JP2013532680A - 抗癌性誘導体、この調製および治療への使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）ダイマー複合体、これを含有する組成物、および治療への使用に関し、特に、抗癌剤としての使用に関する。本発明はまた、この複合体を調製する方法、この複合体の抗癌剤としての使用、また、これらのダイマーにも関する。式（Ｉ）において：は、単結合または二重結合を表す。

Description

本発明は、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）ダイマー複合体、これを含有する組成物、および治療への使用に関し、特に、抗癌剤としての使用に関する。本発明はまた、この複合体を調製する方法、この複合体の抗癌剤としての使用、また、これらのダイマーにも関する。

（技術分野）
ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーは、細胞ＤＮＡに共有結合することによって作用する抗癌剤である。これらの誘導体は、特許出願ＷＯ００／１２５０８およびＷＯ２００５／０８５２６０に記載されており、以下の刊行物にも記載されている。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，２００５，４０，６４１−６５４；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ １９８８，２９（４０），５１０５−５１０８。

複合体の化学は、何年にもわたって知られており、数種類の細胞毒性剤、例えば、メイタンシノイド（ＷＯ０４１０３２７２）、タキサン（ＷＯ０６０６１２５８）、レプトマイシン（ＷＯ０７１４４７０９）、ＣＣ−１０６５およびこの類似体（ＷＯ２００７１０２０６９）に適用されており、複合体については、Ｍｏｎｎｅｒｅｔ Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ｄｕ Ｃａｎｃｅｒ ２０００，８７（１１），８２９−３８；Ｒｉｃａｒｔ Ａ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２００７，４，２４５−２５５；Ｓｉｎｇｈ Ｒ．ａｎｄ Ｒｉｃｋｓｏｎ Ｈ．Ｋ．，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２００９，５２５，４４５−４６７も参照。

（従来技術）
ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーの複合体は、特許出願ＷＯ０７０８５９３０およびＷＯ２００９／０１６５１６に記載されている。使用されるダイマーは、以下の式を有し、

式中、Ｔは、−Ｇ−Ｄ−（Ｚ）_ｐ−ＳＺ_ａまたは−Ｇ−Ｄ−（Ｚ）_ｐ−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂで置換されたアリール基またはヘテロアリール基を表していてもよい。Ｇは、単結合もしくは二重結合を表すか、または、−Ｏ−、−Ｓ−もしくは−ＮＲ−を表す。Ｄは、単結合を表すか、または、以下の基：−Ｅ−、−Ｅ−ＮＲ−、−Ｅ−ＮＲ−Ｆ−、−Ｅ−Ｏ−、−Ｅ−Ｏ−Ｆ−、−Ｅ−ＮＲ−ＣＯ−、−Ｅ−ＮＲ−ＣＯ−Ｆ−、−Ｅ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｅ−、−Ｅ−ＣＯ−Ｆ、−Ｅ−Ｓ−、−Ｅ−Ｓ−Ｆ−、−Ｅ−ＮＲ−Ｃ−Ｓ−、−Ｅ−ＮＲ−ＣＳ−Ｆ−のいずれかを表し、このとき、ＥおよびＦは、−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉアルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−アルキル、−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ、−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉシクロアルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｊ−、−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉヘテロシクリル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｊ−、−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉアリール（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｊ−、−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉヘテロアリール（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉアルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−、−アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉシクロアルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉヘテロシクリル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉアリール−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉヘテロアリール（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｊ−、−シクロアルキル−アルキル−、−アルキル−シクロアルキル−、−ヘテロシクリル−アルキル−、−アルキル−ヘテロシクリル−、−アルキル−アリール−、−アリール−アルキル−、−アルキル−ヘテロアリール−、−ヘテロアリール−アルキル−から選択される。ｉおよびｊは、０から２０００の範囲の整数を表す。Ｚは、アルキル基を表し、ｐは、０または１の整数である。これらの化合物において、ＮＲ基のＲは、ＰＥＧ鎖を含まない。

２００９年１１月にＥＯＲＴＣ Ｃｏｎｇｒｅｓｓに記載された免疫原（Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｂ−１２６）は、以下の複合体であり、

リンカーの性質と、細胞毒性化合物の性質によって識別される。この化合物は、以下の前駆体とともに、２０１０年５月１７日から２１日に開催されたＳｉｘｔｈ Ａｎｎｕａｌ ＰＥＧＳ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｂｏｓｔｏｎに再び記載され、

ここで、Ｒ＝Ｎ−スクシンイミジルまたはメチルである。

以下のダイマーは、特に、ＷＯ０７０８５９３０およびＷＯ２００９／０１６５１６にそれぞれ記載されている。

これら３つの出願は、１個または２個のペグ化鎖を含む本発明の新規リンカーを記載も示唆もしていない。

国際公開第２０００／０１２５０８号 国際公開第２００５／０８５２６０号 国際公開第２００４／１０３２７２号 国際公開第２００６／０６１２５８号 国際公開第２００７／１４４７０９号 国際公開第２００７／１０２０６９号 国際公開第２００７／０８５９３０号 国際公開第２００９／０１６５１６号

Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，２００５，４０，６４１−６５４；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ １９８８，２９（４０），５１０５−５１０８ Ｍｏｎｎｅｒｅｔ Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ｄｕ Ｃａｎｃｅｒ ２０００，８７（１１），８２９−３８ Ｒｉｃａｒｔ Ａ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２００７，４，２４５−２５５ Ｓｉｎｇｈ Ｒ．ａｎｄ Ｒｉｃｋｓｏｎ Ｈ．Ｋ．，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２００９，５２５，４４５−４６７

本発明が解決することを意図している技術課題は、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーの新規複合体を提案することである。

（定義）
以下の定義を適用する。

複合体：少なくとも１個の細胞毒性化合物分子が共有結合している細胞結合剤；
細胞結合剤：生物学的標的への親和性を有する分子であり、例えば、リガンド、タンパク質、抗体、さらに具体的には、モノクローナル抗体、タンパク質または抗体のフラグメント、ペプチド、オリゴヌクレオチドまたはオリゴ糖であってもよい。結合剤は、細胞毒性剤として生物学的活性のある化合物を、生物学的標的に向かわせる機能を有する；
生物学的標的：この腫瘍に関連する癌細胞または間質細胞の表面に優先的に位置する抗原（または抗原群）。これらの抗原は、おそらく、例えば、成長因子受容体、変異した「腫瘍抑制剤」遺伝子または癌遺伝子の産物、血管形成に関連する分子、接着分子であり得る；
リンカー：細胞毒性化合物を結合剤に共有結合させるための一連の原子
アルキル基：アルカンから水素原子を取り除くことによって得られる飽和脂肪族炭化水素系基。アルキル基は、直鎖または分枝鎖であってもよい。あり得る例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、２，２−ジメチルプロピル、ヘキシルが挙げられる；
シクロアルキル基：環構造に関わる炭素原子を３から８個含む環状アルキル基。あり得る例としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基およびシクロヘキシル基が挙げられる；
アリール基：ヘテロ原子を含まない単環または二環の芳香族基。さらに具体的には、フェニル基またはナフチル基である；
ヘテロアリール基：環構造に関わる少なくとも１個のヘテロ原子（Ｏ、Ｓ、Ｎ）を含み、炭素原子に接続して環を形成する、単環または二環の芳香族基。さらに具体的には、ピリジル基、ピローリル基、チエニル基、フリル基、ピリミジニル基またはトリアゾリル基である；
ヘテロシクロアルキル基：環構造に関わる少なくとも１個のヘテロ原子（Ｏ、Ｓ、Ｎ）を含み、炭素原子に接続して環を形成する、シクロアルキル基。さらに具体的には、ピペラジノ基、Ｎ−メチルピペラジノ基、モルホリノ基、ピペリジノ基またはピロリジノ基である；
アルコキシ基：−Ｏ−アルキル基、アルキル基は上に定義したとおりである；
アルカノイルオキシ基：−Ｏ−ＣＯ−アルキル基、アルキル基は上に定義したとおりである；
アルキレン基：アルカンから２個の水素原子を取り除くことによって得られる実験式−Ｃ_ｍＨ_２ｍ−の飽和二価の基。あり得る例としては、メチレン基（−ＣＨ_２−）、エチレン基（−ＣＨ_２ＣＨ_２−）、プロピレン基（−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−）、ブチレン基（−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−）、イソブチレン基

およびヘキシレン基（−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−）基が挙げられる。アルキレン基は、さらに具体的には、式−（ＣＨ_２）_ｍ−であってもよく、ｍは、整数を表す。
値の範囲には、限界値が含まれている（例えば、「１から６の範囲のｉ」という種類の範囲は、限界値１と６を含む。）。さらに、この範囲は、範囲に含まれる全ての点も記載している。従って、「１から６の範囲のｉ」は、１、２、３、４、５および６という値を記述している。

（使用される省略語）
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル；ＡＬＫ：アルキレン基；（Ｃ_ｘ−Ｃ_ｙ）ＡＬＫ：（Ｃ_ｘ−Ｃ_ｙ）アルキレン；ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー；ＭＳＣ：メタンスルホニルクロリド；ＤＢＵ：１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン；ＤＣＣ：Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド；ＤＣＭ：ジクロロメタン；ＤＥＡＤ：ジエチルアゾジカルボキシレート；ＤＩＣ：Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド；ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン；ＤＭＡ：ジメチルアセトアミド；ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン；ＤＭＥ：ジメトキシエタン；ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド；ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド；ｅ_{ＷＬ ｎｍ}：波長ＷＬでのモル吸光係数；ＥＥＤＱ：２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン；ＥＤＣＩ：Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド；ＥＤＴＡ：エチレンジアミンテトラ酢酸；Ｆｍｏｃ：フルオレニルメトキシカルボニル；Ｈａｌ：ハロゲン原子；ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール；ＨＥＰＥＳ：４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸；ＷＬ：波長；Ｍｅ：メチル；ＮＨＳ：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド；ＮＭＰ：Ｎ−メチルピロリジノン；ＲＰ：減圧；Ｒｆ：保持因子；ＳＥＣ：立体排除クロマトグラフィー；ＲＴ：室温；ＴＢＤＭＳ：ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル；ＴＥＡ：トリエチルアミン；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；ＴＩＰＳ：トリイソプロピルシリル；ＴＨＦ：テトラヒドロフラン；ｔ_Ｒ：保持時間。

（図面）
（図１）ＳＰＤＰによる結合剤の修飾。
（図２）イミノチオランによる結合剤の修飾。
（図３）脱グリコシル化後の実施例８の複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトル。
（図４）実施例９の脱グリコシル化されていない複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトル（ＨＲＭＳ）。
（図５）実施例１０の脱グリコシル化されていない複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトル（ＨＲＭＳ）。
（図６）実施例１１の脱グリコシル化されていない複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトル（ＨＲＭＳ）。

これらの図は、それぞれの複合体について、０から８個のトマイマイシンダイマーを含む種の分布を示す（Ｄ_０：ダイマーなし；Ｄ_ｘ：ｘ個のダイマー）。

（発明の簡単な説明）
本発明は、式（Ｉ）の化合物に関し、

式中、

は、単結合または二重結合を表し、但し

が単結合を表す場合には、
Ｕおよび／またはＵ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈを表し；
Ｗおよび／またはＷ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、ＯＨ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ、−ＣＯＯＲ、−ＯＣＯＯＲ、−ＯＣＯＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状カルバメート、−ＮＲＣＯＮＲＲ’、−ＯＣＳＮＨＲ、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状チオカルバメート、−ＳＨ、−ＳＲ、−ＳＯＲ、−ＳＯＯＲ、−ＳＯ_３ ⁻、−ＮＲＳＯＯＲ’、−ＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状アミン、−ＮＲＯＲ’、−ＮＲＣＯＲ’、−Ｎ_３、−ＣＮ、Ｈａｌ、トリアルキルホスホニウム基またはトリアリールホスホニウム基を表し、

が二重結合を表す場合には、
ＵおよびＵ’は存在せず、
Ｗおよび／またはＷ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈを表すことを条件とし、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_１’、Ｒ_２’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、あるいはＨａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ_３、ＯＲ、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、Ｓ（Ｏ）_ｑＲ（ｑ＝０、１または２）を表し、
または、
Ｒ_１とＲ_２、および／またはＲ_１’とＲ_２’とがそれぞれ合わさって、二重結合＝ＣＨ_２または＝ＣＨ−ＣＨ_３を形成し、
ＹおよびＹ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈまたは−ＯＲを表し、
Ｍは、ＣＨまたはＮを表し；
ＡＬＫおよびＡＬＫ’は、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキレン基を示し、
ＲおよびＲ’は、互いに独立して、Ｈ、あるいは、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ_３、ＯＲ、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基またはアリール基を表し、
Ｌ_１は、
単結合、
または
酸素原子を介してフェニル環またはピリジル環に接続した−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−基（ｉは、２から４０、好ましくは２から１０の範囲、好ましくは３の整数を表す。）、
または
Ｄを介してフェニル環またはピリジル環に接続した−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−基（Ｄは、−Ｏ−、−ＮＨ−または−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル−を表す。）
を表し、
Ｌ_２は、
−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−基、
または
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２−基（ｊは、１から４０、好ましくは１から１０の範囲、好ましくは２または３の整数を表す。）、
または
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）−単位を介して窒素原子に接続した−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−基（ｊは、１から４０、好ましくは１から１０の範囲、好ましくは２または３の整数を表し、Ｒ”は、Ｈまたは（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基を表す。）
を表し、
Ｑは、単結合またはＣ（＝Ｏ）基を表し、
ｋは、０から４０、好ましくは１から４０、より好ましくは１から１０の範囲の整数を表し、
Ｇは、−ＯＲ基または−ＮＲＲ’基を表し、ＲおよびＲ’は、すでに定義されたとおりであるか、またはこれらが結合している窒素原子とともに、Ｎ、ＯおよびＳから選択される別のヘテロ原子を環に含んでいてもよく、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基、ハロゲン原子およびヒドロキシル基から選択される少なくとも１個の置換基で場合により置換されていてもよい（Ｃ_４−Ｃ_１０）ヘテロシクロアルキル基を形成し、
ＲＣＧ１は、−ＳＺ_ａ基または−Ｃ（＝Ｏ）−Ｚ_ｂＲ_ｂ基を表し、
Ｚ_ａは、Ａｃ、Ｒ_ａまたはＳＲ_ａを表し、
Ｒ_ａは、Ｈ、あるいは、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ_３、ＯＲ、ＮＯ_２、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、（Ｃ_３−Ｃ_８）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ_４−Ｃ_１０）ヘテロシクロアルキル基を表し、
Ｚ_ｂは、単結合、−Ｏ−または−ＮＨ−を表し、Ｒ_ｂは、Ｈ、あるいは（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、（Ｃ_３−Ｃ_８）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ_４−Ｃ_１０）ヘテロシクロアルキル基を表すか、または、Ｚ_ｂは、単結合を表し、Ｒ_ｂは、Ｈａｌを表し、但し
Ｌ_１が単結合を表す場合には、ＲＣＧ１は−ＳＺ_ａを表すことを条件とする。

さらに具体的には、これらは式（ＩＡ）または（ＩＢ）の化合物である。

また、本発明は、（ｉ）修飾剤を用いて場合により修飾した、結合剤の水溶液（場合により緩衝化した水溶液）と、式（Ｉ）の化合物の溶液とを接触させ、放置して反応させ、（ｉｉ）次いで、場合により、工程（ｉ）で生成した複合体を式（Ｉ）の化合物および／または未反応の結合剤および／または生成し得る任意の凝集物から分離することとを含む、複合体を調製する方法に関する。式（Ｉ）の化合物の化学基ＲＣＧ１は、結合剤に存在する化学基ＲＣＧ２に対して、特に抗体に存在するアミノ基に対して反応性であり、この化学基ＲＣＧ２が、必要に応じて、修飾剤によって共有結合の生成により結合剤に式（Ｉ）の化合物が接続するように、導入される。

また、本発明は、上述の方法によって得られ得る複合体および複合体溶液に関する。

また、本発明は、以下の式のダイマーのＭのパラ位に共有結合する結合剤を調製するための、式（Ｉ）の誘導体の使用に関する。

化合物、複合体および複合体溶液を抗癌剤として使用し得る。

また、本発明は、式Ｐ_２の化合物に関し、

式中、Ｌ_１、Ｌ_２、Ｑ、ｋ、ＡＬＫ、ＡＬＫ’およびＧは、すでに定義したとおりであり、ＬＧおよびＬＧ’は、脱離基を表し、Ｘ’はＲＣＧ１を表す。

また、本発明は、本発明の化合物と結合剤とを反応させた後、以下の式

のダイマーがＭのパラ位において共有結合した結合剤にも関する。

ＳＰＤＰによる結合剤の修飾。 イミノチオランによる結合剤の修飾。 脱グリコシル化後の実施例８の複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトル。 実施例９の脱グリコシル化されていない複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトル（ＨＲＭＳ）。 実施例１０の脱グリコシル化されていない複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトル（ＨＲＭＳ）。 実施例１１の脱グリコシル化されていない複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトル（ＨＲＭＳ）。

本発明は、式（Ｉ）の化合物に関し、

式中、

は、単結合または二重結合を表し、但し

が単結合を表す場合には、
Ｕおよび／またはＵ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈを表し；
Ｗおよび／またはＷ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、ＯＨ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ、−ＣＯＯＲ、−ＯＣＯＯＲ、−ＯＣＯＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状カルバメート、−ＮＲＣＯＮＲＲ’、−ＯＣＳＮＨＲ、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状チオカルバメート、−ＳＨ、−ＳＲ、−ＳＯＲ、−ＳＯＯＲ、−ＳＯ_３ ⁻、−ＮＲＳＯＯＲ’、−ＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状アミン、−ＮＲＯＲ’、−ＮＲＣＯＲ’、−Ｎ_３、−ＣＮ、Ｈａｌ、トリアルキルホスホニウム基またはトリアリールホスホニウム基を表し、

