JP2012525407A - 免疫複合体の精製 - Google Patents
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Abstract
Description
本特許出願は、2009年4月29日出願の米国仮特許出願第61/173,896号に優先権の利益を主張し、これは参照により、すべての目的のために組み入れられる。
科学および医学文献において、様々な種類の免疫複合体が記載され、使用されてきた。例えば、抗体および蛍光もしくは他の種類の検出可能な標識の複合体は、診断および他の研究分野で広く多岐にわたる用途を有する。抗体および毒素、放射性同位体、もしくは他の生物活性化合物の複合体は、多岐にわたる治療用途を有する。
(a) 複合体、非複合抗体、および非複合作用物質が混合モードクロマトグラフィー支持体に結合できる条件下で、複合体、非複合抗体、および非複合作用物質の混合物を支持体に接触させる工程;
(b) 少なくとも複合体の過半数が支持体に結合したままである一方で、非複合抗体および非複合作用物質が支持体から実質的に除去されるように支持体を緩衝液に接触させる工程;および、その後
(c) 複合体を支持体から溶出させ、これにより非複合抗体および非複合作用物質から抗体-作用物質複合体を精製する工程。
「抗体」は、免疫グロブリン、その複合もしくは断片の形態を指す。この用語は天然、もしくはヒト化、ヒト、単鎖、キメラ、合成、組換え、ハイブリッド、変異、移植、およびインビトロ生成抗体等の遺伝子操作された形態を含む、ヒトまたは他の哺乳動物細胞株に由来するクラスIgA、IgD、IgE、IgG、およびIgMのポリクローナルまたはモノクローナル抗体を含んでもよいが、それらに限定されない。「抗体」は免疫グロブリン部分を含む融合タンパク質を含むが、それに限定されない複合の形態も含んでよい。「抗体」はFab、F(ab')2、Fv、scFv、Fd、dAb、Fcおよび他の組成物等の抗体断片も、それらが抗原結合機能を保持していようがいまいが含んでよい。
I.序論
本発明は、免疫複合体および非複合反応物が支持体に結合されており、その後非複合反応物が支持体から洗浄され、続いて免疫複合体が支持体から溶出され、これにより非複合反応物から免疫複合体を精製する過程において混合モード支持体上で免疫複合体を精製できるという発見に一部関連する。
任意の免疫複合体、すなわち他の作用物質に共有結合した1つ以上の抗体もしくはその断片が本発明の方法によって精製できると考えられている。
本発明において、天然、合成、もしくは組換えの供給源からの未精製または部分的に精製された抗体を含む任意の抗体調製物を使用できる。未精製の抗体調製物は、血漿、血清、腹水、乳、植物抽出物、細菌溶解物、酵母溶解物、もしくは細胞馴化培地を含むが、それらに限定されない様々な供給源から得ることができる。部分的に精製された調製物は、少なくとも1回のクロマトグラフィー、沈殿、他の分画工程、もしくは上記の任意の組合せによって処理された未精製調製物から得ることができる。いくつかの態様において、本明細書に記載の精製の前に、抗体はプロテインA親和性によって精製されており、もしくは精製されていない。
広く多岐にわたる作用物質を抗体に連結できる。作用物質はタンパク質(例えば生物活性タンパク質、治療タンパク質、ホルモン、細胞毒性物質、毒性タンパク質、検出可能なタンパク質等)、核酸、小分子(例えば小分子治療薬、診断薬、例えば標識、もしくは毒素)、光増感剤(ポルフィリンおよびハイドロポルフィリンを含むが、それらに限定されない)、および放射性同位体を含み得る。本質的には、抗体によって標的となる任意の作用物質が抗体と複合され得る。
広く多岐にわたるリンカー科学技術が公知であり、免疫複合体を形成するために、本明細書に記載されているように抗体を作用物質に連結するのに使用できる。例えば、リンカー試薬が抗体の標的特性の保持を提供する限り、そして任意で、抗体に連結された作用物質の活性を妨げない限り、任意の適切な二官能性架橋試薬を本発明に関連して使用できる。いくつかの態様において、リンカー分子は(上述したように)化学結合を通して薬剤を抗体に結び付け、薬剤および抗体は互いに化学的に連結される(例えば共有結合する)。いくつかの態様において、連結試薬は開裂可能なリンカーである。適切な開裂可能なリンカーの例には、ジスルフィドリンカー、酸解離性リンカー、光解離性リンカー、ペプチダーゼ解離性リンカー、およびエステラーゼ解離性リンカーが含まれる。ジスルフィド含有リンカーはジスルフィド交換を通して開裂可能なリンカーで、これは生理的条件下で起こり得る。酸解離性リンカーは酸性pHで開裂可能なリンカーである。例えば、エンドソームおよびリソソーム等の特定の細胞内区分は酸性pH(pH 4〜5)であり、酸解離性リンカーを開裂させるのに適した条件を提供する。光解離性リンカーは光の到達できる体表および多くの体腔内で有用である。さらに、赤外光は組織を透過できる。ペプチダーゼ解離性リンカーは細胞内外の特定のペプチドを開裂させるのに使用できる(例えばTrouet et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79: 626-629 (1982)およびUmemoto et al., Int. J. Cancer, 43: 677-684 (1989)を参照)。
