキル、フェニル、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルカノイルおよび／またはフェニル−低級アルキル）−アミノで置換されたピペリジノ、非置換または環炭素原子を介して結合されたＮ−低級アルキル置換ピペリジニル、ピペラジノ、低級アルキルピペラジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、Ｓ−オキソ−チオモルホリノもしくはＳ，Ｓ−ジオキソチオモルホリノ；Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル、アミノ−Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル、Ｎ−Ｃ_１〜Ｃ_７−アルカノイルアミノ−Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル、Ｎ−Ｃ_１〜Ｃ_７−アルカンスルホニル−アミノ−Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル、カルバモイル−Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル、［Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル）−カルバモイル］−Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルカンスルフィニル−Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルカンスルホニル−Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル、フェニル、ナフチル、モノ〜トリ−［Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル、ハロ、および／またはシアノ］−フェニルまたはモノ〜トリ−［Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル、ハロ、および／またはシアノ］−ナフチル；Ｃ_３〜Ｃ_８−シクロアルキル、モノ〜トリ−［Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキルおよび／またはヒドロキシ］−Ｃ_３〜Ｃ_８−シクロアルキル；ハロ、ヒドロキシ、低級アルコキシ、低級アルコキシ−低級アルコキシ、（低級アルコキシ）−低級アルコキシ−低級アルコキシ、ハロ−Ｃ_１〜Ｃ_７−アルコキシ、フェノキシ、ナフチルオキシ、フェニル−もしくはナフチル−低級アルコキシ；アミノ−Ｃ_１〜Ｃ_７−アルコキシ、低級アルカノイルオキシ、ベンゾイルオキシ、ナフトイルオキシ、ホルミル（ＣＨＯ）、アミノ、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル）−アミノ、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルカノイルアミノ、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルカンスルホニルアミノ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル（例えば、フェニル−もしくはナフチル−低級アルコキシカルボニル、例えばベンジルオキシカルボニル）；Ｃ_１〜Ｃ_７−アルカノイル（アセチルなど）、ベンゾイル、ナフトイル、カルバモイル、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−二置換カルバモイル（例えば、その置換基が低級アルキル、（低級アルコキシ）−低級アルキルおよびヒドロキシ−低級アルキルから選択されるＮ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−二置換カルバモイル）；アミジノ、グアニジノ、ウレイド、メルカプト、低級アルキルチオ、フェニルもしくはナフチルチオ、フェニルもしくはナフチル−低級アルキルチオ、低級アルキル−フェニルチオ、低級アルキル−ナフチルチオ、ハロ−低級アルキルメルカプト、スルホ（−ＳＯ_３Ｈ）、低級アルカン−スルホニル、フェニルもしくはナフチル−スルホニル、フェニルもしくはナフチル−低級アルキルスルホニル、アルキルフェニル−スルホニル、ハロ−低級アルキルスルホニル（トリフルオロメタンスルホニルなど）；スルホンアミド、ベンゾスルホンアミド、アジド、アジド−Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル（特にアジドメチル）、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルカンスルホニル、スルファモイル、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル）−スルファモイル、モルホリノスルホニル、チオモルホリノスルホニル、シアノ、およびニトロからなる群から独立に選択される１つまたは複数の、好ましくは最大３個までの、より好ましくは最大２個までの置換基で置換されていてもよく；ここで、置換基、または置換されたアルキル（さらには、本明細書中で言及される置換されたアリール、ヘテロシクリルなど）の置換基の一部として前に言及した各フェニルまたはナフチル（さらにはフェノキシまたはナフトキシ）は、それ自体、非置換であるか、ハロ、ハロ−低級アルキル（トリフルオロメチルなど）、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アジド、アミノ、Ｎ−モノもしくはＮ，Ｎ−ジ−（低級アルキルおよび／またはＣ_１〜Ｃ_７−アルカノイル）−アミノ、ニトロ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、カルバモイル、シアノおよび／またはスルファモイルから独立に選択される１つまたは複数の、例えば最大３個までの、好ましくは１または２個の置換基で置換されている。

「ヘテロシクリル」は、不飽和（＝環（複数可）中に可能な最大数の共役二重結合を有する）、飽和または部分飽和である複素環式基を指し、好ましくは単環式、または本発明のより広範な態様では二環式、三環式またはスピロ環式環であり、３〜２４個、より好ましくは４〜１６個、最も好ましくは５〜１０個、最も好ましくは５または６個の環原子を有し、ここで、１つまたは複数の、好ましくは１〜４個の、特に１または２個の環原子は、ヘテロ原子である（残りの環原子は、それゆえ炭素である）。結合している環（すなわち、分子に連結している環）は、好ましくは、４〜１２個、特に５〜７個の環原子を有する。用語「ヘテロシクリル」は、また、ヘテロアリールを含む。複素環式基（ヘテロシクリル）は、非置換でも、置換アルキルに関して前に定義した置換基からなる群から、および／または次の置換基：オキソ（＝Ｏ）、チオカルボニル（＝Ｓ）、イミノ（＝ＮＨ）、イミノ−低級アルキルの１つまたは複数から独立に選択された１つまたは複数の、特に１〜３個の置換基で置換されていてもよい。さらに、ヘテロシクリルは、特に、オキシラニル、アジリニル、アジリジニル、１，２−オキサチオラニル、チエニル（＝チオフェニル）、フラニル、テトラヒドロフリル、ピラニル、チオピラニル、チアントレニル、イソベンゾフラニル、ベンゾフラニル、クロメニル、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、イミダゾリル、イミダゾリジニル、ベンズイミダゾリル、ピラゾリル、ピラジニル、ピラゾリジニル、チアゾリル、イソチアゾリル、ジチアゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリダジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、（Ｓ−オキソもしくはＳ，Ｓ−ジオキソ）−チオモルホリニル、インドリジニル、アゼパニル、ジアゼパニル、特に１，４−ジアゼパニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、インドリル、ベンズイミダゾリル、クマリル、インダゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、イソキノリル、キノリル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリル、デカヒドロキノリル、オクタヒドロイソキノリル、ベンゾフラニル、ジベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、ジベンゾチオフェニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリル、キナゾリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、カルバゾリル、β−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ペリミジニル、フェナントロリニル、フラザニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、クロメニル、イソクロマニル、クロマニル、ベンゾ［１，３］ジ−オキソール−５−イル、および２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イルからなる群から選択されるヘテロシクリル基であり、これらの基のそれぞれは、非置換であるか、置換されたアリールに関して前に言及した置換基から、および／または次の置換基：オキソ（＝Ｏ）、チオカルボニル（＝Ｓ）、イミノ（＝ＮＨ）、イミノ−低級アルキルの１種または複数から選択される１つまたは複数の、好ましくは最大３個までの置換基で置換されている。

「アリールアルキル」は、メチルまたはエチル基などのアルキル基を介して分子に結合されるアリール基、好ましくはフェネチルまたはベンジル、とりわけベンジルを指す。同様に、シクロアルキル−アルキルおよびヘテロシクリル−アルキルは、アルキル基を介して分子に結合されるシクロアルキル基、またはアルキル基を介して分子に結合されるヘテロシクリル基を表す。それぞれの場合、アリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、およびアルキルは、前に定義したように置換されていてもよい。

「塩」（「またはそれらの塩」あるいは「またはその塩」によって意味されるもの）は、単独で、または遊離化合物、例えば式（Ｉ）の化合物との混合物の状態で存在することができ、好ましくは医薬的に許容される塩である。式（Ｉ）の化合物のこのような塩は、塩基性窒素原子を有する式（Ｉ）の化合物から、例えば、好ましくは有機または無機酸との酸付加塩として形成される。適切な無機酸は、例えば、塩酸などのハロゲン酸、硫酸、またはリン酸である。適切な有機酸は、例えば、カルボン酸またはスルホン酸、例えば、フマル酸またはメタンスルホン酸である。単離または精製の目的で、医薬的に許容されない塩、例えばピクリン酸塩または過塩素酸塩を使用することも可能である。治療で使用するためには、医薬的に許容される塩または遊離化合物のみが採用され（適用可能であれば、医薬製剤（pharmaceutical preparation）の形態で）、したがって、これらの塩または遊離化合物が好ましい。遊離形態の新規化合物とそれらの塩形態の新規化合物（例えば、新規化合物の精製または同定における中間体として使用できる塩を含む）との間の密接な関連を考慮すると、遊離化合物へのこれまでの言及およびこれからの言及はいずれも、適切かつ好都合であれば、対応する塩にも言及していると理解されたい。式（Ｉ）の化合物の塩は、好ましくは医薬的に許容される塩であり、適切な対イオンを形成している医薬的に許容される塩も当技術分野で公知である。

「組合せ（combination）」は、組合せ投与のための、１つの単位剤形（dosage unit form）での配合剤（fixed combination）、または非固定の組合せ（または要素のキット）のいずれかを指し、ここで、式（Ｉ）の化合物および組合せパートナー（例えば、後に説明するような、「治療薬」または「補助薬（co-agent）」とも呼ばれるもう１つの薬物）は、同時刻に独立的に、または時間間隔内に個別に投与することができ、特にこれらの時間間隔は、組合せパートナーが、協同的効果、例えば相乗効果を示すことを可能にする。本明細書中で利用される用語「組合せ投与」などは、それを必要とする単一対象（例えば、患者）への、選択された組合せパートナーの投与を包含することを意味し、薬剤が必ずしも同一の投与経路で、または同時に投与されるとは限らない治療レジメンを含むと解釈される。用語「配合剤」は、有効成分、例えば、式（Ｉ）の化合物および組合せパートナーが、双方とも単一の実体または調剤（dosage）の形態で同時に患者に投与されることを意味する。用語「非固定の組合せ」または「要素のキット」は、有効成分、例えば、式（Ｉ）の化合物および組合せパートナーが、双方とも、別々の実体として、同時に、共に、または特定の時間的制約なしで逐次に、のいずれかで患者に投与されることを意味し、ここで、このような投与は、患者の体内で２種の化合物の治療有効レベルを提供する。後者の組合せは、また、カクテル療法、例えば、３種以上の有効成分の投与にも適用される。

