JP2014117239A - Ｔｒｐｖ１刺激剤及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

【課題】本発明は、新たなＴＲＰＶ１刺激剤及びその製造方法を提供することを目的とする。
【解決手段】ポリフェノール類縁体又はホップ水抽出物を有効成分として含有するＴＲＰＶ１刺激剤、及びホップを水で抽出して、ホップ水抽出物を得るステップを含む、ホップ水抽出物を有効成分として含有するＴＲＰＶ１刺激剤の製造方法。
【選択図】なし

Description

本発明は、ＴＲＰＶ１刺激剤及びその製造方法に関する。

ＴＲＰＶ１は、Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｃａｔｉｏｎ Ｃｈａｎｎｅｌ， ｓｕｂｆａｍｉｌｙ Ｖ， ｍｅｍｂｅｒ １であり、Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌファミリのメンバーである。ＴＲＰＶ１は、口腔等に発現しており、侵害刺激の受容体として知られている。

ＴＲＰＶ１は、例えば非特許文献１で開示されているように、４３℃以上の熱及び生体内で痛みを惹起する酸によって活性化される。また、ＴＲＰＶ１を活性化するアゴニストとしては、例えば非特許文献２で開示されているように、トウガラシの辛味成分であるカプサイシン、コショウの辛味成分であるピペリン、ショウガの辛味成分であるジンゲロール及びショウガオール等が知られている。

Ｆｏｌｉａ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｊｐｎ， ２００４， １２４， ２１９−２２７ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ， ２００８， ６， ７９−９６

本発明の目的は、新たなＴＲＰＶ１刺激剤及びその製造方法を提供することである。

本発明者らは、ポリフェノール類縁体はＴＲＰＶ１を活性化する作用を有することを見出した。かかるポリフェノール類縁体がＴＲＰＶ１アゴニストとして作用できることは今まで知られておらず、予想外であった。本発明者らはまた、ホップ水抽出物がＴＲＰＶ１を活性化する作用を有することを見出した。かかるホップ水抽出物がＴＲＰＶ１アゴニストとして作用できることは今まで知られておらず、予想外であった。

以上の知見から、本発明者らは本発明の完成に至った。すなわち、本発明は、ポリフェノール類縁体を有効成分として含有する、ＴＲＰＶ１刺激剤を提供する。

上記ポリフェノール類縁体は、植物由来のポリフェノール類縁体であることが好ましい。植物由来のポリフェノール類縁体を用いることで、かかるＴＲＰＶ１アゴニストは安全面から優れている。

上記ポリフェノール類縁体はまた、ホップ由来のポリフェノール類縁体であることが好ましい。

上記ポリフェノール類縁体は更に、重合ポリフェノールであることが好ましい。

本発明はまた、ホップ水抽出物を有効成分として含有するＴＲＰＶ１刺激剤を提供する。

上記ホップ水抽出物は、ポリフェノール類縁体を含むことが好ましい。上記ホップ水抽出物はまた、ホップを水で抽出した後にポリビニルポリピロリドンに吸着させて溶出された抽出物であることが好ましい。

本発明はまた、上記ＴＲＰＶ１刺激剤を含有する食品添加剤、及び上記食品添加剤が添加された飲食物を提供する。

本発明は更に、ホップを水で抽出して、ホップ水抽出物を得るステップを含む、ホップ水抽出物を有効成分として含有するＴＲＰＶ１刺激剤の製造方法を提供する。

上記ＴＲＰＶ１刺激剤の製造方法は、ホップ水抽出物をポリビニルポリピロリドンに吸着させた後に溶出して、ポリビニルポリピロリドン吸着画分を得るステップを更に含むことが好ましい。

本発明によれば、新たなＴＲＰＶ１刺激剤及びその製造方法が提供される。より詳細には、ポリフェノール類縁体又はホップ水抽出物を有効成分として含有するＴＲＰＶ１刺激剤及びその製造方法が提供される。本発明のＴＲＰＶ１刺激剤は酸味抑制効果がある。したがって、本発明のＴＲＰＶ１刺激剤を食品添加剤として飲食物に添加することによって酸味を抑制することができる。

ＰＶＰＰ吸着画分の赤外線スペクトルを示す図である。 ＰＶＰＰ吸着画分のゲルろ過カラムクロマトグラフィーによる分析結果を示す図である。 ｈＴＲＰＶ１を発現させたＨＥＫ２９３Ｔ細胞における、ＰＶＰＰ吸着画分の添加に対する応答を示す図である。 ビール系飲料の酸味に対するＰＶＰＰ吸着画分添加の効果を示す図である。