本発明は、免疫複合体および非複合免疫複合体成分(例えば非複合抗体および非複合作用物質)が混合モード支持体に結合しており、続いて免疫複合体が非複合成分から精製されるように溶出されるような、免疫複合体を「結合-溶出」モードで精製するための方法を提供する。本明細書中の本発明に関連する「結合-溶出モード」とは、標的タンパク質(例えば免疫複合体)および所望しない混入物質(例えば非複合成分)の両者が混合モードクロマトグラフィー支持体に結合するような緩衝液の条件が確立されるクロマトグラフィーの操作手段を指す。免疫複合体の他の成分からの分画は、成分および免疫複合体が支持体から別々に溶出するように条件を変化させることで、続いて達成される。
本発明に従って、免疫複合体および非複合成分が吸着(本明細書において「結合」とも呼ばれる)できる条件下で、免疫複合体および非複合成分を含む混合物を混合モード支持体に接触させる。
支持体に結合した非複合成分(非複合抗体もしくは非複合作用物質)を実質的に除去するために、添加に続いて1つ以上の洗浄工程が起こり得る。「実質的に除去する」とは、作用物質の少なくとも75%(任意で、少なくとも85%、95%、もしくは95%以上)が支持体から除去されることを意味する。結合した免疫複合体が支持体に結合したままであるような条件が選択される。いくつかの態様において、結合した免疫複合体の少なくとも過半数は洗浄条件で除去されない。任意で、結合した免疫複合体の少なくとも50%、65%、75%、85%、もしくは90%以上が洗浄工程の間に結合したままである。典型的な洗浄条件は、例えば添加工程における塩濃度に比べて溶液中の塩濃度を増加させることを含み得る。例えば、NaCl、KCl、ホウ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、もしくは他の可溶性塩の量を最初の結合条件に比べて増加させることができ、これにより非複合成分が支持体から除去される。例えば、任意で緩衝液濃度を変化させずに、任意で比較的低くする(例えば50mM未満、例えば5〜20mM)一方で、塩(NaClを含むが、それに限定されない)の量を例えば少なくとも0.75M、例えば1〜3M、0.75〜1.5M、例えば約2Mに(勾配的もしくは段階的に)増加させることができる。任意で、いくつかの態様において、洗浄のpHは5.5〜11の間、例えば5.5〜8.5、例えば6〜6.5、例えば約6である。
非複合成分の除去に続いて、免疫複合体を溶出させるために再度条件を変化させることができる。溶出条件は、例えばイオンおよび/または緩衝液の濃度を増加させ、これにより支持体から免疫複合体を競合させることを含み得る。例えば、リン酸塩に基づく緩衝液システムでは、いくつかの態様において、緩衝液の濃度は例えば少なくとも100mM、例えば100〜900mM、例えば200〜600mM、例えば300〜500mMに引き上げられる。任意で、pHはpH 5.5〜11の間、例えば5.5〜8.5、例えば6〜6.5の間に維持される。
IgG-フィコエリスリン複合体:100mM クエン酸ナトリウム、0.15M NaCl、pH 6.0を含む複合反応混合物中のGAH-PE。フィコエリスリンにはヒドラジン官能基が組み込まれ、IgGにはケトンが組み込まれ、そして活性分子は2:1のIgG:PE比でpH 6.1において3時間連結された。
セラミックフルオロアパタイトCFTタイプII(40μm)、
セラミックハイドロキシアパタイトCHTタイプI(40μm)。
10mM NaPO4、pH 7で最初に平衡化しておいたCFTカラム(0.5×5.1cm)上に添加する前に、リン酸濃度を10mMに低下させるために精製GAH-PEを水で5倍に希釈した。その後、20カラム体積を超えて2M NaClまで直線勾配によりGAH-PEを溶出させた。図1に示すように、後にSDS-PAGE解析で確認されたように(データは示さず)、添加の間にGAH-PEはカラムを通過した。NaCl勾配による溶出の間にGAH-PEは見出されなかった。NaCl勾配による溶出の最初に、電導度が上昇し始めた際に6.9から6.1へのpH下落が観察された。これは恐らくナトリウムイオン濃度が増加したことでCFT表面上の陽子が緩衝液中に置換されたためである。
前平衡化(Pre-equilibration):300cm/時で5カラム体積の500mM NaPO4、pH 6.5
平衡化:5カラム体積の2mM NaPO4、50mM MES、pH 6
添加:前もって平衡化緩衝液に交換された複合反応混合物中の約0.5mgのGAH-PE複合体(注記:添加はまだ最適化されていない)
洗浄:10カラム体積の10mM NaPO4、40mM MES、1M NaCl、pH 6
溶出:6カラム体積の300mM NaPO4、pH 6.5
ストリップ:5カラム体積の500mM NaPO4、pH 6.5
サニタイゼーション:5カラム体積の1N NaOH
保存:5カラム体積の0.1N NaOH
Claims (20)
- 非複合抗体および非複合作用物質から抗体-作用物質複合体を精製するための方法であって、以下の工程を含む方法、
(a) 複合体、非複合抗体、および非複合作用物質が混合モードクロマトグラフィー支持体に結合できる条件下で、複合体、非複合抗体、および非複合作用物質の混合物を支持体に接触させる工程;
(b) 少なくとも複合体の過半数が支持体に結合したままである一方で、非複合抗体および非複合作用物質が支持体から実質的に除去されるように支持体を緩衝液に接触させる工程;および、その後
