JP2014520123A - Ｃｌｅｃ−２を使用して代謝性障害を治療または改善させる方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、Ｃｌｅｃ−２細胞外ドメインを使用して代謝性疾患および代謝性障害を治療する方法を提供する。様々な実施形態では、代謝性疾患または代謝性障害は、２型糖尿病、グルコース濃度上昇、インスリン濃度上昇、およびトリグリセリド濃度上昇である。

Description

本出願は、２０１１年６月１７日に出願された米国仮出願番号第６１／４９８，３７０号の利益を主張し、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

本発明の技術分野
本開示の発明は、Ｃｌｅｃ−２細胞外ドメインもしくはその断片を含む分子またはＣｌｅｃ−２に対する抗体の治療有効量を治療が必要な対象に投与することによる、代謝性障害、例えば糖尿病、グルコース濃度上昇、インスリン濃度上昇、またはトリグリセリド上昇、およびインスリン耐性等の、治療または改善に関する。

ＣＬＥＣ−２は、免疫系でのタンパク質間の認識相互作用（ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）に関与することが知られているＣ型レクチン様受容体に類似性を持つ分子を同定するため、バイオインフォマティクス手法を使用して同定された（Ｍ． Ｃｏｌｏｎｎａ ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３０ ｐｐ． ６９７−７０４）。ＣＬＥＣ−２は、末梢血球、骨髄、骨髄性細胞（単核白血球、樹状細胞、および顆粒球）、ナチュラルキラー細胞、および肝臓で、転写レベルで同定された。ＣＬＥＣ−２をコードする遺伝子は、ヒト第１２番染色体上のＤＥＣＴＩＮ−１およびＬＯＸ−１を含む関連遺伝子のクラスター内に位置する（Ｓｏｂａｎｏｖ， Ａ． ｅｔ ａｌ． ２００１， Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ３１， ｐｐ． ３４９３−３５０３）。ＣＬＥＣ−２はまた、Ｃ型レクチンドメインファミリー１メンバーＢまたはＣＬＥＣ１Ｂと称することもある。

ＣＬＥＣ−２は、タンパク質のＣ型レクチン様ファミリの一員である。ＣＬＥＣ−２は、血小板表面の受容体として、最近同定された（Ｋ． Ｓｕｚｕｋｉ−Ｉｎｏｕｅ ｅｔ ａｌ．， ２００６， Ｂｌｏｏｄ， １０７， ｐｐ． ５４２−５４９）。ＣＬＥＣ−２によるリガンド結合は、ＳｒｃキナーゼによるＣＬＥＣ−２の細胞質ドメインＹＸＸＬモチーフでチロシンのリン酸化を促進させ、さらに、下流のシグナル伝達事象が、血小板の活性化および凝集を誘発する（Ｋ． Ｓｕｚｕｋｉ−Ｉｎｏｕｅ ｅｔ ａｌ，前出を参照のこと）。マレーマムシＣａｌｌｏｓｅｌａｓｍａ ｒｈｏｄｏｓｔｏｍａは、強力な毒性タンパク質、ロドサイチン（ｒｈｏｄｏｃｙｔｉｎ）を生成し、ロドサイチンは強力な血小板の活性化および凝集を惹起する。ロドサイチンは、最近、ＣＬＥＣ−２（血小板表面の新たに同定された受容体）へのリガンドであることが示されたが、また、ロドサイチンのＣＬＥＣ−２への結合は新規の血小板シグナル伝達経路を誘発する。ロドサイチン結合は、ＣＬＥＣ−２の細胞質尾部でのチロシンリン酸化を誘導し、チロシンリン酸化が、脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）の結合、その後のＰＬＣγ２の活性化、および血小板の活性化および凝集を促進させる。

Ｍ． Ｃｏｌｏｎｎａ ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３０ ｐｐ． ６９７−７０４ Ｓｏｂａｎｏｖ， Ａ． ｅｔ ａｌ． ２００１， Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ３１， ｐｐ． ３４９３−３５０３ Ｋ． Ｓｕｚｕｋｉ−Ｉｎｏｕｅ ｅｔ ａｌ．， ２００６， Ｂｌｏｏｄ， １０７， ｐｐ． ５４２−５４９

代謝性疾患（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）を治療する方法を提供する。１つの実施形態では、対象にＣｌｅｃ−２阻害剤の治療有効量を投与することを含む、対象の代謝性障害を治療する方法を提供する。１つの実施形態では、代謝性疾患は、糖尿病、特にＩＩ型糖尿病、グルコース濃度上昇、インスリン濃度上昇、トリグリセリド濃度上昇、インスリン耐性、または経口耐糖能低下である。

本発明の１つの実施形態では、Ｃｌｅｃ−２阻害剤は、Ｃｌｅｃ−２受容体、特にＣｌｅｃ−２受容体の細胞外ドメインまたはその断片を含む。１つの実施形態では、Ｃｌｅｃ−２受容体の細胞外ドメインまたはその断片は、ヒトＣＬＥＣ２細胞外ドメインまたはその断片である。Ｃｌｅｃ−２受容体の細胞外ドメインまたはその断片は、対象での半減期を延長させるために修飾されてもよい。１つの実施形態では、半減期は、免疫グロブリン定常領域またはその断片をＣＬＥＣ２細胞外ドメインに結合させることに延長される。１つの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ヒト免疫グロブリン定常領域またはその断片である。いくつかの実施形態では、他の半減期延長モダリティ（ｍｏｄａｌｉｔｙ）を、Ｃｌｅｃ−２細胞外ドメインまたはその断片を修飾するために使用してもよく、例えばヒト血清アルブミンとの結合、ヒト血清アルブミンバインダとの結合、ＰＥＧ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）、ＰＥＧ化模倣等が挙げられる。

いくつかの実施形態では、本発明のＣｌｅｃ−２阻害剤は、配列番号２、４、６または１３に記載の配列を含むか、または配列番号２、４、６、または１３の配列と少なくとも９０％、９５％、または９８％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、本発明のＣｌｅｃ−２阻害剤は、配列番号１、３、５、もしくは１２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチド、または配列番号１、３、５または１２と少なくとも９０％、９５％、もしくは９８％を有するポリペプチドを含む。

いくつかの実施形態では、本発明のＣｌｅｃ−２阻害剤は、Ｃｌｅｃ−２またはＣｌｅｃ−２のリガンドに特異的に結合する抗体もしくはその断片、である。本発明のいくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、ヒトＣｌｅｃ−２受容体に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号１、３、５、７、もしくは９に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドに、特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、モノクローナル抗体またはその断片である。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。

本発明のいくつかの実施形態では、治療を受ける対象は、哺乳類、特にヒトである。本発明のいくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ２阻害剤は、Ｃｌｅｃ−２阻害剤の治療有効量を薬学的に許容される担体と混合して含む医薬組成物の形態で投与される。

いくつかの実施形態では、本発明の方法により治療を受ける対象は、Ｃｌｅｃ−２阻害剤の対象への投与後の時点で、Ｃｌｅｃ−２阻害剤の投与前の時点より低いグルコース濃度を有する。いくつかの実施形態では、治療を受ける対象は、本発明のＣｌｅｃ−２阻害剤の治療有効量による治療後に、４００、３００、２００、１５０または１４０ｍｇ／ｄｌより低い（しかし約６０ｍｇ／ｄｌ以上である）血糖値、特に、空腹時の血糖値を有する。

いくつかの実施形態では、本発明の方法により治療を受ける対象は、Ｃｌｅｃ−２阻害剤の対象への投与後の時点で、投与前の時点より低いインスリン濃度を有する。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ−２阻害剤投与後の時点での対象のインスリン濃度は、投与前の対象のインスリン濃度より少なくとも５％、１０％、または１５％低い。

いくつかの実施形態では、対象のインスリン耐性は、Ｃｌｅｃ−２阻害剤の対象への投与後の時点で、投与前の時点と比べて改善している。いくつかの実施形態では、対象のグルコース濃度は、対象の血糖値、特に空腹時の血糖値である。いくつかの実施形態では、対象のインスリン濃度は、対象の血漿インスリン濃度である。

いくつかの実施形態では、本発明の方法により治療を受ける対象は、Ｃｌｅｃ−２阻害剤の対象への投与後の時点で、投与前の時点より低いトリグリセリド濃度を有する。いくつかの実施形態では、対象のトリグリセリド（ｔｒｉｇｌｙｅｒｉｄｅ）濃度は、対象の血中トリグリセリド濃度である。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ−２阻害剤投与後の時点での対象のトリグリセリド濃度は、投与前の対象のトリグリセリド濃度より少なくとも５％、１０％、または１５％低い。

いくつかの実施形態では、本発明の方法により治療された対象は、Ｃｌｅｃ−２阻害剤の投与後の時点で、投与前の時点より改善された経口耐糖能を有する。

本発明の１つの実施形態では、対象での代謝性疾患の治療方法は、対象にＣｌｅｃ−２受容体の細胞外ドメインまたはその断片の治療有効量を投与することを含む。１つの実施形態では、治療される代謝性疾患は、２型糖尿病、グルコース濃度上昇、インスリン濃度上昇、トリグリセリド濃度上昇、インスリン耐性、または経口耐糖能低下である。

１つの実施形態では、Ｃｌｅｃ−２受容体の細胞外ドメインまたはその断片は、対象での半減期を延長させるために修飾される。１つの実施形態では、Ｃｌｅｃ−２受容体の細胞外ドメインまたはその断片は、免疫グロブリン定常領域またはその断片に結合される。１つの実施形態では、Ｃｌｅｃ−２受容体の細胞外ドメインまたはその断片は、ヒト細胞外ドメインまたはその断片である。１つの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ヒト免疫グロブリン定常領域またはその断片である。

いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ−２細胞外ドメインは、配列番号２、４、６、もしくは１３の配列、または配列番号２、４、６、もしくは１３の配列と少なくとも９０％、９５％または９８％の配列同一性をもつ配列を含むポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ−２細胞外ドメインは、配列番号１、３、５、もしくは１２のアミノ酸配列、または配列番号１、３、５または１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％または９８％の同一性を示すアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。

本発明の方法のいくつかの実施形態では、対象は、哺乳類、特にヒトである。本発明のいくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ−２細胞外ドメインまたはその断片は、Ｃｌｅｃ−２細胞外ドメインを薬学的に許容される担体と混合して含む医薬組成物の形態で投与される。いくつかの実施形態では、本発明の方法により治療を受ける対象は、ａ）Ｃｌｅｃ−２細胞外ドメインの対象への投与後の時点での、Ｃｌｅｃ−２細胞外ドメイン投与前の時点より低いグルコース濃度；ｂ）Ｃｌｅｃ−２細胞外ドメインまたはその断片の対象への投与後での、投与前の時点より低いインスリン濃度；またはｃ）Ｃｌｅｃ−２細胞外ドメインまたはその断片の対象への投与後での、投与前の時点より低いトリグリセリド濃度、を含む。

いくつかの実施形態では、本発明の方法により治療された対象のインスリン耐性は、Ｃｌｅｃ−２細胞外ドメインまたはその断片の対象への投与後の時点で、投与前の時点と比較して改善している。いくつかの実施形態では、対象のグルコース濃度は、対象の血糖値である。いくつかの実施形態では、対象のインスリン濃度は、対象の血漿インスリン濃度である。いくつかの実施形態では、対象のトリグリセリド濃度は、対象の血中トリグリセリド濃度である。

いくつかの実施形態では、本発明の方法により治療を受ける対象は、Ｃｌｅｃ−２細胞外ドメインまたはその断片の投与後の時点で、投与前の時点より改善した経口耐糖能を有する。

図１は、注入後９日目および２３日目でのＤＩＯマウス中のｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）の血清タンパク質濃度を示す棒グラフである。 図２は、空ＡＡＶで治療した対照動物と比較した、ＤＩＯマウスでの、ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）の体重への効果を示す棒グラフである。 図３は、対照動物と比較すると、ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）で治療したＤＩＯマウスの基準グルコース濃度が低いことを示す棒グラフである。 図４は、対照マウスと比較すると、ＡＡＶ注入後４０日目の、ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）を注入したＤＩＯマウスのインスリン濃度が低いことを示す棒グラフである。 図５は、対照ＤＩＯマウスに比べて、ＡＡＶ注入後２３日目でのｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）治療マウスの経口耐糖能が改善していることを示すプロットである。 図６は、ＤＮＡ構築物のＨＴＶ注入後７、１３、および１８日目での、ＤＩＯマウス中のｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）の血清タンパク質濃度を示す棒グラフである。 図７は、対照動物と比較した、ＤＩＯマウスでのｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）の体重への効果を示す棒グラフである。 図８は、対照動物と比較した、注入２日前、および注入後７および１３日目での、ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）で治療したＤＩＯマウスの基準グルコース濃度を示す棒グラフである。 図９は、対照ＤＩＯマウスと比較すると、ＨＴＶ注入後４０日目での、ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）を注入したＤＩＯマウスでのインスリン濃度が低いことを示すプロットである。 図１０は、対照ＤＩＯマウスと比較すると、ＨＴＶ注入後１３日目での、ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）治療マウスの経口耐糖能が改善していることを示すプロットである。 図１１は、対照ＤＩＯマウスと比較すると、ＨＴＶ注入後１８日目での、ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）治療マウスの肝臓トリグリセリド濃度が低いことを示す棒グラフである。 図１２は、対照動物のインスリン濃度と比較すると、注入後８日目での組換えｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）の１０ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇで治療したＤＩＯマウスのインスリン濃度が低いことを示す棒グラフである。 図１３は、対照ＤＩＯマウスと比較すると、注入後１３日目での、組換えｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）の１０ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇで治療したＤＩＯマウスの経口耐糖能が、改善していることを示すプロットである。 図１４は、対照動物と比較した、ＡＡＶ注入２日前ならびに注入後１２および２６日目での、ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）で治療したｏｂ／ｏｂマウスの基準グルコース濃度を示す棒グラフである。 図１５は、対照ｏｂ／ｏｂマウスと比較すると、ＡＡＶ注入後１２日目でのｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）治療マウスの経口耐糖能が改善していることを示すプロットである。 図１６は、組換えタンパク質注入後７および１４日目での、ｏｂ／ｏｂマウスのｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）の血清タンパク質濃度を示す棒グラフである。 図１７は、対照ｏｂ／ｏｂマウスと比較すると、組換えタンパク質注入後１２日目での、ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）治療マウスの経口耐糖能が改善していることを示すプロットである。

本開示は、代謝性障害、例えば糖尿病（２型糖尿病、グルコース濃度上昇、インスリン濃度上昇、またはトリグリセリド濃度上昇等）等を、治療が必要な対象にＣＬＥＣ２ポリペプチドを含む分子の治療有効量を投与することにより、治療する方法を提供する。投与および送達方法もまた、提供される。

本明細書（実施例を含めて）で使用される組換えポリペプチドおよび核酸方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， １９８９）またはＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ． ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ １９９４）の現行のプロトコルに一般的に記載された方法であり、いずれの目的に対し、その両方が本明細書に組み込まれる。