（ＴＲＰＶ１刺激剤の製造方法）
本発明のＴＲＰＶ１刺激剤の製造方法は、ホップを水で抽出して、ホップ水抽出物を得るステップを含む。かかるホップは、例えば、チェコ産ザーツ種ホップ、ドイツ産ハラタウ・トラディション種ホップ、ドイツ産ハラタウ・マグナム種ホップ、ドイツ産ペルレ種ホップ、ドイツ産ヘルスブルッカー種ホップ、アメリカ産ナゲット種ホップ、ニュージーランド産パシフィック・ハラタウ種ホップ、日本国産フラノ１８号ホップ、ワシントン産シトラ、ニュージーランド産ネルソンソービン種ホップ、日本国産信州早生種ホップ等が挙げられ、目的に応じて当業者が適宜選択することができる。この中でも、特にワシントン産シトラ種ホップ又はチェコ産ザーツ種ホップを使用することが好ましい。

また、ホップの由来は、ホップの毬花の全体又はルプリン部分、苞部分等毬花の一部に由来するものを用いることができる。これらは単独で用いてもよく、混合して用いてもよい。

また、ホップの形態は、保存、輸送等の目的に応じて当業者が適宜選択することができる。かかるホップの形態は例えば、乾燥させたホップの毬花を圧縮して得られるプレスホップ、乾燥させたホップの毬花を粉砕して得られるホップパウダー、当該ホップパウダーをペレット状に圧縮成形して得られるホップペレット、ホップの苞部分からなるスペントホップ等が挙げられる。

水としては、温度が０〜１００℃の水を適宜用いることができる。

ホップを水で抽出する方法は特に限定されず、当業者が適宜選択することができる。かかる方法は例えば、所定の容器内にホップと水とを入れて、適度に撹拌しながら、所定の時間だけ放置し、水中にホップに含まれる成分を溶出させることができる。次いで、この容器からホップ及びホップ由来成分を含有する溶液を回収してろ過し、ホップの残渣が除去されたホップ水抽出物を得ることができる。

本発明のＴＲＰＶ１刺激剤の製造方法はまた、加熱処理して、加熱処理が施されたホップ水抽出物を得るステップを含んでもよい。加熱処理を施すことにより、ホップ水抽出物のＴＲＰＶ１刺激の活性がより強くなる。

加熱処理の方法は特に限定されず、当業者が適宜選択することができる。かかる加熱処理の方法は例えば、温度制御可能なヒータを備えた所定の容器内にホップ水抽出物を入れて、ヒータを発熱させて容器の温度を所定の加熱温度まで上昇させ、所定の時間だけ放置する方法が挙げられる。

加熱処理の温度は、好ましくは８５〜１５５℃であり、より好ましくは８５〜１３５℃である。また、加熱処理の時間は好ましくは１０秒〜４０分である。

本発明のＴＲＰＶ１刺激剤の製造方法は、ホップ水抽出物をポリビニルポリピロリドン担体に吸着させた後に溶出して、ポリビニルポリピロリドン吸着画分を得るステップを含んでもよい。ポリビニルポリピロリドン担体は、Ｎ−ビニル−２−ピロリドンのポリマーからなり、ポリフェノール類縁体を吸着させることができる。

ポリビニルポリピロリドン担体にホップ水抽出物を吸着させて更に溶出させる方法は特に限定されない。かかる方法は例えば、ビーカー等の容器にポリビニルポリピロリドン担体、ホップ水抽出物及び吸着用の溶媒を入れて、撹拌することにより、ホップ水抽出物を担体に吸着させることができる。さらに、溶媒を溶出用の溶媒に変えて撹拌することにより、吸着画分を溶出してポリビニルポリピロリドン吸着画分(以下、ＰＶＰＰ吸着画分ともいう。）を得ることができる。また、ポリビニルポリピロリドン担体をカラムに充填し、吸着用の溶媒に溶解されているホップ水抽出物を当該カラムに流した後に、溶出用の溶媒を流してＰＶＰＰ吸着画分を得る方法を用いることもできる。

