JP2013525290A

JP2013525290A - Ｋｓｐ阻害剤としてのオキサゾールおよびチアゾール化合物

Info

Publication number: JP2013525290A
Application number: JP2013504270A
Authority: JP
Inventors: ポール・エイ・バーサンティ; ユ・ディング; ハン・ウソク
Original assignee: ノバルティスアーゲー
Priority date: 2010-04-15
Filing date: 2011-04-13
Publication date: 2013-06-20
Also published as: WO2011128388A3; US20130224186A1; WO2011128388A2; CN103153970A; US8748626B2; EP2558452A2

Abstract

開示されているのは、式(Ｉ)

の新規置換オキサゾールおよびチアゾール化合物およびその薬学的に許容される塩類、エステル類またはプロドラッグ、薬学的に許容される担体と一体となった当該化合物の組成物、およびその使用である。

Description

発明の分野
本発明は、一般的にオキサゾールおよびチアゾール化合物およびその薬学的に許容される塩類、エステル類またはプロドラッグに関する。本発明は、さらに、薬学的に許容される担体と一体となった当該化合物の組成物、当該化合物の使用、その製造および関連中間体に関する。

技術水準
キネシン類は、微小管に結合し、機械力を発生させるためにアデノシン三リン酸を使用するモータータンパク質である。キネシン類は、約３５０アミノ酸残基を有するモータードメインにより特徴付けられる。数種のキネシンモータードメインの結晶構造が解析されている。

現在、約１００種のキネシン関連タンパク質(ＫＲＰ)が同定されている。キネシン類は、小器官および小胞の輸送および小胞体の維持を含む多様な細胞生物学的過程に関与する。数種のＫＲＰは紡錘体の微小管と相互作用するかまたは染色体と直接相互作用し、細胞周期の有糸分裂段階で中心的役割を有するように見える。これらの有糸分裂ＫＲＰは、癌治療の開発に特に興味深い。

キネシン紡錘体タンパク質(ＫＳＰ)(Ｅｇ５、ＨｓＥｇ５、ＫＮＳＬ１またはＫＩＦ１１としても知られる)は、紡錘体に位置し、双極性紡錘体の形成および／または機能に必要であることが知られる数種のキネシン様モータータンパク質の一つである。

１９９５年に、ＫＳＰのＣ末端に対する抗体を使用したＫＳＰの涸渇が、ＨｅＬａ細胞の有糸分裂を一星状細胞微小管配列で停止させることが示された(Blangy et al., Cell 83:1159-1169, 1995)。ＫＳＰのホモログと見なされているｂｉｍＣおよびｃｕｔ７遺伝子の変異は、アスペルギルス・ニデュランス(Aspergillus nidulans)(Enos, A.P., and N.R. Morris, Cell 60:1019-1027, 1990)およびシゾサッカロミセス・ポンベ(Schizosaccharomyces pombe)(Hagan, I., and M. Yanagida, Nature 347:563-566, 1990)における中心体分離を阻止した。タンパク質レベルでＫＳＰ発現を減少させるＡＴＲＡ(全トランスレチノイン酸)またはアンチセンスオリゴヌクレオチド類を使用するＫＳＰ涸渇のいずれかでの細胞の処置はＤＡＮ−Ｇ膵臓癌細胞の顕著な増殖阻害を示し、ＫＳＰが全トランスレチノイン酸の抗増殖作用に関与することを示唆する(Kaiser, A., et al., J. Biol. Chem. 274, 18925-18931, 1999)。興味深いことに、アフリカツメガエルオーロラ関連タンパク質キナーゼｐＥｇ２はＸｌＥｇ５への結合およびリン酸化を示した(Giet, R., et al., J. Biol. Chem. 274:15005-15013, 1999)。オーロラ関連キナーゼ類の潜在的基質は、抗癌剤開発上特に興味深い。例えば、オーロラ１キナーゼおよび２キナーゼは結腸癌患者でタンパク質レベルでおよびＲＮＡレベルで過発現し、遺伝子は増幅されている。

ＫＳＰに対する最初の細胞透過性小分子阻害剤である“モナストロール”は、タキサン類およびビンカアルカロイドのような慣用の治療剤のように微小管重合に影響することなく、単極性紡錘体で細胞を停止させることが示された(Mayer, T.U., et al., Science 286:971-974, 1999)。モナストロールは、表現型ベースのスクリーニングで阻害剤として同定され、この化合物が抗癌剤開発のリード化合物として役立ち得ることが示唆された。阻害はアデノシン三リン酸に関して競合的ではなく、急速に可逆性であることが決定された(DeBonis, S., et al., Biochemistry, 42:338-349, 2003; Kapoor, T.M., et al., J. Cell Biol., 150:975-988, 2000)。

化学療法剤の改良が重要であることを考慮すると、ＫＳＰおよびＫＳＰ関連タンパク質の有効なインビボ阻害剤であるＫＳＰ阻害剤の必要性がある。

発明の要約
一つの態様において、本発明は置換オキサゾールおよびチアゾール化合物およびその薬学的に許容される塩類、エステル類またはプロドラッグ、その製造、医薬組成物およびＫＳＰ仲介疾患の処置のための使用に関し、ここで、該化合物は式(Ｉ)：

〔式中、
Ｒ^１はアルキル、分枝鎖アルキルおよび置換アルキルから成る群から選択され；
Ｒ^２は水素、アルキルおよび置換アルキルから成る群から選択され；
Ｒ^３は−Ｌ^１−Ａ^１であり、ここで、Ｌ^１は−Ｃ(Ｏ)−、−Ｃ(Ｓ)−、−Ｓ(Ｏ)−および−Ｓ(Ｏ)_２−から成る群から選択され、Ａ^１はアルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキルおよびＮＲ^８Ｒ^９から成る群から選択され；
Ｒ^４は水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニルおよび置換アルキニルおよび場合により置換されていてよいピロリジニルから成る群から選択され；
またはＲ^３およびＲ^４は、それらが結合している窒素原子と一体となって５〜７員ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル基を形成し、ここで、場合により１個の炭素環原子はＯ、ＳまたはＮＲ^１１から成る群から選択されてよく；
ＸはＯまたはＳであり；
Ｒ^６はシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールから成る群から選択され、この全ては場合により−(Ｒ^１０)_ｍで置換されていてよく、ここで、Ｒ^１０はここに定義したとおりであり、ｍは１、２、３または４であり、ｍが２、３または４であるとき、各Ｒ^１０は同一でも異なってもよく；
Ｒ^７は−Ｌ^２−Ａ^２であり、ここで、Ｌ^２はＣ_１−Ｃ_５アルキレンであり、Ａ^２はアリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクロアルキルおよび置換ヘテロシクロアルキルから成る群から選択され、ただし、Ｒ^７はＸに結合しておらず；
Ｒ^８は水素およびアルキルから成る群から選択され；
Ｒ^９は水素、ヒドロキシ、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクロアルキルおよび置換ヘテロシクロアルキルから成る群から選択され；
またはＲ^８およびＲ^９は、それに結合した窒素原子と一体となってヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキルを形成し；
Ｒ^１０はシアノ、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、−ＣＦ_３、アルコキシ、置換アルコキシ、ハロおよびヒドロキシから成る群から選択され；
Ｒ^１１は水素、アルキル、置換アルキル、−ＳＯ_２アルキルおよび−ＳＯ_２置換アルキルから成る群から選択される。〕
により表される。

発明の詳細な記載
本発明の化合物は、式(Ｉ)：

〔式中、
Ｒ^１はアルキル、分枝鎖アルキルおよび置換アルキルから成る群から選択され；
Ｒ^２は水素、アルキルおよび置換アルキルから成る群から選択され；
Ｒ^３は−Ｌ^１−Ａ^１であり、ここで、Ｌ^１は−Ｃ(Ｏ)−、−Ｃ(Ｓ)−、−Ｓ(Ｏ)−および−Ｓ(Ｏ)_２−から成る群から選択され、Ａ^１はアルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキルおよびＮＲ^８Ｒ^９から成る群から選択され；
Ｒ^４は水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニルおよび置換アルキニルおよび場合により置換されていてよいピロリジニルから成る群から選択され；
またはＲ^３およびＲ^４は、それらが結合している窒素原子と一体となって５〜７員ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル基を形成し、ここで、場合により１個の炭素環原子はＯ、ＳまたはＮＲ^１１から成る群から選択されてよく；
ＸはＯまたはＳであり；
Ｒ^６はシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールから成る群から選択され、この全ては場合により−(Ｒ^１０)_ｍで置換されていてよく、ここで、Ｒ^１０はここに定義したとおりであり、ｍは１、２、３または４であり、ｍが２、３または４であるとき、各Ｒ^１０は同一でも異なってもよく；
Ｒ^７は−Ｌ^２−Ａ^２であり、ここで、Ｌ^２はＣ_１−Ｃ_５アルキレンであり、Ａ^２はアリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクロアルキルおよび置換ヘテロシクロアルキルから成る群から選択され、ただし、Ｒ^７はＸに結合しておらず；
Ｒ^８は水素およびアルキルから成る群から選択され；
Ｒ^９は水素、ヒドロキシ、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクロアルキルおよび置換ヘテロシクロアルキルから成る群から選択され；
またはＲ^８およびＲ^９は、それに結合した窒素原子と一体となってヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキルを形成し；
Ｒ^１０はシアノ、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、−ＣＦ_３、アルコキシ、置換アルコキシ、ハロおよびヒドロキシから成る群から選択され；
Ｒ^１１は水素、アルキル、置換アルキル、−ＳＯ_２アルキルおよび−ＳＯ_２置換アルキルから成る群から選択される。〕
の化合物またはその薬学的に許容される塩、エステルまたはプロドラッグを含む。

好ましい態様は、Ｒ^１がアルキルである式(Ｉ)の化合物を提供する。他の好ましい態様は、Ｒ^２がＣ_１−４アルキルまたはＨであり、Ｈがさらに好ましい式(Ｉ)の化合物を提供する。さらに別の態様は、Ｒ^１がｉ−プロピルまたはｔ−ブチルである式(Ｉ)の化合物を提供する。さらに別の態様で提供されるのは、Ｒ^３が−Ｌ^１−Ａ^１から選択され、ここで、Ｌ^１が−Ｃ(Ｏ)−、−Ｃ(Ｓ)−、−Ｓ(Ｏ)−および−Ｓ(Ｏ)_２−から成る群から選択され、Ａ^１がアルキルおよび置換アルキルから成る群から選択される式(Ｉ)の化合物である。さらに好ましい態様は、Ｒ^３が−Ｌ^１−Ａ^１から選択され、ここで、Ｌ^１が−Ｃ(Ｏ)−であり、Ａ^１が置換アルキルである式(Ｉ)の化合物を提供する。

本発明の他の態様は、Ｒ^４が水素、アルキルおよび置換アルキルから成る群から選択され、好ましくはＲ^４が置換アルキルまたは−ＣＨ_２−フルオロピロリジニルである式(Ｉ)の化合物である。他の態様で提供されるのは、Ｒ^３が−Ｌ^１−Ａ^１から選択され、ここで、Ｌ^１が−Ｃ(Ｏ)−であり、Ａ^１が−ＣＨ(ＣＨ_３)ＯＨである式(Ｉ)の化合物である。さらに別の態様は、Ｒ^４が−(ＣＨ_２)_２−ＣＨ(ＣＨ_２Ｆ)ＮＨ_２または−ＣＨ_２−３−フルオロピロリジニルである式(Ｉ)の化合物を提供する。さらに好ましい態様は、Ｒ^６がアリールおよびヘテロアリールから成る群から選択され、その全てが場合により−(Ｒ^１０)_ｍで置換されていてよく、ここで、Ｒ^１０が上に定義したとおりであり、ｍが１、２、３または４であり、ｍが２、３または４であるとき、各Ｒ^１０が同一でも異なってもよく；Ｒ^７が−Ｌ^２−Ａ^２であり、ここで、Ｌ^２がＣ_１−Ｃ_２アルキレンであり、Ａ^２がアリールおよびヘテロアリールから成る群から選択される、式(Ｉ)の化合物を提供する。好ましくはこの態様は、Ｒ^６が２個のＲ^１０基で置換されたアリール基である式(Ｉ)の化合物であり、Ｒ^６がフェニルであるとき、２個のフッ素原子で置換されているのがさらに好ましい。

本発明のさらに別の態様は、Ｒ^７が−ＣＨ_２−アリール、好ましくは、Ｒ^７が−ＣＨ_２−フェニルであり、Ｒ^６が１,４−ジフルオロ−フェニルである、式(Ｉ)の化合物を提供する。特に好ましい式(Ｉ)の化合物は次のものから選択される：

本発明の他の面は、治療有効量の式(Ｉ)の化合物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。この面の好ましい態様は、少なくとも１種の付加的癌処置剤を含む組成物を提供する。付加的癌処置剤がイリノテカン、トポテカン、ゲムシタビン、イマチニブ、トラスツマブ、５−フルオロウラシル、ロイコボリン、カルボプラチン、シスプラチン、ドセタキセル、パクリタキセル、テザシタビン、シクロホスファミド、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン系、リツキシマブおよびトラスツマブから成る群から選択されるのが好ましい。

本発明のさらに別の面は、哺乳動物患者における、少なくとも一部ＫＳＰにより介在される障害の処置方法であって、当該処置を必要とする哺乳動物患者に治療有効量の式(Ｉ)の化合物を含む治療有効量の組成物を投与することを含む、方法を提供する。本発明のこの面の好ましい態様は、処置する障害が細胞増殖性疾患である、特に該細胞増殖性疾患が癌であるものを提供する。さらに本発明のこの面の好ましい態様は、癌が肺および気管支；前立腺；乳；膵臓；結腸および直腸；甲状腺；胃；肝臓および肝内胆管；腎臓および腎盂；膀胱；子宮体；子宮頸；卵巣；多発性骨髄腫；食道；急性骨髄性白血病；慢性骨髄性白血病；リンパ性白血病；骨髄球性白血病；脳；口腔および咽頭；喉頭；小腸；非ホジキンリンパ腫；黒色腫；および絨毛結腸腺腫から成る群から選択される。

