JP2014226096A - Method for producing plant cutting seedling - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、挿し木苗の生産方法に関する。 The present invention relates to a method for producing cuttings.
挿し木は人為的に切断された植物組織を用いて発根床内で発根させ、独立した一つの植物体を作出する方法であり、遺伝的に均一な苗を大量増殖するのに優れた方法である。 Cutting is a method of rooting in the root bed using artificially cut plant tissue and creating an independent plant body, which is an excellent method for mass propagation of genetically uniform seedlings It is.
挿し木による増殖は簡便で、一度に大量の苗を作出するのに適しており、優良な形質を持った個体を大量に増殖できることから商業的にも有利な方法とされている。しかし、挿し木では発根が困難な植物種も多くある。 Propagation by cutting is simple and suitable for producing a large amount of seedlings at a time, and it is considered as a commercially advantageous method because individuals with excellent traits can be proliferated in large amounts. However, many plant species are difficult to root with cuttings.
薬用植物は、漢方薬及び／又は食品の原料として用いられている植物である。植物の二次代謝物が有効成分として働いていることが多い。二次代謝物は薬用植物の発根に悪影響に働くことが多く、薬用植物の挿し木による増殖は困難であった。薬用植物は国内で栽培されている例は極めて少なく、海外からの輸入に頼っている現状がある。海外においても栽培品種は限られており、多くは野生植物を採取している。そのため、中国では乱獲保護の目的で、一部の品種で野生植物採取禁止令が出され、輸出規制が行われている。そこで、薬用植物を国内で安定供給するため、挿し木による簡易で均一な優良苗を大量に増殖することが可能な方法の確立が望まれている。 A medicinal plant is a plant used as a raw material of Chinese medicine and / or food. Plant secondary metabolites often act as active ingredients. Secondary metabolites often adversely affect the rooting of medicinal plants, and it was difficult to grow medicinal plants by cuttings. There are very few cases where medicinal plants are cultivated in Japan, and there is a current situation that relies on imports from overseas. Even overseas, cultivars are limited and many wild plants are collected. For this reason, in order to protect overfishing, China bans the collection of wild plants and restricts exports. Therefore, in order to stably supply medicinal plants in Japan, establishment of a method capable of growing a large amount of simple and uniform excellent seedlings by cutting is desired.
特許文献１には、園芸植物等の挿し穂を水耕液中の支持材に挿して発根を促進する方法において、光量１００〜５００μｍｏｌ／ｍ2／ｓｅｃでかつ１日の明暗周期の繰り返しを２〜８回に設定した人工光と二酸化炭素濃度を５００〜３，０００ｐｐｍ、空気中湿度を８０〜１００％ＲＨ、空気中温度を２０〜３０℃、水耕液中及び支持材の温度を２０〜３０℃に維持することが記載されている。 In Patent Document 1, in a method for promoting rooting by inserting an insertion head of a garden plant or the like on a support material in a hydroponic liquid, the light intensity of 100 to 500 μmol / m 2 / sec and the repetition of the light-dark cycle of one day are repeated. Artificial light and carbon dioxide concentration set to 2 to 8 times, 500 to 3,000 ppm, air humidity 80 to 100% RH, air temperature 20 to 30 ° C., hydroponic solution and support material temperature 20 It is described that it is maintained at ˜30 ° C.
特許文献２には、窒素、リン、カリウムを必須元素として含み、かつ、炭素源を含まない液体培地で湿潤させた発根床を培養容器内に用意し、これに挿し穂を挿し付けて培養し、培養容器内の炭酸ガス濃度を制御しつつ、挿し穂からの発根を行わせることを特徴とする挿し木苗の作出法が記載されている。 In Patent Document 2, a rooting bed wetted with a liquid medium containing nitrogen, phosphorus, and potassium as essential elements and not containing a carbon source is prepared in a culture vessel, and a head is inserted and cultured. In addition, a method for producing cuttings seedlings characterized in that rooting from cuttings is performed while controlling the concentration of carbon dioxide in the culture vessel is described.
しかし特許文献１にはペチュニア、スターチス等の観葉植物への適用例のみが記載されており、発根が困難とされている二次代謝物を蓄積する植物への適用については記載も示唆もしていない。特許文献２に記載の方法では、薬用植物などの発根が困難な植物について、実用規模での挿し木生産を行うことが困難であった。 However, Patent Document 1 describes only application examples to foliage plants such as petunia and starches, and describes and suggests application to plants that accumulate secondary metabolites that are considered difficult to root. Absent. With the method described in Patent Document 2, it has been difficult to produce cuttings on a practical scale for plants that are difficult to root, such as medicinal plants.
本発明は、二次代謝物を蓄積する植物の挿し穂の発根率を向上させることができる効率的な挿し木苗の生産方法の提供を目的とする。 An object of the present invention is to provide an efficient method for producing cuttings that can increase the rooting rate of cuttings of plants that accumulate secondary metabolites.
本発明は、以下の〔１〕〜〔４〕を提供する。
〔１〕光強度１２０〜２７０μｍｏｌ／ｍ2／ｓｅｃ、及び湿度６０％Ｒｈ以上の条件で挿し穂から発根させる工程を含む、二次代謝物を蓄積する植物の挿し木苗の生産方法。
〔２〕挿し穂から発根させる工程における炭酸ガス濃度が５００〜１５００ｐｐｍである、上記〔１〕に記載の生産方法。
〔３〕二次代謝物を蓄積する植物が薬用植物である上記〔１〕又は〔２〕に記載の生産方法。
〔４〕挿し穂から発根させる工程を培養容器内で行う、上記〔１〕〜〔３〕のいずれか一項に記載の生産方法。
The present invention provides the following [1] to [4].
[1] A method for producing cuttings and seedlings of a plant accumulating secondary metabolites, comprising a step of rooting from cuttings under conditions of light intensity of 120 to 270 μmol / m 2 / sec and humidity of 60% Rh or higher.
[2] The production method according to [1], wherein the carbon dioxide concentration in the step of rooting from the cutting head is 500 to 1500 ppm.
[3] The production method according to [1] or [2] above, wherein the plant that accumulates secondary metabolites is a medicinal plant.
[4] The production method according to any one of [1] to [3], wherein the step of rooting from the cutting ear is performed in a culture vessel.
本発明によれば、二次代謝物を蓄積する植物の挿し穂の発根率を向上させることができ、薬用植物からの挿し木生産を効率的に行うことができる。 ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the rooting rate of the cutting head of the plant which accumulate | stores a secondary metabolite can be improved, and cutting production from a medicinal plant can be performed efficiently.