吸着用の溶媒は例えば水等を用いることができる。また、溶出用の溶媒は、例えば１％アンモニア水溶液を用いることができる。

ホップ水抽出物はまた、ポリビニルポリピロリドン担体に吸着させる前に、ＭＷＣＯ３５００透析膜を用いて膜内に回収される画分を得るステップを含むことが好ましい。

本発明のＴＲＰＶ１刺激剤の製造方法はまた、ホップ水抽出物をメタノール、エタノール、アセトン等の有機溶媒、又はそれらの含水溶媒を用いて抽出するステップを含んでもよい。

（ＴＲＰＶ１刺激剤）
本発明のＴＲＰＶ１刺激剤は、ポリフェノール類縁体を有効成分として含有する。かかるポリフェノール類縁体は特に限定されず、例えばポリフェノール−タンパク複合体、ポリフェノール配糖体、重合ポリフェノール等が挙げられる。本発明のＴＲＰＶ１刺激剤は、植物から抽出されるポリフェノール類縁体であることが好ましく、ホップから抽出されるポリフェノール類縁体であることがより好ましく、ホップから抽出される重合ポリフェノールであることが更に好ましい。

上記ポリフェノール類縁体は、アゴニストとしてＴＲＰＶ１受容体に結合して作用し、ＴＲＰＶ１を刺激して活性化することができる。

本発明のＴＲＰＶ１刺激剤はまた、上記製造方法により得られるホップ水抽出物、好ましくはホップ水抽出物のＰＶＰＰ吸着画分を有効成分として含有する。

上記ホップ水抽出物は、アゴニストとしてＴＲＰＶ１受容体に結合して作用し、ＴＲＰＶ１を刺激して活性化することができる。

上記ホップ水抽出物は、好ましくはポリフェノール類縁体を含有する。かかるポリフェノール類縁体は特に限定されず、ポリフェノール−タンパク複合体、ポリフェノール配糖体、重合ポリフェノール等であることが好ましい。かかるポリフェノール類縁体は特に限定されず、ゲルろ過クロマトグラフィーで測定した場合の平均分子量が２９０超のポリフェノール類縁体であることが好ましく、２９０超１７００以下のポリフェノール類縁体であることが更に好ましい。

上記ホップ水抽出物は、より好ましくは重合ポリフェノールを含有する。

本発明のＴＲＰＶ１刺激剤は、食品添加剤に含ませて飲食品に添加することができる。かかる食品添加剤を飲食品に添加することにより、従来のＴＲＰＶ１アゴニストのような辛味を呈することなく酸味を抑える効果がある。したがって、本発明のＴＲＰＶ１刺激剤を含む食品添加剤は、飲食品の味をマイルドにし、味覚を調整して改善することができる。本発明のＴＲＰＶ１刺激剤を含む食品添加剤を用いることにより、天然物を用いて味覚を調整することができるため、安全面から優れている。

ＴＰＲＶ１刺激剤を含む食品添加剤の形態は特に限定されず、目的に応じて様々な形態を有することができる。かかる形態は例えば、溶液、ペースト、粉末、タブレット、カプセル等が挙げられる。

ＴＲＰＶ１刺激剤を含む食品添加剤を用いる際の飲食品への添加量は、飲食品の形態等により当業者が適宜決めることができる。

ＴＲＰＶ１刺激剤を含む食品添加剤が添加される飲食品の形態は特に限定されず、食品であってもよく、飲料であってもよい。

かかる飲料は特に限定されず、アルコール飲料であってもよく、非アルコール飲料であってもよい。

アルコール飲料は、例えば発泡性アルコール飲料であってもよく、非発泡性アルコール飲料であってもよい。発泡性アルコール飲料としては、例えばビール、発泡酒、スパークリングワイン等が挙げられ、非発泡性アルコール飲料としては例えばワイン、焼酎、ブランデー、ウィスキー等が挙げられる。

非アルコール飲料の例としては、緑茶、烏龍茶、ハーブティー等の茶系飲料、コーヒー、果実飲料、発泡性ノンアルコール飲料等が挙げられる。

食品の例としては、チーズ、ヨーグルト、カレー、スープ等が挙げられる。

以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

［実施例１］
＜ホップ水抽出物の製造＞
チェコ産ザーツ種ホップペレット１００ｇを三角フラスコに計り取り、２Ｌの水を加えて室温で１時間撹拌抽出した。残渣をろ過して得られるろ液を、１０分間遠心分離した後、上清を凍結乾燥してホップ水抽出物を得た。このホップ水抽出物１０ｇを１００ｍＬの水に溶解し、１２１℃にて３０分加熱処理した。

