JP2012524068A - 第ｘｉ因子による炎症反応のモジュレーション - Google Patents

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Abstract

本明細書中に開示するのは、第XI因子をモジュレーションするための、および炎症性疾患、障害または状態をモジュレーションすることを必要としている個体の炎症性疾患、障害または状態をモジュレーションするためのアンチセンス化合物および方法である。関節炎および結腸炎などの個体の炎症性疾患は、第XI因子を標的とするアンチセンス化合物の投与で改善するまたは予防することができる。

Description

本発明は、第XI因子モジュレーターを動物に投与することによって炎症反応をモジュレーションするための方法、化合物および組成物を提供する。
肝臓内で合成される第XI因子は、「内因性経路」という凝固カスケードのメンバーであり、それは、最終的には、トロンビンを活性化して、血液喪失を予防する。その内因性経路は、第XII因子の第XIIａ因子への活性化によって引き起こされる。第XIIａ因子は、第XI因子を第XIａ因子へ変換し、そして第XIａ因子は、第IX因子を第IXａ因子へ変換する。第IXａ因子は、その補因子である第VIIIａ因子と共同して、第Ｘ因子を第Ｘａ因子へ変換する。第Ｘａ因子は、第Ｖａ因子と共同して、プロトロンビン（第II因子）をトロンビン（第IIａ因子）へ変換する。
第XI因子欠損症（血漿トロンボプラスチン前駆物質（ＰＴＡ）欠損症、ローゼンタール症候群および血友病Ｃとしても知られる）は、出血傾向に関連した常染色体劣性疾患である。第XI因子欠損症を有する大部分の患者は、自然出血することはないが、外傷後に重篤に出血することがありうる。低レベルの第XI因子も、ヌーナン症候群を含めた他の疾患状態を引き起こすことがありうる。
炎症
炎症は、物理的、化学的または生物学的刺激によって引き起こされる傷害または異常刺激作用に応答した身体の複雑な生物学的過程である。炎症は、身体が、その傷害または刺激を除去しようとする且つ体内の罹患組織を治し始める防御過程である。
傷害または刺激への炎症反応は、組織における増加した赤み（発赤）、温度（灼熱）、腫脹（腫瘍）、痛み（疼痛）および／または機能喪失（機能障害）の臨床徴候を特徴とする。増加した赤みおよび温度は、血管拡張によって引き起こされて、炎症を起こした組織部位への深部体温で増加した血液供給をもたらす。腫脹は、炎症を起こした組織部位での血管透過性およびタンパク質および体液の蓄積によって引き起こされる。痛みは、炎症を起こした組織部位での、神経終末部を刺激する化学物質（例えば、ブラジキニン）の放出による。機能喪失は、いくつかの原因によることがありうる。
炎症は、現在、傷害または刺激への非特異的免疫応答のタイプとして認識されている。炎症反応は、細胞性成分および滲出性成分を有する。細胞性成分の場合、傷害または刺激部位における常在マクロファージが、ＴＮＦα、ＩＦＮα、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ１２、ＩＬ−１８およびその他などの炎症性メディエーターを放出することによって炎症反応を開始する。次に、白血球が動員されて、炎症を起こした組織部位中に移動し、そして追加の細胞性メディエーターの放出、食作用、酵素顆粒の放出および他の機能などのいろいろな機能を果たす。滲出性成分は、タンパク質を含有する血漿液の血管から炎症を起こした組織部位への通過を伴う。ブラジキニン、酸化窒素およびヒスタミンなどの炎症性メディエーターは、血管を拡張した状態にさせ、血管内の血流を遅らせ、そして血管透過性を増加させて、組織中への体液およびタンパク質の移動を可能にする。生化学的カスケードは、炎症反応を伝播するために活性化される（例えば、感染に応答した補体系、熱傷または外傷による壊死に応答した線維素溶解および凝固系、炎症を維持するキニン系）（Robbins Pathologic Basis of Disease, Philadelphia, W.B Saunders Company）。
炎症は、急性または慢性でありうる。急性炎症は、正に急な開始を有し、急速に重症になり、そして数日〜数週間後に急速且つ明瞭になくなる。慢性炎症は、急速にまたは徐々に開始することがあり、そして不確かな且つ不定の終結を伴って何週間、何ヶ月間または何年間も存続する傾向がある。慢性炎症は、傷害または刺激またはその存在によって生じる生産物が、傷害または刺激作用部位で存続し、しかも身体の免疫応答が、その作用を克服するのに不十分である場合に起こりうる。
炎症反応は、概して、傷害または刺激を取り除くのに身体に有用であるが、時々、身体を傷つけることがありうる。いくつかの場合、身体の免疫応答は、身体への既知の傷害または刺激が存在しない場合に、不適当に炎症反応を引き起こす。自己免疫疾患として分類されるこれらの場合、身体は、それ自身の組織を攻撃して、それ自身の組織を傷つける。
炎症を減少させる処置は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）、更には、疾患修飾性薬を包含する。これら薬物の多くは、望ましくない副作用を有する。例えば、ＮＳＡＩＤＳについて、最も一般的な副作用は、悪心、嘔吐、下痢、便秘、食欲低下、発疹、めまい、頭痛および嗜眠状態である。ＮＳＡＩＤは、体液停滞を引き起こすこともあり、浮腫をもたらす。最も重症の副作用は、腎不全、肝不全、潰瘍、および傷害または外科手術後の長期出血である。
Robbins Pathologic Basis of Disease, Philadelphia, W.B Saunders Company
したがって、炎症のための一層魅力的な臨床プロフィールを有する別の処置を発見する要求が存在している。炎症における、研究用に魅力的な標的となっている第XI因子の役割については、ほとんど知られていない。アンチセンス技術は、特定の遺伝子産物の発現を減少させるのに有効な手段として生まれているので、多数の治療的、診断用および研究用用途において第XI因子のモジュレーションのために独特に有用であると証明することができる。
本明細書中に提供されるのは、動物の第XI因子ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質のレベルをモジュレーションする方法、化合物および組成物である。本明細書中に提供されるのは、動物の炎症反応をモジュレーションするために、動物の第XI因子ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質のレベルをモジュレーションする方法、化合物および組成物である。本明細書中に更に提供されるのは、動物の炎症性疾患を改善する；炎症性疾患のリスクがある動物を処置する；炎症性疾患に苦しむ動物において第XI因子発現を阻害する；および動物の炎症性疾患のリスクを減少させるための、治療的有効量の第XI因子に標的指向する化合物を動物に投与する方法、化合物および組成物である。
特定の態様において、第XI因子特異的阻害剤は、第XI因子ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質のレベルをモジュレーションする（すなわち、低下させる）。特定の態様において、第XI因子特異的阻害剤は、核酸、タンパク質または低分子である。
特定の態様において、炎症性疾患のリスクがある動物は、治療的有効量の１２〜３０個連結したヌクレオシドから成る修飾オリゴヌクレオチドであって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７４に示される第XI因子核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物；または治療的有効量の１２〜３０個連結したヌクレオシドから成る修飾オリゴヌクレオチドを含み且つＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５〜２６９に示される核酸塩基配列のいずれか一つより選択される核酸塩基配列の少なくとも８個隣接した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する化合物を動物に投与することによって処置する。
