JP2012531205A - ブタインフルエンザヘマグルチニン変異体 - Google Patents
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Abstract
【選択図】図1A
Description
本出願は、米国特許法第119条(e)の下、2009年6月25日に出願された米国仮特許出願第61/220,426号;2009年7月23日に出願された同第61/227,986号;2009年8月14日に出願された同第61/234,021号;および2009年11月6日に出願された同第61/258,890号の恩典を主張する。これらの出願の各々は、その全体が参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
特に断りのない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって共通に理解されるのと同じ意味を有する。以下の定義は、当技術分野におけるそれらの意味を補足し、本出願に対するものであって、必ずしも関連する事例または無関係の事例(例えば、一般に所有される特許または特許出願)にまで及ぶべきものではない。本明細書に記載されるものと同様または同等の方法および材料を、本発明の試験の実施において使用することができるが、好ましい材料および方法が本明細書に記載されている。したがって、本明細書で使用される専門用語は、特定の実施形態のみを記載するためのものであり、限定することを意図するものではない。さらなる用語が、全体を通じて定義および記載されている。
本発明のポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、インフルエンザのHAおよび/またはNA配列の変異体である。例えば、下記の図1および図2の配列表を参照されたい。一般に、インフルエンザウイルスは、セグメント化された一本鎖RNAゲノムを含有する内部リボ核タンパク質コアとマトリックスタンパク質で裏打ちされた外側のリポタンパク質エンベロープとで構成されている。インフルエンザウイルスのゲノムは、免疫原性のヘマグルチニン(HA)タンパク質およびノイラミニダーゼ(NA)タンパク質、ならびに6つの内部コアポリペプチド(ヌクレオカプシド核タンパク質(NP)、マトリックスタンパク質(M)、非構造タンパク質(NS)および3つのRNAポリメラーゼ(PA、PB1、PB2)タンパク質)をコードする、線状の(−)鎖リボ核酸(RNA)の8つのセグメントから構成される。複製の間に、ゲノムウイルスRNAは、宿主細胞の核内で(+)鎖メッセンジャーRNAと(−)鎖ゲノムcRNAに転写される。8つのゲノムセグメントの各々は、RNAの他に、NPとポリメラーゼ複合体(PB1、PB2、およびPA)とを含むリボ核タンパク質複合体へとパッケージングされる。ヘマグルチニン分子は表面糖タンパク質からなり、宿主細胞表面受容体上のN−アセチルノイラミン酸(NeuNAc)(別名、シアル酸)に結合するよう作用する。本明細書におけるいくつかの実施形態では、本発明のポリペプチド(および本発明のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド)は、インビトロまたはインビボを問わず、NeuNAcに結合するよう作用することができる。そのような作用は、いくつかの実施形態では、ヘマグルチニン活性を保持するヘマグルチニンの断片によってなされることもできる。ヘマグルチニンは、HA1およびHA2という2つのサブユニットでできており、構造全体は、約550アミノ酸長で、約220kDである。ノイラミニダーゼ分子は、インフルエンザウイルスの細胞表面受容体から末端シアル酸残基を切断し、それによって、感染細胞からビリオンを放出させる。ノイラミニダーゼは、新たに作られたヘマグルチニン分子およびノイラミニダーゼ分子からもシアル酸を取り除く。本明細書におけるいくつかの実施形態では、本発明のポリペプチド(および本発明のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド)は、インビトロまたはインビボを問わず、シアル酸残基を切除するよう作用することができる。この作用は、いくつかの実施形態では、ノイラミニダーゼ活性を保持するノイラミニダーゼの断片によってなされることもできる。本発明のノイラミニダーゼポリペプチドは、インフルエンザウイルス由来の1以上の既知のノイラミニダーゼ分子との免疫学的交差反応性を示す。文献には、そのような既知のノイラミニダーゼの実例が多数存在する(例えば、GenBank、CDCからの刊行物など)。同様に、本発明のヘマグルチニンポリペプチドは、インフルエンザウイルス由来の1以上の既知のヘマグルチニン分子との免疫学的交差反応性を示す。これについても、文献にそのような既知のヘマグルチニン分子の実例が多数存在する。
本明細書中の配列、組成物および方法は、主にワクチン用のインフルエンザウイルスの生成に関係するが、それだけではない。歴史的に、インフルエンザウイルスワクチンは、主に、選択されたウイルス株または関連株の経験的な予測に基づくウイルス株を用いて孵化鶏卵で生成されている。最近では、承認された弱毒化温度感受性マスター株に関連して、選択されたヘマグルチニンおよび/またはノイラミニダーゼ抗原を組み込んだ再集合体ウイルスが生成されている。鶏卵での複数回の継代でウイルスを培養した後、インフルエンザウイルスを回収し、場合によって、例えば、ホルムアルデヒドおよび/またはβ−プロピオラクトンを用いて、不活化する(または代わりに弱毒化生ワクチンで使用する)。このように、(本発明に見られる)HAおよびNA配列が、インフルエンザワクチンを構築するのに極めて有用であることが理解されるであろう。
これまでに述べたように、インフルエンザワクチンの非常に多くの例および型が存在する。例示的なインフルエンザワクチンは、FluMist(MedImmune Vaccines Inc.,Mt.View,CA)であり、これは、インフルエンザ疾患から子供および大人を守る弱毒化生ワクチンである(Belshe et al.(1998) The efficacy of live attenuated,cold−adapted,trivalent,intranasal influenza virus vaccine in children N Engl J Med 338:1405−12;Nichol et al.(1999) Effectiveness of live,attenuated intranasal influenza virus vaccine in healthy,working adults:a randomized controlled trial JAMA 282:137−44)。典型的でかつ好ましい実施形態では、本発明の方法および組成物は、好ましくは、FluMistワクチンの生成に適合/使用される。しかしながら、本明細書中の配列、方法、組成物などは、同様のまたは異なるウイルスワクチンの生成にも適合可能であることが、当業者に理解されるであろう。
上記のように、FluMist(商標)ワクチンの生成で使用する代わりに、またはそれに加えて、本発明を他のワクチン製剤で使用することができる。一般に、本発明の組換えウイルスおよび再集合体ウイルスを、免疫学的に有効な量でかつ適切な担体または賦形剤中で予防的に投与して、HAおよび/またはNA配列によって決定されるようなインフルエンザウイルスの1つまたは複数の株に特異的な免疫応答を刺激することができる。通常、担体または賦形剤は、薬学的に許容される担体または賦形剤、例えば、滅菌水、生理食塩水溶液、緩衝生理食塩水溶液、ブドウ糖水溶液、グリセロール水溶液、エタノール、非感染鶏卵由来の尿膜腔液(すなわち、正常尿膜腔液もしくはNAF)、またはそれらの組合せである。滅菌性、pH、等張性、および安定性を保証するそのような溶液の調製は、当技術分野で確立されたプロトコルに従って達成される。一般に、担体または賦形剤は、アレルギーおよび他の望ましくない効果を最小限にするように、かつ特定の投与経路(例えば、皮下、筋肉内、鼻腔内など)に適するように選択される。
マイナス鎖RNAウイルスを、組換えリバースジェネティックスの手法を用いて遺伝子操作し、回収することができる(Paleseらに対する米国特許第5,166,057号)。そのような方法は、もともと、インフルエンザウイルスゲノムを操作するために適用され(Luytjes et al.(1989) Cell 59:1107−1113;Enami et al.(1990) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 92:11563−11567)、かつセグメント化されたおよびセグメント化されていない多種多様なマイナス鎖RNAウイルス、例えば、狂犬病(Schnell et al.(1994) EMBO J.13:4195−4203);VSV(Lawson et al.(1995) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 92:4477−4481);麻疹ウイルス(Radecke et al.(1995) EMBO J.14:5773−5784);牛痘ウイルス(Baron & Barrett(1997) J.Virol.71:1265−1271);ヒトパラインフルエンザウイルス(Hoffman & Banerjee(1997) J.Virol.71:3272−3277;Dubin et al.(1997) Virology 235:323−332);SV5(He et al.(1997) Virology 237:249−260);イヌジステンパーウイルス(Gassen et al.(2000) J.Virol.74:10737−44);およびセンダイウイルス(Park et al.(1991) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:5537−5541;Kato et al.(1996) Genes to Cells 1:569−579)に首尾よく適用されている。当業者であれば、本発明のHAおよびNA配列を含むインフルエンザウイルスを生成するためのこれらのおよび同様の技術に精通しているであろう。1以上の本発明の核酸および/またはポリペプチドを含む組換えインフルエンザウイルスと同様に、そのような方法によって生成される組換えインフルエンザウイルスもまた本発明の特徴である。当然、当業者に理解されるように、一般のインフルエンザウイルスは(そして、本発明のインフルエンザウイルスも)、マイナス鎖RNAウイルスである。したがって、インフルエンザウイルスが、例えば、図1の配列などを含むものとして本発明に記載されるとき、それは、通常、その配列の対応するマイナス鎖RNAバージョンを意味すると理解されるべきである。図1のヌクレオチド配列は、(ヌクレオチド配列中の一部の非翻訳領域とともに)遺伝子のDNAバージョン(例えば、コードするプラスセンスなど)を含む。当業者は、RNA配列とDNA配列(例えば、UからTへの変換など)、および相補的ヌクレオチド配列同士(RNA、DNAを問わない)などを容易に変換することができる。したがって、例えば、当業者は、ヌクレオチド配列から、対応するアミノ酸配列または対応する相補的配列(DNA、RNAを問わない)などに容易に変換することができる。また、明らかなことであるが、そのようなHAおよび/またはNA配列がDNAベクター(例えば、プラスミドなど)中に記載されている場合、通常、その配列の対応するDNAバージョンが理解されるべきである。この場合も、本発明の核酸は、本明細書中の配列表にある明示的な配列、およびそのような配列(RNAとDNAの両方)の相補体、配列表にある配列の二本鎖形態、配列表にある配列の対応するRNA形態(配列表にある明示的な配列のRNA相補体としてまたは例えば、同じセンスだが、Tの代わりにUを含むRNAから構成される、配列表にある配列のRNAバージョンとして、など)を含む。
本発明はまた、本発明のベクターが導入(形質導入、形質転換またはトランスフェクト)された宿主細胞、および組換え技術による本発明のポリペプチドの生成方法に関する。宿主細胞は、本発明のベクター(例えば、発現ベクター)を用いて遺伝子操作(すなわち、形質導入、形質転換またはトランスフェクト)されている。上記のように、ベクターは、プラスミド、ウイルス粒子、ファージなどの形態であることができる。適切な発現宿主の例としては、細菌細胞(例えば、大腸菌、ストレプトミセス、およびネズミチフス菌(Salmonella typhimurium);真菌細胞(例えば、出芽酵母(Saccharomyces cerevisiae)、ピキア・パストリス(Pichia pastoris)、およびアカパンカビ(Neurospora crassa);または昆虫細胞(ショウジョウバエ(Drosophila)およびヨトウガ(Spodoptera frugiperda)が挙げられる。
本発明に適用できる分子生物学的技術(例えば、クローニング、突然変異、細胞培養など)が記載されている一般的な教科書としては、Berger and Kimmel,Guide to Molecular Cloning Techniques,Methods in Enzymology 第152巻 Academic Press,Inc.,San Diego,CA(Berger);Sambrook et al.,Molecular Cloning − A Laboratory Manual(第3版),第1〜3巻,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,New York,2000(「Sambrook」)およびCurrent Protocols in Molecular Biology,F.M.Ausubel et al.,編,Current Protocols,a joint venture between Greene Publishing Associates,Inc.and John Wiley & Sons,Inc.,(2002年まで増補)(「Ausubel」))が挙げられる。これらの教科書には、突然変異導入、ベクターの使用、プロモーターおよび他の多くの関連トピック(例えば、HAおよび/またはNA分子の生成など)が記載されている。
いくつかの実施形態では、好適な宿主細胞株(cell line)または株(cell strain)に形質導入し、適切な細胞密度まで宿主細胞を増殖させた後、選択されたプロモーターを、適切な手段(例えば、温度変化または化学物質による誘導)によって誘導し、細胞をさらなる期間培養する。いくつかの実施形態では、次に、分泌型ポリペプチド産物(例えば、分泌型融合タンパク質形態のHAおよび/またはNAポリペプチド)を培養培地から回収する。他の実施形態では、1以上の本発明のHAおよび/またはNAポリペプチドを含むウイルス粒子を細胞から生成させる。あるいは、細胞を遠心分離によって回収し、物理的または化学的手段によって破壊し、得られた粗抽出物をさらなる精製のために保持することができる。タンパク質の発現に使用される真核細胞または微生物細胞を、凍結融解の繰返し、超音波処理、機械的破壊、もしくは細胞溶解剤の使用、または他の方法をはじめとする、当業者によく知られた任意の好都合な方法によって破壊することができる。さらに、本発明のHAおよび/またはNAポリペプチド産物を発現する細胞を、細胞からポリペプチドを分離することなく利用することができる。そのような状況では、本発明のポリペプチドは、場合によって、細胞表面に発現され、それゆえ、(例えば、HAおよび/もしくはNA分子、またはそれらの断片を有する(例えば、融合タンパク質などを含む)ことによって)細胞表面結合抗体で調べられる。そのような細胞もまた、本発明の特徴である。