本発明のさらに別の面は、哺乳動物患者における、少なくとも一部ＫＳＰにより介在される障害の処置方法であって、当該処置を必要とする哺乳動物患者に治療有効量の式(Ｉ)の化合物を含む治療有効量の組成物および付加的薬剤を投与することを含む、方法を提供する。この面の好ましい態様は、付加的癌処置剤がイリノテカン、トポテカン、ゲムシタビン、イマチニブ、トラスツマブ、５−フルオロウラシル、ロイコボリン、カルボプラチン、シスプラチン、ドセタキセル、パクリタキセル、テザシタビン、シクロホスファミド、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン系、リツキシマブおよびトラスツマブから成る群から選択される方法を提供する。

本発明のさらに別の面は、哺乳動物患者におけるＫＳＰキネシンを阻害する方法であって、患者に有効なＫＳＰ阻害量の式(Ｉ)の化合物を投与することを含む、方法を提供する。この面の好ましい態様は、式(Ｉ)の化合物が次のものから選択されるものを提供する：

本発明の代表的化合物
本発明の範囲内の具体的化合物を表１および２および実験の章に例示する。

Ｂ. 定義および大要
上記のとおり、本発明は一部新規置換オキサゾールおよびチアゾール化合物に関する。

ここで使用する用語は単に特定の態様を述べる目的であり、本発明の範囲を限定しないことは当然である。本明細書でおよび特許請求の範囲で、単数表現は、文脈から他の解釈が必要でない限り複数も含むことは注意すべきである。本明細書および添付する特許請求の範囲において、次の意味を有すると定義する多くの用語をについて述べる：

ここで使用する“アルキル”は、１〜６個の炭素原子、より好ましくは１〜３個の炭素原子を有する一価飽和脂肪族ヒドロカルビル基を意味する。本用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチルなどのような基により例示される。

“置換アルキル”は、アルコキシ、置換アルコキシ、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アリール、置換アリール、アリールオキシ、置換アリールオキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、スピロシクロアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環式、置換ヘテロ環式、−ＳＯ_２−アルキルおよび−ＳＯ_２置換アルキルから成る群から選択される１〜３個、好ましくは１〜２個の置換基を有するアルキル基を意味する。

“アルキレン”は、直鎖または分枝鎖である、好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜３個の炭素原子を有する二価飽和脂肪族ヒドロカルビル基を意味する。本用語は、メチレン(−ＣＨ_２−)、エチレン(−ＣＨ_２ＣＨ_２−)、ｎ−プロピレン(−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−)、イソ−プロピレン(−ＣＨ_２ＣＨ(ＣＨ_３)−)または(−ＣＨ(ＣＨ_３)ＣＨ_２−)などのような基により例示される。

“アルコキシ”は、一例として、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｎ−ペントキシなどを含む、“アルキル−Ｏ−”を意味する。

“置換アルコキシ”は基“置換アルキル−Ｏ−”を意味する。

“アルケニル”は、２〜６個の炭素原子、好ましくは２〜４個の炭素原子を有し、少なくとも１個所、好ましくは１〜２個所のアルケニル不飽和を有する、アルケニル基を意味する。このような基は、ビニル、アリル、ブト−３−エン−１−イルなどにより例示される。

“置換アルケニル”は、アルコキシ、置換アルコキシ、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アリール、置換アリール、アリールオキシ、置換アリールオキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環および置換ヘテロ環から成る群から選択される１〜３個の置換基、好ましくは１〜２個の置換基を有する(ただし、ヒドロキシ置換基はビニル(不飽和)炭素原子に結合しない)アルケニル基を意味する。

“アミノ”は基−ＮＨ_２を意味する。

“シアノ”は基−ＣＮを意味する。

“置換アミノ”は基−ＮＲ’Ｒ”(式中、Ｒ’およびＲ”は独立して水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環式、置換ヘテロ環式、−ＳＯ_２−アルキルおよび−ＳＯ_２−置換アルキル、ならびに、Ｒ’およびＲ”がいずれも水素ではないとき、Ｒ’およびＲ”がそれらが結合している窒素と一体となって、ヘテロ環式または置換ヘテロ環基を形成するものから成る群から選択され)を意味する。Ｒ’が水素であり、Ｒ”がアルキルであるとき、置換アミノ基は本明細書でアルキルアミノと呼ぶこともある。Ｒ’およびＲ”がアルキルであるとき、置換アミノ基は本明細書でジアルキルアミノと呼ぶこともある。一置換アミノを言うとき、Ｒ’またはＲ”が水素であるが、両方が水素ではないことを意味する。二置換アミノを言うとき、Ｒ’もＲ”も水素ではないことを意味する。

“ニトロ”は基−ＮＯ_２を意味する。

“アリール”または“Ａｒ”は、単環(例えば、フェニル)また縮合多環(例えば、ナフチルまたはアントリル)の６〜１４個の炭素原子を有する一価芳香族性炭素環基を意味し、該縮合環は結合点が芳香族性炭素原子である限り芳香族性であってもなくてもよい(例えば、２−ベンズオキサゾリノン、２Ｈ−１,４−ベンズオキサジン−３(４Ｈ)−オン−７−イルなど)。好ましいアリール類はフェニルおよびナフチルを含む。

“置換アリール”は、ヒドロキシ、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アリール、置換アリール、アリールオキシ、置換アリールオキシ、カルボキシル、カルボキシルエステル、シアノ、チオール、アルキルチオ、置換アルキルチオ、アリールチオ、置換アリールチオ、ヘテロアリールチオ、置換ヘテロアリールチオ、シクロアルキルチオ、置換シクロアルキルチオ、ヘテロ環式チオ、置換ヘテロ環式チオ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環式、置換ヘテロ環式、ヘテロアリールオキシ、置換ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリルオキシ、置換ヘテロシクリルオキシ、アミノスルホニル(ＮＨ_２−ＳＯ_２−)および置換アミノスルホニルから成る群から選択される１〜３個の置換基、好ましくは１〜２個の置換基で置換されているアリール基を意味する。

“カルボキシル”は−ＣＯＯＨまたはその塩類を意味する。

“シクロアルキル”は、一例として、アダマンチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチルなどを含む、単環または多環を有する３〜１０個の炭素原子の環状アルキル基を意味する。

“置換シクロアルキル”は、アルキル、置換アルキル、オキソ(＝Ｏ)、チオキソ(＝Ｓ)、アルコキシ、置換アルコキシ、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アリール、置換アリール、アリールオキシ、置換アリールオキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環式、置換ヘテロ環式、−ＳＯ_２−アルキルおよび−ＳＯ_２−シクロアルキルから成る群から選択される１〜５個の置換基を有するシクロアルキル基を意味する。

“ハロ”または“ハロゲン”はフルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを意味し、好ましくはフルオロまたはクロロである。

“ヒドロキシ”は基−ＯＨを意味する。

“ヘテロアリール”は、環内に１〜１０個の炭素原子および１〜４個の酸素、窒素および硫黄から成る群から選択されるヘテロ原子を有する芳香族基を意味する。当該ヘテロアリール基は、単環(例えば、ピリジニルまたはフリル)または縮合多環(例えば、インドリジニルまたはベンゾチエニル)であってよく、ここで、縮合環は結合点が芳香族性ヘテロアリール基の原子を介する限り、芳香族性であってもなくてもよくおよび／またはヘテロ原子を含んでも含まなくてもよい。一つの態様において、ヘテロアリール基の窒素および／または硫黄環原子は、場合により酸化されてＮ−オキシド(Ｎ→Ｏ)基、スルフィニル基またはスルホニル基となってよい。好ましいヘテロアリール類は、ピリジニル、ピロリル、インドリル、チオフェニルおよびフラニルを含む。

“置換ヘテロアリール”は、置換アリールについて定義したのと同じ置換基の群から選択される１〜３個の置換基で置換されているヘテロアリール基を意味する。

“窒素含有ヘテロアリール”および“窒素含有置換ヘテロアリール”は、少なくとも１個の窒素環原子を含み、場合により硫黄、酸素などの非窒素ヘテロ環原子を含んでよいヘテロアリール基および置換ヘテロアリール基を意味する。

“ヘテロ環”または“ヘテロ環式”または“ヘテロシクロアルキル”または“ヘテロシクリル”は、単環、縮環系、架橋環系およびスピロ環系を含む多縮合環を有する、環内に１〜１０個の炭素原子および窒素、硫黄または酸素から成る群から選択される１〜４個のヘテロ原子を含む飽和または不飽和(しかし芳香族ではない)基を意味し、ここで、縮合環系において、結合点がヘテロ環式環を介する限り、環の１個以上はシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであってよい。一つの態様において、ヘテロ環基の窒素および／または硫黄原子は、場合により酸化されてＮ−オキシド基、スルフィニル基およびスルホニル基となってよい。

“置換ヘテロ環式”または“置換ヘテロシクロアルキル”または“置換ヘテロシクリル”は、置換シクロアルキルについて定義したのと同じ置換基の群から選択される１〜３個の置換基で置換されているヘテロシクリル基を意味する。

ヘテロシクリル類およびヘテロアリール類の例は、アゼチジン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、ジヒドロインドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチルピリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナントロリン、イソチアゾール、フェナジン、イソオキサゾール、フェノキサジン、フェノチアジン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドリン、フタルイミド、１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン、４,５,６,７−テトラヒドロベンゾ[ｂ]チオフェン、チアゾール、チアゾリジン、チオフェン、ベンゾ[ｂ]チオフェン、モルホリニル、チオモルホリニル(チアモルホリニルとも呼ぶ)、１,１−ジオキソチオモルホリニル、ピペリジニル、ピロリジン、テトラヒドロフラニルなどを含むが、これらに限定されない。

“窒素含有ヘテロ環式”および“窒素含有置換ヘテロ環式”は、少なくとも１個の窒素環原子を含み、場合により硫黄、酸素などの非窒素ヘテロ環原子を含んでよいヘテロ環基および置換ヘテロ環基を意味する。

ここで使用する“生物学的活性”は、実施例９〜１１のいずれかに概説したアッセイの少なくとも１種で試験したとき、および、少なくともその一つの例で定義したとおり、阻害濃度を意味する。

ここで使用する用語“薬学的に許容される塩類”は、式(Ｉ)の化合物の非毒性酸塩類またはアルカリ土類金属塩類を意味する。これらの塩類は、式(Ｉ)の化合物の最終の単離および精製中にインサイチュで、または別途塩基または酸と適当な有機または無機酸または塩基をそれぞれ反応させることにより、製造できる。代表的塩類は次のものを含むが、これらに限定されない：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、グルコヘプト酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびウンデカン酸塩。また、塩基性窒素含有基を、アルキルハライド類、例えばメチル、エチル、プロピルおよびブチルの塩化物、臭化物およびヨウ化物；ジメチル、ジエチル、ジブチルおよびジアミルの硫酸エステルのような硫酸ジアルキル、長鎖ハライド類、例えばデシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリルの塩化物、臭化物およびヨウ化物、ベンジルおよびフェネチルの臭化物のようなアラルキルハライド類などのような試薬で４級化できる。それにより、水または油可溶性または分散性生成物を得る。

薬学的に許容される酸付加塩類の製造に用い得る酸類の例は、塩酸、硫酸およびリン酸のような無機酸類およびシュウ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、コハク酸およびクエン酸のような有機酸類を含む。塩基付加塩類は、式(Ｉ)の化合物の最終単離および精製中にインサイチュで、または別途カルボン酸基と適当な薬学的に許容される金属カチオンの水酸化物、炭酸塩または重炭酸塩またはアンモニアまたは有機１級、２級または３級アミンのような塩基を反応させることにより、製造できる。薬学的に許容される塩類は、アルカリ金属およびアルカリ土類金属に基づくカチオン、例えばナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム塩類など、ならびにアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどを含むが、これらに限定されないアンモニウム、４級アンモニウムおよびアミンカチオンを含むが、これらに限定されない。塩基付加塩類の形成に有用な他の代表的有機アミン類は、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなどを含む。

ここで使用する用語“薬学的に許容されるエステル”は、インビボで加水分解可能なエステル類を意味し、ヒト体内で分解して親化合物、その塩または薬学的に活性な代謝物を遊離するものを含む。適当なエステル基は、例えば、薬学的に許容される脂肪族カルボン酸類、特にアルカン酸、アルケン酸、シクロアルカン酸およびアルカンジオイック酸(ここで、各アルキルまたはアルケニル基は有利には６個を超えない炭素原子を有する)由来のものを含む。特定のエステル類の代表例は、ギ酸エステル類、酢酸エステル類、プロピオン酸エステル類、酪酸エステル類、アクリル酸エステル類およびエチルコハク酸エステル類を含むが、これらに限定されない。

ここで使用する用語“薬学的に許容されるプロドラッグ”は、合理的な医学的判断の範囲内で、ヒトおよび下等動物組織と接触させる使用に、合理的な利益／リスク比に釣り合い、過度の毒性、刺激、アレルギー応答などがなく適当であり、その意図する使用に有用である本発明の化合物のプロドラッグ、ならびに可能であるならば本発明の化合物の双性イオン形態を意味する。用語“プロドラッグ”は、インビボで急速に、血中の加水分解により変換されて、例えば上記式の親化合物または薬学的に活性な代謝物を生じる化合物を意味する。T. Higuchi and V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 of the A.C.S. Symposium SeriesおよびEdward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987に議論されており、これらのいずれも引用により本明細書に包含させる。

ここで使用する“抗癌剤”または“癌の処置用医薬”は、ほんの一例として、アポトーシス誘発剤；ポリヌクレオチド類(例えば、リボザイム類)；ポリペプチド類(例えば、酵素群)；薬物；生物学的模倣剤；アルカロイド類；アルキル化剤；抗腫瘍抗生物質；代謝拮抗剤；ホルモン類；白金化合物；抗癌剤、毒素および／または放射性核種とコンジュゲートしたモノクローナル抗体；生物学的応答調節剤(例えばインターフェロン類およびインターロイキン類など)；養子免疫療法剤；造血増殖因子；腫瘍細胞分化誘発剤(例えば全トランスレチノイン酸など)；遺伝子治療剤；アンチセンス治療剤およびヌクレオチド類；腫瘍ワクチン；血管形成阻害剤などを含む。多くの他の薬剤が当業者の専門に十分に入る。

上に定義した全ての置換基において、置換基とそれらについての置換基を定義することにより到達する重合体は、本発明に包含することを意図しないことは理解すべきである。この場合、そのような置換基の最大数は３個である。例えば、置換アリール基の別の２個の置換アリール基での連続置換は、−置換アリール−(置換アリール)−置換アリールに限定される。