Ｉ．一般的定義
慣例に従い、本明細書に使用される「ａ」および「ａｎ」は、他に特に指示のない限り「１以上の」を意味する。

「抗体」という用語は、標的抗原への特異的な結合に無傷抗体と競合し得る、いずれのアイソタイプの無傷の免疫グロブリンまたはその断片を指し、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、および、二重特異性抗体が挙げられる。無傷抗体は一般に、少なくとも２つの完全長重鎖および２つの完全長軽鎖を含むが、いくつかの例では、重鎖しか含まないラクダ科（ｃａｍｅｌｉｄ）の天然由来の抗体など、鎖がより少ない場合もある。本発明による抗体は、単に、単独の供給源のみに由来するものであってよく、または「キメラ」であってよく、すなわち、抗体の異なる部分が、２種類の異なる抗体に由来してもよい。例えば、ＣＤＲ領域は、ラットまたはマウス供給源に由来するものであってよく、一方で、Ｖ領域のフレームワーク領域は、異なる動物源、例えばヒト等に由来する。本発明の抗体または結合断片は、ハイブリドーマで、組換えＤＮＡ技術により、または無傷抗体の酵素的開裂または化学的開裂により、生成されてもよい。他に指示がない限り、「抗体」という用語には、２つの完全長重鎖および２つの完全長軽鎖を含む抗体の他に、派生物、変異体、断片、およびその突然変異タンパク質が含まれる。

「軽鎖」という用語には、完全長軽鎖、および結合特異性を与える（ｃｏｎｆｅｒ）のに十分な可変領域配列をもつその断片が含まれる。完全長軽鎖は、可変領域ドメイン、ＶＬ、および定常領域ドメイン、ＣＬを含む。軽鎖の可変領域ドメインは、ポリペプチドのアミノ末端にある。本発明による軽鎖は、κ鎖およびλ鎖を含む。

「重鎖」という用語には、完全長重鎖、および結合特異性を与えるのに十分な可変領域配列をもつその断片が含まれる。完全長重鎖には、可変領域ドメイン、ＶＨ、ならびに定常領域ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３が含まれる。ＶＨドメインは、ポリペプチドのアミノ末端にあり、ＣＨドメインは、カルボキシル末端にあり、ＣＨ３が--ＣＯＯＨ末端に最も近くに存在している。本発明による重鎖は、いずれのアイソタイプであってよく、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４サブタイプを含む）、ＩｇＡ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２サブタイプを含む）、ＩｇＭ、およびＩｇＥが挙げられる。

免疫グロブリン鎖の「免疫機能性（ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）断片」（または簡潔に「断片」）という用語は、本明細書に使用される場合、完全長鎖に存在するアミノ酸の少なくともいくつかが欠落しているがある抗原に特異的に結合することができる抗体軽鎖または重鎖の一部を指す。そのような断片は、それらが標的抗原に特異的に結合するという点で生物学的活性をもち、所定のエピトープとの特異的結合に無傷抗体と競合し得る。本発明の一態様では、そのような断片は完全長軽鎖または重鎖に存在する少なくとも１つのＣＤＲを保持し、また、いくつかの実施形態では、単一の重鎖および／もしくは軽鎖またはその一部を有し得る。これらの生物学的活性な断片は、組換えＤＮＡ技術により生成されてもよく、または、無傷抗体の酵素的開裂または化学的開裂により生成されてもよい。本発明の免疫機能性免疫グロブリン断片として、これに限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体、および一本鎖抗体が挙げられ、また、これに限定されるものではないが、ヒト、マウス、ラット、ラクダ科またはウサギなどのいずれの哺乳類源に由来するものであってもよい。独創的な抗体の機能部分、例えば、１以上のＣＤＲは、体内の特定の標的を対象とし、二機能的治療特性（ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｙ）を備えるか、または長期の血清半減期をもつ治療薬を作り出すための第二のタンパク質と、または小分子と共有結合し得ることが、さらに期待される。

「中和抗体」という用語は、リガンドに結合し、リガンドとその結合パートナーとの結合を阻害し、またリガンドとその結合パートナーの結合により生じる他の生物学的応答を中断する抗体を指す。抗体またはその免疫機能性断片の結合性および特異性の評価では、過剰な抗体が、そのリガンドと結合する結合パートナーの量を少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％またはそれより多く減少させた場合（インビトロ競合的結合アッセイで測定されるように）、抗体または断片は、リガンドとその結合パートナーとの結合を実質的に阻害している。ＣＬＥＣ２抗体の場合、中和抗体は、ＣＬＥＣ２受容体に結合してリガンドの受容体への結合を防ぐか、またはリガンドに結合してリガンドのＣＬＥＣ２受容体への結合を防ぐことのいずれかにより、ＣＬＥＣ２経路によるシグナル伝達を阻害する。

本発明の抗体は、解離定数（Ｋ_ｄ）が１ｘ１０^−８Ｍである時に、その標的抗原と「特異的に結合」しているといわれる。抗体は、Ｋｄが５ｘ１０^−９Ｍである時に、抗原と「高親和性」で特異的に結合し、また、Ｋｄが５ｘ１０^−１０Ｍである時に抗原と「超高親和性」で特異的に結合している。本発明の１つの実施形態では、抗体はＫｄが１ｘ１０^−９Ｍであり、解離速度（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）が約１ｘ１０^−４／秒である。本発明の１つの実施形態では、解離速度は１ｘ１０^−５未満である。本発明の他の実施形態では、抗体は、ヒトＤＫＫ１に約１ｘ１０^−８Ｍ〜１ｘ１０^−１０ＭのＫｄで結合し、また、更に別の実施形態では、抗体は２ｘ１０^−１０のＫｄで結合する。当業者なら、特異的結合が排他的結合を意味せず、むしろ、互いに親和性をもつグループ間での生物学的反応が代表的であるようにある程度の非特異的結合が可能であることを認識するであろう。

本明細書に使用される場合、「アミノ酸」および「残基」という用語は置き換え可能であり、ペプチドまたはポリペプチドの文脈において使用される場合、天然由来のアミノ酸および合成アミノ酸の両方、ならびにアミノ酸類似体、アミノ酸模倣体および天然由来のアミノ酸に化学的に類似する非天然由来のアミノ酸を指す。

「天然由来のアミノ酸」は、遺伝子コードによりコードされたアミノ酸、ならびに合成後に修飾される遺伝子コードによりコードされたアミノ酸（例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、およびＯ−ホスホセリン）である。アミノ酸類似体は、天然由来のアミノ酸と同じ基本的な化学構造をもつ化合物、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、およびＲ基に結合するα炭素、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムである。そのような類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を持ち得るが、天然由来のアミノ酸と同じ基本的な化学構造を保持している。

「アミノ酸模倣体」は、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を持つが、天然由来のアミノ酸と同様の方法で機能する化合物である。例としては、アミドのメタクリロイルまたはアクリロイル誘導体、β−、γ−、δ−イミノ酸（例えばピペリジン−４−カルボン酸等）等が挙げられる。

「非天然由来のアミノ酸」は、天然由来のアミノ酸と同じ基本的な化学構造をもつが、翻訳複合体により成長ポリペプチド鎖に組み込まれない化合物である。「非天然由来のアミノ酸」にはまた、これに限定されないが、天然にコードされたアミノ酸（これらに限定されるものではないが、２０種類の共通アミノ酸を含む）の修飾（例えば、翻訳後修飾）により生じたアミノ酸が挙げられるが、翻訳複合体により成長ポリペプチド鎖にそれ自体が天然に組み込まれてはいない。ポリペプチド配列に挿入することが可能な、またはポリペプチド配列の野生型残基と置き換えることが可能な非天然由来のアミノ酸の例である非限定的列挙としては、β−アミノ酸、ホモアミノ酸、環状アミノ酸、および誘導体化された側鎖をもつアミノ酸が挙げられる。例としては、（Ｌ型またはＤ型で；括弧内に略語を記載する）：シトルリン（Ｃｉｔ）、ホモシトルリン（ｈＣｉｔ）、Ｎα−メチルシトルリン（ＮＭｅＣｉｔ）、Ｎα−メチルホモシトルリン（Ｎα−ＭｅＨｏＣｉｔ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、Ｎα−メチルオルニチン（Ｎα−ＭｅＯｒｎまたはＮＭｅＯｒｎ）、サルコシン（Ｓａｒ）、ホモリジン（ｈＬｙｓまたはｈＫ）、ホモアルギニン（ｈＡｒｇまたはｈＲ）、ホモグルタミン（ｈＱ）、Ｎα−メチルアルギニン（ＮＭｅＲ）、Ｎα−メチルロイシン（Ｎα−ＭｅＬまたはＮＭｅＬ）、Ｎ−メチルホモリジン（ＮＭｅＨｏＫ）、Ｎα−メチルグルタミン（ＮＭｅＱ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、ノルバリン（Ｎｖａ）、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（Ｔｉｃ）、オクタヒドロインドール−２−カルボン酸（Ｏｉｃ）、３−（１−ナフチル）アラニン（１−Ｎａｌ）、３−（２−ナフチル）アラニン（２−Ｎａｌ）、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（Ｔｉｃ）、２−インダニルグリシン（ＩｇＩ）、パラ−ヨードフェニルアラニン（ｐＩ−Ｐｈｅ）、パラ−アミノフェニルアラニン（４ＡｍＰまたは４−アミノ−Ｐｈｅ）、４−グアニジノフェニルアラニン（Ｇｕｆ）、グリシルリジン（「Ｋ（Ｎε−ｇｌｙｃｙｌ）」または「Ｋ（ｇｌｙｃｙｌ）」または「Ｋ（ｇｌｙ）」と略される）、ニトロフェニルアラニン（ｎｉｔｒｏｐｈｅ）、アミノフェニルアラニン（ａｍｉｎｏｐｈｅまたはＡｍｉｎｏ−Ｐｈｅ）、ベンジルフェニルアラニン（ｂｅｎｚｙｌｐｈｅ）、γ−カルボキシグルタミン酸（γ−ｃａｒｂｏｘｙｇｌｕ）、ヒドロキシプロリン（ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏ）、ｐ−カルボキシル−フェニルアラニン（Ｃｐａ）、α−アミノアジピン酸（Ａａｄ）、Ｎα−メチルバリン（ＮＭｅＶａｌ）、Ｎ−α−メチルロイシン（ＮＭｅＬｅｕ）、Ｎα−メチルノルロイシン（ＮＭｅＮｌｅ）、シクロペンチルグリシン（Ｃｐｇ）、シクロヘキシルグリシン（Ｃｈｇ）、アセチルアルギニン（ａｃｅｔｙｌａｒｇ）、α，β−ジアミノプロピオン酸（Ｄｐｒ）、α，γ−ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、ジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）、シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）、４−メチル−フェニルアラニン（ＭｅＰｈｅ）、β，β−ジフェニル−アラニン（ＢｉＰｈＡ）、アミノ酪酸（Ａｂｕ）、４−フェニル−フェニルアラニン（またはビフェニルアラニン；４Ｂｉｐ）、α−アミノ−イソ酪酸（Ａｉｂ）、ベータ−アラニン、ベータ−アミノプロピオン酸、ピペリジン酸、アミノカプロン酸（ａｍｉｎｏｃａｐｒｉｏｉｃ ａｃｉｄ）、アミノへプタン酸、アミノピメリン酸、デスモシン、ジアミノピメリン酸、Ｎ−エチルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、ヒドロキシリジン、アロ−ヒドロキシリジン、イソデスモシン、アロ−イソロイシン、Ｎ−メチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン、Ｎ−メチルバリン、４−ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、γ−カルボキシグルタミン酸塩、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリジン、ε−Ｎ−アセチルリジン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、ω−メチルアルギニン、４−アミノ−Ｏ−フタル酸（４ＡＰＡ）、および他の同様のアミノ酸、ならびに具体的に列挙したアミノ酸のいずれの誘導体化型が挙げられる。

「単離核酸分子」という用語は、５’末端から３’末端までを読み取ったデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド塩基の一本鎖または二本鎖のポリマー（例えば、本明細書に記載のＣｌｅｃ−２細胞外ドメイン核酸配列）、またはその類似体を指し、全核酸を供給源細胞から単離する時に、ポリペプチド、ペプチド、脂質、炭水化物、ポリヌクレオチド、または他の材料の少なくとも約５０％から分離されたものであり、これらにより核酸が自然に見いだされる。好ましくは、単離核酸分子は、実質的に、いかなる他の汚染核酸分子、または、ポリペプチド生成への使用、または治療的、診断的、予防的、もしくは研究への使用を妨げる自然環境中に見いだされる核酸のいかなる他の分子も含まない。

「単離ポリペプチド」という用語は、ポリペプチド（例えば、本明細書に記載のＣＬＥＣ２細胞外ドメインポリペプチド配列）を指し、全核酸を供給源細胞から単離する時に、ポリペプチド、ペプチド、脂質、炭水化物、ポリヌクレオチド、または他の材料の少なくとも約５０％から分離されたものであり、これらにより核酸が自然に見いだされる。好ましくは、単離ポリペプチドは、実質的に、いかなる他の汚染ポリペプチド、または治療的、診断的、予防的、もしくは研究への使用を妨げる自然環境中に見いだされるいかなる他の汚染物質も含まない。

「コードすること」という用語は、１以上のアミノ酸をコードするポリヌクレオチド配列を指す。この用語は、開始コドンおよび終止コドンを必要としない。アミノ酸配列は、ポリヌクレオチド配列により得られる６種類の異なるリーディングフレームのいずれか１つにコードされ得る。

「同一の」およびパーセント「同一性」という用語は、２つ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈では、それと同じものである２以上の配列または部分配列を指す。「パーセント同一性」は、比較される分子のアミノ酸またはヌクレオチド間の同一残基のパーセントを意味し、比較される分子の最小サイズに基づいて計算される。これらの計算について、アライメントのギャップ（もしあるとするならば）は、ある特定の数理モデルまたはコンピュータプログラム（すなわち、「アルゴリズム」）により対処され得る。アライメントした核酸またはポリペプチドの同一性を計算するために使用され得る方法としては、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，（Ｌｅｓｋ， Ａ． Ｍ．， ｅｄ．），（１９８８）Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，（Ｓｍｉｔｈ， Ｄ． Ｗ．， ｅｄ．）， １９９３， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ， Ｐａｒｔ Ｉ，（Ｇｒｉｆｆｉｎ， Ａ． Ｍ．， ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ， Ｈ． Ｇ．， ｅｄｓ．）， １９９４， Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ： Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ， Ｇ．，（１９８７） Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ， Ｍ． ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ， Ｊ．， ｅｄｓ．）， １９９１， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｍ． Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ；およびＣａｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）ＳＩＡＭ Ｊ． Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ． ４８：１０７３に記載された方法が挙げられる。

