JP2014524740A - 構成的活性型aba受容体変異体 - Google Patents
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Abstract
Description
本特許出願は、2011年7月1日出願の米国仮特許出願第61/503,816号および2011年7月27日出願の米国仮特許出願第61/512,280号に基づく優先権の恩典を主張するものであり、これらの各々の内容は、事実上、参照により本明細書に組み入れられる。
本発明は、全米科学財団によって授与されたグラント番号IOS0820508の下で政府の支援を受けて作成された。政府は本発明における一定の権利を有する。
アブシジン酸(ABA)は、非生物的ストレス応答に関連したシグナル伝達を制御する植物ホルモンである(Cutler et al.,2010)。ABAシグナリング経路は、多数のアプローチを介して、植物ストレス応答およびそれに関連した収量形質を改善するために活用されている(Yang et al.,2010)。ABAの植物への直接適用は、水使用効率を改善する(Raedmacher et al.,1987);このため、ABAアゴニスト(Park et al.,2009;Melcher et al.,2010)は、作物収量を改善するために有益であり得るため、そのような分子の発見が、ますます注目を集めている(Notman et al.,2009)。ABA経路の活性化のための補足的なアプローチは、遺伝学的方法を介して、植物のABAに対する感受性を増加させることを含む。例えば、植物のABA感受性を増加させるファルネシル転移酵素βサブユニット遺伝子の条件的アンチセンスは、キャノーラおよびアラビドプシス(Arabidopsis)の両方において、中程度の干ばつの下で、収量を改善する(Wang et al.,2005)。従って、収量に寄与する形質を改善するためのABAシグナリングの操作は、現在よく確立されている。
(例えば、本明細書に記載される)本発明の変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたプロモーターを含む発現カセットを複数の植物へ導入する工程;および
前記複数の植物から、前記ポリヌクレオチドを発現する植物を選択する工程
を含む。
野生型PYR/PYL受容体ポリペプチドと比較してリガンド結合ポケットおよび/または2型プロテインホスファターゼ(PP2C)結合界面における1種以上のアミノ酸置換を含み、アブシジン酸の非存在下でPP2Cに結合する本発明の変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたプロモーターを含む発現カセットを複数の植物へ導入する工程;および
前記複数の植物から、前記ポリヌクレオチドを発現する植物を選択する工程
を含む。
「PYR/PYL受容体ポリペプチド」という用語は、野生型においては、アブシジン酸(ABA)およびABAアナログのシグナリングを媒介する、ポリケチドシクラーゼドメイン2(PF10604)、ポリケチドシクラーゼドメイン1(PF03364)、およびBetVIドメイン(PF03364)のうちの1種以上または全部の存在を一部分特徴とするタンパク質をさす。多様なPYR/PYL受容体ポリペプチド配列が、当技術分野において公知である。いくつかの態様において、PYR/PYL受容体ポリペプチドは、PYR1(SEQ ID NO:1)、PYL1(SEQ ID NO:2)、PYL2(SEQ ID NO:3)、PYL3(SEQ ID NO:4)、PYL4(SEQ ID NO:5)、PYL5(SEQ ID NO:6)、PYL6(SEQ ID NO:7)、PYL7(SEQ ID NO:8)、PYL8(SEQ ID NO:9)、PYL9(SEQ ID NO:10)、PYL10(SEQ ID NO:11)、PYL11(SEQ ID NO:12)、PYL12(SEQ ID NO:13)、もしくはPYL13(SEQ ID NO:14)、またはSEQ ID NO:15〜155のいずれかと実質的に同一であるポリペプチドを含む。
I. 序論
本発明は、PYR/PYL受容体ポリペプチドにおける変異の組み合わせが、構成的活性型のPYR/PYL受容体をもたらすという発見に一部分基づく。PYR/PYL受容体は、配列類似性、ABA感受性、オリゴマー状態、および基底活性化のレベルに基づき、三つのクラスに分類され得る。PYR1、PYL1、PYL2、PYL3、およびPYL4は、溶液中で二量体であり、低い基底活性化を示し、他のPYLと比較して、完全なPP2C阻害を誘発するためにより高いレベルのABAを要求する。PYL5、PYL6、PYL7、PYL8、およびPYL9は、溶液中でモノマーであり、PYR1〜PYL4と比較して、PP2C活性を阻害するためにより低いABA濃度を要求し、より高い基底活性を保有する。PYL10、PYL11、PYL12、およびPYL13も、溶液中でモノマーであるが、PYR1〜PYL9よりはるかに高い基底活性化を示す。2型プロテインホスファターゼ(PP2C)との高親和性結合を可能にする型へと受容体を安定化するためには、アブシジン酸(ABA)が必要とされるため、二量体PYR/PYL受容体タンパク質は、ABAの非存在下では、PP2C活性を実質的に阻害しない。
一つの局面において、本発明は、リガンド結合ポケットおよび/または2型プロテインホスファターゼ(PP2C)結合界面における1種以上のアミノ酸置換を含み、アブシジン酸の非存在下でPP2Cに結合するPYR/PYL受容体ポリペプチド、ならびに1種以上のアミノ酸置換を含み、アブシジン酸の非存在下でPP2Cに結合するPYR/PYL受容体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド;1種以上のアミノ酸置換を含み、アブシジン酸の非存在下でPP2Cに結合するPYR/PYL受容体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む発現カセットおよび発現ベクター;1種以上のアミノ酸置換を含み、アブシジン酸の非存在下でPP2Cに結合するPYR/PYL受容体ポリペプチドを含む植物;1種以上のアミノ酸置換を含み、アブシジン酸の非存在下でPP2Cに結合するPYR/PYL受容体ポリペプチドを含む植物を作成する方法を提供する。
