JP2014193841A - 樹状突起負制御剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 ベンケイソウ科紅景天属植物(Rhodiola)の抽出物を有効成分とする樹状突起負制御剤。前記樹状突起負制御は、樹状突起形成抑制、樹状突起退縮、又は樹状突起活性化抑制であってもよい。前記植物が、茎地紅景天及び/又は大花紅景天であってもよい。;ベンケイソウ科紅景天属植物(Rhodiola)の抽出物を用いる樹状突起制御剤のスクリーニング方法。
【選択図】なし
Description
また、近年、神経細胞以外の細胞の樹状突起の役割も注目されている。例えば、成熟したメラニン顆粒を含むメラノソームは、細胞内を移動し、メラノサイトの樹状突起から隣接のケラチノサイトに受け渡されている。この際にメラノサイトの樹状突起の形成が重要と考えられているものの、樹状突起形成の仕組が十分に解明されていない。
このようなことから、樹状突起の制御に関する研究がさらに進められている。
例えば、特許文献1には、神経細胞の再生などに有用な、Rac活性促進剤をスクリーニングすべく、Racの活性を抑制し、樹状突起を同じレベルに収縮させる技術を提供することが提案されている。
また、例えば、特許文献2には、ミカン科オウバクのエッセンスからなる、メラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤が提案されている。
また、例えば、特許文献3には、酵母抽出物を有効成分とするメラノサイト樹状突起形成抑制剤が提案されている。
しかしながら、樹状突起の形成がどのようなプロセスを経て形成されるかは、依然不明な点があり、樹状突起の形成を制御することが可能な物質のさらなる研究開発が求められている。
すなわち、本発明は、ベンケイソウ科紅景天属植物(Rhodiola)の抽出物を有効成分とする樹状突起負制御剤を提供するものである。
前記植物が、茎地紅景天及び/又は大花紅景天であってもよい。
前記植物抽出物が、水、アルコール類、含水アルコール類から選ばれるものであってもよい。前記アルコール類が、炭素数1〜4であってもよい。前記アルコール類が、メタノール、エタノール、1,3−ブタンジオールから選ばれるものであってもよい。前記含水濃度が50〜100体積%であってもよい。
前記樹状突起負制御が、樹状突起の形成を抑制すること、樹状突起を退縮させること、樹状突起の活性化を抑制することであってもよい。
前記樹状突起が、メラノサイトの樹状突起であってもよい。
また、本発明は、ベンケイソウ科紅景天属植物(Rhodiola)の抽出物を用いる樹状突起制御剤のスクリーニング方法を提供するものである。
樹状突起負制御とは、例えば、樹状突起の形成を抑制すること、樹状突起を退縮させること、樹状突起の活性化を抑制すること等が挙げられる。また、樹状突起正制御とは、例えば、樹状突起の形成が促進されること、樹状突起が伸長すること、樹状突起が活性化すること等が挙げられる。
前記ベンケイソウ科紅景天属植物として、例えば、喜冷紅景天(R.algida/青海、海北、海西)、唐古紅景天(R.algida var.Tangutica/青海、四川)、西川紅景天(R.alsia