「治療」は、疾患または障害の予防的（防止的）および治療的処置、ならびに進行の遅延を含む。用語「予防的」は、増殖性疾患を含む疾患の開始または再発の防止を意味する。用語「進行の遅延」は、本明細書中で使用する場合、治療すべき増殖性疾患の前段階または早期状態にある患者への組合せの投与を意味し、その患者は、例えば、該当する疾患の前形態と診断されるか、またはその患者は、該当する疾患が発症すると思われる、例えば、医学的な治療中の状態、または事故に起因する状態にある。

「対象」は、動物を含むと解釈される。対象の例には、哺乳動物、例えば、ヒト、イヌ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ、ラット、および遺伝子導入非ヒト動物が含まれる。特定の実施形態において、対象は、ヒト、例えば、脳腫瘍疾患に罹患している、罹患する危険にさらされている、または潜在的に罹患し得るヒトである。とりわけ好ましくは、対象はヒトである。

「医薬製剤」または「医薬組成物」は、哺乳動物に影響を及ぼす特定の疾患または状態を予防、治療または管理するために、哺乳動物、例えばヒトに投与する予定の少なくとも１種の治療用化合物を含有する混合物または溶液を指す。

「併用投与する（co-administer）」、「併用投与」または「組合せ投与」などは、単一患者への選択した治療薬の投与を包含することを意味し、薬剤が、必ずしも同一の投与経路により、または同時に投与されるとは限らない治療レジメンを含むことを意味する。

「医薬的に許容される」は、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、およびその他の問題となる合併症なしに、健全な医学的判断の範囲内で妥当な利益／リスク比と釣り合った、哺乳動物、特にヒトの組織との接触に適している化合物、材料、組成物、および／または剤形を指す。

「治療的に有効」とは、好ましくは、増殖性疾患の進行に対して、治療的にまたはより広い意味で予防的にも有効である量に関する。

「単一医薬組成物」は、有効量の双方の治療薬を患者に送達するように製剤化された単一の担体またはビヒクルを指す。単一のビヒクルは、有効量の各薬剤を医薬的に許容される担体または賦形剤と一緒に送達するように設計される。一部の実施形態においてビヒクルは、錠剤、カプセル剤、丸剤、または貼付剤である。他の実施形態において、ビヒクルは、溶液または懸濁液である。

「用量範囲（dose range）」は、指定薬剤量の許容されるバリエーションの上限および下限を指す。典型的には、指定範囲内の任意の量である用量の薬剤を、治療を受けている患者に投与することができる。

用語「約」または「ほぼ」は、通常、示された値または範囲の２０％以内、より好ましくは１０％以内、最も好ましくはさらに５％以内を意味する。あるいは、特に生物学的系において、用語「約」は、約対数（すなわちマグニチュードの桁）内の、好ましくは示された値の２倍以内を意味する。

本発明は、（ａ）下記で定義する式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩、および（ｂ）少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤またはその医薬的に許容される塩を含む医薬的な組合せに関する。このような組合せは、増殖性疾患を治療するための、同時、個別、または逐次使用のためであってもよい。

本発明に適した特定の２−カルボキサミドシクロアミノウレア誘導体、それらの調製
、およびそれらを含有する適切な医薬製剤は、国際公開第２０１０／０２９０８２号に記載されており、式（Ｉ）の化合物

［式中、
Ａは、

からなる群から選択されるヘテロアリールを表し、
Ｒ^１は、次の置換基：（１）非置換または置換された、好ましくは置換されたＣ_１〜Ｃ_７−アルキル、ここで、前記置換基は、１つまたは複数の、好ましくは１〜９個の次の部分：重水素、フルオロ、または１〜２個の次の部分Ｃ_３〜Ｃ_５−シクロアルキルから独立に選択される、（２）必要に応じて置換されたＣ_３〜Ｃ_５−シクロアルキル、ここで、前記置換基は、１つまたは複数の、好ましくは１〜４個の次の部分：重水素、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル（好ましくはメチル）、フルオロ、シアノ、アミノカルボニルから独立に選択される、（３）必要に応じて置換されたフェニル、ここで、前記置換基は、１つまたは複数の、好ましくは１〜２個の次の部分：重水素、ハロ、シアノ、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキルアミノ、ジ（Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル）アミノ、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキルアミノカルボニル、ジ（Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル）アミノカルボニル、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルコキシから独立に選択される、（４）必要に応じてモノまたはジ置換されたアミン、ここで、前記置換基は、次の部分：重水素、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル（これは、非置換であるか、重水素、フルオロ、クロロ、ヒドロキシからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で置換されている）、フェニルスルホニル（これは、非置換であるか、１つまたは複数の、好ましくは１つのＣ_１〜Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルコキシ、ジ（Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル）アミノ−Ｃ_１〜Ｃ_７−アルコキシで置換されている）から独立に選択される、（５）置換されたスルホニル、ここで、前記置換基は、次の部分：Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル（これは、非置換であるか、重水素、フルオロの群から選択される１つまたは複数の置換基で置換されている）、ピロリジノ（これは、非置換であるか、重水素、ヒドロキシ、オキソの群から選択される１つまたは複数の置換基、とりわけ１つのオキソで置換されている）から選択される、（６）フルオロ、クロロ、
のうちの１つを表し、
Ｒ^２は、水素を表し、
Ｒ^３は、（１）水素、（２）フルオロ、クロロ、（３）必要に応じて置換されたメチル、ここで、前記置換基は、１つまたは複数の、好ましくは１〜３個の次の部分：重水素、フルオロ、クロロ、ジメチルアミノから独立に選択される、を表す］、
を含み、
ただし（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛５−［２−（ｔｅｒｔ−ブチル）−ピリミジン−４−イル］−４−メチル−チアゾール−２−イル｝−アミド）を除く。
式（Ｉ）の化合物の定義中で使用される基および記号は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際公開第２０１０／０２９０８２号において開示されている意味を有する。

国際公開第２０１０／０２９０８２号に開示のように、式（Ｉ）のこれらの２−カルボキサミドシクロアミノウレア誘導体化合物は、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（またはＰＩ３Ｋ）に対してかなりの阻害活性を有することが見出された。式（Ｉ）のこれらの化合物は、ＰＩ３Ｋ阻害剤としての有利な薬理学的特性を有し、ＰＩ３−キナーゼのαサブタイプに対して、βおよび／またはδおよび／またはγサブタイプに比較して高い選択性を示す。

本発明にとって好ましい式（Ｉ）の化合物は、国際公開第２０１０／０２９０８２号に具体的に記載されている化合物である。本発明の極めて好ましい化合物は、（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（化合物Ａ）またはその医薬的に許容される塩である。（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）の合成は、国際公開第２０１０／０２９０８２号中に実施例１５として記載されている。

本発明の医薬的な組合せは、Ｈｓｐ９０の内因性ＡＴＰアーゼ活性を標的とする、低下させるまたは阻害する、かつ／またはユビキチンプロテオソーム経路を介してＨｓｐ９０クライアントタンパク質を分解する、標的とする、低下させるまたは阻害する少なくとも１種の化合物を含む。このような化合物は、「熱ショックタンパク質９０阻害剤」または「Ｈｓｐ９０阻害剤」と呼ばれる。

適切なＨｓｐ９０阻害剤としては、限定はされないが、
（ａ）Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ，ＬＬＣ（ミズーリ州、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）から入手可能であり、参照により本出願に組み込まれる１９８１年４月１４日付けの米国特許第４，２６１，９８９号に開示のゲルダナマイシン誘導体であるタネスピマイシン（１７−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン）（ＫＯＳ−９５３および１７−ＡＡＧとしても知られている）、およびその他のゲルダナマイシン関連化合物；
（ｂ）Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ，ＬＬＣ（ミズーリ州、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）から入手可能であるラディシコール；
（ｃ）６−クロロ−９−（４−メトキシ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−アミン・メタンスルホン酸（ＣＮＦ２０２４としても知られている）（Ｃｏｎｆｏｒｍａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｃｏｒｐ．）；
（ｄ）ＩＰＩ５０４；
（ｅ）ＳＮＸ５４２２；
（ｆ）構造およびその製造方法について、参照により本出願に組み込まれる、２００４年８月２６日に公開のＰＣＴ出願国際公開第０４／０７２０５１号に開示されている、５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−４−（４−モルホリン−４−イルメチル−フェニル）−イソキサゾール−３−カルボン酸エチルアミド（ＡＵＹ９２２）；および
（ｇ）構造およびその製造方法について、参照により本出願に組み込まれる、２００７年５月３１日に公開の米国特許出願公開第２００７−０１２３５４６号に開示されている、（Ｒ）−２−アミノ−７−［４−フルオロ−２−（６−メトキシ−ピリジン−２−イル）−フェニル］−４−メチル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−５−オン（ＨＳＰ９９０）；
ならびにこれらの医薬的に許容される塩が挙げられる。