本発明の発現ポリペプチドは、1以上の修飾アミノ酸を含むことができる。修飾アミノ酸の存在は、例えば、(a)ポリペプチド血清の半減期の増大、(b)ポリペプチドの抗原性の低下/増大、(c)ポリペプチドの保存安定性の増大などにおいて好都合であることができる。アミノ酸は、例えば、組換え生成の間に、翻訳と同時にもしくは翻訳後に修飾されるか(例えば、哺乳動物細胞での発現の間のN−X−S/TモチーフにおけるN結合型グリコシル化)または合成手段によって(例えば、PEG化によって)修飾される。
本発明はまた、本発明の配列(例えば、HAおよび/またはNAポリペプチドをコードするもの)またはその断片と、例えば、免疫グロブリン(またはその一部)、例えば、GFP(緑色蛍光タンパク質)または他の同様のマーカーなどをコードする配列との融合体を含む融合タンパク質を提供する。そのような融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列は、本発明の別の態様である。本発明の融合タンパク質は、場合によって、例えば、本発明の非融合タンパク質と同様の用途(例えば、本明細書に記載されたような治療的、予防的、診断的、実験的用途などを含む)に使用される。免疫グロブリン配列とマーカー配列との融合に加えて、本発明のタンパク質はまた、場合によって、例えば、融合タンパク質の選別および/または融合タンパク質の特定の細胞型、領域などへのターゲティングを可能とする配列と融合される。
本発明のポリペプチドを用いて、本明細書に示されたポリペプチドおよび/または本発明のポリヌクレオチド(例えば、本明細書に示されたもの)によってコードされるポリペプチド、ならびにそれらの保存的変異体に特異的な抗体を生成することができる。上述のポリペプチドに特異的な抗体は、例えば、診断および治療目的(例えば、標的ポリペプチドの活性、分布および発現に関するもの)に有用である。例えば、そのような抗体は、場合によって、本明細書中のHA/NA配列と同じ株に含まれる他のウイルスを規定するのに利用することができる。
本明細書に記載されるように、本発明は、核酸のポリヌクレオチド配列およびポリペプチドのアミノ酸配列(例えば、ヘマグルチニンおよびノイラミニダーゼ配列)、ならびに例えば、該配列を含む組成物および方法を提供する。該配列の例は、本明細書に開示されている。しかしながら、当業者であれば、本発明が本明細書に開示されたそれらの配列に必ずしも限定されるわけではなく、本発明が本明細書に記載された機能を有する多くの関連配列および無関係な配列(例えば、HA分子および/またはNA分子をコードするもの)も提供することを理解するであろう。
遺伝暗号の縮重のために、本発明のポリペプチドおよび/またはウイルスをコードする種々の核酸配列のどれかが場合によって生成され、そのうちのいくつかは、HAおよびNA核酸ならびに本明細書中のポリペプチド配列との低いレベルの配列同一性を有する可能性がある。以下に、多くの生物学および生化学の教科書に見られる、遺伝暗号を特定する典型的なコドン表を提供する。
遺伝暗号の縮重のために、「サイレント置換」(すなわち、コードされたポリペプチドに変化をもたらさない核酸配列中の置換)は、アミノ酸をコードする本発明の全ての核酸配列の黙示的な特徴である。同様に、アミノ酸配列中の1個または数個のアミノ酸における「保存的アミノ酸置換」は、高度に類似した特性を有する異なるアミノ酸で置換されており、これはまた、開示された構築物(例えば、本明細書中の構築物)と高度に類似したものとして容易に同定される。各々開示された配列のそのような保存的変異は本発明の特徴である。
3以上の核酸またはポリペプチド配列との関連において、「同一の」または「同一性」パーセントという用語は、下記の配列比較アルゴリズム(もしくは当業者に利用可能な他のアルゴリズム)のうちの1つを用いて、または目視検査によって測定される、最大一致を求めて比較および整列させたときに、同一であるか、または同一である特定の割合のアミノ酸残基もしくはヌクレオチドを有する3以上の配列またはサブ配列を指す。
本発明は、本明細書中の核酸および単離されたポリペプチドまたは組換えポリペプチド(例えば、本明細書に示した配列を含む)ならびに様々なサイレント置換およびその保存的置換についての本明細書中の配列情報に対応する文字列を含むデジタルシステム(例えば、コンピュータ、コンピュータ可読媒体および統合システム)を提供する。統合システムは、例えば、文字列に対応する遺伝子を作製するための遺伝子構成装置をさらに含むことができる。
本発明は、場合により、キットとしてユーザーに提供される。例えば、本発明のキットは、本明細書に記載の1以上の核酸、ポリペプチド、抗体、または細胞株(例えば、本発明のHAおよび/もしくはNA分子を含むか、または有するもの)を含む。キットは、診察用の核酸またはポリペプチド(例えば、抗体)、プローブセット(例えば、好適な容器に梱包されたcDNAマイクロアレイ)、または他の核酸(例えば、1以上の発現ベクター)を含むことができる。キットは、通常、発現産物、チューブおよび/または他の付属物を標識するための1以上の追加の試薬(例えば、基質、標識、プライマー)、サンプルを回収するための試薬、緩衝液、ハイブリダイゼーションチャンバー、カバーガラスなどをさらに含む。キットは、場合により、発見のためにキットの構成要素を用いる好ましい方法、または診断セットの用途などを詳述した指示セットまたはユーザーマニュアルをさらに含む。
組換えウイルスの作製:野生型(wt)A型インフルエンザH1N1ウイルスである、MDCK細胞から単離されたA/CA/4/09と卵から単離されたA/CA/7/09とを米国疾病対策センター(CDC)から得た。A/CA/4/09卵適合ウイルスRNAは、米国食品医薬品局(FDA)のZiping Ye博士によって提供された。A/CA/4/09およびA/CA/7/09のHAおよびNA遺伝子セグメントを、HAおよびNA遺伝子の末端配列に共通するプライマーを用いるRT−PCRで増幅させ、プラスミドベクターpAD3000(Hoffman(2000) PNAS 97:6108−6113)にクローニングした。特定の変化をHA遺伝子に導入するために、QuikChange(登録商標)部位特異的突然変異導入キット(Stratagene)を用いて部位特異的突然変異導入を行ない、シークエンシング解析によってHA配列を確認した。6:2再集合体ワクチン株は、H1N1ウイルスのHAおよびNAならびに低温適応型(ca)A/アナーバー/6/60(MDV−A、A型インフルエンザウイルスのマスタードナーウイルス)の6つの内部遺伝子セグメントをコードする8つのcDNAプラスミドを、共培養された293T細胞およびMDCK細胞に共トランスフェクトすることによって作製した。生成に使用されるワクチン株は、エレクトロポレーションによって無血清Vero/CEK細胞で生成される。ウイルスを10〜11日齢の孵化鶏卵の尿膜腔の中で繁殖させた。レスキューしたウイルスのHAおよびNA配列は、vRNAから増幅されたRT−PCR cDNAのシークエンシングによって確認した。
再集合体候補ワクチン株の作製
wt A/CA/4/09由来のHAおよびNA遺伝子セグメントを、感染させたMDCK細胞のRNAからRT−PCR増幅後にクローニングした。ヌクレオチド配列解析により、各々のHAまたはNA由来の合計12個のcDNAクローンが同一であることが分かった。このwt A/CA/4/09のHA配列およびNA配列を表すプラスミドを、MDV−Aの6つの内部タンパク質遺伝子セグメントを表すプラスミドと一緒に293/MDCK細胞にトランスフェクトしたが、MDCK細胞または卵のいずれにおいても生きた再集合体子孫を回収することができなかった。wt A/CA/4/09卵分離株からクローニングされたHA cDNAは、2つのアミノ酸位置において異種であった(表3)。解析した12個のクローンから、以下の変化:L191I(42%)、Q223R(50%)が観察され、1つ(8%)には、L191IとQ223Rの両方があった。これらの異なるHA配列を表すプラスミドを組み合わせて、MDV−A内部タンパク質遺伝子とともに293/MDCK細胞にトランスフェクトすると、再集合体ウイルスがすぐにレスキューされた。
表3に示すように、レスキューされたA/CA/4/09およびA/CA/7/09再集合体ワクチン株は、ニワトリ孵化卵において、季節性H1N1ワクチン株よりも少なくとも10倍低い7.4〜7.8log10FFU/mlという力価で複製された。さらに、回収されたA/CA/7/09再集合体ワクチン候補は、MDCK細胞で非常に小さいプラークを形成した。MDCK細胞および卵におけるワクチンウイルス増殖を改善するために、A/CA/7/09候補(V5およびV6)をMDCK細胞において4.0、0.4および0.04というmoiで2回継代し、その後、上清中に存在するウイルスをプラークアッセイで調べた。MDCKで継代したウイルスは全て、親ウイルスよりも遙かに大きい(2〜4mm)プラークを含有していた(図1)。MDCKで継代したV5およびV6ワクチン候補由来の12個のプラークのHA遺伝子セグメントをシークエンシングした。大きいプラーク形態の分離株の各々のHAは、以下の位置:K119NまたはK119E、K153E、K154E(V5由来)およびA186D(V6由来)のうちの1つに単一のアミノ酸変化を有していた。
H1 HAに導入されたアミノ酸変化のいずれかが、ウイルス抗原性に影響を及ぼしたかどうかを明らかにするために、HAIアッセイを用いて、A/CA/7/09変異体を、様々な感染後フェレット血清との反応性について評価した(表5)。低温適応型(ca)ウイルスである、223R残基を有するA/CA/4/07(V3)、222G残基を有するA/CA/7/09(V5)および223R残基を有するA/CA/7/09(V6)は、wt A/CA/4/09、ca A/CA/4/09(V3)、ca A/CA/7/09(V5)およびca A/CA/07/09(V6)で免疫化したフェレット由来の4つの参照血清と同様に反応した。V5の位置119および186にアミノ酸変化が導入された変異体は、V5と同様の抗原性を有していた。しかしながら、位置153、154および155に変化を有するウイルスは、これらの血清との反応性が遙かに低く、4倍を超える力価の低下が検出された。したがって、これらのデータは、残基153〜154での突然変異がワクチン株中に存在すべきでないことを示している。位置119および186での変化は、ウイルス抗原性に影響を及ぼすことなくワクチン株に導入することができた。
A/CA/7/09ワクチン変異体を、その弱毒化表現型および抗体応答を誘導するその能力について評価するために、フェレットに7.0log10FFUのウイルスを0.2mlの投与容量で鼻腔内接種し、フェレットの上下気道におけるウイルス複製をEID50アッセイで明らかにした。表6に示すように、A/CA/7/09変異体は全て、NT組織では効率的に複製したが、肺ではウイルスが検出されなかった。これらのデータにより、これらのウイルスがフェレットにおいて弱毒化されていること(これは、MDV−Aの6つの内部タンパク質遺伝子セグメントによって付与される特徴的な表現型である)が確認された。
卵中での野生型A/CA/4/09およびA/CA/7/09ウイルスの増殖によって、HA受容体結合部位におけるアミノ酸変化(D222GおよびQ223R)が生じた。これらの位置は、卵で継代した後の他のH1N1株で以前に同定されており、HA受容体結合特異性に関与している。ワクチンウイルス変異体が異なる受容体結合特異性を有するかどうかを明らかにするために、V5、V6ならびにV5−119およびV5−186変異体を、RBC結合アッセイにより、その受容体結合特異性について評価した(表7)。(222および223が変化していない)V4は、α2,3 SAよりもα2,6 SAに結合する傾向があった。V5(D222G)は、α2,3 SAおよびα2,6 SAで再シアリル化されたRBCに同程度によく結合した。しかしながら、V6(Q223R)は、α2,3 SAで再シアリル化されたRBCにしか結合することができず、これら2つの残基がウイルス受容体結合特異性に影響を及ぼすことが確認された。V5−119E/NおよびV5−186Dウイルスは、V5と同様の結合特異性を有していた。二重HA突然変異体V5−119E/186Dは、α2,3 SAよりもα2,6 SAに良好に結合する傾向があった。V6に導入された119Eおよび186D残基は、α2,6 SAに対するその結合を回復することができなかった(データは示さない)。したがって、119および186残基における変化は、ウイルス受容体結合特異性にそれほど影響を及ぼさない。
感染させた卵から回収した13mlの尿膜腔液を2mlの30%ショ糖クッションに25krpmで1時間通してペレット化した。ウイルスペレットを0.2mlのPBSに再懸濁した。5μlのウイルス懸濁液を4〜20%ポリアクリルアミドゲルに充填し、クマシーブルーで染色したサンプルの順番は以下の通りであった。
図3A
レーン1.組換えHAA/NC/20/99 0.5μg
レーン2.組換えHAA/NC/20/99 2μg
レーン3.MDVA−V5−119E/186D(FFA 8.6)
レーン4.MDVA−V6(FFA 7.9)
レーン5.MDVA−V6−186D(FFA 8.1)
レーン6.PR8−V5−119E/186D(FFA 8.2)
レーン7.PR8−V6(FFA 7.8)
レーン8.PR8−V6−186D(FFA 8.5)
レーン9.NYMC X−179A(FFA 8.5)
レーン10.PR8サウスダコタ(FFA 8.7)
図3B
レーン1.NYMC X−179A(FFA 8.5)
レーン2.MDVA−V5−119E/186D(FFA 8.6)
レーン3.MDVA−V5−119E/186D/PA−S395N(FFA8.9)
レーン4.サウスダコタ(FFA 8.7)
PR8由来の6つの内部ゲノムセグメントと、A/CA/7/09由来のHAおよびNAゲノムセグメントとを含む6:2再集合体インフルエンザウイルスを作製した。PR8由来の6つの内部ゲノムセグメントと、A/CA/7/09由来のNAゲノムセグメントと、本明細書に記載のH1 HA変異体ポリペプチドをコードするHAゲノムセグメントとを含むさらなる6:2再集合体ウイルスを作製した。A/Texas/5/2009 RG15(A/TX/7/09 RG15)およびA/カリフォルニア/07/09 NYMC X179Aとともに、様々なA/CA/7/09HA変異体を含む6:2再集合体ウイルスをニワトリ孵化卵中で拡大し、そのピーク力価をFFAで決定した。アッセイしたウイルス株を表8に示す。6:2PR8−サウスダコタは、PR8由来の6つの内部ゲノムセグメントと、A/サウスダコタ/6/07由来のHAおよびNAゲノムセグメントとを含む6:2再集合体ウイルスである。6:2AA−V5−119E/186Dは、A/アナーバー/6/60由来の6つの内部ゲノムセグメントと、A/CA/7/09由来のNAゲノムセグメントと、V5−119E/186D 変異体HAゲノムセグメントとを含む6:2再集合体ウイルスである。本明細書に記載のH1 HA変異体ゲノムセグメントを含むPR8再集合体ウイルスは、TIV生成に利用可能な最高収量株であるX179Aと同程度の力価を有していた。
