JP2014200179A - 貧栄養食品の微生物試験方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明の試験方法は、添加工程と、保温工程と、測定工程と、判定工程と、を含むものである。
添加工程は、微生物増殖時に必要とされる栄養分を酵母エキスとして貧栄養食品に添加する工程である。酵母エキスの添加量は、最終濃度が0.2〜0.6W/V%となるように調整することが好ましい。酵母エキスの添加濃度が0.2W/V%未満であると微生物数の増加が期待し難く、酵母エキスの添加濃度が0.6W/V%を超えても微生物数の著しい増加が現れず、過剰な酵母エキスを含有することとなり、コスト高となる。
保温工程は、製品の微生物汚染を後記する工程で測定、判定するために、製品を所定条件で保温して、製品に混入した微生物(細菌または真菌)を増殖させる(微生物数を増加させる)工程である。
測定工程は、製品の相対発光量をATP法で測定する工程である。ここで、ATP法とは、微生物内のATPを抽出し、そのATPに応じて試薬を発光させ、その相対発光量が微生物内のATP量(微生物数)と比例することに基づいて、微生物汚染を測定する方法である。そして、試薬の相対発光量は、微生物の種類に寄らず、少ない微生物数であっても測定可能であるため、多様な微生物について、微生物数の少ない初期段階で微生物汚染を測定できることに特徴がある。ATP法では、具体的には、ルシフェラーゼおよびATP(微生物内)の存在下でルシフェリンを酸化させ、その酸化によって生じる発光の量を測定する。このようなATP法には、市販のルミテスターC−100N、ルシフェールAT100(販売元:キッコーマンバイオケミファ株式会社)が好適に使用される。
判定工程は、前記測定工程で測定した相対発光量で製品の微生物汚染状態を判定する工程である。そして、相対発光量が200RLUで以下あるときに、製品に微物汚染がないと判定し、かつ、相対発光量が200RLUを超えるときに、製品が微生物汚染されていると判定する。このように、製品の微生物汚染状態を判定するために、相対発光量に閾値を設定することによって、微生物汚染された製品を取り除くことが可能となる。
つぎに、本発明の試験方法において、貧栄養食品とは、水分およびミネラルを含有し、蛋白質、脂質量の含有量が非常に低量に抑えられた栄養組成物である。また、本発明の試験方法に好適に使用される貧栄養食品は、熱量:20〜30kcal、質量:100〜400g、比重:1.00〜1.20、pH:4.0未満である。また、貧栄養食品は、その形態がゼリー状またはとろみのついた半固形食品であっても良い。貧栄養食品は、容器等に充填された状態にあるものも含まれ、その場合、食品を予め加熱殺菌した後に無菌的に容器に充填する方法、および、容器に充填した後に容器ごと加熱殺菌される方法の何れも採用可能である。
水分の配合量は、製品100g当たり、90.0〜99.0gが好ましい。ゼリー状やとろみの付けられた貧栄養食品の場合には、滑らかで喉越しがよく飲みやすいため体力低下した患者やお年寄りにも好適であるが、水分の配合量が製品100g当たり90.0g未満であると、製品を滑らかに調整することが難しくなる。水分配合量は食品全体の栄養素比率、液粘度、浸透圧をそれぞれ最適に保つべく調整される。患者や症状に応じて適宜設定された食品とすると良い。
ミネラルとしては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよびリン等が挙げられ、これらの1種でもよいし、2種以上を組み合わせてもよい。ミネラルの配合量は、製品100g当たり、1mg以上が好ましい。これらのミネラルが適宜添加されることによって、体内での水分の吸収効率が向上し、より良い。
微量元素としては、鉄、銅、亜鉛、マンガン、セレン、ヨウ素、クロム、およびモリブデン等が挙げられる。
ビタミンとしては、ビタミンB1、ビタミンB2、ビタミンB6、ビタミンB12、ビタミンC、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビチオン、ビタミンA、ビタミンE、ビタミンD、ビタミンK等が挙げられる。
炭水化物は、糖質とおよび食物繊維からなる。糖質としては、澱粉、加工澱粉、デキストリン、乳糖、ショ糖、グルコース、フルクトース、マルトース、粉飴等が挙げられ。これらの1種でもよいし、2種以上を組み合わせてもよい。炭水化物の配合量は、製品100g当たり、1.0〜3.0gが好ましい。炭水化物の配合量が製品100g当たり1.0g未満であると、炭水化物による栄養効果を挙げることが難しくなる。また、炭水化物の配合量が多くなりすぎると製品を滑らかに調整することが難しくなるという問題がある。さらに、本試験対象の貧栄養食品の使用の際に想定される、他栄養食品との併用について、組み合わせにより栄養素過多となることを防止するため、比較的低濃度とすることが望ましい。