特定の態様において、炎症性疾患を有する動物は、治療的有効量の１２〜３０個連結したヌクレオシドから成る修飾オリゴヌクレオチドであって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７４に示される第XI因子核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物；または治療的有効量の１２〜３０個連結したヌクレオシドから成る修飾オリゴヌクレオチドであって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５〜２６９に示される核酸塩基配列のいずれか一つより選択される核酸塩基配列の少なくとも８個隣接した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、または本明細書中に記載の標的セグメントまたは標的領域に相補的な少なくとも８個隣接した核酸塩基を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を動物に投与することによって処置する。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５〜２６９に示される核酸塩基配列のいずれか一つより選択される核酸塩基配列の隣接した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する、または本明細書中に記載の標的セグメントまたは標的領域に相補的な隣接した核酸塩基部分を含む。
特定の態様において、モジュレーションは、細胞、組織、器官または生物中で生じることができる。特定の態様において、細胞、組織または器官は、動物中である。特定の態様において、動物は、ヒトである。特定の態様において、第XI因子ｍＲＮＡレベルを減少させる。特定の態様において、第XI因子タンパク質レベルを減少させる。このような減少は、時間依存方式でまたは用量依存方式で生じることができる。
更に提供されるのは、炎症に関連した疾患、障害および状態を予防する、処置するおよび改善するのに有用な方法、化合物および組成物である。特定の態様において、このような疾患、障害および状態は、炎症性疾患、障害または状態である。
特定の態様において、処置方法は、それを必要としている個体に第XI因子特異的阻害剤を投与することを包含する。
特定の態様において、炎症は、敗血症関連ではない。特定の態様において、炎症は、感染に関連していない。
更に提供されるのは、１２〜３０個連結したヌクレオシドから成る修飾オリゴヌクレオチドであって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７４に示される第XI因子核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを包含する化合物および組成物である。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５〜２６９に示される核酸塩基配列のいずれか一つより選択される核酸塩基配列の隣接した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する、または本明細書中に記載の標的セグメントまたは標的領域に相補的な隣接した核酸塩基部分を含む。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５〜２６９に示される核酸塩基配列の中より選択される核酸塩基配列の少なくとも８個隣接した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、または本明細書中に記載の標的セグメントまたは標的領域に相補的な少なくとも８個隣接した核酸塩基を含む。
図１は、下の実施例１１に記載の、マウスのコラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）へのアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）阻害の作用を示している図表を示す。図１Ａは、ＣＩＡを発生しているマウスの百分率へのＡＳＯ処置の作用を示す。第XI因子ＡＳＯ被処置マウスは、未処置および第VII因子被処置マウスに比較して、より低いＣＩＡ発生率を生じた。図１Ｂは、マウスの関節炎罹患足百分率へのＡＳＯ処置の作用を示す。第XI因子ＡＳＯ被処置マウスは、未処置および第VII因子被処置マウスに比較して、より低い罹患足発生率を生じた。 図２は、下の実施例１１に記載の、マウスのコラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）へのアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）阻害の作用を示している図表を示す。図２Ａは、マウスの罹患足の平均数へのＡＳＯ処置の作用を示す。第XI因子ＡＳＯ被処置マウスは、平均してより少ない罹患足を有した。図２Ｂは、マウスの関節炎重症度へのＡＳＯ処置の作用を示す。第XI因子ＡＳＯ被処置マウスは、対照マウスより重症度の小さい関節炎を発生した。 図３は、下の実施例１１に記載の、ＡＳＯ処置または非処置でのマウスにおけるＣＩＡ発生率の作用の時間表を示す。第XI因子ＡＳＯ被処置マウスは、より少数の罹患マウスについて、より後期にＣＩＡを発生した。 図４は、下の実施例１１に記載の、第XI因子アンチセンス処置または非処置でのコラーゲン誘発性関節炎マウスにおける関節炎重症度および肝中第XI因子ｍＲＮＡ量を示している図表を示す。図４Ａは、コラーゲン誘発性関節炎マウスにおける、第XI因子アンチセンスオリゴヌクレオチドであるＩＳＩＳ４０４０７１（Ｆ１１＃１）、ＩＳＩＳ４０４０５７（Ｆ１１＃２）または対照オリゴヌクレオチド（Ｆ１１ＭＭ）で処置の１０週間後の関節炎重症度を示す。図４Ｂは、被処置マウスの肝中第XI因子ｍＲＮＡへの同オリゴヌクレオチドの作用を示す。 図５は、下の実施例１１に記載の、臓器重量への第XI因子アンチセンスオリゴヌクレオチド処置の作用を示している図表を示す。図５Ａは、マウス体重パーセントとしての被処置マウスの肝重量を示す。図５Ｂは、マウス体重パーセントとしての被処置マウスの脾臓重量を示す。 図６は、下の実施例１１に記載の、肝酵素への第XI因子アンチセンスオリゴヌクレオチド処置の作用を示している図表を示す。図６Ａは、ＡＬＴレベルを示す。図６Ｂは、ＡＳＴレベルを示す。 図７は、下の実施例１２に記載の、マウスの結腸炎へのアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）阻害の作用を示している時間表および図表を示す。図７Ａは、マウス体重へのＡＳＯ処置または非処置でのＤＳＳ誘発性結腸炎発生率の作用の時間表を示す。時間表は、研究開始時の体重の百分率としての、いろいろな時点での体重の尺度である。第XI因子ＡＳＯ被処置マウスは、研究期間中に有意の体重変化が全くなかった。図７Ｂは、６日目のＤＳＳ対照と比較した最終体重変化を示す。ＰＢＳ対照マウスおよび第VII因子ＡＳＯ被処置マウスは、体重の低下を有した。第XI因子ＡＳＯ被処置マウスは、有意の体重変化がなかった。図７Ｃは、処置期間後の結腸長さ測定値を示す。ＰＢＳ対照および第VII因子ＡＳＯ被処置マウスは、結腸長さの低下を有した。第XI因子ＡＳＯ被処置マウスは、有意の結腸長さ変化がなかった。 図８は、下の実施例１２に記載の、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色したマウス結腸組織の組織学的スライドを示す。図８Ａは、ＰＢＳのみを皮下注射された対照マウスからのマウス結腸組織を示し、正常結腸組織学外観を有する。図８Ｂは、ＤＳＳで処置されて結腸炎を誘発したマウスからのマウス結腸組織を示す。その組織は、粘膜潰瘍（２〜４／被験動物）、結腸全体にわたって拡散した好中球浸潤、粘膜下浮腫および固有筋肥厚から成る潰瘍性大腸炎の病変を示す。図８Ｃは、第VII因子ＡＳＯで処置後にＤＳＳで処置されて結腸炎を誘発したマウスからのマウス結腸組織を示し、ＤＳＳ対照と同じ組織学を示す。図８Ｄは、第XI因子で処置後にＤＳＳで処置されて結腸炎を誘発したマウスからのマウス結腸組織を示し、ＤＳＳ対照と比較して、より少ない粘膜潰瘍（＞１／被験動物）を含む有意に軽症の潰瘍性大腸炎を示す。 図９は、下の実施例１２に記載の、マウスの結腸炎へのアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）阻害の作用を示している時間表および図表を示す。図９Ａは、ＤＳＳ誘発性結腸炎マウスの体重へのＰＢＳ、第XI因子ＡＳＯ（ＩＳＩＳ４０４０７１）、第XI因子ＡＳＯ（ＩＳＩＳ４０４０５７）または対照ＡＳＯ（ＩＳＩＳ４２１２０８）での処置の作用の時間表を示す。時間表は、研究開始時の体重の百分率としての、いろいろな時点での体重の尺度である。ＩＳＩＳ４０４０７１被処置マウスおよびＩＳＩＳ４０４０５７被処置マウスは、研究期間中に有意の体重変化が全くなかった。図９Ｂは、７日目の研究期間の最後にＤＳＳ対照と比較した最終体重変化を示す。