本発明にとって好ましいＨｓｐ９０阻害剤は、５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−４−（４−モルホリン−４−イルメチル−フェニル）−イソキサゾール−３−カルボン酸エチルアミド（ＡＵＹ９２２）、および（Ｒ）−２−アミノ−７−［４−フルオロ−２−（６−メトキシ−ピリジン−２−イル）−フェニル］−４−メチル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−５−オン（ＨＳＰ９９０）、またはこれらの医薬的に許容される塩である。

同様に、それらの医薬的に許容される塩、対応するラセミ化合物、ジアステレオ異性体、エナンチオマー、互変異性体、ならびに存在するのであれば、上に開示されている化合物の対応する結晶改変体、例えば、そこに開示の溶媒和物、水和物および多形体を含む。本発明の組合せ中で有効成分として使用される化合物は、それぞれ引用文献中に記載のように調製し、投与することができる。また、前に示したような２種を超える個々の有効成分の組合せも本発明の範囲内にあり、すなわち、本発明の範囲内の医薬的な組合せは、３種以上の有効成分を含むことができる。

本発明の一実施形態において、医薬的な組合せは、（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）である式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩、および５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−４−（４−モルホリン−４−イルメチル−フェニル）−イソキサゾール−３−カルボン酸エチルアミド（ＡＵＹ９２２）、（Ｒ）−２−アミノ−７−［４−フルオロ−２−（６−メトキシ−ピリジン−２−イル）−フェニル］−４−メチル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−５−オン（ＨＳＰ９９０）から選択される少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤またはそれらの医薬的に許容される塩を含む。

本発明の一実施形態において、医薬的な組合せは、（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）である式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩、および少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−４−（４−モルホリン−４−イルメチル−フェニル）−イソキサゾール−３−カルボン酸エチルアミド（ＡＵＹ９２２）またはその医薬的に許容される塩を含む。

驚くべきことに、α−特異的ＰＩ３Ｋ阻害剤である式（Ｉ）の化合物と、少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤との組合せは、その組合せを増殖性疾患、とりわけがんを治療するのにとりわけ有用にする有益な治療特性を所持することが見出されるに至った。

一態様において、本発明は、（ａ）式（Ｉ）の化合物、とりわけ化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）またはその医薬的に許容される塩、および（ｂ）少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤またはその医薬的に許容される塩を含む、増殖性疾患、とりわけがんの治療で使用するための医薬的な組合せを提供する。

一態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩、および少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤またはその医薬的に許容される塩を含む医薬的組合せの、増殖性疾患を治療するための医薬を調製するための使用を提供する。

一態様において、本発明は、さらに、治療を必要とする対象の増殖性疾患を治療するための方法に関するものであり、該方法は、前記対象に治療有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩、および少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤またはその医薬的に許容される塩を投与する工程を含む。本発明によれば、式（Ｉ）の化合物およびＨｓｐ９０阻害剤は、単一の医薬組成物として、別個の組成物として、または逐次のいずれかで投与することができる。

好ましくは、本発明は、がんなどの増殖性疾患に罹患している哺乳動物、特にヒトを治療するのに有用である。

式（Ｉ）の化合物と少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤との組合せが、良好な治療マージンおよびその他の利点を伴って増殖性疾患の効果的治療にとりわけ適していることを立証するために、当業者に公知の方式で、臨床試験を実施することができる。

適切な臨床試験は、例えば、増殖性疾患を有する患者における、オープンラベル、用量上昇試験である。このような試験は、とりわけ、本発明の組合せの有効成分の相乗作用を立証する。有益な効果は、当業者にとってそれ自体公知であるこれらの試験の結果を通して直接的に決定することができる。このような試験は、有効成分を使用する単剤療法および本発明の組合せの効果を比較するのにとりわけ適している。好ましくは、薬剤（ａ）の用量を、最大耐用量（Maximum Tolerated Dosage）に達するまで増大させ、薬剤（ｂ）を固定用量で投与する。別法として、薬剤（ａ）を固定用量で投与し、薬剤（ｂ）の用量を増大させる。各患者は、薬剤（ａ）の用量を毎日または間欠的に受け入れる。このような試験において、治療の有効性は、６週間毎に症状の点数を評価することによって、例えば、１２、１８または２４週後に決定することができる。

本発明の医薬的組合せの投与は、例えば、症状を緩和すること、症状の進行を遅延させること、または症状を抑制することに関しての有益な効果、例えば相乗的治療効果のみならず、本発明の組合せ中で使用される薬剤（ａ）または薬剤（ｂ）の１種だけを適用する単剤療法に比較して、さらに驚くべき有益な効果、例えば、より少ない副作用、改善された生活の質、または死亡率の低下ももたらす。

さらなる利点は、本発明の組合せのより少ない用量の有効成分を使用できること、例えば、投薬量が、しばしばより少なくなるのみならず、より少ない頻度で適用され、これによって、副作用の発生または重症度を減少することができることである。このことは、治療予定の患者の希望および要求と一致している。

増殖性疾患を標的とするまたは予防することにおいて合わせて治療上有効である量の、本発明の各組合せパートナー薬剤（ａ）および（ｂ）を含む医薬組成物を提供することが、本発明の１つの目的である。一態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩、および少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤またはその医薬的に許容される塩を含む医薬組成物に関する。一実施形態において、本発明のこのような医薬組成物は、増殖性疾患治療で使用するために存在する。本発明によれば、薬剤（ａ）および薬剤（ｂ）は、単一の医薬組成物中で一緒に、１つの組み合わされた単位剤形中でもしくは２つの別々の単位剤形中で別々に、または逐次に投与することができる。また単位剤形は配合剤であってもよい。

薬剤（ａ）および薬剤（ｂ）の別々の投与のための、または配合剤（すなわち、少なくとも２種の組合せパートナー（ａ）および（ｂ）を含む単一のガレヌス組成物（galenical composition））での投与のための本発明による医薬組成物は、それ自体公知の方法で調製することができ、ヒトなどの哺乳動物（温血動物）を含む対象への経口または直腸などの経腸、局所、および非経口投与に適した組成物であり、治療有効量の少なくとも１種の薬理学的に有効な組合せパートナーを例えば前に示したように単独で、または経腸もしくは非経口適用に特に適した１種または複数の医薬的に許容される担体または希釈剤と組み合わせて含む。適切な医薬組成物は、例えば、約０．１％〜約９９．９％、好ましくは約１％〜約６０％の有効成分（複数可）を含有する。

経腸または非経口投与のための併用療法用医薬組成物は、例えば、糖衣錠、錠剤、カプセル剤もしくは坐剤、アンプル剤、注射用溶液剤、または注射用懸濁液剤などの単位剤形の組成物である。局所投与は、例えば、皮膚または眼のために、例えば、ローション、ゲル、軟膏またはクリームの形態で、または経鼻もしくは坐剤の形態で存在する。特記しない限り、これらの形態は、それ自体公知の方法で、例えば、従来の混合、造粒、糖衣、溶解または凍結乾燥法によって調製される。各剤形の個々の用量中に含有される薬剤（ａ）または薬剤（ｂ）の単位含有量は、複数の投薬量単位を投与することによって必要有効量を達成することができるので、それ自体で有効量を構成する必要はないことを認識されたい。

医薬組成物は、１種または複数の医薬的に許容される担体または希釈剤を含むことができ、一方または双方の組合せパートナーを医薬的に許容される担体または希釈剤と混合することによる従来法で製造することができる。医薬的に許容される希釈剤の例には、限定はされないが、乳糖、デキストロース、マンニトール、および／またはグリセロール、および／または滑沢剤、および／またはポリエチレングリコールが含まれる。医薬的に許容される結合剤の例には、限定はされないが、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、デンプン（トウモロコシ、小麦または米のデンプンなど）、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドンが含まれ、所望であれば、医薬的に許容される崩壊剤は、限定はされないが、デンプン、寒天、アルギン酸もしくはその塩（アルギン酸ナトリウムなど）、および／または沸騰性混合物、または吸着剤、染料、風味剤、および甘味剤を含む。また、本発明の化合物を非経口的に投与できる組成物の形態、または点滴用溶液の形態で使用することも可能である。医薬組成物は、滅菌することができ、かつ／または賦形剤、例えば、保存剤、安定剤、湿潤化化合物、および／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧調節用塩類、および／または緩衝剤を含むことができる。

詳細には、本発明の組合せの治療有効量の各組合せパートナーは、同時にまたは逐次に、任意の順序で投与することができ、成分は、別々に、または配合剤として投与することができる。例えば、本発明による増殖性疾患を予防または治療する方法は、（ｉ）第１の薬剤（ａ）を遊離形態または医薬的に許容される塩の形態で投与すること、および（ｉｉ）薬剤（ｂ）を遊離形態または医薬的に許容される塩の形態で、同時にまたは任意の順序で逐次に、合わせて治療有効量での、好ましくは相乗的有効量での、例えば、本明細書に記載の量に対応する毎日または間欠的投薬量で投与することを含むことができる。本発明の組合せの個々の組合せパートナーは、治療過程中の異なる時点で別々に、または分割されたもしくは単一の組合せ形態で共に投与することができる。さらに、用語「投与すること（投与する工程）」は、また、インビボで組合せパートナー自体に変わる組合せパートナーのプロドラッグの使用も包含する。本発明は、したがって、同時または交互治療のすべてのこのようなレジメンを包含すると理解されたい。用語「投与すること（投与する工程）」は、それに合うように解釈されたい。