本発明の適用対象は、二次代謝物を蓄積する植物である。二次代謝物（二次代謝物質）とは、一次代謝物が代謝されて合成された物質を意味する。一次代謝物が植物の細胞成長、発生、生殖等の生命に直接的に関与しているのに対し、二次代謝物は生命に直接関与してはいない代わりに、通常、外部からのストレス（紫外線等）、外敵（病原菌等）から自身を守るなどの機能を有する。二次代謝物としては、アルカロイド（エフェドリンなど）、テルペノイド、フラボノイド、テルペンの配糖体（グリチルリチンなど）、グリコシド、フェノール、又はこれらの誘導体等が例示される。二次代謝物には、医薬、健康補助、麻酔薬、染料等に役立つ成分が含まれることが知られているが、このうち医薬、健康補助等に役立つ成分であることが好ましい。 The target of application of the present invention is a plant that accumulates secondary metabolites. The secondary metabolite (secondary metabolite) means a substance synthesized by metabolizing the primary metabolite. While primary metabolites are directly involved in plant cell growth, development, reproduction, and other life, secondary metabolites are not directly involved in life. It has functions such as protecting itself from external enemies (pathogenic bacteria, etc.). Examples of secondary metabolites include alkaloids (such as ephedrine), terpenoids, flavonoids, terpene glycosides (such as glycyrrhizin), glycosides, phenols, or derivatives thereof. Secondary metabolites are known to contain components useful for medicines, health aids, anesthetics, dyes and the like, and among these, components useful for medicines, health aids and the like are preferable.
二次代謝物を蓄積する植物としては、薬用植物が好ましい。薬用植物とは、植物の少なくとも一部が薬用に供される植物を意味する。薬は生薬（未精製薬、薬用ハーブ）、漢方薬、民間薬等が例示され、薬事法により医薬に分類されない食品も含む。薬用植物において薬用に供される部位としては、全草、茎葉、花、蕾、種子、果実、果皮、根、地下茎、根茎、木部、樹皮、及びこれらの２種以上を含む植物部位等が例示される。 Medicinal plants are preferred as the plants that accumulate secondary metabolites. The medicinal plant means a plant in which at least a part of the plant is used for medicinal purposes. Medicines include herbal medicines (unrefined medicines, medicinal herbs), traditional Chinese medicines, folk medicines, etc., and include foods that are not classified as pharmaceuticals by the Pharmaceutical Affairs Law. Examples of medicinal plants used for medicinal purposes include whole plants, foliage, flowers, persimmons, seeds, fruits, pericarps, roots, rhizomes, rhizomes, xylem, bark, and plant parts containing two or more of these. Illustrated.
薬用植物としては、カンキョウ、アキョウ、イレイセン、インチンコウ、ウイキョウ、エンゴサク、オウギ、オウゴン、オウバク、オウレン、オンジ、ガイヨウ、カシュウ、カッコン、カッセキ、カロコン、カロニン、カンゾウ、キキョウ、キクカ、キジツ、キッソウコン、キョウカツ、キョウニン、クジン、ケイガイ、ケイヒ、コウカ、コウジン、コウブシ、コウベイ、コウボク、ゴシツ、ゴシュユ、ゴボウシ、ゴマ、ゴミシ、サイコ、サイシン、サンザシ、サンシシ、サンシュユ、サンショウ、サンソウニン、サンヤク、カンジオウ、ジコッピ、シコン、シツリシ、シナマオウ、シャクヤク、シャゼンシ、ジュクジオウ、シュクシャ、ショウキョウ、ショウバク、ショウマ、シンイ、セッコウ、センキュウ、ゼンコ、センコツ、センタイ、センナ、ソウジュツ、ソウハクヒ、ソボク、ソヨウ、ダイオウ、タイソウ、タクシャ、チクジョ、チクセツニンジン、チモ、チャヨウ、チョウジ、チョウトウコウ、チョレイ、チンピ、テンナンショウ、テンマ、テンモンドウ、トウガシ、トウキ、トウニン、トウヒ、トコン、トチュウ、ドッカツ、ニンジン、ニンドウ、バイモ、バクガ、バクモンドウ、ハッカ、ハマボウフウ、ハンゲ、ビャクゴウ、ビャクシ、ビャクジュツ、ビワヨウ、ビンロウジ、ブクリョウ、ブシ、フンマツアメ、ボウイ、ボウフウ、ボクソク、ボタンピ、ボレイ、マオウ、マシニン、モクツウ、モッコウ、ヨクイニン、リュウガンニク、リュウコツ、リュウタン、リョウキョウ、レンギョウ、レンニク、ワキョウカツが例示され、好ましくはカンキョウ、カンゾウ、ケイヒ、ゴボウシ、サンシシ、チンピ、ビワヨウ、ニンジン、トウニン、チョレイ、ソヨウ、ダイオウ、タイソウ、センナ、シャクヤク、サンショウ、サンシュユ、コウジン、ボタンピ、オンジ、オウギであり、更に好ましくはダイオウ、シャクヤク、ゴボウシ、リュウタンである。更により好ましいのは、カンゾウ属植物（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）、マオウ属植物（Ｅｐｈｅｄｒａ）である。カンゾウ属植物としては、ロシアカンゾウ（Ｇ．ｅｃｈｉｎａｔａ）、スペインカンゾウ（Ｇ．ｇｌａｂｒａ）、アメリカカンゾウ（Ｇ．ｌｅｐｉｄｏｔａ）、ウラルカンゾウ（Ｇ．ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）、シンキョウカンゾウ（Ｇ．ｉｎｆｌａｔａ）等が例示される。マオウ属植物としては、フタマタマオウ（Ｅ．ｄｉｓｔａｃｈｙａ）、シナマオウ（Ｅ．ｓｉｎｉｃａ）、キダチマオウ（Ｅ．ｅｑｕｉｓｅｔｉｎａ Ｂｕｎｇｅ）が挙げられる。 Medicinal plants include citrus, apricot, irresen, nintendo, fennel, engosaku, ogi, ougon, oak, auren, onji, gayyo, kashi, kankon, casseki, carocon, caroten, licorice, kyouka, kikuka, pheasant , Kyonin, Kujin, Keigai, Keihi, Kouka, Koujin, Kouushi, Koubay, Kokuboku, Goshitsu, Goshuyu, Goboushi, Sesame, Garbage, Psycho, Saishin, Hawthorn, Sanshishi, Sanshuyu, Salamander, Sansonin, Sanyaku, Ganko, Zikoppi, Shikon, Shitsuri, Cinnamon, Peonies, Shazenshi, Zukujiou, Shukusha, Shokyo, Shobakaku, Shouma, Shinyi, Gypsum, Senkyu, Zenko, Senkotsu, Centai Senna, Suzutsu, Sakuhakuhi, Sokoku, Seoyo, Daio, Tianou, Takusha, Chikujo, Chikusetinjinjin, Chimo, Chayo, Coji, Butterflyfish, Chorei, Chinpi, Tennansho, Tenma, Tenmondo, Pepper, Toki, Tonin, Spruce , Tokon, Tochu, Dokatsu, Carrot, Nindo, Baimo, Bakuga, Bakumondo, Hakka, Hakubofuu, Hange, Byakugo, Byakushi, Byakujutsu, Biwayou, Binrouji, Bukkyou, Bushi, Fungatsuame, Bowie, Bofufu, Ukubo , Machinin, mokutsu, mokko, yokoinin, ryuganiku, ryukotsu, ryutan, ryokyou, forsythia, rennik, kyoko katsu, preferably kankyo, licorice Keihi, Goboushi, Sanshi, Chimpi, Biwayo, Carrot, Tonin, Chorei, Soyo, Daio, Taiso, Senna, Peonies, Salamander, Sunshu, Kojijin, Buttonpi, Onji, Ogi, and more preferably Daio, Peonies, Goboushi, Ryutan. Even more preferred are licorice plants (Glycyrrhiza) and Ephedra plants. Examples of licorice plants include Russian licorice (G. echinata), Spanish licorice (G. glabra), American licorice (G. lepidota), Ural licorice (G. uralensis), Ginkgo biloba (G. . Examples of the genus Maou include E. distachya, E. sinica, and E. equistina Bunge.
