JP2014513795A - Hdlの逆コレステロール輸送支持能力を評価するための組成物および方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、2011年12月2日に提出した米国仮特許出願第61/566,581号および2011年4月29日に提出した米国仮特許出願第61/481,148号の優先権の利益を主張する。これらの出願はいずれも、その全体が本明細書に参考として援用される。
本発明は、HDLのコレステロール逆転送を支持する能力を測定するために電子常磁性共鳴(EPR)分光法を用いる分野に関する。EPR分光法を用いて、個体における冠動脈疾患のリスクを決定することができる。
本発明は、一部、米国国立衛生研究所(National Institutes of Health)からの助成金番号2 RO1 HL077268−05によって支援された研究の間に行われた。政府は、本発明において一定の権利を有する。
ヒトにおける試験[1〜5]および遺伝子改変マウスモデル系における試験[6〜9]のどちらによっても、血漿高密度リポタンパク質コレステロール(HDL−C)と、米国における死亡数の主な原因である冠動脈疾患(CAD)との間に強力な関連性が実証された。集団研究では、CADに対しては、HDL−Cレベルが低密度リポタンパク質コレステロール(LDL−C)のレベルよりも強力な独立した危険因子であることが一貫して実証されている[1]。長期的な集団研究では、血漿HDL−CのレベルはCADと明白に関連するが、HDL−Cのレベルは、個体ベースではCADに対する患者の素因の優良な予測因子ではない。さらに、フラミンガム子孫研究(Framingham Offspring Study)およびMESA研究のどちらによっても、CAD患者のほぼ40%のHDL−Cレベルが正常であるかまたは上昇していることが見いだされた[10、11]。同様に、IDEAL試験では、HDL−Cレベルが70mg/dLを超える患者において最も高いリスク推定値が見られた[12、13]。これらの試験により、異常に高いHDL−Cおよび/またはCADを導く恐れがある高密度リポタンパク質(HDL)の機能不全プールが存在する可能性があることが示唆されている。HDL−C測定値を決定するための現行の方法は、健康HDL粒子および機能不全HDL粒子を含むという理解により、CADに対する診断薬および予後マーカーとしてのHDL−Cの有効性が疑問視される。したがって、現在決定されている通り、HDL−Cレベル単独では、個体レベルでのCADリスクについての正確な予後またはCADに対する治療を生じるために必要な情報の全てはもたらされない。
本発明は、試料(例えば、本明細書に記載の生体試料または合成試料)における高密度リポタンパク質(HDL)のコレステロール逆転送を支持する能力を測定するための方法であって、HDLに対して高い特異性を有するスピンラベルしたリポタンパク質プローブを試料に添加するステップと、試料の電子常磁性共鳴(EPR)スペクトルを収集するステップとを含む方法を提供する。本発明は、血液における高密度リポタンパク質(HDL)のコレステロール逆転送を支持する能力を測定するための方法であって、HDLに対して高い特異性を有するスピンラベルしたリポタンパク質プローブをin vitro血液試料に添加するステップと、試料の電子常磁性共鳴(EPR)スペクトルを収集するステップとを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、該方法は、スペクトルを陽性対照および/または陰性対照と比較することによって、スピンラベルしたリポタンパク質プローブとHDLとの結合を比較するステップをさらに含む。いくつかの実施形態では、陰性対照は、無脂質環境または低脂質環境中にあるスピンラベルしたリポタンパク質プローブのEPRスペクトルである。いくつかの実施形態では、陽性対照は、ジミリストイルホスファチジルコリンと結合したスピンラベルしたリポタンパク質プローブのEPRスペクトルである。いくつかの実施形態では、コレステロール逆転送がコレステロール流出潜在力(cholesterol efflux potential)である。
HDLの抗アテローム発生性は、大部分が、過剰なコレステロールが末梢組織から肝臓またはステロイド産生組織に転送されるプロセスであるRCTにおけるその役割に帰する[40、41]。血漿では、apoA−Iの大部分は、アポリポタンパク質、リン脂質、トリグリセリド(TG)、遊離のコレステロールおよびコレステロールエステルの複合体である球状HDLと会合する[42]。しかし、マクロファージからのコレステロールおよびリン脂質の主要なアクセプターは無脂質または低脂質のapoA−I(最大で4つのリン脂質分子を含有する)であり[43]、これは、コレステロール流出の主要なメディエーターであるABCA1の好ましい基質である[44〜49]。apoA−Iは主に肝臓で合成されるので、内膜における無脂質apoA−Iの最も可能性が高い供給源はHDLから置き換えられたapoA−I分子である。増加している証拠により、内皮の健康の維持およびマクロファージにおけるコレステロール平衡にとって重大である、成熟HDLからの無脂質/低脂質apoA−Iの産生およびそのABCA1を介した再脂質付加は、動脈壁において進行中のプロセスである(図1および2)という概念が裏付けられる。コレステロール負荷マクロファージからのコレステロール流出を容易にするために、低脂質/無脂質apoA−Iは、ABCA1に結合する。ABCA1との会合の間に、apoA−Iは遊離のコレステロール(FC)およびリン脂質(PL)を得て、円板状プレβHDLを形成する。これらの粒子はLCATの作用を受け、コレステロールエステルコアを含有するアルファHDLに変換される。apoA−Iは、リン脂質転移タンパク質(PLTP)、コレステロールエステル転移タンパク質(CETP)、リポタンパク質リパーゼ(LPL)および肝性リパーゼ(HL)の作用(複数可)によってアルファHDLから遊離する。
電子常磁性共鳴とは、磁場に置かれた常磁性体のマイクロ波放射線または高周波放射線に対する共鳴反応の試験である。常磁性物質は、通常は奇数の電子または不対電子を有するが、いくつかの場合には、偶数の電子を有するイオンまたはビラジカルに対してEPRが観察される。常磁性種を含有する材料に強力な磁場を印加することにより、不対電子の電子「スピン」によって生じる個々の磁気モーメントを、印加された場に対して平行または逆平行のいずれかに向き付けることができる。これにより、不対電子に対して別個のエネルギーレベルが創出され、これにより、電磁放射線(マイクロ波の形態)の正味の吸収を起こすことが可能になる。共鳴条件と称される状況は、マイクロ波のエネルギーが、スピン状態にある対のエネルギーの差異ΔEに対応する場合に起こる。
本発明は、in vitro血液試料におけるHDLのコレステロール逆転送能力を、HDLに対して高い特異性を有するスピンラベルしたリポタンパク質プローブのEPRスペクトルを収集することによって測定する方法を提供する。該方法は、スピンラベルしたリポタンパク質プローブをHDL粒子内のリポタンパク質と交換することができることに一部基づく。本発明のいくつかの実施形態では、HDLに対して高い特異性を有するリポタンパク質とは、全リポタンパク質分子の60%以上、70%以上、80%以上または90%以上がHDLと会合するようなリポタンパク質である。いくつかの実施形態では、HDLに対して高い特異性を有するリポタンパク質とは、40%未満、30%未満、20%未満もしくは10%未満、または約40%、約30%、約20%もしくは約10%が低密度リポタンパク質(VLD)または超低密度リポタンパク質(VLDL)と会合するようなリポタンパク質である。いくつかの実施形態では、リポタンパク質はapoE4タンパク質ではない。
である。
スピンラベルは、それらの構造内に不対電子が存在することに起因して常磁性である化合物である。したがって、スピンラベルは、フリーラジカルのクラスであるが、通常の温度(100℃未満)および生理的なpHの条件下では必ず安定であり、また、それらのフリーラジカル部分に影響を及ぼすことなく特定の化学反応または実験に適応する。いくつかの実施形態では、本発明は、in vitro血液試料におけるHDLのコレステロール逆転送能力を測定するための、HDLに対して高い特異性を有するスピンラベルしたリポタンパク質プローブを提供する。いくつかの実施形態では、スピンラベルは、自由電子を担持する原子を含む。いくつかの実施形態では、自由電子を担持する原子は窒素原子である。いくつかの実施形態では、スピンラベルは窒素酸化物である。いくつかの実施形態では、スピンラベルは、(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート−15N;1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート−15N,d15;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;(−)−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;(+)−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;3−(2−ヨードアセトアミド)−PROXYL;3−ヨードメチル−(1−オキシ−2,2,5,5−テトラメチルピロリン);1−オキシル−3−(マレイミドメチル)−2,2,5,5−テトラメチル−1−ピロリジン;(1−オキシル−2,2,3,5,5−ペンタメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;N−(1−オキシル−2,2,6,6−テトラメチル−4−ピペリジニル)マレイミド;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドエチルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドヘキシルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドプロピルメタンメタンチオスルホネート;3−(2−ブロモアセトアミド)−2,2,5,5−テトラメチル−1−ピロリジニルオキシ、フリーラジカル;4−ブロモ−3−ヒドロキシメチル−1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−δ3−ピロリン;3−ブロモメチル−2,5−ジヒドロ−2,2,5,5−テトラメチル−1H−ピロール−1−イルオキシ;4−ブロモ−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;3−[2−(2−マレイミドエトキシ)エチルカルバモイル]−PROXYL;3−マレイミド−PROXL、3−(2−マレイミドエチル−カルバモイル)−PROXYL、フリーラジカル;3−(3−(2−ヨード−アセトアミド)−プロピル−カルバモイル)−PROXYL、フリーラジカル;3−(2−ブロモ−アセトアミド−メチル)−PROXYL、フリーラジカル;および3−(2−ヨード−アセトアミド−メチル)−PROXYL、フリーラジカルから選択される。
いくつかの実施形態では、本発明は、血液におけるHDLのコレステロール逆転送能力を測定するための、HDLに対して高い特異性を有するスピンラベルしたリポタンパク質プローブを提供する。いくつかの実施形態では、スピンラベルを、リポタンパク質に共有結合によって付着させる。いくつかの実施形態では、スピンラベルを、リポタンパク質に非共有結合によって付着させる。いくつかの実施形態では、スピンラベルを、リポタンパク質と会合させる。いくつかの実施形態では、スピンラベルを、リポタンパク質のアミノ酸残基に共有結合によって付着させる。いくつかの実施形態では、スピンラベルを、リポタンパク質のシステイン残基に共有結合によって付着させる。いくつかの実施形態では、スピンラベルを、リポタンパク質のシステイン残基に、チオスルホネート連結を通じて共有結合によって付着させる。
本明細書では、試料におけるHDLのコレステロール逆転送を支持する能力を、スピンラベルしたリポタンパク質のEPR分光法によって測定するためのものが提供される。いくつかの実施形態では、試料は生体試料である。いくつかの実施形態では、試料は体液である。いくつかの実施形態では、試料は血液試料である。いくつかの実施形態では、試料は脳脊髄液である。さらに他の実施形態では、試料は薬物の発見または健康診断薬の開発に使用される、合成により調製した試料である。
in vitro血液試料におけるHDLのコレステロール逆転送を支持する能力を、スピンラベルしたリポタンパク質のEPR分光法によって測定するための本発明の方法。本発明のいくつかの実施形態では、in vitro血液試料は全血試料である。いくつかの実施形態では、in vitro血液試料は血漿試料である。いくつかの実施形態では、in vitro血液試料は血清試料である。別の実施形態では、in vitro血液試料は抗凝固薬を含む。いくつかの実施形態では、抗凝固薬はヘパリン、クマジン、ワルファリン、EDTA、シトレートまたはオキザレートである。いくつかの実施形態では、を個体から採取してバキュコンテナー(vacucontainer)に入れる。いくつかの実施形態では、in vitro血液試料を、個体から採取した後に本発明の方法によって分析する。いくつかの実施形態では、in vitro血液試料を分析前に凍結させる。いくつかの実施形態では、in vitro血液試料を、分析する前に1サイクルまたは2サイクルの凍結および解凍にかける。
いくつかの態様では、本発明は、血液におけるHDLのコレステロール逆転送を支持する能力を、HDLに対して高い特異性を有するスピンラベルしたリポタンパク質プローブをin vitro試料に添加し、試料(例えば、生体試料(例えば、血液、CSFなど)または合成試料)の電子常磁性共鳴(EPR)スペクトルを収集することによって測定するための方法を提供する。いくつかの態様では、本発明は、血液におけるHDLのコレステロール逆転送を支持する能力を、HDLに対して高い特異性を有するスピンラベルしたリポタンパク質プローブをin vitro血液試料に添加し、試料の電子常磁性共鳴(EPR)スペクトルを収集することによって測定するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、試料のEPRスペクトルを陰性対照および/または陽性対照のEPRスペクトルと比較する。いくつかの実施形態では、陰性対照は、無脂質または低脂質のスピンラベルしたリポタンパク質プローブである。いくつかの実施形態では、陽性対照は、脂質、例えば、ジミリストイルホスファチジルコリンと結合したスピンラベルしたリポタンパク質プローブである。いくつかの実施形態では、試料のEPRスペクトルは、正常なコレステロール逆転送能力を有する個体由来、例えば、心臓血管疾患のリスクがない個体由来のin vitro血液試料に添加したスピンラベルしたリポタンパク質プローブのEPRスペクトルである。いくつかの実施形態では、血液試料のEPRスペクトルは、正常なコレステロール逆転送能力を有する個体由来、例えば、糖尿病ではない個体由来の血液試料に添加したスピンラベルしたリポタンパク質プローブのEPRスペクトルである。いくつかの実施形態では、CSF試料のEPRスペクトルは、正常なコレステロール逆転送能力を有する個体由来、例えば、アルツハイマー病のリスクがない個体由来のCSF試料に添加したスピンラベルしたリポタンパク質プローブのEPRスペクトルである。
いくつかの態様では、本発明は、HDLのコレステロール逆転送を支持する能力をEPRによって測定するためのキットであって、HDLに対して高い特異性を有するスピンラベルしたリポタンパク質プローブを含むキットを提供する。いくつかの態様では、本発明は、血液におけるHDLのコレステロール逆転送を支持する能力をEPRによって測定するためのキットであって、HDLに対して高い特異性を有するスピンラベルしたリポタンパク質プローブを含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、コレステロール逆転送は、コレステロール流出潜在力である。本発明のいくつかの実施形態では、HDLに対して高い特異性を有するリポタンパク質は、リポタンパク質の60%以上、70%以上、80%以上または90%以上がHDLと会合するようなリポタンパク質である。いくつかの実施形態では、HDLに対して高い特異性を有するリポタンパク質は、40%未満、30%未満、20%未満もしくは10%未満、または約40%、約30%、約20%もしくは約10%が低密度リポタンパク質(VLD)または超低密度リポタンパク質(VLDL)と会合するようなリポタンパク質である。いくつかの実施形態では、HDLはHDL3である。いくつかの実施形態では、リポタンパク質は、apoE4でもapoE2でもない。いくつかの実施形態では、リポタンパク質はapoE2ではない。いくつかの実施形態では、リポタンパク質はapoE4ではない。いくつかの実施形態では、リポタンパク質はヒトリポタンパク質である。いくつかの実施形態では、リポタンパク質は非ヒト哺乳動物リポタンパク質である。
いくつかの態様では、本発明は、in vitro血液試料およびHDLに対して高い特異性を有するスピンラベルしたリポタンパク質を含む組成物を提供する。本発明のいくつかの実施形態では、HDLに対して高い特異性を有するリポタンパク質は、リポタンパク質の60%以上、70%以上、80%以上または90%以上がHDLと会合するようなリポタンパク質である。いくつかの実施形態では、HDLに対して高い特異性を有するリポタンパク質は、40%未満、30%未満、20%未満もしくは10%未満、または約40%、約30%、約20%もしくは約10%が低密度リポタンパク質(VLD)または超低密度リポタンパク質(VLDL)と会合するようなリポタンパク質である。いくつかの実施形態では、HDLはHDL3である。いくつかの実施形態では、リポタンパク質は、apoE4でもapoE2でもない。いくつかの実施形態では、リポタンパク質はapoE2ではない。いくつかの実施形態では、リポタンパク質はapoE4ではない。いくつかの実施形態では、リポタンパク質はヒトリポタンパク質である。いくつかの実施形態では、リポタンパク質は非ヒト哺乳動物リポタンパク質である。