同様に、上の定義は許容されない置換パターン(例えば、５個のフルオロ基で置換されたメチルまたはエテニルまたはアセチル不飽和に対しアルファ位のヒドロキシ基)。この許容されない置換パターンは当業者に周知である。

本発明の化合物は、化合物中の１個所以上の不斉またはキラル中心の存在により、立体異性を示し得る。本発明は種々の立体異性体およびそれらの混合物を意図する。式(Ｉ)、(Ｉａ)−(Ｉｅ)、(II)および(IIａ)−(IIｂ)の化合物の記載は、特定の立体中心の立体化学が特に示されていない限り、その立体異性体を含む。ある本発明の化合物は、不斉に置換された炭素原子を含む。当該不斉に置換された炭素原子は、特定の不斉に置換された炭素原子での立体異性体混合物または単一立体異性体を含む本発明の化合物を生じ得る。結果として、本発明の化合物のラセミ混合物、ジアステレオマー混合物、単一エナンチオマー、ならびに単一ジアステレオマーが本発明に包含される。ここで使用する用語“Ｓ”および“Ｒ”配置は、IUPAC 1974 “RECOMMENDATIONS FOR SECTION E, FUNDAMENTAL STEREOCHEMISTRY,” Pure Appl. Chem. 45:13-30, 1976により規定される。所望のエナンチオマーは、市販のキラル出発物質から当分野で既知の方法によるキラル合成により得ることができ、またはエナンチオマー混合物から、既知方法を使用して所望のエナンチオマーを分離することにより得ることができる。

本発明の化合物はまた幾何異性も示し得る。幾何異性体は、アルケニル基またはアルケニレニル基を有する本発明の化合物のｃｉｓおよびｔｒａｎｓ形態を含む。本発明はココの幾何異性体および立体異性体およびそれらの混合物を含む。

Ｃ. 化合物製造
本発明の化合物は容易に入手可能な出発物質から、下記の一般的方法および手順を使用して製造できる。特記しない限り、出発物質は市販されており、当分野で周知である。典型的なまたは好ましい工程条件(すなわち、反応温度、時間、反応物のモル比、溶媒、圧力)が記載されているとき、特記しない限り、他の工程条件も使用できることは当然である。最適な反応条件は、使用する特定の反応物または溶媒により変わるが、当該条件は、日常的な最適化方法により当業者が決定できる。

さらに、当業者には当然であるが、ある官能基が望まない反応を受けることを阻止するために慣用の保護基を必要とすることがある。種々の官能基のための適当な保護基ならびに特定の官能基の保護および脱保護のための適当な条件は当分野で既知である。例えば、多くの保護基がT. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Second Edition, Wiley, New York, 1991およびその中に引用された文献に記載されている。

さらに、本発明の化合物は１個所以上のキラル中心を含み得る。従って、所望により、当該化合物を純粋立体異性体として、すなわち、個々のエナンチオマーまたはジアステレオマーとしてまたは立体異性体富化混合物として製造または単離できる。すべての当該立体異性体(および富化混合物)は、特記しない限り本発明の範囲に含まれる。純粋立体異性体(または富化混合物)は、例えば、当分野で既知の光学活性出発物質または立体選択的試薬を使用して製造できる。あるいは、当該化合物のラセミ混合物を、例えば、キラルカラムクロマトグラフィー、キラル分割剤などを使用して分割できる。

一つの態様において、式(Ｉ)：

(式中、ＸがＯである)
の化合物の製造方法が提供される。

本方法は次の工程を含む：
ａ)式(IIIａ)

の化合物と式(IVａ)

の化合物を加熱して、式(Ｖａ)

の化合物を形成させる(上記式中、Ｒ^６およびＲ^７は先に定義したとおりであり、Ｘはハロゲンである)。
ｂ)式(Ｖａ)の化合物を還元条件下に反応させ、次いで酸化反応に付して、式(Ｖａ’)

の化合物を得る(上記式中、Ｒ^２は先に定義したとおりである)。
ｃ)式(Ｖａ’)の化合物とスルフィンアミド(キラルまたはラセミ体)を反応させて、式(VIａ)

を得る(上記式中、Ｒ^１５はアルキル(置換)またはアリール(置換)である)。
ｄ)式(VIａ)の化合物とメタル化Ｒ^１を反応させて、式(VIIａ)

(式中、Ｒ^１は先に定義したとおりである)
の化合物を形成させる。
ｅ)式(VIIａ)の化合物を酸性条件下に処理して、式(VIIIａ)

の化合物を得る。
ｆ)式(VIIIａ)の化合物とＲ^４−Ｘ^４をカップリング条件下で、またはＲ^４ａＣＨＯを還元的アミノ化条件下で反応させ、式(IXａ)

の化合物を形成させる(上記式中、Ｒ^４は先に定義したとおりであり、Ｒ^４ａＣＨ_２−はＲ^４であり、Ｘ^４は脱離基である)。
ｇ)式(IXａ)の化合物とＲ^３−Ｘ^３(式中、Ｒ^３は先に定義したとおりであり、Ｘ^３は脱離基である)をカップリング条件下で反応させ、式(Ｉ)

(式中、ＸがＯである)
の化合物を得る。

一つの態様において、(IIIａ)と(IVａ)を高温(１００℃)で反応させることによる、式(Ｖａ)

の化合物の製造方法が提供される。Ｒ^６が２,５−ジフルオロベンジルであり、Ｒ^７がベンジルである(IVａ)を形成するこの方法の一例を、実施例４の工程Ａに示す。

他の態様において、式(Ｖａ)の化合物からの式(Ｖａ’)

の化合物の製造方法が提供される。Ｒ^６が２,５−ジフルオロベンジルであり、Ｒ^７がベンジルであり、Ｒ^２が水素である(Ｖａ’)を形成するためのこの方法の一例を、実施例４の工程Ｂおよび工程Ｃに示す。

一つの態様において、(Ｖａ’)とアルキルまたはアリールスルフィンアミドを反応させることによる、式(VIａ)

の化合物の製造方法が提供される。ラセミ体ｔ−ブチルスルフィンアミドを使用して、(VIａ)のラセミ混合物を得る。エルマンのキラルｔ−ブチルスルフィンアミドを、キラル(VIａ)へのキラル誘導に使用できる。Ｒ^６が２,５−ジフルオロベンジルであり、Ｒ^７がベンジルであり、Ｒ^１５がｔ−ブチルであり、Ｒ^２が水素である(VIａ)を形成するこの方法の一例を、実施例４の工程Ｄに示す。

一つの態様において、(VIａ)とメタル化アルキル基を反応させることによる、式(VIIａ)

の化合物の製造方法が提供される。アルキルリチウムを、ラセミ体(VIａ)から(VIIａ)のラセミ混合物を得るために使用する。キラル(VIａ)をアルキルリチウムと反応させて、キラル(VIIａ)を得ることができる。本反応の条件は、テトラヒドロフランのような極性溶媒の使用を含む。本反応を低温(−７８℃)で、無水条件下に行う。Ｒ^６が２,５−ジフルオロベンジルであり、Ｒ^７がベンジルであり、Ｒ^４およびＲ^１５がｔ−ブチルであり、Ｒ^２が水素である(VIIａ)を形成するこの方法の一例を、実施例４の工程Ｅに示す。

他の態様において、式(VIIａ)の化合物を脱保護条件に曝すことによる、式(VIIIａ)

の中間体化合物の製造方法が提供される。Ｒ^１５がｔ−ブチルスルフィニルである一つの面において、保護基を、塩酸での処理のような酸性条件に付して除去する。この脱保護の一例を、実施例４の工程Ｆに示す。

一つの態様において、アルデヒド中間体Ｒ^４ａＣＨＯ(ここで、Ｒ^４およびＲ^４ａが先に定義したとおりである)の製造方法が提供される。

スキーム１は、式(Ｉ)の化合物、特に式(Ｉ)[式中、Ｘ＝Ｏ、Ｓ]の化合物を製造するための還元的アミノ化工程に使用できるアルデヒド１.７の製造を説明する。環状アミン１.１をＣｂｚで保護して、化合物１.２を得る。化合物１.２のＭＣＰＢＡエポキシド化によりエポキシド１.３を得る。エポキシドを、臭化銅存在下で臭化ビニルマグネシウムと反応させることにより、アルコール１.４のラセミ混合物を得る。キラルカラムクロマトグラフィーにより単一エナンチオマーとしてのアルコール１.５を得る。アルコール１.５をフッ素化条件に付して、ビニルフルオロピロリジン１.６を得る。ビニルフルオロピロリジン１.６を続くジヒドロキシル化／酸化的開裂に付して、アルデヒド１.７を得る。この方法の一例を、実施例１の工程Ｈ〜Ｌに示す。

他の態様において、式(IXａ)：

の中間体化合物の製造方法が提供される。

式(VIIIａ)の化合物を、Ｒ^４ａＣＨＯ(ここで、Ｒ^４およびＲ^４ａが先に定義したとおりである)と還元的アミノ化条件で反応させて、式(IXａ)の化合物を形成させる。適当な還元的アミノ化条件は、(VIIIａ)と還元剤を予め混合し、続いてアルデヒドＲ^４ａＣＨＯを添加するか、または(VIIIａ)とアルデヒドＲ^４ａＣＨＯを反応させ、続いて還元剤を添加することを含む。いくつかの面において、溶媒はジクロロメタンのような塩素化化合物であり、還元剤はトリアセトキシボロハイドライドのようなボロハイドライドである。この修飾の一例を実施例４の工程Ｇに示す。

他の態様において、式(IXａ)の化合物を、適当なカップリング条件下、Ｒ^３−Ｘ^３(式中、Ｒ^３は先に定義したとおりであり、Ｘ^３はハロゲン原子のような脱離基である)と反応させることによる、式(Ｉ)

(式中、ＸがＯである)
の化合物の製造方法が提供される。
いくつかの面において、Ｒ^３−Ｘ^３はアシルハライドであり、反応はトリエチルアミンのような有機塩基の存在下で行う。この修飾の一例を、実施例４の工程Ｈに示す。

他の態様は、式(Ｉ)：

(式中、ＸがＳである)
の化合物の製造方法が提供される。

本方法は次の工程を含む：
ａ)式(IIIａ)の化合物をローソン試薬と反応させることにより、式(IIIｂ)

の化合物に変換する(上記式中、Ｒ^６は先に定義したとおりである)。
ｂ)式(IIIｂ)の化合物と式(IVｂ)

の化合物を加熱して、式(Ｖｂ)

の化合物を形成する(上記式中、Ｒ^７は先に定義したとおりであり、Ｘはハロゲンである)。
ｃ)式(Ｖｂ)の化合物を還元条件で反応させ、続いて酸化反応に付して、式(Ｖｂ’)

の化合物を得る(上記式中、Ｒ^２は先に定義したとおりである)。
ｄ)式(Ｖｂ’)の化合物とスルフィンアミド(キラルまたはラセミ体)を反応させて、式(VIｂ)

の化合物を得る(上記式中、Ｒ^１５はアルキル(置換)またはアリール(置換)である)。
ｅ)式(VIｂ)の化合物とメタル化Ｒ^１を反応させて、式(VIIｂ)

の化合物を得る(上記式中、Ｒ^１は先に定義したとおりである)。
ｆ)式(VIIｂ)の化合物を酸性条件下に処理して、式(VIIIｂ)

の化合物を得る。
ｇ)式(VIIIｂ)の化合物とＲ^４−Ｘ^４をカップリング条件下にまたはＲ^４ａＣＨＯを還元的アミノ化条件下で反応させて、式(IXｂ)

の化合物を得る(上記式中、Ｒ^４は先に定義したとおりであり、Ｒ^４ａＣＨ_２−はＲ^４であり、Ｘ^４は脱離基である)。
ｈ)式(IXｂ)の化合物をＲ^３−Ｘ^３(式中、Ｒ^３は先に定義したとおりであり、Ｘ^３は脱離基である)とカップリング条件下で反応させて、
式(Ｉ)

(式中、ＸはＳである)
の化合物を得る。

一つの態様において、(IIIｂ)と(IVｂ)を反応させることによる、式(Ｖｂ)

の化合物の製造方法が提供される。Ｒ^６が２,５−ジフルオロベンジルであり、Ｒ^７がベンジルである(IVｂ)を形成するこの方法の一例を、実施例１の工程Ｂに示す。

他の態様において、(Ｖｂ)の化合物からの式(Ｖｂ’)

の化合物の製造方法が提供される。Ｒ^６が２,５−ジフルオロベンジルであり、Ｒ^７がベンジルであり、Ｒ^２が水素である(Ｖｂ’)を形成するこの方法の一例を、実施例１の工程Ｃおよび工程Ｄに示す。

一つの態様において、(Ｖｂ’)とアルキルまたはアリールスルフィンアミドを反応させることによる、式(VIｂ)

の化合物の製造方法が提供される。ラセミ体ｔ−ブチルスルフィンアミドは、(VIｂ)のラセミ混合物を得るために使用できる。エルマンのキラルｔ−ブチルスルフィンアミドを、キラル(VIｂ)へのキラル誘導に使用できる。Ｒ^６が２,５−ジフルオロベンジルであり、Ｒ^７がベンジルであり、Ｒ^１５がｔ−ブチルであり、Ｒ^２が水素である(VIｂ)を形成するこの方法の一例を、実施例１の工程Ｅに示す。

一つの態様において、(VIｂ)とメタル化アルキル基を反応させることによる、式(VIIｂ)

の化合物の製造方法が提供される。アルキルリチウムを、ラセミ体(VIｂ)から(VIIｂ)のラセミ混合物を得るために使用する。キラル(VIｂ)をアルキルリチウムと反応させて、キラル(VIIｂ)を得ることができる。この反応は、テトラヒドロフランのような極性溶媒の使用を含む。本反応を低温(−７８℃)で、無水条件下に行う。Ｒ^６が２,５−ジフルオロベンジルであり、Ｒ^７がベンジルであり、Ｒ^４およびＲ^１５がｔ−ブチルであり、Ｒ^２が水素である(VIIｂ)を形成するこの方法の一例を、実施例１の工程Ｆに示す。

他の態様において、式(VIIｂ)の化合物を脱保護条件に曝すことによる、式(VIIIｂ)

の中間体化合物の製造方法が提供される。Ｒ^１５がｔ−ブチルスルフィニルである一つの面において、保護基を、塩酸で処理するような酸性条件に付して除去する。この脱保護の一例を、実施例１の工程Ｇに示す。