PR8由来の6つの内部ゲノムセグメントと、A/CA/7/09 H1 HAゲノムセグメントの変異体と、A/CA/7/09 NAゲノムセグメントとを含むさらなる6:2再集合体インフルエンザウイルスを作製した。H1 HAアミノ酸変異を表9にまとめる。
Claims (341)
- a) 配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
b) K119E、K119NおよびA186Dからなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸置換を含む配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
c) K119EおよびA186Dアミノ酸置換を含む配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
d) K119NおよびA186Dアミノ酸置換を含む配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
e) D222Gおよび/またはQ223R置換を含む配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
f) (i)D222Gおよび/またはQ223R置換を含み、かつ(ii)K119E、K119NおよびA186Dからなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸置換をさらに含む配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
g) (i)D222Gおよび/またはQ223R置換を含み、かつ(ii)K119EおよびA186Dアミノ酸置換をさらに含む配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
h) (i)D222Gおよび/またはQ223R置換を含み、かつ(ii)K119NおよびA186Dアミノ酸置換をさらに含む配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
i) 配列番号1の残基1〜327のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
j) K119E、K119NおよびA186Dからなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸置換を含む配列番号1の残基1〜327のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
k) K119EおよびA186Dアミノ酸置換を含む配列番号1の残基1〜327のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
l) K119NおよびA186Dアミノ酸置換を含む配列番号1の残基1〜327のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
m) D222Gおよび/またはQ223R置換を含む配列番号1の残基1〜327のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
n) (i)D222Gおよび/またはQ223R置換を含み、かつ(ii)K119E、K119NおよびA186Dからなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸置換をさらに含む配列番号1の残基1〜327のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
o) (i)D222Gおよび/またはQ223R置換を含み、かつ(ii)K119EおよびA186Dアミノ酸置換をさらに含む配列番号1の残基1〜327のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
p) (i)D222Gおよび/またはQ223R置換を含み、かつ(ii)K119NおよびA186Dアミノ酸置換をさらに含む配列番号1の残基1〜327のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
q) 配列番号6のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
r) 配列番号6の残基1〜327のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
s) (a)〜(r)のいずれか1つのポリペプチドのアミノ酸配列と少なくとも95%、少なくとも98%、少なくとも98.5%、少なくとも99%、少なくとも99.2%、少なくとも99.4%、少なくとも99.6%、少なくとも99.8%または少なくとも99.9%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド;
t) 3個未満、5個未満、10個未満、15個未満、20個未満、25個未満、30個未満のアミノ酸残基が、置換、欠失または挿入されている(a)〜(r)のいずれか1つのポリペプチドのアミノ酸配列を含むポリペプチド;
u) (a)〜(r)のいずれか1つのポリペプチドのアミノ酸配列を含み、かつH273Y置換をさらに含むポリペプチド;および
v) 配列番号8のアミノ酸配列を含むポリペプチド
からなる群から選択される、単離されたポリペプチドまたは組換えポリペプチド。 - 前記ポリペプチドが免疫原性である、請求項1に記載の単離されたポリペプチドまたは組換えポリペプチド。
- 請求項1に記載の単離されたポリペプチドまたは組換えポリペプチドを含む滅菌組成物。
- 請求項1に記載の単離されたポリペプチドまたは組換えポリペプチドに特異的な抗体。
- 免疫学的有効量の請求項1に記載の単離されたポリペプチドまたは組換えポリペプチドを含む免疫原性組成物。
- 請求項1に記載の単離されたポリペプチドまたは組換えポリペプチドをコードする核酸を含む再集合体インフルエンザウイルス。
- 請求項1に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸または組換え核酸。
- 配列番号3または配列番号7のヌクレオチド配列を含む請求項7に記載の単離された核酸または組換え核酸。
- 前記核酸がDNAである、請求項7に記載の単離された核酸または組換え核酸。
- 前記核酸がRNAである、請求項7に記載の単離された核酸または組換え核酸。
- 前記ポリヌクレオチドが免疫原性ポリペプチドをコードする、請求項7に記載の単離された核酸または組換え核酸。
- 請求項7に記載の単離された核酸または組換え核酸を含む組成物。
- 免疫学的有効量の請求項7に記載の単離された核酸または組換え核酸を含む免疫原性組成物。
- 請求項7に記載の核酸を含む再集合体インフルエンザウイルス。
- 請求項8に記載の核酸を含む再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスが、1以上のドナーウイルス由来の6つの内部ゲノムセグメント、請求項1に記載のポリペプチドをコードする第1のゲノムセグメントおよびノイラミニダーゼポリペプチドをコードする第2のゲノムセグメントを含む6:2再集合体ウイルスである、再集合体インフルエンザウイルス。
- 請求項1に記載のポリペプチドをコードする第1のゲノムセグメントを含み、かつ6つの内部ゲノムセグメントと1以上のドナーウイルス由来のノイラミニダーゼポリペプチドをコードする第2のゲノムセグメントとをさらに含む7:1再集合体ウイルスである、再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記ドナーウイルスが、弱毒化、低温適応型および温度感受性からなる群から選択される1以上の表現型特性を含む、請求項16または17に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記ドナーウイルスが、A/アナーバー/6/60、A/プエルトリコ/8/34、A/レニングラード/134/17/57、およびA/レニングラード/17からなる群から選択される、請求項16〜18のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記ウイルスが生ウイルスである、請求項16〜19のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記第1のゲノムセグメントが、K119E、K119NおよびA186Dからなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸置換を有する配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項16〜20のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記第1のゲノムセグメントが、前記K119EおよびA186Dアミノ酸置換を含む配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項16〜20のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記第1のゲノムセグメントが、前記K119NおよびA186Dアミノ酸置換を含む配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項16〜20のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記第1のゲノムセグメントにコードされるポリペプチドのアミノ酸配列が、D222Gおよび/またはQ223R置換をさらに含む、請求項21〜23のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドがブタインフルエンザウイルスノイラミニダーゼである、請求項16〜24のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドがN1ノイラミニダーゼである、請求項16〜24のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドが配列番号4のアミノ酸配列を含む、請求項16〜26のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 細胞培養物中で再集合体インフルエンザウイルスを生成する方法であって、
a) インフルエンザウイルスゲノムを含む複数のベクターを、宿主細胞の集団に導入すること、ここで、複数のベクターは、第1のインフルエンザ株の6つの内部ゲノムセグメント;請求項1に記載のポリペプチドをコードする第1のゲノムセグメントおよびノイラミニダーゼポリペプチドをコードする第2のゲノムセグメントを含み、かつ集団は、インフルエンザウイルスの複製を支持することができる、と
b) 前記宿主細胞の集団を培養することと
c) 複数の再集合体インフルエンザウイルスを回収することと
を含む方法。 - 前記第1のゲノムセグメントが、K119E、K119NおよびA186Dからなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸置換を有する配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項28に記載の方法。
- 前記第1のゲノムセグメントが、前記K119EおよびA186Dアミノ酸置換を含む配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項28に記載の方法。
- 前記第1のゲノムセグメントが、前記K119NおよびA186Dアミノ酸置換を含む配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項28に記載の方法。
- 前記第1のゲノムセグメントにコードされるポリペプチドのアミノ酸配列が、D222Gおよび/またはQ223R置換をさらに含む、請求項28に記載の方法。
- 前記第2のゲノムセグメントがブタインフルエンザウイルスゲノムセグメントである、請求項28〜32のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドがN1ノイラミニダーゼである、請求項28〜33のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドが配列番号4のアミノ酸配列を含む、請求項28〜34のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1のインフルエンザウイルス株が、弱毒化、低温適応型および温度感受性からなる群から選択される1以上の表現型特性を含む、請求項28〜35のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1のインフルエンザ株が、A/アナーバー/6/60、A/プエルトリコ/8/34、A/レニングラード/134/17/57、およびA/レニングラード/17からなる群から選択される、請求項28〜35のいずれか一項に記載の方法。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスが、鼻腔内ワクチン製剤での投与に好適である、請求項28〜37のいずれか一項に記載の方法。
- 前記インフルエンザウイルスゲノムを含む複数のベクターがA型インフルエンザウイルスゲノムを含む、請求項28〜38のいずれか一項に記載の方法。
- 前記複数のベクターが複数のプラスミドベクターである、請求項28〜39のいずれか一項に記載の方法。
- 前記宿主細胞の集団が、Vero細胞、PerC6細胞、MDCK細胞、293T細胞、またはCOS細胞のうちの1つまたは複数を含む、請求項28〜40のいずれか一項に記載の方法。
- ヘルパーウイルスの使用を含まない、請求項28〜41のいずれか一項に記載の方法。
- 前記複数のベクターが8つのベクターからなる、請求項28〜42のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項1に記載の単離されたポリペプチドまたは組換えポリペプチドを含む免疫原性組成物。
- 請求項7に記載の単離された核酸または組換え核酸を含む免疫原性組成物。
- 賦形剤をさらに含む、請求項44または45に記載の組成物。
- 前記賦形剤が薬学的に許容される賦形剤である、請求項46に記載の組成物。
- 請求項14〜27のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスを含む免疫原性組成物。
- 1以上の薬学的に許容される賦形剤をさらに含む請求項48に記載の組成物。
- 前記組成物が弱毒化生インフルエンザワクチンである、請求項48または49に記載の組成物。
- 再集合体インフルエンザウイルスワクチンを生成する方法であって、
a) インフルエンザウイルスゲノムを含む複数のベクターを宿主細胞の集団に導入すること、ここで、複数のベクターは、第1のインフルエンザ株の少なくとも6つの内部ゲノムセグメント;請求項1に記載のポリペプチドをコードする第1のゲノムセグメントおよびノイラミニダーゼポリペプチドをコードする第2のゲノムセグメントを含み、かつその集団はインフルエンザウイルスの複製を支持することができる、と
b) 前記宿主細胞の集団を培養することと