いくつかの態様では、本発明は、HDLのコレステロール逆転送を支持する能力を決定するための試験片を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、スピンラベルしたリポタンパク質プローブおよび固体支持体を含む試験片であって、スピンラベルしたリポタンパク質プローブが本明細書に記載のスピンラベルおよびリポタンパク質を含み、HDLに対して高い特異性を有する試験片を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、細片はポリマー基材またはセルロース基材のいずれかで構成される。いくつかの実施形態では、細片は、観察する磁場領域(3000〜4000ガウス)において固有の低EPRサインを帯びる。いくつかの実施形態では、試験片は固体支持体を含む。いくつかの例では、ポリマーは、吸着剤またはポリマーに接着させた吸着試薬パッドのいずれかであってよい。例えば、吸着試薬パッドは、セルロース細片のように単純なものであってもよく、親水性ポリマーのように複雑なものであってもよく、これにEPRスピンプローブおよびEPR標準品を吸収させる、または共有結合によって付着させる。試験片に使用することができる材料の例としては、これらに限らないが、フッ化ポリビニリデン(PVDF)、ナイロンまたはニトロセルロースが挙げられる。試験片に使用するための材料としては、市販の吸着性材料、例えば、Millipore、WhatmanまたはPallから市販されている吸着性材料などが挙げられる。本発明の試験片は、EPR分光計において使用するために設計する。本発明の試験片は、EPR分光計で用いるために適する限りはいかなる特定の形状またはサイズにも縛られない。
いくつかの態様では、本発明は、本発明の方法において使用するための、内部が二相性の容器を提供する。いくつかの実施形態では、二相性容器は固体材料を含む。いくつかの実施形態では、容器は、本発明の方法において使用する試料中の固体材料または固体様材料を捕捉するための材料を含有する。いくつかの実施形態では、本発明は二相性容器を提供し、その容器には本発明の方法において使用する試料が添加されており、試料中の固体材料または固体様材料が試料中の1種または複数種の液体から分離されている。例えば、材料により、細胞を血漿または血清と分離することができる。いくつかの実施形態では、容器の内側の材料は、1種または複数種の固体材料または固体様材料と結合する、それをトラップする、またはそれを試料中の1種または複数種の液体から隔離する。
本明細書に開示されている特徴は全て、任意の組合せで組み合わせることができる。本明細書に開示されているそれぞれの特徴は、同じ、等価の、または同様の目的にかなう代替の特徴に置き換えることができる。したがって、別段の規定が明示されていない限り、開示されているそれぞれの特徴は、単に一般的な一連の等価物または同様の特徴の一例にすぎない。
apoA−I結合/置き換えのゲルに基づく分析
apoA−Iは、1つのリポタンパク質プールから別のリポタンパク質プールに移動させることができ、低脂質タンパク質としてリポタンパク質プールから離脱させることもできるタンパク質のクラスである、交換可能なアポリポタンパク質のファミリーのメンバーである[50]。リポタンパク質粒子間のアポリポタンパク質の交換は、脂質代謝の中心的な要素である。apoA−Iの交換は置き換え反応であるという有意な証拠が存在するが、HDL粒子由来のapoA−Iの直接結合および置き換えは直接実証されていない。HDL上に常在するapoA−Iが外因的に付加された無脂質/低脂質apoA−Iと平衡になり得るかどうかを考察した。Alexa350で標識したapoA−I変異体(E136位において標識した)を使用して蛍光rHDLを生成した。Alexa350で標識したapoA−Iを用いて異なるサイズのrHDL粒子(7.8nm、8.4nmおよび9.6nm)を再構成し、以前に記載されている通り精製した[51]。精製したrHDLを、標識していない無脂質apoA−Iと一緒に、タンパク質:タンパク質のモル比1:5で、37℃で最大7日間インキュベートした。リポタンパク質を非変性濃度傾きゲル電気泳動(non−denaturing gradient gel electrophoresis)(NDGGE)によって検査した。最初の5時間以内に、Alexa350で標識したapoA−Iの90%超が無脂質タンパク質プール内に急速に放出された(図11)。粒子は37℃で24時間に至るまで安定であり、これにより、HDLからのapoA−I結合/置き換えがHDL粒子の分解または大規模なリモデリングに起因するものではないことが示されている。外因性の無脂質apoA−IをAlexa350標識した場合にも同様の結果が得られた[51]。apoA−I結合/置き換えの速度には、rHDLがABCA1を介してコレステロールを流出させる相対的な能力が反映された。9.6nm粒子で最も遅いapoA−I結合/置き換えの速度が示され、7.8nm粒子で最も速いapoA−I結合/置き換えの速度が示された。7.8nm粒子はABCA1媒介性コレステロール流出の好ましい基質である。このapoA−Iの置き換えのプロセスは、コレステリルエステル転移タンパク質(CETP)[53]、レシチン:コレステロールアシルトランスフェラーゼ(LCAT)[54、55]、リン脂質転移タンパク質(PLTP)[56、57]および肝性リパーゼ[58]などの血漿因子が存在することによって有意に加速される(約5分)[41、52]。
apoA−I交換のFRETに基づくアッセイ。
apoA−I結合/置き換えのゲルに基づく評価には情報価値があるが、この手法の時間尺度および分解能では、酸化状態およびHDL粒子組成の変更によって生じる結合/置き換えのカイネティクスの複雑な差異を解明することができない。ゲルに基づく手法のこの欠点に取り組むために、無脂質の状態のapoA−Iのコンフォメーション、および脂質と結合した状態のapoA−Iのコンフォメーションに基づいて、蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)に基づくアッセイを展開した。FRETは、残基が1つのコンフォメーションでは近位にあり、別のコンフォメーションでは遠位にある場合のタンパク質のコンフォメーションの状態を推定するために有用である、タンパク質内の残基間の距離を決定することができる有力な技法である。FRETの有効範囲は10〜75Åであり、これは無脂質のapoA−Iと、脂質と結合したapoA−Iの規模に適する。原子間距離を、ドナーフルオロフォアからアクセプターフルオロフォアへのエネルギー交換の程度によって測定する。発光スペクトル(330〜350nm)がN−ヨードアセチル−N’−(5−スルホ−1−ナフチル)エチレンジアミン(AEDANS)の吸収スペクトルと重複するトリプトファンの蛍光特性を利用した。4つの内在性トリプトファンがフェニルアラニンに置換されたapoA−I変異体を創出した(TrpヌルapoA−I)。apoA−IにおけるこれらのTrpのPheへの置換は、WTのABCA1媒介性コレステロール流出活性と匹敵することによって実証された通り、タンパク質の構造[59]または機能には有意な影響を及ぼさない[60]。440nmにおけるAEDANS蛍光の相対的なレベルによって、エネルギー移動の程度を表すトリプトファン蛍光ドナーとAEDANS蛍光アクセプター部分の間の距離が決定された(図12)。
交換速度に対する酸化の影響。
apoA−Iの交換速度に対する、ペルオキシナイトライトおよびMPOによる酸化の影響。無脂質TrpヌルapoA−Iを、反応性窒素種の強力な供給源であるMPO−H2O2−亜硝酸系による酸化に供した[66]。無脂質TrpヌルapoA−Iを、ペルオキシナイトライトによる酸化にも供した。これらの2つの酸化方式間の違いは、MPO媒介性酸化は、apoA−Iの、ABCA1によってコレステロールを流出させる能力を激しく低下させる3−クロロチロシンおよび3−ニトロチロシンの強力な供給源であるが[28、30]、apoA−Iのペルオキシナイトライト酸化ではapoA−IのABCA1媒介性流出能力に有意な減退は導かれない[67]ことである。ペルオキシナイトライトによる酸化の影響を試験した場合には、apoA−I交換速度に有意差は観察されなかった(図5)[38]。対照的に、MPOによる酸化により、apoA−Iの2つの集団がもたらされ、一方は交換の程度が正常であり、第2の集団(57%)は、HDLに常在するapoA−Iを交換するその能力が激しく損なわれる[38]。興味深いことに、同様の条件下でのapoA−IのMPOによる酸化では、apoA−Iの、ABCA1によってコレステロール流出を容易にする能力の著しい匹敵する低下(約50%)がもたらされた[31]。これらのデータにより、HDLのapoA−I交換(あるいはapoA−I HDL結合/置き換えと称される)の速度がそのコレステロール流出能を反映することが示唆されている。
EPR方法体系
EPRを用いて、無脂質の状態のapoA−I、および脂質と結合した状態のapoA−Iの構造を考察した。9.6nmの再構成された円板状HDL上のapoA−IのN末端構造に対するEPRによる解[65]。この方法体系は、NMRと類似しており、スピンラベルの構造的な微小環境(約10〜15Å)に関する情報を提供する。詳細には、この領域のコンフォメーションは、EPRによって測定可能な3つの主要なパラメータ:ペプチド骨格の移動性(図5)、スピンラベルの溶媒露出度、および環境の相対的な流動性から得ることができる。後者は、膜結合タンパク質および近位の脂質の流動性を考察するために最も適当である。Hubbellおよび共同研究者は、EPRスペクトルの線形の変調を特徴付け、これらの変化に関連づけられる特異的なタンパク質構造特性を同定した[73、74]。これにより、タンパク質のスピンラベルした部位のEPRスペクトルの形状から構造に関する結論を引き出すことができる。したがって、スピンラベルが、無脂質の状態と、脂質と結合した状態の、独特のコンフォメーションを有するapoA−Iの一部に位置づけられている場合、EPRスペクトルを使用してこれらのapoA−Iの2つの形態を区別することができる。
EPRによるヒト血漿HDLの考察。
EPRを、血漿中のHDLを直接評価する手段として使用することの実現性を評価するために、以下について考察する:1)新しく改善されたEPR器具類のこの分析に対する感度;2)血漿HDLに対するapoA−Iの特異性;および3)EPRスペクトルにより、正常者およびCADの「リスクがある」患者から採取したヒト血漿試料における差異が示されるかどうか。最初に、JEOL TE−100 EPR分光計の感度の増強が、生理的に関連する濃度でapoA−Iの構造特性を測定するために十分であるかどうかを試験した。apoA−I参照試料(種々のよく特徴付けられた位置にスピンラベルしたapoA−I)を、再現性のある信号が検出されなくなるまで濃度を低下させながら評価した。この閾値は0.1mg/mlであり、血漿中のapoA−Iの生理的濃度を十分に下回った。これらの試験のためには、0.3mg/mlのスピンラベルしたapoA−Iが最適程度のHDL特異性をもたらし、EPR分光計で頑強かつ再現性のある信号を帯びるので、それを使用した。
健康者由来のヒト血漿のEPRスペクトルと、リスクがある患者由来のヒト血漿のEPRスペクトルの比較。
EPR分光法が、患者のHDLの質を血漿において直接評価するために実行可能な手法であるかどうかを調査するために、患者4人の血漿中のapoA−ISL217のEPRスペクトルを比較した(表2)。2人の個体を、正常な脂質およびCADリスクプロファイルを有すると特徴付け、他の2人の個体をCADのリスクが高いと特徴付けた。患者は、結果の解釈を補助するために、HDL−CおよびapoA−Iのそれらの濃度に基づいて対応させた患者であった。
試料はCHORIにある現行の血漿バンクから入手した。全ての機密性およびヒト安全性問題がそれらの採取中観察された。患者を性別、相対的なHDLレベル、および抜き取り/保管方法に基づいて対応させた。血漿をヘパリン添加管中に採取し、分析する前に1回だけ凍結させた。試料の品質管理を厳密に精査して、試料の採取および取扱いにおける差異の結果への寄与が最小限になることを確実にした。
C57Bl/6マウス由来のEPRスペクトルとCH3マウス由来のEPRスペクトルの比較。
C57Bl/6マウスは遺伝的に正常であるが、心疾患を起こしやすく、一方C3Hマウスは遺伝的に正常であり、心疾患を起こしにくい。apoA−ISL217の、HDLのコレステロール逆転送に関する能力の低下を同定する能力を評価するために、これらの2つの系統由来の血漿を分析した。C57Bl/6マウスには通常食を与え、C3Hマウスには高脂肪食を与えた。マウスから血漿試料を取り出し、apoA−ISL217を最終濃度1.4mg/mlで血漿に添加し、すぐにEPRスペクトルを収集した。最初に4℃で収集を開始してベースラインをもたらし、次いで温度を37℃までシフトさせ、スペクトルを300秒に至るまで連続的に収集した。図16に試料スペクトルが示されている。結果は図17にグラフで示されている。C57Bl/6マウス由来の血漿試料では、C3Hマウス由来の血漿試料と比較してスピンラベルしたプローブとの結合の低下が示された。1匹のC3Hマウスについて極度の外れ値であり、分析に含めなかったことに留意する。この外れ値の理由は不明である。どちらのマウス系統についても反応時間は少なく、これはマウス血漿においてヒトapoA−Iプローブを使用したことを反映する可能性が最も高いことにも留意する。
apoA−IとHDLの結合をモニターするためのEPRスペクトルの位置
apoA−IとHDLの結合をモニターするためのEPRスペクトルの位置を、等吸収点の磁気強度を同定することによって決定した。PBS中15μlの量のスピンラベルしたリポタンパク質プローブ(apoA−ISL217、3mg/ml)を、フラットセル試料保持器中のヒト血漿の試料45μlに添加した。試料を4℃で維持し、EPR信号の100ガウス掃引を得た(2分超;X−バンド)。スピンラベルしたリポタンパク質プローブの結合をモニターするための位置を決定するために、等吸収点の0.15mTesla高磁場側の位置を同定した。等吸収点のおよそ0.15mTesla(1.5ガウス)高磁場側のピークを連続的に観察し、この位置の反応を時間とともにモニターした。
apoA−IとHDLの結合
ヒト血漿におけるapoA−IとHDLの結合を、等吸収点のおよそ0.15mTesla(1.5ガウス)高磁場側のスペクトルの位置を連続的にモニターすることによって決定した。PBS中15μlの量のスピンラベルしたリポタンパク質プローブ(apoA−ISL217、3mg/ml)を血漿の試料45μlに添加した。試料を4℃で維持し、37℃までシフトさせた。温度を上昇させながら、等吸収点のおよそ0.15mTesla高磁場側の位置を10分にわたって連続的にモニターした。この分析から、apoA−IとHDLの結合の多数のパラメータ、すなわち、反応の振幅および結合の初速度の傾きが識別可能であった。振幅が大きく結合の初速度の傾きが大きいほど、より大きな流出能力と関連づけられた。健康な個体由来の血漿の反応が高かった。不健康な個体由来の血漿の反応は低かった。
陽性試料および陰性試料の反応。
対照ヒト血漿試料におけるapoA−IとHDLの結合の追跡。PBS中15μlの量のスピンラベルしたリポタンパク質プローブ(apoA−ISL217、3mg/ml)を血漿の試料45μlに添加した。試料を4℃で維持し、37℃までシフトさせた。温度を上昇させながら、等吸収点のおよそ0.15mTesla高磁場側の位置を4分にわたって連続的にモニターした。細胞に基づくマクロファージ流出測定による実験の前にヒト血漿対照AおよびBのコレステロール流出能を決定した。対照Aのコレステロール流出能は対照Bのコレステロール流出能の50%であった。同様に、対照Bは、対照Aのおよそ2倍のレベルのプレベータHDLを含有した。
正常な個体、メタボリックシンドロームの個体および糖尿病の個体由来の血漿のコレステロール逆転送能力
糖尿病/メタボリックシンドロームの状態が同定された9個体由来の血漿をHDL機能アッセイによって検査した。簡単に述べると、血漿を、絶食した、糖尿病状態がよく特徴付けられた個体(女性5個体および男性4個体)のセットから採取した。血漿45μlをapoA−Iプローブ(3mg/ml)15μlに添加した。apoA−IプローブはG217C突然変異を担持するapoA−Iで構成された。この突然変異により、ネイティブな配列にはシステイン残基がないapoA−Iにシステインを導入した。導入したシステイン(217位)のスルフヒドリルをチオスルホネート連結窒素酸化物スピンラベルで誘導体化した。得られたスピンラベルしたタンパク質を3mg/mlに濃縮した。プローブを血漿に添加した後、EPRサインスペクトルを8℃および37℃の両方でモニターした。中心場ピークの振幅を参照試料と比較した%反応として報告した。この場合、参照試料は0.1%SDSに対するプローブの反応であり、これにより最大の脂質様反応がもたらされた。患者は、年齢を対応させた。内部標準(Bruker Proprietary Internal Standard)を読み取りに含め(示されていない)、計器の性能に対する対照として使用した。しかし、塩化マンガンなどの内部標準で十分である。
Claims (383)
- 血液中の高密度リポタンパク質(HDL)のコレステロール逆転送を支持する能力を測定するための方法であって、
a)HDLに対して高い特異性を有するスピンラベルしたリポタンパク質プローブをin vitro血液試料に添加するステップと、
b)前記試料の電子常磁性共鳴(EPR)スペクトルを収集するステップと
を含む方法。 - c)ステップb)の前記スペクトルと陽性対照および/または陰性対照を比較することによって、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブとHDLとの結合を比較するステップ
をさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 前記陰性対照が、無脂質環境または低脂質環境中にある前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブのEPRスペクトルである、請求項2に記載の方法。
- 前記陽性対照が、ジミリストイルホスファチジルコリンと結合した前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブのEPRスペクトルである、請求項2に記載の方法。
- 前記コレステロール逆転送がコレステロール流出潜在力である、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記EPRスペクトルの中心ピークの振幅を測定する、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
- 低脂質のスピンラベルしたリポタンパク質プローブのEPRスペクトルと比較した、前記血液試料中の前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの前記EPRスペクトルの前記中心ピークの前記振幅の差異が、前記リポタンパク質と前記HDLとの結合の差異を示す、請求項6に記載の方法。
- 前記中心ピークの前記振幅の増加が、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブと前記HDLとの結合の増加を示す、請求項7に記載の方法。
