JP2014221011A - 細胞培養用支持体の製造方法、細胞培養用支持体および細胞培養方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】細胞の培養に用いる細胞培養用支持体の製造方法であって、フィブロイン水溶液1Lを塗布し乾燥させてシート状の成形体1を得る工程と、85体積%以上のアルコール水溶液Lに成形体を接触させる工程と、を有する細胞培養用支持体の製造方法。
【選択図】図1
Description
本実施形態の細胞培養用支持体の製造方法は、細胞の培養に用いる細胞培養用支持体の製造方法であって、フィブロイン水溶液を塗布し乾燥させてシート状の成形体を得る工程と、85体積%以上のアルコール水溶液に前記成形体を接触させる工程と、を有することとしている。
以下、順に説明する。
本実施形態の細胞培養方法は、上述の細胞培養用支持体の表面に、前記細胞培養用支持体に対応した細胞を播種して培養することとしている。
以下に本発明を実施例により説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
(フィブロイン水溶液の作製)
細片に切断した繭を0.02mol/Lの炭酸ナトリウム中で30分間煮沸(95〜98℃)した後、熱水で洗浄してセリシンを除き、フィブロイン繊維を得た。
得られたフィブロイン繊維を9mol/Lの臭化リチウムに室温で溶解し、約60g/Lのフィブロイン溶解液を作製した。
次いで、透析チューブ(MWCO:5000〜8000)を用い、水に対してフィブロイン溶解液を3日間透析した後、遠心処理(20000rpm×30min)することにより、不純物の除去を行うことで、フィブロイン水溶液を得た。
フィブロイン水溶液をポリスチレンシャーレに注ぎ入れ、風乾してキャストフィルム(成形体)を作製した。このとき、乾燥状態のフィルムの目付け(単位面積当たりの質量)が4.4g/cm2となるように、フィブロイン水溶液の量を調節した。
得られたフィルム状の成形体を、直径13mmのディスク状に打ち抜き、小片を作成した。
次いで、作成した小片同士が重ならないように、種々の濃度のエタノール水溶液(60体積%、70体積%、80体積%、90体積%、95体積%)に24時間浸漬して不溶化処理を施して、細胞培養用支持体(以下、「支持体」と称する)を得た。
支持体を純水で十分に洗浄した後、細胞培養用24穴プラスチックプレートに入れてガラスリングで固定し、リン酸緩衝食塩水を満たして一晩静置した。
各支持体上に15000個の細胞を播種し、播種後4時間、24時間、48時間および、72時間後に細胞の接着形態の観察を行った。培養する細胞は、骨芽細胞(MG63)、線維芽細胞(L929)、上皮細胞(HCE−T)とした。
また、ブランクとしてTCPS上にて、各細胞について培養を行った。
図2〜7は、種々の濃度のエタノール水溶液で不溶化処理した支持体で培養した細胞について、各接着時間における細胞形態を位相差顕微鏡により観察した結果を示す写真であり、図2,3は骨芽細胞(MG63)に関する結果、図4,5は線維芽細胞(L929)に関する結果、図6,7は上皮細胞(HCE−T)に関する結果をそれぞれ示す。
60体積%エタノール水溶液および70体積%エタノール水溶液で不溶化処理した支持体を用いた場合においても、ほぼ同じ挙動が観察された。
培養する細胞として繊維芽細胞(NIH3T3)を用い、不溶化処理で用いるアルコール水溶液の濃度を80.0体積%、82.5体積%、85.0体積%、87.5体積%、90.0体積%としたこと以外は、上記「1.細胞培養実験」と同様にして培養を行った。また、参考例として、ガラス上で培養を行った。
上記「1.細胞培養実験」の「フィブロイン水溶液の作製」において作製したフィブロイン水溶液を用い、スピンコート法によって、スライドガラス上にフィブロイン薄膜を形成して、25℃で一晩風乾した。
Claims (3)
- 細胞の培養に用いる細胞培養用支持体の製造方法であって、
フィブロイン水溶液を塗布し乾燥させてシート状の成形体を得る工程と、
85体積%以上のアルコール水溶液に前記成形体を接触させる工程と、を有する細胞培養用支持体の製造方法。 - 細胞の培養に用いる細胞培養用支持体であって、
水中に溶解したフィブロインを形成材料とし、前記フィブロインの水溶液を塗布し乾燥させたシート状の成形体を、85体積%以上のアルコール水溶液に接触させて得られる細胞培養用支持体。 - 請求項2の細胞培養用支持体の表面に、前記細胞培養用支持体に対応した細胞を播種して培養する細胞培養方法。
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