が二重結合を表す場合には、
ＵおよびＵ’は存在せず、
Ｗおよび／またはＷ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈを表すことを条件とし、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_１’、Ｒ_２’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、あるいはＨａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ_３、ＯＲ、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、Ｓ（Ｏ）_ｑＲ（ｑ＝０、１または２）を表し、
または、
Ｒ_１とＲ_２、および／またはＲ_１’とＲ_２’とがそれぞれ合わさって、二重結合＝ＣＨ_２または＝ＣＨ−ＣＨ_３を形成し、
ＹおよびＹ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈまたは−ＯＲを表し、
Ｍは、ＣＨまたはＮを表し；
ＡＬＫおよびＡＬＫ’は、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキレン基を示し、
ＲおよびＲ’は、互いに独立して、Ｈ、あるいは、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ_３、ＯＲ、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基またはアリール基を表し、
Ｌ_１は、
単結合、
または
酸素原子を介してフェニル環またはピリジル環に接続した−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−基（ｉは、２から４０、好ましくは２から１０の範囲、好ましくは３の整数を表す。）、
または
Ｄを介してフェニル環またはピリジル環に接続した−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−基（Ｄは、−Ｏ−、−ＮＨ−または−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル−を表す。）
を表し、
Ｌ_２は、
−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−基、
または
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２−基（ｊは、１から４０、好ましくは１から１０の範囲、好ましくは２または３の整数を表す。）、
または
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）−単位を介して窒素原子に接続した−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−基（ｊは、１から４０、好ましくは１から１０の範囲、好ましくは２または３の整数を表し、Ｒ”は、Ｈまたは（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基を表す。）
を表し、
Ｑは、単結合またはＣ（＝Ｏ）基を表し、
ｋは、０から４０、好ましくは１から４０、より好ましくは１から１０の範囲の整数を表し、
Ｇは、−ＯＲ基または−ＮＲＲ’基を表し、ＲおよびＲ’は、すでに定義されたとおりであるか、またはこれらが結合している窒素原子とともに、Ｎ、ＯおよびＳから選択される別のヘテロ原子を環に含んでいてもよく、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基、ハロゲン原子およびヒドロキシル基から選択される少なくとも１個の置換基で場合により置換されていてもよい（Ｃ_４−Ｃ_１０）ヘテロシクロアルキル基を形成し、
ＲＣＧ１は、−ＳＺ_ａ基または−Ｃ（＝Ｏ）−Ｚ_ｂＲ_ｂ基を表し、
Ｚ_ａは、Ａｃ、Ｒ_ａまたはＳＲ_ａを表し、
Ｒ_ａは、Ｈ、あるいは、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ_３、ＯＲ、ＮＯ_２、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、（Ｃ_３−Ｃ_８）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ_４−Ｃ_１０）ヘテロシクロアルキル基を表し、
Ｚ_ｂは、単結合、−Ｏ−または−ＮＨ−を表し、Ｒ_ｂは、Ｈ、あるいは（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、（Ｃ_３−Ｃ_８）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ_４−Ｃ_１０）ヘテロシクロアルキル基を表すか、または、Ｚ_ｂは、単結合を表し、Ｒ_ｂは、Ｈａｌを表し、但し
Ｌ_１が単結合を表す場合には、ＲＣＧ１は−ＳＺ_ａを表すことを条件とする。

従って、式（Ｉ）の化合物は、以下の形態で存在していてもよい。

また、本発明は、式（Ｉ’）の化合物に関し、

式中、

は、単結合または二重結合を表し、但し

が単結合を表す場合には、

は、単結合を表し、
Ｕおよび／またはＵ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈを表し；
Ｗおよび／またはＷ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、ＯＨ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ、−ＣＯＯＲ、−ＯＣＯＯＲ、−ＯＣＯＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状カルバメート、−ＮＲＣＯＮＲＲ’、−ＯＣＳＮＨＲ、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状チオカルバメート、−ＳＨ、−ＳＲ、−ＳＯＲ、−ＳＯＯＲ、−ＳＯ_３ ⁻、−ＮＲＳＯＯＲ’、−ＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状アミン、−ＮＲＯＲ’、−ＮＲＣＯＲ’、−Ｎ_３、−ＣＮ、Ｈａｌ、トリアルキルホスホニウム基またはトリアリールホスホニウム基を表すことを条件とし、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_１’、Ｒ_２’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、あるいはＨａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ_３、ＯＲ、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、Ｓ（Ｏ）_ｑＲ（ｑ＝０、１または２）を表し、
または、
Ｒ_１とＲ_２、および／またはＲ_１’とＲ_２’とがそれぞれ合わさって、二重結合＝ＣＨ_２または＝ＣＨ−ＣＨ_３を形成し、
ＹおよびＹ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈまたは−ＯＲを表し、
Ｍは、ＣＨまたはＮを表し；
ＡＬＫおよびＡＬＫ’は、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキレン基を示し、
ＲおよびＲ’は、互いに独立して、Ｈ、あるいは、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ_３、ＯＲ、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基またはアリール基を表し、
Ｌ_１は、
単結合、
または
酸素原子を介してフェニル環またはピリジル環に接続した−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−基（ｉは、２から４０、好ましくは２から１０の範囲の整数を表す。）、
または
Ｄを介してフェニル環またはピリジル環に接続した−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−基（Ｄは、−Ｏ−、−ＮＨ−または−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル−を表す。）
を表し、
Ｌ_２は、
−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−基、
または
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２−（ｊは、１から４０、好ましくは１から１０の範囲の整数を表す。）、
または
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）−単位を介して窒素原子に接続した−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−基（ｊは、１から４０、好ましくは１から１０の範囲の整数を表し、Ｒ”は、Ｈまたは（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基を表す。）
を表し、
Ｑは、単結合またはＣ（＝Ｏ）基を表し、
ｋは、０から４０、好ましくは１から４０、より好ましくは１から１０の範囲の整数を表し、
Ｇは、−ＯＲ基または−ＮＲＲ’基を表し、ＲおよびＲ’は、すでに定義されたとおりであるか、またはこれらが結合している窒素原子とともに、Ｎ、ＯおよびＳから選択される別のヘテロ原子を環に含んでいてもよく、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基、ハロゲン原子およびヒドロキシル基から選択される少なくとも１個の置換基で場合により置換されていてもよい（Ｃ_４−Ｃ_１０）ヘテロシクロアルキル基を形成し、
ＲＣＧ１は、−ＳＺ_ａ基または−Ｃ（＝Ｏ）−Ｚ_ｂＲ_ｂ基を表し、
Ｚ_ａは、Ａｃ、Ｒ_ａまたはＳＲ_ａを表し、
Ｒ_ａは、Ｈ、あるいは、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ_３、ＯＲ、ＮＯ_２、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、（Ｃ_３−Ｃ_８）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ_４−Ｃ_１０）ヘテロシクロアルキル基を表し、
Ｚ_ｂは、単結合、−Ｏ−または−ＮＨ−を表し、Ｒ_ｂは、Ｈ、あるいは（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、（Ｃ_３−Ｃ_８）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ_４−Ｃ_１０）ヘテロシクロアルキル基を表すか、または、Ｚ_ｂは、単結合を表し、Ｒ_ｂは、Ｈａｌを表し、但し
Ｌ_１が単結合を表す場合には、ＲＣＧ１は−ＳＺ_ａを表すことを条件とする。

用語Ｌは、

によって定義されるリンカーを示す。

さらに具体的には、Ｌ_１が単結合を表す場合、Ｌ_２は、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２−または−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−を表し、および／またはｋは２ではない。

さらに具体的には、ＭがＮを表す場合、−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−は、望ましくは−Ｏ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−を表す。

さらに具体的には、フェニル核またはピリジル核に接続するＡＬＫおよびＡＬＫ’という２個の基がメチレン基を示す。

さらに具体的には、Ｄは、−Ｏ−、−ＮＨ−または−ＮＭｅ−を表す。

上の式（Ｉ）および（Ｉ’）において、フェニル核またはピリジル核に接続するそれぞれのアルキレン基（従って、例えば、ＡＬＫおよびＡＬＫ’という２個の基）は、同じであってもよく、異なっていてもよく、別の例によれば、−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−のＡＬＫ基は、フェニル核またはピリジル核に接続するＡＬＫ基と同じであってもよく、異なっていてもよい。ＡＬＫは、例えば、−ＣＨ_２−、−ＣＨ_２ＣＨ_２−、ＣＨ_２ＣＭｅ_２−、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−のいずれかから選択されてもよい。

ＹおよびＹ’は、さらに具体的には、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルコキシ基、特にメトキシ基を表す。ＲおよびＲ’は、さらに具体的には、互いに独立して、Ｈまたは（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基を表していてもよい。

ある具体的な実施形態によれば、フェニル核またはピリジル核に接続するＵ＝Ｕ’および／またはＷ＝Ｗ’および／またはＲ_１＝Ｒ_１’および／またはＲ_２＝Ｒ_２’および／またはＹ＝Ｙ’および／またはＡＬＫおよびＡＬＫ’という２個の基が同じである（対称形ダイマー、調製するのが簡単である。）。

さらに具体的には、ＷとＷ’は同じであるか、または異なっており、ＯＨ、ＯＭｅ、ＯＥｔ、ＮＨＣＯＮＨ_２、ＳＭｅを表す。

Ｒ”は、Ｈまたは（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基、特にＭｅを表していてもよい。

Ｍは、さらに具体的には、窒素原子（Ｎ）を表す。

さらに具体的には、Ｒ_１とＲ_２、および／またはＲ_１’とＲ_２’とがそれぞれ合わさって、二重結合＝ＣＨ_２または＝ＣＨ−ＣＨ_３、さらに具体的には、＝ＣＨ−ＣＨ_３を形成する。

Ｇは、−ＯＲ基、さらに具体的には、−ＯＨ基または−Ｏ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、特に−ＯＭｅを表していてもよい。また、Ｇは、−ＮＲＲ’基を表していてもよく、ここで、ＲおよびＲ’は、互いに独立して、Ｈまたは（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基を表す。さらに具体的には、従って、Ｇは、−ＮＨ_２基、−ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基または−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル_２基、特に、−Ｎ（ＣＨ_３）_２基を表していてもよい。また、Ｇは、−ＮＲＲ’基を表していてもよく、ここで、ＲおよびＲ’は、これらが結合している窒素原子とともに、Ｎ、ＯおよびＳから選択される別のヘテロ原子を環に含んでいてもよく、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基、ハロゲン原子およびヒドロキシル基から選択される少なくとも１個の置換基で場合により置換されていてもよい（Ｃ_４−Ｃ_１０）ヘテロシクロアルキル基を形成する。ヘテロシクロアルキル基は、特に、ピペラジノ、Ｎ−メチルピペラジノ、モルホリノ、ピペリジノおよびピロリジノから選択されてもよい。

ｋは、０から４０の範囲の整数を表す。ｋは、値０になってもよい（窒素原子に接続するＧが末端にあるＰＥＧ鎖はない。）。本発明の化合物の中で、窒素原子に接続するＧが末端にあり、ｋが１から４０の範囲、望ましくは１から１０、望ましくは１から５の範囲のＰＥＧ鎖を特記し得る。また、少なくとも１個のＰＥＧ鎖を含むもの、即ち、ｋが１から４０、好ましくは１から１０、望ましくは１から５の範囲であり、および／またはＬ_１＝−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−および／またはＬ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２−または−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−であるものを特記し得る。

例として与えられているものを含め、式（Ｉ）および（Ｉ’）の化合物は、塩基の形態、または医薬的に許容される酸との付加塩の形態で存在していてもよく、また、これらの塩基またはこれらの塩の水和物または溶媒和物の形態で存在していてもよい。

さらに具体的には、式（ＩＡ）または（ＩＢ）の化合物を特記し得る。

さらに、以下を区別する。

Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−およびＬ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−の化合物である第１のサブグループ；
Ｌ_１＝−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−およびＬ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−の化合物である第２のサブグループ；
Ｌ_１＝単結合およびＬ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−の化合物である第３のサブグループ；
Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−およびＬ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−の化合物である第４のサブグループ；
Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−およびＬ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２−の化合物である第５のサブグループ。

また、以下の化合物群も特記し得る。

Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
Ｌ_１＝−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
Ｌ_１＝−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
Ｌ_１＝単結合、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
Ｌ_１＝単結合、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
Ｌ_１＝単結合、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
Ｌ_１＝単結合、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
Ｌ_１＝−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
Ｌ_１＝−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
Ｌ_１＝−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
Ｌ_１＝−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２−、Ｑ＝単結合、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ。

上に定義した化合物群において、
ｉは、さらに具体的には、２から１０の範囲の整数、特に３の整数を表し、
ｊは、さらに具体的には、１から１０の範囲の整数、特に、２または３の整数を表し、
ｋは、さらに具体的には、０の整数を表すか、または１から５の範囲の整数を表す。

表Ｉは、具体的なリンカーＬと、これらに対応する化合物の例も記載する。この表のそれぞれの化合物は、Ｍ＝ＣＨ（ベンゼン）またはＭ＝Ｎ（ピリジン）の形態で存在していてもよい。Ｍ＝Ｎの化合物は、水溶性が高い。この表では、例は、形態（ＩＡ）で与えられているが、形態（ＩＢ）で存在し得る。Ｌ、Ｌ_１、Ｌ_２、ｋおよびＧは、表Ｉに記載されているもの、または例の中から選択されてもよい。

記載されている化合物は、結合剤に存在する反応性化学基（ＲＣＧ２）に対して反応性である反応性化学基（ＲＣＧ１）を含む。ＲＣＧ１とＲＣＧ２の反応によって、共有結合の生成による結合剤に対する式（Ｉ）の化合物の接続が生じる。従って、式（Ｉ）の化合物は、結合剤に対して複合体化することができる。

ＲＣＧ１は、以下のものを表す。

（ｉ）Ｚ_ａがＨまたは−ＳＲ_ａ基を表し、Ｒ_ａが、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、（Ｃ_３−Ｃ_７）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ_４−Ｃ_１０）ヘテロシクロアルキル基を表す、反応性基−ＳＺ_ａ；
（ｉｉ）Ｚ_ｂが、単結合、−Ｏ−または−ＮＨ−、さらに特定的には−Ｏ−を表し、Ｒ_ｂは、Ｈ、または（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、（Ｃ_３−Ｃ_７）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ_４−Ｃ_１０）ヘテロシクロアルキル基を表す、反応性基−Ｃ（＝Ｏ）−Ｚ_ｂＲ_ｂ。

さらに具体的には、−ＳＺ_ａは、−ＳＨまたは−ＳＳ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル（特に、−ＳＳＭｅ）、または−ＳＳ−ヘテロアリール、特に、

（Ｘ_１およびＸ_２は、以下に定義される。）を表していてもよい。さらに具体的には、−ＳＺ_ａは、−ＳＨまたは−ＳＳ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、特に−ＳＳＭｅを表していてもよい。

さらに具体的には、−Ｚ_ｂＲ_ｂは、−ＯＨ（酸官能基）、−Ｏ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、特に、−ＯＣＨ_３、−ＯＣＨ_２ＣＨ_３、−ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２（エステル官能基）を表していてもよく、または−Ｚ_ｂＲ_ｂは、

または

基を表していてもよく、ここで、ＩＧは、少なくとも１個の電子誘導基、例えば、−ＮＯ_２または−Ｈａｌ、特に−Ｆを表す。例えば、以下の基

のいずれかであってもよい。別の種類の−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ基は、以下

である。反応性基−ＳＨおよび

は、良好な反応性を示す。

さらに具体的には、−Ｚ_ｂＲ_ｂは、−ＯＨ（酸官能基）、−Ｏ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、特に、−ＯＣＨ_３、−ＯＣＨ_２ＣＨ_３を表していてもよく、または、−Ｚ_ｂＲ_ｂは、

を表していてもよい。

さらに具体的には、ＲＣＧ１は、例に記載されるいずれかから選択されてもよい。

ＲＣＧ２の例として、抗体表面に存在するリシン残基の側鎖に担持されるリシンのε−アミノ基、ヒンジ領域の糖基または鎖内ジスルフィド結合の還元による、システインのチオールを挙げてもよい（Ｇａｒｎｅｔｔ Ｍ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２００１，５３，１７１−２１６）。もっと最近では、他の手法、例えば、変異によるシステインの導入（Ｊｕｎｕｔｕｌａ Ｊ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２００８，２６，９２５−９３２；ＷＯ０９０２６２７４）または他の化学種を可能にする非天然アミノ酸の導入（ｄｅ Ｇｒａａｆ Ａ．Ｊ．ｅｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２００９，Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｄａｔｅ（Ｗｅｂ）：Ｆｅｂｒｕａｒｙ ３，２００９（Ｒｅｖｉｅｗ）；ＤＯＩ：１０．１０２１／ｂｃ８００２９４ａ；ＷＯ２００６／０６９２４６およびＣｈｉｎ Ｊ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．，ＪＡＣＳ ２００２，１２４，９０２６−９０２７（ＲｅＣｏｄｅ（登録商標）技術）による。）が考慮されてきた。抗体とともに使用されるこれらの接続様式は、これらの構造の関数として既知の標的となるあらゆる薬剤に適用可能である。

新しい反応性化学基ＲＣＧ２を導入するように、標的となる薬剤を化学修飾することも可能である。従って、修飾剤を用いて抗体をどのように修飾するかは、当業者にはよく知られている（特に、ＷＯ２００５／０７７０９０の１４ページを参照）。修飾によって、複合体化反応を改良し、さまざまなＲＣＧ１基を使用することが可能になる。

ジスルフィド基を導入するための修飾剤
修飾剤は、式

の活性化エステルＮＨＳであってもよく、式中、Ｒは、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、（Ｃ_３−Ｃ_７）シクロアルキル基、（Ｃ_４−Ｃ_１０）ヘテロシクロアルキル基を表し、例えば、ジチオピリジル反応性基ＲＣＧ２を導入するように、Ｎ−ピリジルジチオプロピオネート（ＳＰＤＰ）またはＮ−スクシンイミジルピリジルジチオブチラート（ＳＰＤＢ、即ち、４−（２−ピリジルジチオ）ブタン酸のＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル）を使用することが可能であり（Ｂｏｕｒｄｏｎ Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１９７８，１７３，７２３−７３７；ＵＳ５２０８０２０を参照）、次いで、ジスルフィド結合を含む複合体のために新しい−Ｓ−Ｓ−結合を生成するように、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーのリンカーに存在する−ＳＨ型の反応性化学基ＲＣＧ１と反応させることができる（実施例１を参照）。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド基は、アミド結合を生成するように、抗体に存在するアミノ基と優先的に反応する。修飾剤の別の例は、ＷＯ２００４／０１６８０１に式

を有するものが記載されており、例えば、Ｎ−スクシンイミジル ４−（５−ニトロ−２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＮＰＰ）、またはＷＯ２００９／１３４９７６に記載される式