本発明の適用対象は、本発明の目的に鑑みて、二次代謝物を多量に蓄積する系統の薬用植物であることが好ましい。「多量」とは、同種植物の通常の系統に蓄積される二次代謝物よりも多量であればよく、その量は植物ごとに異なり一律に規定することは困難であるが、例えば、日本薬局方に記載された有効成分量を超えていれば多量と言うことができる。 In view of the object of the present invention, the application target of the present invention is preferably a medicinal plant of a line that accumulates a large amount of secondary metabolites. “Large amount” only needs to be larger than secondary metabolites accumulated in normal strains of the same species, and the amount varies from plant to plant and is difficult to define uniformly. If the amount of the active ingredient described in the above is exceeded, it can be said that the amount is large.
本発明においては、光強度１２０〜２７０μｍｏｌ／ｍ2／ｓｅｃ、湿度６０％Ｒｈ以上の条件で、挿し穂から発根させる工程を含む。 The present invention includes a step of rooting from the cuttings under conditions of light intensity of 120 to 270 μmol / m 2 / sec and humidity of 60% Rh or more.
挿し穂は、薬用植物の一部又は全部であればよい。挿し穂としては、植物の少なくとも一部であればよく、緑枝（当年枝）、熟枝（前年以前に伸びた枝）等の枝；頂芽、腋芽などの芽；葉、子葉；胚軸などが例示される。木本植物の場合の挿し穂は、通常は緑枝又は熟枝であり、草本植物の場合の挿し穂は、通常は葉又は芽であるが、これらには限定されない。 The cuttings may be part or all of a medicinal plant. The cuttings may be at least part of the plant, branches such as green branches (current year branches), mature branches (branches extending before the previous year); buds such as top buds and buds; leaves, cotyledons; hypocotyls Etc. are exemplified. The cuttings in the case of woody plants are usually green branches or mature branches, and the cuttings in the case of herbaceous plants are usually leaves or buds, but are not limited thereto.
一方、不定根を形成することが期待される点で、挿し穂としてシュートを用いてもよい。シュートとは、発根能を有する組織全般をいう。該組織としては、枝、茎、頂芽、腋芽、不定芽、葉、子葉、胚軸、不定胚、苗条原基等が例示される。シュートの由来は特に限定されず、温室又は屋外に生育している植物個体から得られる組織でもよいし、組織培養法により得られた培養組織であってもよいし、天然の植物体の一部の組織であってもよい。シュートは、挿し穂の母本植物、又は多芽体から効率良く取得することができる。中でも、挿し穂（母本植物から得た挿し穂）、母本植物から採取した器官を無菌的に培養することにより得た多芽体、もしくは前記器官を無菌的に育成して得た茎葉であることが好ましい。 On the other hand, shoots may be used as cuttings in that they are expected to form adventitious roots. Shoots refer to all tissues that have rooting ability. Examples of the tissue include branches, stems, apical buds, buds, adventitious buds, leaves, cotyledons, hypocotyls, adventitious embryos, shoot primordia, and the like. The origin of the shoot is not particularly limited, and may be a tissue obtained from an individual plant growing in a greenhouse or outdoors, or may be a cultured tissue obtained by a tissue culture method, or a part of a natural plant body It may be an organization. The shoot can be efficiently obtained from the main plant or multi-bud of the cutting ear. Among them, cuttings (cutting ears obtained from the mother plant), polyblasts obtained by aseptically culturing organs collected from the mother plant, or foliage obtained by aseptically growing the organs Preferably there is.
多芽体は、本発明を適用してクローン苗を生産しようとする植物から、頂芽、腋芽等の組織を切取って、これを組織培養して誘導することができる。多芽体を、母本植物から採取した器官を無菌的に培養して、形成させるには、特開平８−２２８６２１号公報に記載の方法、条件に従って行い得る。その方法、条件は概ね次の通りである。まず、材料とする植物から頂芽、腋芽等の組織を採取し、採取した組織について、有効塩素量約０．５％〜約４％の次亜塩素酸ナトリウム水溶液又は有効塩素量約５％〜約１５％の過酸化水素水溶液に約１０分〜約２０分間浸漬して表面殺菌を行う。次いで、これを滅菌水で洗浄し、固体培地に挿し付けて芽を開じょさせ、伸長してきた茎葉を同じ組成の培地で継代培養することにより、多芽体を形成させる。ユーカリ属又はアカシア属の組織（例えば腋芽）を用いる場合には、固体培地は、ショ糖１〜５重量％、植物ホルモンとしてベンジルアデニン（以下、ＢＡと略す。）約０．０２ｍｇ／ｌ以上約１ｍｇ／ｌ以下、ゲランガム約０．２重量％以上約０．３重量％若しくは寒天約０．５重量％以上約１重量％以下を含有するムラシゲスクーグ（以下、ＭＳと略す。）培地、又は、ＭＳ培地の硝酸アンモニウム成分と硝酸カリウム成分とを半減させた改変ＭＳ培地を用いるのが好ましい。こうして形成された多芽体からは活発にシュートが伸長してくる。多芽体自体は、適当に分割して多芽体形成に用いた培地と同一組成の培地で培養することにより維持し、増殖させることができる。 A multi-bud can be derived by cutting out tissues such as apical buds and axillary buds from a plant to which a clone seedling is to be produced by applying the present invention, and culturing the tissue. In order to form and cultivate an organ collected from a mother plant aseptically, the polyblast can be formed according to the method and conditions described in JP-A-8-228621. The method and conditions are as follows. First, tissues such as apical buds and axillary buds are collected from the plant as a material, and about the collected tissues, an aqueous sodium hypochlorite solution having an effective chlorine content of about 0.5% to about 4% or an effective chlorine content of about 5% Surface sterilization is performed by immersing in an aqueous solution of about 15% hydrogen peroxide for about 10 minutes to about 20 minutes. Next, this is washed with sterilized water, inserted into a solid medium, the buds are opened, and the elongated foliage is subcultured in a medium having the same composition to form a multi-bud. In the case of using Eucalyptus or Acacia tissues (for example, buds), the solid medium is 1 to 5% by weight of sucrose, and benzyladenine (hereinafter abbreviated as BA) as a plant hormone is about 0.02 mg / l or more. Murashige Sukug (hereinafter abbreviated as MS) medium containing 1 mg / l or less, gellan gum of about 0.2 wt% to about 0.3 wt% or agar of about 0.5 wt% to about 1 wt%, or MS It is preferable to use a modified MS medium in which the ammonium nitrate component and potassium nitrate component of the medium are halved. The shoots are actively extended from the multi-buds thus formed. The multiblasts themselves can be maintained and proliferated by appropriately dividing them and culturing them in a medium having the same composition as the medium used for the formation of the multibuds.