パーセント同一性を計算する際、比較する配列は、配列間で最大の適合を生じるように整列される。パーセント同一性を決定するために使用されるコンピュータプログラムは、ＧＣＧプログラムパッケージであり、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄ Ｒｅｓ． １２：３８７； Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ， Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ， Ｍａｄｉｓｏｎ， ＷＩ）が挙げられる。コンピュータアルゴリズムＧＡＰは、パーセント配列同一性を決定すべき２つのポリペプチドまたはポリヌクレオチドを整列するために使用される。配列は、それぞれのアミノ酸またはヌクレオチドを最適に一致させるために整列される（アルゴリズムにより決定されるような「一致スパン（ｍａｔｃｈｅｄ ｓｐａｎ）」）。ギャップ開始ペナルティ（平均対角（ａｖｅｒａｇｅ ｄｉａｇｏｎａｌ）の３倍として計算され、ここで「平均対角」は使用される比較行列の対角の平均であり；「対角」は各完全アミノ酸一致を特定の比較行列により割り当てられるスコアまたは数値である）およびギャップ伸長ペナルティ（通常はギャップ開始ペナルティの１／１０である）、ならびにＰＡＭ２５０またはＢＬＯＳＵＭ６２等の比較行列（ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｍａｔｒｉｘ）が、アルゴリズムと併せて使用される。ある実施形態では、標準比較行列（Ｄａｙｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，（１９７８）Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：３４５−３５２ ｆｏｒ ｔｈｅ ＰＡＭ ２５０ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｍａｔｒｉｘ；Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． ８９：１０９１５−１０９１９ ｆｏｒ ｔｈｅ ＢＬＯＳＵＭ ６２ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｍａｔｒｉｘを参照のこと）もまた、アルゴリズムによって使用される。

ＧＡＰプログラムを使用してポリペプチドまたは塩基配列のパーセント同一性を決定するための推奨パラメータは以下のとおりである：
アルゴリズム：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．， １９７０， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ４８：４４３−４５３；
比較行列：Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ｅｔ ａｌ．， １９９２、前出によるＢＬＯＳＵＭ ６２；
ギャップペナルティ：１２（しかし末端ギャップについてペナルティは含まない）
ギャップ長ペナルティ：４
類似度のしきい値：０。

２つのアミノ酸配列を整列させるためのあるアライメントスキームにより、２つの配列の短い領域のみの適合を生じ得るが、また、２個の完全長配列間に有意に関連しない場合でも、この小さな整列された領域は非常に高い配列同一性を有し得る。したがって、選択されるアライメント方法（例えば、ＧＡＰプログラム）は、もし望むなら、標的ポリペプチドの少なくとも５０個の隣接アミノ酸におよぶアライメントを生じさせるために補正し得る。

「Ｃｌｅｃ−２阻害剤」または「ＣＬＥＣ２阻害剤」という用語は、Ｃｌｅｃ−２経路によるシグナル伝達に対し、阻害効果をもつ分子を指す。Ｃｌｅｃ−２阻害剤は、Ｃｌｅｃ−２受容体に結合する、またはＣｌｅｃ−２受容体のリガンドに結合する、または、Ｃｌｅｃ−２細胞外ドメインの受容体に結合する中和抗体を含んでいてもよい。Ｃｌｅｃ−２阻害剤はまた、Ｃｌｅｃ−２受容体の一部を含む分子、特にヒトＣｌｅｃ−２受容体の細胞外ドメインまたはその断片を含んでいてもよい。

「ＣＬＥＣ２ポリペプチド」および「ＣＬＥＣ２タンパク質」ならびに「Ｃｌｅｃ−２ポリペプチド」および「Ｃｌｅｃ−２タンパク質」ならびに「ＣＬＥＣ２受容体」および「Ｃｌｅｃ−２受容体」という用語は、同じ意味で使用され、哺乳類（例えば、ヒトまたはマウス等）で発現される天然由来の野生型ポリペプチドを意味する。本開示の目的で、「ＣＬＥＣ２ポリペプチド」および「ＣＬＥＣ２タンパク質」ならびに「Ｃｌｅｃ−２ポリペプチド」および「Ｃｌｅｃ−２タンパク質」ならびに「ＣＬＥＣ２受容体」および「Ｃｌｅｃ−２受容体」という用語は、同じ意味で使用し得、完全長ヒトアイソタイプ１Ｃｌｅｃ−２ポリペプチド、例えば２２９アミノ酸残基からなり、かつ、配列番号２の核酸配列によりコードされる配列番号１、細胞外ドメイン、例えば１７９アミノ酸からなり、かつ、配列番号４の核酸配列によりコードされる配列番号３であり、細胞質ドメイン（配列番号中の残基１〜３３）および膜貫通ドメイン（配列番号１の残基３４〜５４）が取り除かれた細胞外ドメインを含むいずれの形態、完全長ヒトアイソタイプ２、例えば１９６残基からなり、配列番号６の核酸配列によりコードされた配列番号５のいずれの形態、および細胞内ドメインおよび膜貫通ドメインが取り除かれた細胞外ドメインを含むＣＬＥＣ２ポリペプチドのいずれの形態、を指す。ＣＬＥＣ２ポリペプチドは、その必要はないが、遺伝子操作によってまたは細菌の発現プロセスの結果として導入されてもよいアミノ末端メチオニンを含み得る。

「ＣＬＥＣ２ポリペプチド」という用語はまた、天然由来のＣＬＥＣ２ポリペプチド配列（例えば、配列番号１、３または５）が修飾されたＣＬＥＣ２ポリペプチドを包含する。そのような修飾には、これに限定されないが、１以上のアミノ酸置換（非天然由来のアミノ酸、非天然由来のアミノ酸類似体、およびアミノ酸模倣体による置換を含む）が挙げられる。

様々な実施形態では、ＣＬＥＣ２ポリペプチドは、天然由来のＣＬＥＣ２ポリペプチド（例えば、配列番号１、３または５）と少なくとも約８５パーセント同一性を示すアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、ＣＬＥＣ２ポリペプチドは、天然由来のＣＬＥＣ２ポリペプチドアミノ酸配列（例えば、配列番号１、３または５）と少なくとも約９０パーセント、または約９５、９６、９７、９８、または９９パーセントの同一性を示すアミノ酸配列を含む。そのようなＣＬＥＣ２ポリペプチドは、その必要はないが、好ましくは、血糖値、インスリン濃度、もしくはトリグリセリド濃度の低下能力、または耐糖能を改善させる能力等の、野生型ＣＬＥＣ２ポリペプチドの少なくとも１つの活性を備えている。本発明はまた、そのようなＣＬＥＣ２ポリペプチド配列をコードする核酸分子を包含する。

本明細書に記載のように、ＣＬＥＣ２ポリペプチドは、細胞内ドメインおよび膜貫通ドメイン（配列番号３の残基１〜５４）を含むものか、または、細胞内ドメインおよび膜貫通ドメインが取り除かれたものであり得る（配列番号３に記載）。ＣＬＥＣ２ポリペプチドの天然由来の生物学的活性をもつ形態は、ホモ二量体である。場合によっては、ＣＬＥＣ２ポリペプチドは、対象の代謝性障害を治療または改善するために使用し得、対象と同じ種に由来するＣＬＥＣ２ポリペプチドの成熟形態での細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ２ポリペプチドはＣＬＥＣ２ポリペプチドの血清半減期を延長するために変更される。例えば、いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、当技術分野で公知の方法を使用して、免疫グロブリンの定常領域に融合される。

１つの実施形態では、ＣＬＥＣ２ポリペプチドは、ヒト免疫グロブリン定常領域に融合させたＣｌｅｃ−２ヒト細胞外ドメインを含み、かつ、以下の４１５アミノ酸配列を含み：

この配列は以下のＤＮＡ配列によりコードされている：

ポリペプチドは、好ましくは生物学的活性をもつ。様々なそれぞれの実施形態では、ＣＬＥＣ２ポリペプチドは、ＣＬＥＣ２成熟タンパク質の細胞外ドメイン（細胞質ドメインおよび膜貫通ドメインがＣＬＥＣ２完全長配列から取り除かれた）の天然由来形態と同等の、それ以上の、またはそれより低い生物学的活性をもつ。生物学的活性の例としては血糖値、インスリン濃度、もしくはトリグリセリド濃度の低下能力、または耐糖能の改善能力が挙げられる。

「治療有効用量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｄｏｓｅ）」および「治療有効量」という用語は、本明細書に使用される場合、研究者、獣医、医師、又は他の臨床専門家により探求される、組織系、動物またはヒトでの生物学的応答または薬剤応答（治療中の疾患または障害の症状の軽減または改善が含まれている）を引き出すＣＬＥＣ２ポリペプチドに特異的に結合するＣＬＥＣ２ポリペプチドまたはＣＬＥＣ２抗体の量、すなわち１以上の所望の生物学的応答または薬剤応答、例えば血糖値、インスリン濃度、もしくはトリグリセリド濃度の低下、または耐糖能もしくはインスリン感受性の改善の、識別可能なレベルを支持するＣＬＥＣ２ポリペプチドに特異的に結合するＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗体の量を意味する。

「上昇した（ｅｌｅｖａｔｅｄ）」という用語は、本明細書に使用される場合、医学界で基準として設定されているしきい値より高いレベルを意味する。例えば、いくつかの実施形態では、治療を受ける対象は、上昇したグルコース濃度、特に１００ｍｇ／ｄｌ以上の上昇した血糖値、特に１２６ｍｇ／ｄｌ以上の上昇した血糖値を含み得る。いくつかの実施形態では、治療を受ける対象は、上昇したインスリン濃度、特に２０ｍＵ／ｌ以上の上昇した血漿インスリン濃度、特に２４．９ｍＵ／ｌ以上の上昇した血漿インスリン濃度を含み得る。いくつかの実施形態では、治療を受ける対象は、上昇したトリグリセリド濃度、特に１７５ｍｇ／ｄｌ以上の上昇した血中トリグリセリド濃度、特に２００ｍｇ／ｄｌ以上の上昇した血中トリグリセリド濃度を含み得る。

「改善した（ｉｍｐｒｏｖｅｄ）」という用語は、本明細書に使用される場合、対象での応答または病的状態が、ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたはＣＬＥＣ２抗体の投与後に、投与前の対象での応答より良くなることを意味する。例えばＯＧＴＴ試験では、改善した応答とは、ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたはＣＬＥＣ２抗体の投与後の時点での血糖値が、ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたはＣＬＥＣ２抗体の初回投与前のＯＧＴＴ試験での血糖値と比較して低下していることである。

ＩＩ．ＣＬＥＣ２ポリペプチドおよび核酸
本明細書に開示のように、本開示により記載されるＣＬＥＣ２ポリペプチドは、標準の分子生物学的手法を使用して遺伝子操作および／または生成され得る。様々な例では、配列番号１、３または５の全てまたは一部を含み得るＣＬＥＣ２をコードする核酸配列は、適切なオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡから単離および／または増幅され得る。プライマーは、本明細書で提供される核酸のアミノ酸配列に基づき、標準の（ＲＴ）−ＰＣＲ増幅方法にしたがって設計され得る。次いで、増幅されたＣＬＥＣ２核酸は、好適なベクターにクローニングされ、ＤＮＡ配列分析により特徴化され得る。

本明細書で提供されるＣＬＥＣ２配列の全てまたは一部を単離または増幅する際のプローブとして使用するオリゴヌクレオチドは、標準の合成手法、例えば、ＤＮＡ自動合成装置を使用して設計または作製され得るか、またはＤＮＡのより長い配列から単離され得る。

ＩＩ．Ａ．天然由来および変異型ＣＬＥＣ２ポリペプチドおよびポリヌクレオチド配列
インビボで、ＣＬＥＣ２は２種類のアイソフォームで生じる。完全長ヒトＣＬＥＣ２アイソフォーム１の２２９アミノ酸配列は以下のとおりであり：

また、以下のＤＮＡ配列によりコードされる：

細胞外ドメインはアミノ酸第５１番目からアミノ酸第２２９番目までであり、以下の配列をもつ１７９アミノ酸長であり：

また、以下によってコードされる：

完全長ヒトＣＬＥＣ２アイソフォーム２の１９６アミノ酸配列は以下のとおりであり：

また、以下のＤＮＡ配列によってコードされる：

２２９アミノ酸の完全長マウスアイソフォーム１は以下のとおりであり：

また、以下のＤＮＡ配列によってコードされる：

マウスＣＬＥＣ２細胞外ドメインの１７９アミノ酸配列は以下のとおりであり：

また、以下のＤＮＡ配列によってコードされる：

本明細書に記載のように、「ＣＬＥＣ２ポリペプチド」という用語は、ヒトアミノ酸配列、配列番号１、３または５を含むＣＬＥＣ２ポリペプチドを指す。しかし、「ＣＬＥＣ２ポリペプチド」という用語はまた、天然由来のＧＤＦポリペプチド配列、例えば、配列番号１、３または５のアミノ酸配列とは、１以上のアミノ酸で異なるアミノ酸配列を含むポリペプチドを包含し、したがって配列は、配列番号１、３または５と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の同一性を示す。ＣＬＥＣ２ポリペプチドは、ＣＬＥＣ２ポリペプチドの特定の位置で、１以上のアミノ酸置換（保存的もしくは非保存的いずれかで、かつ天然由来または非天然由来のアミノ酸を使用して）を導入することにより生成され得る。

「保存的アミノ酸置換」には、天然アミノ酸残基（すなわち野生型ＣＬＥＣ２ポリペプチド配列の所定の位置で見出される残基）の非天然残基（すなわち野生型ＣＬＥＣ２ポリペプチド配列の所定の位置で見出されない残基）による置換が含まれ、したがって所定位置でのアミノ酸残基の極性または電荷の影響はほとんどまたは全くない。保存的アミノ酸置換はまた、代表的には、生物系の合成よりむしろペプチド化学合成法により組み込まれる非天然由来のアミノ酸残基を包含する。これらの残基には、ペプチド模倣物、およびアミノ酸部分の他の反転型または逆位型が含まれる。

天然由来の残基は、側鎖の共通の性質に基づき分類することができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性（ｎｅｕｔｒａｌ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ）：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

アミノ酸のさらなる群がまた、例えばＣｒｅｉｇｈｔｏｎ（１９８４）ＰＲＯＴＥＩＮＳ： ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ（２ｄ Ｅｄ． １９９３）， Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙに記載される原理を使用して系統化され得る。場合によっては、２以上のそのような性質に基づく置換をさらに特徴化するのに有用であり得る（例えば、Ｔｈｒ残基等の「低い極性」残基による置換は、適切な文脈では、高い保存的置換を表し得る）。

保存的置換は、これらの分類のうち１種類のあるメンバーの、同種類の別のメンバーへの交換に関連し得る。非保存的置換は、上記分類のうち１種類のあるメンバーの、別の種類のメンバーへの交換に関連し得る。

上記分類のうち既知の類似した生理化学的性質をもつ合成アミノ酸残基、希アミノ酸残基または修飾アミノ酸残基は、ある配列において「保存的」置換基としてある特定のアミノ酸残基に使用され得る。例えば、Ｄ−Ａｒｇ残基は、代表的なＬ−Ａｒｇ残基の置換基の役割を果たしてもよい。特定の置換が、２以上の上記分類に関して記載し得る場合もまたあり得る（例えば、小分子（ｓｍａｌｌ）で疎水性の残基による置換は、１つのアミノ酸を、上記分類の両方に記載される残基、または、両方の定義に一致するそのような残基と類似する生理化学的性質をもつ当技術分野に公知の他の合成、希少、もしくは修飾残基で置換することを意味する）。

本明細書で提供されるＣＬＥＣ２ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号２、４または６に縮重（ｄｅｇｅｎｅｒａｔｅ）したもの、および配列番号１、３、または５のポリペプチド変異型をコードするものを含む）は、本開示の他の態様を形成する。