他の態様において、式(IXｂ)：

の中間体化合物の製造方法が提供される。

式(VIIIｂ)の化合物を、Ｒ^４ａＣＨＯ(ここで、Ｒ^４およびＲ^４ａが先に定義したとおりである)と還元的アミノ化条件下で反応させて、式(IXｂ)の化合物を形成させる。適当な還元的アミノ化条件は、(VIIIｂ)と還元剤を予め混合し、続いてアルデヒドＲ^４ａＣＨＯを添加するか、または(VIIIｂ)とアルデヒドＲ^４ａＣＨＯを反応させ、続いて還元剤を添加することを含む。いくつかの面において、溶媒はジクロロメタンのような塩素化化合物であり、還元剤はトリアセトキシボロハイドライドのようなボロハイドライドである。この修飾の一例を実施例１の工程Ｎに示す。

他の態様において、式(IXａ)の化合物を適当なカップリング条件にＲ^３−Ｘ^３(式中、Ｒ^３は先に定義したとおりであり、Ｘ^３はハロゲン原子のような脱離基である)を反応させることによる、式(Ｉ)

(式中、ＸがＳである)
の化合物の製造方法が提供される。いくつかの面において、Ｒ^３−Ｘ^３はアシルハライドであり、反応はトリエチルアミンのような有機塩基の存在下で行う。この修飾の一例を、実施例１の工程Ｑに示す。

Ｄ. 医薬製剤
医薬組成物として用いるとき、本発明の化合物は通常医薬製剤の形態で投与される。これらの組成物は、経口、非経腸、経皮、局所、直腸および鼻腔内を含む多様な経路で投与できる。これらの化合物は、例えば、注射用組成物および経口組成物の何れの形態であっても有効である。当該組成物は医薬分野で周知の方法により製造し、少なくとも１種の活性化合物を含む。

本発明はまた活性成分として、１種以上の上記本発明の化合物を薬学的に許容される担体と共に含む医薬組成物も含む。本発明の組成物の製造に際し、活性成分を通常添加物と混合するか、添加物で希釈するか、またはカプセル、小袋、紙もしくは他の容器の形であり得る当該る担体に包含させる。用いる添加物は、典型的にヒト対象または他の哺乳動物への投与に適当な添加物である。添加物が希釈剤として提供されるとき、それは活性成分の賦形剤、担体または媒体として作用する固体、半固体または液体物質であり得る。故に、組成物は錠剤、丸剤、散剤、ロゼンジ剤、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁液剤、エマルジョン剤、溶液剤、シロップ剤、エアロゾル剤(固体としてまたは液体媒体中)、例えば、最大１０重量％の活性化合物を含む軟膏剤、軟および硬ゼラチンカプセル剤、坐剤、滅菌注射用液および滅菌封入粉末の形であり得る。

製剤の製造において、他の成分と合わせる前に、活性化合物を粉砕して、適当な粒子径とすることが必要であり得る。活性化合物が実質的に不溶性であるとき、通常２００メッシュ未満の粒子径に粉砕する。活性化合物が実質的に水溶性であるとき、粒子径は通常製剤に実質的に均一な分散を提供するために粉砕により調節し、例えば、約４０メッシュである。

適当な添加物の数例は、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン類、アカシアガム、カルシウムホスフェート、アルギネート類、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、滅菌水、シロップおよびメチルセルロースを含む。製剤はさらに：タルク、ステアリン酸マグネシウムおよび鉱油のような滑剤；湿潤剤；乳化剤および懸濁化剤；ヒドロキシ安息香酸メチルおよびヒドロキシ安息香酸プロピルのような防腐剤；甘味剤；および風味剤を含む。本発明の組成物は、当分野で既知の方法を用いることにより、患者への投与後に活性成分の急速な、持続したまたは遅延した放出を提供するように製剤できる。

本発明の化合物である活性のその医薬組成物および単位投与量形態中の量は、特定の適用、特定の化合物の効果および望む濃度によって、変えても調節してもよい。

本組成物は、好ましくは単位投与量形態に製剤し、各投与量は約１〜約５００mg、通常約５〜約１００mg、時々約１０〜約３０mgの活性成分を含む。用語“単位投与量形態”は、ヒト対象および他の哺乳動物への単一の投与量として適当な物理的に分けられた単位であり、各単位は、所望の治療効果を生じるように計算された予定量の活性物質を適当な医薬添加物と共に含む。好ましくは、上記本発明の化合物を、医薬組成物の約２０重量％未満、より好ましくは約１５重量％未満で用い、残りは薬学的に不活性な担体である。

活性化合物は広範囲の投与量で有効であり、一般的に薬学的にまたは治療的に有効な量で投与する。しかしながら、実際に投与する化合物の量は、処置する状態、処置する状態の重症度、選択した投与経路、実際に投与する化合物、個々の患者の年齢、体重および応答、患者の症状の重症度などを含む関連する状況を考慮して、医師により決定されることは当然である。

哺乳動物における癌の処置または癌と闘うための治療的使用において、化合物またはその医薬組成物を、処置を受けている哺乳動物における、活性成分の治療的効力のある濃度、すなわち量または血中レベルを達成し、維持するための投与量で、経口、局所、経皮および／または非経腸のような任意の適当な経路で投与する。一般的に、活性成分の当該治療有効量の投与量(すなわち、有効投与量)は約０.１〜約１００、より好ましくは約１.０〜約５０mg／kg体重／日の範囲である。

固体組成物、例えば錠剤の製造のために、主活性成分を医薬添加物と混合して、本発明の化合物の均一混合物を含む固体予備処方組成物を形成する。これらの予備処方組成物を均一と言うとき、本組成物を容易に錠剤、丸剤およびカプセル剤のような等しく有効な単位投与量形態に分配し得るように、活性成分が組成物全体に均一に分散されていることを意味する。次いで、この固体予備処方を、例えば、０.１〜約５００mgの本発明の活性成分を含む、上記タイプの単位投与量形態に分配する。

本発明の錠剤または丸剤は長期作用の利益を提供する投与量形態を提供するようにコーティングするか、または別の方法で調合してよい。例えば、錠剤または丸剤は、内部投与量および外部投与量成分を有し、後者は前者を覆う外皮の形である。２成分を、胃での分解に抵抗するために働き、内部成分を無傷で十二指腸まで通過させるか、または放出を遅延させる腸溶層で分離し得る。多様な物質をこの腸溶層またはコーティングに使用でき、当該物質は多くの重合酸類および重合酸類とシェラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースのような物質の混合物を含む。

本発明の新規組成物を経口または注射により投与するために包含させ得る液体形態は、水溶液剤、適当に風味付けされたシロップ剤、水性または油性懸濁液およびコーン油、綿実油、ゴマ油、ココナッツ油またはピーナツ油のような食用油を含む風味付けされたエマルジョン剤、ならびにエリキシル剤および類似の医薬賦形剤を含む。

吸入または吹き入れ(insufflation)用組成物は、薬学的に許容される水性または有機溶媒またはそれらの混合物中の溶液および懸濁液および粉末を含む。液体または固体組成物は、前記の適当な薬学的に許容される添加物を含む。好ましくは本組成物を、局所または全身作用のために経口または経鼻呼吸器経路で投与する。好ましくは薬学的に許容される溶媒中の組成物を、不活性ガスの使用により霧化し得る。霧化溶液は、噴霧装置から直接吸入してよく、または噴霧装置をフェースマスクテントもしくは間欠的陽圧人工呼吸器に接続してよい。溶液、懸濁液または粉末組成物を、好ましくは経口的または経鼻的に、適当な方法で製剤を送達するデバイスから投与し得る。

次の製剤例は、本発明の代表的医薬組成物を説明する。
製剤例１
次の成分を含む硬ゼラチンカプセルを製造する：

上記成分を混合し、硬ゼラチンカプセルに３４０mg量で充填する。

製剤例２
錠剤製剤を次の成分を使用して製造する：

これら成分を混合し、各２４０mg重量の錠剤に圧縮する。

製剤例３
次の成分を含む乾燥粉末吸入製剤を、製造する：

活性成分をラクトースと混合し、混合物を乾燥粉末吸入装置に添加する。

製剤例４
それぞれ３０mgの活性成分を含む錠剤を次のとおり製造する：

活性成分、デンプンおよびセルロースを、米国２０番メッシュ篩を篩過させ、徹底的に混合する。ポリビニルピロリドンの溶液を得られた混合物と混合し、米国１６メッシュ篩を篩過させる。そうして製造した顆粒を５０℃〜６０℃で乾燥させ、米国１６メッシュ篩を篩過させる。予め米国３０番メッシュ篩を篩過させたナトリウムカルボキシメチルデンプン、ステアリン酸マグネシウムおよびタルクを顆粒に添加し、混合後、打錠機で圧縮して、各１２０mg重量の錠剤を得る。

製剤例５
それぞれ４０mgの医薬を含むカプセルを次のとおり製造する：

活性成分、デンプンおよびステアリン酸マグネシウムを混合し、米国２０番メッシュ篩を篩過させ、１５０mg量で硬ゼラチンカプセルに充填する。

製剤例６
それぞれ２５mgの活性成分を含む坐剤を次の通り製造する：

活性成分を米国６０番メッシュ篩を篩過させ、予め必要最小限の加熱で融解させた飽和脂肪酸グリセリド類に懸濁する。混合物を、名目上２.０ｇ容量の坐剤鋳型に注ぎ、冷ます。

製剤例７
それぞれ５.０mL投与量あたり５０mgの医薬を含む懸濁液を次のとおり製造する：

活性成分、スクロースおよびキサンタンゴムを混合し、米国１０番メッシュ篩を篩過させ、予め製造した微結晶性セルロースおよびナトリウムカルボキシメチルセルロースの水溶液と混合する。安息香酸ナトリウム、風味剤および着色剤を幾分かの水で希釈し、撹拌しながら添加する。次いで、必要量とするのに十分な量の水を添加する。

製剤例８

活性成分、デンプンおよびステアリン酸マグネシウムを混合し、米国２０番メッシュ篩を篩過させ、４２５.０mg量で硬ゼラチンカプセルに充填する。

製剤例９
皮下製剤を次のとおり製造し得る：

製剤例１０
局所製剤を次のとおり製造し得る：

白色軟パラフィンヲ融解するまで加熱する。液体パラフィンおよび乳化蝋を入れ、溶解するまで撹拌する。活性成分を添加し、分散するまで撹拌を続ける。次いで、混合物を固体になるまで冷ます。

製剤例１１
静脈内製剤の説明的例を次のとおり製造し得る：

本発明の方法に用いる他の好ましい製剤は、経皮送達デバイス(“パッチ”)を用いる。このような経皮パッチを、本発明の化合物の制御された量での連続的または断続的注入に使用し得る。薬剤の送達のための経皮パッチの構築および使用は当分野で既知である。例えば、引用により本明細書に包含させる、１９９１年６月１１日公開の米国特許５,０２３,２５２参照。当該パッチは、薬剤の連続的な、脈動的なまたは必要に応じた送達のために構築し得る。

しばしば、医薬組成物を脳に直接的または間接的に通過させることが望ましいまたは必要である。直接的技術は、通常、医薬送達カテーテルを宿主脳室系に設置して血液−脳関門を迂回することを含む。生物学的因子を体の特定の解剖学的領域に輸送するために使用する一つの植え込み型送達系は、本明細書に引用して包含する米国特許５,０１１,４７２に記載されている。

一般的に好ましい間接的技術は、通常、親水性薬物を脂質可溶性薬物に変換することによる薬物潜在化(latentiation)を提供するための組成物の製剤を含む。潜在化は、一般的に薬物に存在するヒドロキシ基、カルボニル基、スルフェート基および１級アミン基をブロックして、薬物をより脂質可溶性にして、血液−脳関門を超える輸送を可能とすることにより達成する。あるいは、親水性薬物の送達を、血液−脳関門を一過性に開放できる高張溶液の動脈内輸液により亢進できる。

本発明で使用するための他の適当な製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, PA, 17th ed. (1985)に見ることができる。

Ｅ. 投与量および投与
上記のとおり、ここに記載する化合物は、上に記載する多様な医薬送達系で使用するのに適当である。加えて、投与された化合物のインビボ血清半減期を延長するために、化合物をカプセル封入してよく、リポソームの内腔に導入してよく、コロイドとして製造してよく、または本化合物の長い清半減期を提供する他の慣用の技術を用い得る。例えば、Szoka, et al.、米国特許番号４,２３５,８７１、４,５０１,７２８および４,８３７,０２８(この各々を引用により本明細書に包含させる)に記載のとおり、多様な方法がリポソームの製造に利用可能である。

本発明の化合物は少なくとも一部ＫＳＰの活性により仲介される障害の阻止または処置に有用である。一つの面において、少なくとも一部ＫＳＰにより仲介される障害は細胞増殖性障害である。用語“細胞性増殖性障害”または“細胞増殖性障害”は、例えば、癌、腫瘍、過形成、再狭窄、心肥大、免疫障害および炎症のような疾患を含む。本発明は、処置を必要とするヒトまたは哺乳動物対象を処置する方法であって、治療有効量の式(Ｉ)または(II)の化合物を、単独でまたは他の抗癌剤と組み合わせて対象に投与することを含む、方法を提供する。

本発明の化合物は、インビトロまたはインビボで癌細胞の増殖阻害に有用である。用語“癌”は、例えば、肺および気管支；前立腺；乳；膵臓；結腸および直腸；甲状腺；胃；肝臓および肝内胆管；腎臓および腎盂；膀胱；子宮体；子宮頸；卵巣；多発性骨髄腫；食道；急性骨髄性白血病；慢性骨髄性白血病；リンパ性白血病；骨髄球性白血病；脳；口腔および咽頭；喉頭；小腸；非ホジキンリンパ腫；黒色腫；および絨毛結腸腺腫を含む癌疾患を意味する。

癌はまた、癌腫、腺癌、肉腫および血液系腫瘍から成る群から選択される腫瘍または新生物も含む。

加えて、癌のタイプは固形腫瘍／悪性腫瘍、粘液型および円形細胞癌、局所的に進行した腫瘍、ヒト軟組織癌、癌転移、扁平上皮細胞癌、食道扁平上皮細胞癌、口腔癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、副腎皮質の癌、ＡＣＴＨ産生腫瘍、非小細胞癌、乳癌、消化器癌、泌尿器科癌、女性生殖系の悪性腫瘍、男性生殖系の悪性腫瘍、腎臓癌、脳の癌、骨の癌、皮膚癌、甲状腺癌、網膜芽細胞腫、神経芽腫、腹水、悪性胸水、中皮腫、ウィルムス腫瘍、胆嚢癌、栄養芽細胞新生物、血管外皮腫およびカポジ肉腫の増殖からなる群から選択できる。