挿し穂から発根させる工程において挿し穂に照射する光の光強度（照度）は、光合成有効光量子束密度として表され、１２０〜２７０μｍｏｌ／ｍ2／ｓｅｃであることが好ましく、１３０〜２７０μｍｏｌ／ｍ2／ｓｅｃであることがより好ましく、１３０〜２００μｍｏｌ／ｍ2／ｓｅｃであることがさらに好ましい。１２０μｍｏｌ／ｍ2／ｓｅｃ未満であると、二次代謝物を蓄積する植物の挿し穂の発根率を向上させることができず、２７０μｍｏｌ／ｍ2／ｓｅｃ以上であると、葉やけなどの光障害が生じる。 The light intensity (illuminance) of light applied to the cutting head in the step of rooting from the cutting head is expressed as a photosynthetic effective photon flux density, and is preferably 120 to 270 μmol / m 2 / sec, preferably 130 to 270 μmol / m. 2 / sec is more preferable, and 130-200 μmol / m 2 / sec is more preferable. If it is less than 120 μmol / m 2 / sec, the rooting rate of cuttings of plants that accumulate secondary metabolites cannot be improved, and if it is 270 μmol / m 2 / sec or more, light such as leaf burns Failure occurs.
挿し穂に照射する光は、赤色光、青色光、白色光、及びこれらから選ばれる２種以上の組み合わせであってもよいが、白色光であることが好ましい。 The light applied to the cutting head may be red light, blue light, white light, and a combination of two or more selected from these, but is preferably white light.
照射の明期と暗期の繰り返しの周期は特に限定されないが、２４時間あたりの明期１４時間〜１８時間／暗期６時間〜１０時間であることが好ましい。 The repetition period of the light period and dark period of irradiation is not particularly limited, but it is preferably 14 to 18 hours of light period per 24 hours / 6 to 10 hours of dark period.
挿し穂から発根させる工程における栽培環境の湿度は、６０％Ｒｈ以上である。湿度がが６０％Ｒｈ未満であると、二次代謝物を蓄積する植物の挿し穂の発根率を向上させることができない。湿度は対象とする植物によって適宜調整することができ、通常は８０％Ｒｈ以上であることがより好ましく、９０％Ｒｈ以上であることがさらに好ましい。湿度が上記範囲であることにより、植物からの発根を促進することができる。湿度の上限については特に制限はなく、１００％Ｒｈ以下であればよい。カビが増殖しやすい植物の場合、８０％Ｒｈ以下であることがより好ましく、７０％Ｒｈ以上であることがさらに好ましい。 The humidity of the cultivation environment in the process of rooting from the cuttings is 60% Rh or more. If the humidity is less than 60% Rh, the rooting rate of cuttings of plants that accumulate secondary metabolites cannot be improved. The humidity can be appropriately adjusted depending on the target plant, and is usually more preferably 80% Rh or more, and further preferably 90% Rh or more. When the humidity is in the above range, rooting from plants can be promoted. There is no restriction | limiting in particular about the upper limit of humidity, What is necessary is just 100% Rh or less. In the case of plants where mold tends to grow, it is more preferably 80% Rh or less, and even more preferably 70% Rh or more.
挿し穂から発根させる工程における栽培環境の炭酸ガス濃度は、通常３００ｐｐｍ〜１５００ｐｐｍであり、５００ｐｐｍ〜１５００ｐｐｍであることが好ましく、７５０ｐｐｍ〜１２５０ｐｐｍであることがより好ましく、９００ｐｐｍ〜１０００ｐｐｍであることがさらに好ましい。炭酸ガスの供給量の制御は、人工気象器等の設備、二酸化炭素透過性の膜を開口部に有する培養容器などを利用して行われうる。 The carbon dioxide concentration in the cultivation environment in the step of rooting from the cuttings is usually 300 ppm to 1500 ppm, preferably 500 ppm to 1500 ppm, more preferably 750 ppm to 1250 ppm, and further preferably 900 ppm to 1000 ppm. preferable. Control of the supply amount of carbon dioxide gas can be performed using equipment such as an artificial weather device, a culture vessel having a carbon dioxide permeable membrane in the opening, and the like.
挿し穂から発根させる工程における栽培環境の温度は、約２３℃以上約２８℃以下であることが好ましい。 The temperature of the cultivation environment in the step of rooting from the cuttings is preferably about 23 ° C. or higher and about 28 ° C. or lower.
挿し穂から発根させる工程における、明期と暗期の配分は、通常は１：１〜３：１であり、３：２〜５：２であることが好ましい。 In the process of rooting from the cuttings, the distribution of the light period and dark period is usually 1: 1 to 3: 1 and preferably 3: 2 to 5: 2.
挿し穂から発根させる工程においては、遮光を行うことが好ましい。遮光率は、３０％以上７０％以下が好ましく、４０％以上６０％以下がより好ましい。 In the step of rooting from the cutting head, it is preferable to perform light shielding. The light shielding rate is preferably 30% or more and 70% or less, and more preferably 40% or more and 60% or less.
挿し穂から発根させる工程の期間は、薬用植物の種類等の栽培条件によっても異なるが、通常は２週間〜３ヶ月であり、４週間〜２ヶ月であることが好ましい。挿し穂から発根が観察されるまで続ければよい。 The period of rooting from the cuttings varies depending on the cultivation conditions such as the type of medicinal plant, but is usually 2 weeks to 3 months, and preferably 4 weeks to 2 months. Continue until rooting is observed from the cuttings.
挿し穂から発根させる工程において、通常は発根用培地を用いる。本発明において発根用培地とは、挿し穂から発根させるために用いられる培地を意味する。 In the step of rooting from cuttings, a rooting medium is usually used. In the present invention, the rooting medium means a medium used for rooting from cuttings.