ＩＩ．Ｂ． ＣＬＥＣ２ベクター
本明細書で提供されるＣＬＥＣ２核酸配列を発現させるため、適切なコード配列、例えば、配列番号２、４、６、８、１０、１１、または１２は、好適なベクターにクローニングされ得、そして好適な宿主に導入後、配列を発現させて当技術分野で公知の標準のクローニングおよび発現技術（例えばＳａｍｂｒｏｏｋ， Ｊ．， Ｆｒｉｔｓｈ， Ｅ． Ｆ．， ａｎｄ Ｍａｎｉａｔｉｓ， Ｔ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ２ｎｄ， ｅｄ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．， １９８９に記載）にしたがってコードされたポリペプチドを生成し得る。本発明はまた、本発明による核酸配列を含むそのようなベクターに関する。

「ベクター」は、（ａ）ポリペプチドコード核酸配列の発現を促進する；（ｂ）それにより得られたポリペプチドの生成を促進する；（ｃ）それを用いて標的細胞のトランスフェクション／形質転換を促進する；（ｄ）核酸配列の複製を促進する；（ｅ）核酸の安定性を促進する；（ｆ）核酸および／または形質転換された／トランスフェクトされた細胞の検出を促進する；および／または（ｇ）その他、ポリペプチドコード核酸に有利な生物学的および／または生理化学的機能を与える、送達担体（ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｖｅｈｉｃｌｅ）を指す。ベクターは、いずれの好適なベクターであり得、例えば染色体の、非染色体の、および合成された核酸ベクター（発現制御エレメント（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｌｅｍｅｎｔ）の好適なセットを含む核酸配列）が挙げられる。そのようなベクターの例としては、ＳＶ４０の派生物、細菌プラスミド、ファージＤＮＡ、バキュロウイルス、酵母プラスミド、プラスミドとファージＤＮＡの組合せに由来するベクター、およびウイルス核酸（ＲＮＡまたはＤＮＡ）ベクターが挙げられる。

組換え発現ベクターは、ＣＬＥＣ２タンパク質発現用に、原核生物（例えば大腸菌）または真核細胞（例えば、昆虫細胞、バキュロウイルス発現ベクターを使用して、酵母細胞、もしくは哺乳類細胞）で設計され得る。典型的な宿主細胞としては、クローン化および発現に使用される宿主細胞が挙げられ、例えば大腸菌株ＴＯＰ１０Ｆ’、ＴＯＰ１０、ＤＨ１０Ｂ、ＤＨ５ａ、ＨＢ１０１、Ｗ３１１０、ＢＬ２１（ＤＥ３）およびＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ、ＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、哺乳類細胞株ＣＨＯ、ＣＨＯ−Ｋ１、ＨＥＫ２９３、２９３−ＥＢＮＡ ｐＩＮベクター（Ｖａｎ Ｈｅｅｋｅ ＆ Ｓｃｈｕｓｔｅｒ， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６４： ５５０３−５５０９（１９８９）；ｐＥＴベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ， Ｍａｄｉｓｏｎ Ｗｉｓ．）が挙げられる。あるいは、組換え発現ベクターは、インビトロで、例えばＴ７プロモーター調節配列およびＴ７ポリメラーゼ、ならびにインビトロ翻訳系を使用して、転写および翻訳され得る。好ましくは、ベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含有するクローニング部位のプロモーター上流を含有する。プロモーター（オン・オフの切り替えが可能な）の例としては、ｌａｃプロモーター、Ｔ７プロモーター、ｔｒｃプロモーター、ｔａｃプロモーター、およびｔｒｐプロモーターが挙げられる。

したがって、本明細書では、組換えＣＬＥＣ２の発現を促進する核酸配列コードＣＬＥＣ２を含むベクターが提供される。様々な実施形態では、ベクターは、ＣＬＥＣ２の発現を調節する作動可能に連結された塩基配列を含む。ベクターは、いずれの好適なプロモーター、エンハンサー、および他の発現誘導性要素（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ−ｆａｃｉｌｉｔａｔｉｎｇ ｅｌｅｍｅｎｔ）を含むか、または、これらと関連するものであり得る。そのような要素の例としては、強発現プロモーター（例えば、ヒトＣＭＶ ＩＥプロモーター／エンハンサー、ＲＳＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＳＬ３−３プロモーター、ＭＭＴＶプロモーター、またはＨＩＶ ＬＴＲプロモーター、ＥＦ１αプロモーター、ＣＡＧプロモーター）、効果的なポリ（Ａ）終結配列、大腸菌のプラスミド産物の複製起点、選択可能なマーカーとしての抗生物質抵抗性遺伝子、および／または好都合なクローニング部位（例えば、ポリリンカー）が挙げられる。ベクターはまた、ＣＭＶ ＩＥ等の構成的プロモーターと対立するものとして、誘導性プロモーターを含み得る。一態様では、ＣＬＥＣ２ポリペプチドをコードする配列を含む核酸を提供し、当該配列は、肝臓または膵臓組織等の代謝に関連した組織での配列の発現を促進させる組織特異的プロモーターと作動可能に連結している。

ＩＩ．Ｃ． 宿主細胞
本開示の別の態様では、本明細書に開示のＣＬＥＣ２核酸およびベクターを含む宿主細胞が提供される。様々な実施形態では、ベクターまたは核酸が宿主細胞ゲノムに組み込まれ、他の実施形態では、ベクターまたは核酸が染色体外にある。

そのような核酸、ベクター、またはそのいずれかの組合せもしくは両方の組合せを含む組換え細胞、例えば酵母細胞、細菌細胞（例えば大腸菌）、および哺乳類細胞（例えば不死化哺乳類細胞）が提供される。様々な実施形態では、一体化されていない核酸（例えばプラスミド、コスミド、ファージミド、または線形発現要素（ｌｉｎｅａｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）等）を含み、ＣＬＥＣ２ポリペプチドの発現のための発現コードを含む細胞が提供される。

本明細書で提供されるＣＬＥＣ２ポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクターは、形質転換によってまたはトランスフェクションによって宿主細胞に導入され得る。細胞を発現ベクターにより形質転換する方法は、周知である。

ＣＬＥＣ２コード核酸は、宿主細胞もしくは宿主動物に、位置し得るおよび／またはウイルスベクターにより送達され得る。いずれの好適なウイルスベクターも、その容量において使用し得る。ウイルスベクターは、いずれの数のウイルスポリヌクレオチドを、単独で、または１以上のウイルスタンパク質との組み合わせで含み得、所望の宿主細胞での本発明の核酸の送達、複製、および／または発現を促進させる。ウイルスベクターは、ウイルス核酸とＣＬＥＣ２ポリペプチドコード核酸を含むウイルスゲノム、ウイルスタンパク質／核酸結合物、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）、または無傷のウイルス粒子の全体または一部を含むポリヌクレオチドであり得る。ウイルス粒子のウイルスベクターは、野生型ウイルス粒子または修飾されたウイルス粒子を含み得る。ウイルスベクターは、複製および／または発現に、別のベクターまたは野生型ウイルスの存在が必要なベクター（例えば、ウイルスベクターはヘルパー依存性のウイルスであり得る）、例えばアデノウイルスベクター単位複製配列等であり得る。代表的には、そのようなウイルスベクターは、野生型ウイルス粒子、または、導入遺伝子容量を増加させるため、または核酸（そのようなベクターの例としては、ヘルペスウイルス／ＡＡＶ単位複製配列が挙げられる）のトランスフェクションおよび／もしくは発現を補助するためにそのタンパク質および／または核酸内容物で修飾されたウイルス粒子からなる。代表的には、ウイルスベクターは、通常、ヒトに感染するウイルスに類似するおよび／または由来する。この点において、好適なウイルスベクター粒子としては、例えば、アデノウイルスベクター粒子（アデノウイルス科のウイルスのまたはそれらに由来するいずれのウイルスを含む）、アデノ関連ウイルスベクター粒子（ＡＡＶベクター粒子）、または他のパルボウイルスおよびパルボウイルスベクター粒子、パピローマウイルスベクター粒子、フラビウイルスベクター、アルファウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、レトロウイルスベクター（レンチウイルスベクターを含む）が挙げられる。

ＩＩ．Ｄ． ＣＬＥＣ２ポリペプチドの単離
本明細書に記載のように発現されたＣＬＥＣ２ポリペプチドは、標準のタンパク質精製方法を使用して単離され得る。ＣＬＥＣ２ポリペプチドは、それが天然に発現する細胞から単離され得、または遺伝子操作されてＣＬＥＣ２を発現する細胞、例えば天然にはＣＬＥＣ２を発現しない細胞から単離され得る。

ＣＬＥＣ２ポリペプチドを単離するために採用され得るタンパク質精製方法、ならびに関連する材料および試薬は、当技術分野で知られている。ＣＬＥＣ２ポリペプチドを精製する例示的な方法を本明細書の実施例において以下に記載する。ＣＬＥＣ２ポリペプチドの単離に有用であろう、さらなる精製方法が、Ｂｏｏｔｃｏｖ ＭＲ， １９９７， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９４：１１５１４−９， Ｆａｉｒｌｉｅ ＷＤ， ２０００， Ｇｅｎｅ ２５４： ６７−７６等の参考文献に見いだすことができる。

ＩＩＩ． 抗ＣＬＥＣ２抗体
本発明の抗体としては、ＣＬＥＣ２受容体に、例えば配列番号１、３、５、７、９のアミノ酸配列を含むポリペプチドに、またはＣＬＥＣ２受容体もしくはＣＬＥＣ２細胞外ドメインの受容体に対するリガンドに結合するモノクローナル抗体、が挙げられる。モノクローナル抗体は、当技術分野に公知のいずれの技術を使用して、例えば免疫化スケジュールの完了後にトランスジェニック動物から採取された脾臓細胞を不死化することによって、生成してもよい。脾臓細胞は、当技術分野に公知のいずれの技術を使用して、例えば脾臓細胞を骨髄腫細胞と融合することにより不死化され、ハイブリドーマを生成し得る。ハイブリドーマ生成融合手順に使用するための骨髄腫細胞は、好ましくは、非抗体生成のものであり、高い融合率（ｆｕｓｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）、および、酵素欠損をもつ（所望の融合細胞（ハイブリドーマ）のみの増殖を支持するある選択的培地で増殖できないようにする）。マウスの融合に使用される好適な細胞株の例としては、Ｓｐ−２０、Ｐ３−Ｘ６３／Ａｇ８、Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８．６５３、ＮＳ１／１．Ａｇ４１、Ｓｐ２１０−Ａｇ１４、ＦＯ、ＮＳＯ／Ｕ、ＭＰＣ−１１、ＭＰＣ１１−Ｘ４５−ＧＴＧ１．７、およびＳ１９４／５ＸＸＯ Ｂｕｌが挙げられ；ラットの融合に使用される細胞株の例としては、Ｒ２１０．ＲＣＹ３、Ｙ３−Ａｇ１．２．３、ＩＲ９８３Ｆ、および４Ｂ２１０が挙げられる。細胞融合に有用な他の細胞株には、Ｕ−２６６、ＧＭ１５００−ＧＲＧ２、ＬＩＣＲ−ＬＯＮ−ＨＭｙ２、およびＵＣ７２９−６がある。

場合によっては、ハイブリドーマ細胞株は、動物（例えば、ヒト免疫グロブリン配列をもつトランスジェニック動物）をＣＬＥＣ２受容体またはＣＬＥＣ２受容体抗原のリガンドにより免疫化し；免疫化した動物から脾臓細胞を採取し；採取した脾臓細胞を骨髄腫細胞株と融合して、これによりハイブリドーマ細胞を作製し；ハイブリドーマ細胞からハイブリドーマ細胞株を樹立し、そしてＣＬＥＣ２受容体またはＣＬＥＣ２受容体のリガンドに結合する抗体を生成するハイブリドーマ細胞株を同定することにより生成される。そのようなハイブリドーマ細胞株、およびそれらにより生成された抗ＣＬＥＣ２モノクローナル抗体は、本発明により包含する。

ハイブリドーマ細胞株により分泌されたモノクローナル抗体は、抗体技術分野で公知のいずれの有用な技術を使用して、精製され得る。ハイブリドーマまたはｍＡｂは、さらに、ＣＬＥＣ２誘導活性を阻止する能力などの特定の性質を備えたｍＡｂを同定するために、スクリーニングを行ってもよい。

前述の配列に基づくキメラ抗体およびヒト化抗体もまた、本発明により提供される。治療薬用のモノクローナル抗体は、使用前に、様々な方法で修飾されてもよい。一例は「キメラ」抗体であり、キメラ抗体は、共有結合で結合して機能的な免疫グロブリン軽鎖もしくは重鎖、またはその免疫機能性部分を生成した、異なる抗体からのタンパク質セグメントからなる抗体である。一般に、重鎖および／または軽鎖の一部は、特定の種に由来するか、または別の抗体の分類もしくは亜分類に属する抗体の対応する配列と同一性または相同性をもつが、本鎖の残部は、別の種に由来するか、または別の抗体の分類もしくは亜分類に属する抗体の対応する配列と同一性または相同性をもつ。キメラ抗体に関する方法について、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８１：６８５１−６８５５（１９８５）を参照されたい。ＣＤＲグラフティング法は、例えば、米国特許第６，１８０，３７０号、第５，６９３，７６２号、第５，６９３，７６１号、第５，５８５，０８９号、および第５，５３０，１０１号に記載されている。

一般に、キメラ抗体作製の目標は、対象とする患者種からのアミノ酸数が最大となるキメラを作り出すことである。一例は、抗体がある特定の種に由来するかまたは特定の抗体の分類もしくは亜分類に属する１以上の相補性決定領域(ＣＤＲ)を含むが、抗体鎖の残部が、別の種に由来するかまたは別の抗体の分類もしくは亜分類に属する抗体の対応する配列と同一性または相同性をもつ、「ＣＤＲ−グラフティングした」抗体である。ヒトでの使用について、齧歯類抗体からのＶ領域または選択されたＣＤＲが、多くの場合、ヒト抗体にグラフトされ、ヒト抗体の天然由来のＶ領域またはＣＤＲに置き換えられる。

本発明により提供されるキメラ抗体の有用な一つのタイプは、「ヒト化」抗体である。一般に、ヒト化抗体は、非ヒト動物で最初に産生（ｒａｉｓｅ）されたモノクローナル抗体から生成される。このモノクローナル抗体での、あるアミノ酸残基（代表的には、抗体の非抗原認識部分に由来する）は、対応するアイソタイプのヒト抗体の対応する残基と相同性をもつように修飾される。ヒト化は、例えば、ヒト抗体の対応する領域について齧歯類の可変領域の少なくとも一部を置換することによる様々な方法を使用して実施し得る（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号および第５，６９３，７６２号；Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．， １９８６， Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−２５； Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４−３６を参照のこと）。ある実施形態では、ヒト以外の種からの定常領域が、ヒト可変領域と共に使用されてハイブリッド抗体を生成し得る。

完全ヒト抗体もまた、提供される。ヒトの抗原への曝露なしに所定の抗原に特異的な完全ヒト抗体を作製するいくつかの方法が利用できる（「完全ヒト抗体」）。完全ヒト抗体の生成を実行するための一手段は、マウスの液性免疫系の「ヒト化」である。ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子座のマウス（内在性Ｉｇ遺伝子が不活性化された状態の）への導入は、完全ヒトモノクローナル抗体（ＭＡｂ）をマウス、すなわちいずれの望ましい抗原により免疫化され得る動物で生成する一つの手段である。完全ヒト抗体の使用は、マウスＭａｂまたはマウス誘導体化Ｍａｂをヒトに治療薬として投与することで時折生じる免疫原性応答およびアレルギー性応答を、最小限にし得る。