を有するペグ化類似体、またはＷＯ２００９／１３４９７７に記載されている式

を有するスルホン酸類似体を使用することが可能であり、式中、
−Ｘ_３、Ｘ_４、Ｘ_５、Ｘ_６は、Ｈまたは（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基を表し、
−Ｘ_１およびＸ_２は、−Ｈ、−ＣＯＮＸ_８Ｘ_９、−ＮＯ_２を表し、Ｘ_８およびＸ_９は、Ｈまたは（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基を表し、
−Ｘ_７は、−ＳＯ_３ ⁻Ｍ^＋またはＨを表すか、または、四級アンモニウム基を表し、
−ａは０から４の範囲の整数を示し、ｂは、０から２０００の範囲の整数、好ましくは、１から２００の範囲の整数を示し；ａおよびｂは、それぞれ０から４、または０から２０００の間のあらゆる値であってもよい。

好ましくは、式

の化合物の中で、ａ＝１、Ｘ_３＝ＭｅおよびＸ_２＝ＮＯ_２およびＸ_１＝Ｘ_４＝Ｘ_５＝Ｘ_６＝Ｘ_７＝Ｈである。

マレイミド基を導入するための修飾剤
別の修飾剤は、

の活性化エステルＮＨＳであってもよく、式中、Ｒは、−（ＣＨ_２）_ｎ−基、−（ＣＨ_２）_ｎ−シクロヘキシル−基、−シクロヘキシル−（ＣＨ_２）_ｎ−基を表し、ｎは、１から１０の範囲の整数を表し、例えば、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）（ＥＰ０３０６９４３による。）、またはスルホ−ＳＭＣＣ（スルホスクシンイミジル ４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート）を使用することが可能である。あり得る他の例としては、

例えば、Ｎ−スクシンイミジル ３−マレイミドプロパノエート；

例えば、Ｎ−スクシンイミジル ６−（３−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート；

〔ｂは、０から２０００、好ましくは１から２００の範囲の整数である（ｂは、０から２０００の間のあらゆる値であってもよい。）。〕

例えば、Ｎ−スクシンイミジル ３−（２−｛２−［３−マレイミドプロピオニルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）プロパノエートまたはＳＭ（ＰＥＧ）_２；

例えば、マレイミドエチル Ｎ−スクシンイミジルサクシネート；

例えば、Ｎ−スクシンイミジル ４−（４−マレイミドフェニル）ブタノン、または

例えば、Ｎ−スクシンイミジル ３−マレイミドベンゾエートが挙げられる。

チオール基を導入するための修飾剤
ＷＯ９０／０６７７４に記載されている修飾剤の別の例は、式

を有し、式中、
−Ｈａｌは、ハロゲン原子を表し；
−Ｘ_１０は、ハロゲン原子または−ＣＯＯＸ_１４基、ニトロ、非置換またはハロゲン化（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル、非置換またはハロゲン化（Ｃ_１−Ｃ_８）アルコキシ、非置換またはハロゲン化（Ｃ_２−Ｃ_８）アルケニル、非置換またはハロゲン化（Ｃ_２−Ｃ_８）アルキニル、非置換（Ｃ_３−Ｃ_８）シクロアルキル、非置換アリール、またはアミノ、ハロゲン原子、非置換またはハロゲン化（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル基、非置換またはハロゲン化（Ｃ_１−Ｃ_８）アルコキシから選択される１から３個の置換基で置換されたアリールを表し；
−Ｘ_１１、Ｘ_１２、Ｘ_１３基は、それぞれ独立して、水素原子を表すか、または、Ｘ_１０を表していてもよく；
または、Ｘ_１０とＸ_１１とで、非置換か、または１から５個の（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基で置換された（Ｃ_２−Ｃ_５）アルキレン環を形成するか；
または、Ｘ_１０およびＸ_１１と、Ｘ_１２とを合わせて、非置換か、または１から５個の（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基で置換された（Ｃ_１−Ｃ_５）アルキレン環を形成し、
Ｘ_１４は、−Ｈまたは（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル基であるか、
またはＸ_１０＝Ｘ_１１＝Ｘ_１２＝Ｘ_１３＝Ｈである。

好ましくは、Ｈａｌは、塩素原子または臭素原子を表す。可能なＸ_１０−Ｘ_１３は、以下の表に掲げる。

好ましいイミノチオランの例は、以下

である。

ハロアセトアミド基を導入するための修飾剤
修飾剤の別の例は、スクシンイミジル−４−（Ｎ−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）

または類似化合物（スクシンイミジル−Ｎ−ヨードアセテート（ＳＩＡ）

スクシンイミジル−Ｎ−ブロモアセテート（ＳＢＡ）、またはスクシンイミジル−３−（Ｎ−ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）またはＷＯ２００９／１３４９７６に記載の同様のペグ化化合物

を含む。）であり、ｂは、すでに記載したとおりである。図１および図２は、ＳＰＤＰまたは上の好ましいイミノチオールを用いた結合剤のアミノ基の修飾を示す。

従って、ＲＣＧ１が−ＳＨを表す場合には、結合剤にジスルフィドＲＣＧ２基（−ＳＳＲ）、特にピリジルジスルフィド型

の基を導入することが可能である。同様に、ＲＣＧ１がジスルフィドを表す場合（即ち、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａであり、Ｚ_ａがＨではなく、例えば、Ｚ_ａ＝

である。）場合には、例えば、イミノチオランを用い、結合剤にチオール（−ＳＨ）ＲＣＧ２基を導入することが可能である。また、対応する芳香族ジスルフィド

を用いる反応によって、これらのチオール（−ＳＨ）ＲＣＧ２基をジスルフィド（−ＳＳＲ）ＲＣＧ２基、特にピリジルジスルフィド型

の基に修飾することも可能である。両者の場合において、ＲＣＧ１とＲＣＧ２の反応によって生成する共有結合は、開裂可能なジスルフィド結合である。

また、ＲＣＧ１が−ＳＨを表す場合には、マレイミド（

）またはハロアセトアミド型（例えば、ブロモ−またはヨードアセトアミド

）のＲＣＧ２基を結合剤表面に導入することも可能である。この場合には、ＲＣＧ１とＲＣＧ２の反応によって生成する共有結合は、開裂不可能なスルフィド結合である。

従って、
−ＳＺ_ａ型の反応性化学基ＲＣＧ１を含む式（Ｉ）の誘導体存在下、結合剤は、
ＲＣＧ１が−ＳＨを表す場合には、ジスルフィド化学基；
ＲＣＧ１が−ＳＺ_ａを表し、Ｚ_ａがＨではない場合には、チオール化学基；
ＲＣＧ１が−ＳＨを表す場合には、マレイミド化学基またはハロアセトアミド化学基
を含み、
−Ｃ（＝Ｏ）−Ｚ_ｂＲ_ｂ型の反応性化学基ＲＣＧ１を含む式（Ｉ）の誘導体存在下、式（Ｉ）の誘導体が、結合剤のアミノ官能基、特に、抗体のリシン（Ｌｙｓ）残基の側鎖に担持されるε−アミノ基と反応する。

さらに具体的には、
反応性化学基ＲＣＧ１が−ＳＨ型である場合、および結合剤にアミン官能基、特に、抗体のリシン残基の側鎖に担持されるε−アミノ基が含まれる場合、後者は、以下の式

の化合物から選択される修飾剤によって修飾され、式中、Ｒは、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、（Ｃ_３−Ｃ_７）シクロアルキル基、（Ｃ_４−Ｃ_１０）ヘテロシクロアルキル基；

以下の式のペグ化類似体

または以下の式のスルホン酸類似体

を表し、ここで、Ｘ_３、Ｘ_４、Ｘ_５、Ｘ_６は、Ｈまたは（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基を表し、Ｘ_１およびＸ_２は、−Ｈ、−ＣＯＮＸ_８Ｘ_９、−ＮＯ_２を表し、Ｘ_８およびＸ_９は、Ｈまたは（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基を表し、Ｘ_７は、−ＳＯ_３ ⁻Ｍ^＋またはＨを表すか、または、四級アンモニウム基を表し、ａは０から４の範囲の整数を示し、ｂは、０から２０００の範囲の整数を示すか、または、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート；スルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート；

〔Ｒは、−（ＣＨ_２）_ｎ−基、−（ＣＨ_２）_ｎ−シクロヘキシル−基、−シクロへキシル−（ＣＨ_２）_ｎ−基を表し、ｎは１から１０の範囲の整数である。〕

〔ｂは０から２０００の整数である。〕

スクシンイミジル−Ｎ−ブロモアセテート；スクシンイミジル−３−（Ｎ−ブロモアセトアミド）プロピオネート；

〔ｂは０から２０００の整数である。〕
から選択される。

反応性化学基ＲＣＧ１が−ＳＺ_ａ型であり、Ｚ_ａがＨではない場合、および結合剤にアミン官能基、特に、抗体のリシン残基の側鎖に担持されるε−アミノ基、が含まれる場合、後者は、すでに記載されている以下の式

の修飾剤によって修飾される。

反応性化学基ＲＣＧ１が−ＳＨ型である場合、および結合剤にチオール官能基、特に、アミノ官能基を担持する結合剤の変異によってまたは化学修飾することによってシステインを導入した後に、担持する場合、結合剤は、チオール官能基が、ジスルフィド官能基に変換される。例えば、以下の式の化合物

〔式中、Ｘ_１およびＸ_２は、−Ｈ、−ＣＯＮＸ_８Ｘ_９または−ＮＯ_２を表し、Ｘ_８およびＸ_９は、Ｈまたは（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基を表す。〕
から選択される修飾剤を使用することが可能である。

以下の表ＩＩは、すでに述べた方法に従った、結合剤のアミノ基の修飾を示す。単純化のために、以下の省略語を使用する。

従って、本発明の化合物を、式

のダイマーがＭのパラ位において共有結合した結合剤の調製に使用し得る。

さらに具体的には、結合剤は抗体である。さらに具体的には、ダイマーは、式

を有する。

式（Ｉ）の化合物を調製する方法
式（Ｉ）の化合物を、スキーム１に従って調製し得る。

化合物Ｐ_１，Ｐ’_１およびＰ_２を一緒に反応させてＰ_３を得る。ＬＧおよびＬＧ’は、脱離基を示す。「脱離基」との用語は、Ｐ_２とＰ_１またはＰ’_１との不均一反応において、ＡＬＫとＬＧまたはＬＧ’とを接続する共有結合の電子の非共有電子対を取り去ったまま残る原子または原子群を示す。脱離基は、さらに具体的には、ハロゲン原子（特に、塩素または臭素）、メシレート基、トシレート基またはノシレート基、または−ＯＰＰｈ_３ ^＋から選択される。中間体化合物Ｐ_２も、本発明の一部分を形成する。

ＲＣＧ１を含む式（Ｉ）の化合物の調製において、Ｘ’は、このＲＣＧ１基を表していてもよく、この場合、Ｐ_３は、式（Ｉ）の化合物を表す。また、Ｘ’は、−ＳＺ_ａ型のＲＣＧ１基の前駆体または−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂであってもよく、この場合には、１つ以上の化学反応を用いることによって、Ｘ’をＲＣＧ１に変換することが必要である。ある改変例によれば、Ｘ’→ＲＣＧ１の変換は、Ｐ_２上で行われてもよい。

従って、Ｚ_ａ＝Ｈの化合物Ｐ_３（または改変例Ｐ_２の化合物）の場合、対応するリンカーの前駆体を用い、Ｚ_ａ＝−Ｓ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキルであるＸ’＝−ＳＺ_ａ基を導入し、次いで、ジスルフィド官能基−ＳＳ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキルをチオール官能基−ＳＨに還元することが好ましい。このために、例えば、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンを使用し得る。この観点で、Ｂｕｒｎｓ Ｊ．Ａ．ｅｔ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９１，５６（８），２６４８−２６５０を参照。−ＳＳ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル→−ＳＨの変換は、特に、表Ｉの化合物１から１９に適用し得る。

ＲＣＧ１が−ＳＨ基を表すＸ’→ＲＣＧ１の変換によってＰ_３から式（Ｉ）の化合物を調製する場合、Ｘ’が、イミン官能基に対するチオール官能基の付加物に対応する、Ｚ_ａ＝

である−ＳＺ_ａ基を表す化合物Ｐ_３も生成し得る。

同様に、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂである基を含む式（Ｉ）の化合物を製造する場合、１つ以上の化学反応を用いることによって、Ｘ’＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂである基をＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂである基に変換することが可能である。特に、−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂが

である場合、化合物Ｐ_３（または改変例Ｐ_２の化合物）にＸ’基＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキルまたは−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリルを導入し、次いで、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ基に変換し、最後に、Ｎ−Ｎ’−ジスクシンイミジルカーボネートまたはＮＨＳと反応させることが可能である。−ＣＯＯアルキル／アリルから−ＣＯＯＨへの変換は、アミン「捕捉剤」、例えば、モルホリン存在下、塩基（例えば、ＬｉＯＨ）またはパラジウム触媒（例えば、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム）を用いる処理によって行われてもよい。Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジルとの反応は、塩基（例えば、ＤＩＰＥＡ）存在下で行われ、ＮＨＳとの反応は、カップリング剤（例えば、ＤＣＣ）存在下で行われる。同様に、−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ＝

である場合には、−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ＝−ＣＯＯＨ基を導入し、次いで、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールと反応させることが可能である（ＪＡＣＳ １９５８，８０，４４２３；ＪＡＣＳ １９６０，８２，４５９６）。このＸ’＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ→ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂの変換は、特に、表Ｉの実施例２０から３６の化合物に適用し得る。

化合物Ｐ_１およびＰ’_１は、特許出願ＷＯ００／１２５０８、ＷＯ００／１２５０７、ＷＯ２００５／０４０１７０、ＷＯ２００５／０８５２６０、ＷＯ０７０８５９３０またはＷＯ２００９／０１６５１６に記載されているか、または全合成によって利用可能である（Ｍｏｒｉ Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９８６，４２，３７９３−３８０６）。Ｐ_１および／またはＰ’_１が、式

のトマイマイシンを表す場合、後者は、ＦＲ１５１６７４３の教示に従ってＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｒｏｃｅｕｓ株の助けを借りて、または全合成によって調製されてもよい（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ １９８３，ＸＸＸＶＩ（３），２７６−２８２ Ｚ．Ｔｏｚｕｋａ「Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｏｍａｙｍｙｃｉｎ．Ｔｏｔａｌ ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ｅ− ａｎｄ Ｚ−ｔｏｍａｙｍｙｃｉｎｓ」を参照）。市販の化合物Ｐ_１／Ｐ’_１も存在する。

Ｗ／Ｗ’基を導入するために、イミン官能基（

＝二重結合）を種々の化合物ＨＷ／ＨＷ’（例えば、Ｈ_２Ｏ、アルコールＲＯＨ）に付加することが可能である。

Ｑ＝単結合の場合

Ｐ _２ の調製

ｉ．極性溶媒（例えば、ＤＭＦまたはＴＨＦ）中、塩基（例えば、Ｋ_２ＣＯ_３）存在下でのＰ_４の二級アミン官能基−ＮＨ−と、式ＬＧ”−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｋ−ＣＨ_２ＣＨ_２−Ｇ（ＬＧ”＝脱離基）の試薬との求核反応。

式ＨＯ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｋ−ＣＨ_２ＣＨ_２−Ｇの化合物から、当業者に既知の化学反応を用いて−ＯＨ基を脱離基ＬＧ”と交換することによって、ＬＧ”−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｋ−ＣＨ_２ＣＨ_２−Ｇ試薬が得られる。例えば、ＬＧ”がメシレート基を表す場合には、三級アミン（例えば、ＴＥＡ）のような塩基存在下、メタンスルホニルクロリドが使用される。ＬＧ”がＩを表す場合には、例えば、Ｄ．Ｍａｒｑｕｉｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９５，２４，７９８４−９６に従って、ヨウ化ナトリウムを用い、メシレートをＩと置換する。

式ＨＯ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｋ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３のＰＥＧ−アルコールは市販されている（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ ｃｏｍｐａｎｙ ＱｕａｎｔａＢｉｏＤｅｓｉｇｎ，Ｌｔｄ．のカタログを参照）。ＲがＭｅではないＨＯ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｋ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＲである他のＰＥＧ−アルコールは、市販されており、または、ＨＯ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｋ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨから、当業者に既知の化学反応を用いて入手可能である。同様に、Ｇ＝ＮＲＲ’であり、ｋ≧１である特定の化合物は市販されており、例えば、

である。

ｉｉ．ＬＧおよびＬＧ’の導入。メシレート基の場合には、三級アミン（例えば、ＴＥＡ）のような塩基存在下、ＭＳＣが使用される。

Ｑ＝−Ｃ（＝Ｏ）の場合

Ｐ _２ の調製

ｉ．Ｐ_４と、式Ｔ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｋ−ＣＨ_２ＣＨ_２−Ｇのカルボン酸誘導体とのアミド化反応。

カルボン酸誘導体は、ハロゲン化アシル（Ｔ＝−Ｈａｌ）であってもよい。ある改変例によれば、活性化エステル（例えば、Ｔ＝−ＯＮＨＳ）が使用されるか、または、カップリング剤存在下、カルボン酸（Ｔ＝−ＯＨ）が使用される。式ＨＯＣ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｋ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＲのＰＥＧ−酸を、Ｊ．Ｈｕｓｋｅｎｓ，Ｊ．Ａ．Ｐｅｔｅｒｓ，Ｈ．ｖａｎ Ｂｅｋｋｕｍ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９３，１５，３１４９−６４に従って、式ＨＯ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｋ−１−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＲの対応するＰＥＧ−アルコール（ｋ＝１から１１のものが市販されている。）から、アクリル酸ナトリウムに加えることによって調製し得る。ＧがＮＲＲ’基であり、ｋ≧１である場合も、同様に、式Ｈ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｋ−１−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲＲ’の対応する化合物から出発する。同様に、ＨＯＣ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２ＣＨ_２）−ＮＲＲ’（ｋ＝０）の化合物は市販されている。