本発明の組合せ中で採用される組合せパートナー薬剤（ａ）および薬剤（ｂ）のそれぞれの有効投薬量は、採用される特定の化合物または医薬組成物、投与方式、治療されている状態、治療されている状態の重症度に応じて変わる可能性がある。したがって、本発明の組合せの投薬レジメンは、患者の種類、種、年齢、体重、性別、および医学的状態；治療すべき状態の重症度；投与経路；患者の腎および肝機能；ならびに採用される特定の化合物を含む種々の要因により選択される。通常の技能を有する医師、臨床医または獣医師は、状態の進行を予防、逆転または阻止するのに必要とされる薬物の有効量を、容易に決定し処方することができる。有効性をもたらす範囲内の薬物濃度を最善の正確さで達成するには、標的部位に対する薬物利用能の動力学に基づくレジメンを必要とする。このことは、薬物の分布、平衡、および排泄に関する考察を必要とする。

本発明の目的に関して、治療有効用量は、一般に、単回または分割用量で宿主に投与される１日当たりの総用量である。式（Ｉ）の化合物は、受容者の体重当たり、例えば、約０．０５〜約５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは受容者の体重当たり約０．１〜２５ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは受容者の体重当たり約０．５〜１０ｍｇ／ｋｇの１日当たりの投薬量範囲で宿主に投与することができる。７０ｋｇの者に投与する場合、式（Ｉ）の化合物の投薬量範囲は、１日に最も好ましくは約３５〜７００ｍｇである。薬剤（ｂ）は、宿主に、受容者の体重当たり、例えば、約０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは受容者の体重当たり１．０〜３０ｍｇ／ｋｇの１日当たりの投薬量範囲で投与することができる。投薬量単位の組成物は、１日当たりの用量を補うために、その約数などの量を含有してもよい。

さらなる利点は、より少ない用量の有効成分の本発明の組合せを使用できること、例えば、しばしば投薬量がより少なくなるだけではなく、より少ない頻度で適用されること、または副作用の発生率を減少させるために使用し得ることである。このことは、治療予定の患者の希望および要求に一致している。

式（Ｉ）の化合物とＨＳＰ９０阻害剤との組合せは、単独で、またはこれらの病状で使用するための少なくとも１種の他の医薬的有効化合物と組み合わせて使用することができる。これらの有効化合物を、同一の医薬製剤中で、または組合せパートナーを独立に投与できるという意味で組合せ製剤「要素のキット」の形態で、または区別される量の組合せパートナーとの様々な配合剤の、すなわち、同時または異なる時点での使用によって、組み合わせることができる。次いで、要素のキットの要素を、例えば、同時に、または要素のキット中の任意の要素に関して、異なる時点で、等しいもしくは異なる時間間隔で時間的にずらして、投与することができる。式（Ｉ）の化合物と少なくとも１種のＨＳＰ９０阻害剤との組合せを含む組合せ中で使用するために挙げることのできる化合物の非限定的例が、アナストロゾール、ドキソルビシン塩酸塩、フルタミド、デキサメタゾン、ドセタキセル、シスプラチン、パクリタキセルなどの細胞障害性化学療法薬である。さらに、ピリミジルアミノベンズアミド化合物とＨＳＰ９０阻害剤との組合せを、かなりの相乗効果をもたらすと予想されるその他のシグナル伝達阻害剤またはその他の腫瘍遺伝子標的化薬と組み合わせることができる。

本発明の組合せは、増殖性疾患を治療するのにとりわけ有用である。用語「増殖性疾患」は、限定はされないが、がん、腫瘍、過形成、再狭窄、心肥大、免疫障害、および炎症を含む。

本発明の組合せで治療することのできる増殖性疾患の例は、例えばがんであり、例えば、肉腫、肺、気管支、前立腺、乳房（散発性乳がんおよびカウデン病の罹患者を含む）、膵臓、消化管がん、または胃、結腸、直腸、結腸直腸アデノーマ、甲状腺、肝臓、肝内胆管、肝細胞、副腎、胃、神経膠腫、神経膠芽種、子宮内膜、腎臓、腎盂、膀胱、子宮体、子宮頸部、膣、卵巣、多発性骨髄腫、食道、白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ球性白血病、骨髄性白血病、脳、口腔および咽頭、喉頭、小腸、非ホジキンリンパ腫、黒色腫、絨毛結腸アデノーマ、新形成、上皮性新形成（neoplasia of epithelial character）、リンパ腫、乳房癌、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、光線性角化症、首または頭部の腫瘍、真性赤血球増加症、本態性多血小板血症、骨髄組織の過形成を伴う骨髄線維症、およびワルデンシュトレーム病を含む。

さらなる例には、真性赤血球増加症、本態性多血小板血症、骨髄組織の過形成を伴う骨髄線維症、喘息、ＣＯＰＤ、ＡＲＤＳ、レフレル症候群、好酸球性肺炎、寄生虫（とりわけ後生動物）感染（熱帯性好酸球症を含む）、気管支肺アスペルギルス症、結節性多発性動脈炎（チャーグ・ストラウス症候群を含む）、好酸球増加性肉芽腫、薬物反応によって引き起こされた気道に影響を及ぼす好酸球関連障害、乾癬、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、円形脱毛症、多形性紅疹、疱疹性皮膚炎、強皮症、白斑、過敏性血管炎、蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、エリテマトーデス、天疱瘡、後天性表皮水疱症、自己免疫性血液学的障害（例えば、溶血性貧血、再生不良性貧血、真性赤血球性貧血、および特発性血小板減少症）、全身性エリテマトーデス、多発性軟骨炎、強皮症、ウェゲナー肉芽腫症、皮膚筋炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、スチーブンス・ジョンソン症候群、特発性スプルー、自己免疫性炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎およびクローン病）、内分泌性眼疾患、グレーヴス病、サルコイドーシス、肺胞炎、慢性過敏性肺炎、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、ぶどう膜炎（前部および後部）、間質性肺線維症、乾癬性関節炎、糸球体腎炎、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、高血圧症、深部静脈血栓症、脳卒中、心筋梗塞、不安定狭心症、血栓塞栓症、肺動脈塞栓症、血栓溶解性疾患、急性動脈虚血、末梢性血栓性閉塞、および冠状動脈疾患、再潅流傷害、網膜症（糖尿病性網膜症または高圧酸素誘発性網膜症）ならびに高められた眼内圧または眼房水の分泌によって特徴付けられる緑内障などの状態が含まれる。

一実施形態において、本発明の組合せによって治療される増殖性疾患は、ＨＳＰ９０および／またはＰＩ３Ｋの阻害によって有益に治療できるがんであり、例えば、胃、肺および気管支、前立腺、乳房、膵臓、結腸、直腸、甲状腺、肝臓および肝内胆管、腎臓および腎盂、膀胱、子宮体、子宮頸部、卵巣、多発性骨髄腫、食道、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ球性白血病、骨髄性白血病、脳、口腔および咽頭、喉頭、小腸、非ホジキンリンパ腫、黒色腫、ならびに絨毛結腸アデノーマが挙げられる。

一実施形態において、本発明の組合せで治療される増殖性疾患は、食道のがん、消化管または胃のがんである。

腫瘍、腫瘍性疾患、肉腫、癌腫またはがんについて言及する場合、腫瘍および／または転移の場所がどのようであっても、最初の臓器または組織中の、および／または任意のその他の場所中の転移も、代替的にまたは付加的に包含される。

本発明の組合せは、増殖性疾患、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、とりわけＰＩ３Ｋのα−サブユニット、および／またはＨｓｐ９０（またはＰＩ３ＫまたはＨｓｐ９０に依存するもの）が介在する特にがんおよびその他の悪性疾患を治療するのにとりわけ有用である。増殖性疾患には、ＰＩ３Ｋαの過剰発現または増幅、ＰＩＫ３ＣＡの体細胞変異または生殖細胞変異またはＰＴＥＮの体細胞変異、またはｐ８５−ｐ１１０複合体を上向き調節するのに役立つｐ８５αの変異および転座を示すものが含まれる。

一実施形態において、本発明は、（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（化合物Ａ）から選択される治療有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩、ならびにゲルダナマイシン誘導体であるタネスピマイシン（１７−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン）（ＫＯＳ−９５３および１７−ＡＡＧとしても知られている）、ラディシコール、６−クロロ−９−（４−メトキシ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−アミン・メタンスルホン酸塩（ＣＮＦ２０２４としても知られている）、ＩＰＩ５０４、ＳＮＸ５４２２、５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−４−（４−モルホリン−４−イルメチル−フェニル）−イソキサゾール−３−カルボン酸エチルアミド（ＡＵＹ９２２）、および（Ｒ）−２−アミノ−７−［４−フルオロ−２−（６−メトキシ−ピリジン−２−イル）−フェニル］−４−メチル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−５−オン（ＨＳＰ９９０）から選択される少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤またはその医薬的に許容される塩を前記対象に投与する工程を含む、増殖性障害の治療方法に関する。

本発明は、さらに、式（Ｉ）の化合物、とりわけ、Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）またはその医薬的に許容される塩、および少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤またはその医薬的に許容される塩、ならびに使用法（direction）を含む添付文書またはその他のラベルを含んでなる、増殖性疾患を治療するためのキットに関する。