発根用培地は、銀イオン及び／又は抗酸化剤を含有することが好ましく、銀イオン及び抗酸化剤の両方を含有することがより好ましい。銀イオンは、チオ硫酸銀（ＳＴＳ、ＡｇＳ4Ｏ6）、硝酸銀等の銀化合物（銀イオン源）として培地中に添加すればよい。中でもＳＴＳは、培地に添加してシュートを培養すると、健全な根の発根及び／又は伸長が促進されるので、本発明で用いる銀イオン源として好ましい。これは、ＳＴＳに由来する銀イオンが、培地中で、チオ硫酸銀イオンの形態を取り、マイナスに帯電しているためと考えられる。発根用培地中の銀イオンの濃度は、銀イオン源の種類その他の培養条件などにもよるが、銀イオン源の濃度として約０．５μＭ以上約６μＭ以下が好ましく、約２μＭ以上約６μＭ以下がより好ましい。 The rooting medium preferably contains silver ions and / or antioxidants, and more preferably contains both silver ions and antioxidants. Silver ions may be added to the medium as a silver compound (silver ion source) such as silver thiosulfate (STS, AgS 4 O 6 ) or silver nitrate. Among them, STS is preferable as a silver ion source used in the present invention, since healthy roots and / or elongation is promoted when added to a medium and cultured for shoots. This is presumably because silver ions derived from STS take the form of silver thiosulfate ions in the medium and are negatively charged. The concentration of silver ions in the rooting medium depends on the type of silver ion source and other culture conditions, but the concentration of the silver ion source is preferably about 0.5 μM or more and about 6 μM or less, and about 2 μM or more and about 6 μM or less. Is more preferable.
一方、抗酸化剤としては、例えば、酸化型グルタチオン（ＧＳＳＧ）、アスコルビン酸、亜硫酸塩等の、公知の抗酸化剤を用いることができ、酸化型グルタチオンが好ましい。発根用培地中の酸化型グルタチオンの濃度は、１ｍｇ／ｌ〜１００ｍｇ／ｌが好ましく、５ｍｇ／ｌ〜約７５ｍｇ／ｌがより好ましい。 On the other hand, as the antioxidant, for example, known antioxidants such as oxidized glutathione (GSSG), ascorbic acid, sulfite and the like can be used, and oxidized glutathione is preferable. The concentration of oxidized glutathione in the rooting medium is preferably 1 mg / l to 100 mg / l, more preferably 5 mg / l to about 75 mg / l.
発根用培地は、無機成分、炭素源、ビタミン類、アミノ酸類及び植物ホルモン類等の成分を更に含んでいてもよい。 The rooting medium may further contain components such as an inorganic component, a carbon source, vitamins, amino acids, and plant hormones.
無機成分としては、窒素、リン、カリウム、硫黄、カルシウム、マグネシウム、鉄、マンガン、亜鉛、ホウ素、モリブデン、塩素、ヨウ素、コバルト等の元素、及び、これらの元素から選ばれる１以上の元素を含む無機塩が例示される。無機塩としては例えば、硝酸カリウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸ナトリウム、リン酸１水素カリウム、リン酸２水素ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第１鉄、硫酸第２鉄、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸ナトリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、ホウ酸、三酸化モリブデン、モリブデン酸ナトリウム、ヨウ化カリウム、塩化コバルト等、これらの水和物が挙げられる。無機成分は、１種であってもよいし、２種以上の組み合わせであってもよい。 Inorganic components include elements such as nitrogen, phosphorus, potassium, sulfur, calcium, magnesium, iron, manganese, zinc, boron, molybdenum, chlorine, iodine, cobalt, and one or more elements selected from these elements Inorganic salts are exemplified. Examples of inorganic salts include potassium nitrate, ammonium nitrate, ammonium chloride, sodium nitrate, potassium monohydrogen phosphate, sodium dihydrogen phosphate, potassium chloride, magnesium sulfate, ferrous sulfate, ferric sulfate, manganese sulfate, zinc sulfate, These hydrates include copper sulfate, sodium sulfate, calcium chloride, magnesium chloride, boric acid, molybdenum trioxide, sodium molybdate, potassium iodide, cobalt chloride and the like. 1 type may be sufficient as an inorganic component, and the combination of 2 or more types may be sufficient as it.
発根用培地は、窒素、リン及びカリウムが必須元素として含まれることが好ましい。よって、上述の無機成分の具体例のうち、窒素、リン、カリウム、窒素を含む無機塩、リンを含む無機塩、及びカリウムを含む無機塩が好ましく、窒素、リン、カリウム、及び、窒素を含む無機塩がより好ましい。発根用培地中の無機成分の濃度は、無機成分が１種の場合は０．１μＭ〜１００ｍＭであることが好ましく、１μＭ〜１００ｍＭであることがより好ましい。無機成分が２種以上の組み合わせの場合はそれぞれ０．１μＭ〜１００ｍＭであることが好ましく、１μＭ〜１００ｍＭであることがより好ましい。 The rooting medium preferably contains nitrogen, phosphorus and potassium as essential elements. Therefore, among the specific examples of the above-described inorganic components, nitrogen, phosphorus, potassium, an inorganic salt containing nitrogen, an inorganic salt containing phosphorus, and an inorganic salt containing potassium are preferable, and include nitrogen, phosphorus, potassium, and nitrogen. Inorganic salts are more preferred. The concentration of the inorganic component in the rooting medium is preferably 0.1 μM to 100 mM, and more preferably 1 μM to 100 mM, when there is only one inorganic component. When the inorganic component is a combination of two or more, it is preferably 0.1 μM to 100 mM, and more preferably 1 μM to 100 mM.
炭素源としては、ショ糖等の炭水化物とその誘導体；脂肪酸等の有機酸；エタノール等の１級アルコール、などが例示される。炭素源は１種であってもよいし、２種以上であってもよい。発根用培地中の炭素源の濃度は、１ｇ／ｌ〜１００ｇ／ｌであることが好ましく、１０ｇ／ｌ〜１００ｇ／ｌであることがより好ましい。しかし、培養を炭酸ガスを供給しながら行う場合には、培地は炭素源を含む必要は無く、含まないことが好ましい。ショ糖等の炭素源となりうる有機化合物は微生物の炭素源ともなるので、これらを添加した培地を用いる場合には、無菌環境下で培養を行う必要があるが、炭素源を含まない培地を用いることにより、非無菌環境下での培養が可能となる。 Examples of the carbon source include carbohydrates such as sucrose and derivatives thereof; organic acids such as fatty acids; primary alcohols such as ethanol. 1 type may be sufficient as a carbon source, and 2 or more types may be sufficient as it. The concentration of the carbon source in the rooting medium is preferably 1 g / l to 100 g / l, and more preferably 10 g / l to 100 g / l. However, when culture is performed while supplying carbon dioxide gas, the culture medium does not need to contain a carbon source, and preferably does not contain it. Organic compounds that can serve as a carbon source such as sucrose can also serve as a carbon source for microorganisms. Therefore, when using a medium supplemented with these, it is necessary to culture in a sterile environment, but use a medium that does not contain a carbon source. This makes it possible to culture in a non-sterile environment.