完全ヒト抗体は、内在性免疫グロブリン生成がない状態でヒト抗体のレパートリを生成することができるトランスジェニック動物（通常はマウス）を免疫化することにより生成され得る。本目的の抗原は、代表的には、６以上の隣接アミノ酸を有し、また、随意に、ハプテン等の担体と結合する。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．， １９９３， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０：２５５１−２５５５； Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．， １９９３， Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５−２５８；およびＢｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， １９９３， Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ７：３３を参照されたい。そのような方法の一例では、トランスジェニック動物は、マウスの重鎖および軽鎖免疫グロブリン鎖をコードする内在性マウス免疫グロブリン遺伝子座をその中からなくし、ヒトの重鎖および軽鎖タンパク質をコードする遺伝子座を含有するヒトゲノムＤＮＡのマウスゲノム大断片に挿入することにより、作製される。部分的には、修飾された動物（ヒト免疫グロブリン遺伝子座の完全な補体（ｆｕｌｌ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）に満たない）は、次いで、異種交配（ｃｒｏｓｓ−ｂｒｅｄ）させて、所望の免疫系修飾の全てをもつ動物を得る。免疫原を投与すると、これらのトランスジェニック動物は、免疫原に免疫特異性をもつが可変領域を含むマウスアミノ酸配列よりむしろヒトアミノ酸配列を有する抗体を生成する。そのような方法のさらなる詳細について、例えば、国際公開第９６／３３７３５号および国際公開第９４／０２６０２号を参照されたい。ヒト抗体を作製するトランスジェニックマウスに関するさらなる方法は、米国特許第５，５４５，８０７号；第６，７１３，６１０号；第６，６７３，９８６号；第６，１６２，９６３号；第５，５４５，８０７号；第６，３００，１２９号；第６，２５５，４５８号；第５，８７７，３９７号；第５，８７４，２９９号、および第５，５４５，８０６号；ＰＣＴ公報、国際公開第９１／１０７４１号、国際公開第９０／０４０３６号、ならびに欧州特許第５４６０７３Ｂ１号および欧州特許第５４６０７３Ａ１号に記載されている。

上に記載のトランスジェニックマウス（本明細書では「ＨｕＭａｂ」マウスと称する）は、内在性μおよびカッパ鎖遺伝子座を不活性化する標的突然変異株（ｔａｒｇｅｔｅｄ ｍｕｔａｔｉｏｎ）と共に、再配列していない（ｕｎｒｅａｒｒａｎｇｅｄ）ヒト重鎖（μおよびγ）およびカッパ軽鎖の免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子小遺伝子座を含有する（Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｎａｔｕｒｅ ３６８： ８５６−８５９）。

したがって、上述のマウスに、マウスＩｇＭまたはカッパの発現の低下がみられ、免疫化に応答して、そして、ヒトの重鎖および軽鎖導入遺伝子がクラススイッチおよび体細胞突然変異を受けて、高親和性ヒトＩｇＧカッパモノクローナル抗体が生成される（Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．， 前出．；Ｌｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ， １９９５， Ｉｎｔｅｒｎ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １３： ６５−９３；Ｈａｒｄｉｎｇ ａｎｄ Ｌｏｎｂｅｒｇ， １９９５， Ａｎｎ． Ｎ．Ｙ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ ７６４： ５３６−５４６）。ＨｕＭａｂマウスの調製は、Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．， １９９２， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ２０： ６２８７−６２９５；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．， １９９３， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５： ６４７−６５６；Ｔｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５２： ２９１２−２９２０；Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｎａｔｕｒｅ ３６８： ８５６−８５９；Ｌｏｎｂｅｒｇ， １９９４， Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １１３： ４９−１０１；Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６： ５７９−５９１；Ｌｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ， １９９５， Ｉｎｔｅｒｎ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １３： ６５−９３；Ｈａｒｄｉｎｇ ａｎｄ Ｌｏｎｂｅｒｇ， １９９５， Ａｎｎ． Ｎ．Ｙ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ７６４： ５３６−５４６；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．， １９９６， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４： ８４５−８５１に、詳細に記載されている。さらに米国特許第５，５４５，８０６号；第５，５６９，８２５号；第５，６２５，１２６号；第５，６３３，４２５号；第５，７８９，６５０号；第５，８７７，３９７号；第５，６６１，０１６号；第５，８１４，３１８号；第５，８７４，２９９号；および第５，７７０，４２９号；ならびに米国特許第５，５４５，８０７号、国際公開第９３／１２２７号；国際公開第９２／２２６４６号；および国際公開第９２／０３９１８号を参照のこと。これらのトランスジェニックマウスでヒト抗体を生成するために利用される技術はまた、国際公開第９８／２４８９３号、およびＭｅｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．， １９９７， Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５： １４６−１５６に記載されている。

ハイブリドーマ技術を使用して、所望の特異性を備える抗原特異的ヒトＭＡｂが、上に記載のトランスジェニックマウス等より生成および選択され得る。そのような抗体は、好適なベクターおよび宿主細胞を使用して、クローニングおよび発現されてもよい。

本発明の完全ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリに由来するものであり得る（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２７：３８１；およびＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２２：５８１に記載）。ファージディスプレイ法は、糸状バクテリオファージ表面での抗体レパートリのディスプレイ、およびその後の最適な抗体と結合することによるファージの選択により、免疫選択を模倣する。そのような技術の一つがＰＣＴ公開番号、国際公開第９９／１０４９４号に記載され、そのようなアプローチを使用してＭＰＬ−およびｍｓｋ−受容体について高親和性かつ機能的なアゴニスト抗体（ａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）を単離することが記載されている。

本明細書で提供される抗ＣＬＥＣ２剤はまた、ＣＬＥＣ２受容体とリガンド間の結合を阻止または低減させて、これによりＣＬＥＣ２経路によるシグナル伝達を阻害してもよい。本剤は、抗体またはその免疫機能性断片であり得、したがって、本剤には天然由来の構造を備えた抗体、ならびに抗原結合ドメインをもつポリペプチド（例えば，ドメイン抗体）が含まれる。抗体および断片を使用して、各種の代謝性疾患を治療し得る。抗体の生成に有用な核酸分子、ベクター、および宿主細胞もまた提供される。

配列番号１、３もしくは５のアミノ酸配列を含むＣＬＥＣ２ポリペプチド、または配列番号１、３もしくは５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９８％の同一性をもつポリペプチドと特異的に結合する単離された抗体またはその免疫機能性断片もまた、それぞれ含まれる。

ＩＶ． ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたはＣＬＥＣ２抗体を含む医薬組成物
ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体を含む医薬組成物が提供される。そのようなＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体の医薬組成物は、ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体の治療有効量を、投与形態を適合するために選択された薬学的または生理学的に許容される処方薬剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｇｅｎｔ）と混合して含み得る。「薬学的に許容される担体」または「生理学的に許容される担体」という用語は、本明細書に使用される場合、ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体の、ヒトまたは非ヒト対象への送達を達成するまたは増強させるのに好適な１以上の処方薬剤を指す。本用語には、生理学的に適合性をもついずれのおよび全ての溶媒、分散媒、被覆剤、抗菌および抗真菌剤、等張剤、ならびに吸収遅延剤等が含まれる。薬学的に許容される担体の例としては、１以上の、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ブドウ糖（ｄｅｘｔｒｏｓｅ）、グリセロール、エタノール等、ならびにそれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの場合では、医薬組成物中に、等張剤、例えば、糖質、多価アルコール（例えばマンニトール）、ソルビトール、または塩化ナトリウムを含むことが好ましい。薬学的に許容される物質、ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体の保存期間を延長または有効性を増進させる、例えば湿潤性のまたは少量の補助物質（湿潤性剤もしくは乳化剤、保存剤または緩衝液等）もまた、担体として、または担体成分として機能し得る。許容される薬学的に許容される担体は、好ましくは、使用する服用量および濃度で受容者に非毒性である。

医薬組成物は、例えば、ｐＨ、オスモル濃度、粘度、清澄性、色、等張性、臭い、無菌性、安定性、溶解速度もしくは放出速度、吸着、または組成物の浸透性を変更、維持、または保持する処方薬剤を含有し得る。好適な処方薬剤としては、これに限定されないが、アミノ酸（例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリジン等）、抗菌剤、酸化防止剤（例えばアスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、または亜硫酸水素ナトリウム等）、緩衝剤（例えばホウ酸塩、重炭酸塩、トリス−ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩、または他の有機酸等）、バルキング剤（ｂｕｌｋｉｎｇ ａｇｅｎｔ）（例えばマンニトールまたはグリシン）、キレート剤（例えばエチレンジアミン４酢酸（ＥＤＴＡ）等）、錯化剤（例えばカフェイン、ポリビニルピロリドン、β−シクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン等）、充填剤（ｆｉｌｌｅｒ）、単糖類、二糖類、および他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリン等）、タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン等）、着色剤、着香料および希釈剤、乳化剤、親水性ポリマー（例えばポリビニルピロリドン等）、低分子量ポリペプチド、塩形成対イオン（ナトリウム等）、保存剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸、または過酸化水素等）、溶媒（例えばグリセリン、プロピレングリコール、またはポリエチレングリコール等）、糖アルコール（例えばマンニトールまたはソルビトール等）、懸濁剤、界面活性剤または湿潤剤（例えばプルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）；ＰＥＧ；ソルビタンエステル類；ポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０等のポリソルベート類；Ｔｒｉｔｏｎ；トロメタミン；レシチン；コレステロールまたはチロキサポール（ｔｙｌｏｘａｐａｌ）等）、安定促進剤（スクロースまたはソルビトール等）、張度増強剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ａｇｅｎｔ）（ハロゲン化アルカリ金属、好ましくは、塩化ナトリウムもしくは塩化カリウム、またはマンニトール、ソルビトール、等）、送達担体、希釈剤、賦形剤および／または補助薬（例えば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ： ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹ， １９ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，（１９９５）；Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ．， ６６６１）， １−１９（１９７７）を参照のこと）が挙げられる。さらなる関連する原理、方法、および薬剤は、例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．， ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＤＯＳＡＧＥ ＦＯＲＭＳ−ＤＩＳＰＥＲＳＥ ＳＹＳＴＥＭＳ（２ｎｄ ｅｄ．， ｖｏｌ． ３， １９９８）；Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．， ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＤＯＳＡＧＥ ＦＯＲＭＳ ＆ ＤＲＵＧ ＤＥＬＩＶＥＲＹ ＳＹＳＴＥＭＳ（７ｔｈ ｅｄ． ２０００）；Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ， ＴＨＥ ＥＸＴＲＡ ＰＨＡＲＭＡＣＯＰＥＩＡ（３１ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ）， Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ（１６ｔｈ−２０^ｔｈ ａｎｄ ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ ｅｄｉｔｉｏｎｓ）；Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ Ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ， Ｅｄｓ．（９ｔｈ ｅｄ．−−１９９６）；Ｗｉｌｓｏｎ ａｎｄ Ｇｉｓｖｏｌｄｓ’ ＴＥＸＴＢＯＯＫ ＯＦ ＯＲＧＡＮＩＣ ＭＥＤＩＣＩＮＡＬ ＡＮＤ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ， Ｄｅｌｇａｄｏ ａｎｄ Ｒｅｍｅｒｓ， Ｅｄｓ．（１０ｔｈ ｅｄ．， １９９８）に、記載されている。薬学的に許容される組成物の製剤原理もまた、例えば、Ａｕｌｔｏｎ， ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＳ： ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＯＦ ＤＯＳＡＧＥ ＦＯＲＭ ＤＥＳＩＧＮ， Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）（１９８８）、ＥＸＴＥＭＰＯＲＡＮＥＯＵＳ ＯＲＡＬ ＬＩＱＵＩＤ ＤＯＳＡＧＥ ＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮＳ， ＣＳＨＰ（１９９８）（いずれの目的のため参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。

最適な医薬組成物は、例えば、意図する投与経路、送達形式、および所望の服用量に応じて、当業者により決定されるものである（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ、前出を参照のこと）。そのような組成物は、ＣＬＥＣ２ポリペプチドの、物理的状態、安定性、インビボ放出速度、およびインビボ除去速度に影響を与え得る。

医薬組成物の主要なビヒクル（ｖｅｈｉｃｌｅ）または担体は、本来、水性または非水性のいずれかであり得る。例えば、注入用の好適なビヒクルまたは担体は、水、生理食塩水、または人工脳脊髄液であり得、場合により非経口投与用の組成物によく見られる他の材料が補充される。中性に緩衝化した生理食塩水または血清アルブミンと混合した生理食塩水は、さらなる例示的なビヒクルである。他の例示的な医薬組成物は、約ｐＨ７．０〜８．５のトリス緩衝液、または約ｐＨ４．０〜５．５の酢酸塩緩衝液を含み、これらの緩衝液はソルビトールまたは好適な代替物を含み得る。本発明の１つの実施形態では、ＦＧＦ２１ポリペプチド突然変異体組成物は、保存のために、所望の程度の純度をもつ選択された組成物を随意的な処方薬剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ、前出）と混合して、凍結乾燥したケーキまたは水溶液の形態で、調製され得る。さらにまた、ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体生成物は、スクロース等の適切な賦形剤を使用して、凍結乾燥物として製剤され得る。

ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体医薬組成物は、非経口送達用に選択され得る。あるいは、組成物は、吸入用、または経口等の消化管を介した送達用に選択され得る。そのような薬学的に許容される組成物の調製は、当業者の技術範囲内である。

処方成分（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）は、投与部位に許容される濃度で存在する。例えば、緩衝液は、組成物を生理的ｐＨ、またはやや低いｐＨ、代表的にはｐＨ約５〜約８の範囲内に維持するために使用される。

非経口投与を計画している場合、本発明で使用する治療組成物は、薬学的に許容されるビヒクルに所望のＣＬＥＣ２ポリペプチドを含む、発熱物質を含まない非経口的に許容される水溶液の形態であり得る。特に、非経口注入用の好適なビヒクルは、滅菌蒸留水であり、滅菌蒸留水中で、ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体が滅菌性の等張液として製剤され、適切に保存される。さらに別の調製物は、注入可能なミクロスフェア、生体侵食性（ｂｉｏ−ｅｒｏｄｉｂｌｅ）粒子、ポリマー化合物（例えばポリ乳酸またはポリグリコール酸等）、ビーズ、またはリポソーム等の薬剤と所望の分子との製剤を含み、本製剤により、次いで蓄積注入により送達され得る生成物の制御または持続した放出が可能となる。ヒアルロン酸もまた、使用され得、これは循環の継続時間を持続させる効果を有する。所望の分子の導入に好適な他の手段としては、移植可能な薬剤送達装置が挙げられる。

１つの実施形態では、医薬組成物は、吸入用に製剤され得る。例えば、ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体等のＣＬＥＣ２阻害剤は、吸入用に乾燥粉末として製剤され得る。ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体の吸入溶液もまた、エアロゾル送達用の噴射剤（ｐｒｏｐｅｌｌａｎｔ）を用いて製剤し得る。更に別の実施形態では、溶液は噴霧化され得る。経肺投与がさらに国際公開第９４／２００６９号に記載され、化学的に修飾されたタンパク質の経肺送達について記載されている。