ＩＳＩＳ４０４０７１被処置マウスおよびＩＳＩＳ４０４０５７被処置マウスは、有意の体重変化が全くなかった。図表中の星印は、ＤＳＳのみで処置されたマウスからの統計的に有意の変化を示す。 図１０は、下の実施例１２に記載の、マウスの結腸炎へのアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）阻害の作用を示している図表を示す。図１０は、次で処置されたマウスの肝中第XI因子ｍＲＮＡレベルを示す。（１）対照としてのＰＢＳのみ；（２）ＰＢＳの後、ＤＳＳで結腸炎を誘発する；（３）ＩＳＩＳ４０４０７１の後、ＤＳＳで結腸炎を誘発する；（４）ＩＳＩＳ４０４０５７の後、ＤＳＳで結腸炎を誘発する；および（５）対照ＡＳＯであるＩＳＩＳ４２１２０８の後、ＤＳＳで結腸炎を誘発する。 図１１は、下の実施例１２に記載の、マウスの結腸炎への第XI因子アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）阻害の用量反応作用を示している時間表および図表を示す。１０ｍｇ／ｋｇ用量の第XI因子ＡＳＯ、２０ｍｇ／ｋｇ用量の第XI因子ＡＳＯ、４０ｍｇ／ｋｇ用量の第XI因子ＡＳＯまたは４０ｍｇ／ｋｇ用量の対照の非第XI因子ＡＳＯを、ＤＳＳ誘発性結腸炎マウスに投与した。図１１Ａは、ＤＳＳ誘発性結腸炎マウスの体重へのいろいろな用量の第XI因子ＡＳＯでの処置の作用の時間表を示す。図１１Ｂは、ＤＳＳ誘発性結腸炎マウスの軟便／下痢へのいろいろな用量の第XI因子ＡＳＯの作用を示す。図１１Ｃは、ＤＳＳ誘発性結腸炎マウスの結腸長さへのいろいろな用量の第XI因子ＡＳＯの作用を示す。
前述の一般的な説明および以下の詳細な説明は双方とも、単に例示し且つ説明するものであり、請求の範囲に記載の本発明を制限するものではないということは理解されるはずである。本明細書中において、単数形の使用は、特に具体的に断らない限り、複数形を包含する。本明細書中で用いられる「または」の使用は、特に断らない限り、「および／または」を意味する。更に、「含めた」という用語並びに「包含する」および「含まれる」などの他の形の使用は、制限するものではない。更に、「要素」または「成分」などの用語は、一つのユニットを含む要素および成分も、特に具体的に断らない限り、二つ以上のサブユニットを含む要素および成分も包含する。
本明細書中に用いられる見出し部分は、単に系統化目的のためであり、記載の内容を制限すると解釈されるべきではない。本出願に引用される特許、特許出願、記事、書物および論文が含まれるがこれに制限されるわけではない書類または書類の一部分は全て、本明細書中に論じられる書類の一部分について参照して明白に、更には、そのまま援用される。
定義
具体的な定義が与えられない限り、本明細書中に記載の分析化学、合成有機化学、および医薬品・製薬化学に関連して利用される命名法、並びにそれら化学の手順および技法は、当該技術分野において周知の且つ一般的に用いられるものである。標準的な技法は、化学合成および化学分析に用いることができる。許容されるところで、特許、出願、公開出願および他の公報、National Center for Biotechnology Information（ＮＣＢＩ）などのデータベースによって入手可能なＧＥＮＢＡＮＫ受託番号および関連配列情報、および本明細書中の開示中に挙げられている他のデータは全て、本明細書中に論じられる書類の一部分について参照して、更には、そのまま援用される。
特に断らない限り、次の用語は、次の意味を有する。
「２’−Ｏ−メトキシエチル」（更に、２’−ＭＯＥおよび２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３）は、フロシル（furosyl）環の２’位のＯ−メトキシエチル修飾を意味する。２’−Ｏ−メトキシエチルで修飾された糖は、修飾糖である。
「２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオチド」は、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖部分を含むヌクレオチドを意味する。
「５−メチルシトシン」は、５’位に結合したメチル基で修飾されたシトシンを意味する。５−メチルシトシンは、修飾核酸塩基である。
「活性医薬物質」は、個体に投与された場合に治療的利点を与える医薬組成物中の一つまたは複数の物質を意味する。例えば、特定の態様において、第XI因子を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、活性医薬物質である。
「活性標的領域」または「標的領域」は、一つまたはそれを超える活性アンチセンス化合物に標的とされている領域を意味する。「活性アンチセンス化合物」は、標的核酸レベルまたはタンパク質レベルを減少させるアンチセンス化合物を意味する。
「同時に投与される」は、二つの物質の、双方の薬理作用が患者に同時に現れるいずれかの方式での共投与を意味する。同時投与は、双方の物質が、単一の医薬組成物で、同じ剤形で、または同じ投与経路で投与されることを必要としない。双方の物質の作用は、同時に現れる必要はない。それら作用は、一定時間重複している必要があるだけで、同一に広がる必要はない。
「投与すること」は、医薬物質を個体に与えることを意味し、それには、医療の専門家が投与することおよび自己投与することが含まれるが、これに制限されるわけではない。
「改善」は、関連疾患、障害または状態の少なくとも一つの指標、徴候または症状の軽減を意味する。特定の態様において、改善には、状態または疾患の一つまたはそれを超える指標の進行の遅延または緩慢化が含まれる。指標の重症度は、当業者に知られている主観的または客観的尺度によって決定されてよい。例えば、コラーゲン誘発性関節炎マウスの関節炎の改善は、Marty et al.（J. Clin. Invest 107:631-640 (2001)）によって記載のようにマウスの関節炎の量を臨床的に評点することによって決定することができる。
「動物」は、ヒト、またはマウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、およびサルおよびチンパンジーが含まれるがこれに制限されるわけではない非ヒト霊長類が含まれるがこれに制限されるわけではない非ヒト動物を意味する。
「解毒薬化合物」は、いずれかのアンチセンス活性の強度または持続時間を低下させることが可能な化合物を意味する。
「解毒薬オリゴヌクレオチド」は、アンチセンス化合物に相補的で且つそれとハイブリッド形成可能であるオリゴヌクレオチドを含む解毒薬化合物を意味する。
「解毒薬タンパク質」は、ペプチドを含む解毒薬化合物を意味する。
「抗体」は、抗原とある程度特異的に反応することを特徴とする分子を意味し、その場合、抗体および抗原は各々、他方によって定義される。抗体は、完全な抗体分子、またはその重鎖、軽鎖、Ｆａｂ領域およびＦｃ領域などのいずれかのフラグメントまたは領域を意味してよい。
「アンチセンス活性」は、アンチセンス化合物のその標的核酸へのハイブリダイゼーションに起因するいずれかの検出可能なまたは測定可能な活性を意味する。特定の態様において、アンチセンス活性は、標的核酸またはこのような標的核酸によってエンコードされたタンパク質の量または発現の低下である。
「アンチセンス化合物」は、水素結合によって標的核酸へのハイブリダイゼーションを行うことが可能であるオリゴマー性化合物を意味する。
「アンチセンス阻害」は、標的核酸に相補的なアンチセンス化合物の不存在下における標的核酸レベルまたは標的タンパク質レベルに比較した、アンチセンス化合物の存在下における標的核酸レベルまたは標的タンパク質レベルの減少を意味する。
「アンチセンスオリゴヌクレオチド」は、標的核酸の該当する領域またはセグメントへのハイブリダイゼーションを許容する核酸塩基配列を有する一本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。
「二環式糖」は、２個の非 gem−環原子の架橋によって修飾されたフロシル環を意味する。二環式糖は、修飾糖である。
「二環式核酸」または「ＢＮＡ」は、ヌクレオシドまたはヌクレオチドのフラノース部分が、フラノース環上の２個の炭素原子を連結している架橋を包含することによって、二環式環系を形成しているヌクレオシドまたはヌクレオチドを意味する。
「キャップ構造」または「末端キャップ部分」は、アンチセンス化合物のどちらかの末端に包含された化学修飾を意味する。
「化学的に異なる領域」は、同じアンチセンス化合物の別の領域とはある程度化学的に異なっているアンチセンス化合物の領域を意味する。例えば、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオチドを有する領域は、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾不含のヌクレオチドを有する領域とは化学的に異なる。