c) 複数の再集合体インフルエンザウイルスを回収することと
d) 1以上の薬学的に許容される賦形剤を提供することと
を含む方法。 - 前記第1のゲノムセグメントが、K119E、K119NおよびA186Dからなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸置換を含む配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項51に記載の方法。
- 前記第1のゲノムセグメントが、前記K119EおよびA186Dアミノ酸置換を含む配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項51に記載の方法。
- 前記第1のゲノムセグメントが、前記K119NおよびA186Dアミノ酸置換を含む配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項51に記載の方法。
- 前記第1のゲノムセグメントにコードされるポリペプチドのアミノ酸配列が、D222Gおよび/またはQ223R置換をさらに含む、請求項51に記載の方法。
- 前記第2のゲノムセグメントがブタインフルエンザウイルスゲノムセグメントである、請求項51〜55のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドがN1ノイラミニダーゼである、請求項51〜55のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドが配列番号4のアミノ酸配列を含む、請求項51〜57のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1のインフルエンザウイルス株が、弱毒化、低温適応型および温度感受性からなる群から選択される1以上の表現型特性を含む、請求項51〜58のいずれか一項に記載の方法。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスが、鼻腔内ワクチン製剤での投与に好適である、請求項51〜59のいずれか一項に記載の方法。
- 前記インフルエンザウイルスゲノムを含む複数のベクターがA型インフルエンザウイルスゲノムを含む、請求項51〜60のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1のインフルエンザ株が、A/アナーバー/6/60、A/プエルトリコ/8/34、A/レニングラード/134/17/57、およびA/レニングラード/17からなる群から選択される、請求項51〜61のいずれか一項に記載の方法。
- 前記再集合体ウイルスが、鼻腔内ワクチン製剤での投与に好適である、請求項51〜62のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ウイルス感染の予防的または治療的処置のために対象内でウイルス感染に対する免疫原性応答を生じさせるのに有効な量で請求項1に記載のポリペプチドを含む、再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記対象が哺乳動物である、請求項64に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記哺乳動物がヒトである、請求項65に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記ウイルス感染がウイルス性インフルエンザ感染である、請求項64〜66のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスが、インビボで前記対象にまたはインビトロもしくはエクスビボで前記対象の1つもしくは複数の細胞に投与されることになっている、請求項64〜67のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスと薬学的に許容される賦形剤とを含む組成物が、前記ウイルス感染を予防的にまたは治療的に処置するのに有効な量で前記対象に投与される、請求項64〜68のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 孵化卵における再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価を増大させるための方法であって、配列番号1の位置119または186のアミノ酸残基に対応する位置の前記ヘマグルチニンポリペプチドのアミノ酸残基を改変し、それにより孵化卵における前記インフルエンザウイルスのピーク力価を増大させることを含む方法。
- 配列番号1の位置119のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基を改変する、請求項70に記載の方法。
- 配列番号1の位置119のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基をグルタミン酸(E)となるように改変する、請求項71に記載の方法。
- 配列番号1の位置119のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基をアスパラギン(N)となるように改変する、請求項71に記載の方法。
- 配列番号1の位置186のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基を改変する、請求項70に記載の方法。
- 配列番号1の位置186のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基をアスパラギン酸(D)となるように改変する、請求項74に記載の方法。
- 配列番号1の位置119および186のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基を改変する、請求項70に記載の方法。
- 配列番号1の位置119のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基をグルタミン酸(E)となるように改変し、かつ配列番号1の位置186のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基をアスパラギン酸(D)となるように改変する、請求項76に記載の方法。
- 配列番号1の位置119のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基をアスパラギン(N)となるように改変し、かつ配列番号1の位置186のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基をアスパラギン酸(D)となるように改変する、請求項76に記載の方法。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドがH1ヘマグルチニンポリペプチドである、請求項70〜78のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドがブタインフルエンザウイルスのヘマグルチニンポリペプチドである、請求項70〜78のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが配列番号1のアミノ酸配列を含む、請求項70〜80のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが、D222Gおよび/またはQ223R置換をさらに含む、請求項81に記載の方法。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスが、A/アナーバー/6/60、A/プエルトリコ/8/34、A/レニングラード/134/17/57、およびA/レニングラード/17からなる群から選択されるウイルスの少なくとも6つの内部ゲノムセグメントを含む、請求項70〜82のいずれか一項に記載の方法。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスが、A/アナーバー/6/60、A/プエルトリコ/8/34、A/レニングラード/134/17/57、およびA/レニングラード/17からなる群から選択されるウイルスの7つのゲノムセグメントを含む、請求項70〜82のいずれか一項に記載の方法。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、弱毒化、低温適応型および温度感受性からなる群から選択される1以上の表現型特性を含む、請求項70〜83のいずれか一項に記載の方法。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスが、A/アナーバー/6/60のまたはB/アナーバー/1/66の少なくとも6つの内部ゲノムセグメントを含む、請求項85に記載の方法。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスが、A/アナーバー/6/60またはB/アナーバー/1/66の7つのゲノムセグメントを含む、請求項85に記載の方法。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、アミノ酸改変を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて少なくとも2倍増加している、請求項70〜87のいずれか一項に記載の方法。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、アミノ酸改変を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて少なくとも4倍増加している、請求項70〜87のいずれか一項に記載の方法。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、アミノ酸改変を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて少なくとも8倍増加している、請求項70〜87のいずれか一項に記載の方法。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、アミノ酸改変を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて少なくとも10倍増加している、請求項70〜87のいずれか一項に記載の方法。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、アミノ酸改変を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて少なくとも20倍増加している、請求項70〜87のいずれか一項に記載の方法。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、アミノ酸改変を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて2倍〜10倍増加している、請求項70〜87のいずれか一項に記載の方法。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、アミノ酸改変を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて2倍〜20倍増加している、請求項70〜87のいずれか一項に記載の方法。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、アミノ酸改変を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて2倍〜40倍増加している、請求項70〜87のいずれか一項に記載の方法。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、アミノ酸改変を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて5倍〜20倍増加している、請求項70〜87のいずれか一項に記載の方法。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、アミノ酸改変を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて5倍〜40倍増加している、請求項70〜87のいずれか一項に記載の方法。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約7.5 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項70〜87のいずれか一項に記載の方法。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約8 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項70〜87のいずれか一項に記載の方法。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約8.5 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項70〜87のいずれか一項に記載の方法。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約9 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項70〜87のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項70〜101のいずれかに記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスを含む免疫原性組成物。
- 請求項70〜101のいずれかに記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスを含むインフルエンザワクチン。
- 請求項70〜101のいずれかに記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスを含む低温適応型であり、温度感受性の、弱毒化生インフルエンザワクチン。