ある製剤が経口投与され得ることも考えられる。本発明の１つの実施形態では、この投与方法で投与されるＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体は、錠剤およびカプセル等の固形剤形の調合慣習的に使用される上記担体と共に、またはなしで製剤され得る。例えば、カプセルは、製剤の活性部分が、消化管でバイオアベイラビリティ（ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ）が最大でかつ前全身分解（ｐｒｅ−ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）が最小となる時点で放出するように設計され得る。さらなる薬剤が、ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体の吸収を高めるために含まれ得る。希釈剤、香味料、低融点ワックス、植物油、潤滑剤、懸濁化剤、錠剤崩壊剤、および結合剤もまた、利用し得る。

別の医薬組成物は、錠剤製造に好適な非毒性の賦形剤との混合物中に、有効量のＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体を含み得る。滅菌水または別の適切なビヒクルでの錠剤の溶解により、溶液は、単位用量形態で調製し得る。好適な賦形剤としては、これに限定されないが、不活性希釈剤（例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムもしくは重炭酸ナトリウム、ラクトース、またはリン酸カルシウム等）；または結合剤（例えばスターチ、ゼラチン、もしくはアカシア等）；または潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、もしくはタルク等）が挙げられる。

さらなるＣＬＥＣ２ポリペプチド医薬組成物は、当業者に明らかであり、持続送達または制御送達製剤中にＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体を含む製剤を含む。各種の他の持続送達または制御送達手段（例えば、リポソーム担体、生体侵食性微粒子もしくは多孔性ビーズ、および蓄積注入等）を製剤する技術もまた、当業者に公知である（例えば、国際公開第９３／１５７２２号（医薬組成物の送達についての多孔性ポリマー微粒子の制御放出が記載されている）、およびＷｉｓｃｈｋｅ ＆ Ｓｃｈｗｅｎｄｅｍａｎ， ２００８， Ｉｎｔ． Ｊ． Ｐｈａｒｍ． ３６４： ２９８−３２７およびＦｒｅｉｂｅｒｇ ＆ Ｚｈｕ， ２００４， Ｉｎｔ． Ｊ． Ｐｈａｒｍ． ２８２： １−１８（ミクロスフェア／微粒子の調合および使用が記載されている）を参照のこと）。本明細書に記載のように、ハイドロゲルは、持続送達製剤または制御送達製剤の一例である。

持続放出調製物のさらなる例としては、成形品の形態（例えばフィルム、またはマイクロカプセル）での半透過性ポリマーマトリックスが挙げられる。持続放出マトリックスには、ポリエステル、ハイドロゲル、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号および欧州特許第０ ０５８ ４８１号）、Ｌ−グルタミン酸およびγ−エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．， １９８３， Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２： ５４７−５６）、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）（Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， １９８１， Ｊ． Ｂｉｏｍｅｄ． Ｍａｔｅｒ． Ｒｅｓ． １５： １６７−２７７およびＬａｎｇｅｒ， １９８２， Ｃｈｅｍ． Ｔｅｃｈ． １２： ９８−１０５）、エチレンビニルアセテート（Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．、前出）またはポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸（欧州特許第０ １３３ ９８８号）が含まれる。持続放出組成物にはまた、リポソームが含まれ、これは、当技術分野に公知のいくつかの方法のいずれによっても調製され得る。例えば、Ｅｐｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．， １９８５， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． ８２： ３６８８−９２；および欧州特許第０ ０３６ ６７６号、第０ ０８８ ０４６号、および第０ １４３ ９４９号を参照のこと。

インビボ投与に使用されるＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体医薬組成物は、代表的には無菌状態であるべきである。これは、無菌濾過膜による濾過によって達成し得る。組成物が凍結乾燥される場合、本方法を使用した滅菌は、凍結乾燥および再構成の前または後のいずれかに行い得る。非経口投与用の組成物は、凍結乾燥された形態または溶液で保管し得る。さらに、非経口組成物は、一般に、アクセスポートを備えた容器、例えば静脈注射用溶液バッグ（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｂａｇ）、または皮下用注射針で貫通可能なストッパーを備えたバイアルに入れられる。

医薬組成物が製剤されるとすぐに、滅菌バイアルに溶液、懸濁液、ゲル、乳液、固形物として、または脱水したもしくは凍結乾燥した粉末として保管され得る。そのような製剤は、すぐに使用できる形態、または投与前に再構成が必要な形態のいずれの形態（例えば、凍結乾燥）でも保管し得る。

特定の実施形態では、本発明は、単回用量用の投与単位を生成するキットに関する。キットは、乾燥タンパク質をもつ第一の容器と水性製剤をもつ第二の容器の両方を各々含有し得る。また本発明の権利範囲内に、単室および複室薬剤充填済みシリンジ（ｐｒｅ−ｆｉｌｌｅｄ ｓｙｒｉｎｇｅ）（例えば、液体シリンジ（ｌｉｑｕｉｄ ｓｙｒｉｎｇｅ）および分散シリンジ（ｌｙｏｓｙｒｉｎｇｅ）等）を含有するキットが含まれる。

治療用に使用されるＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体医薬組成物の有効量は、例えば治療の背景および目的に応じる。したがって、治療に適切な服用量濃度が送達される分子、ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体が使用される指標、投与経路、ならびに患者のサイズ（体重、体表面、または器官サイズ）および病的状態（年齢および全体的な健康状態）により、部分的に異なることが、当業者に理解される。したがって、臨床医は、最適な治療効果を得るために、服用量を力価決定（ｔｉｔｅｒ）し、また投与経路を変更し得る。代表的な服用量は、約０．１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、またはそれ以上の範囲であり、上記の因子に応じる。

服用頻度は、使用する製剤でのＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体の薬物動態パラメータに応じる。代表的には、臨床医は、所望の効果を達成する服用量に達するまで組成物を投与する。したがって、組成物は、単回用量として、経時的な２回以上の用量（所望の分子の同一量を含んでも含まなくてもよい）として、または移植装置またはカテーテルを介した連続的な注入として投与され得る。適切な服用量のさらなる改良は、当業者により慣用的になされ、当業者に慣用的に実施される課題の範囲内である。適切な服用量は、適切な用量−応答データの使用により確認され得る。

医薬組成物の投与経路は、公知の方法、例えば、経口で；静脈内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、門脈内、または病巣内経路による注入で；持続放出系（これもまた注入されてもよい）で；または移植装置による方法、に従う。所望される場合、組成物は、ボーラス投与注入により、または点滴により持続的に、または移植装置により、投与され得る。

あるいは、またはさらに、組成物は、所望の分子が吸収または封入された膜、スポンジ、または他の適切な材料の移植により局所的に投与し得る。移植装置を使用する場合、装置はいずれの好適な組織または器官に移植され得、また、所望の分子の送達は、拡散による、持続放出型のボーラス投与、または連続投与であり得る。

薬剤、例えば、ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体を所定の速度で送達するために、すなわち薬剤濃度が長期間にわたり所望の治療有効濃度を維持し得るように、各種の様々なアプローチを利用し得る。一例では、ゼラチン（例えば、ウシゼラチン、ヒトゼラチンまたは別の供給源からのゼラチン）等のポリマー、または天然由来のもしくは合成して生成したポリマーを含むハイドロゲルを利用し得る。ポリマー（例えば、ゼラチン）のいずれの百分率も、ハイドロゲルに、例えば５、１０、１５または２０％等で利用し得る。適切な濃度の選択は、各種の因子、例えば所望される治療プロファイルおよび治療用分子の薬物動態等に応じる。

ハイドロゲルに組み込まれ得るポリマーの例としては、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリエチレンオキシド、ポリエチレンオキシド−コ−ポリプロピレンオキシド、コ−ポリエチレンオキシドブロックもしくはランダムコポリマー、ポリビニルアルコール、ポリ（ビニルピロリジノン）、ポリ（アミノ酸）、デキストラン、ヘパリン、多糖類、ポリエーテル類等が挙げられる。

ハイドロゲル製剤を作製する際に考えられ得る別の因子は、ハイドロゲルと架橋剤との架橋度である。１つの実施形態では、架橋はメタクリル酸無水物を含むメタクリル化（ｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｉｏｎ）反応物を介してなし得る。場合によっては、高い架橋度が望ましいこともあるが、他の場合によっては、より低い架橋度が好まれる。いくつかの場合、より高い架橋度が比較的長い持続放出にもたらされる。より高い架橋度により、より強固なハイドロゲルと、より長い薬剤送達期間がもたらされるであろう。

ポリマーの架橋剤（例えば、メタクリル酸無水物）に対するポリマーのいずれの比率も所望の性質を備えるハイドロゲルを作製するために使用され得る。例えば、架橋剤に対するポリマーの比率は、例えば、８：１、１６：１、２４：１、または３２：１であり得る。例えば、ハイドロゲルポリマーがゼラチンであり、また架橋剤がメタクリル酸塩である場合、８：１、１６：１、２４：１、または３２：１のメタクリル酸無水物（ｍｅｔｈｙａｃｒｙｌｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）：ゼラチンの比率が使用され得る。

Ｖ． ＣＬＥＣ２ポリペプチドおよび抗体の治療用途
ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体は、代謝性疾患または障害を治療、診断、または改善するために使用され得る。１つの実施形態では、治療される代謝性障害は、糖尿病、例えば２型糖尿病である。別の実施形態では、代謝性疾患または障害は肥満症である。他の実施形態では、代謝性疾患または障害は、グルコース濃度上昇、インスリン濃度上昇、トリグリセリド濃度上昇、または耐糖能低下またはインスリン非感受性である。例えば、ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体を使用して治療または改善され得る代謝性疾患または障害としては、ヒト対象が１２５ｍｇ／ｄＬ以上、例えば１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００ｍｇ／ｄＬまたは２００ｍｇ／ｄＬ以上の空腹時血糖値をもつ状態が挙げられる。血糖値は、施餌もしくは絶食状態で、または無作為に決定され得る。代謝性疾患または障害はまた、対象が代謝性疾患を発症するリスクが高い病的状態を含み得る。ヒト対象について、そのようは病的状態には、１００ｍｇ／ｄＬの空腹時血糖値が含まれる。ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体を含む医薬組成物を使用して治療され得る病的状態はまた、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃａｒｅ ｉｎ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ−２０１１， Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ， Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ Ｖｏｌ． ３４， Ｎｏ． Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ １， Ｓ１１−Ｓ６１， ２０１０に見出すことができ、これらは参照によって本明細書に組み込まれる。

適用では、代謝性障害または病的状態（例えば、２型糖尿病、グルコース濃度上昇、インスリン濃度上昇、インスリン耐性、および耐糖能低下）は、抗ＣＬＥＣ２抗体またはＣＬＥＣ２ポリペプチド、例えば配列番号１、３、５または１２等のヒトＣＬＥＣ２ポリペプチドの治療有効用量を、治療が必要な患者に投与することによって治療され得る。投与は、本明細書に記載のように、ＩＶ注入、腹腔内（ＩＰ）注入、皮下注入、筋肉内注入、または、錠剤または液体形状の形態での経口投与等により、実施され得る。場合によっては、ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体の、治療効果のあるまたは好ましい用量は、臨床医により決定される。ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体の治療有効用量は、とりわけ投与スケジュール、投与される薬剤の単位用量、ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体の投与の他の治療薬との組み合わせの有無、受容者の免疫状態および健康状態、に応じる。「治療有効用量」という用語は、本明細書に使用される場合、研究者、獣医、医師、又は他の臨床専門家により探求される、組織系、動物またはヒトでの生物学的応答または薬剤応答（治療中の疾患または障害の症状の軽減または改善が含まれている）を引き出すＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体の量、すなわち１以上の所望の生物学的応答または薬剤応答、例えば血糖値、インスリン、トリグリセリド、もしくはコレステロール値の低下；体重の減少；または耐糖能、エネルギー消費、もしくはインスリン感受性の改善の、識別可能なレベルを支持するＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体の量を意味する。

ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体の治療有効用量はまた、所望の結果によって異なり得ることに留意される。したがって、例えば、低い血糖値が示される状況下では、ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体の用量は、それに応じて、比較的低い血糖値を望む用量より多くなる。逆に、高い血糖値が示される状況下では、ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体の用量は、それに応じて、比較的高い血糖値を望む用量より少なくなる。

様々な実施形態では、対象は、１００ｍｇ／ｄＬ以上の血糖値を有し、かつＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体で治療され得る、ヒトである。

１つの実施形態では、本開示の方法は、対象での１以上の代謝関連化合物の基準濃度、例えばグルコース濃度、インスリン濃度、トリグリセリド濃度を最初に測定することを含む。次いで、ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体を含む医薬組成物を対象に投与する。所望の期間後、対象での１以上の代謝関連化合物（例えば、血中グルコース、インスリン、トリグリセリド）の濃度を再度測定する。次いで、対象での代謝関連化合物の相対的変動を決定するため、２つの濃度を比較し得る。比較結果に応じて、ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体、分子を含む医薬組成物の別の用量を投与して、１以上の代謝関連化合物の所望の濃度を達成し得る。

ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体を含む医薬組成物は、別の化合物と共投与し得ることに留意される。ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体と共投与される化合物の同一性および性質は、治療または改善させるべき病的状態の性質に応じる。ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体を含む医薬組成物との組合せで投与され得る化合物の非限定的な例としては、ロシグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｔｉｚｏｎｅ）、ピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔｉｚｏｎｅ）、レパグリニド、ナテグリニド、メトホルミン、エクセナチド、シタグリプチン（ｓｔｉａｇｌｉｐｔｉｎ）、プラムリンチド、グリピジド、グリメプリド（ｇｌｉｍｅｐｒｉｒｉｄｅ）、アカルボース、およびミグリトールが挙げられる。

ＶＩ． キット
本開示の方法を実践するキットもまた提供される。そのようなキットは、本明細書に記載のような医薬組成物を含み得、本明細書で提供されるペプチドまたはタンパク質をコードする核酸、そのような核酸を含むベクターおよび細胞、ならびに滅菌容器に提供され得るそのような核酸含有化合物を含む。随意に、提供される医薬組成物をどのように代謝性障害の治療に使用するかについての使用説明書もまた含まれ得、または、患者もしくは医療サービス提供者（ｍｅｄｉｃａｌ ｓｅｒｖｉｃｅ ｐｒｏｖｉｄｅｒ）に都合のよい形に作られる。

一態様では、キットは、（ａ）ＣＬＥＣ２ポリペプチドまたは抗ＣＬＥＣ２抗体の治療有効量を含む医薬組成物、および（ｂ）医薬組成物用の１以上の容器を含む。そのようなキットはまた、その使用のための使用説明書を含み得；使用説明書は治療中の正確な代謝性障害に合わせることができる。使用説明書は、キットに提供される物質（ｍａｔｅｒｉａｌ）の用途と性質を記載し得る。ある実施形態では、キットには、患者が、代謝性障害（例えば、グルコース濃度上昇、インスリン濃度上昇、およびトリグリセリド濃度上昇、耐糖能低下、インスリン感受性低下ならびに／または２型糖尿病等）を治療するための投与を実行するための使用説明書が含まれる。