「キメラのアンチセンス化合物」は、少なくとも二つの化学的に異なる領域を有するアンチセンス化合物を意味する。
「共投与」は、個体への二つまたはそれを超える医薬物質の投与を意味する。二つまたはそれを超える医薬物質は、単一の医薬組成物であってよいし、または別々の医薬組成物であってよい。二つまたはそれを超える医薬物質は各々、同じまたは異なった投与経路によって投与されてよい。共投与は、同時、平行または逐次的投与を包含する。
「凝固因子」は、血液凝固カスケードにおけるＩ、II、III、IV、Ｖ、VII、VIII、IX、Ｘ、XI、XIIまたはXIIIといういずれかの因子を意味する。「凝固因子核酸」は、凝固因子をエンコードしているいずれかの核酸を意味する。例えば、特定の態様において、凝固因子核酸には、制限されることなく、凝固因子をエンコードしているＤＮＡ配列（イントロンおよびエクソンを含むゲノムＤＮＡを含めた）、凝固因子をエンコードしているＤＮＡより転写されたＲＮＡ配列、および凝固因子をエンコードしているｍＲＮＡ配列が含まれる。「凝固因子ｍＲＮＡ」は、凝固因子タンパク質をエンコードしているｍＲＮＡを意味する。
「相補性」は、第一核酸の核酸塩基と第二核酸の核酸塩基との間の対合する能力を意味する。
「隣接した核酸塩基」は、互いに直に隣接する核酸塩基を意味する。
「希釈剤」は、薬理活性を欠いているが、薬学的に必要であるまたは望まれる組成物中の成分を意味する。例えば、注射される組成物中の希釈剤は、液体、例えば、生理食塩水溶液であってよい。
「疾患修飾性薬」は、自己免疫疾患（例えば、関節炎、結腸炎または糖尿病）、外傷または外科手術関連障害、敗血症、アレルギー性炎症および喘息を含めた炎症性疾患、障害または状態に関連した症状および／または進行を修飾するいずれかの物質を意味する。ＤＭＡＲＤは、これら疾患、障害または状態に関連した一つまたはそれを超える症状および／または疾患進行を修飾する。
「用量」は、単回投与でまたは規定の時間内に与えられる医薬物質の規定量を意味する。特定の態様において、用量は、一つ、二つまたはそれを超える巨丸剤、錠剤または注射剤で投与されてよい。例えば、皮下投与が望まれる特定の態様において、所望の用量は、単回注射に容易に適応しない容量を必要とするので、２回またはそれを超える注射を用いて、所望の用量に達しさせてよい。特定の態様において、医薬物質は、注入によって長時間にわたってまたは継続して投与される。用量は、毎時、毎日、毎週または毎月の医薬物質の量として提示することができる。
「有効量」は、活性医薬物質を必要としている個体において所望の生理学的結果を実現するのに十分な活性医薬物質の量を意味する。有効量は、処置される個体の健康および身体状態、処置される個体の分類群、組成物の処方、個体の医学的状態の評価および他の関係のある因子に依存して個体間で変動してよい。
「第XI因子」、「ＦXI」、「第11因子」および「Ｆ11」は、本明細書中において同じ意味に用いられる。
「第XI因子核酸」または「第XI因子核酸」は、第XI因子をエンコードしているいずれかの核酸を意味する。例えば、特定の態様において、第XI因子核酸には、第XI因子をエンコードしているＤＮＡ配列、第XI因子をエンコードしているＤＮＡ（イントロンおよびエクソンを含むゲノムＤＮＡを含めた）より転写されたＲＮＡ配列、および第XI因子をエンコードしているｍＲＮＡ配列が含まれる。「第XI因子ｍＲＮＡ」は、第XI因子タンパク質をエンコードしているｍＲＮＡを意味する。
「第XI因子特異的阻害剤」は、第XI因子ｍＲＮＡおよび／または第XI因子タンパク質の発現を分子レベルで特異的に阻害することが可能ないずれかの物質を意味する。例えば、第XI因子特異的阻害剤には、第XI因子ｍＲＮＡおよび／または第XI因子タンパク質の発現を阻害することが可能な核酸（アンチセンス化合物を含めた）、ペプチド、抗体、低分子および他の物質が含まれる。特定の態様において、第XI因子ｍＲＮＡレベルおよび／または第XI因子タンパク質発現を特異的にモジュレーションすることにより、第XI因子特異的阻害剤は、炎症経路の成分に影響を与えることができる。同様に、特定の態様において、第XI因子特異的阻害剤は、動物中の他の分子過程に影響を与えることができる。
「第XI因子特異的阻害剤解毒薬」は、第XI因子特異的阻害剤の作用を低下させることが可能な化合物を意味する。特定の態様において、第XI因子特異的阻害剤解毒薬は、第XI因子ペプチド；第XI因子アンチセンス化合物に相補的な第XI因子解毒薬化合物を含めた第XI因子解毒薬オリゴヌクレオチド；および内因性または外因性行経路に影響を与えるいずれかの化合物またはタンパク質より選択される。
「十分に相補的な」または「１００％相補的な」は、第一核酸の核酸塩基が各々、第二核酸中に相補的な核酸塩基を有することを意味する。特定の態様において、第一核酸は、アンチセンス化合物であり、そして標的核酸は、第二核酸である。
「ギャップマー（Gapmer）」は、ＲＮアーゼＨ切断を支持する複数のヌクレオシドを有する内部領域が、一つまたはそれを超えるヌクレオシドを有する外部領域の間に位置しているキメラのアンチセンス化合物を意味し、ここにおいて、内部領域を構成するヌクレオシドは、外部領域を構成する一つまたは複数のヌクレオシドとは化学的に異なる。内部領域は、「ギャップセグメント」と称することができ、そして外部領域は、「ウィングセグメント」と称することができる。
「広幅ギャップ（Gap-widened）」は、１〜６個のヌクレオシドを有する５’および３’ウィングセグメントの間に且つそれらに直に隣接して位置する１２個またはそれを超える隣接した２’−デオキシヌクレオシドのギャップセグメントを有するキメラのアンチセンス化合物を意味する。
「ハイブリダイゼーション」は、相補的核酸分子のアニーリングを意味する。特定の態様において、相補的核酸分子には、アンチセンス化合物および標的核酸が含まれる。
「炎症性疾患、障害または状態のリスクがある動物を識別すること」は、炎症性疾患、障害または状態を有すると診断された動物を識別すること、または炎症性疾患、障害または状態を発生する素質がある動物を識別することを意味する。炎症性疾患、障害または状態を発生する素質がある個体、例えば、結腸炎または関節炎の家族歴を有する個体。このような識別は、個体の病歴を評価することおよび標準的な臨床試験または評価を含めたいずれかの方法によって行うことができる。
「直に隣接する」は、直に隣接する要素の間に介在する要素が存在しないことを意味する。
「個体」は、処置または療法のために選択されるヒトまたは非ヒト動物を意味する。
「炎症反応」は、動物の炎症に関連したいずれかの疾患、障害または状態を意味する。炎症反応の例には、炎症反応を開始する原因となる傷害または刺激を取り除くための動物体による免疫応答が含まれる。或いは、炎症反応は、自己免疫疾患の場合などの、既知の傷害または刺激が見出されない場合でも、体内で開始することがありうる。炎症は、Ｔｈ１またはＴｈ２応答によって媒介されることがありうる。Ｔｈ１およびＴｈ２応答には、選択的サイトカインの生産および炎症部位への細胞の遊走または補充が含まれる。炎症部位へ遊走しうる細胞タイプには、好酸球およびマクロファージが含まれるが、これに制限されるわけではない。Ｔｈ１サイトカインには、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＩＮＦγおよび角化細胞化学誘引物質（ＫＣ）が含まれるが、これに制限されるわけではない。Ｔｈ２サイトカインには、ＩＬ−４およびＩＬ−５が含まれるが、これに制限されるわけではない。一つまたは複数のサイトカインレベルの低下または細胞遊走は、低下した炎症を示すものでありうる。したがって、サイトカインレベルまたは細胞遊走は、Ｔｈ１またはＴｈ２で媒介される炎症などの特定のタイプの炎症のマーカーでありうる。
「炎症性疾患」、「炎症性障害」または「炎症性状態」は、組織における増加した赤み（発赤）、温度（灼熱）、腫脹（腫瘍）、痛み（疼痛）および／または機能喪失（機能障害）の臨床徴候を特徴とする傷害または刺激への炎症反応に関連した疾患、障害または状態を意味する。
「ヌクレオシド間結合」は、ヌクレオシド間の化学結合を意味する。
「連結したヌクレオシド」は、互いに結合している隣接するヌクレオシドを意味する。
「ミスマッチ」または「非相補的核酸塩基」または「ＭＭ」は、第一核酸の核酸塩基が、第二または標的核酸の該当する核酸塩基と対合可能でない場合を意味する。
「修飾ヌクレオシド間結合」は、天然に存在するヌクレオシド間結合（すなわち、ホスホジエステルヌクレオシド間結合）からの置換またはいずれかの変化を意味する。