ｉｉ．ＬＧおよびＬＧ’の導入。メシレート基の場合には、三級アミン（例えば、ＴＥＡ）のような塩基存在下、ＭＳＣが使用される。

Ｐ _４ の調製
Ｘ’＝−Ｃ（＝Ｏ）−Ｚ _ｂ Ｒ _ｂ の場合

ｉ．保護基ＰＧ”の導入。ノシレート基の場合には、三級アミン（例えば、ＴＥＡ）またはピリジンのような塩基存在下、２−ニトロベンゼンスルホニルクロリドが使用される。

ｉｉ．ＰＧ基およびＰＧ’基の脱保護。例えば、ＰＧ基およびＰＧ’基がＴＢＤＭＳの場合、塩酸またはＴＦＡ存在下。

ある改変例によれば、ＡＬＫ＝ＡＬＫ’＝−ＣＨ_２−の場合、Ｐ_５は、

を表していてもよい。次いで、脱保護工程は、例えば、水素化ホウ素ナトリウムを用い、エステル官能基を−ＣＨ_２ＯＨに還元する工程と置き換えられる。このために、ＷＯ２００７／０８５９３０の６２−６３ページに与えられている還元条件を適用し得る。後で記載するとおり、ジエステルを用い、次いで、還元を適用することからなるこの改変例を他のＰ_５まで一般化し得る。さらに、エステル官能基の還元は、Ｐ_４上で行われてもよいが、場合により、ある改変例によれば、Ｐ_５上でも行われてもよい。

ｉｉｉ．極性溶媒（例えば、ＤＭＦまたはＴＨＦ）中、塩基（例えば、Ｋ_２ＣＯ_３）存在下での保護されたアミン官能基−ＮＨ（ＰＧ”）と、式ＬＧ−Ｌ_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｚ_ｂＲ_ｂの試薬との求核反応。

Ｌ_２＝（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫの場合、式Ｂｒ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＭｅのブロモ−アルキルエステルは市販されている。Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２−の場合、式ＨＯ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂの対応するＰＥＧ−アルコールから出発し、ＬＧを導入し得る。このような化合物は、市販されており、または、Ｊ．Ｈｕｓｋｅｎｓ，Ｊ．Ａ．Ｐｅｔｅｒｓ，Ｈ．ｖａｎ Ｂｅｋｋｕｍ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９３，１５，３１４９−６４に従って、式ＨＯ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−Ｈの対応するＰＥＧ−ジオール（ｊ＝１から１１まで市販されている。）から、アクリル酸ナトリウムに加えることによって得てもよい。

ｉｖ．ＰＧ”基の脱保護。例えば、ＰＧ”がノシレート基の場合、チオフェノールおよび塩基（例えば、炭酸セシウム）存在下。

Ｘ’＝−ＳＺ _ａ の場合
Ｌ _２ ＝（Ｃ _１ −Ｃ _６ ）ＡＬＫの場合

ｉ．ＰＧ基およびＰＧ’基がＴＢＤＭＳである場合、好ましくは、酸性媒体中、例えば、塩酸またはＴＦＡ存在下での保護基ＰＧおよびＰＧ’の脱保護。

ある改変例によれば、ＡＬＫ＝ＡＬＫ’＝−ＣＨ_２−の場合、Ｐ_５は、

を表していてもよい。次いで、アルコール官能基の脱保護工程は、例えば、水素化ホウ素ナトリウムを用い、エステル官能基の−ＣＨ_２ＯＨ官能基への還元反応、次いで、アミン官能基の脱保護工程と置き換えられる。このために、ＷＯ２００７／０８５９３０の６２−６３ページに与えられている還元条件を適用し得る。

ｉｉ．式ＨＣ（＝Ｏ）−ＡＬＫ−ＳＺａのアルデヒドを用いた還元的アミノ化
ｉｉｉ．Ａ．Ｆ．Ａｂｄｅｌ−Ｍａｇｉｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９６，６１，３８４９−６２に従って、還元剤（例えば、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム）を用い、好ましくは酢酸中、中間体アミンを系中で還元する。

Ｌ _２ ＝−（ＣＨ _２ ＣＨ _２ Ｏ） _ｊ −ＣＨ _２ ＣＨ _２ ＮＲ”−ＡＬＫ−の場合

ｉ．保護基ＰＧ”の導入。ノシレート基の場合には、三級アミン（例えば、ＴＥＡ）またはピリジンのような塩基存在下、２−ニトロベンゼンスルホニルクロリドが使用される。

ｉｉ．ＰＧ基およびＰＧ’基の脱保護。例えば、ＰＧ基およびＰＧ’基がＴＢＤＭＳの場合、塩酸またはＴＦＡ存在下。

ある改変例によれば、ＡＬＫ＝ＡＬＫ’＝−ＣＨ_２−の場合、Ｐ_５は、

を表していてもよい。次いで、脱保護工程は、例えば、水素化ホウ素ナトリウムを用い、エステル官能基を−ＣＨ_２ＯＨ官能基に還元する工程と置き換えられる。このために、ＷＯ２００７／０８５９３０の６２−６３ページに与えられている還元条件を適用し得る。

ｉｉｉ．極性溶媒（例えば、ＤＭＦまたはＴＨＦ）中、塩基（例えば、Ｋ_２ＣＯ_３）存在下での保護されたアミン官能基−ＮＨ（ＰＧ”）と、式ＬＧ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ_３の試薬との求核反応。ＷＯ０７／０８５９３０に従って、式ＨＯ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ＋１−Ｈの対応するＰＥＧ−ジオール（ｊ＝０から１０まで市販されている。）から出発して、このような化合物を得てもよい。

ｉｖ．例えば、Ｓｔａｕｄｉｎｇｅｒ反応に従って、トリフェニルホスフィンおよび水存在下、アジド基の還元。

ｖ．式ＨＣ（＝Ｏ）−ＡＬＫ−ＳＺａのアルデヒドを用いた還元的アミノ化；
ｖｉ．Ａ．Ｆ．Ａｂｄｅｌ−Ｍａｇｉｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９６，６１，３８４９−６２に従って、還元剤（例えば、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム）を用い、好ましくは酢酸中、中間体アミンを系中で還元する。

ｖｉｉ．二級アミン官能基のアルキル化
ｖｉｉｉ．ＰＧ”基の脱保護。例えば、ＰＧ”がノシレート基の場合、例えば、チオフェノールおよび塩基（例えば、炭酸セシウム）存在下。

Ｐ _５ の調製
Ｌ _１ ＝−Ｄ−（Ｃ _１ −Ｃ _６ ）ＡＬＫ−、Ｄ＝ＯまたはＮＨの場合

ｉ．極性溶媒（例えば、ＤＭＦまたはＴＨＦ）中、塩基（例えば、Ｋ_２ＣＯ_３）存在下での官能基−ＤＨと、式Ｂｒ（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−ＮＨｂｏｃのｂｏｃ保護されたブロモ−アミンとの求核反応（例えば、ＷＯ０７０８５９３０の６３ページの条件を参照）。

ｉｉ．好ましくは、酸性媒体中、例えば、塩酸またはＴＦＡ存在下でのアミンの選択的脱保護。選択的脱保護を行うことができない場合、例えば、ＰＧ基およびＰＧ’基がＴＢＤＭＳである場合には、アルコールの選択的な再保護が必要である。

ある改変例によれば、ＡＬＫ＝ＡＬＫ’＝−ＣＨ_２−の場合には、式

の化合物Ｐ_５を得るように、式

のジエステルを用いたブロモ−アミンの求核置換を行うことが可能であり、これを得られたままの形態でＰ_４の調製に使用する。

Ｌ _１ ＝−Ｎ（（Ｃ _１ −Ｃ _４ ）アルキル）−（Ｃ _１ −Ｃ _６ ）ＡＬＫ−の場合

ｉ．極性溶媒（例えば、ＤＭＦまたはＴＨＦ）中、塩基（例えば、Ｋ_２ＣＯ_３）存在下での官能基−ＮＨ−と、式Ｒ＊−Ｈａｌのハロゲン化アルキル（Ｒ＊＝（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル）との求核反応。

ある改変例によれば、ＡＬＫ＝ＡＬＫ’＝−ＣＨ_２−の場合、式

の化合物Ｐ_５を得るように、式

のジエステルを用いたハロゲン化アルキルの求核置換を行うことが可能であり、これを得られたままの形態でＰ_４の調製に使用する。

Ｌ _１ ＝−（ＯＣＨ _２ ＣＨ _２ ） _ｉ −の場合

ｉ．極性溶媒（例えば、ＤＭＦまたはＴＨＦ）中、塩基（例えば、Ｋ_２ＣＯ_３）存在下での、−ＯＨ官能基の１つ（その他の２つは、保護基を示すＰＧで保護されている。）と、離核性基（ＬＧ）（例えば、Ｈａｌまたはメシレート）を含む式ＬＧ−（ＣＨ_２ＣＨ_２）−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−１−Ｎ_３のアジド−ＰＥＧ試薬との求核反応（例えば、ＷＯ０７０８５９３０の６３ページの条件を参照）。

ｉｉ．例えば、トリフェニルホスフィンを用い、極性溶媒（例えば、ＴＨＦ）中、アジド基の還元。

ある改変例によれば、ＡＬＫ＝ＡＬＫ’＝−ＣＨ_２−の場合、式

の化合物Ｐ_５を得るように、式

のヒドロキシ−ジエステルを用いたアジド−ＰＥＧ試薬の求核置換を行うことが可能であり、これを得られたままの形態でＰ_４の調製に使用する。

Ｌ _１ ＝単結合の場合

ｉ．アルコール基の保護
式

のハロ−ジオールから、Ｐ_５を得てもよい。ハロ−ジオールおよび対応する保護されたジオールの例は、ＷＯ２００９／０１６５１６の４８ページのスキーム１に記載されている（スキーム１の化合物２および３）。保護されたジオールの２つの例は、ＣＡＳ Ｎｏｓ．１８１２２５−４０−１および１８１２２５−４１−２のジオールである。対応する二酸またはジエステル化合物、例えば、ＣＡＳ Ｎｏ．１９３０１０−４０−１の還元によって、ハロ−ジオールを得てもよい。また、ピリジン（Ｍ＝Ｎ）の場合には、Ｌｉｅｂｉｇｓ Ａｎｎａｌｅｎ ｄｅｒ Ｃｈｅｍｉｅ １９９１，１０，９８７−９８８またはＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ２００５，６１（７），１７５５−１７６３（スキーム１の化合物３）を参照。

当業者は、特定のリンカーＬ_１およびＬ_２について与えられている以下に記載する実施例の操作条件から着想を得ると思われ、これらのリンカーを他のリンカーＬ_１およびＬ_２に応用することができる。

複合体を調製する方法
複合体は、
（ｉ）修飾剤を用いて場合により修飾した、結合剤の水溶液（場合により緩衝化した水溶液）と、式（Ｉ）の化合物の溶液とを接触させ、放置して反応させ、
（ｉｉ）次いで、場合により、工程（ｉ）で生成した複合体を式（Ｉ）の化合物および／または未反応の結合剤および／または生成し得る任意の凝集物から分離することからなる、方法によって得られる。

式（Ｉ）の化合物の化学基ＲＣＧ１は、結合剤に存在する化学基ＲＣＧ２に対して、特に抗体に存在するアミノ基に対して反応性であり、この化学基ＲＣＧ２が、必要に応じて、修飾剤によって共有結合の生成を介して結合剤に式（Ｉ）の化合物が接続するように、導入される。

ある改変例によれば、工程（ｉｉ）において、工程（ｉ）で作られた複合体を、未反応の結合剤および溶液中に存在し得る任意の凝集物から分離する。別の改変例によれば、工程（ｉｉ）において、工程（ｉ）から得た複合体を、式（Ｉ）の未反応の化合物および生成し得る凝集物、および溶液中に残る任意の未反応結合剤とからのみ分離する。

結合剤の水溶液は、少なくとも１種類のバッファー（例えば、リン酸カリウムまたはＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳバッファー））で緩衝化されていてもよい。バッファーは、結合剤の性質によって変わる。式（Ｉ）の化合物を極性有機溶媒（例えば、ＤＭＳＯまたはＤＭＡ）に溶解する。

反応は、一般的に、２０℃から４０℃の温度で行われる。反応時間は、１から２４時間の範囲であってもよい。結合剤と式（Ｉ）の化合物との反応は、反応の進行を決定するように、屈折率検出器および／または紫外線検出器を備えるＳＥＣによってモニタリングされてもよい。架橋度が十分ではない場合、反応物を長い時間放置してもよく、および／または式（Ｉ）の化合物を加えてもよい。複合体化に使用可能な特定の条件に関するさらなる詳細について、実施例の章に与えられている一般的な方法を参照し得る。

当業者は、工程（ｉｉ）の分離のために、種々のクロマトグラフィー技術を自由に使用し、例えば、立体排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって、吸着クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、ＩＥＣ）によって、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）によって、アフィニティクロマトグラフィーによって、セラミックヒドロキシアパタイトのような混合支持体のクロマトグラフィーによって、またはＨＰＬＣによって、複合体を精製し得る。透析または血液透析濾過による精製を用いてもよい。

「凝集物」との用語は、２つ以上の結合剤の間で生成し得る会合を意味し、結合剤は、複合体化によって修飾される可能性がある。凝集物は、溶液中の高濃度の結合剤、溶液のｐＨ、高い剪断力、架橋ダイマーの数およびこの疎水性、温度のような多くのパラメータの影響を受けて生成する可能性があり（Ｊ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｓｃｉ．２００８，３１８，３１１−３１６の緒言に引用されている参考文献を参照）、これらのパラメータの一部の影響は、時折、正確に説明されていない。タンパク質または抗体の場合、ＡＡＰＳ Ｊｏｕｒｎａｌ，「Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ」２００６，８（３），Ｅ５７２−Ｅ５７９を参照し得る。凝集物の含有量は、ＳＥＣのような既知の技術によって決定されてもよい（この観点で、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９３，２１２（２），４６９−４８０を参照）。工程（ｉ）または（ｉｉ）の後、複合体溶液に対し、超濾過および／または血液透析濾過の工程（ｉｉｉ）を行ってもよい。これらの工程の後、このようにして水溶液中の複合体を得る。

抗体
抗体（この観点で、Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．「Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ」，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照）は、特許出願ＷＯ０４０４３３４４、ＷＯ０８０１０１０１、ＷＯ０８０４７２４２、ＷＯ０５００９３６９号（抗ＣＡ６）に特に記載されているものから選択されてもよい。抗体は、特に、モノクローナル、ポリクローナル、または多重特異的であってもよい。また、抗体フラグメントであってもよい。また、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体であってもよい。

複合体
複合体は、一般的に、結合剤に接続した約１から１０のピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーを含む（これは、架橋度または「薬物対抗体比」（つまり「ＤＡＲ」）である。）。この数は、結合剤およびダイマーの性質の関数として変動し、また、複合体化に用いられる操作条件（例えば、結合剤に対するダイマーの当量数、反応時間、溶媒および共溶媒の性質）の関数としても変動する。結合剤とダイマーを接触させると、異なるＤＡＲによって互いに個々に識別される幾つかの複合体と、おそらく未反応の結合剤（不完全な反応の場合）と、おそらく凝集物とを含む混合物が得られる。ＤＡＲは、例えば、ＵＶ分光法によって最終的な溶液で決定されるため、平均ＤＡＲに対応する。

結合剤が抗体である場合、ＵＶ分光法が、ＤＡＲを決定するために用いられる方法であってもよい。この方法は、Ａｎｔｏｎｙ Ｓ．Ｄｉｍｉｔｒｏｖ（ｅｄ），ＬＬＣ，２００９，「Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」，ｖｏｌ．５２５，４４５，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅに提示されている方法から着想を得ている。この方法は、分離工程（ｉｉ）の後の複合体溶液の吸光度をＷＬ１およびＷＬ２と呼ばれる２種類の波長で測定することからなる。複合体化する前のピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーの覆われていない抗体の以下に示すモル吸光係数を使用する。

複合体溶液のＷＬ１およびＷＬ２での吸光度（Ａ_ＷＬ１）および（Ａ_ＷＬ２）は、ＳＥＣスペクトルのいずれかの対応するピークを測定する（「ＤＡＲ（ＳＥＣ）」を計算することができる。）か、または標準的なＵＶ分光計を用いることによって測定する（「ＤＡＲ（ＵＶ）」を計算することができる。）。吸光度は、以下の形式で表されてもよい。

Ａ_ＷＬ１＝（Ｃ_Ｄ×ｅ_{Ｄ ＷＬ１}）＋（Ｃ_Ａ×ｅ_{Ａ ＷＬ１}）
Ａ_ＷＬ２＝（Ｃ_Ｄ×ｅ_{Ｄ ＷＬ２}）＋（Ｃ_Ａ×ｅ_{Ａ ＷＬ２}）
この式について、
Ｃ_ＤおよびＣ_Ａは、それぞれ、溶液中のピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーに関連する複合体部分の濃度および抗体に関連する複合体部分の濃度を示す。

ｅ_{Ｄ ＷＬ１}およびｅ_{Ｄ ＷＬ２}は、それぞれ、複合体化前のピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーの波長ＷＬ１およびＷＬ２でのモル吸光係数を示す。

ｅ_{Ａ ＷＬ１}およびｅ_{Ａ ＷＬ２}は、それぞれ、覆われていない抗体の２種類の波長ＷＬ１およびＷＬ２でのモル吸光係数を示す。

「覆われていない抗体」との用語は、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーに接続していない抗体（即ち、複合体化工程の前の抗体）を意味する。

これらの２つの式の解は、以下のように導かれる。

ｃ_Ｄ＝［（ｅ_{Ａ ＷＬ１}×Ａ_ＷＬ２）−（ｅ_{Ａ ＷＬ２}×Ａ_ＷＬ１）］／［（ｅ_{Ｄ ＷＬ２}×ｅ_{Ａ ＷＬ１}）−（ｅ_{Ａ ＷＬ２}×ｅ_{Ｄ ＷＬ１}）］
ｃ_Ａ＝［Ａ_ＷＬ１−（ｃ_Ｄ×ｅ_{Ｄ ＷＬ１}）］／ｅ_{Ａ ＷＬ１}
ここで、平均ＤＡＲは、ｃ_Ｄ／ｃ_Ａに対応している。ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーの場合、考慮される２つの波長は、ＷＬ１＝２８０ｎｍおよびＷＬ２＝３２０ｎｍである。平均ＤＡＲは、好ましくは、１から１０、好ましくは１．５から７である。

複合体を抗癌剤として使用し得る。結合剤が存在しているため、複合体は、健康な細胞よりも腫瘍細胞に対して非常に選択的になる。これによって、抗癌活性を有する式（Ｉ）の化合物を、これらの腫瘍細胞に近い環境へと向かわせるか、または細胞の中に直接向かわせることができる（この観点で、癌処理におけるモノクローナル抗体複合体の使用を記載する以下の刊行物を参照：「Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ」Ｃａｒｔｅｒ Ｐ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．２００８，１４，１５４−１６９；「Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ：ｃｏｎｆｅｒｒｉｎｇ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｔｏ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｄｒｕｇｓ」Ｃｈａｒｉ Ｒ．，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．２００８，４１，９８−１０７）。固形癌または液体癌を治療することが可能である。