本発明の化合物または組成物は哺乳動物に経口、静脈内、非経腸、経皮、局所、直腸または鼻腔内のような適当な経路で投与し得る。

哺乳動物は、例えば、ヒトおよび他の霊長類、イヌおよびネコのようなペットまたはコンパニオンアニマル、ラット、マウスおよびウサギのような実験動物、およびウマ、ブタ、ヒツジおよびウシのような家畜を含む。

腫瘍または新生物は、細胞の増殖が制御されず、かつ進行性である組織細胞の増殖を含む。ある種の増殖は良性であるが、他は“悪性”と呼ばれ、生物を死に至らしめ得る。悪性新生物または“癌”は、攻撃的細胞増殖を示すのに加えて、周囲組織に浸潤でき、転移できる点で良性増殖と区別される。さらに、悪性新生物は、互いにおよび周囲組織と比較して、大きな分化喪失(大きな“脱分化”)および器質化喪失を示すことにより特徴付けられる。この特性は“退形成”と呼ばれる。

所望の生物学的活性を有する化合物は、薬理学的特性(例えば、インビボ安定性、バイオアベイラビリティ)の改善または診断的適用における検出能のような所望の特性を提供するために必要に応じて修飾され得る。安定性は、ペプチダーゼ類またはヒト血漿または血清とのインキュベーション中の化合物の半減期測定のような多様な方法でアッセイできる。

診断目的で、広範な標識を化合物に結合でき、それは、直接的または間接的に、検出可能なシグナルを提供し得る。故に、本発明の化合物および／または組成物は、なお生物学的活性を維持したまま、多様な最終目的のために多様な方法で修飾してよい。加えて、粒子、固体基質、高分子などと結合させるために種々の反応部位を導入してよい。

標識化合物を多様なインビボまたはインビトロ適用に使用できる。放射性核種(例えば、テクネチウム−９９またはインジウム−１１１のようなガンマ放射放射性同位体)、蛍光物質(fluorescers)(例えば、フルオレセイン)、酵素群、酵素基質、酵素補因子、酵素阻害剤、化学発光化合物、生物発光化合物などのような広範な標識を用い得る。当業者は、複合体に結合させるための他の適当な標識を知っているか、または日常的な実験を使用してそのようなものを確認できる。これらの標識の結合は、当業者に慣用の標準法を使用して達成する。

本発明の医薬組成物は、多様な医薬送達系に使用するための適当である。本発明で使用するのに適当な製剤はRemington's Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17th ed. (1985)に見られる。

患者に投与する量は何を投与するか、予防であるか治療であるかのような投与の目的、患者の状態、投与方法などにより変わる。治療適用においては、本組成物を既に疾患を有している患者に、該疾患およびその合併症を治癒するかまたは少なくとも一部進行を阻止するのに十分な量で投与する。これを達成する適切な量を“治療有効量”と定義する。この使用に有効な量は処置する疾患状態ならびに疾患、障害または状態の重症度、患者の年齢、体重および一般的状態などのような因子による担当医の判断による。

患者に投与する本化合物は、典型的に上記の医薬組成物の形態でる。これらの組成物は慣用の滅菌法により滅菌されていてよく、または滅菌濾過してよい。得られた水溶液をそのまままたは凍結乾燥して使用のために包装してよく、凍結乾燥製剤は、投与前に滅菌水性担体と合わせる。化合物製剤のｐＨは、典型的に約３〜１１、より好ましくは約５〜９および最も好ましくは約７〜８である。前記のある添加物、担体または安定化剤の使用が医薬的塩類の形成をもたらすことは理解されよう。

本発明の化合物および／または組成物の治療投与量は、例えば、処置を行う特定の使用、化合物の投与方法、患者の健康状態および情況および担当医の判断により変わる。例えば、経口投与について、投与量は典型的に約５μg〜約５０mg／kg体重／日、好ましくは約１mg〜約１０mg／kg体重／日の範囲である。あるいは、静脈内投与について、投与量は典型的に約５μg〜約５０mg／kg体重、好ましくは約５００μg〜約５０００μg／kg体重の範囲である。意図される別の投与経路は、鼻腔内、経皮、吸入、皮下および筋肉内を含むが、これらに限定されない。有効量は、インビトロまたは動物モテル系に由来する用量−応答曲線から外挿できる。

一般に、本発明の化合物および／または組成物を、類似の有用性を提供する薬剤について承認されている投与方法のいずれかで、治療有効量を投与する。当該化合物の毒性および治療効果は、例えば、ＬＤ_５０(集団の５０％に致死的な量)およびＥＤ_５０(集団の５０％に治療効果のある量)を決定するための、細胞培養または実験動物における標準的薬事的方法により決定できる。毒性と治療効果の量の比は治療指数であり、比ＬＤ_５０／ＥＤ_５０として表すことができる。大きい治療指数を示す化合物が好ましい。

細胞培養アッセイおよび動物試験で得たデータを、ヒトに使用する投与量の定式化に使用できる。当該化合物の投与量は、好ましくは、毒性がほとんどまたは全くなく、ＥＤ_５０を含む循環濃度の範囲内に入る。投与量はこの範囲内で用いる投与形態および利用する投与経路により代わり得る。本発明の方法で使用するいずれの化合物および／または組成物についても、治療有効量は、最初に細胞培養アッセイから推定できる。投与量を、細胞培養で決定したＩＣ_５０(最大活性の半分の阻害を達成する試験化合物の濃度)を含む循環血漿濃度範囲を達成するために動物モデルで定式化できる。当該情報を使用して、ヒトで有用な投与量をより正確に決定できる。血漿レベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーにより測定できる。

次の合成および生物学的実施例は、本発明を説明するために提供し、決して本発明の範囲を限定すると解釈してはならない。

下の実施例に関して、本発明の化合物をここに記載の方法で、または当業者に周知の他の方法で合成した。製造または分析していない化合物を、ここに記載の方法でまたは当業者に周知の他の方法で製造または分析し得ることは当然である。

化合物および／または中間体は、Waters Milleniumクロマトグラフィー系と2690 Separation Module(Milford, MA)を使用する高速液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ)により特徴付けした。分析カラムは、Alltech(Deerfield, IL)のAlltima C-18逆相、４.６×２５０mmであった。典型的に５％アセトニトリル／９５％水から出発し、４０分間かけて１００％アセトニトリルへと進む勾配を使用した。全ての溶媒は０.１％トリフルオロ酢酸(ＴＦＡ)を含んだ。化合物を、２２０nmまたは２５４nmの紫外線(ＵＶ)吸収により検出した。ＨＰＬＣ溶媒はBurdick and Jackson(Muskegan, MI)またはFisher Scientific(Pittsburgh, PA)であった。いくつかの例で、純度を薄層クロマトグラフィー(ＴＬＣ)で、例えば、Baker-Flex Silica Gel 1B2-F軟質シートのような、裏板がガラスまたはプラスチックのシリカゲルプレートを使用して評価した。ＴＬＣ結果は、紫外線光下でまたは周知のヨウ素蒸気および他の種々の染色技術を用いて、直ぐに可視的に検出した。

質量分光分析は２種のＬＣ／ＭＳ装置：Waters System(Alliance HT HPLCおよびMicromass ZQ mass分光計；カラム：Eclipse XDB-C18、２.１×５０mm；溶媒系：０.０５％ＴＦＡ含有５〜９５％(または３５〜９５％または６５〜９５％または９５〜９５％)アセトニトリル水溶液；流速０.８mL／分；分子量範囲５００〜１５００；コーン電圧２０Ｖ；カラム温度４０℃)またはHewlett Packard System(Series 1100 HPLC；カラム：Eclipse XDB-C18、２.１×５０mm；溶媒系：０.０５％ＴＦＡ含有１〜９５％アセトニトリル水溶液；流速０.４mL／分；分子量範囲１５０〜８５０；コーン電圧５０Ｖ；カラム温度３０℃)の一方で行った。全ての質量をプロトン化親イオンのものとして記載した。

ＧＣ／ＭＳ分析をHewlett Packard装置(HP6890 SeriesガスクロマトグラフとMass Selective Detector 5973；注入量：１mL；初期カラム温度：５０℃；最終カラム温度：２５０℃；傾斜時間：２０分間；ガス流速：１mL／分；カラム：５％フェニルメチルシロキサン、Model No. HP 190915-443、寸法：３０.０ｍ×２５ｍ×０.２５ｍ)で行う。

核磁気共鳴(ＮＭＲ)分析を、いくつかの化合物で、Varian 300 MHz NMR(Palo Alto, CA)で行った。参照スペクトルは、ＴＭＳまたは溶媒の既知化学シフトであった。いくつかの化合物サンプルを、高いサンプル溶解性を促進するために高温(例えば、７５℃)で流した。

本発明化合物のいくつかの純度を元素分析(Desert Analytics, Tucson, AZ)により評価する。

融点をLaboratory Devices Mel-Temp装置(Holliston, MA)で決定する。

予備分離をFlash 40クロマトグラフィー系およびKP-Sil、60A(Biotage, Charlottesville, VA)またはシリカゲル(２３０−４００メッシュ)充填材を使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーまたはＣ−１８逆相カラムを使用するＨＰＬＣにより行った。Flash 40 Biotage系およびフラッシュカラムクロマトグラフィーに使用する典型的溶媒は、ジクロロメタン、メタノール、ＥｔＯＡｃ、ヘキサン、アセトン、ヒドロキシアミン水溶液およびトリエチルアミンであった。逆相ＨＰＬＣに用いる典型的溶媒は、種々の濃度のアセトニトリルおよび０.１％トリフルオロ酢酸含有水であった。

特記しない限り、全ての温度は摂氏度である。また、これらの実施例および他の場所で、略語は次の意味を有する：

実施例１
(Ｓ)−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)−Ｎ−(((３Ｓ,４Ｒ)−４−フルオロピロリジン−３−イル)メチル)−２−ヒドロキシプロパンアミド

工程Ａ：２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチルのα−臭素化

２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチル(１０ｇ、４８.５mmol)のＥｔＯＡｃ(３２３mL)およびＣＨＣｌ_３(１６２mL)溶液に、臭化銅(II)(３２.５ｇ、１４５mmol)を添加した。反応混合物を６時間還流した。冷却後、反応混合物をシリカゲルで濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製して、３−ブロモ−２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチル(１５.０ｇ、＞９９％)を明黄色油状物として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz):δ 7.42-7.28 (2H, m), 7.28-7.19 (3H, m), 5.27 (1H, m), 4.35 (2H, m), 3.54 (1H, m), 3.25 (1H, m), 1.37 (3H, m). LC/MS (uplc):MH⁺ 269.1 (-18), 0.79min。

工程Ｂ：チアゾール核の合成

３−ブロモ−２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチル(１３.８ｇ、４８.４mmol)のＭｅＯＨ(１６１mL)溶液に、２,５−ジフルオロベンゾチオアミド(８.３８ｇ、４８.４mmol)を室温でゆっくり添加した。反応混合物を一夜還流した。冷却後、白色沈殿を濾過し、冷エタノールで洗浄し、乾燥させた。５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボン酸メチルと５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボン酸エチル(１０.５ｇ、６１％)の混合物を白色固体として得た。ＬＣ／ＭＳ(ｕｐｌｃ)：メチルエステルについてMH⁺ 346.1, 1.21min；エチルエステルについて360.1, 1.27min。

工程Ｃ：チアゾールエステル類の還元

５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボン酸メチルおよび５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボン酸エチル(７.８ｇ、２１.７０mmol)混合物のＴＨＦ(７２.３mL)溶液に、ＬｉＢＨ_４(０.９４６ｇ、４３.４mmol)を室温でゆっくり添加した。反応混合物を一夜撹拌した。水で反応停止後、反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製して、(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)メタノール(６.６６ｇ、９７％)を白色固体として得た。LC/MS(uplc):MH⁺ 318.2, 1.03min。

工程Ｄ：チアゾールアルコールの酸化

(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)メタノール(６.６６ｇ、２０.９９mmol)のジクロロメタン(７０.０mL)溶液に、Dess-Martinペルヨージナン(１３.３５ｇ、３１.５mmol)を添加した。反応混合物を室温で一夜撹拌した。２００mLの飽和ＮａＨＣＯ_３溶液と飽和Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３溶液(８：１)を反応停止のために添加した。１時間撹拌後、反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水および塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製して、５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボアルデヒド(５.３ｇ、８０％)を白色固体として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz):δ 10.3 (1H, s), 8.01 (1H, m), 7.36-7.17 (5H, m), 7.16-7.07 (2H, m), 4.64 (2H, s). LC/MS(uplc):MH⁺ 316.2, 1.21min。

工程Ｅ：ｔ−ブチルスルフィンイミンの合成

５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボアルデヒド(５.２ｇ、１６.４９mmol)のＴＨＦ(５５.０mL)溶液に、(Ｒ)−(＋)−ｔ−ブチルスルフィンアミド(２.２ｇ、１８.１４mmol)およびＴｉ(ＯＥｔ)_４(７.５２mL、３６.３mmol)を添加した。反応混合物を４時間、室温で撹拌した。反応混合物を塩水(５０mL)およびＥｔＯＡｃ(７０mL)で希釈し、セライト(登録商標)を添加した混合物を１時間激しく撹拌し、濾過した。濾液をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水および塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を自動化カラムクロマトグラフィーで精製して、(Ｒ)−Ｎ−((５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)メチレン)−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド(６.５ｇ、９４％)を薄黄色固体として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz):δ 8.91 (1H, s), 8.04 (1H, m), 7.38-7.22 (5H, m), 7.16-7.05 (2H, m), 4.62 (2H, s), 1.25 (9H, s). LC/MS(uplc):MH⁺ 419.1, 1.31min。