ビタミンとしては、ビオチン、チアミン（ビタミンＢ１）、ピリドキシン（ビタミンＢ４）、ピリドキサール、ピリドキサミン、パントテン酸カルシウム、イノシトール、ニコチン酸、ニコチン酸アミド及びリボフラビン（ビタミンＢ２）等が例示される。ビタミンは１種でもよいし、２種以上の組み合わせであってもよい。発根用培地中のビタミンの濃度は、ビタミンが１種の場合は０．０１ｍｇ／ｌ〜２００ｍｇ／ｌであることが好ましく、０．０２ｍｇ／ｌ〜１００ｍｇ／ｌであることがより好ましい。ビタミンが２種以上の組み合わせの場合はそれぞれ、０．０１ｍｇ／ｌ〜１５０ｍｇ／ｌであることが好ましく、０．０２ｍｇ／ｌ〜１００ｍｇ／ｌであることがより好ましい。 Examples of vitamins include biotin, thiamine (vitamin B1), pyridoxine (vitamin B4), pyridoxal, pyridoxamine, calcium pantothenate, inositol, nicotinic acid, nicotinamide and riboflavin (vitamin B2). 1 type of vitamin may be sufficient and the combination of 2 or more types may be sufficient. The concentration of vitamins in the rooting medium is preferably 0.01 mg / l to 200 mg / l, more preferably 0.02 mg / l to 100 mg / l when the number of vitamins is one. When the vitamin is a combination of two or more, it is preferably 0.01 mg / l to 150 mg / l, more preferably 0.02 mg / l to 100 mg / l.
アミノ酸としては、グリシン、アラニン、グルタミン酸、システイン、フェニルアラニン及びリジン等が例示される。アミノ酸は、１種であってもよいし、２種以上であってもよい。発根用培地中のアミノ酸の濃度は、アミノ酸が１種の場合は約０．１ｍｇ／ｌ以上約１０００ｍｇ／ｌ以下であることが好ましく、アミノ酸が２種以上の組み合わせの場合は、それぞれ０．２ｍｇ／ｌ〜１０００ｍｇ／ｌであることが好ましい。 Examples of amino acids include glycine, alanine, glutamic acid, cysteine, phenylalanine and lysine. 1 type may be sufficient as an amino acid and 2 or more types may be sufficient as it. The concentration of the amino acid in the rooting medium is preferably about 0.1 mg / l or more and about 1000 mg / l or less when one amino acid is used, and is 0. It is preferable that it is 2 mg / l-1000 mg / l.
植物ホルモンとしては、オーキシン、サイトカイニン等が例示される。オーキシン類としては、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、インドール酢酸（ＩＡＡ）、ｐ−クロロフェノキシ酢酸、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４Ｄ）、インドール酪酸（ＩＢＡ）及びこれらの誘導体等が例示される。オーキシンは、１種であってもよいし２種以上の組み合わせであってもよい。サイトカイニンとしては、ベンジルアデニン（ＢＡ）、カイネチン、ゼアチン、これらの誘導体等が例示される。サイトカイニンは、１種であってもよいし、２種以上の組み合わせであってもよい。植物ホルモンは、オーキシンのみであってもよいし、サイトカイニンのみであってもよいし、オーキシンとサイトカイニンの組み合わせであってもよい。一般に、オーキシンは発根に作用し、サイトカイニンは生育に作用するため、サイトカイニンのみを添加して挿し穂を培養した後に、オーキシンを添加して発根させることができる。発根用培地中の植物ホルモンの濃度は、植物ホルモンを１種用いる場合には０．０１ｍｇ／ｌ〜１０ｍｇ／ｌであることが好ましく、０．０２ｍｇ／ｌ〜１０ｍｇ／ｌであることがより好ましい。植物ホルモンが２種以上の場合にはそれぞれ、０．０１ｍｇ／ｌ〜１０ｍｇ／ｌであることが好ましく、０．０２ｍｇ／ｌ〜１０ｍｇ／ｌであることがより好ましい。 Examples of plant hormones include auxin and cytokinin. Examples of auxins include naphthalene acetic acid (NAA), indole acetic acid (IAA), p-chlorophenoxyacetic acid, 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4D), indolebutyric acid (IBA), and derivatives thereof. . One auxin may be used or a combination of two or more auxins may be used. Examples of cytokinins include benzyladenine (BA), kinetin, zeatin, and derivatives thereof. Cytokinin may be one kind or a combination of two or more kinds. The plant hormone may be auxin alone, cytokinin alone, or a combination of auxin and cytokinin. In general, auxin acts on rooting, and cytokinin acts on growth. Therefore, after culturing the ear by adding only cytokinin, it can be rooted by adding auxin. The concentration of the plant hormone in the rooting medium is preferably 0.01 mg / l to 10 mg / l, more preferably 0.02 mg / l to 10 mg / l when one kind of plant hormone is used. preferable. When there are two or more kinds of plant hormones, it is preferably 0.01 mg / l to 10 mg / l, and more preferably 0.02 mg / l to 10 mg / l.
発根用培地は、植物組織培養用培地として公知の培地に、必要に応じて、銀イオン及び／又は抗酸化剤、炭素源、もしくは、植物ホルモン類を適宜添加した培地を用いてもよい。植物組織培養用培地として公知の培地としては、ＭＳ培地、リンスマイヤースクーグ培地、ホワイト培地、ガンボーグのＢ−５培地、ニッチニッチ培地等が例示される。このうちＭＳ培地及びガンボーグのＢ−５培地が好ましい。これらの培地は、必要に応じて適宜希釈等して用いることができる。 As the rooting medium, a medium in which silver ions and / or an antioxidant, a carbon source, or plant hormones are appropriately added to a medium known as a plant tissue culture medium as necessary may be used. Examples of the medium known as a plant tissue culture medium include MS medium, Rinsmeier Skoog medium, white medium, Gamborg B-5 medium, and niche niche medium. Of these, MS medium and Gamborg B-5 medium are preferred. These media can be used by appropriately diluting them as necessary.
発根用培地は、液体培地、固体培地のいずれであってもよいが、液体培地の方が作業効率及び移植時に根を傷つけることが少ない点で好ましい。液体培地の場合には培地組成を混合し調製してそのまま用いてもよい。固体培地の場合には液体培地と同様に培地組成を混合し調製すると同時に、或いは調整後に、寒天又はゲランガム等の固化剤で固化させて使用し得る。固化剤の培地への添加量は、固化剤の種類、培地の組成によっても異なる。固化剤が寒天の場合０．５重量％以上１重量％以下であることが好ましい。固化剤がゲランガムの場合０．２重量％以上０．３重量％以下であることが好ましい。 The rooting medium may be either a liquid medium or a solid medium, but the liquid medium is preferable in terms of work efficiency and less damage to the roots during transplantation. In the case of a liquid medium, the medium composition may be mixed and prepared and used as it is. In the case of a solid medium, the medium composition can be mixed and prepared in the same manner as the liquid medium, or can be used after being adjusted and solidified with a solidifying agent such as agar or gellan gum. The amount of the solidifying agent added to the medium varies depending on the kind of the solidifying agent and the composition of the medium. When the solidifying agent is agar, it is preferably 0.5% by weight or more and 1% by weight or less. When the solidifying agent is gellan gum, the content is preferably 0.2% by weight or more and 0.3% by weight or less.