複合体を緩衝化した水溶液の形態で、一般的に１から１０ｍｇ／ｍｌの濃度で配合する。この溶液をそのまま灌流形態で注入してもよく、または再び希釈して灌流溶液を作成し得る。

方法Ａ：高速液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＭＳＣ）
陽および／または陰エレクトロスプレーイオン化モード（ＥＳ＋／−）で、Ｗａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ−ＳＱＤ機でスペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件：カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ ＢＥＨ Ｃ１８−１．７μｍ−２．１×５０ｍｍ；溶媒：Ａ：Ｈ_２Ｏ（０．１％ギ酸）Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ（０．１％ギ酸）；カラム温度：５０℃；流速：１ｍｌ／分；勾配（２分）：０．８分でＢが５％から５０％；１．２分：Ｂ １００％；１．８５分：Ｂ １００％；１．９５：Ｂ ５％。

方法Ｂ：高速液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＭＳＣ）
陽および／または陰エレクトロスプレーモード（ＥＳ＋／−）で、Ｕ．Ｖ．ＤＡＤ ２００＜ＷＬ＜４００ｎｍ検出器を用い、Ｗａｔｅｒｓ ＺＱ機でスペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８ １００Ａ ３×５０ｍｍ、粒子直径２．６μｍ；溶媒：Ａ：Ｈ_２Ｏ（０．１％ギ酸）Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ；カラム温度：５０℃；流速：１ｍｌ／分；勾配（６分）：６％ Ｂで０．８０分間；３．９分でＢが６％から１００％；４．８０分：Ｂ １００％；５分：Ｂ ６％；６分：Ｂ ６％。

方法Ｃ：高速液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＭＳＣ）
陽および／または陰エレクトロスプレーモード（ＥＳ＋／−）で、Ｕ．Ｖ．ＤＡＤ ２００＜ＷＬ＜４００ｎｍ検出器を用い、Ｗａｔｅｒｓ ＺＱ機でスペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８ ３×１００ｍｍカラム、粒子直径２．６μｍ；溶媒：Ａ：Ｈ_２Ｏ（０．１％ギ酸）Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ；カラム温度：５０℃；流速：０．８ｍｌ／分；勾配（８．２分）：４％ Ｂで０．１５分間；６．８５分でＢ ６％から１００％；７．１分：Ｂ １００％；７．４分：Ｂ ４％；８．２分：Ｂ ４％。

方法Ｄ：複合体の脱グリコシル化および質量分析法（ＨＲＭＳ）
脱グリコシル化は、グリコシダーゼを用いた酵素による消化技術である。５００μｌの複合体＋１００μｌのトリスＨＣｌ ５０ｍＭバッファー＋１０μｌのグリコシダーゼ−Ｆ酵素（凍結乾燥した酵素１００単位／水１００μｌ）から出発して行う。混合物をボルテックスによって撹拌し、３７℃で一晩維持する。これで、脱グリコシル化したサンプルをＨＲＭＳで分析する準備ができた。状況に依存して、サンプルのＨＲＭＳ分析を、あらかじめ脱グリコシル化をせずに行ってもよい。両方の場合に、陽エレクトロスプレーモード（ＥＳ＋）で、Ｗａｔｅｒｓ Ｘｅｖｏ Ｑ−Ｔｏｆ機を用いて質量スペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件：Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ Ｗａｔｅｒｓ ＢＥＨ ３００ Ｃ４ ２．１×１５０ｍｍカラム、粒子直径１．７μｍ；溶媒：Ａ：Ｈ_２Ｏ＋０．１％ギ酸：Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ＋０．１％ギ酸；カラム温度 ７０℃：流速０．５ｍｌ／分；勾配（１０分）：Ｂ ２０％で２分５０秒；２分５０秒でＢが２０％から８０％；８分５０秒：Ｂ ８０％；８分５５秒：Ｂ ２０％；１０分：Ｂ ２０％。

方法Ｅ：高速液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＭＳＣ）
陽および／または陰エレクトロスプレーイオン化モード（ＥＳ＋／−）で、Ｕ．Ｖ．ＤＡＤ ２１０＜ＷＬ＜４００ｎｍ検出器を用い、Ｗａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ−ＳＱＤラインでスペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件：カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８−１．７μｍ−２．１×３０ｍｍ；溶媒：Ａ：Ｈ_２Ｏ（０．１％ギ酸）Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ（０．１％ギ酸）；カラム温度：４５℃；流速：０．６ｍｌ／分；勾配（２分）：１分でＢが５％から５０％；０．３分でＢが５０％から１００％；１．４５分：Ｂ １００％；０．３分でＢが１００％から５％；２分：Ｂ １００％。

方法Ｆ：高速液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＭＳＣ）
陽および／または陰エレクトロスプレーモード（ＥＳ＋／−）で、Ｕ．Ｖ．ＤＡＤ ２００＜ＷＬ＜４００ｎｍ検出器を用い、Ｗａｔｅｒｓ ＺＱラインでスペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｗａｔｅｒｓ Ｃ１８ ３×７５ｍｍ、粒子直径３．５μｍ；溶媒：Ａ：Ｈ_２Ｏ（０．１％ギ酸）Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ（０．１％ギ酸）；カラム温度：５０℃；流速：０．８ｍｌ／分；勾配（６分）：Ｂ ６％を０．８０分；３．９分でＢが６％から１００％；４．８０分：Ｂ １００％；５分：Ｂ ６％；６分：Ｂ ６％。

方法Ｇ：高速液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＭＳＣ）
陽および／または陰エレクトロスプレーイオン化モード（ＥＳ＋／−）で、Ｗａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ−ＳＱＤ機でスペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件：カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ ＢＥＨ Ｃ１８−１．７μｍ−２．１×５０ｍｍ；溶媒：Ａ：Ｈ_２Ｏ（０．１％ギ酸）Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ（０．１％ギ酸）；カラム温度：５０℃；流速：０．８ｍｌ／分；勾配（２．５分）：１．８分でＢが５％から１００％；２．４０分：Ｂ １００％；２．４５分：Ｂ １００％ Ｂ；０．０５分でＢが１００％から５％。

抗体ｈｕ２Ｈ１１（ＷＯ２００８０１０１０１の１５ページでｈｕ５３ ２Ｈ１１としても知られ、アミノ酸配列番号２４を有するＶｈを含む抗体である。）またはｈｕ５３ ２Ｈ１１の直接的な突然変異生成によって得られる抗体ｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４（ＷＯ２０１１０３９７２１の２０ページを参照。アミノ酸配列番号１８を有するＶｈと、配列番号１６を有するＶｌとを含む抗体である。）を使用する。

第１章：新規トマイマイシン誘導体
［実施例１］
１．１． ４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン

２０ｍｇの４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジンを９００μＬのＭｅＯＨおよび４００μＬのＤＭＦに溶解し、これに１７．５ｍｇのトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩および１５．８ｍｇのＮａＨＣＯ_３の水３７０μＬ溶液を加える。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ｉｎｔｅｒｃｈｒｏｍ Ｐｕｒｉｆｌａｓｈ Ｓｉｌｉｃａ １５／３５Ｕ ２Ｇ）で９：１ ＤＣＭ／アセトニトリル混合物中、０％から１０％ ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。望ましい生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。７ｍｇの４−｛２−［メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジンをこのようにして得る：ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：ｔｒ＝１．０６分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ ９４１；［Ｍ＋Ｈ_２Ｏ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ９５９。

１．２． ４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン

３０ｍｇの４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジンおよび６５．５μＬのジイソプロピルエチルアミンのＤＣＭ ２００μＬ溶液を−２０℃に冷却し、これに１９．４μＬのＭＳＣを加える。２０分間撹拌した後、混合物を加水分解し、有機相を水で洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ_４で脱水し、減圧下で濃縮する。得られた残渣（３６ｍｇ）を４００μＬのＤＭＦに溶解し、これを、３９．６ｍｇのＫ_２ＣＯ_３および１５．８ｍｇのＫＩとともに、２６ｍｇのトマイマイシンのＤＭＦ ４２５μＬ溶液に加える。混合物を３０℃で１２時間撹拌し、次いで、沈殿が生じるまで加水分解する。不溶性物質を焼結式漏斗による濾過によって除去し、ＤＣＭで洗浄し、有機相を合わせ、次いで、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ Ｓｕｐｅｒ Ｆｌａｓｈ ＳｉＯ_２ ＳＦ２５−８ｇ）で、ＤＣＭ中、０％から１０％ ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。望ましい生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮し、１／１ ジオキサン／水混合物に入れ、再び減圧下で濃縮する。２３ｍｇの４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジンをこのようにして得る。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）：ｂｒｏａｄ ｓｉｇｎａｌｓ：１．２０ ｔｏ １．７８（ｍ，１２Ｈ）；２．４０（ｓ，３Ｈ）；２．７０ ｔｏ ３．１０（ｍ，１０Ｈ）；３．３４（ｍ，４Ｈ）；３．４９ ｔｏ ３．７０（ｍ，８Ｈ）；３．７１（ｓ，３Ｈ）；３．９１（ｍ，２Ｈ）；４．００（ｓ，６Ｈ）；４．２７（ｍ，４Ｈ）；５．２７（ｍ，４Ｈ）；５．６０（ｍ，２Ｈ）；６．８６（ｓ，２Ｈ）；７．００（ｍ，２Ｈ）；７．５６（ｓ，２Ｈ）；７．６５（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：Ｔｒ＝０．８１分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ ９８７。

１．３． ４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジン

１００ｍｇの４−［２−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピルアミノ）−エトキシ］−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジンのＤＭＦ ２ｍＬ溶液に、９９ｍｇの１−ヨード−２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エタン（Ｂ．Ｂｅｎ Ａｒｏｙａ Ｂａｒ Ｎｉｒ，Ｊ．Ｆ．Ｋａｄｌａ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，２００９，７６，６０−６７）および５４ｍｇのＫ_２ＣＯ_３を加える。６０℃で１２時間後、混合物に４０ｍｇの１−ヨード−２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エタンを加え、さらに５５ｍｇのＫ_２ＣＯ_３を加える。得られた混合物を８０℃でさらに２４時間撹拌する。減圧下で濃縮する後、このようにして得た未精製生成物を、最小限の量のＭｅＯＨに溶解し、Ｍｅｇａ ＢＥ−ＳＣＸ，１ＧＭ ６ＭＬ（Ｖａｒｉａｎ）に入れる。この相をＭｅＯＨで洗浄した後、目的生成物を２ＮアンモニアＭｅＯＨ溶液で溶出させる。ＭｅＯＨ相を減圧下で濃縮し、次いで、再びＭｅｇａ ＢＥ−ＳＣＸ，２ＧＭ １２ＭＬ（Ｖａｒｉａｎ）に同じプロトコルに従って入れる。メタノール／ＮＨ_３相を減圧下で濃縮し、得られた残渣をシリカフラッシュクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ ＳｕｐｅｒＶａｒｉｏＦｌａｓｈ １０ｇカラム，Ｓｉ６０ １５−４０μｍ）で、ＤＣＭ中、０％から１０％ ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。３０ｍｇの４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジンをこのようにして得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：１．２７（ｓ，６Ｈ）；２．４０（ｓ，３Ｈ）；２．７５（ｓ，２Ｈ）；２．８０（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；３．００（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；３．２３（ｓ，３Ｈ）；３．４０（ｍ，２Ｈ）；３．４７ ｔｏ ３．５５（ｍ，８Ｈ）；４．１２（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；４．４５（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，４Ｈ）；５．３０（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；６．８５（ｓ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：ｔｒ＝０．４４分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ ４７９；［Ｍ−Ｈ＋ＨＣＯ２Ｈ］⁻：ｍ／ｚ ５２３。

１．４． ４−［２−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピルアミノ）−エトキシ］−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジン

３９０ｍｇの４−［２−アミノ−エトキシ］−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジン（ＷＯ０７０８５９３０の１０１ページに記載されている４−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エトキシ）−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジンのｂｏｃ基の脱保護後に調製された。）のＴＨＦ ２ｍＬ懸濁物に、２７０μｌの２−（メチルジチオ）−イソブチルアルデヒドおよび７３０μＬのチタンイソプロポキシドを加える。２０分後、さらなる２７０μｌの２−（メチルジチオ）−イソブチルアルデヒドおよび７３０μＬのチタンイソプロポキシドを加え、混合物を室温で２時間撹拌する。次いで、混合物に６ｍＬのエタノールを追加し、室温で２０分間撹拌し、次いで、１２４ｍｇのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを加える。４５分間撹拌した後、さらなる１２４ｍｇのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを加え、１時間撹拌した後、混合物を減圧下で濃縮し、ＥｔＯＡｃおよび水で希釈する。得られた沈殿を濾別し、１Ｍ ＨＣｌ水溶液に溶解する。得られた水相を５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を用いて塩基性ｐＨにし、ＤＣＮで３回抽出し、有機相を合わせ、減圧下で濃縮する。３２２ｍｇの４−［２−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピルアミノ）−エトキシ］−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジンを得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：１．２６（ｓ，６Ｈ）；１．８１（ｂｒｏａｄ ｍ，１Ｈ）；２．３９（ｓ，３Ｈ）；２．６７（ｂｒｏａｄ ｓ，２Ｈ）；２．９４（ｂｒｏａｄ ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）；４．１１（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）；４．４５（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，４Ｈ）；５．３２（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ）；６．８５（ｓ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：ｔｒ＝０．２４分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ ３４７。

［実施例２］
２．１． ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−ブタン酸

２８ｍｇのエチル ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−ブタノエートをＴＨＦ５２７μｌおよび水６１μｌに溶解し、この溶液に、３２μｌの１Ｍ水酸化リチウム水溶液を加える。混合物を室温で１時間３０分撹拌し、さらなる５μｌの１Ｍ水酸化リチウム水溶液をこの混合物に加える。室温で１時間３０分撹拌した後、８００μｌのリン酸カリウムバッファー（ｐＨ＝３）を加えることによって、ｐＨが３に近くなるまで混合物を酸性化し、次いで、ＤＣＭで５回抽出する。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ_４で脱水し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ Ｓｕｐｅｒ Ｆｌａｓｈ ＳｉＯ_２ ＳＦ１０−４ｇ）で、ＤＣＭ中、３％から２０％ ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。１０．２ｍｇの４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾ−ジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−ブタン酸を得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝３．０８分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ９３９。

２．２． エチル ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ１−エチル｝−アミノ）−ブタノエート

５０．４ｍｇの（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−８−ヒドロキシ−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２．１−ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オンのＤＭＦ ４ｍｌ溶液に、７７ｍｇのＫ_２ＣＯ_３、３０．７ｍｇのヨウ化カリウムおよび６７ｍｇのエチル ４−（［２−（２，６−ビス−メタンスルホニルオキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−ブチレートを加える。混合物を３０℃で１８時間加熱し、次いで、室温まで冷却し、０．４５μｍ膜によって濾過し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ Ｓｕｐｅｒ Ｆｌａｓｈ ＳｉＯ_２ ＳＦ１５−１２ｇ）で、ＤＣＭ中、０％から１０％ ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。５１ｍｇのエチル ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］エチル｝−アミノ）−ブタノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝３．２０分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ９６７。

２．３． エチル（［２−（２，６−ビス−メタンスルホニルオキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−ブチレート

５１ｍｇのエチル ４−（［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−ブタノエートのＤＣＭ ５ｍｌ溶液をあらかじめ−２５℃に冷却しておき、これに１１０μｌのジイソプロピルエチルアミンおよび３４μｌのＭＳＣを加える。混合物を−１５℃で１時間撹拌し、次いで、５ｍｌの水で洗浄する。水相を５ｍｌのＤＣＭで抽出する。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ_４で脱水し、減圧下で濃縮する。６９ｍｇのエチル ４−（［２−（２，６−ビス−メタンスルホニルオキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−ブチレートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝２．８７分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ６１５。

２．４． エチル ４−（［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−ブタノエート

１８０ｍｇのエチル ４−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−ブタノエートのアセトニトリル１８ｍｌ溶液に、２０７ｍｇの１−ヨード−２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エタンおよび１９２μＬのジイソプロピルエチルアミンを加える。混合物を８０℃で３日間加熱し、次いで、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ ＳｕｐｅｒＶａｒｉｏＦｌａｓｈ １５ｇカラム、Ｓｉ６０ １５−４０μｍ）で、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／水混合物（４０／５／０．５）を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。５１ｍｇのエチル ４−（［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−ブタノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝０．７０分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ４５９。

２．５． エチル ４−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−ブタノエート

３９０ｍｇのエチル ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−ブタノエートのアセトニトリル１０ｍｌ溶液に、アルゴン下、７６６ｍｇの炭酸セシウムおよび１６０μＬのチオフェノールを加える。混合物を室温で１７時間撹拌し、次いで、空隙率４の焼結物を通して濾過する。ケーキをＥｔＯＡｃを用いて洗浄し、濾液を減圧下で濃縮し、Ｍｅｇａ ＢＥ−ＳＣＸ，２ＧＭ １２ＭＬカートリッジ（Ｖａｒｉａｎ）で精製し、ＭｅＯＨを用いて洗浄し、２ＮアンモニアＭｅＯＨ溶液を用い、予想生成物を外す。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。１８３ｍｇのエチル ４−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−ブタノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝０．６８分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ３１３。

２．６． エチル ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（２−ニトロ−ベンゼン−スルホニル）−アミノ］−ブタノエート

７６７ｍｇのＮ−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミドのＤＭＦ １５ｍｌ溶液に、アルゴン下、３４４μｌのエチル ３−ブロモ−ブチレートおよび１．３８ｇのＫ_２ＣＯ_３を加える。混合物を４０℃で約２０時間撹拌し、次いで、空隙率４の焼結物を通して濾過する。ケーキをＥｔＯＡｃを用いて洗浄し、濾液を減圧下で濃縮する。未精製生成物をシリカフラッシュクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ ＳｕｐｅｒＶａｒｉｏＰｒｅｐ ９０ｇカラム，Ｓｉ６０ １５−４０μｍ）で、ＤＣＭ中、０％から１０％ ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。３９５ｍｇのエチル ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−ブタノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝２．７２分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ４９８；［Ｍ＋ＨＣＯ_２Ｈ−Ｈ］⁻：ｍ／ｚ ５４２。