- ヘマグルチニンポリペプチドが配列番号1の位置119または186のアミノ酸残基に対応する位置に改変されたアミノ酸残基を含む、ヘマグルチニンポリペプチドを含む再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記改変されたアミノ酸残基が配列番号1の位置119のアミノ酸残基に対応する、請求項105に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 配列番号1の位置119のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基がグルタミン酸(E)となるように改変されている、請求項106に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 配列番号1の位置119のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基がアスパラギン(N)となるように改変されている、請求項106に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記改変されたアミノ酸残基が配列番号1の位置186のアミノ酸残基に対応する、請求項105に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 配列番号1の位置186のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基がアスパラギン酸(D)となるように改変されている、請求項109に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 配列番号1の位置119および186のアミノ酸残基に対応する位置に改変されたアミノ酸残基を含む、請求項105に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記改変された配列番号1の位置119のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基がグルタミン酸(E)となるように改変され、かつ前記改変された配列番号1の位置186のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基がアスパラギン酸(D)となるように改変されている、請求項111に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記改変された配列番号1の位置119のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基がアスパラギン(N)となるように改変され、かつ前記改変された配列番号1の位置186のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基がアスパラギン酸(D)となるように改変されている、請求項111に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドがH1ヘマグルチニンポリペプチドである、請求項105〜113のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドがブタインフルエンザウイルスのヘマグルチニンポリペプチドである、請求項105〜113のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが配列番号1のアミノ酸配列を含む、請求項105〜115のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドがD222Gおよび/またはQ223R置換をさらに含む、請求項116に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- A/アナーバー/6/60、A/プエルトリコ/8/34、A/レニングラード/134/17/57、およびA/レニングラード/17からなる群から選択されるウイルスの少なくとも6つの内部ゲノムセグメントをさらに含む請求項105〜117のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- A/アナーバー/6/60、A/プエルトリコ/8/34、A/レニングラード/134/17/57、およびA/レニングラード/17からなる群から選択されるウイルスの7つのゲノムセグメントをさらに含む請求項105〜117のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、弱毒化、低温適応型および温度感受性からなる群から選択される1以上の表現型特性を含む、請求項105〜119のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスが、A/アナーバー/6/60、A/プエルトリコ/8/34、A/レニングラード/134/17/57、およびA/レニングラード/17からなる群から選択されるウイルスの少なくとも6つの内部ゲノムセグメントを含む、請求項120に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスが、A/アナーバー/6/60、A/プエルトリコ/8/34、A/レニングラード/134/17/57、およびA/レニングラード/17からなる群から選択されるウイルスの7つのゲノムセグメントを含む、請求項120に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、前記改変されたアミノ酸残基を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて少なくとも2倍増大している、請求項105〜122のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、前記改変されたアミノ酸残基を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて少なくとも4倍増大している、請求項105〜122のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、前記改変されたアミノ酸残基を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて少なくとも8倍増大している、請求項105〜122のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、前記改変されたアミノ酸残基を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて少なくとも10倍増大している、請求項105〜122のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、前記改変されたアミノ酸残基を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて少なくとも20倍増大している、請求項105〜122のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、前記改変されたアミノ酸残基を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて2倍〜10倍増大している、請求項105〜122のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、前記改変されたアミノ酸残基を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて2倍〜20倍増大している、請求項105〜122のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、前記改変されたアミノ酸残基を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて2倍〜40倍増大している、請求項105〜122のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、前記改変されたアミノ酸残基を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて5倍〜20倍増大している、請求項105〜122のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、前記改変されたアミノ酸残基を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて5倍〜40倍増大している、請求項105〜122のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約7.5 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項105〜122のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約8 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項105〜122のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約8.5 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項105〜122のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約9 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項105〜122のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 請求項105〜136のいずれかに記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスを含む免疫原性組成物。
- 請求項105〜136のいずれかに記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスを含むインフルエンザワクチン。
- 請求項105〜136のいずれかに記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスを含む低温適応型であり、温度感受性の、弱毒化生インフルエンザワクチン。
- アミノ酸EまたはNが位置119にあり、かつアミノ酸Dが位置186にあることを除いて、配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするゲノムセグメントを含む再集合体インフルエンザウイルス。
- アミノ酸EまたはNが位置119にあり、かつアミノ酸Dが位置186にあることを除いて、H1N1ブタインフルエンザウイルスのアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするHAゲノムセグメントを含む再集合体インフルエンザウイルス。
- 非天然アミノ酸が位置119および位置186にあることを除いて、H1N1ブタインフルエンザウイルスのアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするHAゲノムセグメントを含む再集合体インフルエンザウイルス。
- 請求項28〜43のいずれか一項に記載の方法によって生成される前記再集合体インフルエンザウイルスを含む免疫原性組成物。
- 1以上の薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、請求項143に記載の組成物。
- 前記組成物が弱毒化生インフルエンザワクチンである、請求項143または144に記載の組成物。
- ヘマグルチニンポリペプチドが、配列番号1の位置119のアミノ酸残基に対応する位置または配列番号1の位置186のアミノ酸残基に対応する位置に非天然アミノ酸を含む、ヘマグルチニンポリペプチドを含む再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが、配列番号1の位置119のアミノ酸残基に対応する位置または配列番号1の位置186のアミノ酸残基に対応する位置に非天然アミノ酸を含む、請求項146に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが、配列番号1の位置119のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基におけるグルタミン酸(E)、配列番号1の位置119のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基におけるアスパラギン(N)、および配列番号1の位置186のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基におけるアスパラギン酸(D)からなる群から選択される少なくとも1つの非天然アミノ酸を含む、請求項146に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが、配列番号1の位置119のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基におけるグルタミン酸(E)、および配列番号1の位置186のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基におけるアスパラギン酸(D)を含む、請求項148に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが、配列番号1の位置119のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基におけるアスパラギン(N)、および配列番号1の位置186のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基におけるアスパラギン酸(D)を含む、請求項148に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドがH1ヘマグルチニンポリペプチドである、請求項146〜150のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドがブタインフルエンザウイルスのヘマグルチニンポリペプチドである、請求項146〜150のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが、位置119および/または186にアミノ酸置換を有する配列番号1のアミノ酸配列を含む、請求項146〜152のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドがD222Gおよび/またはQ223R置換をさらに含む、請求項153に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- A/アナーバー/6/60、A/プエルトリコ/8/34、A/レニングラード/134/17/57、およびA/レニングラード/17からなる群から選択されるウイルスの少なくとも6つの内部ゲノムセグメントをさらに含む請求項146〜154のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- A/アナーバー/6/60、A/プエルトリコ/8/34、A/レニングラード/134/17/57、およびA/レニングラード/17からなる群から選択されるウイルスの7つのゲノムセグメントをさらに含む請求項146〜154のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、弱毒化、低温適応型および温度感受性からなる群から選択される1以上の表現型特性を含む、請求項146〜156のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、非天然のアミノ酸を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて少なくとも2倍増大している、請求項146〜157のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、非天然のアミノ酸を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて少なくとも4倍増大している、請求項146〜157のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、非天然のアミノ酸を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて少なくとも8倍増大している、請求項146〜157のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、非天然のアミノ酸を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて少なくとも10倍増大している、請求項146〜157のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、非天然のアミノ酸を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて少なくとも20倍増大している、請求項146〜157のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、非天然のアミノ酸を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて2倍〜10倍増大している、請求項146〜157のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、非天然のアミノ酸を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて2倍〜20倍増大している、請求項146〜157のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、非天然のアミノ酸を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて2倍〜40倍増大している、請求項146〜157のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、非天然のアミノ酸を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて5倍〜20倍増大している、請求項146〜157のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 孵化卵における前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスのピーク力価が、非天然のアミノ酸を含まない同じ再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスと比べて5倍〜40倍増大している、請求項146〜157のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約7.5 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項146〜157のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約8 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項146〜157のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約8.5 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項146〜157のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約9 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項146〜157のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 請求項146〜171のいずれかに記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスを含む免疫原性組成物。
- 請求項146〜171のいずれかに記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスを含むインフルエンザワクチン。
- 請求項146〜171のいずれかに記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスを含む低温適応型であり、温度感受性の、弱毒化生インフルエンザワクチン。
- 配列番号6のアミノ酸配列を含むヘマグルチニンポリペプチドを含む再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 配列番号6のアミノ酸配列との少なくとも95%、少なくとも98%、少なくとも98.5%、少なくとも99%、少なくとも99.2%、少なくとも99.4%、少なくとも99.6%、少なくとも99.8%または少なくとも99.9%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むヘマグルチニンポリペプチドを含む再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 3個未満、5個未満、10個未満、15個未満、20個未満、25個未満、30個未満のアミノ酸置換、欠失または挿入を含む配列番号6のアミノ酸配列を含むヘマグルチニンポリペプチドを含む再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 配列番号6の残基1〜327のアミノ酸配列を含むヘマグルチニンポリペプチドを含む再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 配列番号6の残基1〜327のアミノ酸配列との少なくとも95%、少なくとも98%、少なくとも98.5%、少なくとも99%、少なくとも99.2%、少なくとも99.4%、少なくとも99.6%、少なくとも99.8%または少なくとも99.9%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むヘマグルチニンポリペプチドを含む再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 3個未満、5個未満、10個未満、15個未満、20個未満、25個未満、30個未満のアミノ酸置換、欠失または挿入を含む配列番号6の残基1〜327のアミノ酸配列を含むヘマグルチニンポリペプチドを含む再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- A/アナーバー/6/60、A/プエルトリコ/8/34、A/レニングラード/134/17/57、およびA/レニングラード/17からなる群から選択されるウイルスの少なくとも6つの内部ゲノムセグメントをさらに含む請求項175〜180のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- A/アナーバー/6/60の少なくとも6つの内部ゲノムセグメントをさらに含む請求項175〜180のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- A/プエルトリコ/8/34の少なくとも6つの内部ゲノムセグメントをさらに含む請求項175〜180のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- A/アナーバー/6/60、A/プエルトリコ/8/34、A/レニングラード/134/17/57、およびA/レニングラード/17からなる群から選択されるウイルスの7つのゲノムセグメントをさらに含む請求項175〜180のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- A/アナーバー/6/60の7つのゲノムセグメントをさらに含む請求項175〜180のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- A/プエルトリコ/8/34の7つのゲノムセグメントをさらに含む請求項175〜180のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、弱毒化、低温適応型および温度感受性からなる群から選択される1以上の表現型特性を含む、請求項175〜186のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約7.5 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項175〜187のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約8 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項175〜187のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約8.5 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項175〜187のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約9 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項175〜187のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約9.5 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項175〜187のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約10 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項175〜187のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 請求項175〜193のいずれかに記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスを含む免疫原性組成物。
- 請求項175〜193のいずれかに記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスを含むインフルエンザワクチン。
- 請求項175〜193のいずれかに記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスを含む低温適応型であり、温度感受性の、弱毒化生インフルエンザワクチン
- ノイラミニダーゼポリペプチドをさらに含む請求項105〜196のいずれか一項に記載の再集合体組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドがブタインフルエンザウイルスノイラミニダーゼである、請求項197に記載の再集合体組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドがN1ノイラミニダーゼである、請求項197に記載の再集合体組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドが配列番号4のアミノ酸配列を含む、請求項197に記載の再集合体組換えインフルエンザウイルス。
- ドナーウイルスの6つの内部ゲノムセグメントと、ヘマグルチニンポリペプチドをコードする第1のゲノムセグメントと、ノイラミニダーゼポリペプチドをコードする第2のゲノムセグメントとを含む再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが前記配列番号6のアミノ酸配列を含む、請求項201に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが、前記配列番号6のアミノ酸配列との少なくとも95%、少なくとも98%、少なくとも98.5%、少なくとも99%、少なくとも99.2%、少なくとも99.4%、少なくとも99.6%、少なくとも99.8%または少なくとも99.9%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項201に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが、3個未満、5個未満、10個未満、15個未満、20個未満、25個未満、30個未満のアミノ酸置換、欠失または挿入を含む配列番号6のアミノ酸配列を含む、請求項201に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが配列番号6の残基1〜327のアミノ酸配列を含む、請求項201に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが、前記配列番号6の残基1〜327のアミノ酸配列との少なくとも95%、少なくとも98%、少なくとも98.5%、少なくとも99%、少なくとも99.2%、少なくとも99.4%、少なくとも99.6%、少なくとも99.8%または少なくとも99.9%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項201に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが、3個未満、5個未満、10個未満、15個未満、20個未満、25個未満、30個未満のアミノ酸置換、欠失または挿入を含む配列番号6の残基1〜327のアミノ酸配列を含む、請求項201に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドがブタインフルエンザウイルスノイラミニダーゼである、請求項201〜207のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドがN1ノイラミニダーゼである、請求項201〜207のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドが配列番号4のアミノ酸配列を含む、請求項201〜207のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ドナーウイルスが、A/アナーバー/6/60、A/プエルトリコ/8/34、A/レニングラード/134/17/57、およびA/レニングラード/17からなる群から選択される、請求項201〜210のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ドナーウイルスがA/アナーバー/6/60である、請求項201〜210のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ドナーウイルスがA/プエルトリコ/8/34である、請求項201〜210のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、弱毒化、低温適応型および温度感受性からなる群から選択される1以上の表現型特性を含む、請求項201〜213のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約7.5 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項201〜214のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約8 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項201〜214のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約8.5 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項201〜214のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約9 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項201〜214のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約9.5 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項201〜214のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約10 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項201〜214のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 請求項201〜220のいずれかに記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスを含む免疫原性組成物。
