JP2013523180A5 - - Google Patents

Claims (15)

1. 少なくとも一つの異種タンパク質の発現が内因性調節系により調節されるように、少なくとも一つの異種タンパク質をコードする配列を細胞の染色体内にインテグレートするための方法であって、該方法が：
   ａ）（ｉ）少なくとも一つの標的エンドヌクレアーゼあるいは標的エンドヌクレアーゼをコードする核酸、該標的エンドヌクレアーゼは標的配列に結合することができ、かつ内因性タンパク質をコードする標的とされる染色体配列における切断部位を切断することができるものである；および（ｉｉ）異種タンパク質コード配列を形成するために２Ａペプチドをコードする配列に連結される、少なくとも一つの異種タンパク質をコードする配列を含み、該異種タンパク質コード配列が切断部位の両側と実質的な配列同一性を有する上流配列および下流配列に挟まれるものである、少なくとも一つのドナーポリヌクレオチドを、細胞内に導入すること；および
   ｂ）標的エンドヌクレアーゼにより標的とされる染色体配列内に導入された二本鎖切断が、該ドナーポリヌクレオチドにおける異種タンパク質コード配列が、標的とされる染色体配列内にインフレームでインテグレートされ、それにより少なくとも一つの異種タンパク質の発現が、内因性タンパク質の発現を調節する内因性調節系により調節されるように、相同性指向修復過程により修復されるような条件下で、細胞を維持すること、
   を含む方法。
2. 標的エンドヌクレアーゼがジンクフィンガーヌクレアーゼである、請求項１に記載の方法。
3. ２Ａペプチドをコードする配列が異種タンパク質をコードする配列に５’または３’で連結される、請求項１に記載の方法。
4. 異種タンパク質コード配列が、標的とされる染色体配列のタンパク質コード配列の開始付近または終止付近にインテグレートされる、請求項１に記載の方法。
5. 少なくとも一つの異種タンパク質が抗体の重鎖または軽鎖である、請求項１に記載の方法。
6. 細胞がヒト細胞またはほ乳類細胞である、請求項１に記載の方法。
7. 標的とされる染色体配列が、アクチン、チューブリン、またはラミンタンパク質をコードする、請求項１に記載の方法。
8. 標的エンドヌクレアーゼが、配列番号１、２、３、４、５、６、７、および８から選択される配列と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列に結合するジンクフィンガーヌクレアーゼである、請求項１に記載の方法。
9. 配列同一性が８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％である、請求項８に記載の方法。
10. 細胞がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞であり、標的とされる染色体配列がアクチンタンパク質をコードし、かつジンクフィンガーヌクレアーゼが配列番号７および配列番号８から選択される配列に結合する、請求項８に記載の方法。
11. 少なくとも一つの異種タンパク質をコードする、染色体にインテグレートされた配列を含み、少なくとも一つの異種タンパク質をコードする配列が、少なくとも一つの異種タンパク質の発現が内因性タンパク質の発現と協調的に制御されるように、内因性タンパク質をコードする染色体配列とインフレームでインテグレートされるものである、細胞。
12. 内因性タンパク質および異種タンパク質のそれぞれが個別の構成要素として生成される、請求項１１に記載の細胞。
13. 少なくとも一つの異種タンパク質の発現を調節するために、内因性調節系を使用するための方法であって、該方法が：
    （ａ）２Ａペプチドをコードする配列に連結された少なくとも一つの異種タンパク質をコードする、染色体にインテグレートされた配列を含み、異種タンパク質および２Ａペプチドをコードする配列が内因性タンパク質をコードする染色体配列とインフレームでインテグレートされるものである、細胞を提供すること；および
    （ｂ）内因性調節系の活性化が、異種タンパク質、２Ａペプチド、および内因性タンパク質をコードする１つの転写産物を生成し、ここに２Ａペプチドが、異種タンパク質および内因性タンパク質のそれぞれが個別の構成要素として生産されるように翻訳を分断させるものであるような条件下で、細胞を維持すること、
    を含む方法。
14. 染色体配列が、アクチン、チューブリン、またはラミンタンパク質をコードする、請求項１３に記載の方法。
15. 細胞がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞であり、染色体配列がアクチンタンパク質をコードし、かつ異種タンパク質が抗体の重鎖または軽鎖である、請求項１３に記載の方法。