<実験1:微生物汚染のない状態の確認試験>
表1に示す栄養素からなる貧栄養食品を調製し、試料を作製する。まず調合水を80℃以上に加温し、炭水化物、ミネラルを添加する。熱水を添加して全量を調整した後、均一な状態となるまで溶解分散させた。この溶液を200mLずつ口栓付きのアルミパウチに充填し、90℃で10分間の容器殺菌処理を行い、試料1Aとした。この試料1A500mlを1000mlの耐熱ビン(121℃で20分間加熱滅菌したもの)に入れ、さらに酵母エキス(BD社製)20ml(最終濃度0.4W/v%)を添加した。なお、酵母エキスは、酵母エキス10gを100mlの純水に溶解後、121℃で20分間加熱滅菌したものを使用した。
(分析装置)
ルミタスターC−100H(販売元:キッコーマンバイオケミファ株式会社)
(測定キット)
ルシフェーノールAT100(販売元:キッコーマンバイオケミファ株式会社)
実験1で用いた試料1Aに、以下の手順で調製した菌懸濁液0.5mlを接種した(試料1B)。つぎに、接種後の試料1Bの菌数が30〜300個/mlになるように段階希釈した。
(菌懸濁液の調製)
細菌として乳酸菌(菌種:Lactobacillus plantarum NBRC 3070)を使用し、真菌として酵母(菌種:Saccharomyces cerevisiae NBRC 0565)を使用した。乳酸菌は標準寒天培地上で35℃、24時間発育させたものから、酵母はPDA培地上で23℃、24時間発育させたものから各々1白金耳(菌数:約107個)取り、10ml滅菌生理食塩水に懸濁した。
また、保温、接種、稀釈後の試料1Bの乳酸菌および酵母の菌数を確認するため、実験1と同様にして培養して、培養後の試料1Bの菌数(1ml当たりに換算)を求めた。その結果を表3に示す。
よって、表2、3の結果から、本発明の試験方法、すなわち、貧栄養食品を所定条件で6日間保温後、ATP法で相対発光量を測定する方法においては、相対発光量:200RLUを閾値として微生物汚染状態の判定が可能であることが確認できた。
従来の試験方法においては、貧栄養食品を7日間保温後にさらに培養を5日間行って、培養後、発育したコロニー数を計測して、微生物汚染状態の判定を行っている。したがって、本発明の試験方法においては、製品の保温後に所定の培養を行う必要がないため、微生物汚染状態の判定日数を短縮できることが確認された。
検出限界=(3.3×σ)/相関直線の傾き
ここで、σは、測定された相対発光量の標準偏差とする。そして、試料1Aの乳酸菌における検出限界は10(RLU)、酵母における検出限界は10(RLU)であった。
Claims (5)
- 水分およびミネラルを含有する貧栄養食品の微生物試験方法であって、
前記貧栄養食品に酵母エキスを添加する添加工程と、
前記酵母エキスを添加した前記貧栄養食品を所定条件で保温する保温工程と、
前記保温工程の終了後に、前記貧栄養食品の相対発光量をATP法で測定する測定工程と、
前記貧栄養食品の微生物汚染状態を前記相対発光量で判定する判定工程と、を含み、
前記判定工程において、前記相対発光量が200RLU以下であるときに前記貧栄養食品に微生物汚染がないと判定し、かつ、前記相対発光量が200RLUを超えるときに前記貧栄養食品が微生物汚染されていると判定することを特徴とする貧栄養食品の微生物試験方法。 - 前記貧栄養食品100g当たり、前記水分の配合量が90.0〜99.0gおよび前記ミネラルの配合量が1mg以上であることを特徴とする請求項1に記載の貧栄養食品の微生物試験方法。
- 前記貧栄養食品が、前記水分、前記ミネラルに加えて、炭水化物をさらに含有することを特徴とする請求項1または請求項2に記載の貧栄養食品の微生物試験方法。
- 前記貧栄養食品100g当たり、前記炭水化物の配合量が1.0〜3.0gであることを特徴とする請求項3に記載の貧栄養食品の微生物試験方法。
- 前記貧栄養食品は、その形態がゼリー状またはとろみのついた半固形食品であることを特徴とする請求項1ないし請求項4のいずれか一項に記載の貧栄養食品の微生物試験方法。
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キッコーマン微生物測定用試薬キット(無菌確認用)「ルシフェール AT100」取扱い説明書 (2011) <URL, JPN6017001106, ISSN: 0003481715 * |
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