(c) 複合体を支持体から溶出させ、これにより非複合抗体および非複合作用物質から抗体-作用物質複合体を精製する工程。 - 工程(b)の緩衝液が工程(a)の混合物に比べてより高い塩濃度を含む、請求項1記載の方法。
- 塩濃度が0.5および4Mの間である、請求項2記載の方法。
- 塩がNaClである、請求項2または3のいずれか一項記載の方法。
- 工程(c)が工程(b)の濃度に比べて緩衝液の濃度を増加させることを含む、請求項1記載の方法。
- 工程(c)が工程(b)の塩濃度に比べて塩濃度を減少させることを含む、請求項1または5のいずれか一項記載の方法。
- 工程(a)の混合物のpHが約pH 5.5およびpH 11の間である、請求項1記載の方法。
- 工程(b)の緩衝液のpHが約pH 5.5およびpH 11の間である、請求項1記載の方法。
- 溶出の工程が、pHが約pH 5.5およびpH 11の間である溶出緩衝液に支持体を接触させることを含む、請求項1記載の方法。
- 緩衝液がリン酸緩衝液である、請求項1記載の方法。
- 作用物質が標識、ホルモン、細胞毒性物質、および放射性同位体からなる群より選択される、請求項1記載の方法。
- 標識が蛍光標識である、請求項11記載の方法。
- 蛍光標識がフィコエリスリンである、請求項12記載の方法。
- 混合モード支持体がセラミックハイドロキシアパタイト(CHT)もしくはセラミックフルオロアパタイト(CFT)を含む、請求項1記載の方法。
- CHTがハイドロキシアパタイトCHTタイプI、20ミクロン;ハイドロキシアパタイトCHTタイプI、40ミクロン;ハイドロキシアパタイトCHTタイプI、80ミクロン;ハイドロキシアパタイトCHTタイプII、20ミクロン;ハイドロキシアパタイトCHTタイプII、40ミクロン;およびハイドロキシアパタイトCHTタイプII、80ミクロンからなる群より選択される、請求項14記載の方法。
- CFTがCFTタイプI、40ミクロンおよびCFTタイプII、40ミクロンからなる群より選択される、請求項14記載の方法。
- 混合モードクロマトグラフィー支持体に接触した複合体、非複合抗体、および非複合作用物質の混合物。
- 作用物質が標識、ホルモン、細胞毒性物質、および放射性同位体からなる群より選択される、請求項17記載の混合物。
- 標識がフィコエリスリンである、請求項18記載の混合物。
- 混合モード支持体がセラミックハイドロキシアパタイト(CHT)もしくはセラミックフルオロアパタイト(CFT)を含む、請求項17記載の混合物。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014507368A (ja) * | 2011-02-02 | 2014-03-27 | バイオ−ラッド ラボラトリーズ インコーポレーティッド | アルカリ溶液でのアパタイトの表面中和方法 |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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GB201310028D0 (en) * | 2013-06-05 | 2013-07-17 | Algeta Asa | Pharmaceutical preparation |
CN108348604B (zh) * | 2015-09-08 | 2022-04-29 | 沃特世科技公司 | 用于分析抗体-药物缀合物的多维色谱方法 |
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US20190100577A1 (en) * | 2016-03-24 | 2019-04-04 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Selectively and fully cleavable fluorescent probes for sequential, itrative immunostaining |
EP3519351A4 (en) * | 2016-09-29 | 2020-06-24 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | PROCESSES FOR PURIFYING PROTEIN-NANOPARTICLE CONJUGATES |
CA3072129A1 (en) * | 2017-08-30 | 2019-03-07 | Ares Trading S.A. | Method for purifying proteins |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002513800A (ja) * | 1998-05-06 | 2002-05-14 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | イオン交換クロマトグラフィによるタンパク質精製 |
JP2005532258A (ja) * | 2002-01-03 | 2005-10-27 | スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション | 免疫コンジュゲートの調製方法 |