/四川)、小座紅景天(R.dumulosa/四川、甘粛)、大花紅景天(R.euryphylla/雲南西北、チベット)、長鞭紅景天(R.fastigiata/雲南西北、チベット)、長鱗紅景天(R.gilida/宇天山)、豌豆七紅景天(R.henryi/甘粛、河南、湖北、四川、貴州)、昇歯紅景天(R.heterodonta/新彊、チベット)、狭葉紅景天(R.kirillowii/河北、山西、雲南、四川、チベット)、四烈紅景天(R.quadrifida/甘粛、青海、新彊、四川、チベット)、庫頁紅景天(R.sachalinensis/黒龍江、吉林)、茎地紅景天(全弁)(R.sacra/雲南西北部、チベット東南)、粗造紅景天(R.scabrida/四川西部、雲南西北部)、粗茎紅景天(R.wallichiana/雲南西北部、チベット東南)、大株粗茎紅景天(R.wallichiana var. cholaensis/青海、雲南西北部)、雲南紅景天(R.yunnanensis/湖北西部)等が挙げられる。
前記紅景天属植物の表記は、植物名(学名/産地)の順であり、前記紅景天属植物の産地としては、中華人民共和国のチベット、四川省、雲南省等が有名である。
これらの紅景天属植物のうち、大花紅景天(Rhodiola euryphylla)及び/又は茎地紅景天(全弁)(Rhodiola sacra)が好ましい。
好ましい抽出方法の例としては、含水濃度0〜100vol%(好適には含水濃度50〜100vol%)のエチルアルコール又は1,3−ブチレングリコールを用い、室温(4〜40℃程度)にて1〜5日間抽出を行ったのち濾過し、得られたろ液をさらに1週間ほど放置して熟成させ、再びろ過を行う方法が挙げられる。ろ過の際に、活性炭等のろ過剤を用いて夾雑物や着色物等の不純物を除去してもよい。なお、含水濃度100vol%とは水のことである。
例えば、プルキンエ細胞は神経系に関与する細胞であるが、プルキンエ細胞の樹状突起を制御することができる剤があれば、その剤を神経細胞の再生等に利用することも可能である。また、メラニン生成が増大した場合には、メラノサイトの樹状突起を負制御することで、ケラチノサイトへのメラニンの移行を抑制することができ、最終的にシミ、ソバカス等のような色素沈着を抑制する剤に使用することも可能である。
従って、本開示の紅景天属植物は、樹状突起負制御(例えば、樹状突起形成抑制作用、樹状突起退縮作用等)を有するため、当該紅景天属植物を含有させて有効成分とする樹状突起負制御剤(例えば、樹状突起形成抑制剤、樹状突起退縮剤等)として使用することが可能である。
本開示の紅景天属植物は、樹状突起負制御(例えば、樹状突起形成抑制作用、樹状突起退縮作用等)のために使用してもよく、また樹状突起負制御剤(例えば、樹状突起形成抑制剤、樹状突起退縮剤等)等の上述のような使用を目的とした各種製剤に使用することができ、これら各種製剤を製造するために使用することも可能である。
本開示の紅景天属植物は、樹状突起負制御(樹状突起形成抑制作用、樹状突起退縮作用等)を有し、樹状突起形成による各種症状や状態を、予防、改善及び/又は治療を図るための方法に使用することができる。よって、本開示の紅景天属植物抽出物は、ヒトを含む動物に摂取又は投与して、樹状突起形成による各種症状や状態等の予防、改善及び/又は治療を図るための方法に使用することが可能である。
本開示の紅景天属植物抽出物は、特に皮膚外用剤、化粧料(好適には美白化粧料)、医薬部外品、医薬品等に用いるのが好適であり、皮膚に塗布など接触させる製剤が好適である。皮膚外用剤、化粧料として、例えば化粧水、乳液(水中油型等)、クリーム(油中水型等)、パック化粧料、リキッドファンデーション、軟膏剤、養毛剤等が挙げられる。