PYR/PYL受容体タンパク質は、「ゲート」および「ラッチ」と呼ばれる2個のループが隣接する保存されたSTARTドメインリガンド結合ポケットを有する(Melcher,K.et al.,Nature 462(2009))。ABAは、リガンド結合ポケットでPYR/PYL受容体タンパク質に結合し、ABA結合は、リガンド結合ポケット内にABAを封じ込めるため、ループの閉鎖を誘導する。PYR/PYL受容体ポリペプチドのリガンド結合ポケットは、リガンドがPYR/PYL受容体に結合している時、PYR/PYLリガンド(例えば、ABA)の直近(例えば、約5Å以内)にあるアミノ酸残基またはリガンドと接触する水分子を含む。実施例セクションの表1は、PYR1のリガンド結合ポケットを構成する残基をリストしたものであり;PYR1リガンド結合ポケットを構成する残基は全部で25個存在する。リガンド結合ポケットの残基も、他のPYR/PYLファミリーメンバーの間で高度に保存されている。
PYR/PYL受容体タンパク質は、2型プロテインホスファターゼ(PP2C)に直接結合し、従って、PP2C結合界面も含有している。PYR/PYL受容体ポリペプチドのPP2C結合界面は、PP2CとPYR/PYL受容体とABAとが三元複合体として全て結合している時、PP2Cの直近(例えば、約5Å以内)にあるアミノ酸残基を含む。実施例セクションの表1は、PYR1のPP2C結合界面を構成する残基をリストしたものであり;PYR1 PP2C結合界面を構成する残基は全部で25個存在する。PP2C結合界面の残基も、他のPYR/PYLファミリーメンバーの間で高度に保存されている。
いくつかの態様において、本発明の変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドは、リガンド結合ポケットおよびPP2C結合界面の各々における1種以上のアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、リガンドポケットおよびPP2C結合界面の各々における1種以上のアミノ酸置換は、SEQ ID NO:1に示されるPYR1における位置H60、V83、I84、L87、A89、M158、F159、T162、L166、およびK170に相当するH60P/G/R/A/W/I/K/V/M、V83F/L/P、I84Q/E/P/H/K、L87F、A89W、M158T/C/V/I、F159V/A、T162F、L166Y/F、およびK170Wより選択される。いくつかの態様において、変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドは、SEQ ID NO:1に示されるPYR1における位置H60、V83、I84、L87、A89、M158、F159、T162、L166、およびK170に相当するH60P/G/R/A/W/I/K/V/M、V83F/L/P、I84Q/E/P/H/K、L87F、A89W、M158T/C/V/I、F159V/A、T162F、L166Y/F、およびK170Wより選択される2種、3種、4種、またはそれ以上のアミノ酸置換を含む。本明細書に記載された変異のいずれかを、SEQ ID NO:1〜155のいずれかのポリペプチドまたはSEQ ID NO:1〜155のいずれかと実質的に同一のポリペプチドにおいて作成することができる。リガンド結合ポケットおよびPP2C結合界面の残基は、PYR/PYLファミリーメンバーの間で高度に保存されており、従って、当業者は、PYR1について本明細書に記載されたものと類似のアミノ酸置換を、PYR1以外のPYR/PYL受容体において作成し得ることを認識するであろう。
もう一つの局面において、本発明は、リガンド結合ポケットおよび/または2型プロテインホスファターゼ(PP2C)結合界面における1種以上のアミノ酸置換を含み、アブシジン酸の非存在下でPP2Cに結合するPYR/PYL受容体ポリペプチドを作成する方法を提供する。いくつかの態様において、方法は、野生型PYR/PYL受容体を変異誘発する工程、および変異誘発されたPYR/PYL受容体がアブシジン酸の非存在下でホスファターゼアッセイにおいてPP2Cの活性を有意に阻害するか否かを決定する工程を含む。
いくつかの態様において、変異型PYR/PYL受容体がABAの非存在下で活性化されているか否かを決定するため、変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドをスクリーニングする。いくつかの態様において、変異型PYR/PYL受容体がABAの非存在下で活性化されているか否かは、変異型受容体がABAの非存在下でホスファターゼアッセイにおいてPP2Cの活性を有意に阻害するか否かを測定することにより決定される。いくつかの態様において、変異型受容体が、ABAの非存在下での野生型PYR/PYL受容体と比較して、ABAの非存在下で、少なくとも約10%、少なくとも約20%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、またはそれ以上、PP2Cの活性を阻害する場合、その変異型受容体は、ABAの非存在下で活性化されている(即ち、構成的活性型である)と言われる。いくつかの態様において、受容体およびPP2Cが約1:1、約1:2、約1:3、または約1:4の受容体/PP2Cモル比で存在する時、変異型受容体が、ABAの非存在下での野生型PYR/PYL受容体と比較して、ABAの非存在下で、少なくとも約10%、少なくとも約20%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、またはそれ以上、PP2Cの活性を阻害する場合、その変異型受容体は、ABAの非存在下で活性化されている(即ち、構成的活性型である)。
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが入手された後は、異種プロモーターによって指図される、トランスジェニック植物における変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドの発現のための発現カセットを調製するため、それを使用することができる。変異型PYR/PYLポリヌクレオチドの発現の増加は、例えば、PYR/PYL受容体を選択的に活性化し、従って、ストレス耐性を増強する植物を作製するために有用である。
全ての形質転換された細胞または組織、例えば、再生された植物のものにおいて変異型PYR/PYL核酸の発現を指図する断片を、使用することができる。「構成的制御要素」という用語は、構成的制御要素が発現される細胞型または組織型とは比較的無関係な発現レベルを、機能的に連結された核酸分子に付与する制御要素を意味する。植物において発現される構成的制御要素は、一般に、極めて多数の細胞型および組織型において広く発現されている。生理学的条件下で発現を連続的に駆動するプロモーターは、「構成的」プロモーターと呼ばれ、大部分の環境条件および発達または細胞分化の状態の下で活性である。