- 前記中心ピークの前記振幅の増加が、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブと前記HDLとの結合の減少を示す、請求項7に記載の方法。
- 前記中心ピークの前記振幅の減少が、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブと前記HDLとの結合の増加を示す、請求項7に記載の方法。
- 前記中心ピークの前記振幅の減少が、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブと前記HDLとの結合の減少を示す、請求項7に記載の方法。
- 前記中心ピークの振幅の変化を、前記血液試料中の前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブとHDLが結合しても変化しない近ピークおよび/または遠ピークの振幅との関連で測定する、請求項8から11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記EPRスペクトルのプロファイルの変化が、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの結合の変化を示す、請求項6に記載の方法。
- 前記中心ピークのシフトが、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの結合の変化を示す、請求項6に記載の方法。
- 前記in vitro血液試料が全血試料である、請求項1から14のいずれか一項に記載の方法。
- 前記in vitro血液試料が血漿試料である、請求項1から14のいずれか一項に記載の方法。
- 前記in vitro血液試料が血清試料である、請求項1から14のいずれか一項に記載の方法。
- 前記in vitro血液試料が、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブを添加する前に1回または2回凍結解凍されている、請求項1から17のいずれか一項に記載の方法。
- 前記in vitro血液試料が非ヒト哺乳動物血液試料である、請求項1から18のいずれか一項に記載の方法。
- 前記in vitro血液試料がヒト血液試料である、請求項19に記載の方法。
- 前記スピンラベルが前記リポタンパク質の単一の部位に位置する、請求項1から20のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、第1のスピンラベルおよび第2のスピンラベルを含む、請求項1から20のいずれか一項に記載の方法。
- 第1のスピンラベルが前記リポタンパク質の第1の単一の部位に位置し、前記第2のスピンラベルが、前記リポタンパク質の第2の単一の部位に位置する、請求項22に記載の方法。
- 前記スピンラベルが前記リポタンパク質に共有結合によって付着している、請求項1から23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スピンラベルが前記リポタンパク質に非共有結合によって付着している、請求項1から23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoA−Iまたはその断片を含み、前記apoA−Iまたはその断片が、HDLに対して高い特異性を有する、請求項1から25のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoA−IのHDL結合領域を含むapoA−Iの断片を含む、請求項26に記載の方法。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質またはその断片の単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項26または27に記載の方法。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質の残基188〜残基243のうちの1つのアミノ酸残基に共有結合によって付着している、請求項28に記載の方法。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質の26位、44位、64位、98位、101位、111位、167位、217位、または226位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項28に記載の方法。
- 26位、44位、64位、98位、101位、111位、167位、217位、または226位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項30に記載の方法。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iタンパク質の217位のシステイン残基に共有結合によって付着している、請求項28から31のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iタンパク質の217位のシステイン残基に共有結合によって付着しており、前記スピンラベルが(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネートである、請求項32に記載の方法。
- 前記EPRスペクトルの中心ピークの振幅の増加が、前記in vitro血液試料における前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブとHDLとの結合の増加を示す、請求項33に記載の方法。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iタンパク質の111位のシステイン残基に共有結合によって付着しており、前記スピンラベルが(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネートである、請求項30に記載の方法。
- 前記EPRスペクトルの中心ピークの振幅の増加が、前記in vitro血液試料における前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブとHDLとの結合の増加を示す、請求項35に記載の方法。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoA−IIリポタンパク質またはその断片を含み、前記apoA−IIまたはその断片が、HDLに対して高い特異性を有する、請求項1から25のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スピンラベルが前記apoA−IIリポタンパク質の単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項37に記載の方法。
- 前記apoA−IIタンパク質の前記単一の部位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項38に記載の方法。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoEリポタンパク質またはその断片を含み、前記apoEまたはその断片が、HDLに対して高い特異性を有する、請求項1から25のいずれか一項に記載の方法。
- 前記apoEリポタンパク質がapoE3リポタンパク質である、請求項40に記載の方法。
- 前記スピンラベルが前記apoEリポタンパク質の単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項40または41のいずれか一項に記載の方法。
- 前記apoEタンパク質の前記単一の部位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項42に記載の方法。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、HDLに対して高い特異性を有するapoA−I模倣物を含む、請求項1から25のいずれか一項に記載の方法。
- 前記apoA−I模倣物が18A、18A−Pro−18A、4F、および4f−Pro−4Fからなる群から選択される、請求項44に記載の方法。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−I模倣物の単一の部位に共有結合によって付着している、請求項44または45に記載の方法。
- 前記スピンラベルが自由電子を担持する原子を含む、請求項1から46のいずれか一項に記載の方法。
- 自由電子を担持する前記原子が窒素である、請求項47に記載の方法。
- 前記スピンラベルが、(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート−15N;1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート−15N,d15;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;(−)−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;(+)−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;3−(2−ヨードアセトアミド)−PROXYL;3−ヨードメチル−(1−オキシ−2,2,5,5−テトラメチルピロリン);1−オキシル−3−(マレイミドメチル)−2,2,5,5−テトラメチル−1−ピロリジン;(1−オキシル−2,2,3,5,5−ペンタメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;N−(1−オキシル−2,2,6,6−テトラメチル−4−ピペリジニル)マレイミド;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドエチルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドヘキシルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドプロピルメタンメタンチオスルホネート;3−(2−ブロモアセトアミド)−2,2,5,5−テトラメチル−1−ピロリジニルオキシ、フリーラジカル;4−ブロモ−3−ヒドロキシメチル−1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−δ3−ピロリン;3−ブロモメチル−2,5−ジヒドロ−2,2,5,5−テトラメチル−1H−ピロール−1−イルオキシ;4−ブロモ−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;3−[2−(2−マレイミドエトキシ)エチルカルバモイル]−PROXYL;3−マレイミド−PROXL、3−(2−マレイミドエチル−カルバモイル)−PROXYL、フリーラジカル;3−(3−(2−ヨード−アセトアミド)−プロピル−カルバモイル)−PROXYL、フリーラジカル;3−(2−ブロモ−アセトアミド−メチル)−PROXYL、フリーラジカル;または3−(2−ヨード−アセトアミド−メチル)−PROXYL、フリーラジカルである、請求項29に記載の方法。
- 前記スピンラベルが過重水素化スピンラベルである、請求項48または49に記載の方法。
- 前記スピンラベルが、前記リポタンパク質のアミノ酸にチオスルホネート部分を通じて付着している、請求項47から50のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スピンラベルが、前記スピンラベルと前記リポタンパク質との間のスペーサー部分をさらに含む、請求項47から50のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スペーサー部分がメタン、エタン、プロパンまたはブタンである、請求項52に記載の方法。
- 前記HDLがHDL3である、請求項1から53のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブを、最終濃度約0.1mg/ml〜約1.1mg/mlで前記in vitro血液試料に添加する、請求項1から54のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブを、最終濃度約0.3mg/mlで前記in vitro血液試料に添加する、請求項55に記載の方法。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブを、最終濃度約0.8mg/ml超で前記in vitro血液試料に添加する、請求項55に記載の方法。
- 前記EPRスペクトルを、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブを前記in vitro血液試料に添加した後の1つまたは複数の時点で収集する、請求項1から57のいずれか一項に記載の方法。
- 前記EPRスペクトルを、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブを前記in vitro血液試料に添加した後1.5分、4分、6分、8分、10分、30分、60分の時点のうちの1つまたは複数でモニターする、請求項58に記載の方法。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブと前記HDLとの結合が平衡に達するまでの時間が10分以上であることが、HDLのコレステロール逆転送に関する能力の低下を示す、請求項58または59に記載の方法。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブと前記HDLとの結合が平衡に達するまでの時間が正常なコレステロール逆転送能力を伴うin vitro血液試料の平衡に達するまでの時間より少なくとも2倍長いことが、コレステロール逆転送の能力の低下を示す、請求項57または59のいずれか一項に記載の方法。
- ステップc)の評価が、スピンラベルしたリポタンパク質プローブと前記HDLとの結合の程度の決定である、請求項1から59のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブと前記HDLとの結合の平衡の程度が、正常なコレステロール逆転送能力を伴うin vitro血液試料における前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの結合と比較して80%以下であることが、コレステロール逆転送の能力の低下を示す、請求項62に記載の方法。
- ステップc)の評価が、前記HDLの転移温度の決定であり、前記HDLの転移温度が25℃以上であることが、コレステロール逆転送能力の低下を示す、請求項1から59のいずれか一項に記載の方法。
- 前記EPRスペクトルを0℃〜37℃にわたる温度で収集する、請求項64に記載の方法。
- 前記EPRスペクトルを、37℃で収集し、次いで、20℃および/または0℃で収集する、請求項64または65に記載の方法。
- 前記EPRスペクトルを、0℃で収集し、次いで、20℃および/または37℃で収集する、請求項64または65に記載の方法。
- 前記EPRスペクトルを、4℃で収集し、次いで、37℃で収集する、請求項64または65に記載の方法。
- 前記in vitro血液試料が抗凝固薬をさらに含む、請求項1から68のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗凝固薬がヘパリン、クマジン、ワルファリン、EDTA、シトレートまたはオキザレートである、請求項69に記載の方法。
- 第1の個体において心臓血管疾患が発生するリスクを決定するための方法であって、
a)請求項1から70のいずれか一項に従って前記第1の個体由来のin vitro血液試料のコレステロール逆転送能力を決定するステップ
を含む方法。 - b)ステップa)のコレステロール逆転送能力を、心臓血管疾患の明白なリスクがない1または複数の第2の個体由来の血液試料の逆転送能力と比較するステップであって、前記第1の個体由来の前記in vitro血液試料のコレステロール逆転送能力が前記1または複数の第2の個体と比較して低下していることが、心臓血管疾患のリスクの増加を示すステップ
をさらに含む、請求項71に記載の方法。 - 前記第1の個体および第2の個体がヒトである、請求項71または72に記載の方法。
- 前記心臓血管疾患が冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、および脳卒中から選択される、請求項73に記載の方法。
- 前記第1の個体が糖尿病かつ/または肥満である、請求項73または74に記載の方法。
- 心臓血管疾患に対する治療を受けている個体において心臓血管疾患に対する療法の経過をモニターするための方法であって、
a)請求項1から71のいずれか一項に従って前記個体由来のin vitro血液試料のコレステロール逆転送能力を決定するステップ
を含む方法。 - b)前記個体に前記療法を施している間、および/またはその後に、1回または複数回、前記個体由来のin vitro血液試料のコレステロール逆転送能力を決定するステップであって、前記個体由来の血液試料の前記逆転送能力の増加が治療有効性を示すステップ
をさらに含む、請求項76に記載の方法。 - 前記個体がヒトである、請求項77に記載の方法。
- 前記心臓血管疾患が冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、および脳卒中から選択される、請求項76または78に記載の方法。
- 心臓血管疾患に対する公知の療法または潜在的な療法の有効性を決定するための方法であって、
a)請求項1から71のいずれか一項に従って試験個体由来のin vitro血液試料のコレステロール逆転送能力を決定するステップであって、試験動物が前記療法に供されているステップ
を含む方法。 - 前記試験動物が、前記試験動物に前記療法を施すことによって前記療法に供されている、請求項80に記載の方法。
- b)前記療法を前記試験動物に施している間、および/またはその後に、1回または複数回、前記試験動物由来のin vitro血液試料のコレステロール逆転送能力を決定するステップであって、前記試験動物由来の前記in vitro血液試料の前記逆転送能力の増加が治療有効性を示すステップ
をさらに含む、請求項80または81に記載の方法。 - 心臓血管疾患に対する公知の療法または潜在的な療法の有効性を決定する方法であって、
a)請求項1から71のいずれか一項に従って試験動物由来のin vitro血液試料のコレステロール逆転送能力を決定するステップと、
b)前記試験動物に前記療法を施すステップと、