チロシナーゼ阻害剤及びメラニン生成抑制剤の例としては、L−アスコルビン酸及びその誘導体、並びにそれらの塩(アスコルビン酸−2−グルコシド、リン酸アスコルビルマグネシウム、リン酸アスコルビルナトリウム、3−O−エチルアスコルビン酸等)、ハイドロキノン及びその誘導体(アルブチン等)、トラネキサム酸及びその誘導体(トラネキサム酸セチル、トランス−4−アミノメチルシクロヘキサンカルボン酸メチルアミド等)、サリチル酸及びその誘導体(4−メトキシサリチル酸等)並びにそれらの塩、エラグ酸及びその誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アデノシン−1−リン酸、リノール酸、5,5’−ジプロピル−ビフェニル2,2’−ジオール、4−(4−ヒドロキシフェニル)−2−ブタノール又はその誘導体、レゾルシンおよびその誘導体(4−n−ブチルレゾルシノール等)、胎盤抽出物、カミツレエキス,ニコチン酸アミド等が挙げられるが、アスコルビン酸−2−グルコシド、3−O−エチルアスコルビン酸、又はアルブチンが好ましい。抗炎症剤としては、トラネキサム酸及びその誘導体、グリチルリチン酸ジカリウム等のグリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸又はグリチルレチン酸ステアリル等のグリチルレチン酸誘導体、サリチル酸及びその誘導体、カミツレエキス等が挙げられるが、トラネキサム酸、グリチルリチン酸ジカリウム又はグリチルレチン酸ステアリルが好ましい。メラニン排出促進剤としてはニコチン酸アミド等のニコチン酸誘導体やアデノシン−1−リン酸及びその誘導体等があげられるが、ニコチン酸アミド又はアデノシン−1−リン酸が好ましい。
また、前記製剤の形態は、特に限定されず、液状、ペースト状、ゲル状、固形状、粉末状等の何れの形態でもよい。
また、本開示の紅景天属植物抽出物と既知の樹状突起正制御剤を添加した際の樹状突起形成状態と、当該樹状突起正制御剤と被験物質を添加した際の樹状突起の形成状態とを対比し、本開示の紅景天属植物抽出物を添加したときよりも樹状突起が負制御されていた場合には、被験物質を良好な樹状突起負制御剤として判断することができる。
例えば、位相差顕微鏡(オリンパス社製)で細胞形態の写真を撮影し、樹状突起保有細胞(双極性の細胞から新たに1箇所以上の樹状突起の形成が確認された細胞)の数を数えて、樹状突起保有細胞数/総細胞数×100%を算出する。対照との対比により被験物質の樹状突起制御の正負を判断する。
本開示の紅景天属植物抽出物の存在下で、メラノサイトを培養し、これに被験物質を加え、メラノサイトの樹状突起の形態変化を観察することにより、樹状突起正制御剤をスクリーニングすることができる。
このとき、メラノサイト活性化因子を添加してもよい。メラノサイト活性化因子として、例えばα−メラノサイト刺激ホルモン(α−MSH:melanocyte stimulating hormome)、幹細胞増殖因子(SCF:Stem cell factor)、エンドセリン−1(Endothelin-1)等が挙げられる。
メラノサイトの場合には、ケラチノサイトへのメラノソームへの移行が促進されるため、白髪改善等の物質探索に応用することができる。
例えば、正常メラノサイトを使用する場合には、正常メラノサイトを培養可能な公知の培養条件で行えばよい。培養増殖用培地として、市販のメラノサイト用培地等を使用してもよい。
培養温度は、使用するメラノサイトの由来に対応する培養可能な温度であればよく、例えばヒト由来の場合20〜40℃、好ましくは37℃程度であればよい。二酸化炭素濃度は、5vol%程度であればよい。
〔1〕 ベンケイソウ科紅景天属植物(Rhodiola)の抽出物を有効成分とする樹状突起負制御剤。
〔2〕 前記植物が、茎地紅景天及び/又は大花紅景天である前記〔1〕記載の樹状突起負制御剤。
〔3〕 前記植物抽出物が、水、アルコール類、含水アルコール類から選ばれるもので抽出されたものである前記〔1〕又は〔2〕記載の樹状突起負制御剤。
〔4〕 前記樹状突起負制御が、メラノサイト樹状突起負制御である前記〔1〕〜〔3〕の何れか1項記載の樹状突起負制御剤。