発根用培地への挿し穂の挿し付け方法は、培地の種類、培養条件等により適宜選択すればよい。発根用培地が固体培地の場合は、発根用培地に挿し穂の基部を直接挿し付けて培養すればよい。一方、発根用培地が液体培地の場合は、例えば、後述の支持体を発根用培地で湿潤させてから、挿し穂の基部を挿し付けて培養すればよい。なお、発根用培地に挿し付ける時に挿し穂の基部に傷をつけるといった物理的刺激を加えることも、発根率の向上のために好ましい。挿し穂の基部とは、挿し穂の一端であって根が形成される領域（葉の形成される端部に対し反対側）を意味する。挿し穂として多芽体を用いる場合の基部は、多芽体を分割する際の切断面を有する領域である。挿し穂の基部への傷のサイズ（大きさ、形状など）は特に限定されない。例えば、挿し穂として多芽体を用いる場合、挿し穂の基部（上述の切断面）を正面方向から見た際に十字型となるような傷を付けることが好ましい。傷を付ける際には、ハサミ、ナイフなどの器具を用いることができる。 What is necessary is just to select suitably the insertion method of the cutting head to the culture medium for rooting according to the kind of culture medium, culture conditions, etc. When the rooting medium is a solid medium, the rooting medium may be directly inserted into the rooting medium and cultured. On the other hand, when the rooting medium is a liquid medium, for example, the support described later may be wetted with the rooting medium, and then the base of the cutting ear may be inserted and cultured. In order to improve the rooting rate, it is also preferable to apply a physical stimulus such as damaging the base of the cutting head when inserted into the rooting medium. The base of the cutting head means a region (one side opposite to the end where the leaf is formed) which is one end of the cutting head and a root is formed. The base in the case of using a multi-bud as an insertion ear is a region having a cut surface when dividing the multi-bud. The size (size, shape, etc.) of the damage to the base of the cutting head is not particularly limited. For example, in the case where a multi-bud is used as the cutting head, it is preferable to scratch the base of the cutting head (the above-mentioned cut surface) so as to form a cross when viewed from the front. When scratching, instruments such as scissors and knives can be used.
本発明において支持体とは、挿し穂を支持するための支持体である。発根用培地（特に固体培地）を用いる場合などには、支持体は不要の場合があるが、それ以外の場合には通常支持体が利用される。 In the present invention, the support is a support for supporting the cutting head. When using a rooting medium (especially a solid medium), a support may be unnecessary. In other cases, a support is usually used.
支持体は、栽培の期間中挿し穂を指しつけた状態で保持できる支持体が好ましい。栽培にあたり液状の発根用培地を用いる場合には、通常、支持体に浸潤させて用いられる。よって支持体は液体で浸潤され得る支持体が好ましく、中でも、液体培地により実質的に均一に湿潤され得る支持体が好ましい。支持体としては、従来慣用の支持体を用いればよく、特に限定されない。支持体としては、砂、赤玉土等の自然土壌；籾殻燻炭、ココナッツ繊維、バーミキュライト、パーライト、ピートモス、ガラスビーズ等の人工土壌；発泡フェノール樹脂、ロックウール等の多孔性成形品などを例示することができる。支持体を培養容器内に入れることにより発根床が調製され得る。なお、発根用培地が固体培地の場合には、固体培地を直接培養容器に入れることで、発根床が調製され得る。 The support is preferably a support that can be held in a state where the cutting head is pointed during the cultivation period. When a liquid rooting medium is used for cultivation, it is usually used by infiltrating a support. Accordingly, the support is preferably a support that can be infiltrated with a liquid, and among them, a support that can be substantially uniformly wetted by a liquid medium is preferable. A conventional support may be used as the support, and is not particularly limited. Examples of the support include natural soils such as sand and red bean clay; artificial soils such as rice husk charcoal, coconut fiber, vermiculite, perlite, peat moss, and glass beads; and porous molded articles such as foamed phenol resin and rock wool. be able to. The root bed can be prepared by placing the support in a culture vessel. When the rooting medium is a solid medium, the rooting bed can be prepared by placing the solid medium directly into the culture vessel.
本発明においては、発根用培地又は支持体を納めるための培養容器を用いることが好ましい。培養容器としては、従来慣用の培養容器を用いることができ、特に限定されない。例えば、育苗ポット、プラグトレーなどが例示される。培養容器は密閉型でもよいし開放型でもよいが、密閉型の培養容器が、挿し穂及びこれから形成される挿し木苗を取り巻く環境の湿度維持が容易となるため好ましい。 In the present invention, it is preferable to use a culture vessel for storing a rooting medium or a support. As the culture vessel, a conventional culture vessel can be used, and is not particularly limited. For example, a seedling pot, a plug tray, etc. are illustrated. The culture vessel may be a closed type or an open type, but a closed type culture vessel is preferable because it facilitates maintaining the humidity of the environment surrounding the cuttings and cuttings and seedlings formed therefrom.
挿し穂として枝を用いる場合には、培養容器として密閉型の培養容器を用いることが好ましい。これにより挿し穂を高湿度下に置くことが容易となるので、枝についた葉の蒸散作用が抑制され、従来行われていた葉の一部切除処理を省略することができる。 When a branch is used as the cutting head, it is preferable to use a closed culture vessel as the culture vessel. This makes it easy to place the cutting head under high humidity, so that the transpiration action of the leaves on the branches is suppressed, and the conventional partial excision processing of the leaves can be omitted.
培養容器は、容器内への炭酸ガス供給が可能な容器であることがより好ましい。このような培養容器としては、二酸化炭素透過性の膜で蔽われた開口部を有する容器が例示される。二酸化炭素透過性の膜で蔽われた開口部を有する容器を用いることにより、培養環境の湿度をも容易に調整しうる。開口部の形状は特に問わない。二酸化炭素透過性の膜の材料は特に限定されず、ポリテトラフルオロエチレンなどが例示される。膜の孔径も特に限定されず、約０．１μｍ以上約１μｍ以下の孔径の膜が例示される。 The culture container is more preferably a container capable of supplying carbon dioxide gas into the container. As such a culture container, a container having an opening covered with a carbon dioxide permeable membrane is exemplified. By using a container having an opening covered with a carbon dioxide permeable membrane, the humidity of the culture environment can be easily adjusted. The shape of the opening is not particularly limited. The material for the carbon dioxide permeable membrane is not particularly limited, and examples thereof include polytetrafluoroethylene. The pore diameter of the membrane is not particularly limited, and examples thereof include membranes having a pore diameter of about 0.1 μm or more and about 1 μm or less.