工程Ｆ：ｔ−ブチルスルフィンイミンへのｔ−ブチルリチウムのジアステレオ選択的付加反応

(Ｒ)−Ｎ−((５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)メチレン)−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド(６.５ｇ、１５.５３mmol)の無水ＴＨＦ(７８mL)溶液に、^ｔＢｕＬｉ(１.７Ｍペンタン溶液、２７.４mL、４６.６mmol)を−７８℃で添加した。反応混合物を−７８℃で３時間撹拌後、反応物をＭｅＯＨ(１０mL)で反応停止させ、飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液(３０mL)を添加した。室温まで温まったら、反応混合物を３０分間撹拌し、ＥｔＯＡｃ(２５０mL)で抽出した。有機層を水および塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を自動化カラムクロマトグラフィーで精製して、エナンチオマー富化された(Ｒ)−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド(３.９３ｇ、５３.１％)を薄黄色固体として得た。単一ジアステレオマーのみ形成し、単離した。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz):δ 7.87 (1H, m), 7.37-7.29 (3H, m), 7.27-7.21 (2H, m), 7.11-6.96 (2H, m), 4.43-4.28 (2H, m), 4.24-4.09 (2H, m), 1.28 (9H, s), 1.00 (9H, s). LC/MS(uplc):MH⁺ 477.2, 1.44min。

工程Ｇ：ｔ−ブチルスルフィニル基の脱保護

(Ｒ)−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド(５３mg、０.１１１mmol)のＴＨＦ(２００μL)溶液に、ＭｅＯＨ(５５.６μL)および４ＭＨＣｌのジオキサン溶液(５５.６μL、０.２２２mmol)を添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。飽和Ｎａ_２ＣＯ_３溶液で反応停止させ、ＥｔＯＡｃで希釈後、反応混合物を１５分間撹拌し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水および塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗(Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロパン−１−アミンを９９％収率(４１mg)で得て、それをさらに精製せずに次工程に使用した(主副産物である２−メチルプロパン−２−スルフィン酸メチルを高真空下で完全に除去した)。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz):δ 7.96 (1H, m), 7.35-7.29 (2H, m), 7.28-7.22 (3H, m), 7.08 (1H, m), 7.0 (1H, m), 4.18 (2H, m), 3.8 (1H, s), 1.73 (2H, bs), 1.02 (9H, s). LC/MS(uplc):MH⁺ 356.2, 1.08min。

工程Ｈ：ジヒドロピロールのＣｂｚ保護

２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール(３０ｇ、４３４mmol)のジオキサン(０.４３Ｍ溶液)に、ＣｂｚＯＳｕ(１３０ｇ、５２１mmol)を添加した。室温で１８時間撹拌後、反応混合物を約３００mLまで濃縮し、１０００mLのＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を水および塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィーにより、所望の２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボン酸ベンジルを９１％収率(８０.０ｇ)で無色油状物として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400MHz):δ 7.32 (5H, m), 5.80 (2H, m), 5.77 (2H, s), 4.22 (4H, m). LC/MS(uplc):MH⁺ 204.2, 160.1 (-44), 0.86min。

工程Ｉ：アルケンのエポキシド化

２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボン酸ベンジル(３３ｇ、１６３mmol)のジクロロメタン(０.３Ｍ溶液)溶液にＭＣＰＢＡ(４４ｇ、３４０mmol、７７％、Aldrichから)を添加した。反応混合物を室温で１８時間撹拌後、５００mLの飽和Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を添加し、得られた混合物を室温で１時間撹拌した。有機層を分離し、水および塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィーにより、所望の生成物を黄色油状物として８３％収率(２９.５ｇ)で得た。¹H NMR (CDCl₃, 400MHz):δ 3.38 (2H, m), 3.68 (2H, m), 3.87 (2H, m), 5.11 (2H, s), 7.33(5H, m). LC/MS(uplc):MH⁺ 220.0, 0.69min。

工程Ｊ：エポキシドの開環

６−オキサ−３−アザビシクロ[３.１.０]ヘキサン−３−カルボン酸ベンジル(２８.５ｇ、１３０mmol)およびＣｕＢｒ・ＳＭｅ_２(２６.７ｇ、１３０mmol)の無水ＴＨＦ(２６０mL、０.５Ｍ溶液)溶液に、−４０℃で臭化ビニルマグネシウム(５２０mL、１.０ＭＴＨＦ溶液)をゆっくり添加した。反応混合物を２時間かけて−２０℃に温めた。飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液(２００mL)で反応停止後、反応混合物をＥｔＯＡｃ(５００mL)で抽出した。有機層を水および塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィーにより、所望の３−ヒドロキシ−４−ビニルピロリジン−１−カルボン酸ｔｒａｎｓ−(±)−ベンジルのラセミ混合物を４８％収率(１５.５ｇ)で黄色油状物として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400MHz):δ 2.71 (1H, m), 3.28 (2H, m), 3.72 (2H, m), 4.11 (1H, m), 5.14 (2H, s), 5.16-5.23 (2H, m), 5.69 (1H, m), 7.33 (5H, m). LC/MS(uplc):MH⁺ 248.0, 0.78min。

工程Ｋ：ｔｒａｎｓ−(±)−ヒドロキシルビニルピロリジンの分割

３−ヒドロキシ−４−ビニルピロリジン−１−カルボン酸ｔｒａｎｓ−(±)−ベンジルのラセミ混合物(１４ｇ)をキラルＨＰＬＣを使用して分割した。所望のエナンチオマー富化された３−ヒドロキシ−４−ビニルピロリジン−１−カルボン酸(３Ｓ,４Ｒ)−ベンジル(６.７min；６.３ｇ、＞９９.５％ｅｅ)および不所望の３−ヒドロキシ−４−ビニルピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｓ)−ベンジル(９.３min；６.７ｇ、９９.５％ｅｅ)を得た。

工程Ｌ：ヒドロキシルビニルピロリジンのフッ素化

３−ヒドロキシ−４−ビニルピロリジン−１−カルボン酸(３Ｓ,４Ｒ)−ベンジル(５.０ｇ、２０.２mmol)のＰｈＣＦ_３(８１mL、０.２５Ｍ溶液)溶液に、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(５３mL、３０３mmol)、三フッ化水素トリエチルアミン(１９.８mL、１２１mmol)およびペルフルオロ−１−ブタンスルホニルフルオライド(ＰＢＳＦ、３.６mL、２０.２mmol)を添加した。得られた混合物を室温で撹拌した。６０分間および１２０分間後、さらにペルフルオロ−１−ブタンスルホニルフルオライド(３.６mL、２０.２mmol)を添加した。１８時間後、反応混合物を分液漏斗に移し、５０mLの１.０ＮＨＣｌ(注！かなり発熱する)で２回、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液で２回、Ｈ_２Ｏおよび塩水で各１回洗浄した。有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗褐色油状物として得た。フラッシュカラムクロマトグラフィーにより、純粋３−フルオロ−４−ビニルピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジルを８１％収率(４.１ｇ)で黄色油状物として得た。¹HNMR (CDCl₃, 400MHz):δ 7.37-7.25 (5H, m), 5.9 (1H, m), 5.24 (2H, m), 5.14 (2H, m), 5.03 (1H, m), 3.9-3.5 (3H, m), 3.53 (1H, m), 2.83 (1H, m). LC/MS(uplc):MH⁺ 250.0, 0.93min。

工程Ｍ：ビニルフルオロピロリジンの酸化的開裂

３−フルオロ−４−ビニルピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル(１.７８ｇ、７.１５mmol)のＣＨ_３ＯＨおよびＨ_２Ｏ(２：１、１７８mL、０.０４Ｍ溶液)溶液に、ＯｓＯ_４のＨ_２Ｏ溶液(３mLの４％ｗ／ｖ溶液、０.５mmol)を添加した。ＮａＩＯ_４(４.６ｇ、２１.５mmol)を一度に添加し、得られた混合物を室温で撹拌した。２時間後、混合物を濾過して、沈殿白色固体を除き、フィルターケーキをＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を真空で濃縮して、有機溶媒をほとんど除去した。残留物をＥｔＯＡｃで３回洗浄し、合わせた有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗３−フルオロ−４−ホルミルピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｓ)−ベンジルをさらに精製せずに次工程に使用した。LC/MS(uplc):MH⁺ 208.2 (-44), 252.0, 0.69min。

工程Ｎ：還元的アミノ化

(Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロパン−１−アミン(１４０mg、０.３７８mmol)のＣＨ_２Ｃｌ_２(７.０mL)溶液にＮａＢＨ(ＯＡｃ)_３(４００mg、１.８９mmol)を添加した。この溶液に、粗３−フルオロ−４−ホルミルピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｓ)−ベンジル(２.０当量の３−フルオロ−４−ビニルピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジルから得た)のＣＨ_２Ｃｌ_２(１.０mL)溶液を、３分間かけて、室温で添加した。２０分間撹拌後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で反応停止させ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水および塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を分取逆相ＨＰＬＣで精製した。合わせた生成物のフラクションを飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で中和し、それをＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、３−(((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピルアミノ)メチル)−４−フルオロピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル(１３８mg、６０％)を得た。LC/MS(uplc)MH⁺ 608.3, 1.14min。

工程Ｏ：アミド結合形成

３−(((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピルアミノ)メチル)−４−フルオロピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル(１３０mg、０.２１４mmol)のジクロロメタン(２.１mL、０.１Ｍ溶液)溶液に、室温でＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(１１２μL、０.６４mmol)を添加した。酢酸(Ｓ)−１−クロロ−１−オキソプロパン−２−イル(５４.２μL、０.４２８mmol)を２分間かけて滴下した。得られた溶液を室温で２時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で反応停止させ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水および塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。揮発性有機物質を真空で除去後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、３−(((Ｓ)−２−アセトキシ−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)プロパンアミド)メチル)−４−フルオロピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル(１１５mg、７５％)を得た。¹HNMR (CDCl₃, 400MHz):δ 7.85 (1H, m), 7.37-7.24 (7H, m), 7.21 (1H, m), 7.09 (2H, m), 7.05 (1H, m), 6.96 (1H, m), 6.1 (1H, m), 5.4 (2H, m), 5.28 (1H, m), 4.82 (2H, m), 4.19-3.97 (3H, m), 3.70-3.49 (2H, m), 3.13 (1H, m), 2.76 (1H, m), 2.52 (1H, m), 2.18 (3H, s), 1.61 (3H, m), 0.99 (9H, s). LC/MS(uplc):MH⁺ 722.3, 1.40min。

工程Ｐ：脱アセチル化

３−(((Ｓ)−２−アセトキシ−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)プロパンアミド)メチル)−４−フルオロピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル(４０mg、０.０５５mmol)のメタノール(３.５mL、０.１１Ｍ溶液)溶液に、１ＭＬｉＯＨ溶液(０.０８３mL、０.０８３mmol)を室温で添加した。３０分間撹拌後、反応混合物を１ＮＨＣｌ溶液(０.０８３mL、０.０８３mmol)で中和し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水および塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。粗３−(((Ｓ)−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)−２−ヒドロキシプロパンアミド)メチル)−４−フルオロピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル(１０８mg、＞９９％)を、さらに精製せずに次工程に使用した。LC/MS(uplc):MH⁺ 680.4, 1.36min。

工程Ｑ：Ｃｂｚ脱保護

３−(((Ｓ)−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)−２−ヒドロキシプロパンアミド)メチル)−４−フルオロピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル(１０８mg、０.１５９mmol)の脱気エタノール(３mL、０.０５Ｍ溶液)溶液にＰｄ／Ｃ(１７.２mg)を無水Ｎ_２雰囲気下添加した。水素ガス通気後、水素ガスバルーンを付して反応混合物を室温で３０分間撹拌した。反応混合物をセライト(登録商標)パッドで濾過し、それをメタノールおよびＥｔＯＡｃで洗浄した。揮発性有機濾液を真空で除去して粗アミンを得て、それを分取逆相ＨＰＬＣで精製した。合わせた生成物のフラクションを飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で中和し、それをＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。得られた生成物をアセトニトリルおよび水(１：１比)に溶解し、４８時間凍結乾燥した。白色粉末状(Ｓ)−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)−Ｎ−(((３Ｓ,４Ｒ)−４−フルオロピロリジン−３−イル)メチル)−２−ヒドロキシプロパンアミドを７５％収率(６６mg、２工程で)で遊離アミンとして得た。¹HNMR (CD₃Cl, 400MHz):δ 7.87 (1H, m), 7.33-7.27 (4H, m), 7.22-7.14 (2H, m), 7.08 (1H, m), 6.08 (1H, s), 4.71-4.62 (1H, m), 4.60-4.40 (1H, m), 4.23 (2H, s), 3.95 (1H, m), 3.63 (2H, m), 3.01-2.86 (1H, m), 2.70-2.46 (2H, m), 2.14-2.06 (2H, m), 1.45 (3H, m), 1.03 (9H, s). LC/MS(uplc):MH⁺ 546.4, 1.00min。

実施例２
３−(((Ｓ)−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)テトラヒドロフラン−２−カルボキサミド)メチル)−４−フルオロピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル

工程Ａ：アミド結合形成

(Ｓ)−(−)−２−テトラヒドロフロン酸(５０mg、０.４３mmol)の塩化チオニル(０.５mL)溶液を３０分間還流し、揮発性物質を完全に真空で濃縮した。粗生成物をジクロロメタン(０.３mL)に溶解し、それを３−(((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピルアミノ)メチル)−４−フルオロピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル(４０mg、０.０６６mmol)およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(３４μL、０.１９７mmol)の溶液に添加した。その後反応混合物を室温で一夜撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で反応停止させ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。粗生成物を分取逆相ＨＰＬＣで精製した。合わせた生成物のフラクションを飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で中和し、それをＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、所望の３−(((Ｓ)−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)テトラヒドロフラン−２−カルボキサミド)メチル)−４−フルオロピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル(３０mg、６４.６％)を得た。LC/MS(uplc):MH⁺ 706.0, 1.40min。