２．７． Ｎ−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド

１．３ｇのジエチル ４−［２−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニルアミノ）−エトキシ］−ピリジン−２，６−ジカルボキシレートのエタノール２００ｍＬ溶液に、３１５ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムおよび９４１ｍｇのＣａＣｌ_２を順に加える。混合物を室温で１時間３０分撹拌し、次いで、この混合物に５０ｍｌの水を加える。エタノールを減圧下で除去し、得られた残渣に５０ｍｌの水を加え、水相をＥｔＯＡｃで３回抽出する。有機相を合わせ、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、減圧下で濃縮する。１．０６ｇのＮ−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミドを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：ｔｒ＝０．５７分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ３８４。

２．８． ジエチル ４−［２−（２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミノ）−エトキシ］−ピリジン−２，６−ジカルボキシレート

９５７ｍｇのジエチル ４−（２−アミノ−エトキシ）−ピリジン−２，６−ジカルボキシレート一塩酸塩をＤＣＭ ３０ｍｌおよびピリジン７３４μｌに溶解し、この溶液をあらかじめ約５℃に冷却し、これに７９８ｍｇの２−ニトロベンゼンスルホニルクロリドを加える。混合物を室温まで加温し、２時間撹拌する。さらなる２４４μｌのピリジンおよび６６５ｍｇの２−ニトロベンゼンスルホニルクロリドをこれに加え、１５時間撹拌を続ける。混合物を水２５ｍｌで洗浄し、水相を２５ｍｌのＤＣＭで２回抽出する。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ_４で脱水し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ ＥａｓｙＶａｒｉｏＰｒｅｐ １５０ｇカラム、Ｓｉ６０ １５−４０μｍ）で、ＤＣＭ中、０％から１０％ ＥｔＯＡｃの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。９６０ｍｇのジエチル ４−［２−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニルアミノ）−エトキシ］−ピリジン−２，６−ジカルボキシレートを得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：１．３５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ）；３．４１（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）；４．２２（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）；４．３９（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ）；７．５０（ｓ，２Ｈ）；７．８０（ｍ，２Ｈ）；７．９２（ｍ，１Ｈ）；８．０４（ｍ，２Ｈ）；８．４０（ｍ，１Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ｃ）：ｔｒ＝３．５０分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ４６８。

２．９． ジエチル ４−（２−アミノ−エトキシ）−ピリジン−２，６−ジカルボキシレート一塩酸塩

２．６４ｇのジエチル ４−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エトキシ）−ピリジン−２，６−ジカルボキシレート（ＷＯ０７０８５９３０の１０１ページに記載されている。）のジオキサン２７ｍｌ溶液に、２０．７ｍｌの４Ｎ 塩酸ジオキサン溶液を加える。混合物を室温で約２０時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮する。蒸発残渣を約７０ｍｌのジオキサンに取り、次いで、再び減圧下で濃縮する。この操作を３回繰り返す。混合物を５０ｍｌのｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルに取り、得られた懸濁物を空隙率４の焼結物を通して濾過する。ケーキをｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルを用いて洗浄し、減圧下、室温でデシケーター内で乾燥させる。２ｇのジエチル ４−（２−アミノ−エトキシ）−ピリジン−２，６−ジカルボキシレート一塩酸塩を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：１．３５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ）；３．２６（ｍ，２Ｈ）；４．３９（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ）；４．４５（ｍ，２Ｈ）；７．７７（ｓ，２Ｈ）；８．１６（ｂｒｏａｄ ｍ，３Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ｃ）：ｔｒ＝２．３９分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ２８３。

［実施例３］
３．１． ３−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパン酸

３０ｍｇのメチル ３−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパノエートをＴＨＦ５７６μｌおよび水６７μｌに溶解し、この溶液に、３５μｌの１Ｍ水酸化リチウム水溶液を加える。混合物を室温で１時間３０分撹拌し、次いで、４ｍｌのＤＣＭに取り、リン酸カリウムバッファー（ｐＨ＝３）を加えることによって、ｐＨが３に近くなるまで混合物を酸性化する。混合物をＤＣＭで４回抽出し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ_４で脱水し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ Ｓｕｐｅｒ Ｆｌａｓｈ ＳｉＯ_２ ＳＦ１０−４ｇ）で、ＤＣＭ中、１０％から２０％ ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。１３ｍｇの３−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパン酸を得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝３．０７分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ９２５。

３．２． メチル ３−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシ］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパノエート

８４ｍｇの（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−８−ヒドロキシ−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２．１−ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オンのＤＭＦ ５ｍｌ溶液に、１２８ｍｇのＫ_２ＣＯ_３、５１ｍｇのＫＩおよび１１０ｍｇのメチル ３−（［２−（２，６−ビス−メタンスルホニルオキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパノエートを加える。混合物を３０℃で１８時間加熱し、次いで室温まで冷却し、０．４５μｍ膜によって濾過し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ Ｓｕｐｅｒ Ｆｌａｓｈ ＳｉＯ_２ ＳＦ１５−２４ｇ）で、ＤＣＭ中、０％から１０％ ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。３３ｍｇのメチル ３−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝３．２１分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ９３９。

３．３． メチル ３−（［２−（２，６−ビス−メタンスルホニルオキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパノエート

８０ｍｇのメチル ３−（［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパノエートのＤＣＭ ８ｍｌ溶液をあらかじめ−２５℃に冷却しておき、これに１８３μｌのジイソプロピルエチルアミンおよび５７μｌのメタンスルホニルクロリドを加える。混合物を−１５℃で１時間撹拌し、次いで、５ｍｌの水で洗浄する。水相を５ｍｌのＤＣＭで抽出する。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ_４脱水し、減圧下で濃縮する。１１０ｍｇのメチル ３−（［２−（２，６−ビス−メタンスルホニルオキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝２．６７分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ５８７。

３．４． メチル ３−（［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパノエート

２８４ｍｇのメチル ３−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−プロパノエートのアセトニトリル２８ｍｌ溶液に、３５６ｍｇの１−ヨード−２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エタン、３３０μｌのジイソプロピルエチルアミンを加える。混合物を８０℃で３日間加熱し、次いで、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ Ｓｕｐｅｒ Ｆｌａｓｈ ＳｉＯ_２ ＳＦ２５−４０ｇ）で、ＤＣＭ中、５％から１０％ ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。１６５ｍｇのメチル ３−（［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝０．４４分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ４３１。

３．５． メチル ３−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−プロパノエート

１５５ｍｇのメチル ３−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロパノエートのアセトニトリル６ｍｌ溶液に、アルゴン下、３２５ｍｇの炭酸セシウムおよび６７μｌのチオフェノールを加える。混合物を室温で４時間撹拌し、次いで、空隙率４の焼結物を通して濾過する。ケーキをＥｔＯＡｃを用いて洗浄し、濾液を減圧下で濃縮し、Ｍｅｇａ ＢＥ−ＳＣＸ，２ＧＭ １２ＭＬカートリッジ（Ｖａｒｉａｎ）で精製し、ＭｅＯＨを用いて洗浄し、２ＮアンモニアＭｅＯＨ溶液を用い、予想生成物を外す。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。８２ｍｇのメチル ３−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−プロパノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝０．３３分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ２８５。

３．６． メチル ３−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロパノエート

６７０ｍｇのｔｅｒｔ−ブチル ３−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−プロパノエートのＤＣＭ ２０ｍｌ溶液に、２ｍｌのＴＦＡを加える。混合物を室温で６時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮し、ＤＣＭに取り、再び減圧下で濃縮する。得られた残渣を１０ｍｌのＭｅＯＨに溶解し、これに、５℃で、７ｍｌの２Ｍ（トリメチルシリル）ジアゾメタンのヘキサン溶液を加える。混合物を５℃で１時間３０分撹拌し、次いで、２００μｌの酢酸を加える。混合物を水３０ｍｌおよびＥｔＯＡｃ ３０ｍｌに入れる。水相を３０ｍｌのＥｔＯＡｃで２回抽出する。有機相を合わせ、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ Ｓｕｐｅｒ Ｆｌａｓｈ ＳｉＯ_２ ＳＦ１５−２４ｇ）で、ＤＣＭ中、０％から１０％ ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。１５５ｍｇのメチル ３−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−プロパノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｃ）：ｔｒ＝２．５６分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ４７０。

３．７． ｔｅｒｔ−ブチル ３−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロパノエート

０．８ｇのジエチル ４−｛２−［（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−エチル）−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−エトキシ｝−ピリジン−２，６−ジカルボキシレートのエタノール８０ｍＬ溶液に、１５２ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムおよび４４７ｍｇのＣａＣｌ_２を順に加える。混合物を室温で撹拌し、次いで、反応終了時に２０ｍｌの水を加える。減圧下でエタノールを除去し、得られた残渣に１００ｍｌの水を加え、水相をＥｔＯＡｃで３回抽出する。有機相を合わせ、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、減圧下で濃縮する。６７０ｍｇのｔｅｒｔ−ブチル ３−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロパノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｃ）：ｔｒ＝３分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ５１２。

３．８． ジエチル ４−｛２−［（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−エチル）−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−エトキシ｝−ピリジン−２，６−ジカルボキシレート

１０．６ｇのｔｅｒｔ−ブチル ３−［（２−メタンスルホニルオキシ−エチル）−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロピオネートのＤＭＦ ２２０ｍｌ溶液に、１６．２ｇのＫ_２ＣＯ_３および５．６ｇのジエチル ４−ヒドロキシ−ピリジン−２，６−ジカルボキシレートを加える。混合物を６０℃で２０時間加熱し、次いで、減圧下で濃縮し、２００ｍｌの水および２００ｍｌのＥｔＯＡｃに入れる。水相をＥｔＯＡｃで２回抽出する。有機相を合わせ、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ ＥａｓｙＶａｒｉｏＰｒｅｐ ６００ｇカラム、Ｓｉ６０ １５−４０μｍ）で、ＤＣＭ中、０％から２０％ ＥｔＯＡｃの勾配によって精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。６．５６ｇのジエチル ４−｛２−［（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−エチル）−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−エトキシ｝−ピリジン−２，６−ジカルボキシレートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｃ）：ｔｒ＝４．１４分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ５９６。

３．９． ｔｅｒｔ−ブチル ３−［（２−メタンスルホニルオキシ−エチル）−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロピオネート

９．２ｇのｔｅｒｔ−ブチル ３−［（２−ヒドロキシ−エチル）−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロピオネートのＤＣＭ ９２ｍｌ溶液に、８．１ｍｌのジイソプロピルエチルアミンを加える。混合物を−５℃まで冷却し、２．３４ｍｌのＭＳＣのＤＣＭ １０ｍｌ溶液を滴下する。室温まで加温した後、混合物を約２時間撹拌し、次いで、１００ｍｌの水を追加する。水相をＤＣＭで２回抽出し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ_４で脱水し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ Ｓｕｐｅｒ Ｆｌａｓｈ ＳｉＯ_２ ＳＦ４０−２４０ｇ）で、ＤＣＭ中、０％から５％の酢酸エチルの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。１０．６２ｇのｔｅｒｔ−ブチル ３−［（２−メタンスルホニルオキシ−エチル）−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロピオネートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｃ）：ｔｒ＝３．７７分；［Ｍ＋Ｎａ］^＋：ｍ／ｚ ４７５。

３．１０ ｔｅｒｔ−ブチル ３−［（２−ヒドロキシ−エチル）−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロピオネート

８．７ｇのＮ−（２−ヒドロキシ−エチル）−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド（Ｓｋｅｒｌｊ，Ｒ．Ｔ．；Ｎａｎ，Ｓ．；Ｚｈｏｕ，Ｙ．；Ｂｒｉｄｇｅｒ，Ｇ．Ｊ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．２００２（４３）７５６９−７５７１）のＤＭＦ ８７ｍｌ溶液に、アルゴン下、８．８ｍｌのｔｅｒｔ−ブチル ３−ブロモプロピオネートおよび１４．６ｇのＫ_２ＣＯ_３を加える。混合物を４０℃で１５時間撹拌し、次いで、さらなる５ｍｌのｔｅｒｔ−ブチル ３−ブロモプロピオネートを加える。混合物を４０℃で一晩加熱し、次いで、空隙率４の焼結物を通して濾過する。ケーキを酢酸エチルで洗浄し、次いで、濾液を減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ ＥａｓｙＶａｒｉｏＰｒｅｐ ４００ｇカラム、Ｓｉ６０ １５−４０μｍ）で、ＤＣＭ中、０％から１０％ ＥｔＯＡｃの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。９．５４ｇのｔｅｒｔ−ブチル ３−［（２−ヒドロキシ−エチル）−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロピオネートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｃ）：ｔｒ＝３．３９分；［Ｍ＋Ｎａ］^＋：ｍ／ｚ ３９７。

［実施例４］
４．１． ４−［２−（（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−エトキシ］−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン
４−［２−（（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−エトキシ］−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジンから出発し、実施例１と同様に調製する。

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：１．２２（ｓ，６Ｈ）；１．６９（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ）；２．２８ ｔｏ ２．４４（ｍ，６Ｈ）；２．３６（ｍ，３Ｈ）；２．７１（ｓ，２Ｈ）；２．７７（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ）；２．８８ ｔｏ ３．０８（ｍ，６Ｈ）；３．４２ ｔｏ ３．５５（ｍ，１２Ｈ）；３．８６（ｓ，６Ｈ）；３．８８（ｍ，２Ｈ）；４．１０（ｓ，４Ｈ）；４．１５（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）；５．１７（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，２Ｈ）；５．２３（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，２Ｈ）；５．５５（ｍ，２Ｈ）；６．９３（ｓ，２Ｈ）；７．０６（ｓ，２Ｈ）；７．３８（ｓ，２Ｈ）；７．７６（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：ｔｒ＝０．６８分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ １０４２；［Ｍ＋２Ｈ］^２＋：ｍ／ｚ ５２１．５（ベースピーク）。

４．２． ４−［２−（（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−エトキシ］−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジン
４−｛２−［２−（２−ヨード−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−モルホリンおよび４−［２−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピルアミノ）−エトキシ］−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジンから出発し、実施例１と同様に調製する。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：１．２６（ｓ，６Ｈ）；２．３６（ｍ，４Ｈ）；２．３９（ｓ，３Ｈ）；２．４３（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；２．７４（ｓ，２Ｈ）；２．７９（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；３．００（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；３．４６ ｔｏ ３．５５（ｍ，１２Ｈ）；４．１２（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；４．４５（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，４Ｈ）；５．３０（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；６．８４（ｓ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ｅ）：ｔｒ＝０．３３分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ５３４。

４．３． ４−｛２−［２−（２−ヨード−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−モルホリン

１．１２ｇの２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エタノールおよび９４０μｌのジイソプロピルエチルアミンのＤＣＭ ６ｍｌ溶液を０℃まで冷却し、これに４４０μｌのメタンスルホニルクロリドのＤＣＭ ３ｍＬ溶液を同じ温度で加える。混合物を０℃で１時間撹拌し、次いで、水８ｍｌで洗浄する。有機相をＭｇＳＯ_４で脱水し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を３０ｍｌのアセトンに溶解し、次いで、１．４２ｇのヨウ化ナトリウムを追加する。還流状態で５時間撹拌した後、不溶性物質を焼結式漏斗による濾過によって除去する。濾液を減圧下で濃縮し、次いで、ジクロロメタンに入れる。不溶性物質を再び濾過によって除去し、濾液を減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ Ｓｕｐｅｒ Ｆｌａｓｈ ＳｉＯ_２ ＳＦ２５−４０ｇ）で、ＤＣＭ中、０％から５％ ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。１．０９ｇの４−｛２−［２−（２−ヨード−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−モルホリンを得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：２．３９（ｍ，４Ｈ）；２．４５（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；３．３２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）；３．４７ ｔｏ ３．６０（ｍ，１０Ｈ）；３．６７（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：ｔｒ＝０．２９分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ３３０。

［実施例５］
５．１． Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエート

６５ｍｇの４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタン酸をＴＨＦ ３．８ｍＬに溶解し、これに、６７μｌのＤＩＰＥＡおよび３３ｍｇのＮ，Ｎ’−ジスクシンイミジルカーボネートを加える。室温で１時間後、８ｍＬのＤＣＭを加え、得られた有機相を水で２回洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ Ｓｕｐｅｒ Ｆｌａｓｈ ＳｉＯ_２ ＳＦ１０−８ｇ）で、ＤＣＭ中、０％から７．５％ メタノールの勾配を用いて精製する。３５ｍｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミジル ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートをこのようにして得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｆ）：ｔｒ＝３．５４分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ １１０８；［Ｍ＋Ｈ_２Ｏ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ １１２６；［Ｍ＋２Ｈ_２Ｏ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ １１４４。

５．２． ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタン酸
メチル ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートから出発し、実施例２と同様に調製する。

ＬＣ／ＭＳ（Ｅ）：ｔｒ＝１．０５分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ １０１１；［Ｍ＋Ｈ_２Ｏ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ １０２９；［Ｍ＋２Ｈ_２Ｏ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ １０４７。

５．３． メチル ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエート
エチル ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートから出発し、実施例２と同様に調製する。

ＬＣ／ＭＳ（Ｅ）：ｔｒ＝１．１４分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ １０２５；［Ｍ＋Ｈ_２Ｏ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ １０４３；［Ｍ＋２Ｈ_２Ｏ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ １０６１。

５．４． メチル ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエート

４６０ｍｇのｔｅｒｔ−ブチル ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートのＤＣＭ ７ｍｌ溶液に、１．１４ｍｌのＴＦＡを加える。混合物を室温で１５時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮する。得られた残渣に３．８ｍｌのＭｅＯＨを加え、これに、５℃で３．１ｍｌの２Ｍ （トリメチルシリル）ジアゾメタンのヘキサン溶液を加える。混合物を５℃で１時間撹拌し、次いで、１００μｌの酢酸を加える。減圧下で濃縮した後、得られた残渣をシリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ Ｓｕｐｅｒ Ｆｌａｓｈ ＳｉＯ_２ ＳＦ２５−４０ｇ）で、ＤＣＭ中、２％から１０％ ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ減圧下で濃縮する。２６５ｍｇのメチル ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートを得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：配座異性体の５０％−５０％混合物：１．６７ ｔｏ １．８６（ｍ，２Ｈ）；２．２７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）；２．３６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）；２．５７（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ）；２．６６（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ）；３．２３（ｓ，３Ｈ）；３．３１ ｔｏ ３．７５（ｍ，２１Ｈ）；４．１４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）；４．１９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）；４．４５（ｍ，４Ｈ）；５．３０（ｍ，２Ｈ）；６．８４（ｓ，１Ｈ）；６．８６（ｓ，１Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ｇ）：ｔｒ＝０．６２分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ５１７；［Ｍ−Ｈ＋ＨＣＯ_２Ｈ］⁻：ｍ／ｚ ５６１。