c)前記療法を前記試験動物に施している間、および/またはその後に、1回または複数回、前記試験動物由来の前記in vitro血液試料の前記コレステロール逆転送能力を決定するステップであって、前記試験動物由来の前記in vitro血液試料の前記逆転送能力の増加が治療有効性を示すステップと
を含む方法。 - 前記試験動物がマウス、ラット、ウサギ、ハムスター、モルモット、イヌ、ネコ、およびブタから選択される、請求項80から83のいずれか一項に記載の方法。
- in vitro血液試料中の高密度リポタンパク質(HDL)のコレステロール逆転送を支持する能力をEPRによって測定するためのキットであって、HDLに対して高い特異性を有するスピンラベルしたリポタンパク質プローブを含むキット。
- in vitro血液試料中の高密度リポタンパク質(HDL)のコレステロール逆転送を支持する能力をEPRによって測定するためのキットであって、スピンラベルと、HDLに対して高い特異性を有するリポタンパク質とを含むキット。
- 前記コレステロール逆転送がコレステロール流出潜在力である、請求項85または86に記載のキット。
- 個体において心臓血管疾患が発生するリスクを決定するためのキットであって、前記個体由来のin vitro血液試料に添加し、EPRによって分析するために製剤化されたスピンラベルしたリポタンパク質プローブを含むキット。
- 個体における心臓血管疾患に対する療法の経過を決定するためのキットであって、前記個体由来のin vitro血液試料に添加し、EPRによって分析するために製剤化されたスピンラベルしたリポタンパク質プローブを含むキット。
- 前記個体がヒトである、請求項88または89に記載のキット。
- 前記個体が非ヒト哺乳動物である、請求項88または89に記載のキット。
- 前記心臓血管疾患が冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、および脳卒中から選択される、請求項90に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、全血試料とともに使用するために製剤化されている、請求項85から92のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、血漿試料とともに使用するために製剤化されている、請求項85から92のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、血清試料とともに使用するために製剤化されている、請求項85から92のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブを添加する前に1回または2回凍結解凍されたin vitro血液試料とともに使用するために製剤化されている、請求項85から95のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、哺乳動物血液試料とともに使用するために製剤化されている、請求項85から95のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、ヒト血液試料とともに使用するために製剤化されている、請求項85から95のいずれか一項に記載のキット。
- 使用説明書をさらに含む、請求項85から98のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoA−Iまたはその断片を含み、前記apoA−Iまたはその断片が、HDLに対して高い特異性を有する、請求項85から99のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoA−IのHDL結合領域を含むapoA−Iの断片を含む、請求項100に記載のキット。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質の単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項100または101に記載のキット。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質の残基188〜残基243のうちの単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項100または101に記載のキット。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質の26位、44位、64位、98位、101位、111位、167位、217位、または226位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項100または101に記載のキット。
- 26位、44位、64位、98位、101位、111位、167位、217位、または226位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項104に記載のキット。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iタンパク質の217位のシステイン残基に共有結合によって付着している、請求項105に記載のキット。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iタンパク質の217位のシステイン残基に共有結合によって付着しており、前記スピンラベルが(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネートである、請求項106に記載の方法キット。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iタンパク質の111位のシステイン残基に共有結合によって付着しており、前記スピンラベルが(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネートである、請求項104に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoA−IIリポタンパク質またはその断片を含み、前記apoA−IIまたはその断片が、HDLに対して高い特異性を有する、請求項85から97のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベルが前記apoA−IIリポタンパク質またはその断片の単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項109に記載のキット。
- 前記apoA−IIタンパク質の前記単一の部位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項110に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoEリポタンパク質またはその断片を含み、前記apoEまたはその断片が、HDLに対して高い特異性を有する、請求項85から97のいずれか一項に記載のキット。
- 前記apoEリポタンパク質またはその断片がapoE3リポタンパク質またはその断片である、請求項112に記載のキット。
- 前記スピンラベルが前記apoEリポタンパク質の単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項112または113に記載のキット。
- 前記apoEタンパク質の前記単一の部位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項114に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、HDLに対して高い特異性を有するapoA−I模倣物を含む、請求項85から97のいずれか一項に記載のキット。
- 前記apoA−I模倣物が18A、18A−Pro−18A、4F、および4f−Pro−4Fからなる群から選択される、請求項116に記載のキット。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−I模倣物の単一の部位に共有結合によって付着している、請求項116または117に記載のキット。
- 前記スピンラベルが自由電子を担持する原子を含む、請求項85から118のいずれか一項に記載のキット。
- 自由電子を担持する前記原子が窒素である、請求項119に記載のキット。
- 前記スピンラベルが、(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート−15N;1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート−15N,d15;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;(−)−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;(+)−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;3−(2−ヨードアセトアミド)−PROXYL;3−ヨードメチル−(1−オキシ−2,2,5,5−テトラメチルピロリン);1−オキシル−3−(マレイミドメチル)−2,2,5,5−テトラメチル−1−ピロリジン;(1−オキシル−2,2,3,5,5−ペンタメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;N−(1−オキシル−2,2,6,6−テトラメチル−4−ピペリジニル)マレイミド;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドエチルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドヘキシルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドプロピルメタンメタンチオスルホネート;3−(2−ブロモアセトアミド)−2,2,5,5−テトラメチル−1−ピロリジニルオキシ、フリーラジカル;4−ブロモ−3−ヒドロキシメチル−1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−δ3−ピロリン;3−ブロモメチル−2,5−ジヒドロ−2,2,5,5−テトラメチル−1H−ピロール−1−イルオキシ;4−ブロモ−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;3−[2−(2−マレイミドエトキシ)エチルカルバモイル]−PROXYL;3−マレイミド−PROXL、3−(2−マレイミドエチル−カルバモイル)−PROXYL、フリーラジカル;3−(3−(2−ヨード−アセトアミド)−プロピル−カルバモイル)−PROXYL、フリーラジカル;3−(2−ブロモ−アセトアミド−メチル)−PROXYL、フリーラジカル;または3−(2−ヨード−アセトアミド−メチル)−PROXYL、フリーラジカルである、請求項119または120に記載のキット。
- 前記スピンラベルが過重水素化スピンラベルである、請求項120または121に記載のキット。
- 前記スピンラベルが、前記リポタンパク質のアミノ酸にチオスルホネートを通じて付着している、請求項120から122のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベルが、前記スピンラベルと前記リポタンパク質との間のスペーサーをさらに含む、請求項120のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スペーサーがメタン、エタン、プロパンまたはブタンである、請求項124に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの60%超がHDLと結合する、請求項85から125のいずれか一項に記載のキット。
- 前記HDLがHDL3である、請求項126に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、前記in vitro血液試料に最終濃度約0.1mg/ml〜約1.1mg/mlで添加されるように製剤化されている、請求項85から127のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、前記in vitro血液試料に最終濃度約0.3mg/mlで添加されるように製剤化されている、請求項128に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、前記in vitro血液試料に最終濃度約0.8mg/ml超で添加されるように製剤化されている、請求項128に記載のキット。
- 抗凝固薬をさらに含む、請求項85から130のいずれか一項に記載のキット。
- 前記抗凝固薬がヘパリン、クマジン、ワルファリン、EDTA、シトレートまたはオキザレートである、請求項131に記載のキット。
- シリンジをさらに含む、請求項85から132のいずれか一項に記載のキット。
- apoA−IIリポタンパク質またはその断片を含む組成物であって、前記apoA−IIリポタンパク質がスピンラベルを含み、前記apoA−IIリポタンパク質またはその断片がHDLに対して高い特異性を有する組成物。
- 前記スピンラベルが前記apoA−IIリポタンパク質またはその断片の単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項134に記載の組成物。
- 前記apoA−IIタンパク質の前記単一の部位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項135に記載の組成物。
- HDLに対して高い特異性を有し、スピンラベルを含むapoA−I模倣物を含む組成物。
- 前記apoA−I模倣物が、18A、18A−Pro−18A、4F、および4f−Pro−4Fからなる群から選択される、請求項137に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−I模倣物の単一の部位に共有結合によって付着している、請求項137または138に記載の組成物。
- apoA−Iリポタンパク質またはその断片を含む組成物であって、前記apoA−Iリポタンパク質またはその断片がスピンラベルを含み、前記スピンラベルが、(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;(−)−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;または(+)−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネートを含む組成物。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質の残基188〜残基243のうちの単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項140に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質の26位、44位、64位、98位、101位、111位、167位、217位、または226位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項140または141に記載の組成物。
- 26位、44位、64位、98位、101位、111位、167位、217位、または226位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項142に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iタンパク質の217位のシステイン残基に共有結合によって付着している、請求項143に記載の組成物。
- in vitro血液試料と、HDLに対して高い特異性を有するスピンラベルしたリポタンパク質プローブとを含む組成物。
- 前記in vitro血液試料が全血試料である、請求項145に記載の組成物。
- 前記in vitro血液試料が血漿試料である、請求項145に記載の組成物。
- 前記in vitro血液試料が血清試料である、請求項145に記載の組成物。
- 前記in vitro血液試料が1回または2回凍結解凍されている、請求項145から148のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記in vitro血液試料が非ヒト哺乳動物血液試料である、請求項145から149のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記哺乳動物血液試料がヒト血液試料である、請求項145から149のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoA−Iまたはその断片を含み、前記apoA−Iまたはその断片がHDLに対して高い特異性を有する、請求項145から150のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoA−IのHDL結合領域を含むapoA−Iの断片を含む、請求項152に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質の単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項152または153に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質の残基188〜残基243のうちの単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項152から154のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質の26位、44位、64位、98位、101位、111位、167位、217位、または226位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項152または153に記載の組成物。