工程Ｂ：Ｃｂｚ脱保護

(３−(((Ｓ)−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)テトラヒドロフラン−２−カルボキサミド)メチル)−４−フルオロピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル(３０mg、０.０４３mmol)の脱気エタノール(０.５mL、０.１Ｍ溶液)溶液に、Ｐｄ／Ｃ(３mg、１０ｗｔ％)を無水Ｎ_２雰囲気下に添加した。水素ガス通気後、水素ガスバルーンを付して反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をセライト(登録商標)パッドで濾過し、それをＥｔＯＡｃで洗浄した。揮発性有機濾液を真空で除去して粗アミンを得て。粗生成物を分取逆相ＨＰＬＣで精製した。合わせた生成物のフラクションを飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で中和し、それをＥｔＯＡｃ(２００mL)で抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。乾燥生成物をアセトニトリルおよび水(１：１比)に溶解し、４８時間凍結乾燥した。白色粉末状(Ｓ)−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)−Ｎ−(((３Ｓ,４Ｒ)−４−フルオロピロリジン−３−イル)メチル)テトラヒドロフラン−２−カルボキサミドを収率１４％(５.４mg)で遊離アミンとして得た。LC/MS(uplc):MH⁺ 572.0, 1.04min。

実施例３
酢酸２−(((Ｒ)−１−(２−ベンジル−５−(２,５−ジフルオロフェニル)チオフェン−３−イル)−２,２−ジメチルプロピル)((Ｓ)−３−(１,３−ジオキソイソインドリン−２−イル)−４−フルオロブチル)アミノ)−２−オキソエチル

工程Ａ：還元的アミノ化

１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロパン−１−アミン(９５mg、０.２６７mmol)のジクロロメタン(２mL)溶液に、(Ｓ)−３−(１,３−ジオキソイソインドリン−２−イル)−４−フルオロブタナール(６２.８mg、０.２６７mmol)を０℃で添加し、Ｎａ(ＯＡｃ)３ＢＨ(１６９.８mg、０.８０１mmol)を添加した。反応混合物をこの温度で窒素下１時間撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で反応停止させ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水および塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー(３０％ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液)で精製して、２−((２Ｓ)−４−(１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピルアミノ)−１−フルオロブタン−２−イル)イソインドリン−１,３−ジオンのジアステレオマー混合物を白色泡状物(６５mg、４１％)として得た。LC/MS(uplc):MH+ 592.1, 1.05minおよび1.07min。

工程Ｂ：アミド結合形成

２−((２Ｓ)−４−(１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピルアミノ)−１−フルオロブタン−２−イル)イソインドリン−１,３−ジオン(６５mg、０.１２５mmol)のジクロロメタン(１mL、０.１Ｍ溶液)溶液に、室温でＤＩＥＡ(６５.３μL、０.３７５mmol)を添加した。酢酸(Ｓ)−１−クロロ−１−オキソプロパン−２−イル(３５μL、０.２７６mmol)を２分間かけて滴下した。得られた溶液を室温で１.５時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で反応停止させ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。揮発性有機物質を真空で除去後、粗ジアステレオマーを分取逆相ＨＰＬＣで精製した。合わせた各ジアステレオマーのフラクションを飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で中和し、それをＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。非極性ジアステレオマー、酢酸(Ｒ)−１−(((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)((Ｓ)−３−(１,３−ジオキソイソインドリン−２−イル)−４−フルオロブチル)アミノ)−１−オキソプロパン−２−イル、２３％(１０mg)。LC/MS(uplc)MH+ 706.2, 1.37min。極性異性体、酢酸(Ｒ)−１−(((Ｓ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)((Ｓ)−３−(１,３−ジオキソイソインドリン−２−イル)−４−フルオロブチル)アミノ)−１−オキソプロパン−２−イル、１２％(５mg)。LC/MS(uplc)MH⁺ 706.2, 1.36min。

工程Ｃ：脱保護

酢酸(Ｒ)−１−(((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)((Ｓ)−３−(１,３−ジオキソイソインドリン−２−イル)−４−フルオロブチル)アミノ)−１−オキソプロパン−２−イル(１０mg、０.０１４mmol)のＥｔＯＨ(１mL)溶液に、無水ヒドラジン(４５μL)を添加した。反応物を６０℃で１４時間加熱した。反応混合物を冷却後、白色沈殿をセライト(登録商標)パッドで濾過し、ＥｔＯＨで洗浄した。濾液を濃縮し、分取逆相ＨＰＬＣで精製した。純粋フラクションを合わせ、凍結乾燥して、(Ｓ)−Ｎ−((Ｓ)−３−アミノ−４−フルオロブチル)−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)−２−ヒドロキシプロパンアミド(２.３mg、２５％)をＴＦＡ塩として得た。LC/MS(uplc)MH⁺ 543.2, 1.05min。

実施例４
((Ｓ)−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)−Ｎ−(((３Ｓ,４Ｒ)−４−フルオロピロリジン−３−イル)メチル)−２−ヒドロキシプロパンアミド

工程Ａ：オキサゾール・コアの合成

封管中の３−ブロモ−２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチル(３.０ｇ、１０.５mmol)および２,５−ジフルオロベンズアミド(４.０ｇ、２５.５mmol)を１００℃で１５時間加熱した。冷却後、沈殿を濾別し、メタノールで洗浄した。濾液を真空で除去後、粗生成物を自動化カラムクロマトグラフィー(１０％〜６０％ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液)で精製した。分離できない副産物で汚染された５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−カルボン酸エチル(７３５mg、２０.４％)を得て、それを次工程にさらに精製せずに使用した。LC/MS(uplc):MH⁺ 344.1, 1.15min。

工程Ｂ：オキサゾールエステル類の還元

５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−カルボン酸エチル(５９０mg、１.７２mmol)のＴＨＦ(８.６mL)溶液に、ＬｉＢＨ_４(５６.２mg、２.５８mmol)を室温でゆっくり添加した。反応混合物を一夜撹拌した。水で反応停止後、反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を自動化カラムクロマトグラフィー(０〜１００％ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液)で精製して、(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)メタノール(４６０mg、８８％)を白色固体として得た。LC/MS(uplc):MH⁺ 302.2, 0.92min。

工程Ｃ：オキサゾールアルコールの酸化

(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)メタノール(９６６mg、３.２１mmol)のジクロロメタン(１６mL)溶液に、Dess-Martinペルヨージナン(２.０４mg、４.８１mmol)を添加した。反応混合物を室温で一夜撹拌した。２０mLの飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および飽和Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３溶液(８：１)を反応停止のために添加した。１時間撹拌後、反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水および塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を自動化カラムクロマトグラフィーで精製して、５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−カルボアルデヒド(８９８mg、９４％)を白色固体として得た。¹HNMR (CD₃Cl, 400MHz):δ 10.0 (1H, s), 7.70 (1H, m), 7.37-7.31 (3H, m), 7.29-7.25 (2H, m), 7.19-7.14 (2H, m), 4.44 (2H, s). LC/MS(uplc):MH⁺ 300.0, 1.06min。

工程Ｄ：ｔ−ブチルスルフィンイミンの合成

５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−カルボアルデヒド(８９８mg、３.０mmol)のＴＨＦ(３０.０mL)溶液に、(±)−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド(３６４mg、３.０mmol)およびＴｉ(ＯＥｔ)_４(１.３７mL、６.６mmol)を添加した。反応混合物を４時間、室温で撹拌した。反応混合物を塩水(３０mL)およびＥｔＯＡｃ(６０mL)で希釈し、セライト(登録商標)を添加した混合物を１時間激しく撹拌し、濾過した。濾液をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水および塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物(７７０mg、６４％)を自動化カラムクロマトグラフィーで精製して、(±)−Ｎ−((５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)メチレン)−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミドを薄黄色固体として得た。LC/MS(uplc):MH⁺ 403.0, 1.21min。

工程Ｅ：ｔ−ブチルリチウム付加反応

(±)−Ｎ−((５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)メチレン)−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド(７７０mg、１.９１mmol)の無水ＴＨＦ(７.６mL)溶液に、^ｔＢｕＬｉ(１.７Ｍペンタン溶液、３.３４mL、５.７４mmol)を−７８℃でゆっくり添加した。反応混合物を−７８℃で３時間撹拌後、ＭｅＯＨ(２mL)で反応停止させ、飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液(１０mL)を添加した。室温まで温まったら、反応混合物を３０分間撹拌し、ＥｔＯＡｃ(５０mL)で抽出した。有機層を水および塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を自動化カラムクロマトグラフィーで精製して、(±)−Ｎ−(１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド(３４０mg、３８.６％)を薄黄色固体として得た。¹HNMR (CDCl₃, 400MHz):δ 7.64 (1H, m), 7.38-7.27 (4H, m), 7.27-7.21 (1H, m), 7.12-6.99 (2H, m), 4.24 (1H, m), 4.12 (2Hm), 3.92 (1H, m), 1.27 (9H, s), 0.95 (9H, s). LC/MS(uplc):MH⁺ 461.2, 1.34min。

工程Ｆ：ｔ−ブチルスルフィニル基の脱保護

(±)−Ｎ−(１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド(３４０mg、０.７３８mmol)のＭｅＯＨ(１０mL)溶液に、４ＭＨＣｌのジオキサン溶液(３６９μL、１.４７６mmol)を添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で反応停止させ、ＥｔＯＡｃで希釈後、反応混合物を１５分間撹拌し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水および塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗(±)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロパン−１−アミンを９１％収率(２４０mg)で得て、それをさらに精製せずに次工程に使用した(主副産物、２−メチルプロパン−２−スルフィン酸メチルを高真空下で完全に除去した)。LC/MS(uplc):MH⁺ 340.2 (-NH₂), 0.91min。

工程Ｇ：還元的アミノ化

(±)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロパン−１−アミン(２４０mg、０.６７３mmol)のＣＨ_２Ｃｌ_２(５.０mL)溶液に、ＮａＢＨ(ＯＡｃ)_３(２.８６ｇ、１３.５mmol)を添加した。この溶液に、粗３−フルオロ−４−ホルミルピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｓ)−ベンジル(２.０当量の３−フルオロ−４−ビニルピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジルから得た)のＣＨ_２Ｃｌ_２(１.０mL)溶液を急速に室温で添加した。２０分間撹拌後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で反応停止させ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水および塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を分取逆相ＨＰＬＣで精製した。合わせた生成物のフラクションを飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で中和し、それをＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、３−((１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピルアミノ)メチル)−４−フルオロピロリジン−１−カルボン酸(±)−(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル(３７mg、９.２％)を得た。LC/MS(uplc)MH⁺ 592.4, 0.91min。

工程Ｈ：アミド結合形成

３−((１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピルアミノ)メチル)−４−フルオロピロリジン−１−カルボン酸(±)−(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル(３７mg、０.０６３mmol)のジクロロメタン(０.６３mL、０.１Ｍ溶液)溶液に、室温でＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(５５μL、０.３１３mmol)を添加した。酢酸(Ｓ)−１−クロロ−１−オキソプロパン−２−イル(１５.８μL、０.１２５mmol)を２分間かけて滴下した。得られた溶液を室温で２時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で反応停止させ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水および塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。２個のジアステレオマーを分取ＴＬＣ(２％ＭｅＯＨのジクロロメタン溶液)で分離した。極性ジアステレオマー、３−(((Ｓ)−２−アセトキシ−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)プロパンアミド)メチル)−４−フルオロピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル、１７％収率(７.５mg)。LC/MS(uplc):MH⁺ 706.4, 1.34min。非極性ジアステレオマー、３−(((Ｓ)−２−アセトキシ−Ｎ−((Ｓ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)プロパンアミド)メチル)−４−フルオロピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル、１６％収率(７.０mg)。LC/MS(uplc):MH⁺ 706.4, 1.35min。

工程Ｉ：脱アセチル化

３−(((Ｓ)−２−アセトキシ−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)プロパンアミド)メチル)−４−フルオロピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル(７.５mg、０.０１１mmol)のメタノール(２１３μL、０.０５Ｍ溶液)溶液に、Ｋ_２ＣＯ_３(１４.６９mg、０.１０６mmol)を室温で添加した。３０分間撹拌後、水で反応停止させ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水および塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。粗３−(((Ｓ)−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)−２−ヒドロキシプロパンアミド)メチル)−４−フルオロピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル(６.５mg、９２％)を、さらに精製せずに次工程に使用した。LC/MS(uplc):MH⁺ 664.3, 1.30min。

工程Ｊ：Ｃｂｚ脱保護

３−(((Ｓ)−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)−２−ヒドロキシプロパンアミド)メチル)−４−フルオロピロリジン−１−カルボン酸(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル(６.５mg、０.８μmol)の脱気エタノール(９８０μL、０.０１Ｍ溶液)溶液にＰｄ／Ｃ(５.０mg)を無水Ｎ_２雰囲気下添加した。水素ガス通気後、水素ガスバルーンを付して反応混合物を室温で３０分間撹拌した。反応混合物をセライト(登録商標)パッドで濾過し、それをメタノールおよびＥｔＯＡｃで洗浄した。揮発性有機濾液を真空で除去して粗アミンを得て、それを分取逆相ＨＰＬＣで精製した。合わせた生成物のフラクションを飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で中和し、それをＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。粗生成物を分取ＴＬＣで精製して、(Ｓ)−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)−Ｎ−(((３Ｓ,４Ｒ)−４−フルオロピロリジン−３−イル)メチル)−２−ヒドロキシプロパンアミド(２.５mg、４８.２％)を遊離アミンとして得た。LC/MS(uplc):MH⁺ 530.3, 0.94min。

実施例５
(Ｓ)−Ｎ−((Ｓ)−３−アミノ−４−フルオロブチル)−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)−２−ヒドロキシプロパンアミド

工程Ａ：還元的アミノ化

(±)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロパン−１−アミン(２５mg、０.０７mmol)のジクロロメタン(０.５mL)溶液に(Ｓ)−３−(１,３−ジオキソイソインドリン−２−イル)−４−フルオロブタナール(１６.５mg、０.０７mmol)を０℃で添加し、Ｎａ(ＯＡｃ)_３ＢＨ(２２mg、０.１１mmol)を添加した。反応混合物をこの温度で窒素下１時間撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で反応停止させ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水および塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物である(±)−２−((２Ｓ)−４−(１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピルアミノ)−１−フルオロブタン−２−イル)イソインドリン−１,３−ジオンを(±)−２−((２Ｓ)−４−(１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピルアミノ)−１−フルオロブタン−２−イル)イソインドリン−１,３−ジオンのジアステレオマー混合物(３９mg、９７％)として得た。LC/MS(uplc):MH⁺ 576.4, 1.03minおよび1.05min。