５．５． ｔｅｒｔ−ブチル ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエート

５６０ｍｇのｔｅｒｔ−ブチル ３−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−ブタノエートのＤＭＦ ４ｍｌ溶液に、６５８ｍｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミジル ３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパノエート（参照。Ｍ．Ａ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ｎ．Ｂ．Ｍａｌｋａｒ，Ｄ．Ｓｅｖｅｒｙｎｓｅ−Ｓｔｅｖｅｎｓ，Ｋ．Ｇ．Ｙａｒｂｒｏｕｇｈ，Ｍ．Ｊ．Ｂｅｄｎａｒｃｉｋ，Ｒ．Ｅ．Ｄｕｇｄｅｌｌ，Ｍ．Ｅ．Ｐｕｓｋａｓ，Ｒ．Ｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｋ．Ｄ．Ｊａｍｅｓ Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，２００６，１７，２６７−２７４）のＤＭＦ４ｍＬ溶液を加える。混合物を室温で１５時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ Ｓｕｐｅｒ Ｆｌａｓｈ ＳｉＯ_２ ＳＦ４０−８０ｇ）で、ＤＣＭ中、０％から１０％の１０％アンモニアＭｅＯＨ溶液の勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。４６０ｍｇのｔｅｒｔ−ブチル ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートを得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：配座異性体の５０％−５０％混合物：１．３９（ｓ，４．５Ｈ）；１．４０（ｓ，４．５Ｈ）；１．６３ ｔｏ １．８１（ｍ，２Ｈ）；２．１６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）；２．２５（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）；２．５７（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ）；２．６６（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ）；３．２３（ｓ，３Ｈ）；３．３１ ｔｏ ３．７４（ｍ，１８Ｈ）；４．１４（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）；４．１９（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）；４．４５（ｍ，４Ｈ）；５．３０（ｍ，２Ｈ）；６．８４（ｓ，１Ｈ）；６．８６（ｓ，１Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ｇ）：ｔｒ＝０．８０分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ５５９；［Ｍ−Ｈ＋ＨＣＯ_２Ｈ］⁻：ｍ／ｚ ６０３。

５．６． ｔｅｒｔ−ブチル ３−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−ブタノエート
ｔｅｒｔ−ブチル ３−ブロモ−ブチレートおよびＮ−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミドから出発し、実施例２と同様に調製する。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：１．３９（ｓ，９Ｈ）；１．６２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）；１．８４（ｂｒｏａｄ ｍ，１Ｈ）；２．２２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）；２．５５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）；２．８６（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）；４．０７（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）；４．４５（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，４Ｈ）；５．２９（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）；６．８５（ｓ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：ｔｒ＝０．４０分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ３４１；ベースピーク：ｍ／ｚ １５６。

［実施例６］
６．１． エチル ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエート
エチル ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートから出発し、実施例５と同様に調製する。

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：配座異性体の５０％−５０％混合物：１．１１ ｔｏ １．１８（ｍ，３Ｈ）；１．５４ ｔｏ １．８２（ｍ，８Ｈ）；２．２４（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）；２．３２（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）；２．５３ ｔｏ ２．６８（ｍ，４Ｈ）；２．８７ ｔｏ ３．０７（ｍ，４Ｈ）；３．２０（ｓ，１．５Ｈ）；３．２１（ｓ，１．５Ｈ）；３．３１ ｔｏ ４．２７（ｍ，３２Ｈ）；５．１６（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，２Ｈ）；５．２２（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，２Ｈ）；５．５５（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ）；６．９４（ｓ，２Ｈ）；７．０８（ｓ，２Ｈ）；７．３７（ｓ，２Ｈ）；７．７６（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：ｔｒ＝０．８６分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ １０３９；ベースピーク：ｍ／ｚ ３７６。

６．２． エチル ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエート
エチル ３−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−ブタノエートから出発し、実施例５と同様に調製する。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）配座異性体の５０％−５０％混合物：１．１６（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１．５Ｈ）；１．１７（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１．５Ｈ）；１．６７ ｔｏ １．９７（ｍ，２Ｈ）；２．２５（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）；２．３４（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）；２．５７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）；２．６６（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）；３．２３（ｓ，３Ｈ）；３．３２ ｔｏ ３．７４（ｍ，１８Ｈ）；４．０４（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）；４．０５（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）；４．１４（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）；４．１９（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）；４．４５（ｍ，４Ｈ）；５．３０（ｍ，２Ｈ）；６．８４（ｓ，１Ｈ）；６．８６（ｓ，１Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：ｔｒ＝０．４７分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ５３１；ベースピーク：ｍ／ｚ ３７６；［Ｍ−Ｈ＋ＨＣＯ_２Ｈ］⁻：ｍ／ｚ ５７５。

［実施例７］
７．１． メチル ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエート
メチル ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートから出発し、実施例５と同様に調製する。

ＬＣ／ＭＳ（Ｅ）：ｔｒ＝０．８８分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ １０８０；［Ｍ＋Ｈ_２Ｏ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ １０９８；［Ｍ＋２Ｈ_２Ｏ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ １１１６。

７．２． メチル ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエート
ｔｅｒｔ−ブチル ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートから出発し、実施例５と同様に調製する。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：１．８３（ｍ，２Ｈ）；２．３３（ｍ，２Ｈ）；２．４２（ｍ，４Ｈ）；２．４８（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ）；２．６１（ｍ，２Ｈ）；３．４０（ｍ，２Ｈ）；３．４９ ｔｏ ３．５５（ｍ，１０Ｈ）；３．５６（ｍ，４Ｈ）；３．６２（ｓ，３Ｈ）；３．６９（ｂｒｏａｄ ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，４Ｈ）；４．２１（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）；４．４９（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，４Ｈ）；４．９０（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ）；６．８７（ｓ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ｇ）：ｔｒ＝０．５０分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ５７２；ベースピーク：ｍ／ｚ １９８；［Ｍ−Ｈ＋ＨＣＯ_２Ｈ］⁻：ｍ／ｚ ６１６。

７．３． ｔｅｒｔ−ブチル ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエート
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル ３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパノエートから出発し、実施例５と同様に調製する。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：１．４２（ｓ，９Ｈ）；１．７８（ｍ，２Ｈ）；２．２２（ｍ，２Ｈ）；２．４２（ｍ，４Ｈ）；２．４８（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ）；２．６１（ｍ，２Ｈ）；３．３９（ｍ，２Ｈ）；３．４８ ｔｏ ３．５５（ｍ，１０Ｈ）；３．５６（ｍ，４Ｈ）；３．６９（ｂｒｏａｄ ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，４Ｈ）；４．２１（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）；４．４９（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，４Ｈ）；４．９０（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ）；６．８７（ｓ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ｇ）：ｔｒ＝０．６５分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ６１４；ベースピーク：ｍ／ｚ ２４０。

７．４． Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル ３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパノエート

８３０ｍｇの３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパン酸をＴＨＦ ５０ｍＬに溶解し、これに１．１ｇのＮ，Ｎ’−ジスクシンイミジルカーボネートおよび１．５ｍＬのＤＩＰＥＡを加える。室温で２４時間後、２００ｍＬのＤＣＭを加え、得られた有機相を体積が半分になるまで減圧下で濃縮し、次いで、水で２回洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、減圧下で濃縮する。１．０５ｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミジル ３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパノエートをこのようにして得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：２．３９（ｍ，４Ｈ）；２．４５（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；２．８１（ｓ，４Ｈ）；２．９２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）；３．４５ ｔｏ ３．５７（ｍ，１４Ｈ）；３．７２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ｇ）：ｔｒ（ＥＬＳＤ）＝０．４９分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ３８９。

７．５． ３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパン酸

１ｇのｔｅｒｔ−ブチル ３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパノエートのＤＣＭ ５０ｍｌ溶液に、４ｍｌのＴＦＡを加える。混合物を室温で１０時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮し、Ｍｅｇａ ＢＥ−ＳＣＸ，２５ＧＭ １５０ＭＬカートリッジ（Ｖａｒｉａｎ）で精製し、ＭｅＯＨを用いて洗浄し、２ＮアンモニアＭｅＯＨ溶液を用い、予想生成物を外す。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。８３０ｍｇの３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパン酸を得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｅ）：ｔｒ（ＥＬＳＤ）＝０．１６分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ２９２。

７．６． ｔｅｒｔ−ブチル ３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパノエート

９８９ｍｇの２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エタノールの無水ＴＨＦ ２．８ｍＬ溶液に、１．０４ｍｇのナトリウムを加える。４０℃で２時間１５分撹拌した後、７９３μＬのｔｅｒｔ−ブチルアクリレートを加える。４０℃でさらに２時間加熱した後、反応混合物を室温で２０分間放置し、次いで、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ ＳｕｐｅｒＶａｒｉｏＰｒｅｐ ７０ｇカラム、Ｓｉ６０ １５−４０μｍ）で、ＤＣＭ中、０％から６％ ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。１ｇのｔｅｒｔ−ブチル ３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｅ）：ｔｒ（ＥＬＳＤ）＝０．５９分；［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ３４８。

ＲＣＧ１＝−ＳＺ _ａ （Ｚ _ａ ＝ＳＭｅ）またはＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ _ｂ Ｒ _ｂ （Ｚ _ｂ Ｒ _ｂ ＝ＯＭｅ）である式（ＩＡ）の化合物を用いた、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＤＡ−Ａ１およびＨＣＴ１１６細胞株の増殖阻害に関する評価
指数関数的な成長段階にあるＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞、ＭＤＡ−Ａ１細胞またはＨＣＴ１１６細胞をトリプシン処理し、それぞれの培地（ＭＤＡ細胞の場合、ＤＭＥＭ／Ｆ１２ Ｇｉｂｃｏ番号２１３３１、１０％ ＦＣＳ Ｇｉｂｃｏ番号１０５００−０５６、２ｎＭ グルタミン Ｇｉｂｃｏ番号２５０３０；ＨＣＴ１１６細胞の場合、ＤＭＥＭ Ｇｉｂｃｏ番号１１９６０、１０％ ＦＣＳ Ｇｉｂｃｏ番号１０５００−０５６、２ｍＭ グルタミン Ｇｉｂｃｏ番号２５０３０）に再び懸濁させる。細胞懸濁物を、血清を含む完全培地の入ったＣｙｔｏｓｔａｒ ９６ウェル培養プレート（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｅｕｒｏｐｅ、番号ＲＰＮＱ０１６３）に、密度が５０００細胞／ウェル（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＤＡ−Ａ１、ＨＣＴ１１６）になるように播種する。４時間インキュベートした後、トマイマイシンダイマーの連続希釈物を、ウェルに各濃度について３つ組で加える。５％ ＣＯ_２雰囲気下、細胞毒性剤が存在する状態で、細胞を３７℃で３日間培養する。４日目に、^１４Ｃ−チミジン（０．１μＣｉ／ウェル、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ番号ＮＥＣ５６８２５０００）の１０μｌの溶液を各ウェルに加える。実験開始から９６時間後、Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ放射線カウンター（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用い、^１４Ｃ−チミジンの組み込み量を測定する。データは、細胞毒性剤で処理した細胞）を用いて得られた計測数と、コントロールウェルの細胞（培地のみで処理された。）を用いて得られた計測数との比率を決定することによって、生存率の形態で表す。

ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａであり、Ｚ_ａ＝ＳＭｅであるか、またはＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂであり、Ｚ_ｂＲ_ｂ＝ＯＭｅである試験化合物は、強力な抗癌活性を有することがわかり、このことは、別のＺ_ｂＲ_ｂ基で特徴づけられる同様の化合物が、少なくとも同一の活性を有する傾向があることを示唆している。

第２章：新規トマイマイシン複合体
［実施例８］
４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジンを含むＳＰＤＢで修飾された複合体ｈｕ２Ｈ１１の調製
リン酸カリウム濃度が０．０５Ｍ、ＮａＣｌが０．０５Ｍ、ｐＨ＝６．５のエチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）が２ｍＭである水系バッファー２．３７ｍｌ中、２４ｍｇのｈｕ２Ｈ１１（ＷＯ２００８０１０１０１の１５ページでは、ｈｕ５３ ２Ｈ１１と記載されている抗体。アミノ酸配列番号２４を有するＶｈを含む抗体である。）に、磁気撹拌しつつ、３２０μｇのＳＰＤＢ（ＷＯ２０１０／０７６４７４の７ページに記載されている。）を６２μＬのＤＭＡに溶解したものを加える。室温で４時間後、修飾された抗体を、濃度が０．０５Ｍ Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、０．０５Ｍ ＮａＣｌおよびｐＨ＝８の２ｍＭ エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）の水系バッファーであらかじめ平衡状態にしておいたＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５（ＰＤ−１０ ＧＥカラム）でゲル濾過によって精製する。修飾された抗体を等分し、これをジチオスレイトール（ＤＴＴ）で処理し、ジチオピリジン基を開裂させる。修飾された抗体を、放出されたピリジンチオールとともに、ピリジンチオールの吸光係数（ｅ_{３４３ｎｍ}＝８０８０Ｍ^−１ｃｍ^−１）、ジチオピリジン基の吸光係数（ｅ_{２８０ｎｍ}＝５１００Ｍ^−１ｃｍ^−１）およびｈｕ２Ｈ１１の吸光係数（ｅ_{２８０ｎｍ}＝２０６９４１Ｍ^−１ｃｍ^−１）を用い、分光法によってアッセイし、抗体分子あたり、平均で３．２のジチオピリジン基を、濃度７．０８ｍｇ／ｍＬで決定した。

濃度が０．０５Ｍ Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、０．０５Ｍ ＮａＣｌおよびｐＨ＝８の２ｍＭ エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）の水系バッファー３．２ｍＬ中、１２ｍｇの上の修飾された抗体に、７１３μＬのＤＭＡおよび１．２２ｍｇの４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジンを、磁気撹拌しつつ、８７μＬのジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）に溶解したものを加える。３０℃で１２時間後、混合物をＭｉｌｌｅｘ（登録商標）−ＳＶ ０．４５μＭ（ＰＶＤＦ Ｄｕｒａｐｏｒｅ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で濾過し、２０％ Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）を含むリン酸食塩水バッファーであらかじめ平衡状態にしておいたＳｕｐｅｒｄｅｘ（商標）２００分取グレードカラム（Ｈｉｌｏａｄ（商標）２６／６０ＧＥカラム）で精製する。目的のフラクションを合わせ、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ−１５（Ｕｌｔｒａｃｅｌ ５０ｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で濃縮し、次いで、１０％スクロースおよび５％ＮＭＰを含み、ヒスチジン濃度が１０ｍＭのｐＨで＝６．５の水系バッファーであらかじめ平衡状態にしておいたＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５（ＰＤ１０、ＧＥカラム）で濾過する。

得られた複合体（３．５ｍＬ）を、４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジンの吸光係数ｅ_{３２０ｎｍ}＝７８４３Ｍ^−１ｃｍ^−１およびｅ_{２８０ｎｍ}＝４４３６Ｍ^−１ｃｍ^−１ならびにｈｕ２Ｈ１１の場合のｅ_{２８０ｎｍ}＝２０６９４１Ｍ^−１ｃｍ^−１を用いた分光法によってアッセイし、抗体分子あたり、平均で２．９のトマイマイシン（４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン）ダイマーを、濃度１．７４ｍｇ／ｍＬで決定した。

［実施例９］
４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジンを含むＳＮＰＰで修飾された複合体ｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４の調製
リン酸カリウム濃度が０．０５Ｍ、ＮａＣｌが０．０５ＭおよびｐＨ＝６．５のエチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）が２ｍＭである水系バッファー８．２ｍｌ中、１００ｍｇのｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４（ＷＯ２０１１０３９７２１の２０ページを参照）に、磁気撹拌しつつ、１．３ｍｇのＳＮＰＰ（ＷＯ２００４／０１６８０１の３６ページに記載されている。）を１８６μＬのＤＭＡに溶解する。室温で４時間後、修飾された抗体の溶液を４つにわけ、濃度が０．０５ＭのＮ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、０．０５Ｍ ＮａＣｌおよびｐＨ＝８の２ｍＭ エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）の水系バッファーであらかじめ平衡状態にしておいた４種類のＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５カラム（ＰＤ−１０ ＧＥカラム）でゲル濾過によって精製する。このようにして得られた４種類の濾液を混合し、均質化した後、修飾された抗体を、ニトロピリジンチオールの吸光係数（ｅ_{２８０ｎｍ}＝３３４４Ｍ^−１ｃｍ^−１およびｅ_{３２５ｎｍ}＝１０９６４Ｍ^−１ｃｍ^−１）およびｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４の場合（ｅ_{２８０ｎｍ}＝２１９５２８Ｍ^−１ｃｍ^−１）を用い、分光法によってアッセイし、抗体分子あたり、平均で４．４７のジチオ−ニトロピリジン基を、濃度６．２７ｍｇ／ｍＬで決定した。

濃度が０．０５Ｍ Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、０．０５Ｍ ＮａＣｌおよびｐＨ＝８の２ｍＭ エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）の水系バッファー２３．２４ｍｌ中、８７ｍｇの上の修飾された抗体に、４．３８ｍＬのＤＭＡおよび１７．７３ｍｇの４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジンを加え、磁気撹拌しつつ、１．４３ｍＬのジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）に溶解する。３０℃で１７時間後、混合物をＳｔｅｒｉｆｌｉｐ（登録商標）０．４５μｍ（ＰＶＤＦ Ｄｕｒａｐｏｒｅ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で濾過し、２０％ Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）を含むリン酸食塩水バッファーであらかじめ平衡状態にしておいたＳｕｐｅｒｄｅｘ（商標）２００分取グレードカラム（Ｈｉｌｏａｄ（商標）２６／６０ＧＥカラム）で３インジェクションによって精製する。目的のフラクションを合わせ、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ−１５（Ｕｌｔｒａｃｅｌ ５０ｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で濃縮し、次いで、１０％スクロースおよび５％ＮＭＰを含み、ヒスチジン濃度が１０ｍＭのｐＨ＝６．５の水系バッファーであらかじめ平衡状態にしておいたＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５（ＨｉＰｒｅｐ ２６／１０脱塩、ＧＥカラム）で濾過する。