本発明は、さらに、式（Ｉ）の化合物、とりわけ、（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）またはその医薬的に許容される塩、および使用法を含む添付文書またはその他のラベルを含んでなる、少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤またはその医薬的に許容される塩を併用投与することによって増殖性疾患を治療するためのキットに関する。

以下の実施例は、上記の本発明を例示するが、それらは、いかなる意味でも本発明の範囲を限定することを意図しない。本発明の医薬的組合せの有益な効果は、当業者にとってそれ自体公知のその他の試験モデルによって決定することもできる。

実施例１ 雌性無胸腺ヌードマウスにおけるＨＧＣ−２７胃がん異種移植片モデルでの化合物Ａの効果
実験は、処置開始時にほぼ８〜１２週齢の雌性Ｈｓｄ：無胸腺Ｎｕｄｅ−ＦｏｘＮ１^ｎｕヌードマウスで実施する。すべての動物は、Ｈａｒｌａｎ（マサチューセッツ州、Ｓｏｕｔｈ Ｅａｓｔｏｎ）から購入し、食餌および水へのアクセスを自由にしたフィルタートップ型マイクロアイソレーター・ケージ中に最適化された衛生状態下に収容される（ケージ当たり最大で５匹の動物）。

ＰＩＫ３ＣＡ変異（ｃ１６２４Ｇ＞Ａ、ｐ．Ｅ５４２Ｋ）を有し、ＰＴＥＮなしのヒト胃癌細胞であるＨＧＣ−２７細胞を、１％非必須アミノ酸を含有するＭＥＭ培地中で１０％熱不活化ＦＣＳと共に増殖させ、５％ＣＯ_２の加湿雰囲気中で３７℃にてインキュベートする。細胞培養試薬は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（カリフォルニア州、Ｃａｒｌｓｂａｄ）から購入する。

ＨＧＣ−２７腫瘍は、動物の右側腹部に皮下で２００μＬ（１００μＬのＰＢＳ＋１００μＬのマトリゲル）（Ｃａｔ＃３５４２３４、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、マサチューセッツ州、Ｂｅｄｆｏｒｄ）中の５×１０^６個の細胞を注入することによってインビボで確立される。有効性の実験は、腫瘍が平均でほぼ２３０ｍｍ^３の大きさに達した時点（細胞注入の１２日後）で開始される。

化合物Ａは、０．５％メチルセルロース（ＭＣ）中で製剤化される。１６ｍＬの０．５％ＭＣに８０ｍｇの化合物Ａを添加し、次いで、撹拌／ボルテックスし、超音波水浴中で１時間超音波処理して、５ｍｇ／ｍＬの均質懸濁液を得る。０．５％ＭＣを使用して５ｍｇ／ｍＬの溶液を、２．５ｍｇ／ｍＬ、そして投与用の１．２５ｍｇ／ｍＬまで希釈する。化合物Ａまたはビヒクルを、１０ｍＬ／ｋｇの量で経口投与する。この懸濁液は、室温で１週間安定である。

ＡＵＹ９２２メシル酸塩をＤ５水中で製剤化する。遊離塩基化合物に対する補正係数（correction factor）は１．２１である。５０ｍｇ／ｋｇの遊離塩基ＡＵＹ９２２を調製するために、５．０ｍＬのＤ５水に６０．５ｍｇのＡＵＹ９２２／メシル酸塩を添加し、次いで超音波水浴中で溶液が澄明になるまで超音波処理する。ＡＵＹ９２２は、週２回、５ｍＬ／ｋｇの量で静脈内（ｉ．ｖ．）投与される。ＡＵＹ９２２は、その都度新たに調製する。

腫瘍体積を、キャリパーで測定し、式：長さ×直径^２×π／６により求める。抗腫瘍活性は、式：（処置された動物の腫瘍体積の平均変化量／対照動物の腫瘍体積の平均変化量）×１００により求められるＴ／Ｃ％として表現される。退縮（％）は、式：［（処置終了時の平均腫瘍体積−処置開始時の平均腫瘍体積）／処置開始時の平均腫瘍体積］×１００により計算される。体重および腫瘍体積は、週に２回記録される。

適用可能であれば、データは、平均±ＳＥＭとして示される。すべての試験で、有意性の水準は、ｐ＜０．０５で設定される。腫瘍体積に関し、処置群とビヒクル対照群との間の比較は、一元ＡＮＯＶＡ、それに続くダネット検定を使用して行われる。処置群間での腫瘍体積比較は、クラスカル・ウォリスの一元ＡＮＯＶＡ事後スチューデント・ニューマン・クールズ検定またはダン検定を使用して行われる。第１実験において、化合物Ａは、ＨＧＣ−２７皮下異種移植片の腫瘍を所持するヌードマウスに、経口で毎日１２．５ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、および５０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。ビヒクル対照は、毎日１０ｍＬ／ｋｇの０．５％ＭＣの経口（p.o.）投与、および週に２回５ｍＬ／ｋｇのＤ５水の静脈内（i.v.）投与を受け入れる動物からなる。

１日１回、１２．５ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、および５０ｍｇ／ｋｇで経口投与された化合物Ａは、それぞれ、３９．４％、３５．５％、および７．１％のＴ／Ｃ％をもたらす（図１）。週２回、５０ｍｇ／ｋｇの遊離塩基の用量で投与されたＡＵＹ９２２は、６０．５％のＴ／Ｃ（％）をもたらした（図３）。１２．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａと５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２遊離塩基との組合せは、１６．６％のＴ／Ｃ（％）をもたらす（図３）。２５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａと５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２遊離塩基との組合せは、２９．４８％の腫瘍退縮をもたらし（図５）、５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａと５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２遊離塩基との組合せは、８５．１％の腫瘍退縮をもたらす（図７）。２３日目は、腫瘍測定の最終日である。

化合物Ａは、５０ｍｇ／ｋｇの用量で、ビヒクルで処置された群に比較して統計的に有意な抗腫瘍効果をもたらす（ｐ＜０．０５、ＡＮＯＶＡ、事後ダネット検定）（図１参照）。１日１回、１２．５、２５および５０ｍｇ／ｋｇで経口投与された化合物Ａは、ビヒクル（１３０９±１６９ｍｍ^３の平均腫瘍体積変化）に比較して、それぞれ５１５±８５ｍｍ^３、４６５±１１１ｍｍ^３、および９３±７７ｍｍ^３の平均腫瘍体積変化をもたらす（ｐ＜０．０５、ＡＮＯＶＡおよび事後ダネット検定）（図１参照）。ＡＵＹ９２２は、７９２．２±１５９ｍｍ^３の平均腫瘍体積変化をもたらす。

週２回の５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２と組み合わせて、１日１回１２．５、２５および５０ｍｇ／ｋｇで経口投与された化合物Ａは、それぞれ、２１７±６８ｍｍ^３（ｐ＜０．０５、クラスカル・ウォリスＡＮＯＶＡ事後スチューデント・ニューマン・クールズ検定によりビヒクルおよび双方の単一薬剤に比較して）、−６８±３６ｍｍ^３（ｐ＜０．０５、クラスカル・ウォリス一元ＡＮＯＶＡ事後ダン検定によりビヒクルおよびＡＵＹ９２２で処置された群と比較して）、および−１９６±２１ｍｍ^３（ｐ＜０．０５、クラスカル・ウォリス一元ＡＮＯＶＡ事後スチューデント・ニューマン・クールズ検定によりビヒクルおよび双方の単一薬剤に比較して）の平均腫瘍体積変化をもたらす（図３、５および７参照）。

化合物Ａは、ビヒクルでの処置群（７．８±１．４％）および化合物Ａでの処置群（それぞれ、５．３±１．４％、２．２±１．１％、および−１．１±１．６％）に関する体重変化によって立証されるように、１２．５、２５ｍｇ／ｋｇ、および５０ｍｇ／ｋｇで十分許容される。ＡＵＹ９２２での処置群は、６．６±２．６％の体重変化をもたらす。

週２回の５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２と組み合わせて、１日１回１２．５、２５および５０ｍｇ／ｋｇで経口投与された化合物Ａは、すべての用量で許容される（０．９±１．５％、−３．０±２．４％、８．０６±２．４％）（図４、６および８参照）。

実施例２ 雌性無胸腺ヌードマウスにおけるＨＧＣ−２７胃がん異種移植片モデルでの化合物Ａの効果
次の修正を加えて実施例１に記載の手順に従う：
５００万個のＨＣＧ−２７腫瘍細胞を移植して２０日後の、平均腫瘍体積が３１６ｍｍ^３（１６４〜４８５ｍｍ^３）である時点で処置を開始する。動物には、（ａ）ビヒクル対照は、毎日１０ｍＬ／ｋｇの０．５％ＭＣの経口投与、および週２回５ｍＬ／ｋｇのＤ５Ｗの静脈内投与を受け入れる動物からなり、（ｂ）週２回（2 q.w.）の静脈内での５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２、（ｃ）１日１回（q.d.）経口での２５ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇのいずれかの化合物Ａ、（ｄ）週２回の静脈内での５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２と、１日１回の経口での２５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａとの組合せ、あるいは（ｅ）週２回の静脈内での５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２と、１日１回の経口での５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａとの組合せ、のいずれかを投与する。処置は１４日間継続される。

