JP2014033665A - ブリ細菌性溶血性黄疸の病原体抗原ポリペプチド、及びこれを含む水産用ワクチン - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明は、ブリ属魚類の細菌性溶血性黄疸に対して高いワクチン活性を有する4種類の抗原タンパク質を提供する。また、本発明はこれらの抗原タンパク質を含むブリの細菌性溶血性黄疸に対するワクチンを提供する。
【選択図】なし
Description
[1]以下の(1)〜(4)から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含み、且つブリ属魚類の細菌性溶血性黄疸に対するワクチン活性を有するポリペプチド:
(1)配列番号2、4、6、8、10、12、14又は16で表されるアミノ酸配列;
(2)配列番号2、4、6、8、10、12、14又は16で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列;
(3)配列番号2、4、6、8、10、12、14又は16で表されるアミノ酸配列において1若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列;及び
(4)10アミノ酸以上の長さを有する、上記(1)〜(3)から選択されるいずれかのアミノ酸配列の部分配列。
[2][1]記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド。
[3][2]記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
[4][3]記載の発現ベクターで形質転換された形質転換体。
[5][1]記載のポリペプチドを特異的に認識する抗体。
[6][1]記載のポリペプチドを含む、組成物。
[7][1]記載のポリペプチドを含む、ブリ属魚類の細菌性溶血性黄疸に対するワクチン。
[8][1]記載のポリペプチドの有効量をブリ属魚類へ投与することを含む、当該ブリ属魚類における細菌性溶血性黄疸の予防方法。
[9][1]記載のポリペプチドの有効量をブリ属魚類へ投与すること、および当該ブリ属魚類を飼育することを含む、ブリ属魚類の養殖方法。
細菌性溶血性黄疸の病原体は難培養性であるため、これまでワクチンの開発が進まなかったが、本発明の抗原ポリペプチド及びワクチンは、遺伝子組換技術を用いることにより安価に大量に調製することができるので、ブリ属魚類の細菌性溶血性黄疸に対するワクチンの実用化に資する。
本発明は、以下の(1)〜(4)から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含み、且つブリ属魚類の細菌性溶血性黄疸に対するワクチン活性を有するポリペプチド(以下、本発明のポリペプチドと称する場合がある)を提供するものである:
(1)配列番号2、4、6、8、10、12、14又は16で表されるアミノ酸配列;
(2)配列番号2、4、6、8、10、12、14又は16で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列;
(3)配列番号2、4、6、8、10、12、14又は16で表されるアミノ酸配列において1若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列;及び
(4)10アミノ酸以上の長さを有する、上記(1)〜(3)から選択されるいずれかのアミノ酸配列の部分配列。
本発明は上記本発明のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを提供するものである。
本発明は、上記本発明のポリヌクレオチドを含む発現ベクター及び該発現ベクターを含む形質転換体を提供するものである。
本発明は、上記本発明のポリペプチドを特異的に認識する抗体(以下、本発明の抗体と称することがある)を提供する。
ブリ属魚類を本発明のポリペプチドにより免疫すると、本発明のポリペプチドに対する免疫反応が惹起され、本発明のポリペプチド又はその抗原エピトープを含む細菌性溶血性黄疸の病原体もこの獲得された免疫反応により排除される。従って、本発明のポリペプチドにより免疫されたブリ属魚類は、細菌性溶血性黄疸の病原体の感染に対する耐性を獲得する。よって、本発明は、上記本発明のポリペプチドを含む、ブリ属魚類の細菌性溶血性黄疸に対するワクチン(以下、本発明のワクチンと称することがある。)を提供する。本発明のポリペプチドの有効量をブリ属魚類へ投与することにより、当該ブリ属魚類における細菌性溶血性黄疸を予防することができる。
(抗原候補の選択)
1991年に香川県で分離されたブリの細胞細菌性溶血性黄疸の病原体 JKBA-6株を、10%子牛血清を添加したL-15培地中で培養し、菌体を回収し、ゲノムDNAを抽出した。次いで、抽出したゲノムDNAを断片化し、ライブラリーを作製し、複数の次世代シークエンサーを用いてゲノムシークエンスを行った。
上述の64種類の抗原をそれぞれ発現する64種類の大腸菌死菌を用いた。この大腸菌死菌2種類ずつを組み合わせることにより、32組の試作ワクチンを調整し、ブリの0歳魚(体重136.5g)に、腹腔内投与することにより免疫した(投与量 大腸菌死菌タンパク質として2mg/尾)。対照区として、JBKA-6 株ホルマリン死菌(FKC)、PBS およびE.coliを同様に腹腔内接種した。尚試験を通じた飼育水温は17.7〜19.9℃であった。
尚、本試験と同時に上記4組の混合抗原についても試験を行い、18 日間の死亡率は、1-2で20%、1-5で0%、1-8で10%、3-1で10%であった。
細菌性溶血性黄疸の病原体は難培養性であるため、これまでワクチンの開発が進まなかったが、本発明の抗原ポリペプチド及びワクチンは、遺伝子組換技術を用いることにより安価に大量に調製することができるので、ブリ属の細菌性溶血性黄疸に対するワクチンの実用化に資する。
Claims (9)
- 以下の(1)〜(4)から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含み、且つブリ属魚類の細菌性溶血性黄疸に対するワクチン活性を有するポリペプチド:
(1)配列番号2、4、6、8、10、12、14又は16で表されるアミノ酸配列;
(2)配列番号2、4、6、8、10、12、14又は16で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列;
(3)配列番号2、4、6、8、10、12、14又は16で表されるアミノ酸配列において1若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列;及び
(4)10アミノ酸以上の長さを有する、上記(1)〜(3)から選択されるいずれかのアミノ酸配列の部分配列。 - 請求項1記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド。
- 請求項2記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
- 請求項3記載の発現ベクターで形質転換された形質転換体。
- 請求項1記載のポリペプチドを特異的に認識する抗体。
- 請求項1記載のポリペプチドを含む、組成物。
- 請求項1記載のポリペプチドを含む、ブリ属魚類の細菌性溶血性黄疸に対するワクチン。
- 請求項1記載のポリペプチドの有効量をブリ属魚類へ投与することを含む、当該ブリ属魚類における細菌性溶血性黄疸の予防方法。
- 請求項1記載のポリペプチドの有効量をブリ属魚類へ投与すること、および当該ブリ属魚類を飼育することを含む、ブリ属魚類の養殖方法。
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