US20060160998A1 (en) * | 2005-01-19 | 2006-07-20 | Suk Roelf J | Methods for isolation and purification of fluorochrome-antibody conjugates |
WO2007081851A2 (en) * | 2006-01-06 | 2007-07-19 | Millipore Corporation | Affinity chromatography matrices and methods of making and using the same |
WO2008086335A2 (en) * | 2007-01-09 | 2008-07-17 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Enhanced capacity and purification of antibodies by mixed mode chromatography in the presence of aqueous-soluble nonionic organic polymers |
WO2009017491A1 (en) * | 2006-06-14 | 2009-02-05 | Smithkline Beecham Corporation | Methods for purifying antibodies using ceramic hydroxyapatite |
JP2009506032A (ja) * | 2005-08-24 | 2009-02-12 | イムノゲン インコーポレーティッド | メイタンシノイド(maytansinoid)抗体複合体の調製方法 |
Family Cites Families (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4307016A (en) | 1978-03-24 | 1981-12-22 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Demethyl maytansinoids |
US4256746A (en) | 1978-11-14 | 1981-03-17 | Takeda Chemical Industries | Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use |
JPS55102583A (en) | 1979-01-31 | 1980-08-05 | Takeda Chem Ind Ltd | 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound |
JPS55162791A (en) | 1979-06-05 | 1980-12-18 | Takeda Chem Ind Ltd | Antibiotic c-15003pnd and its preparation |
JPS5645483A (en) | 1979-09-19 | 1981-04-25 | Takeda Chem Ind Ltd | C-15003phm and its preparation |
JPS5645485A (en) | 1979-09-21 | 1981-04-25 | Takeda Chem Ind Ltd | Production of c-15003pnd |
EP0028683A1 (en) | 1979-09-21 | 1981-05-20 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Antibiotic C-15003 PHO and production thereof |
WO1982001188A1 (en) | 1980-10-08 | 1982-04-15 | Takeda Chemical Industries Ltd | 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same |
US4450254A (en) | 1980-11-03 | 1984-05-22 | Standard Oil Company | Impact improvement of high nitrile resins |
US4313946A (en) | 1981-01-27 | 1982-02-02 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora |
US4315929A (en) | 1981-01-27 | 1982-02-16 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Method of controlling the European corn borer with trewiasine |
US4563304A (en) | 1981-02-27 | 1986-01-07 | Pharmacia Fine Chemicals Ab | Pyridine compounds modifying proteins, polypeptides or polysaccharides |
JPS57192389A (en) | 1981-05-20 | 1982-11-26 | Takeda Chem Ind Ltd | Novel maytansinoid |