〔5〕 前記樹状突起負制御は、樹状突起形成抑制、樹状突起退縮、又は樹状突起活性化抑制である前記〔1〕〜〔4〕の何れか1項記載の樹状突起負制御剤。
〔6〕 ベンケイソウ科紅景天属植物(Rhodiola)の抽出物を適用することを特徴とする樹状突起制御方法。
〔7〕 前記〔1〕〜〔3〕の何れか1項記載の紅景天属植物抽出物である前記〔6〕記載の樹状突起制御方法。
〔8〕 ベンケイソウ科紅景天属植物(Rhodiola)の抽出物を用いる樹状突起制御剤のスクリーニング方法。
〔9〕 前記〔1〕〜〔3〕の何れか1項記載の紅景天属植物抽出物である前記〔8〕記載の樹状突起制御剤のスクリーニング方法。
大花紅景天の根茎乾燥物10gに、精製水100mLを加え、室温にて3日間抽出を行ったのち濾過して大花紅景天精製水抽出物を得た。この抽出物の乾燥固形分は5.3%であった。
茎地紅景天の根茎乾燥物10gに、精製水100mLを加え、室温にて3日間抽出を行ったのち濾過して茎地紅景天精製水抽出物を得た。この抽出物の乾燥固形分は4.8%であった。
大花紅景天の根茎乾燥物10gに、50体積%エタノール含むエタノール・水混合溶液100mLを加え、室温にて3日間抽出を行ったのち濾過して大花紅景天50%エタノール抽出物を得た。この抽出物の乾燥固形分は1.7%であった。
茎地紅景天の根茎乾燥物10gに、50体積%エタノール含むエタノール・水混合溶液100mLを加え、室温にて3日間抽出を行ったのち濾過して茎地紅景天50%エタノール抽出物を得た。この抽出物の乾燥固形分は1.4%であった。
大花紅景天の根茎乾燥物10gに、99.5%エタノール100mLを加え、室温にて3日間抽出を行ったのち濾過して大花紅景天99.5%エタノール抽出物を得た。この抽出物の乾燥固形分は0.58%であった。
茎地紅景天の根茎乾燥物10gに、99.5%エタノール100mLを加え、室温にて3日間抽出を行ったのち濾過して茎地紅景天99.5%エタノール抽出物を得た。この抽出物の乾燥固形分は0.55%であった。
〔実施例1:紅景天抽出物〕
上記製造例1で製造した紅景天抽出物を用いて、メラノサイト樹状突起形成抑制作用を調べた。
詳細には、6穴プレートにHMGS増殖添加剤入りの表皮メラノサイト(メラニン細胞)培地を適量添加し、正常ヒト表皮メラノサイト(メラニン細胞)を1×105個播種して、37℃、二酸化炭素濃度5vol%中に静置培養した。培養2日後、HMGS増殖添加剤からBPEを抜いた培地に交換して、製造例1で製造した紅景天抽出物を培地中の含有率が0(活性化状態の対照)、0.3、0.5、0.75、1.0vol%となるようにした30分後、α−MSHを最終濃度が10−8mol/Lになるように添加し、混和した。
3日後、位相差顕微鏡(オリンパス社製)で細胞形態の写真を撮影し、樹状突起保有細胞(双極性の細胞から新たに1箇所以上の樹状突起の形成が確認された細胞)の数を数えて、樹状突起保有細胞数/総細胞数×100を算出し、結果を図1、表1及び図2に示した。
〔試薬類〕
表皮メラノサイト(メラニン細胞)基礎培地:Medium 254培地;ヒト表皮メラニン細胞培養用の無菌の液体培地M-254-500(Life Technologies社製)
HMGS増殖添加剤:HMGS増殖添加剤分注キットKM-6350 (倉敷紡績株式会社製)
正常ヒト表皮メラノサイト(メラニン細胞):Human Epidermal Melanocytes, neonatal(HEMn-LP);新生児由来 lightly pigmented donorC-002-5C(Life Technologies社製)
α−MSH:α−メラノサイト刺激ホルモンM4135(シグマ社製)