使用説明書は、基材（例えば、紙またはプラスチック等）に印刷され得、また、添付文書としてキット内に、キットの容器またはその構成部品（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）（例えば、梱包に関連する）に表示するなどして存在する。他の実施形態では、使用説明書は、好適なコンピュータ可読記憶媒体（例えばＣＤ−ＲＯＭ、ディスケット等）に存在する電子記憶データファイルとして存在し得る。さらに他の実施形態では、実際の使用説明書はキットに存在しないが、使用説明書をリモートソース（例えばインターネットを通じて）から取得する手段を提供する。本実施形態の例として、使用説明書を閲覧できるおよび／または使用説明書をダウンロードできるウェブアドレスを記載したキットがある。

多くの場合、キットのいくつかのまたは全ての構成部品が無菌性を維持する好適な梱包で梱包されていることが望ましい。キットの構成部品は、単独で容易に取り扱える単位にするキット収納エレメント（ｃｏｎｔａｉｎｍｅｎｔ ｅｌｅｍｅｎｔ）に梱包され得、この場合、キット収納エレメント（例えば、箱または類似の構造）は、例えば、さらにキットの構成部品のいくつかまたは全ての無菌性を保つための密閉容器であっても、または、なくてもよい。

実施した実験および得られた結果を含む以下の実施例は、例証目的でのみ提供され、本発明を限定するものと解釈するものではない。

実施例１： ＣＬＥＣ２融合タンパク質阻害剤の調製
ｈＦｃ−ＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）発現ベクターは、マウスＣＬＥＣ２タンパク質の第５１番目から第２２９番目のアミノ酸を含み、Ｎ末端でヒトＩｇＧ１のＦｃ部と融合している。短い１１アミノ酸長のＧＳリンカーもまた、ヒトＦｃ部とマウスＣＬＥＣ２の間に挿入され、結果として以下の配列をもつｈＦｃ−ＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）ｃＤＮＡとなった：

ｈＦｃ−ＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）ｃＤＮＡ（配列番号１１）全体を、ｐＴＴ５、ＣＭＶ系哺乳類発現ベクターにクローニングした。

大容量の一過性トランスフェクション（ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）を使用して、タンパク質精製に十分な馴化培地を生成した。最大１０ｍｇのエンドトキシンフリーの発現ベクタープラスミドＤＮＡを、所望のトランスフェクション試薬と共に、１０リットルの２９３ＥＮＢＡ（２９３Ｅ）細胞中でトランスフェクトした。トランスフェクトされた２９３Ｅ細胞を、５％のＣＯ２濃度の加湿インキュベータで、３７℃でインキュベーションした。トランスフェクション後７〜９日目で、２９３Ｅの細胞培養物を遠心分離により採取し、上清をタンパク質精製用に回収した。

Ｆｃ−ＣＬＥＣ２タンパク質を含む清澄状態の細胞培養液を、１０Ｋの再生セルロース膜で、ＤＰＢＳにて透析濾過（ｄｉａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）により１０倍まで濃縮した。保持液（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）を浄化（ｃｌａｒｉｆｙ）し、適切な大きさにしたＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティカラムに、２〜３分の滞留時間で適用し、ＤＰＢＳ中で洗浄し、ｐＨ３．５で溶出した。アフィニティ精製したＦｃ−ＣＬＥＣ２タンパク質を中性のｐＨで緩衝化した０．１５Ｍ ＮａＣｌで予め平衡化（ｐｒｅ−ｅｑｕｉｌｉｂｒａｔｅ）した適切な大きさのＳｕｐｅｒＤｅｘ２００サイズ排除カラム上で溶解するか、またはｈＦｃ−ＣＬＥＣ２ ｐｒｏｔｅｉｎ Ａの溶出物を中性のｐＨに調整して、スルホプロピル陽イオン交換カラムに最大１５ｍｇ／ｍｌのレジンで、５〜８分の滞留時間で適用し、中性のｐＨで緩衝化したＮａＣｌ勾配で溶解した。いずれの方法によっても、宿主細胞の混入物、凝集物、およびエンドトキシンは取り除かれ、画分を貯留し、限外濾過により再濃縮し、滅菌濾過し、そして凍結保存した。

実施例２：マウスＣＬＥＣ−２細胞外ドメイン融合タンパク質のＡＡＶ発現は、マウス食餌性肥満モデルで、血中インスリン濃度、血糖値を低減し、経口耐糖能を改善させる
組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターを使用して、ＤＩＯマウスモデルでのインビボ過剰発現を実現した。実施例１に記載のように、Ｃlec−２のマウスＣ末端細胞外ドメインをヒトＦｃのＣ末端に融合させ、結果としてＥＦ１ａプロモーターおよびｂＧＨポリＡと共にＡＡＶベクターにクローニングしたｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）（配列番号１１）を得た。ｒＡＡＶを、ヘルパーフリーシステムを使用して２９３Ｔ細胞への一過性トランスフェクションにより生成し、勾配遠心分離により精製し、緩衝液交換し、そして濃縮した。精製ｒＡＡＶを蛍光法により力価決定した。

１２週齢雄Ｂ６Ｄ２Ｆ１ ＤＩＯマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂより入手）を、４〜５群に収容した。マウスに２０週にわたる期間、高脂肪餌（最大６０％の脂肪量）を施餌した。体重、グルコース濃度、およびインスリン濃度の基準代謝プロファイルを、０〜１６時間の絶食後に尾端から血液を回収することにより測定した。

マウスを、体重および基準グルコース濃度に基づき２群（ｎ＝１２）に分けた。第１群に、対照ＡＡＶ（ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２を含まない空ベクターである）の８ｘ１０^１２ゲノムコピー／動物を尾静脈を介して注入した。第２群に、ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２を発現するＡＡＶの８ｘ１０^１２ゲノムコピー／動物を尾静脈を介して注入した。

ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）の血清タンパク質濃度を、注入後９日目および２３日目で次のようにｈＦｃ Ｅｌｉｓａで測定した（図１）：Ｍａｘｉｓｏｒｐプレートに、ＰＢＳの１．０μｇ／ｍｌのヤギ抗ヒトＦｃを、一晩、４℃で固定化し、ＰＢＳで１回洗浄した。プレートを、ＰＢＳの３％ＢＳＡで一晩、４℃でブロッキングし、ＰＢＳで１回洗浄した。１％ＢＳＡを含むＰＢＳ（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ）で適切に希釈した状態の血清試料を添加し、１時間、室温でインキュベーションし、０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳ＋０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０）で３回洗浄した。ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ中のヤギ抗ヒトＦｃ−ＨＲＰを添加し、１時間、室温でインキュベーションした。プレートを、ＰＢＳ＋０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０で６回洗浄した。基質であるＴＭＢを添加し、２〜３０分間、インキュベーションした。１Ｎ ＨＣｌを添加して反応を停止させた。プレートを、ＳｐｅｃＭａｘプレートリーダーで４５０ｎｍにて読み込んだ。組換えヒトＦｃタンパク質を、標準曲線に使用した。

体重およびグルコース濃度を、注入５日前、ならびに注入後９、２３および３６日目に力価決定した（それぞれ図２および図３）。

経口耐糖能を、注入後２３日目に次のように測定した：動物を４時間絶食させた。体重およびグルコース濃度（グルコース測定器（ｇｌｕｃｏｍｅｔｅｒ）による）の測定後、マウスに、胃管栄養針（ｇａｖａｇｅ ｎｅｅｄｌｅ）により胃にグルコースを大量瞬時（２０％グルコースを１０ｍｌ／ｋｇ体重で）に注入した。グルコース濃度を、グルコース測定器で、グルコース服用の０、２０、４０、および６０分後に、尾端血液を回収することにより測定した。図５は、グルコース曲線を示す。ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）群のグルコース濃度は、全ての時点で、対照群と比較して低く、ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）で治療された動物の耐糖能が改善したことを示唆している。

血漿インスリン濃度を、注入後４０日目に、ＡＬＰＣＯ ＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓからのマウスインスリンＥＬＩＳＡキット（カタログ番号８０−ＩＮＳＭＳ−Ｅ０１）を使用して測定した（図４）。試料をゼロ標準液（ｚｅｒｏ ｓｔａｎｄａｒｄ）で１：１０に希釈し、１０ｕｌの希釈試料を１ウェルあたりに使用した。分析を、製造者のプロトコルに記載のとおり実施した。

対照ウイルスで治療された群と比較した、ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）ＡＡＶ−群での血糖値およびインスリン濃度の低下、ならびに経口耐糖能の改善により、ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）のＡＡＶ介在性のインビボ過剰発現が、ＤＩＯマウスでの代謝性異常（高血糖および高インスリン血症、インスリン耐性を含む）をほぼ治すことが実証された。本データにより、ＣＬＥＣ２は全身代謝の調整に関与している、また、ＣＬＥＣ２の拮抗作用が代謝性障害、特に糖尿病を治療し得る、という本発明者らの仮説が確証された。

実施例３：マウスＣＬＥＣ−２細胞外ドメイン融合タンパク質のＨＴＶ注入は、マウス食餌誘導性肥満モデルで、血中インスリン濃度、血糖値、肝臓トリグリセリド濃度を低減し、経口耐糖能を改善させる
水圧尾静脈注入（「ＨＴＶ」）を使用して、ＤＩＯマウスモデルでのインビボ過剰発現を実現した。Ｃｌｅｃ−２のマウスＣ末端細胞外ドメインをヒトＦ_ｃに融合させ、ＵＢＣ６プロモーターおよびｂＧＨポリＡと共にＨＴＶ構築物ベクターにクローニングされたｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）（配列番号１１）を得た。

１２週齢雄Ｂ６Ｄ２Ｆ１ ＤＩＯマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂより入手）を、４〜５群に収容した。マウスに２０週にわたる期間、高脂肪餌（最大６０％の脂肪）を施餌した。体重、グルコース濃度、およびインスリン濃度の基準代謝プロファイルを、０〜１６時間の絶食後に尾端から血液を回収することにより測定した。

マウスを、体重および基準グルコース濃度に基づき２群（ｎ＝１５）に分けた。第１群に、尾静脈を介して、１動物あたり１０ｕｇの対照ＨＴＶのＤＮＡ構築物を、２．５ｍｌの体積で注入した。対照ＨＴＶのＤＮＡ構築物はヒトＦｃのみを発現した。第２群に、尾静脈を介して、１動物あたり２０ｕｇのｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２を発現するＨＴＶのＤＮＡ構築物を、２．５ｍｌの体積で注入した。両構築物の注入は、次のように実施した：簡単には、対照またはｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２のＤＮＡ構築物を最初に２０ｕｇ／ｍｌ（ＤＮＡに１００ＥＵ／ｍｇのプラスミド調製エンドトキシン値をもつ）調製し、生理食塩水またはリンガー溶液に希釈した。最大１００ｍＬ／ｋｇ（１０％）の溶液で２．５ｍｌを超えない体積を、マウスの尾静脈に、５〜８秒の決められた時間内で注入した。

ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）の血清タンパク質濃度を、注入後７、１３、および１８日目で、上記実施例２に記載されたｈＦｃ ＥＬＩＳＡを使用して、ｈＦｃ ＥＬＩＳＡ法により測定した（図６）。体重および血糖値を、注入２日前、ならびに注入後７および１３日目に測定した（それぞれ図７および図８）。

経口耐糖能を、注入後１３日目に測定した。ＯＧＴＴを次のように実施した：動物を４時間絶食させた。体重およびグルコース濃度（グルコース測定器による）の測定後、マウスに、胃管栄養針により胃にグルコースを大量瞬時（２０％グルコースを１０ｍｌ／ｋｇ体重で）に注入した。グルコース濃度を、グルコース測定器で、グルコース服用の０、２０、４０、および６０分後に、尾端血液を回収することにより測定した。図１０は、ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）で治療された動物のグルコース濃度は全ての時点で低下し、耐糖能が改善したことを示唆している。

血漿インスリン濃度を、注入後１８日目に、ＡＬＰＣＯ ＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓからのマウスインスリンＥＬＩＳＡキット（カタログ番号８０−ＩＮＳＭＳ−Ｅ０１）を使用して測定した（図９）。試料をゼロ標準液で１：１０に希釈し、１０ｕｌの希釈試料を１ウェルあたりに使用した。分析を、製造者のプロトコルに記載のとおり実施した。

肝臓トリグリセリド濃度を、注入後１８日目に次のように測定した（図１１）：２ｍｌのクロロホルム／メタノール（２：１の体積比（ｖ／ｖ））を４０〜５０ｍｇの肝臓組織に添加し、組織をＱｉａｇｅｎ社の組織破砕装置で、３０秒から１分間、均質化した。次いで、試料を１２ｘ７５ｍｍのガラス試験管に移し、室温で３０〜４５分間、インキュベーションした。試料を０．５ｍｌの５０ｍＭ ＮａＣｌで洗浄し、ボルテックスし、１５００ｇまたは２６００ｒｐｍで１０分間遠心分離して、有機相を取り出して新しいガラス管に入れた。有機相を、０．５ｍｌの０．３６Ｍ ＣａＣｌ２／メタノールで洗浄し、ボルテックスし、１５００ｇまたは２６００ｒｐｍで１０分間遠心分離して、有機相を取り出して新しいガラス管に入れた。有機相を、０．５ｍｌの０．３６Ｍ ＣａＣｌ２／メタノールで洗浄し、ボルテックスし、１５００ｇまたは２６００ｒｐｍで１０分間遠心分離して、有機相を取り出して２ｍｌメスフラスコに入れた。体積を計量し、十分なクロロホルムを添加して２ｍｌの体積にした。試料中のトリグリセリド濃度を、Ｉｎｆｉｎｉｔｙ ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅアッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号ＴＲ２２４２１）を使用して測定した。

対照群と比較して、ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）ＨＴＶ群での血糖値およびインスリン濃度、およびトリグリセリド濃度の低下、ならびに経口耐糖能の改善により、ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）のＨＴＶ介在性のインビボ過剰発現が、ＤＩＯマウスでの代謝性異常（高血糖およびトリグリセリド濃度上昇、および高インスリン血症を含む）をほぼ治すことが実証された。本データにより、ＣＬＥＣ２が全身代謝の調節に関与している、また、ＣＬＥＣ２の拮抗作用が代謝性障害、特に糖尿病を治療し得る、という本発明者らの仮説が確証された。

実施例４： 組換えマウスＣＬＥＣ２細胞外ドメイン融合タンパク質は、ＤＩＯマウスで耐糖能を改善させ、インスリン濃度を低下させる
発明者らは、ＤＩＯモデルでの組換えｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）の有効性を試験した。雄１４週齢Ｂ６Ｄ２Ｆ１マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂより入手、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔ社Ｄ１２４９２（６０ｋｃａｌ％脂肪）で８週間施餌）を、体重およびグルコース濃度に基づき、３群（ｎ＝１２）に分けた。開始０日目から、マウスに、毎日、対照または１０ｍｇ／ｋｇのｈＦＣ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）もしくは３０ｍｇ／ｋｇのｈＦＣ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）を、腹腔内注入（ＩＰ−ｉｎｊｅｃｔ）した。生理食塩水緩衝液対照およびｈＦＣ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）組換えタンパク質を実施例１に記載のように調製した。タンパク質を０．２ｍｌのＰＢＳにて注入した。注入は、通常、およそ午後４時（ダークサイクル（消灯）を午後６時に開始）に行われた。ＯＧＴＴを実施する日に、タンパク質を、基準グルコース測定の２〜３時間前に与え、採血（午前１０時）した。