あるいは、植物プロモーターは、変化する環境条件または発達条件の影響下で変異型PYR/PYLポリヌクレオチドの発現を指図するものであってもよい。誘導性プロモーターによる転写に影響する環境条件の例には、嫌気条件、高温、干ばつ、または光の存在が含まれる。そのようなプロモーターは、本明細書において、「誘導性」プロモーターと呼ばれる。いくつかの態様において、誘導性プロモーターは、干ばつ、酷寒、および高塩を含むが、これらに限定されない、1種以上の環境的ストレス要因によって誘導されるものである。例えば、本発明は、トウモロコシの干ばつ誘導性プロモーター(例えば、トウモロコシrab17干ばつ誘導性プロモーター(Vilardell et al.(1991)Plant Mol.Biol.17:985-993;Vilardell et al.(1994)Plant Mol.Biol.24:561-569))のような干ばつ特異的プロモーター;あるいは、ジャガイモ由来(Kirch(1997)Plant Mol.Biol.33:897-909)またはアラビドプシス由来(例えば、rd29Aプロモーター(Kasuga et al.(1999)Nature Biotechnology 17:287-291))の寒冷、干ばつ、高塩誘導性プロモーターを組み入れることができる。その他の環境的ストレス誘導性プロモーターには、以下の遺伝子に由来するプロモーターが含まれる:イネのRab21、Wsi18、Lea3、Uge1、Dip1、およびR1G1B(Yi et al.(2010)Planta 232:743-754)。
あるいは、植物プロモーターは、特定の組織における変異型PYR/PYLポリヌクレオチドの発現を指図するものであってもよい(組織特異的プロモーター)。組織特異的プロモーターとは、栄養組織または生殖組織のような、植物発達の間の特定の時点における特定の細胞または組織においてのみ活性である転写調節要素である。
もう一つの局面において、本発明は、植物において本明細書に記載される構成的活性型PYR/PYL受容体タンパク質を発現させるための組換え発現カセットを含むトランスジェニック植物を提供する。いくつかの態様において、そのトランスジェニック植物の種以外の種に由来するポリヌクレオチドの完全配列または部分配列を含有しているトランスジェニック植物が生成される。トランスジェニック植物には、発現カセットが導入されている植物または植物細胞のみならず、発現カセットが染色体に安定的に組み込まれた子孫を含む、発現カセットを含有しているそのような植物または植物細胞の子孫も包含されることが認識されるべきである。
PYR/PYL受容体とPP2Cとの間の相互作用を改善するために変異させることができる部位を明らかにするため、本発明者らは、通常、ABAと接触し(即ち、PYR1のリガンド結合ポケット内にあり)かつ/またはPP2Cと接触する(即ち、PP2C結合界面内にある)PYR1の39残基に対して飽和変異誘発を実施した。これらの機能的に重要な位置において可能な741種の単一変異体バリアントを全て構築し、次いで、酵母ツーハイブリッドに基づくアッセイを使用してPP2C相互作用についてアッセイした。飽和変異誘発は、所定の部位における全ての可能なアミノ酸バリアントの構築(即ち、各部位について19種全ての置換変異体の生成)を含む方法である。PYR1は、PYR/PYL受容体ファミリーのよく特徴決定されているメンバーであり、変異誘発研究を案内する広範な構造データを有するため、本発明者らは、PYR1に変異誘発の努力を集中させたが、標的とされた部位は、PYR/PYL受容体の間での高度の配列保存を示すことに注意するべきである(図1)。さらに、低い基底活性のため、野生型PYR1は、適切な酵母細胞をABAの存在下で増殖させた時にのみPP2C HAB1(またはその他のPP2C)に結合するため、PYR1は、酵母に基づくツーハイブリッドアッセイを使用してその活性化状態を研究することが可能であるため、機能研究のために好適である。従って、このアッセイは、ABA添加の非存在下でレポーター遺伝子発現を刺激するものとして、PYR1を活性化する変異を同定することを可能にする。
受容体活性化をさらに増強するために、活性化変異を組み合わせることが可能であることを確立するため、本発明者らは、Quickchange Lightening multi-site directed mutagenesisキット(Agilent;USA)を使用して、PYR1CA3と呼ばれる三重変異体(H60P、V83F、F159V)およびPYR1CA4と呼ばれる四重変異体(H60P、V83F、F159V、M158I)を構築した。変異体クローンの配列をバリデートし、組換えタンパク質を大腸菌において産生させ、上記のようなPP2Cアッセイにおいて利用した。図3に示されるように、三重変異体および四重変異体の両方が、野生型PYR1と比べて基底PYR1活性を劇的に増加させた。重要なことには、構成的活性型(CA)対立遺伝子は、HAB1に加えて、ABI1およびABI2とも相互作用する。このことは、それらの構成的活性が、ABAによって制御されるホスファターゼの群の中の特定のPP2Cに制限されないことを証明している。これは、増強された基底活性化レベルを有する変異体タンパク質を作出するために、単一活性化変異を組み合わせることが可能であることを証明している。
既に記載されたように、PYR1を活性化するために変異させることができる部位は、PYR/PYL受容体ファミリーにおいて高度に保存されており(図1)、従って、PYR1において同定された活性化変異を、他の受容体を活性化するために使用することが可能であると予想される。この仮説を試験するため、実施例2に記載されたPYR1の三重変異体または四重変異体と相同の変異を、PYL2へ導入し、変異体PYL2CA3(H65P、V87F、F165V)およびPYL2CA4(H65P、V87F、M164I、F165V)を生成した。Lightening multi-site directed mutagenesisキットを使用して、PYL9にも変異を導入し、PYL9CA4変異体(V85F、Y160I、F161V)を作出した。上記実施例2に記載されたようにして、組換えタンパク質を作製した。図4に示されるように、変異体タンパク質は、野生型のPYL2またはPYL9と比較して、ABAの非存在下で高度に活性化されており、このことから、活性化変異をABA受容体ファミリーの他の受容体へ移植することが可能であることが証明された。PYR1 CA対立遺伝子により観察されたように、PYL2およびPYL9のCA対立遺伝子は、複数のPP2Cに対して活性である(図4)。