- 26位、44位、64位、98位、101位、111位、167位、217位、または226位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項156に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iタンパク質の217位のシステイン残基に共有結合によって付着している、請求項157に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iタンパク質の217位のシステイン残基に共有結合によって付着しており、前記スピンラベルが(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネートである、請求項158に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iタンパク質の111位のシステイン残基に共有結合によって付着しており、前記スピンラベルが(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネートである、請求項157に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoA−IIリポタンパク質またはその断片を含み、前記apoA−IIまたはその断片が、HDLに対して高い特異性を有する、請求項145から150のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが前記apoA−IIリポタンパク質またはその断片の単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項161に記載の組成物。
- 前記apoA−IIタンパク質の前記単一の部位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項161または162に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoEリポタンパク質またはその断片を含み、前記apoEまたはその断片が、HDLに対して高い特異性を有する、請求項145から150のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記apoEリポタンパク質またはその断片がapoE3リポタンパク質またはその断片である、請求項164に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが前記apoEリポタンパク質の単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項163または164に記載の組成物。
- 前記apoEタンパク質の前記単一の部位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項166に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoA−I模倣物を含み、前記apoA−I模倣物が、HDLに対して高い特異性を有し、前記apoA−I模倣物が、18A、18A−Pro−18A、4F、および4f−Pro−4Fからなる群から選択される、請求項145から150のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−I模倣物の単一の部位に共有結合によって付着している、請求項167または168に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが自由電子を担持する原子を含む、請求項145から169のいずれか一項に記載の組成物。
- 自由電子を担持する前記原子が窒素である、請求項170に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが、(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート−15N;1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート−15N,d15;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;(−)−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;(+)−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;3−(2−ヨードアセトアミド)−PROXYL;3−ヨードメチル−(1−オキシ−2,2,5,5−テトラメチルピロリン);1−オキシル−3−(マレイミドメチル)−2,2,5,5−テトラメチル−1−ピロリジン;(1−オキシル−2,2,3,5,5−ペンタメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;N−(1−オキシル−2,2,6,6−テトラメチル−4−ピペリジニル)マレイミド;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドエチルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドヘキシルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドプロピルメタンメタンチオスルホネート;3−(2−ブロモアセトアミド)−2,2,5,5−テトラメチル−1−ピロリジニルオキシ、フリーラジカル;4−ブロモ−3−ヒドロキシメチル−1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−δ3−ピロリン;3−ブロモメチル−2,5−ジヒドロ−2,2,5,5−テトラメチル−1H−ピロール−1−イルオキシ;4−ブロモ−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;3−[2−(2−マレイミドエトキシ)エチルカルバモイル]−PROXYL;3−マレイミド−PROXL、3−(2−マレイミドエチル−カルバモイル)−PROXYL、フリーラジカル;3−(3−(2−ヨード−アセトアミド)−プロピル−カルバモイル)−PROXYL、フリーラジカル;3−(2−ブロモ−アセトアミド−メチル)−PROXYL、フリーラジカル;または3−(2−ヨード−アセトアミド−メチル)−PROXYL、フリーラジカルである、請求項170または171に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが過重水素化スピンラベルである、請求項171または172に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが、前記リポタンパク質のアミノ酸にチオスルホネートを通じて付着している、請求項171から173のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが、前記スピンラベルと前記リポタンパク質との間のスペーサーをさらに含む、請求項174に記載の組成物。
- 前記スペーサーがメタン、エタン、プロパンまたはブタンである、請求項175に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブがHDL3と結合する、請求項145から176のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの60%超がHDL3と結合する、請求項177に記載の組成物。
- 抗凝固薬をさらに含む、請求項145から178のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記抗凝固薬がヘパリン、クマジン、ワルファリン、EDTA、シトレートまたはオキザレートである、請求項179に記載の組成物。
- 前記1または複数の第2の個体のスペクトルがヒストリカルスペクトルである、請求項73または74に記載の方法。
- 前記個体に前記療法を施す前に前記個体由来のin vitro血液試料のコレステロール逆転送能力を決定するステップをさらに含む、請求項77に記載の方法。
- 前記試験個体が試験動物である、請求項80に記載の方法。
- 前記試験動物に前記療法を施す前に前記個体由来のin vitro血液試料のコレステロール逆転送能力を決定するステップをさらに含む、請求項83に記載の方法。
- HDLのコレステロール逆転送を支持する能力を測定するための組成物であって、前記組成物は、試験片を含み、前記試験片は、スピンラベルしたリポタンパク質プローブおよび固体支持体を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、スピンラベルおよびタンパク質を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、HDLに対して高い特異性を有する組成物。
- 前記コレステロール逆転送が流体のコレステロール流出潜在力である、請求項185に記載の組成物。
- 血液試料または脳脊髄液試料から選択される試料とともに使用するために製剤化されている、請求項185に記載の組成物。
- 前記血液試料が全血試料、血漿試料、および血清試料から選択される、請求項187に記載の組成物。
- 前記試料が哺乳動物血液試料である、請求項187に記載の組成物。
- 前記哺乳動物試料がヒト血液試料である、請求項188に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoA−Iポリペプチドまたはその断片を含む、請求項185に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoA−IのHDL結合領域を含むapoA−I断片を含む、請求項191に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iリポタンパク質またはその断片の単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項191または192に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが、残基188〜残基243に位置する前記apoA−Iリポタンパク質のアミノ酸残基に共有結合によって付着している、請求項193に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質の26位、44位、64位、98位、101位、111位、167位、217位、または226位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項193に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質の98位、111位または217位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項195に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質の26位、44位、64位、101位、167位または226位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項195に記載の組成物。
- 98位、111位、または217位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項195に記載の組成物。
- 26位、44位、64位、101位、167位、または226位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項195に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iタンパク質の217位のシステイン残基に共有結合によって付着している、請求項198に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iタンパク質の217位のシステイン残基に共有結合によって付着しており、前記スピンラベルが(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネートである、請求項200に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iタンパク質の111位のシステイン残基に共有結合によって付着しており、前記スピンラベルが(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネートである、請求項198に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoA−IIリポタンパク質またはその断片を含み、前記apoA−IIまたはその断片が、HDLに対して高い特異性を有する、請求項185から190のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記apoA−IIまたはその断片、ここで、全リポタンパク質分子の60%以上、70%以上、80%以上、または90%以上がHDLと会合する、請求項203に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが前記apoA−IIリポタンパク質またはその断片の単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項203に記載の組成物。
- 前記apoA−IIタンパク質の前記単一の部位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項205に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoEリポタンパク質またはその断片を含み、前記apoEまたはその断片が、HDLに対して高い特異性を有する、請求項185から190のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記apoEリポタンパク質またはその断片がapoE3リポタンパク質またはその断片である、請求項207に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが前記apoEリポタンパク質の単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項207または208に記載の組成物。
- 前記apoEタンパク質の前記単一の部位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項209に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、HDLに対して高い特異性を有するapoA−I模倣物を含む、請求項185から190のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記apoA−I模倣物が18A、18A−Pro−18A、4F、および4f−Pro−4Fからなる群から選択される、請求項211に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−I模倣物の単一の部位に共有結合によって付着している、請求項211または212に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが自由電子を担持する原子を含む、請求項185から213のいずれか一項に記載の組成物。
- 自由電子を担持する前記原子が窒素である、請求項214に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが、(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート−15N;1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート−15N,d15;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;(−)−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;(+)−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;3−(2−ヨードアセトアミド)−PROXYL;3−ヨードメチル−(1−オキシ−2,2,5,5−テトラメチルピロリン);1−オキシル−3−(マレイミドメチル)−2,2,5,5−テトラメチル−1−ピロリジン;(1−オキシル−2,2,3,5,5−ペンタメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;N−(1−オキシル−2,2,6,6−テトラメチル−4−ピペリジニル)マレイミド;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドエチルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドヘキシルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドプロピルメタンメタンチオスルホネート;3−(2−ブロモアセトアミド)−2,2,5,5−テトラメチル−1−ピロリジニルオキシ、フリーラジカル;4−ブロモ−3−ヒドロキシメチル−1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−δ3−ピロリン;3−ブロモメチル−2,5−ジヒドロ−2,2,5,5−テトラメチル−1H−ピロール−1−イルオキシ;4−ブロモ−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;3−[2−(2−マレイミドエトキシ)エチルカルバモイル]−PROXYL;3−マレイミド−PROXL、3−(2−マレイミドエチル−カルバモイル)−PROXYL、フリーラジカル;3−(3−(2−ヨード−アセトアミド)−プロピル−カルバモイル)−PROXYL、フリーラジカル;3−(2−ブロモ−アセトアミド−メチル)−PROXYL、フリーラジカル;または3−(2−ヨード−アセトアミド−メチル)−PROXYL、フリーラジカルである、請求項214または215に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが過重水素化スピンラベルである、請求項215または216に記載の組成物。
- 前記スピンラベルが、前記リポタンパク質のアミノ酸にチオスルホネートを通じて付着している、請求項214から217のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質が、前記スピンラベルと前記リポタンパク質との間のスペーサーをさらに含む、請求項214から218のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記スペーサーがメタン、エタン、プロパンまたはブタンである、請求項219に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの60%超がHDLと結合する、請求項185から220のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記HDLがHDL3である、請求項221に記載の組成物。