工程Ｂ：アミド結合形成

粗(±)−２−((２Ｓ)−４−(１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピルアミノ)−１−フルオロブタン−２−イル)イソインドリン−１,３−ジオン(３９mg、０.０６８mmol)のジクロロメタン(０.５mL)溶液に、室温でＤＩＥＡ(５２μL、０.２９mmol)を添加した。酢酸(Ｓ)−１−クロロ−１−オキソプロパン−２−イル(２８μL、０.２２mmol)を２分間かけて滴下した。得られた溶液を室温で１.５時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で反応停止させ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。揮発性有機物質を真空で除去後、粗ジアステレオマーを分取ＴＬＣで精製した。ＴＬＣで極性化合物である酢酸(Ｓ)−１−(((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)((Ｓ)−３−(１,３−ジオキソイソインドリン−２−イル)−４−フルオロブチル)アミノ)−１−オキソプロパン−２−イル、１７％(８mg)。LC/MS(uplc)MH+ 690.3, 1.27min。非極性化合物である酢酸(Ｓ)−１−(((Ｓ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)((Ｓ)−３−(１,３−ジオキソイソインドリン−２−イル)−４−フルオロブチル)アミノ)−１−オキソプロパン−２−イル、１７％(８mg)。LC/MS(uplc)MH⁺ 690.3, 1.28min。

工程Ｃ：脱保護

酢酸(Ｒ)−１−(((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)((Ｓ)−３−(１,３−ジオキソイソインドリン−２−イル)−４−フルオロブチル)アミノ)−１−オキソプロパン−２−イル(８mg、０.０１２mmol)のＥｔＯＨ(１mL)溶液に無水ヒドラジン(４０μL)を添加した。反応物を５０℃で２４時間加熱した。反応混合物を冷却後、白色沈殿をセライト(登録商標)パッドで濾過し、ＥｔＯＨで洗浄した。濾液を濃縮し、分取逆相ＨＰＬＣで精製した。純粋フラクションを合わせ、凍結乾燥して、(Ｓ)−Ｎ−((Ｓ)−３−アミノ−４−フルオロブチル)−Ｎ−((Ｒ)−１−(５−ベンジル−２−(２,５−ジフルオロフェニル)オキサゾール−４−イル)−２,２−ジメチルプロピル)−２−ヒドロキシプロパンアミド(３.２mg)をＴＦＡ塩として得た。LC/MS(uplc)MH⁺ 518.2, 0.96min。

実施例６、７および８の化合物を、それぞれ実施例４、５および３に概説した方法を使用して製造した。

実施例９
ＫＳＰ活性測定のためのアッセイ
本実施例は、インビトロでのＫＳＰ活性測定のための代表的インビトロアッセイを提供する。ウシ脳から得た精製微小管をCytoskeleton Inc. (Denver, Colorado, USA)から購入した。ヒトＫＳＰのモータードメイン(Ｅｇ５、ＫＮＳＬ１)をクローン化し、発現させ、９５％を超える均一性まで精製した。Biomol GreenをAffinity Research Products Ltd.(Matford Court, Exeter, Devon, United Kingdom)から購入した。微小管およびＫＳＰモータータンパク質(すなわち、ＫＳＰモータードメイン)を、アッセイ緩衝液(２０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ(ｐＨ７.５)、１mMＭｇＣｌ_２、１０mM ＤＴＴおよび０.２５mg／mL ＢＳＡ)中、最終濃度３５μg／mL微小管および４５nM ＫＳＰまで希釈した。微小管／ＫＳＰ混合物を３７℃で１０分間プレインキュベートし、ＫＳＰの微小管への結合を促した。

１.２５μLの阻害剤または試験化合物のＤＭＳＯ溶液(または対照の場合はＤＭＳＯのみ)を含む試験プレート(３８４ウェルプレート)の各ウェルに２５μLのＡＴＰ溶液(アッセイ緩衝液で３００μMの濃度に希釈したＡＴＰ)および２５μLの上記微小管／ＫＳＰ溶液を添加した。プレートをＲＴで１時間インキュベートした。インキュベーション後、６５μLのBiomol Green(無機ホスフェートの遊離を検出するマラカイトグリーン・ベースの色素)を各ウェルに添加した。プレートをさらに５〜１０分間インキュベートし、６３０nmの吸光度をVictor IIプレートリーダーを使用して測定した。６３０nmでの吸光度の量は、サンプル中のＫＳＰ活性の量に比例する。各阻害剤または試験化合物のＩＣ_５０を、各濃度での６３０nmの吸光度の低下に基づき、Excel用XLFitまたはGraphPad Software Inc.のPrismデータ解析ソフトウェアを使用して、非線形回帰により決定した。

表２に記載するのは、本発明の代表的化合物のＩＣ_５０値である。

実施例１０
ＫＳＰ阻害剤で処置した腫瘍細胞株における細胞増殖阻害
細胞を、９６ウェルプレートに約５００細胞／９６ウェルプレートウェルの密度で播種し、２４時間増殖させる。次いで、細胞を種々の濃度の化合物で７２時間処理する。１００μｌのCellTiter-Glo(登録商標)溶液を添加する。CellTiter-Glo^{(登録商標)}アッセイは、細胞溶解後にウェルに存在するＡＴＰの量を測定する；遊離されたＡＴＰは、酵素ルシフェラーゼおよびその基質ルシフェリンを含む酵素反応に使用される。発光の量はＡＴＰの量に比例し、それはさらにウェル中の生存細胞数に比例する。(Promega product catalog #G7573, CellTiter-Glo(登録商標) Luminescent Cell Viability Assay参照)。次いで、細胞を暗所で３０分間インキュベートする。発光の量を、ウェルあたりの細胞数と相関するWallac Triluxプレートリーダーを使用して各ウェルで測定する。ＤＭＳＯ(０.５％)のみを入れたウェル中の生存細胞数は０％阻害の指標として働き、細胞なしのウェルを細胞増殖の１００％阻害として働く。５０％増殖阻害(ＧＩ_５０)を生じる化合物濃度を、連続７２時間化合物暴露後に、ログ変換した用量値対細胞数(対照のパーセント)のシグモイド用量−応答曲線からグラフ的に決定する。
使用した細胞株を下に上げる。
細胞増殖アッセイを上記のとおり行う。

好ましい本発明の化合物は、ＧＩ_５０で測定して、記載するアッセイで約１mM未満の生物学的活性を有し、ある態様は約２５μM未満の生物学的活性を有し、他の態様は約１０００nM未満の生物学的活性を有し、さらに別の態様は約１００nM未満のＧＩ_５０を有する。

実施例１１
クローン形成性軟寒天アッセイプロトコール
ヒト癌細胞を、６ウェルプレートに３×１０^５細胞／ウェルで播種する。翌日、ある濃度の目的の化合物を各ウェルに添加する。２４時間および４８時間インキュベーション後、細胞を回収し、洗浄し、計数する。以下の工程をMultimek 96ロボットを使用して行う。ウェル辺り５００個の生存細胞を、細胞がウェル底に接着することを防止するためにPolyHemaでコートした９６ウェルプレートに播種する。アガロース(３％原液)を融解し、温媒体で希釈し、細胞に最終濃度０.５％で添加する。軟寒天が固化した後、プレートを３７℃で６日間インキュベートする。アラマーブルー色素を細胞に添加し、プレートをさらに６時間インキュベートする。光学密度の変化をTecanプレートリーダーで測定し、それは軟寒天に形成したコロニー数と相関する。癌性細胞は本寒天上で増殖でき、故に光学密度の増加を示す。光学密度読み取り値の減少は、癌細胞が阻害されていることを意味する。本発明の化合物は光学密度の減少を示すことが企図される。

Claims

式(Ｉ)：

〔式中、
Ｒ^１はアルキル、分枝鎖アルキルおよび置換アルキルから成る群から選択され；
Ｒ^２は水素、アルキルおよび置換アルキルから成る群から選択され；
Ｒ^３は−Ｌ^１−Ａ^１であり、ここで、Ｌ^１は−Ｃ(Ｏ)−、−Ｃ(Ｓ)−、−Ｓ(Ｏ)−および−Ｓ(Ｏ)_２−から成る群から選択され、Ａ^１はアルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキルおよびＮＲ^８Ｒ^９から成る群から選択され；
Ｒ^４は水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニルおよび置換アルキニルおよび場合により置換されていてよいピロリジニルから成る群から選択され；
またはＲ^３およびＲ^４は、それらが結合している窒素原子と一体となって５〜７員ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル基を形成し、ここで、場合により１個の炭素環原子はＯ、ＳまたはＮＲ^１１から成る群から選択されてよく；
ＸはＯまたはＳであり；
Ｒ^６はシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールから成る群から選択され、この全ては場合により−(Ｒ^１０)_ｍで置換されていてよく、ここで、Ｒ^１０はここに定義したとおりであり、ｍは１、２、３または４であり、ｍが２、３または４であるとき、各Ｒ^１０は同一でも異なってもよく；
Ｒ^７は−Ｌ^２−Ａ^２であり、ここで、Ｌ^２はＣ_１−Ｃ_５アルキレンであり、Ａ^２はアリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクロアルキルおよび置換ヘテロシクロアルキルから成る群から選択され、ただし、Ｒ^７はＸに結合しておらず；
Ｒ^８は水素およびアルキルから成る群から選択され；
Ｒ^９は水素、ヒドロキシ、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクロアルキルおよび置換ヘテロシクロアルキルから成る群から選択され；
またはＲ^８およびＲ^９は、それに結合した窒素原子と一体となってヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキルを形成し；
Ｒ^１０はシアノ、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、−ＣＦ_３、アルコキシ、置換アルコキシ、ハロおよびヒドロキシから成る群から選択され；
Ｒ^１１は水素、アルキル、置換アルキル、−ＳＯ_２アルキルおよび−ＳＯ_２置換アルキルから成る群から選択される。〕
の化合物またはその薬学的に許容される塩。
Ｒ^１がアルキルである、請求項１に記載の化合物。
Ｒ^２がＣ_１−４アルキルまたはＨである、請求項２に記載の化合物。
Ｒ^２がＨである、請求項３に記載の化合物。
Ｒ^１がｉ−プロピルまたはｔ−ブチルである、請求項４に記載の化合物。
Ｒ^３が−Ｌ^１−Ａ^１から選択され、ここで、Ｌ^１が−Ｃ(Ｏ)−、−Ｃ(Ｓ)−、−Ｓ(Ｏ)−および−Ｓ(Ｏ)_２−から成る群から選択され、Ａ^１がアルキルおよび置換アルキルから成る群から選択される、請求項５に記載の化合物。
Ｒ^３が−Ｌ^１−Ａ^１から選択され、ここで、Ｌ^１が−Ｃ(Ｏ)−であり、Ａ^１が置換アルキルである、請求項６に記載の化合物。
請求項Ｒ^４が水素、アルキルおよび置換アルキルから成る群から選択される、請求項７に記載の化合物。
Ｒ^４が置換アルキルまたは−ＣＨ_２−フルオロピロリジニルである、請求項８に記載の化合物。
Ｒ^３が−Ｌ^１−Ａ^１から選択され、ここで、Ｌ^１が−Ｃ(Ｏ)−であり、Ａ^１が−ＣＨ(ＣＨ_３)ＯＨである、請求項９に記載の化合物。
Ｒ^４が−(ＣＨ_２)_２−ＣＨ(ＣＨ_２Ｆ)ＮＨ_２または−ＣＨ_２−３−フルオロピロリジニルである、請求項１０に記載の化合物。
Ｒ^６がアリールおよびヘテロアリールから成る群から選択され、その全てが場合により−(Ｒ^１０)_ｍで置換されていてよく、ここで、Ｒ^１０が上に定義したとおりであり、ｍが１、２、３または４であり、ｍが２、３または４であるとき、各Ｒ^１０が同一でも異なってもよく；
Ｒ^７が−Ｌ^２−Ａ^２であり、ここで、Ｌ^２がＣ_１−Ｃ_２アルキレンであり、Ａ^２がアリールおよびヘテロアリールから成る群から選択される、
請求項１１に記載の化合物。
Ｒ^６が２個のＲ^１０基で置換されたアリールである、請求項１２に記載の化合物。
請求項Ｒ^６が２個のフッ素原子で置換されたフェニルである、請求項１２に記載の化合物。
Ｒ^７が−ＣＨ_２−アリールである、請求項１３に記載の化合物。
Ｒ^７が−ＣＨ_２−フェニルおよびＲ^６が１,４−ジフルオロ−フェニルである、請求項１４に記載の化合物。
次のものから選択される、式(Ｉ)の化合物：
治療有効量の請求項１に記載の化合物および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
さらに少なくとも１種の付加的癌処置剤を含む、請求項１８に記載の組成物。
付加的癌処置剤がイリノテカン、トポテカン、ゲムシタビン、イマチニブ、トラスツマブ、５−フルオロウラシル、ロイコボリン、カルボプラチン、シスプラチン、ドセタキセル、パクリタキセル、テザシタビン、シクロホスファミド、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン系、リツキシマブおよびトラスツマブから成る群から選択される、請求項１９に記載の組成物。
哺乳動物患者における、少なくとも一部ＫＳＰにより介在される障害の処置方法であって、当該処置を必要とする哺乳動物患者に治療有効量の請求項１に記載の化合物または請求項１８に記載の組成物を投与することを含む、方法。
障害が細胞増殖性疾患である、請求項２１に記載の方法。
細胞増殖性疾患が癌である、請求項２２に記載の方法。
癌が肺および気管支；前立腺；乳；膵臓；結腸および直腸；甲状腺；胃；肝臓および肝内胆管；腎臓および腎盂；膀胱；子宮体；子宮頸；卵巣；多発性骨髄腫；食道；急性骨髄性白血病；慢性骨髄性白血病；リンパ性白血病；骨髄球性白血病；脳；口腔および咽頭；喉頭；小腸；非ホジキンリンパ腫；黒色腫；および絨毛結腸腺腫から成る群から選択される、請求項２３に記載の方法。
付加的癌処置剤がイリノテカン、トポテカン、ゲムシタビン、イマチニブ、トラスツマブ、５−フルオロウラシル、ロイコボリン、カルボプラチン、シスプラチン、ドセタキセル、パクリタキセル、テザシタビン、シクロホスファミド、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン系、リツキシマブおよびトラスツマブから成る群から選択される、請求項１９に記載の方法。
哺乳動物患者におけるＫＳＰキネシンを阻害する方法であって、該患者に有効なＫＳＰ阻害量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む、方法。
次のものから選択される、式(Ｉ)の化合物：