本発明者らの研究によって同定された活性化変異は、植物において発現された時、基底レベルより高くABAシグナリングを増加させると予想される。そのような活性化は、構成的活性型または対照野生型の受容体タンパク質を発現するトランスジェニック植物における、ABAによって制御される遺伝子の発現の分析、およびABAによって媒介される生理学的応答の特徴決定を含む、多数の方法によって定量化され得る。従って、本発明者らは、野生型コロンビア背景またはaba2-1変異体背景のいずれかにおいて、野生型PYL2またはPYL2CA3を発現する2セットのトランスジェニック植物を作成した。aba2変異体には、ABA生合成のために必要な酵素ABAアルデヒドオキシダーゼが欠損している。aba2変異体は、立ち枯れ、複数の非生物的ストレスに対する増加した感受性、および非休眠種子を含む、ABAレベルの低下に起因する多数の表現型を保有している。さらに、その種子発芽は、発芽のためにジベレリン(GA)を要求する野生型と異なり、GA生合成を要求しない。その結果として、aba2変異体は、(パクロブトラゾールのような)GA生合成阻害剤の効果に対して抵抗性である。PYL2CA3がABAシグナリングを効率的に活性化するのであれば、それは、aba2変異体におけるABA枯渇の効果を抑制することができ、野生型株およびaba2株の両方において、ABAによって制御される遺伝子の発現に影響することができるはずである。
を含有している反応混合物において、superscript逆転写酵素II(Invitrogen)を使用して、5μgの全RNAから、cDNAを生成した。リアルタイム定量的PCR分析を、相対的定量化のΔΔCt法によって実施した。PCR混合物は、15μlの最終容量で、2μlのcDNA、7.5μlの2×Maxima(登録商標)SYBR grean/Fluorescein qPCRマスターミックス(2×)(Fermentas)、および330nMの各遺伝子特異的プライマーを含有していた。RT-PCRは、BioRad CFX96 Real-Time SystemおよびBioRad CFX Managerソフトウェア(BioRad)を使用して行われた。PCRは下記条件の下で実施された:96穴光学反応プレート(BioRad)において、95℃3分、ならびに95℃10秒、55℃10秒、および72℃30秒の40サイクル。アンプリコンの特異性は、40サイクルの後に融解曲線(解離)分析(60〜95℃)によって確証された。インプットcDNAはrRNAプライマーを使用して標準化された。以下のプライマーが、特異的な遺伝子発現レベルを検出するために使用された:
図6および図12に示されるように、2種の独立のPYL2CA3トランスジェニック系統が、ABA処理の非存在下で、ABAによって制御される遺伝子のレベルの上昇を示す。これらの遺伝子の発現レベルは、5μM ABAにより処理された野生型種子において観察されたレベルと比べて、比較可能であるか(図6)または上昇している(図12)。従って、PYL2CA3対立遺伝子は、数種のABAによって制御される遺伝子の高レベルの誘導を引き起こす。このことは、PYL2CA3が、ABA処理と比較可能なABAシグナリングをインビボで活性化するという結論と一致している。
部位飽和変異誘発
2種の方法のうちのいずれかを使用して変異体を作出した。約半分の変異体は、標的位置にランダムヌクレオチド(即ち、NNN)を含有しているプライマーを使用して、QuikChange site-directed mutagenesisキット(Stratagene,USA)を使用して、作成された(使用された全ての変異誘発プライマー配列のリストについては表2を参照のこと)。製造業者の説明に従い、10pmol NNNプライマーならびに稀なコドンの頻度を高めるために添加された各0.5pmolのMコードプライマーおよびWコードプライマーを含有している20μL変異誘発反応を、pBD GAL4-PYR1鋳型(Park et al.(2009)Science 324(5930):1068-1071)を使用して実施した。各部位について96コロニーのプラスミドDNAを、Bioneer AccuPrep(登録商標)Plasmid Mini Extraction Kit(Alameda,CA)を使用して単離し、変異体を同定するために配列決定した。それによって、配列決定された96クローンについて、各標的部位について19種の所望の変異のうち平均12種が同定された。第2の変異誘発法において、本発明者らは、縮重を低下させる、変異誘発標的部位にNNNの代わりに配列NNKを含有しているリン酸化プライマーを使用して、QuikChange lightning multi-site directed mutagenesisキット(Agilent Technologies,USA)を使用して、変異を作成した(Kretz KA,et al.(2004)Methods Enzymol 388:3-11)。各部位について96コロニーのプラスミドDNAを、Beckman Multimek 96ロボットおよびPerfectprep Vacキット(5 Prime Inc.,USA)を使用して単離し、配列決定したところ、配列決定された96クローンについて19種の所望の変異のうちの14種が平均して同定された。ランダムクローンの配列決定によって同定されなかった変異は、QuickChange(登録商標)lightning multi-site directed mutagenesisキット(Agilent Technologies,USA)を使用して、特別に設計された変異誘発プライマーにより構築された。この過程を39個全ての標的部位について実施し、最終的に、741種の配列がバリデートされた変異体PYR1クローンのセットを得た。
変異体pBD GAL-PYR1クローンを、GAL4活性化ドメイン-HAB1融合タンパク質を発現するpACT-HAB1(Park et al.,2009)を含有しているS.セレビシエ株Y190へ個々に形質転換した。酵母形質転換体を、LeuおよびTrpを欠く合成デキストロース(SD)寒天プレート(SD-LT)上でプラスミドの存在について選択し、β-galレポーター遺伝子発現レベルをモニタリングするため、X-gal染色を使用することにより、PP2C相互作用について調査した。個々のクローンを96穴プレートへ配置し、次いで、SD-LT細菌叢(即ち、1穴)プレートにスポットした。各アッセイプレートは、95種の変異体クローンおよび1種の野生型PYR1対照クローンを含有していた。プレートを、30℃における2日間のインキュベーションの後、クロロホルムオーバーレイX-gal法によって染色した。各アッセイプレートを少なくとも3回試験した。図1に示される活性化変異は、3回の別々の実験全てにおいてX-gal+として観察された。