「修飾核酸塩基」は、アデニン、シトシン、グアニン、チミジンまたはウラシル以外のいずれかの核酸塩基を意味する。「未修飾核酸塩基」は、アデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）というプリン塩基、およびチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）およびウラシル（Ｕ）というピリミジン塩基を意味する。
「修飾ヌクレオチド」は、修飾糖部分、修飾ヌクレオシド間結合または修飾核酸塩基を独立して有するヌクレオチドを意味する。「修飾ヌクレオシド」は、修飾糖部分または修飾核酸塩基を独立して有するヌクレオシドを意味する。
「修飾オリゴヌクレオチド」は、修飾ヌクレオシド間結合、修飾糖または修飾核酸塩基を含むオリゴヌクレオチドを意味する。
「修飾糖」は、天然糖からの置換または変化を意味する。
「モジュレーションすること」は、細胞、組織、器官または生物中の特性を変化させることまたは調整することを意味する。例えば、第XI因子ｍＲＮＡをモジュレーションすることは、細胞、組織、器官または生物中の第XI因子ｍＲＮＡおよび／または第XI因子タンパク質のレベルを増加させるまたは低下させることを意味することができる。第XI因子ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質をモジュレーションすることは、細胞、組織、器官または生物中の炎症反応の増加または低下をもたらすことがありうる。「モジュレーター」は、細胞、組織、器官または生物中の変化をもたらす。例えば、第XI因子アンチセンスオリゴヌクレオチドは、細胞、組織、器官または生物中の第XI因子ｍＲＮＡおよび／または第XI因子タンパク質の量を増加させるまたは低下させるモジュレーターでありうる。「モチーフ」は、アンチセンス化合物中の化学的に異なる領域のパターンを意味する。
「天然に存在するヌクレオシド間結合」は、３’〜５’ホスホジエステル結合を意味する。
「天然糖部分」は、ＤＮＡ（２’−Ｈ）またはＲＮＡ（２’−ＯＨ）中に見出される糖を意味する。
「ＮＳＡＩＤ」は、非ステロイド性抗炎症薬（Non-Steroidal Anti-Inflammatory Drug）を意味する。ＮＳＡＩＤは、対象の炎症反応を減少させるが、概して、疾患を改善することはないし、または疾患を発症させないまたは進行させないこともない。
「核酸」は、モノマー性ヌクレオチドから構成される分子を意味する。核酸には、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、一本鎖核酸、二本鎖核酸、低分子内在性（small interfering）リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）が含まれる。
「核酸塩基」は、別の核酸の塩基と対合することが可能な複素環式部分を意味する。
「核酸塩基配列」は、いずれの糖、結合または核酸塩基修飾とも無関係な隣接した核酸塩基の順序を意味する。
「ヌクレオシド」は、糖に連結した核酸塩基を意味する。
「ヌクレオチド」は、ヌクレオシドの糖部分に共有結合で連結したリン酸基を有するヌクレオシドを意味する。
「オリゴマー性化合物」または「オリゴマー」は、少なくとも核酸分子の領域にハイブリッド形成することが可能である連結したモノマー性サブユニットのポリマーを意味する。
「オリゴヌクレオチド」は、互いに独立して修飾されうるまたは未修飾でありうる各々連結したヌクレオシドのポリマーを意味する。
「非経口投与」は、注射または注入による投与を意味する。非経口投与には、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与または頭蓋内投与、例えば、髄腔内または脳室内投与が含まれる。
「ペプチド」は、少なくとも二つのアミノ酸をアミド結合によって連結することによって形成される分子を意味する。ペプチドは、ポリペプチドおよびタンパク質を意味する。
「医薬組成物」は、個体へ投与するのに適する物質の混合物を意味する。例えば、医薬組成物は、一つまたはそれを超える活性医薬物質および滅菌水溶液を含んでよい。
「薬学的に許容しうる塩」は、アンチセンス化合物の生理学的に且つ薬学的に許容しうる塩、すなわち、親オリゴヌクレオチドの所望の生物学的活性を保持する上に、望ましくない毒物学的作用を与えない塩を意味する。
「ホスホロチオエート結合」は、ホスホジエステル結合が、非架橋性酸素原子の一つを硫黄原子で置き換えることによって修飾されているヌクレオシドの間の結合を意味する。ホスホロチオエート結合は、修飾ヌクレオシド間結合である。
「部分」は、核酸の規定数隣接した（すなわち、連結した）核酸塩基を意味する。特定の態様において、一部分は、標的核酸の規定数隣接した核酸塩基である。特定の態様において、一部分は、アンチセンス化合物の規定数隣接した核酸塩基である。
「予防する」は、疾患、障害または状態の開始、発生または進行を何分間か〜無期限の一定期間遅延させることまたは妨げることを意味する。予防するは、更に、疾患、障害または状態を発生するリスクを減少させることを意味する。
「プロドラッグ」は、内因性酵素または他の化学物質または条件の作用によって体内またはその細胞内で活性形へ変換される不活性形で製造される治療薬を意味する。
「副作用」は、処置に起因する所望の作用以外の生理学的応答を意味する。特定の態様において、副作用には、注射部位反応、肝機能検査異常、腎機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常、筋障害および倦怠感が含まれる。例えば、血清中の増加したアミノトランスフェラーゼレベルは、肝毒性または肝機能異常を示すことがありうる。例えば、増加したビリルビンは、肝毒性または肝機能異常を示すことがありうる。
「一本鎖オリゴヌクレオチド」は、相補鎖へハイブリッド形成されないオリゴヌクレオチドを意味する。
「特異的にハイブリッド形成可能な」は、アンチセンスオリゴヌクレオチドと標的核酸との間に、所望の作用を引き起こすのに十分な程度の相補性を有するが、特異的結合が望まれる条件下、すなわち、in vivo 検定および治療的処置の場合の生理学的条件下において、非標的核酸への作用を最小限にしかまたは全く示さないアンチセンス化合物を意味する。
「標的指向すること」または「標的とされる」は、標的核酸に特異的にハイブリッド形成し且つ所望の作用を引き起こすであろうアンチセンス化合物の設計および選択の過程を意味する。
「標的核酸」、「標的ＲＮＡ」および「標的ＲＮＡ転写物」は全て、アンチセンス化合物によって標的とされることが可能な核酸を意味する。
「標的セグメント」は、アンチセンス化合物に標的とされる標的核酸のヌクレオチド配列を意味する。「５’標的部位」は、標的セグメントの最も５’のヌクレオチドを意味する。「３’標的部位」は、標的セグメントの最も３’のヌクレオチドを意味する。
「Ｔｈ１関連疾患、障害または状態」は、Ｔｈ１免疫応答によって媒介される炎症性疾患、障害または状態を意味する。Ｔｈ１疾患の例には、アレルギー性疾患（例えば、アレルギー性鼻炎）、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症、関節炎、強皮症、乾癬、セリアック病）、心臓血管疾患、結腸炎、糖尿病（例えば、１型インスリン依存性糖尿病）、過敏症（例えば、４型過敏症）、感染症（例えば、ウイルス感染、ミコバクテリア感染）および後部ブドウ膜炎が含まれるが、これに制限されるわけではない。
「Ｔｈ２関連疾患、障害または状態」は、Ｔｈ２免疫応答によって媒介される炎症性疾患、障害または状態を意味する。Ｔｈ２疾患の例には、アレルギー性疾患（例えば、慢性鼻副鼻腔炎）、気道過敏性、喘息、アトピー性皮膚炎、結腸炎、子宮内膜症、感染症（例えば、蠕虫感染）、甲状腺疾患（例えば、グレーヴズ病）、過敏症（例えば、１型、２型または３型過敏症）および膵炎が含まれるが、これに制限されるわけではない。
「Ｔｈ１」または「Ｔｈ２」応答には、選択的サイトカインの生産および炎症部位への細胞の遊走または補充が含まれる。炎症部位へ遊走しうる細胞タイプには、好酸球およびマクロファージが含まれるが、これに制限されるわけではない。したがって、サイトカインレベルまたは細胞遊走は、Ｔｈ１またはＴｈ２で媒介される炎症などの特定のタイプの炎症のマーカーでありうる。Ｔｈ１マーカーには、サイトカインＩＬ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＩＮＦγおよび角化細胞化学誘引物質（ＫＣ）が含まれるが、これに制限されるわけではない。Ｔｈ２マーカーには、好酸球浸潤、粘液生産およびサイトカインＩＬ−４およびＩＬ−５が含まれるが、これに制限されるわけではない。一つまたは複数のサイトカインレベルの低下または細胞遊走は、低下した炎症を示すものでありうる。