加熱処理が施されたホップ水抽出物はまた、ＭＷＣＯ３５００の透析膜（フナコシ社製、スペクトラ／ポア3）を用いて、膜外部に溶出された画分と膜内部に回収された画分とにそれぞれ分画した。次いで膜内部に回収された画分を、水を溶媒として用いてポリビニルポリピロリドン（アイエスピー・ジャパン社製、商品名ポリクラールＶＴ）に吸着させた。その後ポリビニルポリピロリドンに吸着した画分を１％アンモニア水を用いて溶出し、ＰＶＰＰ吸着画分を得た。

［実施例２］
＜各種ポリフェノール類縁体のＴＲＰＶ１活性の測定＞
ヒトＴＲＰＶ１（Ｇｅｎｂａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＢＣ１３６６３３、以下ｈＴＲＰＶ１と表記する。）を哺乳類発現ベクターｐＢＡｐｏＥＦ１αＰｕｒに連結し、ｈＴＲＰＶ１を構築した。

ヒト胎児由来腎臓細胞であるＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ、ＳＩＧＭＡ社製）で培養し、６ウェルプレートに８０〜９０％コンフルエントとした。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ^ＴＭ ２０００ Ｒｅａｇｅｎｔ（インビトロジェン社製）を用いて、ｈＴＲＰＶ１発現ベクターをマニュアルに従って導入した。

ｈＴＲＰＶ１を発現させたＨＥＫ２９３Ｔ細胞を９６ウェルブラックウォールプレート（ｌｕｍｏｘｍｕｌｔｉｗｅｌｌ ９６ ｗｅｌｌ、グライナージャパン製品番号１２００９６）に５×１０^５細胞／ウェルとなるように蒔いた。細胞をアッセイバッファー（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１３０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＫＣｌ、１０ｍＭグルコース、２ｍＭＣａＣｌ_２及び１．２ｍＭ ＭｇＣｌ_２、ＮａＯＨでｐＨ７．４に調製）で洗浄した。ウェル内にバッファーを５０μＬ残し、ここにアッセイバッファーに溶解した１０μＭカルシウム蛍光指示薬Ｆｕｒａ−２ ＡＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を５０μＬ添加して２７℃で３０分インキュベートした。その後再度アッセイバッファーで洗浄した後、１００μＬをウェルに残して室温・暗所で１５分静置し、アッセイ用の細胞を調製した。

リガンドとしては、重合ポリフェノールであるタンニン酸又は重合ポリフェノールを含む柿渋、緑茶凍結乾燥物又は烏龍茶凍結乾燥物、あるいは単量体ポリフェノールであるカテキンを用いた。各リガンドは、２０質量ｐｐｍとなるようにアッセイバッファーに溶解し、１００μＬを細胞に添加して４０秒間細胞内のカルシウム濃度変化を測定した。すなわち、アッセイサンプル中のリガンドの最終濃度は、１０質量ｐｐｍであった。

細胞内のカルシウム濃度変化の測定は、カルシウムイメージング法を利用した。具体的には、蛍光顕微鏡上で３４０ｎｍと３８０ｎｍの励起波長を細胞に照射し、放出される蛍光を顕微鏡に取り付けたＣＣＤカメラでリアルタイムに撮影した。３４０ｎｍと３８０ｎｍの励起光の切り替えはフィルターホイールを用い、撮影間隔は４秒間とした。得られた画像をＭｅｔａＦｌｏｕｒシステム（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ社製）によって解析し、リガンド添加直後（０秒）に対する、リガンド添加から４０秒後の３４０ｎｍと３８０ｎｍとにおける蛍光強度比の増加を計算した。上記蛍光強度比の増加が０．２を超えた細胞を応答したとみなし、細胞１００個あたりの応答率を算出した。その結果、重合ポリフェノールであるタンニン酸、柿渋、緑茶凍結乾燥物及び烏龍茶凍結乾燥物にはＴＲＰＶ１活性化作用が確認されたが、単量体ポリフェノールであるカテキンにはＴＲＰＶ１活性化作用が確認されなかった。

［実施例３］
＜ＰＶＰＰ吸着画分の赤外線スペクトル＞
次に、フーリエ変換型赤外分光光度計（ＦＴ−ＩＲ、パーキンエルマージャパン社製）でＰＶＰＰ吸着画分の赤外線スペクトルを調べた。その結果を図１で示している。ＰＶＰＰ吸着分の赤外線スペクトルは、コントロールであるカテキンポリマー、すなわち重合ポリフェノールのスペクトルと非常に類似していた。したがって、ＰＶＰＰ吸着画分には、重合ポリフェノールが含まれていることが推定された。