カシス抽出物は、カシス(Ribes nigrum L.)の果実10gに精製水50gを加え、50℃にて3日間加温抽出したのち濾過して得た。この抽出物の乾燥固形分は3.1%であった。
試料の「紅景天抽出物」を「センプクカ抽出物」に代えた以外は、上記〔実施例1〕と同様にしてメラノサイト樹状突起形成抑制試験を行った(比較例2)。
センプクカ抽出物は、センプクカ:オグルマ(Inula Britannica linne’ var chinensis)の花10gに、50体積%エタノールを含むエタノール・水混合液500gを加え、室温で3日間抽出を行ったのち濾過して得た。この抽出物の乾燥固形分は0.3%であった。
比較例1及び2の結果を図3及び4に示す。
〔実施例2:紅景天抽出物〕
α−MSH・紅景天抽出物の添加・観察の順序・スケジュールを変更した以外は、前記試験例1と同様にして行った。活性化剤としてα−MSHを添加した3日後に、メラノサイトの樹状突起が十分に形成されているのを確認してから紅景天抽出物を添加し、さらに3日培養してから観察した。
その結果を図5に示す。また、播種するメラノサイトの数を減らして、同様にしてメラノサイト樹状突起退縮試験を行い、その結果を図6に示す。
細胞の樹状突起が既に活性化して伸長していても、紅景天抽出物を添加することで、伸長していた樹状突起を退縮させることが認められた。
〔実施例3:紅景天抽出物〕
全細胞数を2/3にした以外は、前記試験例1と同様にして行った(実施例3)。この実施例3の対比として、紅景天を、アルブチンに代えて、同様にして行った(比較例3)。これらの結果を表2、表3及び図7に示す。
また、先に樹状突起活性化剤を添加し、樹状突起を活性化させて伸長させた後に、紅景天抽出物を添加した場合でも、伸長した樹状突起が退縮したことが認められた。特に、伸長した樹状突起を退縮させたことは、メラニン生成量が多くとも美白作用効果を発現させること、また、既に形成された色素沈着を改善することを可能にする。このような樹状突起の負制御は、従来美白効果として探索されていたチロシナーゼ阻害作用、メラニン生成抑制作用、抗炎症作用、メラニン排出促進作用等とは異なる作用と考えられる。
このため、本開示の紅景天属植物抽出物と、樹状突起制御以外の作用機序により美白効果を発揮する薬剤(例えば、チロシナーゼ阻害剤、メラニン生成抑制剤、抗炎症剤、メラニン排出促進剤等)とを併用することで、相乗的な美白効果を発揮する可能性が高い。
また、樹状突起を介する細胞間の物質の授受を抑制する作用が、新たな化粧用途及び医薬用途等に繋がる可能性がある。従来のようなメラニンの合成量を抑制する方向性でないことも、新たな美白剤や白髪改善剤、神経再生促進剤等の探求方法として有望と考えられる。
(成分) (質量%)
1.POE(40モル)硬化ヒマシ油 0.5
2.POE(12モル)ジオレエート 0.3
3.アスタキサンチン 0.05
4.1,3−ブチレングリコール 2.0
5.グリセリン 2.0
6.エタノール 15.0
7.トラネキサム酸 2.0
8.製造例1の紅景天抽出物 0.1
9.乳酸ナトリウム 0.2
10.パラオキシ安息香酸メチル 0.1
11.精製水 残量
(製造方法)
A.成分1〜6を混合溶解する。
B.成分7〜11を混合溶解する。
C.BにAを加え、化粧水を得た。
(成分) (質量%)
1.大豆由来水素添加リン脂質 0.5
2.セトステアリルアルコール 0.1
3.ポリオキシエチレン(10モル)コレステロールエーテル 0.2
4.酢酸−dl−α−トコフェロール 0.1
5.グリチルレチン酸ステアリル 0.25
6.スクワラン 0.1
7.ヒドロキシエチルセルロース 0.03
8.精製水 残量
9.製造例2の紅景天抽出物 0.02
10.リン酸一水素二ナトリウム 0.1
11.リン酸二水素一ナトリウム 0.1