- 請求項201〜220のいずれかに記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスを含むインフルエンザワクチン。
- 請求項201〜220のいずれかに記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスを含む低温適応型であり、温度感受性の、弱毒化生インフルエンザワクチン。
- ドナーウイルスの6つの内部ゲノムセグメントと、ヘマグルチニンポリペプチドをコードする第1のゲノムセグメントと、ノイラミニダーゼポリペプチドをコードする第2のゲノムセグメントとを含む、再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記第1のゲノムセグメントが、配列番号7のヌクレオチド配列を含む、請求項224に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記第1のゲノムセグメントが、配列番号7の84〜1064のヌクレオチド配列を含む、請求項224に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドがブタインフルエンザウイルスノイラミニダーゼである、請求項224〜226のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドがN1ノイラミニダーゼである、請求項224〜226のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドが配列番号4のアミノ酸配列を含む、請求項224〜226のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記第2のゲノムセグメントが配列番号5のヌクレオチド配列を含む、請求項224〜226のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ドナーウイルスが、A/アナーバー/6/60、A/プエルトリコ/8/34、A/レニングラード/134/17/57、およびA/レニングラード/17からなる群から選択される、請求項224〜230のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ドナーウイルスがA/アナーバー/6/60である、請求項224〜230のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ドナーウイルスがA/プエルトリコ/8/34である、請求項224〜230のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、弱毒化、低温適応型および温度感受性からなる群から選択される1以上の表現型特性を含む、請求項224〜233のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約7.5 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項224〜234のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約8 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項224〜234のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約8.5 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項224〜234のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約9 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項224〜234のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約9.5 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項224〜234のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスが、孵化卵中で少なくとも約10 log10 PFU/mlの力価まで増殖する、請求項224〜234のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 請求項224〜240のいずれかに記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスを含む免疫原性組成物。
- 請求項224〜240のいずれかに記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスを含むインフルエンザワクチン。
- 請求項224〜240のいずれかに記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルスを含む低温適応型であり、温度感受性の、弱毒化生インフルエンザワクチン。
- ウイルス感染を予防的または治療的に処置するために対象内でウイルス感染に対する免疫原性応答を生じさせるのに有効な量の請求項14〜27または140〜142のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記対象が哺乳動物である、請求項244に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記哺乳動物がヒトである、請求項245に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記ウイルス感染がウイルス性インフルエンザ感染である、請求項244〜246のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスが、インビボで前記対象にまたはインビトロもしくはエクスビボで前記対象の1つもしくは複数の細胞に投与されることになっている、請求項244〜247のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスと薬学的に許容される賦形剤とを含む組成物が、前記ウイルス感染を予防的にまたは治療的に処置するのに有効な量で前記対象に投与される、請求項244〜248のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- ウイルス感染を予防的または治療的に処置するために対象内でウイルス感染に対する免疫原性応答を生じさせるのに有効な量の請求項105〜136、146〜171、175〜193、197〜220または224〜240のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記対象が哺乳動物である、請求項250に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記哺乳動物がヒトである、請求項251に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記ウイルス感染がウイルス性インフルエンザ感染である、請求項250〜252のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスが、インビボで前記対象にまたはインビトロもしくはエクスビボで前記対象の1つもしくは複数の細胞に投与されることになっている、請求項250〜253のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスと薬学的に許容される賦形剤とを含む組成物が、前記ウイルス感染を予防的にまたは治療的に処置するのに有効な量で前記対象に投与される、請求項250〜254のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスまたは組換えインフルエンザウイルス。
- 対象におけるウイルス感染の予防的または治療的処置方法であって、前記対象に、前記ウイルス感染に対する免疫原性応答を生じさせるのに有効な量の請求項14〜27または140〜142のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスを投与することを含む、方法。
- 前記対象が哺乳動物である、請求項256に記載の方法。
- 前記哺乳動物がヒトである、請求項257に記載の方法。
- 前記ウイルス感染がウイルス性インフルエンザ感染である、請求項256〜258のいずれか一項に記載の方法。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスが、インビボで前記対象にまたはインビトロもしくはエクスビボで前記対象の1つもしくは複数の細胞に投与される、請求項256〜259のいずれか一項に記載の方法。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスと薬学的に許容される賦形剤とを含む組成物が、前記ウイルス感染を予防的にまたは治療的に処置するのに有効な量で前記対象に投与される、請求項256〜260のいずれか一項に記載の方法。
- 対象におけるウイルス感染の予防的または治療的処置方法であって、前記対象に、前記ウイルス感染に対する免疫原性応答を生じさせるのに有効な量の請求項105〜136、146〜171、175〜193、197〜220または224〜240のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスを投与することを含む、方法。
- 前記対象が哺乳動物である、請求項262に記載の方法。
- 前記哺乳動物がヒトである、請求項263に記載の方法。
- 前記ウイルス感染がウイルス性インフルエンザ感染である、請求項262〜264のいずれか一項に記載の方法。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスが、インビボで前記対象にまたはインビトロもしくはエクスビボで前記対象の1つもしくは複数の細胞に投与される、請求項262〜265のいずれか一項に記載の方法。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスと薬学的に許容される賦形剤とを含む組成物が、前記ウイルス感染を予防的にまたは治療的に処置するのに有効な量で前記対象に投与される、請求項262〜266のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞培養物中で再集合体インフルエンザウイルスを生成する方法であって、
a) インフルエンザウイルスゲノムを含む複数のベクターを、宿主細胞の集団に導入すること、ここで、複数のベクターは、第1のインフルエンザ株の6つの内部ゲノムセグメント、ヘマグルチニンポリペプチドをコードする第1のゲノムセグメントおよびノイラミニダーゼポリペプチドをコードする第2のゲノムセグメントを含み、かつ宿主細胞の集団は、インフルエンザウイルスの複製を支持することができる、と
b) 前記宿主細胞の集団を培養することと
c) 複数の再集合体インフルエンザウイルスを回収することと
を含む方法。 - 前記ヘマグルチニンポリペプチドが配列番号6のアミノ酸配列を含む、請求項268に記載の方法。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが、配列番号6のアミノ酸配列との少なくとも95%、少なくとも98%、少なくとも98.5%、少なくとも99%、少なくとも99.2%、少なくとも99.4%、少なくとも99.6%、少なくとも99.8%または少なくとも99.9%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項268に記載の方法。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが、3個未満、5個未満、10個未満、15個未満、20個未満、25個未満、30個未満のアミノ酸置換、欠失または挿入を含む配列番号6のアミノ酸配列を含む、請求項268に記載の方法。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが配列番号6の残基1〜327のアミノ酸配列を含む、請求項268に記載の方法。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが、配列番号6の残基1〜327のアミノ酸配列との少なくとも95%、少なくとも98%、少なくとも98.5%、少なくとも99%、少なくとも99.2%、少なくとも99.4%、少なくとも99.6%、少なくとも99.8%または少なくとも99.9%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項268に記載の方法。
- 3個未満、5個未満、10個未満、15個未満、20個未満、25個未満、30個未満のアミノ酸置換、欠失または挿入を含む配列番号6の残基1〜327のアミノ酸配列を含む、請求項268に記載の方法。
- 前記第1のゲノムセグメントが、配列番号7のヌクレオチド配列を含む、請求項268に記載の方法。