全長のABI1およびABI2を、修飾型pSUMOベクター(LifeSensors Inc,USA)へクローニングし、6×His-SUMO融合タンパク質を得た;GST-HAB1を、以前に記載されたようにして(Park et al,2009)発現させ精製した。変異体受容体をpET28へクローニングし、6×His-融合タンパク質を得た。クローンを大腸菌発現株BL21(DE3)pLysSへ形質転換し、以下のように組換えタンパク質を調製した:1mlの一夜培養物を、200ml TB(受容体)または200ml LB(PP2C)に接種した。培養物を、30℃で2時間プレインキュベートし、PP2C発現のため、接種の1時間後に培地に4mM MnCl2を補足した。プレインキュベーションの後、IPTGを添加し(1mM)、細胞を15℃で16時間誘導し、その後、遠心分離によって収集し、5mlの緩衝液A(50mM NaH2PO4、300mM NaCl)+10mMイミダゾール(pH 8.0)に再懸濁させ、-80℃で保管した。精製のため、細胞を解凍し、氷上で超音波処理し(60秒)、次いで、清浄化された溶解物を、1mlベッド容量のNi-NTA(Qiagen,USA)カラムへ適用し、20カラム体積の緩衝液A+30mMイミダゾールにより洗浄し、結合したタンパク質を1mlの緩衝液A+250mMイミダゾールにより溶出させた。受容体については、溶出液をTBSに対して透析し、PP2Cについては、融合タンパク質をSephadex G50カラムに通すことによって脱塩した。
所望のトランスジェニック植物を作出するため、PYL2、PYL2CA3、およびPYL2CA4のコード配列を、pEGADの修飾バージョン(Cutler SR et al(2000)Proc Natl Acad Sci USA 97(7):3718-3723)へクローニングし、35Sにより駆動されるGFP-受容体融合タンパク質を作出した。以前の研究は、N末端GFP融合タグが、インビボのPYR1機能に干渉しないことを証明した(Park et al.,2009)。構築物の配列をバリデートし、次いで、フローラルディップ法(Clough SJ & Bent AF(1998)Plant J 16(6):735-743)を介して、アグロバクテリウムによって媒介される形質転換を使用して、コロンビアまたはaba2-1変異体へ導入した。構築された各遺伝子型について、およそ40個の初代トランスジェニック植物を、T1実生におけるグルホシネート抵抗性またはGFP発現によって同定し、次いで、単一挿入ホモ接合性系統を、10個のT1系統の子孫から単離した。
休眠をアッセイするため、コロンビア、35S::GFP-PYL2、および35S::GFP-PYL2CA3の種子を二分割し、(漂白剤およびHClを使用してインサイチューで調製された)塩素ガスを使用して表面滅菌した。一方を暗所で4℃で6日間1/3 MS寒天プレート上で層積処理し、室温で維持されたもう一方を6日後に1/3 MS寒天プレート上に播種し;両方の試料を、23℃の遮光グロースチャンバーに移し、24時間目に発芽を判定した。これらの実験において使用されたホモ接合性の35S::GFP-PYL2および35S::GFP-PYL2CA3の種子は、図12に示された実験の時点で、それぞれ、収穫後およそ5ヶ月目および6ヶ月目であった。
野生型系統またはトランスジェニック系統を、連続照明下で室温で、水または5μM ABAのいずれかにおいて32時間水浸処理し、その後、Concert(商標)Plant RNA Reagentを使用してRNAを単離し、続いて、LiCl2沈降させ、RNase不含DNAse(Ambion)を使用してDNase処理した。精製されたRNAを、ABAによって制御される遺伝子Em6(At2g40170)、LEA(At2g21490)、およびRd29b(At5g52300)のためのプライマーを使用したqRT-PCR反応において利用した。生物学的二重反復および技術的三重反復による測定を実施し、遺伝子発現レベルを決定した。遺伝子発現のqRT-PCR分析のため、オリゴdT20(SEQ ID NO:174)およびリボソームRNAプライマー3404(-)
を含有している反応混合物において、superscript逆転写酵素II(Invitrogen)を使用して、5μgの全RNAからcDNAを生成した。リアルタイム定量的PCR分析を、相対的定量化のΔΔCt法によって実施した。PCR混合物は、15μlの最終容量で、2μlのcDNA、7.5μlの2×Maxima(登録商標)SYBR green/Fluorescein qPCRマスターミックス(2×)(Fermentas)、および330nMの各遺伝子特異的プライマーを含有していた。RT-PCRは、BioRad CFX96 Real-Time SystemおよびBioRad CFX Managerソフトウェア(BioRad)を使用して行われた。PCRは以下の条件の下で実施された:96穴光学反応プレート(BioRad)において、95℃3分、ならびに95℃10秒、55℃10秒、および72℃30秒の40サイクル。アンプリコンの特異性は40サイクルの後に融解曲線(解離)分析(60〜95℃)によって確証された。インプットcDNAはrRNAプライマーを使用して標準化された。以下のプライマーが、特定の遺伝子発現レベルを検出するために使用された:
上記実施例に示されるように、35SプロモーターからのGFP-PYL2CA4の構成的発現は、増強された種子休眠を含む、多数の望ましくない効果に関連している。一般に、非生物的ストレス応答の構成的な発現は、生長の低下、および収量を低下させるその他の生理学的効果に関連している。これらの負の効果を避けるためには、誘導性の発現を使用することができる。例えば、アブシジン酸経路において正に作用する転写因子DREB1Aの、RD29Aにより駆動される干ばつ誘導性の発現は、干ばつ耐性を改善し、正常な生長条件の下では最小の効果を有するが、構成的な35Sにより駆動されるDREB1Aは、生長を著しく損なう(Kasuga et al.,1999)。ストレス耐性をモジュレートするための干ばつ誘導性の構成的活性型受容体の効率を調査するため、本発明者らは、RD29Aプロモーターの調節下で野生型PYL2受容体またはPYL2CA4受容体のいずれかを発現するトランスジェニックアラビドプシス植物を生成した。対照植物と比べた、これらの植物のストレス耐性を、塩ストレス処理および干ばつストレス処理の両方を使用して調査した。
および