得られた複合体（２８ｍＬ）を、ｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４の吸光係数ｅ_{２８０ｎｍ}＝２１９５２８Ｍ^−１ｃｍ^−１を用いた分光法によってアッセイし、抗体分子あたり、平均で３．１３のトマイマイシン（４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン）ダイマーを、濃度１．９９ｍｇ／ｍＬで決定した。

［実施例１０］
４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジンを含むＳＰＤＢで修飾された複合体ｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４の調製
ｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４から出発し、実施例８と同様に調製し、抗体分子あたり、平均で２．９２のトマイマイシン（４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン）ダイマーを決定した。

［実施例１１］
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートを用いた複合体ｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４の調製
１．５９ｍｇのｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４を、ｐＨ＝６．６のリン酸カリウムの濃度が０．０４３Ｍである水系バッファー１５０μＬに溶かし、この溶液に、６μＬの１Ｍ ＨＥＰＥＳ水溶液を加えた後、濃度が０．０５Ｍ Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、０．０５Ｍ ＮａＣｌおよびｐＨ＝８の２ｍＭ エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）の水系バッファー２６７μＬを加え、１００μＬのＤＭＡ、次いで、８３μｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミジル ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートを５μｌのＤＭＡに溶解した。３０℃で４時間後、混合物を、１０％スクロースおよび５％ＮＭＰを含み、ヒスチジン濃度が１０ｍＭのｐＨ＝６．５の水系バッファーであらかじめ平衡状態にしておいたＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５（ＮＡＰ−５ ＧＥカラム）で濾過する。

得られた複合体（１ｍＬ）を、エチル ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートの吸光係数（ｅ_{３２２ｎｍ}＝７９７１Ｍ^−１ｃｍ^−１およびｅ_{２８０ｎｍ}＝５２１９Ｍ^−１ｃｍ^−１）を用いた分光法によってアッセイし、抗体分子あたり、平均で４．１８のトマイマイシンダイマーを濃度１．１４ｍｇ／ｍＬで決定した。

細胞毒性複合体ｈｕ２Ｈ１１（または、それぞれｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４）を用いた、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞株の増殖阻害に関する評価
指数関数的な成長段階にあるＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をトリプシン処理し、培地（ＤＭＥＭ／Ｆ１２ Ｇｉｂｃｏ番号２１３３１、１０％ ＦＣＳ Ｇｉｂｃｏ番号１０５００−０５６、２ｎＭ グルタミン Ｇｉｂｃｏ番号２５０３０）に再び懸濁させる。細胞懸濁物を、血清を含む完全培地の入ったＣｙｔｏｓｔａｒ ９６ウェル培養プレート（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｅｕｒｏｐｅ、番号ＲＰＮＱ０１６３）に、密度が５０００細胞／ウェルになるように播種する。４時間インキュベートした後、抗体−細胞毒性剤免疫複合体の連続希釈物を、ウェルに濃度を１０^−７から１０^−１２Ｍまで減らしつつ加える（各濃度について３つ組）。５％ ＣＯ_２雰囲気下、抗体−細胞毒性剤免疫複合体が存在する状態で、細胞を３７℃で３日間培養する。４日目に、^１４Ｃ−チミジン（０．１μＣｉ／ウェル、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ番号ＮＥＣ５６８２５０００）の１０μＬの溶液を各ウェルに加える。実験開始から９６時間後、Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ放射線カウンター（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用い、^１４Ｃ−チミジンの組み込み量を測定する。データは、免疫複合体で処理した細胞を用いて得られた計測数と、コントロールウェルの細胞（培地のみで処理された。）を用いて得られた計測数との比率を決定することによって、生存率の形態で表す。アステリスク（＊）で示されている特定の実施形態において、覆われていない抗体ｈｕ２Ｈ１１（またはそれぞれｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４）を、実験開始時に濃度１μＭでウェルに加え、すでに記載したように増殖阻害を測定した。

Claims (29)

1. 式（Ｉ）：
   

   

   の化合物であって、式中、
   

   

   は、単結合または二重結合を表し、但し
   

   

   が単結合を表す場合には、
   Ｕおよび／またはＵ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈを表し；
   Ｗおよび／またはＷ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、ＯＨ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ、−ＣＯＯＲ、−ＯＣＯＯＲ、−ＯＣＯＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状カルバメート、−ＮＲＣＯＮＲＲ’、−ＯＣＳＮＨＲ、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状チオカルバメート、−ＳＨ、−ＳＲ、−ＳＯＲ、−ＳＯＯＲ、−ＳＯ_３ ⁻、−ＮＲＳＯＯＲ’、−ＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状アミン、−ＮＲＯＲ’、−ＮＲＣＯＲ’、−Ｎ_３、−ＣＮ、Ｈａｌ、トリアルキルホスホニウム基またはトリアリールホスホニウム基を表し、
   

   

   が二重結合を表す場合には、
   ＵおよびＵ’は存在せず、
   Ｗおよび／またはＷ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈを表すことを条件とし、
   Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_１’、Ｒ_２’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、あるいはＨａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ_３、ＯＲ、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、ｑ＝０、１または２であるＳ（Ｏ）_ｑＲを表し、
   または、
   Ｒ_１とＲ_２、および／またはＲ_１’とＲ_２’とがそれぞれ合わさって、二重結合＝ＣＨ_２または＝ＣＨ−ＣＨ_３を表し、
   ＹおよびＹ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈまたは−ＯＲを表し、
   Ｍは、ＣＨまたはＮを表し；
   ＡＬＫおよびＡＬＫ’は、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキレン基を示し、
   ＲおよびＲ’は、互いに独立して、Ｈ、あるいは、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ_３、ＯＲ、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基またはアリール基を表し、
   Ｌ_１は、
   単結合、
   または
   ｉが２から４０の範囲の整数を表す、酸素原子を介してフェニル環またはピリジル環に接続した−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−基、
   または
   −Ｏ−、−ＮＨ−または−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル−を表すＤを介してフェニル環またはピリジル環に接続した−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−基
   を表し、
   Ｌ_２は、
   −（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−基、
   または
   ｊが１から４０の範囲の整数を表す、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２−基、
   または
   ｊが１から４０の範囲の整数を表し、ならびにＲ”は、Ｈまたは（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基を表す、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）−単位を介して窒素原子に接続した−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−基
   を表し、
   Ｑは、単結合またはＣ（＝Ｏ）基を表し、
   ｋは、０から４０の範囲の整数を表し、
   Ｇは、−ＯＲ基または−ＮＲＲ’基を表し、ＲおよびＲ’は、すでに定義されたとおりであるか、またはこれらが結合している窒素原子とともに、Ｎ、ＯおよびＳから選択される別のヘテロ原子を環に含んでいてもよく、ならびに（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基、ハロゲン原子およびヒドロキシル基から選択される少なくとも１個の置換基で場合により置換されていてもよい（Ｃ_４−Ｃ_１０）ヘテロシクロアルキル基を形成し、
   ＲＣＧ１は、−ＳＺ_ａ基または−Ｃ（＝Ｏ）−Ｚ_ｂＲ_ｂ基を表し、
   Ｚ_ａは、Ａｃ、Ｒ_ａまたはＳＲ_ａを表し、
   Ｒ_ａは、Ｈ、あるいは、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ_３、ＯＲ、ＮＯ_２、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、（Ｃ_３−Ｃ_８）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ_４−Ｃ_１０）ヘテロシクロアルキル基を表し、
   Ｚ_ｂは、単結合、−Ｏ−または−ＮＨ−を表し、ならびにＲ_ｂは、Ｈ、あるいは（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、（Ｃ_３−Ｃ_８）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ_４−Ｃ_１０）ヘテロシクロアルキル基を表すか、または、Ｚ_ｂは、単結合を表し、およびＲ_ｂは、Ｈａｌを表し、但し
   Ｌ_１が単結合を表す場合には、ＲＣＧ１は−ＳＺ_ａを表すことを条件とする、
   化合物。
2. Ｕ＝Ｕ’および／またはＷ＝Ｗ’および／またはＲ_１＝Ｒ_１’および／またはＲ_２＝Ｒ_２’および／またはＹ＝Ｙ’および／またはフェニル核またはピリジル核に接続するＡＬＫおよびＡＬＫ’という２個の基が同じである、請求項１に記載の化合物。
3. 式（ＩＡ）または（ＩＢ）：
   

   

   の請求項１に記載の化合物。
4. 式（ＩＡ）：
   

   

   の請求項３に記載の化合物。
5. ＹおよびＹ’が、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルコキシ基を表す、請求項１から４に記載の化合物。
6. ＭがＮを表す、請求項１から５に記載の化合物。
7. Ｌ_１が単結合を表す場合、Ｌ_２が、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊＣＨ_２ＣＨ_２−または−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−を表す、請求項１から６の一項に記載の化合物。
8. Ｇが、−ＯＨ基、−Ｏ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、−ＮＨ_２基、−ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基または−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル_２基を表すか、または、Ｇが、−ＮＲＲ’基を表し、ここで、ＲとＲ’が、これらが結合している窒素原子とともに、Ｎ、ＯおよびＳから選択される別のヘテロ原子を環に含んでいてもよく、ならびに（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基、ハロゲン原子およびヒドロキシル基から選択される少なくとも１個の置換基で場合により置換されていてもよい（Ｃ_４−Ｃ_１０）ヘテロシクロアルキル基を形成する、請求項１から７の一項に記載の化合物。
9. Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−およびＬ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−；または
   Ｌ_１＝−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−およびＬ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−；または
   Ｌ_１＝単結合およびＬ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−；または
   Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−およびＬ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−；または
   Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−およびＬ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２−
   である、請求項１から８の一項に記載の化合物。
10. Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
    Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
    Ｌ_１＝−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
    Ｌ_１＝−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
    Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
    Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
    Ｌ_１＝単結合、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
    Ｌ_１＝単結合、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
    Ｌ_１＝単結合、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
    Ｌ_１＝単結合、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
    Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
    Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
    Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
    Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ”−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺ_ａ；
    Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
    Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
    Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
    Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
    Ｌ_１＝−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
    Ｌ_１＝−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
    Ｌ_１＝−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
    Ｌ_１＝−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−、Ｌ_２＝−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
    Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
    Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
    Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２−、Ｑ＝単結合、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂ；
    Ｌ_１＝−Ｄ−（Ｃ_１−Ｃ_６）ＡＬＫ−、Ｌ_２＝−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｊ−ＣＨ_２ＣＨ_２−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ｂＲ_ｂである、請求項１から８に記載の化合物。
11. −ＣＯＺ_ｂＲ_ｂが、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、
    

    

    または
    

    

    基を表し、ＩＧが、少なくとも１個の誘導基または
    

    

    を表す、請求項１から１０に記載の化合物。
12. −ＳＺ_ａが、−ＳＨまたは−ＳＳ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキルまたは−ＳＳ−ヘテロアリールを表す、請求項１から１０に記載の化合物。
13. 以下：
    

    

    

    の１つから選択される、請求項１に記載の化合物。
14. 複合体を調製する方法であって、
    （ｉ）場合により緩衝化した、場合により修飾剤を用いて修飾した結合剤の水溶液、
    および
    請求項１から１３のうち一項に定義されている通りの式（Ｉ）の化合物の溶液
    を接触させ、放置して反応させる工程であって、
    式（Ｉ）の化合物の化学基ＲＣＧ１は、結合剤に存在する化学基ＲＣＧ２に対して、特に抗体に存在するアミノ基に対して反応性であり、前記化学基ＲＣＧ２は、必要に応じて、共有結合の生成を伴って、式（Ｉ）の化合物が結合剤に接続するように修飾剤によって導入されている工程、
    （ｉｉ）次いで、場合により、工程（ｉ）で生成した複合体を式（Ｉ）の化合物および／または未反応の結合剤および／または生成し得る任意の凝集物から分離する工程
    を含む、方法。
15. −ＳＺ_ａ型の反応性化学基ＲＣＧ１を含む式（Ｉ）の誘導体存在下、結合剤が、
    ＲＣＧ１が−ＳＨを表す場合には、ジスルフィド化学基；
    ＲＣＧ１が−ＳＺ_ａを表し、Ｚ_ａがＨではない場合には、チオール化学基；
    ＲＣＧ１が−ＳＨを表す場合には、マレイミド化学基またはハロアセトアミド化学基
    を含み、
    −Ｃ（＝Ｏ）−Ｚ_ｂＲ_ｂ型の反応性化学基ＲＣＧ１を含む式（Ｉ）の誘導体存在下、式（Ｉ）の誘導体が、結合剤のアミノ官能基、特に、抗体のリシン（Ｌｙｓ）残基の側鎖に担持されるε−アミノ基と反応する、
    請求項１４に記載の方法。
16. 反応性化学基ＲＣＧ１が−ＳＨ型である場合、および結合剤にアミン官能基、特に、抗体のリシン残基の側鎖に担持されるε−アミノ基、が含まれる場合、後者は、式
    

    

    の化合物（式中、Ｒは、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、（Ｃ_３−Ｃ_７）シクロアルキル基、（Ｃ_４−Ｃ_１０）ヘテロシクロアルキル基を表す）；
    

    

    式
    

    

    のペグ化類似体、または式
    

    

    のスルホン酸類似体を表し、（Ｘ_３、Ｘ_４、Ｘ_５、Ｘ_６は、Ｈまたは（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基を表し、Ｘ_１およびＸ_２は、−Ｈ、−ＣＯＮＸ_８Ｘ_９、−ＮＯ_２を表し、Ｘ_８およびＸ_９は、Ｈまたは（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基を表し、Ｘ_７は、−ＳＯ_３ ⁻Ｍ^＋またはＨを表すか、または、四級アンモニウム基を表し、ならびにａは０から４の範囲の整数を示し、およびｂは、０から２０００の範囲の整数を示す。）から選択される；または、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート；スルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート；
    

    

    （Ｒは、−（ＣＨ_２）_ｎ−基、−（ＣＨ_２）_ｎ−シクロヘキシル−基、−シクロへキシル−（ＣＨ_２）_ｎ−基を表し、ならびにｎは１から１０の範囲の整数である）；
    
    

    

    （ｂは０から２０００の整数である）；
    

    

    スクシンイミジル−Ｎ−ブロモアセテート；スクシンイミジル−３−（Ｎ−ブロモアセトアミド）プロピオネート；
    

    

    （ｂは０から２０００の整数である）
    から選択される修飾剤によって修飾され、
    反応性化学基ＲＣＧ１が−ＳＺ_ａ型であり、Ｚ_ａがＨではない場合、および結合剤にアミン官能基、特に、抗体のリシン残基の側鎖に担持されるε−アミノ基、が含まれる場合、後者は、式
    

    

    の化合物から選択される修飾剤によって修飾され、ここで、
    −Ｈａｌは、ハロゲン原子を表し；
    −Ｘ_１０は、ハロゲン原子または−ＣＯＯＸ_１４基、ニトロ、非置換またはハロゲン化（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル、非置換またはハロゲン化（Ｃ_１−Ｃ_８）アルコキシ、非置換またはハロゲン化（Ｃ_２−Ｃ_８）アルケニル、非置換またはハロゲン化（Ｃ_２−Ｃ_８）アルキニル、非置換（Ｃ_３−Ｃ_８）シクロアルキル、非置換アリール、あるいはアミノ、ハロゲン原子、非置換またはハロゲン化（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル基、非置換またはハロゲン化（Ｃ_１−Ｃ_８）アルコキシから選択される１から３個の置換基で置換されたアリールを表し；
    −Ｘ_１１、Ｘ_１２、Ｘ_１３は、それぞれ独立して、水素原子を表すか、または、Ｘ_１０を表していてもよく；
    または、Ｘ_１０とＸ_１１が一緒に、非置換か、または１から５個の（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基で置換された（Ｃ_２−Ｃ_５）アルキレン環を形成するか；
    または、Ｘ_１０またはＸ_１１が、Ｘ_１２と一緒に、非置換か、または１から５個の（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基で置換された（Ｃ_１−Ｃ_５）アルキレン環を形成し、
    ならびにＸ_１４は、−Ｈまたは（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル基であり、
    またはＸ_１０＝Ｘ_１１＝Ｘ_１２＝Ｘ_１３＝Ｈであり、
    反応性化学基ＲＣＧ１が−ＳＨ型である場合、および結合剤がチオール官能基を、特に、アミノ官能基を担持する結合剤の変異によってまたは化学修飾することによってシステインを導入した後に、担持する場合、結合剤は、チオール官能基ジスルフィド官能基に変換されるように修飾されるが、より具体的には、式
    

    

    の化合物（Ｘ_１およびＸ_２は、−Ｈ、−ＣＯＮＸ_８Ｘ_９または−ＮＯ_２を表し、Ｘ_８およびＸ_９は、Ｈまたは（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基を表す）
    から選択される修飾剤を用いることによって修飾される、請求項１４または１５に記載の方法。
17. 請求項１４から１６の一項に記載の方法を介し得られ得る複合体。
18. 請求項１４から１６の一項に記載の方法を介し得られ得る複合体溶液、または請求項１７に定義される複合体を含む複合体溶液。
19. 式
    

    

    のダイマーがＭのパラ位において共有結合する結合剤を調製するための、請求項１から１３の一項に記載の式（Ｉ）の誘導体の使用。
20. 結合剤が抗体である、請求項１９に記載の使用。
21. ダイマーが式：
    

    

    を有する、請求項１９または２０に記載の使用。
22. 抗癌剤として使用するための請求項１から１３の一項に記載の化合物。
23. 抗癌剤として使用するための請求項１７に記載の複合体。
24. 抗癌剤として使用するための請求項１８に記載の複合体溶液。
25. 式Ｐ_２：
    

    

    の化合物であって、式中、
    Ｌ_１、Ｌ_２、Ｑ、ｋ、ＡＬＫ、ＡＬＫ’およびＧは、請求項１から９の一項に定義したとおりであり、
    ＬＧおよびＬＧ’は、脱離基を表し、
    Ｘ’はＲＣＧ１を表す、
    化合物。
26. 請求項１から１３の一項に記載の化合物の調製における中間体化合物としての、請求項２５に記載の化合物の使用。
27. 請求項１から１３の一項に定義される化合物と結合剤とを反応させた後に、式
    

    

    のダイマーがＭのパラ位に共有結合した結合剤。
28. 腫瘍に関連する癌細胞または間質細胞上に位置する抗原または抗原群に対して親和性を有する、請求項２７に記載の結合剤。
29. 抗体、好ましくはモノクローナル抗体である、請求項２７または２８に記載の結合剤。

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