この実験で、２５および５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａは、それぞれ、１１％のＴ／Ｃ（ｐ＜０．０５、ビヒクルに対して）および１０％のＴ／Ｃ（ｐ＜０．０５、ビヒクルに対して）により有意な腫瘍増殖阻害をもたらす。５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２は５７％のＴ／Ｃをもたらすが、これはビヒクル処置群と比較して有意ではない。５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２と組み合わせた２５および５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａは、それぞれ、−１１％のＴ／Ｔ０（ｐ＜０．０５、ビヒクルまたはＡＵＹ９２２での処置群に対して）および−５７％のＴ／Ｔ０（ｐ＜０．０５、ビヒクル、ＡＵＹ９２２または化合物Ａでの処置群に対して）をもたらす。

実施例３ 雌性無胸腺ヌードマウスにおけるＮＣＩ−Ｎ８７胃がん異種移植片モデルでの化合物Ａの効果
実験は、処置開始時点でほぼ１０〜１２週齢の雌性Ｈｓｄ無胸腺ヌード−ｎｕ ＣＰＢマウスで実施される。すべての動物は、Ｈａｒｌａｎ（ドイツ、Ｗｉｎｋｅｌｍａｎｎ）から入手し、食餌および水へのアクセスを自由にしたＭａｋｒｏｌｏｎ ＩＩＩ型ケージ中に最適化された衛生状態下に収容する（ケージ当たり最大で５匹の動物）。

ヒト胃癌細胞であるＮＣＩ−Ｎ８７細胞を、１０％熱不活化ＦＣＳ、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウムで補足され、４．５ｇ／Ｌのグルコースを含有するＤＭＥＭ培地中で増殖させる。細胞を５％ＣＯ２の加湿雰囲気中、３７℃でインキュベートする。細胞を、トリプシン（０．２５％ｗ／ｖ）−ＥＤＴＡ（０．５３ｍＭ）で採取し、培地（添加物を含む）に再懸濁し、Ｃａｓｙ（登録商標）装置で計数する。細胞培養試薬は、ＢｉｏＣｏｎｃｅｐｔ（スイス、Ａｌｌｓｃｈｗｉｌ）から購入する。

ＮＣＩ−Ｎ８７腫瘍は、２３ゲージの注射針で８×１０^６〜１×１０^７個の細胞（５０％ｖ／ｖマトリゲルを含有するＨＢＳＳ中の）を皮下で注入することによって確立される。腫瘍が確立され、１８０〜２１０ｍｍ^３の間に達した時点で、動物を処置群間で無作為化し、処置を開始する。

化合物Ａは、ＮＭＰ／ＰＥＧ３００／ソルトールＨＳ１５／水（１０：３０：２０：４０％ｖ／ｖ）中で製剤化される。化合物を、まずＮＭＰに完全に溶解し、動物に投与する直前に水を添加する。化合物Ａまたはビヒクルを、１０ｍＬ／ｋｇの量で経口投与する。この懸濁液は、室温で１週間安定である。

ＡＵＹ９２２メシル酸塩は、Ｄ５水（水中、５％グルコース）中で製剤化される。ＡＵＹ９２２の用量は、すべて、遊離塩基当量を指す。ＡＵＹ９２２は、週２回、１０ｍＬ／ｋｇの量で静脈内投与される。

適用できる場合、データは、平均±ＳＥＭとして示される。すべての試験で、有意性の水準は、ｐ＜０．０５で設定される。腫瘍体積に関し、処置群とビヒクル対照群との間の比較は、一元ＡＮＯＶＡ、それに続くダネット検定を使用して行われる。ペアでの比較は、一元ＡＮＯＶＡ、それに続くテューキー検定を使用して行われる。処置期間の開始および終了の間の群内での体重変化の有意水準を、ペアードｔ−検定を使用して求める。処置群とビヒクル対照群との間の体重増分（delta body weight）の比較は一元ＡＮＯＶＡ、それに続く事後ダネット検定により実施される。計算は、Ｗｉｎｄｏｗｓ(登録商標)用ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ４（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．）を使用して実施される。

さらに、薬物相互作用の近似は、Clarke R.の論文「Issues in experimental design and endpoint analysis in the study of experimental cytotoxic agents in vivo in breast cancer and other models」、Breast Cancer Res.Treat.、46、255〜78(1997)中に記載の方法を使用して行われる。これをΔＴＶ（腫瘍体積）に適用する。

処置群間の腫瘍体積の比較は、クラスカル・ウォリスの一元ＡＮＯＶＡ事後スチューデント・ニューマン・クールズ検定またはダン検定を使用して行われる。

第１の実験
雌性無胸腺ヌードマウスを、１日１回の経口での５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの単独で、または週２回静脈内で投与される５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２と組み合わせて処置する。ビヒクル対照は、１０ｍＬ／ｋｇの５％グルコース水溶液の静脈内投与に加えて、ＮＭＰ／ＰＥＧ３００／ソルトールＨＳ１５／水（１０：３０：２０：４０％ｖ／ｖ）の混合物の毎日の経口投与を受け入れる動物から構成される。

単剤として、化合物Ａは、４．２％のＴ／Ｃ（ｐ＜０．０５、一元ＡＮＯＶＡ、事後ダネット検定）、および−１５．１±２１．４の平均腫瘍体積変化（ｍｍ^３±ＳＥＭ）で、統計的に有意な抗腫瘍効果をもたらす。単剤として使用したＡＵＹ９２２（５０ｍｇ／ｋｇ）は、７％の腫瘍退縮をもたらし、化合物Ａと組み合わせると７２．３％の退縮をもたらす。効果は、双方とも、ビヒクル対照と有意に異なる（ｐ＜０．０５、ＡＮＯＶＡ）。

ビヒクル対照は、２４８．９±２０．４の平均腫瘍体積変化（ｍｍ^３±ＳＥＭ）をもたらす。単剤として使用したＡＵＹ９２２（５０ｍｇ／ｋｇ）は、−１５．１±２１．４の平均腫瘍体積変化をもたらし、単剤として使用した化合物Ａおよび１．４±１８．８の平均腫瘍体積変化（ｍｍ^３±ＳＥＭ）をもたらす。ＡＵＹ９２２と化合物Ａとの組合せは、−１５５．８±１４．７の平均腫瘍体積変化（ｍｍ^３±ＳＥＭ）をもたらす。さらに、組合せで処置された群は、単剤として投与された化合物ＡおよびＡＵＹ９２２の双方と有意に異なる（ｐ＜０．０５、一元ＡＮＯＶＡ、事後テューキー検定）。

さらに、考え得る化合物相互作用のClarke R.(1997)により発表されている方法を用いる分析は、ＡＵＹ９２２と化合物Ａとの組合せでの相乗的抗腫瘍効果を指摘している：

化合物Ａ、Ｂまたは組合せＡＢ（ビヒクル対照群Ｃを含めて）に関して、計算結果がＡＢ／Ｃ＞Ａ／Ｃ×Ｂ／Ｃの場合には拮抗作用、ＡＢ／Ｃ＝Ａ／Ｃ×Ｂ／Ｃの場合には相加効果が予想され、ＡＢ／Ｃ＜Ａ／Ｃ×Ｂ／Ｃの場合には相乗的相互作用が発生すると予想される

処置期間中の体重変化は、化合物Ａの単剤で処置された群を除き、すべての群内で統計的に有意である（ｐ＜０．０５、ペアードｔ−検定）。組合せ化学療法群での体重変化は、ビヒクル群での体重変化と有意に相違している（一元ＡＮＯＶＡ、事後ダネット検定）。

第２の実験
第２の有効性実験では、腫瘍モデルを第１の実験のように構成し、同一処置群を使用し、１２．５ｍｇ／ｋｇの用量での化合物Ａの単剤で処置される１つの群に、ＡＵＹ９２２（５０ｍｇ／ｋｇ、静脈内で週２回）と組み合わせた同一用量の化合物Ａで処置されるもう１つの群を加える。

単剤としてのＡＵＹ９２２は、４．７％のＴ／Ｃで統計的に有意な抗腫瘍効果をもたらす（ｐ＜０．０５、ＡＮＯＶＡ）。単剤として、化合物Ａは、低用量（１２．５ｍｇ／ｋｇ、Ｔ／Ｃ＝３０．３％）で統計的に有意な抗腫瘍効果をもたらさないが、効果は、高用量（５０ｍｇ／ｋｇ）で有意になり、１．２％の退縮をもたらす（ｐ＜０．０５、ＡＮＯＶＡ）。ＡＵＹ９２２（５０ｍｇ／ｋｇ）と組み合わせると、低用量（１２．５ｍｇ／ｋｇ）および高用量（５０ｍｇ／ｋｇ）の化合物Ａは、それぞれ１７．５％および５９．６％の退縮で統計的に有意な抗腫瘍効果をもたらす。組合せ群を単剤処置と比較すると、１２．５ｍｇ／ｋｇで投与される化合物Ａと組合せ群との間に、有意差が見出される。

ビヒクル対照は、３７８．５±５７．５の平均腫瘍体積変化（ｍｍ^３±ＳＥＭ）をもたらす。単剤として使用したＡＵＹ９２２（５０ｍｇ／ｋｇ）は、１７．９±１１．０の平均腫瘍体積変化をもたらす。単剤として使用した化合物Ａは、１２．５ｍｇ／ｋｇで１１４．９±４３．９（統計的に有意でない）および５０ｍｇ／ｋｇで−２．３±１５．２の平均腫瘍体積変化（ｍｍ^３±ＳＥＭ）をもたらす。ＡＵＹ９２２と化合物Ａ（１２．５ｍｇ／ｋｇ）との組合せは、−３４．８±１９．５の平均腫瘍体積変化（ｍｍ^３±ＳＥＭ）をもたらす。ＡＵＹ９２２と化合物Ａ（５０ｍｇ／ｋｇ）との組合せは、−１１６．２±８．３の平均腫瘍体積変化（ｍｍ^３±ＳＥＭ）をもたらす。さらに、高用量の組合せ群（５０ｍｇ／ｋｇで投与される化合物Ａ）は、双方の単剤と有意に異なる（ｐ＜０．０５、ＡＮＯＶＡ）。