［実施例４］
＜ＰＶＰＰ吸着画分のゲルろ過クロマトグラフィー＞
ＰＶＰＰ吸着画分を、Ｓｈｏｄｅｘ社製のＧＦ−３１０ ＨＱカラムを用いて、ゲルろ過クロマトグラフィーで分析した。ゲルろ過クロマトグラフィーは、１０ｍＭ臭化リチウム／ジメチルホルムアミドを溶媒として用いて、０．４ｍＬ／分の流量で行った。また、コントロールとして、分子量が１７００のタンニン酸及び分子量が２９０のカテキンを用いた。

ゲルろ過クロマトグラフィーの結果を図２で示している。図２（ｃ）で示されているように、ＰＶＰＰ吸着画分には、図２（ａ）で示されているカテキンのピークと、図２（ｂ）で示されているタンニン酸のピークとの間に、主要なピークが観察された。したがって、ＰＶＰＰ吸着画分には、分子量が２９０〜１７００のポリフェノール類縁体が含まれていると推定された。

［実施例５］
＜ＰＶＰＰ吸着画分のＴＲＰＶ１活性の測定＞
リガンドとしてＰＶＰＰ吸着画分又は洗浄液を、最終濃度が１００質量ｐｐｍとなるように細胞に添加した以外は実施例２と同様な方法を用いて細胞のＴＲＰＶ１応答を観察した。結果は図３で示している。ＰＶＰＰ吸着画分の添加により、ＴＲＰＶ１発現細胞の応答率が上昇した。すなわち、ＰＶＰＰ吸着画分は、ＴＲＰＶ１を活性化する作用を有することがわかった。

［実施例６］
＜味覚特性の評価＞
５ｍｇ／ｍＬのＰＶＰＰ吸着画分水溶液を調整し、７０ｍＬの市販の麦芽１００％ビール、麦芽７０％ビール、リキュール類及び発泡酒それぞれに対し、２８０μＬ添加して最終濃度２０質量ｐｐｍとした。対照として２８０μＬの蒸留水を添加したサンプルを用意し、味覚センサーで測定した。味覚センサーは味認識装置ＳＡ４０２Ｂ（インテリジェントセンサーテクノロジー社製）を利用し、マニュアルに従って測定を実施した。標準液・基準液は付属のものを用いた。センサーは（ＳＢ２ＡＡＥ、ＳＢ２ＣＴＯ、ＳＢ２ＣＡＯ、ＳＢ２ＣＯＯ、ＳＢ２ＡＥＩ）の５種類を用いた。得られた酸味値について、付属の解析アプリケーションにて解析した。

味覚特性の結果を図４で示している。全てのサンプルにおいて、ＰＶＰＰ吸着画分の添加により酸味が低下していることが確認された。

Claims (11)

1. ポリフェノール類縁体を有効成分として含有する、ＴＲＰＶ１刺激剤。
2. 前記ポリフェノール類縁体は、植物由来のポリフェノール類縁体である、請求項1に記載のＴＲＰＶ１刺激剤。
3. 前記ポリフェノール類縁体は、ホップ由来のポリフェノール類縁体である、請求項１又は２に記載のＴＲＰＶ１刺激剤。
4. 前記ポリフェノール類縁体は、重合ポリフェノールであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＴＲＰＶ１刺激剤。
5. ホップ水抽出物を有効成分として含有する、ＴＲＰＶ１刺激剤。
6. 前記ホップ水抽出物が、ポリフェノール類縁体を含む、請求項５に記載のＴＲＰＶ１刺激剤。
7. 前記ホップ水抽出物が、ホップを水で抽出した後にポリビニルポリピロリドンに吸着させて溶出された抽出物である、請求項５又は６に記載のＴＲＰＶ１刺激剤。
8. 請求項１〜７のいずれか一項に記載のＴＲＰＶ１刺激剤を含有する、食品添加剤。
9. 請求項８に記載の食品添加剤が添加された、飲食物。
10. ホップを水で抽出して、ホップ水抽出物を得るステップを含む、ホップ水抽出物を有効成分として含有するＴＲＰＶ１刺激剤の製造方法。
11. 前記ホップ水抽出物をポリビニルポリピロリドンに吸着させた後に溶出して、ポリビニルポリピロリドン吸着画分を得るステップを更に含む、請求項１０に記載のＴＲＰＶ１刺激剤の製造方法。

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