- 前記固体支持体が、常磁性が低いポリマー材料またはセルロース系材料から選択される、請求項185から222のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記固体支持体が吸着性材料である、請求項185から222のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記吸着性材料がポリフッ化ビニリデン(PVDF)、ナイロンまたはニトロセルロースである、請求項224に記載の組成物。
- 前記固体支持体が吸着性材料をさらに含む、請求項185から223のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記固体支持体に共有結合によって付着している、請求項185から225のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記吸着性材料に共有結合によって付着している、請求項226に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記試験片に静電気によって付着している、請求項185から225のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記吸着性材料に静電気によって付着している、請求項226に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記試験片に疎水性相互作用によって付着している、請求項185から225のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記吸着性材料に疎水性相互作用によって付着している、請求項226に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記試験片に疎水性相互作用および静電気によって付着している、請求項185から225のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記吸着性材料に疎水性相互作用および静電気によって付着している、請求項226に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記吸着性材料内に捕捉されている、請求項226に記載の組成物。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記固体支持体または吸着性材料上で乾燥されている、請求項226に記載の組成物。
- 前記試験片がスピンラベルした参照プローブをさらに含む、請求項185から236のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記スピンラベルした参照プローブがHDLの存在の影響を受けないスピンプローブである、請求項237に記載の組成物。
- 前記スピンラベルした参照プローブが、テトラメチルピペリジン(TEMPO;2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−1−オキシル)、TEMPOL(4−ヒドロキシ−2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−1−オキシル)、TAMINE(4−アミノ−2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−1−オキシル)、BZONO(4−(ベンゾイルオキシ)−2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−1−オキシル)、SLPEO(ポリ(エチレンオキシド)−2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−1−オキシル)、およびテトラシアノキノジメタン(TCNQ;2,5−シクロヘキサジエン−1,4−ジイリデン)ジマロノニトリル、7,7,8,8−テトラシアノキノジメタン)から選択される、請求項237に記載の組成物。
- 前記試験片が2種以上のスピンラベルしたリポタンパク質プローブを含む、請求項185から237のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記試験片が治療薬または治療薬候補をさらに含む、請求項185から240のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記治療薬または治療薬候補がCETP阻害剤である、請求項241に記載の組成物。
- 前記治療薬または治療薬候補がトルセトラピブ、アナセトラピブ、ダルセトラピブまたはエバセトラピブである、請求項242に記載の組成物。
- in vitro試料の、HDLのコレステロール逆転送を支持する能力をEPRによって測定するためのキットであって、固体支持体およびスピンラベルしたリポタンパク質プローブを含む試験片を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、スピンラベルおよびタンパク質を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、HDLに対して高い特異性を有するキット。
- コレステロール流出潜在力を調節するための治療薬の有効性を試験するためのキットであって、固体支持体およびスピンラベルしたリポタンパク質プローブを含む試験片を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、スピンラベルおよびリポタンパク質を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、HDLに対して高い特異性を有するキット。
- 個体における高コレステロール血症を治療するための治療薬の有益性を決定するためのキットであって、固体支持体、スピンラベルしたリポタンパク質プローブ、ならびに治療薬を含む試験片を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、スピンラベルおよびリポタンパク質を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、HDLに対して高い特異性を有するキット。
- 個体におけるアルツハイマー病を治療するための治療薬の有益性を決定するためのキットであって、固体支持体、スピンラベルしたリポタンパク質プローブ、ならびに治療薬を含む試験片を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、スピンラベルおよびリポタンパク質を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、HDLに対して高い特異性を有するキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記固体支持体上に存在する、請求項244から247のいずれか一項に記載のキット。
- 1つまたは複数の追加的な試験片をさらに含む、請求項248に記載のキット。
- 前記1つまたは複数の追加的な試験片が、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブを異なる量で含む、請求項249に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記試験片とは別の容器に入っている、請求項244から247のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが乾燥粉末として提供される、請求項251に記載のキット。
- スピンラベル参照プローブをさらに含む、請求項244から252のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベル参照プローブが前記固体支持体上に存在する、請求項253に記載のキット。
- 前記スピンラベル参照プローブが前記試験片とは別の容器に入っている、請求項253に記載のキット。
- 前記スピンラベル参照プローブが乾燥粉末として提供される、請求項255に記載のキット。
- 前記コレステロール逆転送が流体のコレステロール流出潜在力である、請求項244から256のいずれか一項に記載のキット。
- 前記試験片が、血液試料または脳脊髄液試料から選択される試料とともに使用するために製剤化されている、請求項244から256のいずれか一項に記載のキット。
- 前記血液試料が全血試料、血漿試料、および血清試料から選択される、請求項258に記載のキット。
- 前記試料が哺乳動物血液試料である、請求項258に記載のキット。
- 前記哺乳動物試料がヒト血液試料である、請求項260に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoA−Iポリペプチドまたはその断片を含む、請求項244から256のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoA−IのHDL結合領域を含むapoA−I断片を含む、請求項262に記載のキット。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iリポタンパク質またはその断片の単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項262または263に記載のキット。
- 前記スピンラベルが、残基188〜残基243に位置する前記apoA−Iリポタンパク質のアミノ酸残基に共有結合によって付着している、請求項264に記載のキット。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質の26位、44位、64位、98位、101位、111位、167位、217位、または226位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項265に記載のキット。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質の98位、111位または217位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項266に記載のキット。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質の26位、44位、64位、101位、167位または226位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項266に記載のキット。
- 98位、111位、または217位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項266に記載のキット。
- 26位、44位、64位、101位、167位、または226位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項266に記載のキット。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iタンパク質の217位のシステイン残基に共有結合によって付着している、請求項269に記載のキット。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iタンパク質の217位のシステイン残基に共有結合によって付着しており、前記スピンラベルが(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネートである、請求項271に記載のキット。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iタンパク質の111位のシステイン残基に共有結合によって付着しており、前記スピンラベルが(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネートである、請求項269に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoA−IIリポタンパク質またはその断片を含み、前記apoA−IIまたはその断片が、HDLに対して高い特異性を有する、請求項244から261のいずれか一項に記載のキット。
- 前記apoA−IIまたはその断片、ここで、全リポタンパク質分子の60%以上、70%以上、80%以上、または90%以上がHDLと会合する、請求項274に記載のキット。
- 前記スピンラベルが前記apoA−IIリポタンパク質またはその断片の単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項274に記載のキット。
- 前記apoA−IIタンパク質の前記単一の部位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項276に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoEリポタンパク質またはその断片を含み、前記apoEリポタンパク質またはその断片が、HDLに対して高い特異性を有する、請求項244から261のいずれか一項に記載のキット。
- 前記apoEリポタンパク質またはその断片がapoE3リポタンパク質またはその断片である、請求項278に記載のキット。
- 前記スピンラベルが前記apoEリポタンパク質の単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項278または279に記載のキット。
- 前記apoEタンパク質の前記単一の部位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項280に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、HDLに対して高い特異性を有するapoA−I模倣物を含む、請求項244から261のいずれか一項に記載のキット。
- 前記apoA−I模倣物が18A、18A−Pro−18A、4F、および4f−Pro−4Fからなる群から選択される、請求項282に記載のキット。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−I模倣物の単一の部位に共有結合によって付着している、請求項282または283に記載のキット。
- 前記スピンラベルが自由電子を担持する原子を含む、請求項244から284のいずれか一項に記載のキット。
- 自由電子を担持する前記原子が窒素である、請求項285に記載のキット。
- 前記スピンラベルが、(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート−15N;1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート−15N,d15;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;(−)−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;(+)−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;3−(2−ヨードアセトアミド)−PROXYL;3−ヨードメチル−(1−オキシ−2,2,5,5−テトラメチルピロリン);1−オキシル−3−(マレイミドメチル)−2,2,5,5−テトラメチル−1−ピロリジン;(1−オキシル−2,2,3,5,5−ペンタメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;N−(1−オキシル−2,2,6,6−テトラメチル−4−ピペリジニル)マレイミド;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドエチルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドヘキシルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドプロピルメタンメタンチオスルホネート;3−(2−ブロモアセトアミド)−2,2,5,5−テトラメチル−1−ピロリジニルオキシ、フリーラジカル;4−ブロモ−3−ヒドロキシメチル−1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−δ3−ピロリン;3−ブロモメチル−2,5−ジヒドロ−2,2,5,5−テトラメチル−1H−ピロール−1−イルオキシ;4−ブロモ−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;3−[2−(2−マレイミドエトキシ)エチルカルバモイル]−PROXYL;3−マレイミド−PROXL、3−(2−マレイミドエチル−カルバモイル)−PROXYL、フリーラジカル;3−(3−(2−ヨード−アセトアミド)−プロピル−カルバモイル)−PROXYL、フリーラジカル;3−(2−ブロモ−アセトアミド−メチル)−PROXYL、フリーラジカル;または3−(2−ヨード−アセトアミド−メチル)−PROXYL、フリーラジカルである、請求項285または286に記載のキット。
- 前記スピンラベルが過重水素化スピンラベルである、請求項286または287に記載のキット。
- 前記スピンラベルが、前記リポタンパク質のアミノ酸にチオスルホネートを通じて付着している、請求項286から288のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質が、前記スピンラベルと前記リポタンパク質との間のスペーサーをさらに含む、請求項285から289のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スペーサーがメタン、エタン、プロパンまたはブタンである、請求項290に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの60%超がHDLと結合する、請求項244から291のいずれか一項に記載のキット。
- 前記HDLがHDL3である、請求項292に記載のキット。
- 前記固体支持体が、常磁性が低いポリマー材料またはセルロース系材料から選択される、請求項244から293のいずれか一項に記載のキット。
- 前記固体支持体が吸着性材料である、請求項244から293のいずれか一項に記載のキット。
- 前記吸着性材料がポリフッ化ビニリデン(PVDF)、ナイロンまたはニトロセルロースである、請求項295に記載のキット。