本発明において、支持体及び／又は発根用培地の温度は、通常は２０℃〜３０℃であり、２２℃〜２６℃であることが好ましい。 In the present invention, the temperature of the support and / or rooting medium is usually 20 ° C to 30 ° C, preferably 22 ° C to 26 ° C.
本発明においては、挿し木苗を育成する工程を含んでいてもよい。挿し木苗を育成する工程は、通常、挿し穂から発根させる工程の後に行う。挿し木苗を育成する工程においては、挿し穂から発根させる工程において得られる挿し木苗を、育苗容器、苗畑に移植して育成させ得る。挿し穂が、不定芽、苗条原基等の培養組織由来のシュートである場合には、通常、育苗容器等への移植の前に順化の工程を経る。育成の際の温度、光強度、育苗容器に収容する用土の種類や量等の条件は、挿し木苗に適する条件を適宜設定すればよい。挿し木苗を育成する工程を経ることにより、漢方薬等の医薬、食品等の原料として使用可能な植物又はその二次代謝物を得ることができる。 In this invention, the process of growing a cutting seedling may be included. The process of growing the cuttings is usually performed after the process of rooting from the cuttings. In the step of growing the cutting seedling, the cutting seedling obtained in the step of rooting from the cutting ear can be transplanted and grown in a seedling container or a nursery. When the cuttings are shoots derived from cultured tissues such as adventitious shoots and shoot primordia, they usually undergo an acclimation step before transplantation to a seedling container or the like. Conditions suitable for cutting seedlings may be set as appropriate for conditions such as temperature, light intensity during cultivation, and the type and amount of soil to be stored in the seedling container. By going through the process of growing cuttings and seedlings, it is possible to obtain a plant that can be used as a raw material for medicines such as traditional Chinese medicines and foods, or secondary metabolites thereof.
実施例１
薬用植物として甘草の系統１（ＧｕＴＳ７１−０８ＩＶ２株）及び系統２（ＧｕＴＳ７１−０８ＩＶ１株）〔両株とも特開２０１２−１１５２６１号公報参照〕を用いた。これらは、二次代謝物としてのグリチルリチンを多量に蓄積する系統である。これらの地上部を採取し、芽を一つ含むように枝を３ｃｍ〜１０ｃｍ程度に切断して挿し穂を調整した。挿し床には発泡フェノール樹脂成形品（製品名：オアシス）を使用した。発根床はＩＢＡ ５ｍｇ／ｍｌを添加した、５倍希釈Ｂ５培地１００ｍｌにより浸潤させた。挿し木苗の作出は、上記のようにして調整した挿し穂をこの発根床に挿しつけて、温度２５℃、光強度（照度）１３５μｍｏｌ／ｍ2／ｓｅｃ、炭酸ガス濃度３８０ｐｐｍ、明期８時間、暗期１６時間で培養容器内で培養することにより行った。各試験区の挿し穂の数は１００であった。培養容器は、１０ｃｍ四方のポリカーボネート製容器の上部２箇所に直径１ｃｍの穴を開け、この開口部を炭酸ガス透過性の膜（日本ミリポア（株）製「ミリシール」）で蔽ったものを用いた。６週間後の各試験区あたりの発根率を表１に示す。
Example 1
As a medicinal plant, licorice strain 1 (GuTS71-08IV2 strain) and strain 2 (GuTS71-08IV1 strain) [both strains refer to JP2012-115261A] were used. These are strains that accumulate a large amount of glycyrrhizin as a secondary metabolite. These above-ground parts were collected, branches were cut into about 3 cm to 10 cm so as to include one bud, and the ears were adjusted. A foamed phenol resin molded product (product name: Oasis) was used for the insertion floor. The root bed was infiltrated with 100 ml of 5-fold diluted B5 medium supplemented with 5 mg / ml of IBA. The cutting seedlings were produced by inserting the cuttings adjusted as described above into the root bed, temperature 25 ° C., light intensity (illuminance) 135 μmol / m 2 / sec, carbon dioxide concentration 380 ppm, light period 8 hours. This was carried out by culturing in a culture vessel with a dark period of 16 hours. The number of cuttings in each test section was 100. The culture container is a 10 cm square polycarbonate container with holes with a diameter of 1 cm in the top, and this opening is covered with a carbon dioxide permeable membrane ("Milliseal" manufactured by Nihon Millipore). It was. Table 1 shows the rooting rate in each test section after 6 weeks.
実施例２
炭酸ガス濃度を１，０００ｐｐｍとした以外は、実施例１と同様にした。
Example 2
The procedure was the same as Example 1 except that the carbon dioxide concentration was 1,000 ppm.
比較例１
光強度を２５μｍｏｌ／ｍ2／ｓｅｃにした以外は、実施例２と同様にした。
Comparative Example 1
The procedure was the same as Example 2 except that the light intensity was 25 μmol / m 2 / sec.
表１に示すとおり、比較例１の発根率と比較して実施例１及び２の発根率は高く、実施例２の発根率は顕著であった。この結果は、本発明の生産方法により二次代謝物を蓄積する植物の挿し穂の発根率を向上させることができることを示している。 As shown in Table 1, compared with the rooting rate of Comparative Example 1, the rooting rates of Examples 1 and 2 were high, and the rooting rate of Example 2 was remarkable. This result shows that the rooting rate of cuttings of plants that accumulate secondary metabolites can be improved by the production method of the present invention.
実施例３
薬用植物としてシナマオウ（総アルカロイド含有量０．７％以上）を用いた以外は、実施例２と同様にした。
Example 3
The procedure was the same as in Example 2 except that cinnamon (total alkaloid content: 0.7% or more) was used as a medicinal plant.
実施例４
ＧＳＳＧを培地中に５０ｍｇ／ｌ添加した以外は、実施例３と同様にした。
Example 4
Example 3 was repeated except that 50 mg / l of GSSG was added to the medium.
比較例２
薬用植物としてシナマオウ（総アルカロイド含有量０．７％以上）を用いた以外は、比較例１と同様にした。
Comparative Example 2
The procedure was the same as Comparative Example 1, except that cinnamon (total alkaloid content 0.7% or more) was used as a medicinal plant.
比較例３
ＧＳＳＧを培地中に５０ｍｇ／ｌ添加した以外は、比較例２と同様にした。
６週間後の各試験区あたりの発根率を、表２に示す。
Comparative Example 3
Comparative Example 2 was performed except that 50 mg / l of GSSG was added to the medium.
Table 2 shows the rooting rate per each test section after 6 weeks.
表２に示すとおり、比較例２及び３の発根率に対して、実施例３及び４の発根率は高かった。この結果は、本発明の生産方法により二次代謝物を蓄積する植物の挿し穂の発根率を高めることができることを示している。 As shown in Table 2, the rooting rates of Examples 3 and 4 were higher than those of Comparative Examples 2 and 3. This result shows that the rooting rate of cuttings of plants that accumulate secondary metabolites can be increased by the production method of the present invention.
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