を用いてシロイヌナズナゲノムDNAから増幅させられ、AgeIおよびSacI制限酵素を使用して、pEGADへクローニングされた。RD29A::GFP-PYL2およびRD29A::GFP-PYL2CA4と以後呼ばれる、RD29Aにより駆動されるGFP-受容体融合タンパク質を作出するため、PYL2およびPYL2CA4のコード配列を上記ベクターへクローニングした。構築物の配列をバリデートし、次いで、フローラルディップ法(Clough et al.1998)を使用して、アグロバクテリウムによって媒介される形質転換によって、コロンビア野生型背景へ導入した。構築された各遺伝子型について、およそ25個の初代トランスジェニック植物を、T1実生におけるグルホシネート抵抗性および/またはGFP発現によって同定し、次いで、単一挿入ホモ接合性系統を、初代T1系統のT2子孫およびT3子孫から同定した。
構築されたトランスジェニック植物が、ストレスに応答して適切にPYLタンパク質を発現することを確認するため、RD29A::GFP-PYL2トランスジェニック遺伝子型および2種の独立のRD29A::GFP-PYL2CA4トランスジェニック遺伝子型についての短日下で生長した4週齢の植物の成熟ロゼット葉を切り取り、4時間乾燥させた。その後、1%プロテアーゼ阻害剤混合物(Sigma-Aldrich,USA)が補足されたTBS緩衝液(10mM Tris-Cl(pH7.4)、150mM NaCl)で、タンパク質を抽出した。次いで、20μgの全タンパク質を10%アクリルアミド(wt/vol)SDS/PAGEゲル上で分離し、次いで、ニトロセルロース膜上にブロットし、1:10,000希釈のモノクローナル抗GFP抗体(Clontech,USA)または抗αチューブリン抗体(Sigma-Aldrich,USA)によりプロービングした。抗マウスHRP(1:10,000)コンジュゲートを二次抗体として使用し、次いで、免疫反応性タンパク質を可視化するため、ECL(GE Healthcare,USA)を使用した。図21に示されるように、RD29Aにより駆動されるPYLタンパク質は、脱水に応答して高レベルに発現され、ストレスの非存在下ではより低い基底レベルを有していた。これは、以前に特徴決定された、乾燥後のRD29Aプロモーターの誘導と一致している(Yamaguchi-Shinozaki et al.,1992)。従って、RD29Aにより駆動されるPYL2構築物は、予想通り、成熟アラビドプシス植物においてストレス誘導的にPYL2タンパク質を誘導する。
ABAは、耐塩性の媒介において、よく認識されている役割を果たす(Zhu,2002)。従って、本発明者らは、RD29Aにより駆動されるPYR1、PYL2、PYR1CA4バリアント、またはPYL2CA4バリアントを発現するアラビドプシス植物が、アラビドプシスの耐塩性を増強し得るか否かを調査しようと努力した。類似のPYL2構築物について実施例6に記載された方法を使用して、RD29Aにより駆動されるPYR1トランスジェニック植物およびPYR1CA4トランスジェニック植物を構築した。野生型材料およびトランスジェニック材料の塩分感受性アッセイを、以下のように実施した:野生型コロンビア系統、RD29A::GFP-PYR1系統、2種の独立のRD29A::GFP-PYR1CA4系統、RD29A::GFP-PYL2系統、または2種の独立のRD29A::GFP-PYL2CA4系統の実生を、0.5%ムラシゲ・スクーグ基礎塩混合物(Murashige and Skoog Basal Salt Mixture)(MS)、0.5%ショ糖、および0.5% Gelzan(商標)寒天、および100mg/mlカルボキシリン(carboxyline)抗微生物剤からなる一般的な増殖培地で、BD Falcon 100×15mm使い捨て正方形integridペトリ皿に蒔き、発芽させた。無菌の80×80mmナイロンメッシュを25mlの溶融培地の上に置いた。使用されたナイロンメッシュは、1000ミクロンの正方形開口部、59%開口部面積、および515ミクロンの糸直径を含有している(Small Parts,USAより入手された)。これらのメッシュカバーは、低塩分ペトリ皿から高塩分ペトリ皿への実生の容易な移動を可能にする。滅菌された9粒の種子を、10×10メッシュ正方形ユニット上に均一に蒔き、5日間4℃で暗所で層積処理し、次いで、室温で連続光に曝した。7日後、実生を、RD29Aプロモーターの発現を誘導するため、100mM NaCl+一般的な増殖培地を含有しているプレートに移した。トランスジーン誘導後、実生を250mM NaClプレートに移し、高塩プレートへの移動から14日後に実生生存率を判定した。図22Aに示されるように、RD29A::GFP-PYR1CA4トランスジェニック植物およびRD29A::GFP-PYL2CA4トランスジェニック植物は、野生型植物ならびにRD29A::GFP-PYR1トランスジェニック植物およびRD29A::GFP-PYL2トランスジェニック植物の両方と比較して、高塩分条件下での生存率の有意な改善を示した。PYR1系列(図22B)およびPYL2系列(図22C)のトランスジェニック植物の生存率の定量化は、CA発現トランスジェニック系統の耐塩性の有意な改善を明らかにした。100mM NaCl処理が様々なPYR1タンパク質およびPYL2タンパク質の発現を効率的に誘導することを確認するため、100mM NaClへの移動の後、実生に対してqRT-PCRアッセイを実施した。移動後3時間間隔(移動後0時間目、3時間目、および6時間目)で実生組織を採集し、Concert(商標)Plant RNA Reagentを使用して単離されたRNAを、RNase不含DNase(Ambion,USA)を使用してDNase処理した。次いで、ABAによって制御される遺伝子RAB18(At5g66400)およびRD29B(At5g52300)のためのオリゴヌクレオチドプライマーを使用したqRT-PCR反応において、精製されたRNAを利用した。生物学的トリプリケートおよび技術的三重反復による測定を実施した。遺伝子発現のqRT-PCR分析のため、オリゴdT20(SEQ ID NO:174)プライマーを含有している反応混合物において、Superscript Reverse Transcriptase III(Invitrogen,USA)を使用して、2μgの全RNAからcDNAを生成した。リアルタイム定量的PCR分析を、相対的定量化のΔΔCt法によって実施した。PCR混合物は、15μlの最終反応容量で、2μlのcDNA、7.5μlの2×Maxima(登録商標)SYBR green/Fluorescein qPCRマスターミックス(2×)(Fermentas)、および330nMの各遺伝子特異的プライマーを含有していた。RT-PCRは、BioRad CFX Managerソフトウェア(BioRad,USA)を使用して実施された。PCRは以下の条件の下で実施された:96穴光学反応プレート(BioRad)において、95℃3分、続いて、95℃10秒、55℃10秒、および72℃30秒の40サイクル。アンプリコンの特異性を、40サイクルの後に融解曲線(解離)分析(60〜95℃)によって確証した。インプットcDNAを、rRNAプライマーを使用して標準化した。図23に示されるように、RD29A::GFP-PYL2CA4系統#1において、野生型植物およびRD29A::GFP-PYL2トランスジェニック植物と比較して、ABA応答性遺伝子の発現の増大が観察された。従って、PYR1CA4またはPYL2CA4のRD29Aにより駆動される発現は、アラビドプシス実生におけるABA応答の増大および耐塩性の改善に関連している。