「治療的有効量」は、個体に治療的利点を与える医薬物質の量を意味する。
「処置する」は、動物の疾患、障害または状態の変更または改善を行うために、動物に医薬組成物を投与することを意味する。特定の態様において、一つまたはそれを超える医薬組成物を、動物に投与することができる。
「未修飾ヌクレオチド」は、天然に存在する核酸塩基、糖部分およびヌクレオシド間結合から構成されるヌクレオチドを意味する。特定の態様において、未修飾ヌクレオチドは、ＲＮＡヌクレオチド（すなわち、β−Ｄ−リボヌクレオチド）またはＤＮＡヌクレオチド（すなわち、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオチド）である。
特定の態様
特定の態様において、提供されるのは、化合物であって、第XI因子モジュレーターを含む化合物を動物に投与することによって炎症反応をモジュレーションする方法、化合物および組成物である。第XI因子のモジュレーターは、炎症反応を必要とされるように増加させるまたは低下させるために、第XI因子ｍＲＮＡおよびタンパク質発現の増加または低下をもたらすことができる。特定の態様において、動物における第XI因子阻害は、第XI因子に標的指向するモジュレーターを投与することによって逆行する。本発明の特定の態様において、第XI因子は、そのモジュレーターによって阻害される。第XI因子モジュレーターは、第XI因子に標的指向する修飾オリゴヌクレオチドでありうる。
特定の態様において、提供されるのは、第XI因子に関連した炎症性疾患、障害および状態の処置、予防または改善を必要としている動物の第XI因子に関連した炎症性疾患、障害および状態の処置、予防または改善のための方法、化合物および組成物である。ある態様において、動物の炎症性疾患を改善する方法は、第XI因子に標的指向する化合物を動物に投与することを含む。
特定の態様において、提供されるのは、炎症性疾患、障害または状態のリスクがある動物を処置する方法、化合物および組成物であって、治療的有効量の第XI因子に標的指向する化合物をリスクがある動物に投与することを含む方法、化合物および組成物である。
特定の態様において、提供されるのは、炎症性疾患、障害または状態に苦しむ動物において第XI因子発現を阻害する方法、化合物および組成物であって、第XI因子に標的指向する化合物を動物に投与することを含む方法、化合物および組成物である。
特定の態様において、提供されるのは、動物の炎症性疾患、障害または状態のリスクを減少させる方法、化合物および組成物であって、第XI因子に標的指向する化合物を動物に投与することを含む方法、化合物および組成物である。
特定の態様において、提供されるのは、炎症反応、炎症性疾患、障害または状態を処置する、予防するまたは改善する場合に用いるための第XI因子モジュレーターであって、第XI因子特異的阻害剤である第XI因子モジュレーターである。特定の態様において、第XI因子特異的阻害剤は、第XI因子ｍＲＮＡおよび／または第XI因子タンパク質の発現を阻害することが可能な核酸（アンチセンス化合物を含めた）、ペプチド、抗体、低分子および他の物質である。
特定の態様において、炎症性疾患、障害または状態は、フィブリン関連炎症性疾患、障害または状態である。
特定の態様において、炎症性疾患、障害または状態は、敗血症関連でも感染関連でもない。
特定の態様において、炎症性疾患、障害または状態は、Ｔｈ１に媒介される。特定の態様において、Ｔｈ１に媒介される炎症性疾患、障害または状態のマーカーを低下させる。Ｔｈ１のマーカーには、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦ−αまたはＫＣなどのサイトカインが含まれるが、これに制限されるわけではない。特定の態様において、本発明の化合物は、Ｔｈ１に媒介される疾患を予防するまたは改善する。Ｔｈ１に媒介される疾患には、アレルギー性疾患（例えば、アレルギー性鼻炎）、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症、関節炎、強皮症、乾癬、セリアック病）、心臓血管疾患、結腸炎、糖尿病（例えば、１型インスリン依存性糖尿病）、過敏症（例えば、４型過敏症）、感染症（例えば、ウイルス感染、ミコバクテリア感染）および後部ブドウ膜炎が含まれるが、これに制限されるわけではない。
特定の態様において、炎症性疾患、障害または状態は、Ｔｈ２に媒介される。特定の態様において、Ｔｈ２に媒介される炎症性疾患、障害または状態のマーカーを低下させる。Ｔｈ２のマーカーには、炎症部位への好酸球浸潤、粘液生産およびＩＬ−４およびＩＬ−５などのサイトカインが含まれるが、これに制限されるわけではない。特定の態様において、本発明の化合物は、Ｔｈ２に媒介される疾患を予防するまたは改善する。Ｔｈ２に媒介される疾患には、アレルギー性疾患（例えば、慢性鼻副鼻腔炎）、気道過敏性、喘息、アトピー性皮膚炎、結腸炎、子宮内膜症、感染症（例えば、蠕虫感染）、甲状腺疾患（例えば、グレーヴズ病）、過敏症（例えば、１型、２型または３型過敏症）および膵炎が含まれるが、これに制限されるわけではない。
特定の態様において、提供されるのは、第XI因子核酸を標的とする化合物である。特定の態様において、第XI因子核酸は、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０００１２８．３（本明細書中にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１として包含される）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０２２７９２．１７のヌクレオチド１９５９８０００〜１９６２４０００（本明細書中にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２として包含される）およびＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０２８０６６．１（本明細書中にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６として包含される）、エクソン１〜１５のＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＷ＿００１１１８１６７．１（本明細書中にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７４として包含される）に示されるいずれかの配列である。
特定の態様において、本発明は、修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。特定の態様において、本発明の化合物は、１２〜３０個連結したヌクレオシドから成る修飾オリゴヌクレオチドを含む。
特定の態様において、本発明の化合物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含んでよい。特定の態様において、本発明の化合物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含んでよい。
特定の態様において、本発明は、標的ＲＮＡ配列上の核酸塩基範囲として下に示される標的領域の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