Clarkeが発表している方法を用いる化合物相互作用解析（式の詳細については表３−１参照）を実施すると、双方の組合せにおいて次のような相乗的相互作用が発生することがわかる：
− １２．５ｍｇ／ｋｇで投与された化合物Ａに関するＣｌａｒｋｅ組合せ指標（Clarke combination index）＝−０．１１、
− ５０ｍｇ／ｋｇで投与された化合物Ａに関する組合せ指標＝−０．３１。

処置期間中の体重変化は、ビヒクル群、化合物Ａ（１２．５ｍｇ／ｋｇ）での処置群、および組合せ群（５０ｍｇ／ｋｇで投与される化合物Ａとの）内で統計的に有意である（ｐ＜０．０５、ペアードｔ−検定）。化合物Ａ（５０ｍｇ／ｋｇ）で処置した群、および組合せ群での体重変化は、ビヒクル群での体重変化と有意に異なる（一元ＡＮＯＶＡ、事後ダネット検定）。

第３の実験
第３の有効性実験では、腫瘍モデルを第２の実験のように構成する。

この実験で、ＡＵＹ９２２は単剤として投与され、１４％のＴ／Ｃの統計的に有意な抗腫瘍効果をもたらす（ｐ＜０．０５、ＡＮＯＶＡ）。化合物Ａは、双方の用量（１２．５ｍｇ／ｋｇおよび５０ｍｇ／ｋｇ、１日１回経口）で、それぞれ３７．８％のＴ／Ｃおよび６．４％の退縮で統計的に有意な抗腫瘍効果をもたらす（ｐ＜０．０５、ＡＮＯＶＡ）。また、それぞれ１２．５ｍｇ／ｋｇおよび５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２と一緒に投与した２つの組合せ群において、３７．４および６３．１％の退縮で、有意な効果が得られる。

ビヒクル対照は、１９５．４±２２．９の平均腫瘍体積変化（ｍｍ^３±ＳＥＭ）をもたらす。単剤として使用されたＡＵＹ９２２（５０ｍｇ／ｋｇ）は、２７．４±１０．２の平均腫瘍体積変化をもたらす。単剤として使用された化合物Ａは、１２．５ｍｇ／ｋｇで７３．９±１７．６、および５０ｍｇ／ｋｇで−１３．３±６．７の平均腫瘍体積変化（ｍｍ^３±ＳＥＭ）をもたらす。ＡＵＹ９２２と化合物Ａ（１２．５ｍｇ／ｋｇ）との組合せは、７８．４±７．４の平均腫瘍体積変化（ｍｍ^３±ＳＥＭ）をもたらす。ＡＵＹ９２２と化合物Ａ（５０ｍｇ／ｋｇ）との組合せは、−１３２．０±７．９の平均腫瘍体積変化（ｍｍ^３±ＳＥＭ）をもたらす。組合せ群は、双方とも、また、それぞれの単剤の双方と有意に異なる（ｐ＜０．０５、ＡＮＯＶＡ、事後テューキー検定）が、単剤は、互いに相違しなかった。

Clarkeが１９９７年に発表した方法を用いる化合物相互作用解析を実施すると、双方の組合せにおいて次のように相乗的相互作用を示す：
− １２．５ｍｇ／ｋｇで投与された化合物Ａに関するＣｌａｒｋｅ組合せ指標＝−０．４５、
− ５０ｍｇ／ｋｇで投与された化合物Ａに関する組合せ指標＝−０．６７。

処置期間中の体重変化は、ビヒクル群、化合物Ａ（１２．５ｍｇ／ｋｇ）での処置群、および組合せ群（５０ｍｇ／ｋｇで投与される化合物Ａとの）内で統計的に有意である（ｐ＜０．０５、ペアードｔ−検定）。組合せでの化学療法群、および化合物Ａ（５０ｍｇ／ｋｇ）で処置された群の双方での体重変化は、ビヒクル群での体重変化と有意に異なる（一元ＡＮＯＶＡ、事後ダネット検定）。

実施例４ 雌性無胸腺ヌードマウスにおけるＫＹＳＥ−７０食道扁平上皮細胞癌異種移植片モデルでの化合物Ａの効果
実験は、処置開始時点でほぼ１０〜１２週齢の雌性Ｈｓｄ無胸腺ヌード−ｎｕＣＰＢマウスで実施される。ＫＹＳＥ−７０腫瘍は、食道扁平上皮細胞癌細胞である１００μＬの細胞懸濁液中の７．５×１０^６個のＫＹＳＥ−７０細胞を２３ゲージの注射針を用いて、マウスの右側腹部に皮下で注入することによって確立される。移植の１０日後に腫瘍に達した。移植のほぼ１０日後に腫瘍が確立され、約１５６ｍｍ^３（最小８６ｍｍ^３、最大２１８ｍｍ^３）に達したら、４８匹の動物を選択し、６つの処置群（ｎ＝８）に無作為化する。

プラセボ対照は、経口による１日１回の送達用に、２５０μＬのＮＭＰ、７５０μＬのＰＥＧ３００、５００μＬのソルトールＨＳ１５、および１０００μＬの水の１０ｍＬ／ｋｇとして（プラセボ１）、および週２回の静脈内送達用に２．５ｍＬのグルコースの１０ｍＬ／ｋｇとして（プラセボ２）製剤化される。

化合物Ａは、ＮＭＰ／ＰＥＧ３００／ソルトールＨＳ１５／水（１０：３０：２０：４０％ｖ／ｖ）中で製剤化される。化合物を、まずＮＭＰに完全に溶解し、動物に投与する直前に水を添加する。化合物Ａまたはビヒクルを、１０ｍＬ／ｋｇの量で経口投与する。この懸濁液は、室温で１週間安定である。

ＡＵＹ９２２メシル酸塩は、Ｄ５水（水中、５％グルコース）中で製剤化される。ＡＵＹ９２２の用量は、すべて、遊離塩基当量を指す。ＡＵＹ９２２は、週２回、１０ｍＬ／ｋｇの量で静脈内投与される。

マウスの各群を次の処置のうちの１つで２４日間処置する：（ａ）プラセボ１およびプラセボ２（群１）、（ｂ）１日１回の経口での１２．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ（群２）、（ｃ）１日１回の経口での５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ（群３）、（ｄ）週２回の静脈内での５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２（群４）、（ｅ）１日１回の経口での１２．５ｍｇ／ｋｇ化合物Ａと週２回の静脈内での５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２との組合せ（群５）、または（ｆ）１日１回の経口での５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａと週２回の静脈内での５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２との組合せ（群６）。

抗腫瘍活性は、式：（処置された動物の平均腫瘍体積変化／対照動物の平均腫瘍体積変化）×１００により求められるＴ／Ｃ％として表現される。

上記の実験プロトコールに従って、次の抗腫瘍活性データが得られる：

実施例５ 雌性無胸腺ヌードマウスにおけるＡ３７５黒色腫細胞癌異種移植片モデルでの化合物Ａの効果
実験は、体重がほぼ２０〜２５ｇのＨａｒｌａｎ雌性Ｈｓｄ：Ｎｐａ無胸腺ヌードマウスで実施される。Ａ３７５腫瘍は、黒色腫細胞である４×１０^６個のＡ３７５細胞をマウスの背部に皮下で注入することによって確立される。移植の１０日後に腫瘍に達した。移植のほぼ３０日後に、３２匹の動物を選択し、４つの処置群（ｎ＝８）に無作為化する。

プラセボ対照は、経口による１日１回の送達用に１％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）として（プラセボ１）、および週２回の静脈内または腹腔内送達用に２．５ｍＬのグルコースの１０ｍＬ／ｋｇとして（プラセボ２）製剤化される。

化合物Ａは、５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−８０を含有する１％（ｗ／ｖ）カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）に溶解することによって、化合物Ａの４０ｍｇ／ｋｇの用量で製剤化される。化合物Ａまたはビヒクルは、１日１回、１０ｍｇ／ｍＬの量で経口投与される。

ＡＵＹ９２２は、Ｄ５水（水中、５％グルコース）中で製剤化される。ＡＵＹ９２２の用量は、すべて、遊離塩基当量を指す。ＡＵＹ９２２は、週２回、１０ｍｇ／ｍＬの量、および５０ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与される。

マウスの各群を次の処置のうちの１つで１１日間処置する：（ａ）プラセボ１およびプラセボ２（群１）、（ｂ）１日１回の経口での４０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ（群２）、（ｃ）週２回の静脈内での５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２（群３）、（ｅ）１日１回の経口での４０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａと週２回の静脈内での５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２との組合せ（群４）。

適用可能であれば、データは、平均±ＳＥＭとして示される。すべての試験で、有意性の水準は、ｐ＜０．０５で設定される。処置群間の腫瘍体積比較は、順位に関するクラスカル・ウォリス一元分散分析またはテューキー検定を使用して行われる。