PYL2CA4のRD29Aにより駆動される発現が干ばつ耐性を増強するか否かを調査するため、コロンビア野生型、RD29A::GFP-PYL2トランスジェニック遺伝子型、または2種の独立のRD29A::GFP-PYL2CA4トランスジェニック遺伝子型のいずれかの成熟植物を、水枯渇実験に供し、水枯渇後2週間目に水損失をモニタリングした。実験を以下のように実施した:各遺伝子型の実生を、水分補給されたJiffy-7ピートペレット土壌へ個々に移し、定期的に灌水しながら、短日条件(8/16明暗)で、成熟するまで(およそ6週間)生長させた;各遺伝子型についておよそ40の植物を特徴決定した。成熟後、非蒸散水損失を最小化するため、ポリ塩化ビニルおよびパラフィルムの組み合わせを使用してポットを密閉した。ポットの下半分をポリ塩化ビニルラップにより密封し、上半分をパラフィルムにより密封した。十分に灌水された対照植物(各遺伝子型についておよそ10植物)を、処理された標本と並行して生長させた。実験の間中、毎週、植物を写真撮影し計量した。実験の完了時、(植物バイオマスおよび土壌を含有している)各ポットをオーブンで乾燥させ、各ポットの乾重量を決定するため計量し、次いで、それを、水枯渇実験の間中、測定された含水量を推論するために使用した。さらに、干ばつストレスの示度である葉崩落(即ち、膨圧の損失)についても、視覚的に植物を判定した。さらに、実験中止時に、気生植物乾重量を対照植物および実験植物の両方について測定した。図24Aに示されるように、RD29A::GFP-PYL2CA4トランスジェニック植物は、膨張損失の低下によって証拠付けられるように、コロンビア野生型またはRD29A::GFP-PYL2遺伝子型のいずれよりも良好に、2週間の水枯渇の後に生存していた。さらに、水保持の定量化は、RD29A::GFP-PYL2CA4トランスジェニック植物が、コロンビア野生型またはRD29A::GFP-PYL2遺伝子型のいずれよりも良好に、2週間の水枯渇の間、水を保持していたことを明らかにした。図25に示されるように、対照植物および水ストレス植物の乾重量は有意に異なっていなかったため、このストレス耐性の改善は、植物サイズの差に起因するものではあり得ない。従って、PYL2CA4受容体の干ばつ誘導性の発現は、アラビドプシス干ばつ耐性を増強する。
蒸散および水使用には気孔開度が重要であるため、本発明者らは、RD29Aプロモーターによって駆動されたPYL2CA4の干ばつによって誘導される発現が、気孔開度に影響するか否かを調査しようと努力した。これを調査するため、本発明者らは、乾燥からの回復後の植物の気孔開度を調査した。RD29Aプロモーターの誘導を可能にするため、コロンビア遺伝子型、RD29A::GFP-PYL2トランスジェニック遺伝子型、またはRD29A::GFP-PYL2CA4トランスジェニック遺伝子型からの植物を、切断し、1時間乾燥させた。次いで、90分間、植物に再び水分補給し、その後、Suzuki's Universal Micro-Printing(SUMP)プレート(SUMP Laboratory,Tokyo)でのモールディングにより、各遺伝子型について4枚の葉の気孔形態学を捕えた。1200倍の倍率で、TM1000 Hitachi Tabletop SEMを使用して、気孔所見を画像化した(各遺伝子型についておよそ100個の気孔)。図26に示されるように、RD29A::GFP-PYL2CA4トランスジェニックは、野生型植物およびRD29A::GFP-PYL2植物と比較して低下した気孔開度を有していた。
Claims (36)
- 野生型PYR/PYL受容体ポリペプチドと比較して、リガンド結合ポケットおよび/または2型プロテインホスファターゼ(PP2C)結合界面における1種以上のアミノ酸置換を含み、アブシジン酸の非存在下でPP2Cに結合する変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、単離された核酸。
- 変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、リガンド結合ポケットにおける1種以上のアミノ酸置換を含む、請求項1記載の単離された核酸。
- 変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P/G/R/A/W/I/K/V/M、V83F/L/P、L87F、A89W、またはF159V/Aに相当する1種以上のアミノ酸置換を含む、請求項2記載の単離された核酸。
- 変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P/G、V83F、A89W、またはF159Vに相当する1種以上のアミノ酸置換を含む、請求項3記載の単離された核酸。
- 変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、PP2C結合界面における1種以上のアミノ酸置換を含む、請求項1記載の単離された核酸。
- 変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P/G/R/A/W/I/K/V/M、I84Q/E/P/H/K、L87F、A89W、M158T/C/V/I、F159V/A、T162F、L166Y/F、またはK170Wに相当する1種以上のアミノ酸置換を含む、請求項5記載の単離された核酸。
- 変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P/G、I84Q、A89W、M158T/C、F159V、またはK170Wに相当する1種以上のアミノ酸置換を含む、請求項6記載の単離された核酸。
- 変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、リガンド結合ポケットにおける1種以上のアミノ酸置換およびPP2C結合界面における1種以上のアミノ酸置換を含む、請求項1記載の単離された核酸。