12.グリセリン 3.0
13.ジプロピレングリコール 2.0
14.エタノール 7.0
15.香料 適量
(製造方法)
A.成分1〜6を75℃に加熱し、均一に混合溶解する。
B.成分7、8を75℃に加熱し、均一に混合溶解する
C.AにBを添加し、乳化する。
D.Cを冷却し、成分9〜15を添加し、乳化型化粧水を得た。
(成分) (質量%)
1.モノオレイン酸ポリオキシエチレン(20)ソルビタン 1.0
2.セスキオレイン酸ソルビタン 0.5
3.トリオクタン酸グリセリル 0.5
4.ホホバ油 0.5
5.スクワラン 0.5
6.精製水 残量
7.エデト酸二ナトリウム 0.1
8.メチルパラベン 0.2
9.フェノキシエタノール 0.5
10.グリセリン 5.0
11.プロパンジオール 1.0
12.プロピレングリコール 2.0
13.乳酸ナトリウム 0.5
14.2−O−α−D−グルコシル−L−アスコルビン酸(注1) 1.0
15.製造例2の紅景天抽出物 0.005
16.キサンタンガム 0.05
17.精製水 10.0
18.エタノール 3.0
19.香料 適量
(注1):林原生物化学研究所社製
(製造方法)
A.成分16を70℃に加熱した成分17で膨潤する。
B.成分1〜5を70℃で加熱混合する。
C.成分6〜15を70℃で加熱溶解後、Bに添加し、乳化する。
D.Cを室温まで冷却後、成分17〜19とAを添加し、美容液を得た。
本処方例3の乳液は、肌に潤いを与え、長時間にわたって皮膚の乾燥を防ぎ、保湿効果に優れたものであった。
(成分) (質量%)
1.スエルチアニン 1.5
2.イチョウエキス 0.5
3.トラネキサム酸 1.0
4.製造例2の紅景天抽出物 1.0
5.グリセリン 2.0
6.精製水 残量
7.D−パントテニルアルコール 0.3
8.ヒノキチオール 0.02
9.セファランチン 0.001
10.酢酸トコフェロール 0.01
11.L−メントール 0.2
12.ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 0.2
13.エタノール 60
(製造方法)
A.成分1〜6を混合溶解する。
B.成分7〜13を混合溶解する。
C.AにBを加え、養毛料を得た。
(配合成分) (質量%)
1.ステアリルアルコール 18.0
2.モクロウ 20.0
3.ポリオキシエチレン(20)モノオレイン酸エステル 0.25
4.グリセリンモノステアリン酸エステル 0.3
5.ワセリン 40.0
6.精製水 残量
7.グリセリン 10.0
8.アデノシン−1−リン酸 0.5
9.製造例2の紅景天抽出物 1.0
(製造方法)
A.1〜5を70℃で均一に混合する。
B.6〜8を70℃に加温する。
C.AにBを加え、乳化する。
D.Cを冷却し、9を添加し、軟膏を得た。
Claims (6)
- ベンケイソウ科紅景天属植物(Rhodiola)の抽出物を有効成分とする樹状突起負制御剤。
- 前記植物が、茎地紅景天及び/又は大花紅景天である請求項1記載の樹状突起負制御剤。
- 前記植物抽出物が、水、アルコール類、含水アルコール類から選ばれるもので抽出されたものである請求項1又は2記載の樹状突起負制御剤。
- 前記樹状突起負制御が、メラノサイト樹状突起負制御である請求項1〜3の何れか1項記載の樹状突起負制御剤。
- 前記樹状突起の負制御は、樹状突起形成抑制、樹状突起退縮又は樹状突起活性化抑制である請求項1〜4の何れか1項記載の樹状突起負制御剤。
- ベンケイソウ科紅景天属植物(Rhodiola)の抽出物を用いる樹状突起制御剤のスクリーニング方法。
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