- 前記固体支持体が吸着性材料をさらに含む、請求項244から294のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記固体支持体に共有結合によって付着している、請求項244から286のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記吸着性材料に共有結合によって付着している、請求項297に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記試験片に静電気によって付着している、請求項244から296のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記吸着性材料に静電気によって付着している、請求項297に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記試験片に疎水性相互作用によって付着している、請求項244から296のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記吸着性材料に疎水性相互作用によって付着している、請求項297に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記試験片に疎水性相互作用および静電気によって付着している、請求項244から296のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記吸着性材料に疎水性相互作用および静電気によって付着している、請求項297に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記吸着性材料内に捕捉されている、請求項297に記載のキット。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが前記固体支持体または吸着性材料上で乾燥されている、請求項297に記載のキット。
- 前記試験片がスピンラベルした参照プローブをさらに含む、請求項244から307のいずれか一項に記載のキット。
- 前記スピンラベルした参照プローブがHDLの存在の影響を受けないスピンプローブである、請求項308に記載のキット。
- 前記スピンラベルした参照プローブが、テトラメチルピペリジン(TEMPO;2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−1−オキシル)、TEMPOL(4−ヒドロキシ−2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−1−オキシル)、TAMINE(4−アミノ−2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−1−オキシル)、BZONO(4−(ベンゾイルオキシ)−2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−1−オキシル)、SLPEO(ポリ(エチレンオキシド)−2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−1−オキシル)、およびテトラシアノキノジメタン(TCNQ;2,5−シクロヘキサジエン−1,4−ジイリデン)ジマロノニトリル、7,7,8,8−テトラシアノキノジメタン)から選択される、請求項309に記載のキット。
- 2種以上のスピンラベルしたリポタンパク質プローブを含む、請求項244から310のいずれか一項に記載のキット。
- 前記試験片が治療薬または治療薬候補をさらに含む、請求項244から311のいずれか一項に記載のキット。
- 前記治療薬または治療薬候補がHDL修飾治療薬またはHDL修飾治療薬候補である、請求項312に記載のキット。
- 前記治療薬または治療薬候補がCETP阻害剤である、請求項312に記載のキット。
- 前記治療薬または治療薬候補がトルセトラピブ(Torcetrapib)、アナセトラピブ(Anacetrapib)、ダルセトラピブ(Dalcetrapib)またはエバセトラピブ(Evacetrapib)である、請求項314に記載のキット。
- 凝固薬をさらに含む、請求項244から315のいずれか一項に記載のキット。
- 前記凝固薬が、ヘパリン、クマジン、ワルファリン、EDTA、シトレートまたはオキザレートである、請求項316に記載のキット。
- 使用説明書をさらに含む、請求項244から317のいずれか一項に記載のキット。
- 試料中の高密度リポタンパク質(HDL)のコレステロール逆転送を支持する能力を測定するための方法であって、
a)in vitro試料を、固体支持体およびスピンラベルしたリポタンパク質プローブを含む試験片と接触させるステップであって、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブがスピンラベルおよびリポタンパク質を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブがHDLに対して高い特異性を有するステップと、
b)前記試験片上の前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの電子常磁性共鳴(EPR)スペクトルを収集するステップと
を含む方法。 - 試料中の高密度リポタンパク質(HDL)のコレステロール逆転送を支持する能力を測定するための方法であって、
a)in vitro試料を、スピンラベルしたリポタンパク質プローブと接触させるステップであって、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、スピンラベルおよびリポタンパク質を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、HDLに対して高い特異性を有すると、
b)前記in vitro試料を、固体支持体を含む試験片と接触させるステップであって、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの一部または全部が前記試験片に接着するステップと、
c)前記試験片上の前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの電子常磁性共鳴(EPR)スペクトルを収集するステップと
を含む方法。 - ステップa)およびb)が逐次的または同時になされる、請求項320に記載の方法。
- 治療薬の、個体における高コレステロール血症またはアルツハイマー病を治療するための有益性を決定するための方法であって、
a)前記個体由来のin vitro試料を、固体支持体およびスピンラベルしたリポタンパク質プローブを含む試験片と接触させるステップであって、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、スピンラベルおよびリポタンパク質を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、HDLに対して高い特異性を有する、ステップと、
b)前記試験片上の前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの電子常磁性共鳴(EPR)スペクトルを収集するステップと
を含み、
前記個体の前記試料のコレステロール流出潜在力が正常な個体からのコレステロール流出潜在力と比較して減少することが、前記個体にとって、前記高コレステロール血症またはアルツハイマー病を治療することに前記治療薬が有益である可能性があることを示す方法。 - 個体におけるアルツハイマー病を診断するための方法であって、
a)前記個体由来のin vitro試料を、固体支持体およびスピンラベルしたリポタンパク質プローブを含む試験片と接触させるステップであって、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、スピンラベルおよびリポタンパク質を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、HDLに対して高い特異性を有する、ステップと、
b)前記試験片上の前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの電子常磁性共鳴(EPR)スペクトルを収集するステップと、
を含み、
前記個体の前記試料のコレステロール流出潜在力が正常な個体からのコレステロール流出潜在力と比較して減少することが、前記個体がアルツハイマー病を有する可能性があることを示す方法。 - 治療薬の、個体における高コレステロール血症またはアルツハイマー病を治療するための有益性を決定するための方法であって、
a)前記個体由来のin vitro試料を、スピンラベルしたリポタンパク質プローブと接触させるステップであって、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブは、スピンラベルおよびリポタンパク質を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブは、HDLに対して高い特異性を有する、ステップと、
b)前記in vitro試料を、固体支持体を含む試験片と接触させるステップであって、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの一部または全部が前記試験片に接着するステップと、
c)前記試験片上の前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの電子常磁性共鳴(EPR)スペクトルを収集するステップと
を含み、
前記個体の前記試料のコレステロール流出潜在力が正常な個体からのコレステロール流出潜在力と比較して減少することが、前記個体にとって、前記高コレステロール血症またはアルツハイマー病を治療することに前記治療薬が有益である可能性があることを示す方法。 - ステップa)およびb)が逐次的または同時になされる、請求項324に記載の方法。
- 高コレステロール血症を治療するための療法を受けている個体において高コレステロール血症を治療するために治療薬の治療有効性を最適化するための方法であって、
a)前記個体由来のin vitro試料を、固体支持体およびスピンラベルしたリポタンパク質プローブを含む試験片と接触させるステップであって、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、スピンラベルおよびリポタンパク質を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、HDLに対して高い特異性を有する、ステップと、
b)前記試験片上の前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの電子常磁性共鳴(EPR)スペクトルを収集するステップと
を含み、
前記個体の前記試料のコレステロール流出潜在力が療法を受ける前の前記個体由来の試料のコレステロール流出潜在力と比較して増加することが、前記個体にとって、高コレステロール血症を治療することに前記治療薬が有益である可能性があることを示す方法。 - 高コレステロール血症を治療するための療法を受けている個体において高コレステロール血症を治療するために治療薬の治療有効性を最適化するための方法であって、
a)前記個体由来のin vitro試料を、スピンラベルしたリポタンパク質プローブと接触させるステップであって、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブは、スピンラベルおよびリポタンパク質を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブは、HDLに対して高い特異性を有すると、
b)前記in vitro試料を、固体支持体を含む試験片と接触させるステップであって、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの一部または全部が前記試験片に接着するステップと、
c)前記試験片上の前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの電子常磁性共鳴(EPR)スペクトルを収集するステップと
を含み、
前記個体の前記試料のコレステロール流出潜在力が療法を受ける前の前記個体由来の試料のコレステロール流出潜在力と比較して増加することが、前記個体にとって、高コレステロール血症を治療することに前記治療薬が有益である可能性があることを示す方法。 - ステップa)およびb)が逐次的または同時になされる、請求項327に記載の方法。
- 療法に応答してコレステロール流出潜在力が増加することが実証されれば療法が継続される、請求項325または326に記載の方法。
- 前記療法に応答したコレステロール流出潜在力の変化を受けて療法が調節される、請求項326から329のいずれか一項に記載の方法。
- 個体の血液のコレステロール流出能を調節するための候補治療薬をスクリーニングするための方法であって、
a)コレステロール流出能が低いin vitro試料を、固体支持体およびスピンラベルしたリポタンパク質プローブを含む試験片と接触させるステップであって、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、スピンラベルおよびリポタンパク質を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、HDLに対して高い特異性を有する試験片と、
b)前記試料を前記候補組成物と接触させるステップと、
b)前記試験片上の前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの電子常磁性共鳴(EPR)スペクトルを収集するステップと
を含み、
前記試料のコレステロール流出潜在力の増加が、前記組成物がコレステロール流出能を調節するために有用である可能性があることを示す方法。 - 個体のコレステロール流出能を調節するための候補治療薬をスクリーニングするための方法であって、
a)コレステロール流出能が低いin vitro試料を、スピンラベルしたリポタンパク質プローブと接触させるステップであって、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブは、スピンラベルおよびリポタンパク質を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブは、HDLに対して高い特異性を有する、ステップと、
b)前記in vitro試料を前記候補治療薬と接触させるステップと、
c)前記in vitro試料を、固体支持体を含む試験片と接触させるステップであって、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの一部または全部が前記試験片に接着するステップと、
d)前記試験片上の前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの電子常磁性共鳴(EPR)スペクトルを収集するステップと
を含み、
前記試料のコレステロール流出潜在力の増加が、前記組成物がコレステロール流出能を調節するために有用である可能性があることを示す方法。 - ステップa)、b)およびc)が逐次的または同時になされる、請求項332に記載の方法。
- コレステロール流出潜在力の行動性調節因子を決定するための方法であって、
a)行動調節を受けている個体由来のin vitro試料を、固体支持体およびスピンラベルしたリポタンパク質プローブを含む試験片と接触させるステップであって、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、スピンラベルおよびリポタンパク質を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、HDLに対して高い特異性を有する、ステップと、
b)前記試験片上の前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの電子常磁性共鳴(EPR)スペクトルを収集するステップと
を含み、
前記個体の前記試料のコレステロール流出潜在力が行動調節を受ける前の前記個体由来の試料のコレステロール流出潜在力と比較して増加することが、前記行動調節によりコレステロール流出能に利益がもたらされることを示す方法。 - コレステロール流出潜在力の行動性調節因子を決定するための方法であって、
a)行動調節を受けている個体由来のin vitro試料を、スピンラベルしたリポタンパク質プローブと接触させるステップであって、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、スピンラベルおよびリポタンパク質を含み、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、HDLに対して高い特異性を有する、ステップと、
b)前記in vitro試料を、固体支持体を含む試験片と接触させるステップであって、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの一部または全部が前記試験片に接着するステップと、
c)前記試験片上の前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの電子常磁性共鳴(EPR)スペクトルを収集するステップと
を含み、
前記個体の前記試料のコレステロール流出潜在力が行動調節を受ける前の前記個体由来の試料のコレステロール流出潜在力と比較して増加することが、前記行動調節によりコレステロール流出能に利益がもたらされることを示す方法。 - ステップa)およびb)が逐次的または同時になされる、請求項335に記載の方法。
- 前記行動が食事、運動または喫煙である、請求項334から336のいずれか一項に記載の方法。
- 前記試料が血液試料または脳脊髄液試料である、請求項318から337のいずれか一項に記載の方法。
- 前記試料が血液試料である、請求項338に記載の方法。
- 前記血液試料が全血試料、血漿試料、および血清試料から選択される、請求項339に記載の方法。
- 前記試料が哺乳動物血液試料である、請求項340に記載の組成物。
- 前記哺乳動物試料がヒト血液試料である、請求項341に記載の組成物。
- 前記EPRスペクトルを、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブを前記in vitro試料に添加した後の1つまたは複数の時点で収集する、請求項318から342のいずれか一項に記載の方法。