耐糖能を、１０ｍｇ／ｋｇもしくは３０ｍｇ／ｋｇの組換えＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）または対照を注入後８日目に測定した。ＧＴＴを次のように実施した：動物を４時間絶食させた。体重およびグルコース濃度（グルコース測定器による）の測定後、マウスに、胃管栄養針により胃にグルコースを大量瞬時（２０％グルコースを１０ｍｌ／ｋｇ体重で）に注入した。グルコース濃度を、グルコース測定器で、グルコース服用の０、１５、３０、および６０分後に、尾端血液を回収することにより測定した。図１３は、対象動物と比較すると、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇの両方の組換えｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）治療動物の全時点でのグルコースが低下することを示し、耐糖能を改善させていることを示唆している。

血漿インスリン濃度を、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇの組換えＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）または対照の注入後１５日目に、ＡＬＰＣＯ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社のマウスインスリンＥＬＩＳＡキット（カタログ番号８０−ＩＮＳＭＳ−Ｅ０１）を使用して測定した。試料をゼロ標準液で１：１０に希釈し、１０ｕｌの希釈試料を１ウェルあたりに使用した。分析を、製造者のプロトコルに記載のとおり実施した。

１０ｍｇ／ｋｇの組換えＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）で治療されたマウスは、対照動物のインスリン濃度より低いインスリン濃度を有し、また３０ｍｇ／ｋｇの組換えＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）で治療されたマウスは、対照群および１０ｍｇ／ｋｇの治療群のインスリン濃度より低いインスリン濃度を有していた（図１２）。

総合的に、これらの結果により、組換えｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）がＤＩＯマウスに有効であることが示唆される。

実施例５：ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）のＡＡＶ介在性過剰発現は、Ｏｂ／Ｏｂマウスで、血糖値を低下させ、耐糖能を改善させる
６週齢雄ｏｂ／ｏｂマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂより入手）を、体重および基準グルコース濃度に基づき２群（ｎ＝１２）に分けた。第１群に、尾静脈を介して、対照ＡＡＶを、８^１２ウイルス力価で注入した。対照は、ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２を含まない空ベクターであった。第２群に、尾静脈を介して、ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２を発現するＡＡＶを、２^１２ウイルス力価で注入した。対照およびｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２ ｒＡＡＶ構築物は、実施例２に記載されている。

血糖値を、Ｆｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）または対照の注入２日前、ならびに注入後１２日目および２６日目に測定した。Ｆｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）で治療されたマウスのグルコース濃度は、注入後１２日目および２６日目の両方で、対照のグルコース濃度より低いグルコース濃度を有していた（図１４）。

耐糖能試験（ＧＴＴ）を、ＡＡＶ注入後１２日目に実施した。ＧＴＴを、次のように実施した：動物を４時間絶食させた。体重およびグルコース濃度（グルコース測定器による）の測定後、マウスに、胃管栄養針により胃にグルコースを大量瞬時（１０％グルコースを１０ｍｌ／ｋｇ体重で）に注入した。グルコース濃度を、グルコース測定器で、グルコース服用の０、２０、４０、６０、および９０分後に、尾端血液を回収することにより測定した。図１５は、ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）で治療された動物が、全ての時点で対照動物のグルコース濃度より低いグルコース濃度を有していることを示し、耐糖能を改善させることを示唆している。

総合的に、これらの結果により、組換えｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）がＯｂ／Ｏｂマウスに有効であることが示唆される。

実施例６： 組換えｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤタンパク質は、Ｏｂ／Ｏｂマウスで、耐糖能を改善させる
組換えｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）タンパク質の有効性もまた、ｏｂ／ｏｂマウスで試験した。６週齢雄ｏｂ／ｏｂマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ ｌａｂ）を、体重および基準グルコース濃度に基づき、２群（ｎ＝１２）に分けた。基準グルコースを、グルコース測定器により測定した。開始の１日目から１４日目まで、マウスに、ＰＢＳ緩衝液またはビヒクル緩衝液の１０ｍｌ／ｋｇのｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）タンパク質による腹腔内注入を施した。

ｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）の血清タンパク質濃度を、ｈＦｃ ＥＬＩＳＡにより、注入後７および１４日目に、実施例２に記載のように測定した（図１６）。

耐糖能試験（ＧＴＴ）を、ＡＡＶ注入後１４日目に実施した。ＧＴＴを次のように実施した：動物を４時間絶食させた。体重およびグルコース濃度（グルコース測定器による）の測定後、マウスに、胃管栄養針により胃にグルコースを大量瞬時（１０％グルコースを１０ｍｌ／ｋｇ体重で）に注入した。グルコース濃度を、グルコース測定器で、グルコース服用の０、２０、３０、６０、および９０分後に、尾端血液を回収することにより測定した。

図１７は、組換えｈＦｃ−ｍＣＬＥＣ２（ＥＣＤ）で治療された動物は、全ての時点で対照動物の血糖値より低い血糖値を有していたことを示し、耐糖能を改善させることを示唆している。

実施例７： ＣＬＥＣ−２に特異的なモノクローナル抗体の調製
Ａ．マウスＣＬＥＣ２免疫原の調製
マウスまたはヒトＣＬＥＣ２ポリペプチドのＦＬＡＧエピトープタグ化（ｅｐｉｔｏｐｅ ｔａｇｇｅｄ）バージョンを、免疫原として使用する。ＦＬＡＧエピトープを、当業者に自明の標準の分子生物学的手法を使用して、マウスまたはヒトＣＬＥＣ２のカルボキシ末端に付加する。ＣＬＥＣ２のエピトープタグ化バージョンを、ＨＥＫ２９３およびＣＨＯ細胞で発現させる発現ベクターにクローニングする。当業者に公知の他のタンパク質生成および精製手順もまた、使用してもよい。

ＣＬＥＣ２免疫原は、ＦＬＡＧエピトープタグ付きもしくは無しのＣＬＥＣ２細胞外ドメイン（例えば配列番号３または９を参照のこと）またはその断片であってもよい。

Ｂ．免疫化および力価測定
ＨＥＫ２９３細胞発現組換えＦＬＡＧタグ化マウスまたはヒトＣＬＥＣ２を抗原として使用する。マウスまたはヒトＣＬＥＣ２に対するモノクローナル抗体を、野生型Ｃ５７ＢＬ／６雌マウスを順次免疫化することにより発生させる。動物を、全ての注入に足蹠（ｆｏｏｔｐａｄ）および腹腔内経路を介して免疫化する。免疫化したマウスからの血清の抗ＣＬＥＣ２抗体力価を、ＣＨＯ細胞発現組換えＦＬＡＧタグ化ＣＬＥＣ２を使用してＦＡＣＳにより決定する。

Ｃ．リンパ球の回収、Ｂ細胞の単離、融合、およびハイブリドーマの作製
Ｂ細胞を、免疫化されたマウスのリンパ節および脾臓から採取する。融合を上述の洗浄されたＢ細胞とＡＴＣＣから購入した非分泌性骨髄腫Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞、カタログ番号ＣＲＬ１５８０（Ｋｅａｒｎｅｙ ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １２３， １９７９， １５４８−１５５０）とを１：１の割合で混合することにより実施する。電気的細胞融合（Ｅｌｅｃｔｒｏ−ｃｅｌｌ ｆｕｓｉｏｎ）（ＥＣＦ）を、融合装置（ｆｕｓｉｏｎ ｇｅｎｅｒａｔｏｒ）、ＥＣＭ２００１モデル、Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ、Ｉｎｃ．、Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ、ＭＡを使用して実施する。使用される融合容器の大きさは２．０ｍＬである。ＥＣＦ後、細胞懸濁液を、融合容器から無菌状態下で注意深く取り出し、同量のハイブリドーマ培養液（ＤＭＥＭ系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））を収容した滅菌チューブに移した。細胞をインキュベーションし、次いで、遠心分離する。細胞を少量のＨｙｂｒｉｄｏｍａ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍ（１Ｘ ＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｈ０２６２）が補充されたハイブリドーマ培養液）で再懸濁し、その体積をさらなるＨｙｂｒｉｄｏｍａ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍで適宜、調整した。細胞を徐々に混合し、３８４−ウェルプレートにピペットで分取し、増殖させた。

Ｄ．ハイブリドーマスクリーニング
十分な培養後、ハイブリドーマ上清を、ＣＬＥＣ２特異的モノクローナル抗体のスクリーニングを行う。一次スクリーニングで、ハイブリドーマ上清をＣＨＯ細胞発現組換えＦＬＡＧタグ化マウスまたはヒトＣＬＥＣ２および検出抗体ＦＭＡＴ Ｂｌｕｅ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によりＦＭＡＴプレートで３時間、室温でインキュベーションする。インキュベーション後、プレートをＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ８２００ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍによりスキャンして、陽性ハイブリドーマ上清を検出する。

一次スクリーニングに基づく陽性ハイブリドーマ細胞増殖ウェルからの古い培養上清を完全に取り除き、ＣＬＥＣ２陽性ハイブリドーマ細胞を新鮮なハイブリドーマ培養液に懸濁して、９６−ウェルプレートに移す。培養２日後、二次的確認スクリーニングを行い、ここで、第一スクリーニングでの陽性ハイブリドーマをＦＡＣＳ分析で確かめる。特異的結合を実証するために、２セットのＣＨＯ細胞（一方のセットは組換えＦＬＡＧタグ化マウスまたはヒトＣＬＥＣ２を発現し、他方は発現しない）を使用する。選択されたハイブリドーマを、抗体の生成および精製用に増殖させる。

実施例８： マウスＤＩＯまたはマウスｏｂ／ｏｂモデルでのモノクローナル抗体
６週齢雄Ｂ６Ｄ２Ｆ１マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂより入手）を、１ケージあたり４匹のマウスを１群として収容し、最大２０週にわたる期間、高脂肪餌（最大６０％の脂肪）を施餌した。体重およびグルコース濃度の基準代謝プロファイルを、４〜６時間の絶食後に、尾端から血液を回収することにより測定した。

マウスを選択して、体重および基準グルコースに基づき数群（ｎ＝１２）に無作為化する。マウスに、腹腔内で（ｉ．ｐ．）、５ｍｌ／ｋｇで、１週間に３回、注入する。第１群に、ビヒクルのみ（Ａ５Ｓｕ：１０ｍＭ酢酸ナトリウム、９％スクロース、ｐＨ５）を注入し、第２群に、抗Ｃｌｅｃ２抗体（２０ｍｇ／ｋｇ）を注入し、また第３群に抗Ｃｌｅｃ２抗体（２０ｍｇ／ｋｇ）を注入する。

抗Ｃｌｅｃ２抗体の血清タンパク質濃度を、抗Ｃｌｅｃ２ ＥＬＩＳＡ法により測定する。簡単には、９６ウェルマイクロタイタープレートを１ｕｇ／ｍｌの抗ｈｕＩｇＧ Ｆｃ抗体で一晩、４℃で固定化し、ＰＢＳで２回洗浄する。組換えマウスＣｌｅｃ２タンパク質を１ｕｇ／ｍｌでウェルに添加し、室温で１時間、インキュベーションする。プレートを洗浄後、治療されたマウスからの希釈血清試料をウェルに添加する。１時間のインキュベーション後、ウェルを２回洗浄し、ＨＲＰ結合抗マウスＩｇＧ抗体を添加して３０分間、インキュベーションする。２回の洗浄後、室温で約１５分発色させるため、１００ｕｌのＴＭＢ溶液をウェルに添加する。１Ｎ ＨＣＬを添加して呈色反応を停止させる。プレートをＥｎＶｉｓｉｏｎで、ＯＤ４５０で読み取る。

経口耐糖能を、治療の７日後および１４日後に測定する。動物を４時間絶食させる。体重およびグルコース濃度（グルコース測定器による）の測定後、マウスに、胃管栄養針により胃にグルコースを大量瞬時（２０％グルコースを１０ｍｌ／ｋｇ体重で）に注入する。グルコース濃度を、グルコース測定器で、グルコース服用の０、１５、３０、および６０分後に、尾端血液を回収することにより測定する。

Claims (18)

1. 代謝性疾患の治療が必要な対象にＣｌｅｃ−２阻害剤の治療有効量を投与することを含む、前記対象の代謝性疾患を治療する方法であって、前記Ｃｌｅｃ−２阻害剤がＣｌｅｃ−２受容体の細胞外ドメインまたはその断片を含む、方法。
2. 代謝性疾患は、糖尿病、グルコース濃度上昇、インスリン濃度上昇、トリグリセリド濃度上昇、インスリン耐性、または経口耐糖能低下である、請求項１に記載の方法。
3. 糖尿病がII型糖尿病である、請求項２に記載の方法。
4. Ｃｌｅｃ−２受容体の細胞外ドメインまたはその断片が、免疫グロブリン定常領域またはその断片に結合されている、請求項２に記載の方法。
5. Ｃｌｅｃ−２受容体の細胞外ドメインまたはその断片が、ヒト細胞外ドメインまたはその断片である、請求項４に記載の方法。
6. 免疫グロブリン定常領域が、ヒト免疫グロブリン定常領域またはその断片である、請求項５に記載の方法。
7. Ｃｌｅｃ−２阻害剤が、配列番号２、４、６または１３の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含むポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを含む、請求項６に記載の方法。
8. Ｃｌｅｃ−２阻害剤が、配列番号２、４、６または１３の配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを含む、請求項７に記載の方法。
9. Ｃｌｅｃ−２阻害剤が、配列番号２、４、６または１３の配列と少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含むポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを含む、請求項８に記載の方法。
10. Ｃｌｅｃ−２阻害剤が、配列番号２、４、６または１３の配列を有するポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを含む、請求項９に記載の方法。
11. Ｃｌｅｃ−２阻害剤が、配列番号１、３、５または１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を示すアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項６に記載の方法。
12. Ｃｌｅｃ−２阻害剤が、配列番号１、３、５または１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を示すアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項１１に記載の方法。
13. Ｃｌｅｃ−２阻害剤が、配列番号１、３、５または１２のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一性を示すアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項１２に記載の方法。
14. Ｃｌｅｃ−２阻害剤が、配列番号１、３、５または１２のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項１３に記載の方法。
15. 対象が哺乳類である、請求項６に記載の方法。
16. 対象がヒトである、請求項７に記載の方法。
17. Ｃｌｅｃ−２阻害剤が、Ｃｌｅｃ−２阻害剤の治療有効量を薬学的に許容される担体と混合して含む医薬組成物の形態で投与される、請求項１８に記載の方法。
18. Ｃｌｅｃ−２投与後に、対象が：
    （ａ）Ｃｌｅｃ−２阻害剤の対象への投与後の時点での、Ｃｌｅｃ−２阻害剤の投与前の時点より低い血糖値、
    （ｂ）Ｃｌｅｃ−２阻害剤の対象への投与後の時点での、投与前の時点より低い血漿インスリン濃度、
    （ｃ）Ｃｌｅｃ−２阻害剤の対象への投与後の時点での、投与前の時点より改善されたインスリン耐性、
    （ｄ） Ｃｌｅｃ−２阻害剤の対象への投与後の時点での、投与前の時点より低い血中トリグリセリド濃度、または
    （ｅ） Ｃｌｅｃ−２阻害剤の投与後の時点での、投与前の時点より改善された経口耐糖能、
    を含む、請求項１８に記載の方法。

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