- 変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P、V83F、およびF159Vに相当するアミノ酸置換を含む、請求項1記載の単離された核酸。
- 変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P、V83F、M158I、およびF159Vに相当するアミノ酸置換を含む、請求項1記載の単離された核酸。
- 変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P、A89W、M158I、およびF159Vに相当するアミノ酸置換を含む、請求項1記載の単離された核酸。
- 変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換V83F、M158I、F159V、およびK170Wに相当するアミノ酸置換を含む、請求項1記載の単離された核酸。
- 変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、アブシジン酸の非存在下でホスファターゼアッセイにおいてPP2Cの活性を有意に阻害する、請求項1記載の単離された核酸。
- 変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、アブシジン酸の非存在下で野生型PYR/PYL受容体ポリペプチドと接触させたPP2CのPP2C活性のレベルと比較して、アブシジン酸の非存在下でPP2Cの活性を少なくとも50%阻害する、請求項13記載の単離された核酸。
- 変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1〜155のいずれかと実質的に同一である、請求項1〜14のいずれか一項記載の単離された核酸。
- 変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:120〜155のいずれかである、請求項1記載の単離された核酸。
- PP2CがHAB1である、請求項1記載の単離された核酸。
- 請求項1〜17のいずれか一項記載のポリヌクレオチドに機能的に連結されたプロモーターを含む発現カセットであって、植物への該発現カセットの導入が、アブシジン酸の非存在下で2型プロテインホスファターゼ(PP2C)に結合するPYR/PYL受容体を有する植物をもたらす、発現カセット。
- プロモーターが前記ポリヌクレオチドと異種である、請求項18記載の発現カセット。
- プロモーターが誘導性である、請求項18記載の発現カセット。
- プロモーターがストレス誘導性プロモーターである、請求項20記載の発現カセット。
- プロモーターが組織特異的である、請求項18記載の発現カセット。
- 植物への発現カセットの導入が、該発現カセットを欠く植物と比較して、アブシジン酸の非存在下で有意に阻害されたPP2C活性を有する植物をもたらす、請求項18記載の発現カセット。
- 請求項18〜23のいずれか一項記載の発現カセットを含む発現ベクター。
- アブシジン酸の非存在下で有意に阻害されたPP2C活性を有する、請求項18〜23のいずれか一項記載の発現カセットを含む植物。
- 請求項25記載の植物に由来する植物細胞。
- 請求項25記載の植物に由来する種子、花、葉、果実、加工食品、または食品成分。
- アブシジン酸の非存在下で有意に阻害された2型プロテインホスファターゼ(PP2C)活性を有する植物を作製する方法であって、
請求項18〜23のいずれか一項記載の発現カセットを複数の植物へ導入する工程;および
前記複数の植物から、前記ポリヌクレオチドを発現する植物を選択する工程
を含む、方法。 - 増強されたストレス耐性を有する植物を作製する方法であって、
野生型PYR/PYL受容体ポリペプチドと比較して、リガンド結合ポケットおよび/または2型プロテインホスファターゼ(PP2C)結合界面における1種以上のアミノ酸置換を含み、アブシジン酸の非存在下でPP2Cに結合する変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたプロモーターを含む発現カセットを複数の植物へ導入する工程;および
前記複数の植物から、前記ポリヌクレオチドを発現する植物を選択する工程
を含む、方法。 - 変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P/G/R/A/W/I/K/V/M、V83F/L/P、I84Q/E/P/H/K、L87F、A89W、M158T/C/V/I、F159V/A、T162F、L166Y/F、またはK170Wに相当する1種以上のアミノ酸置換を含む、請求項29記載の方法。
- 変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P、V83F、およびF159Vに相当するアミノ酸置換を含む、請求項30記載の方法。
- 変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P、V83F、M158I、およびF159Vに相当するアミノ酸置換を含む、請求項30記載の方法。
- 変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1〜155のいずれかと実質的に同一である、請求項29記載の方法。
- プロモーターが誘導性プロモーターである、請求項29記載の方法。
- プロモーターがストレス誘導性プロモーターである、請求項34記載の方法。
- プロモーターが組織特異的である、請求項29記載の方法。
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Citations (2)
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---|---|---|---|---|
US20100216643A1 (en) * | 2009-02-13 | 2010-08-26 | Regents Of The University Of California | Control of plant stress tolerance, water use efficiency and gene expression using novel aba receptor proteins and synthetic agonists |
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