前記の実験手順に従って、処置されたマウスの平均腫瘍断片増殖および平均体重変化を図９に示す。

実施例６ 雌性無胸腺ヌードマウスにおけるＡ３７５黒色腫細胞癌異種移植片モデルでの化合物Ａの効果
実験は、体重がほぼ２０〜２５ｇのＨａｒｌａｎ雌性Ｈｓｄ：Ｎｐａ無胸腺ヌードマウスで実施される。Ａ３７５腫瘍は、黒色腫細胞である４×１０^６個のＡ３７５細胞をマウスの背部に皮下で注入することによって確立される。移植の１０日後に腫瘍に達した。移植のほぼ３０日後に、３２匹の動物を選択し、４つの処置群（ｎ＝８）に無作為化する。

プラセボ対照は、経口による１日１回の送達用に１％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）として（プラセボ１）、および週２回の静脈内または腹腔内送達用に２．５ｍＬのグルコースの１０ｍＬ／ｋｇとして（プラセボ２）製剤化される。

化合物Ａは、５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−８０を含有する１％（ｗ／ｖ）カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）に溶解することによって、化合物Ａの４０ｍｇ／ｋｇの用量で製剤化される。化合物Ａまたはビヒクルは、１日１回、１０ｍｇ／ｍＬの量で経口投与される。

ＡＵＹ９２２は、Ｄ５水（水中、５％グルコース）中で製剤化される。ＡＵＹ９２２の用量は、すべて、遊離塩基当量を指す。ＡＵＹ９２２は、週２回、１０ｍｇ／ｍＬの量、および５０ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与される。

マウスの各群を次の処置のうちの１つで１１日間処置する：（ａ）プラセボ１およびプラセボ２（群１）、（ｂ）１日１回の経口での４０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ（群２）、（ｃ）週２回の静脈内での５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２（群３）、（ｄ）１日１回の経口での４０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａと週２回の静脈内での５０ｍｇ／ｋｇのＡＵＹ９２２との組合せ（群４）。

適用可能であれば、データは、平均±ＳＥＭとして示される。すべての試験で、有意性の水準は、ｐ＜０．０５で設定される。処置群間の腫瘍体積比較は、順位に関するクラスカル・ウォリス一元分散分析またはテューキー検定を使用して行われる。

前記の実験手順に従って、処置されたマウスの平均腫瘍断片増殖および平均体重変化を図９に示す。

Claims (15)

1. （ａ）式（Ｉ）の化合物
   

   

   ［式中、
   Ａは、
   

   

   からなる群から選択されるヘテロアリールを表し、
   Ｒ^１は、次の置換基：（１）非置換または置換された、好ましくは置換されたＣ_１〜Ｃ_７−アルキル、ここで、前記置換基は、１つまたは複数の、好ましくは１〜９個の次の部分：重水素、フルオロ、または１〜２個の次の部分Ｃ_３〜Ｃ_５−シクロアルキルから独立に選択される；（２）必要に応じて置換されたＣ_３〜Ｃ_５−シクロアルキル、ここで、前記置換基は、１つまたは複数の、好ましくは１〜４個の次の部分：重水素、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル（好ましくはメチル）、フルオロ、シアノ、アミノカルボニルから独立に選択される；（３）必要に応じて置換されたフェニル、ここで、前記置換基は、１つまたは複数の、好ましくは１〜２個の次の部分：重水素、ハロ、シアノ、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキルアミノ、ジ（Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル）アミノ、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキルアミノカルボニル、ジ（Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル）アミノカルボニル、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルコキシから独立に選択される；（４）必要に応じてモノまたはジ置換されたアミン；ここで、前記置換基は、次の部分：重水素、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル（これは、非置換であるか、重水素、フルオロ、クロロ、ヒドロキシの群から選択される１つまたは複数の置換基で置換されている）、フェニルスルホニル（これは、非置換であるか、１つまたは複数の、好ましくは１つのＣ_１〜Ｃ_７−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_７−アルコキシ、ジ（Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル）アミノ−Ｃ_１〜Ｃ_７−アルコキシで置換されている）から独立に選択される；（５）置換されたスルホニル；ここで、前記置換基は、次の部分：Ｃ_１〜Ｃ_７−アルキル（これは、非置換であるか、重水素、フルオロの群から選択される１つまたは複数の置換基で置換されている）、ピロリジノ（これは、非置換であるか、重水素、ヒドロキシ、オキソの群から選択される１つまたは複数の置換基、とりわけ１つのオキソで置換されている）から選択される；（６）フルオロ、クロロ；
   のうちの１つを表し、
   Ｒ^２は、水素を表し、
   Ｒ^３は、（１）水素、（２）フルオロ、クロロ、（３）必要に応じて置換されたメチル、ここで、前記置換基は、１つまたは複数の、好ましくは１〜３個の次の部分：重水素、フルオロ、クロロ、ジメチルアミノから独立に選択される、を表す］
   であって、、
   ただし、（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛５−［２−（ｔｅｒｔ−ブチル）−ピリミジン−４−イル］−４−メチル−チアゾール−２−イル｝−アミド）を除く、化合物
   またはその医薬的に許容される塩、および
   （ｂ）少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤またはその医薬的に許容される塩
   を含む医薬的な組合せ。
2. 薬剤（ａ）が、（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「化合物Ａ」）またはその医薬的に許容される塩から選択される、請求項１に記載の医薬的な組合せ。
3. 薬剤（ｂ）が、ゲルダナマイシン誘導体であるタネスピマイシン（１７−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン）（ＫＯＳ−９５３および１７−ＡＡＧとしても知られている）；ラディシコール；６−クロロ−９−（４−メトキシ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−アミン・メタンスルホン酸塩（ＣＮＦ２０２４としても知られている）；ＩＰＩ５０４；ＳＮＸ５４２２；５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−４−（４−モルホリン−４−イルメチル−フェニル）−イソキサゾール−３−カルボン酸エチルアミド（ＡＵＹ９２２）；および（Ｒ）−２−アミノ−７−［４−フルオロ−２−（６−メトキシ−ピリジン−２−イル）−フェニル］−４−メチル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−５−オン（ＨＳＰ９９０）またはその医薬的に許容される塩から選択される、請求項１に記載の医薬的な組合せ。
4. 増殖性疾患の治療のための、同時、個別または逐次使用のための、請求項１に記載の医薬的な組合せ。
5. 増殖性疾患が、胃、肺および気管支、前立腺、乳房、膵臓、結腸、直腸、甲状腺、肝臓および肝内胆管、腎臓および腎盂、膀胱、子宮体、子宮頸部、卵巣、多発性骨髄腫、食道、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ球性白血病、骨髄性白血病、脳、口腔および咽頭、喉頭、小腸、非ホジキンリンパ腫、黒色腫、または絨毛結腸アデノーマのがんである、請求項４に記載の医薬的な組合せ。
6. 請求項１に記載の式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩、および少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤またはその医薬的に許容される塩を含む、増殖性疾患の治療に使用するための医薬組成物。
7. 増殖性疾患を治療するための医薬を調製するための、請求項１に記載の医薬的な組合せの使用。
8. 増殖性疾患が、胃、肺および気管支、前立腺、乳房、膵臓、結腸および直腸、甲状腺、肝臓および肝内胆管、腎臓および腎盂、膀胱、子宮体、子宮頸部、卵巣、多発性骨髄腫、食道、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ球性白血病、骨髄性白血病、脳、口腔および咽頭、喉頭、小腸、非ホジキンリンパ腫、黒色腫、および絨毛結腸アデノーマである、請求項７に記載の使用。
9. 対象に治療有効量の請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩、および少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤またはその医薬的に許容される塩を投与する工程を含む、治療を必要とする対象における増殖性疾患の治療方法。
10. 増殖性疾患が、胃、肺および気管支、前立腺、乳房、膵臓、結腸および直腸、甲状腺、肝臓および肝内胆管、腎臓および腎盂、膀胱、子宮体、子宮頸部、卵巣、多発性骨髄腫、食道、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ球性白血病、骨髄性白血病、脳、口腔および咽頭、喉頭、小腸、非ホジキンリンパ腫、黒色腫、および絨毛結腸アデノーマである、請求項９に記載の増殖性疾患の治療方法。
11. 式（Ｉ）の化合物が、（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（化合物Ａ）から選択される、請求項９に記載の増殖性疾患の治療方法。
12. Ｈｓｐ９０阻害剤が、ゲルダナマイシン誘導体であるタネスピマイシン（１７−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン）（ＫＯＳ−９５３および１７−ＡＡＧとしても知られている）；ラディシコール；６−クロロ−９−（４−メトキシ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−アミン・メタンスルホン酸塩（ＣＮＦ２０２４としても知られている）；ＩＰＩ５０４；ＳＮＸ５４２２；５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−４−（４−モルホリン−４−イルメチル−フェニル）−イソキサゾール−３−カルボン酸エチルアミド（ＡＵＹ９２２）；および（Ｒ）−２−アミノ−７−［４−フルオロ−２−（６−メトキシ−ピリジン−２−イル）−フェニル］−４−メチル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−５−オン（ＨＳＰ９９０）から選択される、請求項９に記載の増殖性疾患の治療方法。
13. 式（Ｉ）の化合物およびＨｓｐ９０阻害剤が、単一の医薬組成物として一緒に投与される、請求項９に記載の方法。
14. 式（Ｉ）の化合物およびＨｓｐ９０阻害剤が、別個の組成物として、または逐次に投与される、請求項９に記載の方法。
15. 請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩、および少なくとも１種のＨｓｐ９０阻害剤またはその医薬的に許容される塩を併用投与することによって増殖性疾患を治療するための使用法を提供する添付文書またはラベルを含むキット。
    

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