特定の態様において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基６５６〜６７６の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基６５６〜６７６の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも８０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基６６５〜６８７の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基６６５〜６８７の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも５０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基６７５〜７０４の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基６７５〜７０４の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも５０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基６７７〜７０４の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基６７７〜７０４の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも６０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基６７８〜６９７の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基６７８〜６９７の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも７０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基６８０〜７０３の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基６８０〜７０３の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３および実施例１４に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも８０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基６８３〜７０２の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基６８３〜７０２の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも９０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基７３８〜７５９の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基７３８〜７５９の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３および実施例１４に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも８０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基７３８〜７６０の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基７３８〜７６０の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも６０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基７３８〜７６２の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基７３８〜７６２の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも４５％阻害を達成することができる。
特定の態様において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１０１８〜１０４２の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１０１８〜１０４２の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも８０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１０６２〜１０８９の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１０６２〜１０８９の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも７０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１０６２〜１０９０の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１０６２〜１０９０の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも６０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１０６２〜１０９１の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１０６２〜１０９１の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも２０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１２７５〜１３０１の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１０６２〜１０９１の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも８０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１２７６〜１３０１の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１０６２〜１０９１の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例１４に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも８０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１２８４〜１３０８の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１０６２〜１０９１の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも８０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１２９１〜１３１７の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１０６２〜１０９１の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも８０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１２７５〜１３１８の少なくとも一部分に相補的な核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１２７５〜１３１８の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の等長部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含んでよい。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも７０％阻害を達成することができる。
本発明の態様は、１２〜３０個連結したヌクレオシドから成る且つＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５〜２４１に示される核酸塩基配列の中より選択される核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
本発明の態様は、１２〜３０個連結したヌクレオシドから成る且つＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５〜２６９に示される核酸塩基配列の中より選択される核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
本発明の態様は、１２〜３０個連結したヌクレオシドから成る且つＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４２〜２６９に示される核酸塩基配列の中より選択される核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