US4737456A (en) | 1985-05-09 | 1988-04-12 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Reducing interference in ligand-receptor binding assays |
CA2076465C (en) | 1992-03-25 | 2002-11-26 | Ravi V. J. Chari | Cell binding agent conjugates of analogues and derivatives of cc-1065 |
US6333410B1 (en) | 2000-08-18 | 2001-12-25 | Immunogen, Inc. | Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids |
US8088387B2 (en) | 2003-10-10 | 2012-01-03 | Immunogen Inc. | Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates |
CA2543193C (en) | 2003-10-27 | 2015-08-11 | Wyeth | Removal of high molecular weight aggregates using hydroxyapatite chromatography |
US7999085B2 (en) * | 2007-01-09 | 2011-08-16 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Enhanced capacity and purification of protein by mixed mode chromatography in the presence of aqueous-soluble nonionic organic polymers |
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Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002513800A (ja) * | 1998-05-06 | 2002-05-14 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | イオン交換クロマトグラフィによるタンパク質精製 |
JP2005532258A (ja) * | 2002-01-03 | 2005-10-27 | スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション | 免疫コンジュゲートの調製方法 |
US20060160998A1 (en) * | 2005-01-19 | 2006-07-20 | Suk Roelf J | Methods for isolation and purification of fluorochrome-antibody conjugates |
JP2009506032A (ja) * | 2005-08-24 | 2009-02-12 | イムノゲン インコーポレーティッド | メイタンシノイド(maytansinoid)抗体複合体の調製方法 |
WO2007081851A2 (en) * | 2006-01-06 | 2007-07-19 | Millipore Corporation | Affinity chromatography matrices and methods of making and using the same |
WO2009017491A1 (en) * | 2006-06-14 | 2009-02-05 | Smithkline Beecham Corporation | Methods for purifying antibodies using ceramic hydroxyapatite |
WO2008086335A2 (en) * | 2007-01-09 | 2008-07-17 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Enhanced capacity and purification of antibodies by mixed mode chromatography in the presence of aqueous-soluble nonionic organic polymers |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JPN6014036817; SCHUBERT, S., et al.: Journal of Chromatography A 1142(1), 20070216, pp.106-113 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014507368A (ja) * | 2011-02-02 | 2014-03-27 | バイオ−ラッド ラボラトリーズ インコーポレーティッド | アルカリ溶液でのアパタイトの表面中和方法 |
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