- 前記第1のゲノムセグメントが前記配列番号7の84〜1064のヌクレオチド配列を含む、請求項268に記載の方法。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドがブタインフルエンザウイルスノイラミニダーゼである、請求項268〜276のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドがN1ノイラミニダーゼである、請求項268〜276のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドが配列番号4のアミノ酸配列を含む、請求項268〜276のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第2のゲノムセグメントが配列番号5のヌクレオチド配列を含む、請求項268〜276のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1のインフルエンザウイルス株が、弱毒化、低温適応型および温度感受性からなる群から選択される1以上の表現型特性を含む、請求項268〜280のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1のインフルエンザ株が、A/アナーバー/6/60、A/プエルトリコ/8/34、A/レニングラード/134/17/57、およびA/レニングラード/17からなる群から選択される、請求項268〜281のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1のインフルエンザ株がA/アナーバー/6/60である、請求項268〜281のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1のインフルエンザ株がA/プエルトリコ/8/34である、請求項268〜281のいずれか一項に記載の方法。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスが、鼻腔内ワクチン製剤での投与に好適である、請求項268〜284のいずれか一項に記載の方法。
- 前記インフルエンザウイルスゲノムを含む複数のベクターがA型インフルエンザウイルスゲノムを含む、請求項268〜285のいずれか一項に記載の方法。
- 前記複数のベクターが複数のプラスミドベクターである、請求項268〜286のいずれか一項に記載の方法。
- 前記宿主細胞の集団が、Vero細胞、PerC6細胞、MDCK細胞、293T細胞、またはCOS細胞のうちの1つまたは複数を含む、請求項268〜287のいずれか一項に記載の方法。
- ヘルパーウイルスの使用を含まない、請求項268〜288のいずれか一項に記載の方法。
- 前記複数のベクターが8つのベクターからなる、請求項268〜289のいずれか一項に記載の方法。
- 再集合体インフルエンザウイルスワクチンを生成する方法であって、
a) インフルエンザウイルスゲノムを含む複数のベクターを、宿主細胞の集団に導入すること、ここで、複数のベクターは、第1のインフルエンザ株の6つの内部ゲノムセグメント、ヘマグルチニンポリペプチドをコードする第1のゲノムセグメントおよびノイラミニダーゼポリペプチドをコードする第2のゲノムセグメントを含み、かつ宿主細胞の集団は、インフルエンザウイルスの複製を支持することができる、と
b) 前記宿主細胞の集団を培養することと
c) 複数の再集合体インフルエンザウイルスを回収することと
d) 1以上の薬学的に許容される賦形剤を提供することと
を含む方法。 - 前記ヘマグルチニンポリペプチドが配列番号6のアミノ酸配列を含む、請求項291に記載の方法。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが、配列番号6のアミノ酸配列との少なくとも95%、少なくとも98%、少なくとも98.5%、少なくとも99%、少なくとも99.2%、少なくとも99.4%、少なくとも99.6%、少なくとも99.8%または少なくとも99.9%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項291に記載の方法。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが、3個未満、5個未満、10個未満、15個未満、20個未満、25個未満、30個未満のアミノ酸置換、欠失または挿入を含む配列番号6のアミノ酸配列を含む、請求項291に記載の方法。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが配列番号6の残基1〜327のアミノ酸配列を含む、請求項291に記載の方法。
- 前記配列番号6の残基1〜327のアミノ酸配列との少なくとも95%、少なくとも98%、少なくとも98.5%、少なくとも99%、少なくとも99.2%、少なくとも99.4%、少なくとも99.6%、少なくとも99.8%または少なくとも99.9%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項291に記載の方法。
- 前記ヘマグルチニンポリペプチドが、3個未満、5個未満、10個未満、15個未満、20個未満、25個未満、30個未満のアミノ酸置換、欠失または挿入を含む配列番号6の残基1〜327のアミノ酸配列を含む、請求項291に記載の方法。
- 前記第1のゲノムセグメントが配列番号7のヌクレオチド配列を含む、請求項291に記載の方法。
- 前記第1のゲノムセグメントが配列番号7の84〜1064のヌクレオチド配列を含む、請求項291に記載の方法。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドがブタインフルエンザウイルスノイラミニダーゼである、請求項291〜299のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドがN1ノイラミニダーゼである、請求項291〜299のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドが配列番号4のアミノ酸配列を含む、請求項291〜299のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第2のゲノムセグメントが配列番号5のヌクレオチド配列を含む、請求項291〜299のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1のインフルエンザウイルス株が、弱毒化、低温適応型および温度感受性からなる群から選択される1以上の表現型特性を含む、請求項291〜303のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1のインフルエンザ株が、A/アナーバー/6/60、A/プエルトリコ/8/34、A/レニングラード/134/17/57、およびA/レニングラード/17からなる群から選択される、請求項291〜304のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1のインフルエンザ株がA/アナーバー/6/60である、請求項291〜304のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1のインフルエンザ株がA/プエルトリコ/8/34である、請求項291〜304のいずれか一項に記載の方法。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスが鼻腔内ワクチン製剤での投与に好適である、請求項291〜307のいずれか一項に記載の方法。
- 前記インフルエンザウイルスゲノムを含む複数のベクターがA型インフルエンザウイルスゲノムを含む、請求項291〜308のいずれか一項に記載の方法。
- 前記複数のベクターが複数のプラスミドベクターである、請求項291〜309のいずれか一項に記載の方法。
- 前記宿主細胞の集団が、Vero細胞、PerC6細胞、MDCK細胞、293T細胞、またはCOS細胞のうちの1つまたは複数を含む、請求項291〜310のいずれか一項に記載の方法。
- 前記方法がヘルパーウイルスの使用を含まない、請求項291〜311のいずれか一項に記載の方法。
- 前記複数のベクターが8つのベクターからなる、請求項291〜312のいずれか一項に記載の方法。
- ポリペプチドが、
a) 配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
b) H273Yアミノ酸置換を含む配列番号1のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
c) 配列番号8のアミノ酸配列を含むポリペプチド;
d) (a)〜(c)のいずれか1つのポリペプチドのアミノ酸配列との少なくとも95%、少なくとも98%、少なくとも98.5%、少なくとも99%、少なくとも99.2%、少なくとも99.4%、少なくとも99.6%、少なくとも99.8%または少なくとも99.9%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド;および
e) 3個未満、5個未満、10個未満、15個未満、20個未満、25個未満、30個未満のアミノ酸残基が置換、欠失または挿入された(a)〜(c)のいずれか1つのポリペプチドのアミノ酸配列を含むポリペプチド
からなる群から選択される、単離されたポリペプチドまたは組換えポリペプチド。 - 前記ポリペプチドが免疫原性である、請求項314に記載の単離されたポリペプチドまたは組換えポリペプチド。
- 請求項314に記載の単離されたポリペプチドまたは組換えポリペプチドを含む滅菌組成物。
- 請求項314に記載の単離されたポリペプチドまたは組換えポリペプチドに特異的な抗体。
- 免疫学的有効量の請求項314に記載の単離されたポリペプチドまたは組換えポリペプチドを含む免疫原性組成物。
- 請求項314に記載の単離されたポリペプチドまたは組換えポリペプチドをコードする核酸を含む再集合体インフルエンザウイルス。
- 請求項314に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸または組換え核酸。
- 前記核酸がDNAである、請求項320に記載の単離された核酸または組換え核酸。
- 前記核酸がRNAである、請求項320に記載の単離された核酸または組換え核酸。
- 前記ポリヌクレオチドが免疫原性ポリペプチドをコードする、請求項320に記載の単離された核酸または組換え核酸。
- 請求項320に記載の単離された核酸または組換え核酸を含む組成物。
- 免疫学的有効量の請求項320に記載の単離された核酸または組換え核酸を含む免疫原性組成物。
- 請求項320に記載の核酸を含む再集合体インフルエンザウイルス。
- 請求項321に記載の核酸を含む再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスが、1以上のドナーウイルス由来の6つの内部ゲノムセグメントと、請求項314に記載のポリペプチドをコードする第1のゲノムセグメントと、ノイラミニダーゼポリペプチドをコードする第2のゲノムセグメントとを含む6:2再集合体ウイルスである、再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記再集合体インフルエンザウイルスが、請求項314に記載のポリペプチドをコードする第1のゲノムセグメントを含み、かつ1以上のドナーウイルス由来の6つの内部ゲノムセグメントとノイラミニダーゼポリペプチドをコードする第2のゲノムセグメントとをさらに含む7:1再集合体ウイルスである、再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記ドナーウイルスが、弱毒化、低温適応型および温度感受性からなる群から選択される1以上の表現型特性を含む、請求項3146または17に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記ドナーウイルスが、A/アナーバー/6/60、A/プエルトリコ/8/34、A/レニングラード/134/17/57、およびA/レニングラード/17からなる群から選択される、請求項328〜330のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記ウイルスが生ウイルスである、請求項328〜331のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記第1のゲノムセグメントが、配列番号8のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項328〜332のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドがブタインフルエンザウイルスノイラミニダーゼである、請求項328〜333のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドがN1ノイラミニダーゼである、請求項328〜333のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 前記ノイラミニダーゼポリペプチドが配列番号4のアミノ酸配列を含む、請求項328〜333のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルス。
- 細胞培養物中で再集合体インフルエンザウイルスを生成するための方法であって、
a) インフルエンザウイルスゲノムを含む複数のベクターを、宿主細胞の集団に導入すること、ここで、複数のベクターは、第1のインフルエンザ株の6つの内部ゲノムセグメント、請求項314に記載のポリペプチドをコードする第1のゲノムセグメントおよびノイラミニダーゼポリペプチドをコードする第2のゲノムセグメントを含み、かつ宿主細胞の集団は、インフルエンザウイルスの複製を支持することができる、と
b) 前記宿主細胞の集団を培養することと
c) 複数の再集合体インフルエンザウイルスを回収することと
を含む方法。 - 請求項314に記載の単離されたポリペプチドまたは組換えポリペプチドを含む免疫原性組成物。
- 請求項328〜336のいずれか一項に記載の再集合体インフルエンザウイルスを含む免疫原性組成物。
- 再集合体インフルエンザウイルスワクチンを生成する方法であって、
a) インフルエンザウイルスゲノムを含む複数のベクターを、宿主細胞の集団に導入すること、ここで、複数のベクターは、第1のインフルエンザ株の少なくとも6つの内部ゲノムセグメント、請求項314に記載のポリペプチドをコードする第1のゲノムセグメントおよびノイラミニダーゼポリペプチドをコードする第2のゲノムセグメントを含み、かつ宿主細胞の集団は、インフルエンザウイルスの複製を支持することができる、と
b) 前記宿主細胞の集団を培養することと
c) 複数の再集合体インフルエンザウイルスを回収することと
d) 1以上の薬学的に許容される賦形剤を提供することと
を含む方法。 - 前記ウイルス感染を予防的または治療的に処置するために対象内でウイルス感染に対する免疫原性応答を生じさせるのに有効な量の、請求項314に記載のポリペプチドを含む再集合体インフルエンザウイルス。
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