- 前記EPRスペクトルを、前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブを前記in vitro試料に添加した後1.5分、4分、6分、8分、10分、30分、60分の時点のうちの1つまたは複数でモニターする、請求項343に記載の方法。
- 前記EPRスペクトルを0℃〜37℃にわたる温度で収集する、請求項318から344のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoA−Iポリペプチドまたはその断片を含む、請求項318から345のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoA−IのHDL結合領域を含むapoA−I断片を含む、請求項346に記載の方法。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iリポタンパク質またはその断片の単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項346または347に記載の方法。
- 前記スピンラベルが、残基188〜残基243に位置する前記apoA−Iリポタンパク質のアミノ酸残基に共有結合によって付着している、請求項348に記載の方法。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質の26位、44位、64位、98位、101位、111位、167位、217位、または226位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項348に記載の方法。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質の98位、111位または217位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項350に記載の方法。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−Iリポタンパク質の26位、44位、64位、101位、167位または226位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項350に記載の方法。
- 98位、111位、または217位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項350に記載の方法。
- 26位、44位、64位、101位、167位、または226位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項350に記載の方法。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iタンパク質の217位のシステイン残基に共有結合によって付着している、請求項353に記載の方法。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iタンパク質の217位のシステイン残基に共有結合によって付着しており、前記スピンラベルが(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネートである、請求項355に記載の方法。
- 前記スピンラベルが前記apoA−Iタンパク質の111位のシステイン残基に共有結合によって付着しており、前記スピンラベルが(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネートである、請求項353に記載の方法。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoA−IIリポタンパク質またはその断片を含み、前記apoA−IIまたはその断片が、HDLに対して高い特異性を有する、請求項318から345のいずれか一項に記載の方法。
- 前記apoA−IIまたはその断片、ここで、全リポタンパク質分子の60%以上、70%以上、80%以上、または90%以上がHDLと会合する、請求項358に記載の方法。
- 前記スピンラベルが前記apoA−IIリポタンパク質またはその断片の単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項358または359に記載の方法。
- 前記apoA−IIタンパク質の前記単一の部位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項360に記載の方法。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、apoEリポタンパク質またはその断片を含み、前記apoEまたはその断片が、HDLに対して高い特異性を有する、請求項318から345のいずれか一項に記載の方法。
- 前記apoEリポタンパク質またはその断片がapoE3リポタンパク質またはその断片である、請求項362に記載の方法。
- 前記スピンラベルが前記apoEリポタンパク質の単一の部位のアミノ酸に共有結合によって付着している、請求項362または363に記載の方法。
- 前記apoEタンパク質の前記単一の部位のネイティブなアミノ酸残基がシステイン残基によって置き換えられている、請求項364に記載の方法。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブが、HDLに対して高い特異性を有するapoA−I模倣物を含む、請求項318から345のいずれか一項に記載の方法。
- 前記apoA−I模倣物が18A、18A−Pro−18A、4F、および4f−Pro−4Fからなる群から選択される、請求項366に記載の方法。
- 前記スピンラベルが、前記apoA−I模倣物の単一の部位に共有結合によって付着している、請求項366または367に記載の方法。
- 前記スピンラベルが自由電子を担持する原子を含む、請求項318から368のいずれか一項に記載の方法。
- 自由電子を担持する前記原子が窒素である、請求項369に記載の方法。
- 前記スピンラベルが、(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート−15N;1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート−15N,d15;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;(−)−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;(+)−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンスルホネート;3−(2−ヨードアセトアミド)−PROXYL;3−ヨードメチル−(1−オキシ−2,2,5,5−テトラメチルピロリン);1−オキシル−3−(マレイミドメチル)−2,2,5,5−テトラメチル−1−ピロリジン;(1−オキシル−2,2,3,5,5−ペンタメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;N−(1−オキシル−2,2,6,6−テトラメチル−4−ピペリジニル)マレイミド;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−3−イル)メチルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドエチルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドヘキシルメタンチオスルホネート;(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチルピロリン−3−イル)カルバミドプロピルメタンメタンチオスルホネート;3−(2−ブロモアセトアミド)−2,2,5,5−テトラメチル−1−ピロリジニルオキシ、フリーラジカル;4−ブロモ−3−ヒドロキシメチル−1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−δ3−ピロリン;3−ブロモメチル−2,5−ジヒドロ−2,2,5,5−テトラメチル−1H−ピロール−1−イルオキシ;4−ブロモ−(1−オキシル−2,2,5,5−テトラメチル−Δ3−ピロリン−3−メチル)メタンチオスルホネート;3−[2−(2−マレイミドエトキシ)エチルカルバモイル]−PROXYL;3−マレイミド−PROXL、3−(2−マレイミドエチル−カルバモイル)−PROXYL、フリーラジカル;3−(3−(2−ヨード−アセトアミド)−プロピル−カルバモイル)−PROXYL、フリーラジカル;3−(2−ブロモ−アセトアミド−メチル)−PROXYL、フリーラジカル;または3−(2−ヨード−アセトアミド−メチル)−PROXYL、フリーラジカルである、請求項369または370に記載の方法。
- 前記スピンラベルが過重水素化スピンラベルである、請求項371または373に記載の方法。
- 前記スピンラベルが、前記リポタンパク質のアミノ酸にチオスルホネートを通じて付着している、請求項370から372のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質が、前記スピンラベルと前記リポタンパク質との間のスペーサーをさらに含む、請求項370から372のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スペーサーがメタン、エタン、プロパンまたはブタンである、請求項374に記載の方法。
- 前記スピンラベルしたリポタンパク質プローブの60%超がHDLと結合する、請求項318から375のいずれか一項に記載の方法。
- 前記HDLがHDL3である、請求項376に記載の方法。
- 前記固体支持体が、常磁性が低いポリマー材料またはセルロース系材料から選択される、請求項318から377のいずれか一項に記載の方法。
- 前記固体支持体が吸着性材料である、請求項318から377のいずれか一項に記載の方法。
- 前記吸着性材料がポリフッ化ビニリデン(PVDF)、ナイロンまたはニトロセルロースである、請求項379に記載の方法。
- 前記固体支持体が吸着性材料をさらに含む、請求項318から378のいずれか一項に記載の方法。
- 前記in vitro試料が抗凝固薬をさらに含む、請求項318から381のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗凝固薬がヘパリン、クマジン、ワルファリン、EDTA、シトレートまたはオキザレートである、請求項382に記載の方法。
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JP2022025100A (ja) * | 2016-07-21 | 2022-02-09 | クリーヴランド ハートラブ,インコーポレイテッド | Hdl関連タンパク質のバイオマーカーパネル検出 |
Families Citing this family (3)
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---|---|---|---|---|
CN106573970B (zh) * | 2014-05-15 | 2021-07-30 | 克利夫兰心脏实验室公司 | 用于hdl和apoa1的纯化和检测的组合物和方法 |
MX2017000582A (es) * | 2014-07-30 | 2017-04-27 | Hoffmann La Roche | Marcadores geneticos para predecir la reactividad a terapia con agente que eleva la lipoproteina de alta densidad (hdl) o que imita la lipoproteina de alta densidad (hdl). |
CN112630252B (zh) * | 2020-11-05 | 2022-04-01 | 浙江大学 | 含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂稳定性无损检测方法 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004507738A (ja) * | 2000-08-25 | 2004-03-11 | クイーン メアリー アンド ウェストフィールド カレッジ | S−ニトロソチオール化合物アッセイ法 |
WO2006001806A2 (en) * | 2004-06-15 | 2006-01-05 | Duke University | Method for non-invasive thermometry using elastin-like polypeptide conjugates |
JP2007525490A (ja) * | 2004-01-13 | 2007-09-06 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ イリノイ | 膜骨格タンパク質 |
JP2008039761A (ja) * | 2006-06-15 | 2008-02-21 | Shiseido Co Ltd | 角層の評価方法 |
WO2010119138A1 (en) * | 2009-04-17 | 2010-10-21 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Development of fluorescently p-loop labelled kinases for screening of inhibitors |
JP2011002460A (ja) * | 2003-12-05 | 2011-01-06 | Clevland Clinic Foundation | 心臓血管疾患に対するリスクマーカー |
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---|---|---|---|---|
US4806311A (en) * | 1985-08-28 | 1989-02-21 | Miles Inc. | Multizone analytical element having labeled reagent concentration zone |
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Patent Citations (7)
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---|---|---|---|---|
JP2004507738A (ja) * | 2000-08-25 | 2004-03-11 | クイーン メアリー アンド ウェストフィールド カレッジ | S−ニトロソチオール化合物アッセイ法 |
JP2011002460A (ja) * | 2003-12-05 | 2011-01-06 | Clevland Clinic Foundation | 心臓血管疾患に対するリスクマーカー |
JP2007525490A (ja) * | 2004-01-13 | 2007-09-06 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ イリノイ | 膜骨格タンパク質 |
WO2006001806A2 (en) * | 2004-06-15 | 2006-01-05 | Duke University | Method for non-invasive thermometry using elastin-like polypeptide conjugates |
JP2008039761A (ja) * | 2006-06-15 | 2008-02-21 | Shiseido Co Ltd | 角層の評価方法 |
WO2010119138A1 (en) * | 2009-04-17 | 2010-10-21 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Development of fluorescently p-loop labelled kinases for screening of inhibitors |
JP2013504302A (ja) * | 2009-04-17 | 2013-02-07 | マックス−プランク−ゲゼルシャフト ツール フェルデルンク デル ヴィッセンシャフテン エー.ファウ. | 阻害剤のスクリーニングのための、蛍光的p−ループ標識キナーゼの開発 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JENS O.LAGERSTEDT ET AL.: "Electron Paramagnetic Resonance Spectroscopy of Site-directed Spin Labels Reveals the Structural Het", THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, vol. 282, no. 12, JPN7016000869, 2007, pages 9143 - 9149, XP055138863, ISSN: 0003297731, DOI: 10.1074/jbc.M608717200 * |
MICHAEL N ODA ET AL.: "The C-terminal domain of apolipoprotein A-I contains a lipid-sensitive conformational trigger", NATURE STRUCTURAL BIOLOTY, vol. 10, no. 6, JPN6016012963, 2003, pages 455 - 460, XP002739197, ISSN: 0003677605, DOI: 10.1038/nsb931 * |
三井田孝: "HDLと動脈硬化−新しい見方 2.HDLの働き 2)逆転送系からみて", PROGRESS IN MEDICINE, vol. 22, no. 4, JPN6016012961, 2002, pages 919 - 924, ISSN: 0003297732 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2022025100A (ja) * | 2016-07-21 | 2022-02-09 | クリーヴランド ハートラブ,インコーポレイテッド | Hdl関連タンパク質のバイオマーカーパネル検出 |
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