本発明の特定の態様は、１２〜３０個連結したヌクレオシドから成る且つＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５〜２６９に示される核酸塩基配列の中より選択される核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
本発明の特定の態様は、１２〜３０個連結したヌクレオシドから成る且つＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４２〜２６９に示される核酸塩基配列の中より選択される核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＩＳＩＳ Ｎｏ：２２、３１、３２、３４、３６〜３８、４０、４１、４３、５１〜５３、５５、５６、５９、６０、６４、６６、７１、７３、７５、９６、９８〜１０３、１０５〜１０９、１１３〜１１７、１１９、１２４、１２７、１２９、１７１、１７２、１７４、１７６、１７８、１７９、１８１〜１９７、１９９〜２１１および２１３〜２３２より選択される核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含む。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、３１、３２、３４、３６〜３８、４０、４１、４３、５１〜５３、５５、５６、５９、６０、６４、６６、７１、７３、７５、９６、９８〜１０３、１０５〜１０９、１１３〜１１７、１１９、１２４、１２７、１２９、１７１、１７２、１７４、１７６、１７８、１７９、１８１〜１９７、１９９〜２１１および２１３〜２３２より選択される核酸塩基配列を含む。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、３１、３２、３４、３６〜３８、４０、４１、４３、５１〜５３、５５、５６、５９、６０、６４、６６、７１、７３、７５、９６、９８〜１０３、１０５〜１０９、１１３〜１１７、１１９、１２４、１２７、１２９、１７１、１７２、１７４、１７６、１７８、１７９、１８１〜１９７、１９９〜２１１および２１３〜２３２より選択される核酸塩基配列から成る。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも７０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＩＳＩＳ Ｎｏ：２２、３１、３４、３７、４０、４３、５１〜５３、６０、９８、１００〜１０２、１０５〜１０９、１１４、１１５、１１９、１７１、１７４、１７６、１７９、１８１、１８６、１８８〜１９３、１９５、１９６、１９９〜２１０および２１３〜２３２より選択される核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含む。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、３１、３４、３７、４０、４３、５１〜５３、６０、９８、１００〜１０２、１０５〜１０９、１１４、１１５、１１９、１７１、１７４、１７６、１７９、１８１、１８６、１８８〜１９３、１９５、１９６、１９９〜２１０および２１３〜２３２より選択される核酸塩基配列を含む。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、３１、３４、３７、４０、４３、５１〜５３、６０、９８、１００〜１０２、１０５〜１０９、１１４、１１５、１１９、１７１、１７４、１７６、１７９、１８１、１８６、１８８〜１９３、１９５、１９６、１９９〜２１０および２１３〜２３２より選択される核酸塩基配列から成る。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも８０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＩＳＩＳ Ｎｏ：３１、３７、１００、１０５、１７９、１９０〜１９３、１９６、２０２〜２０７、２０９、２１０、２１４〜２１９、２２１〜２２４、２２６、２２７、２２９および２３１より選択される核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含む。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、３７、１００、１０５、１７９、１９０〜１９３、１９６、２０２〜２０７、２０９、２１０、２１４〜２１９、２２１〜２２４、２２６、２２７、２２９および２３１より選択される核酸塩基配列を含む。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、３７、１００、１０５、１７９、１９０〜１９３、１９６、２０２〜２０７、２０９、２１０、２１４〜２１９、２２１〜２２４、２２６、２２７、２２９および２３１より選択される核酸塩基配列から成る。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例３に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも９０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４、５２、５３、１１４、１１５、１９０、２１３〜２３２、２４２〜２６０および２６２〜２６６より選択される核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含む。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４、５２、５３、１１４、１１５、１９０、２１３〜２３２、２４２〜２６０および２６２〜２６６より選択される核酸塩基配列を含む。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４、５２、５３、１１４、１１５、１９０、２１３〜２３２、２４２〜２６０および２６２〜２６６より選択される核酸塩基配列から成る。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例１４に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも７０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４、５２、５３、１１４、１１５、１９０、２１３〜２１６、２１８〜２２６、２４３〜２４６、２４８、２４９、２５２〜２５９、２６４および２６５より選択される核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含む。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４、５２、５３、１１４、１１５、１９０、２１３〜２１６、２１８〜２２６、２４３〜２４６、２４８、２４９、２５２〜２５９、２６４および２６５より選択される核酸塩基配列を含む。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４、５２、５３、１１４、１１５、１９０、２１３〜２１６、２１８〜２２６、２４３〜２４６、２４８、２４９、２５２〜２５９、２６４および２６５より選択される核酸塩基配列から成る。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例１４に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも８０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４、１９０、２１５、２２２、２２３、２２６、２４６および２５４より選択される核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または２０個隣接した核酸塩基を含む。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４、１９０、２１５、２２２、２２３、２２６、２４６および２５４より選択される核酸塩基配列を含む。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４、１９０、２１５、２２２、２２３、２２６、２４６および２５４より選択される核酸塩基配列から成る。この修飾オリゴヌクレオチドは、ＲＴ−ＰＣＲ検定法を用いて、場合により、ＨｅｐＧ２細胞中で（例えば、実施例１４に記載のように）決定されるヒトｍＲＮＡレベルの少なくとも９０％阻害を達成することができる。
特定の態様において、本発明の化合物は、一本鎖修飾オリゴヌクレオチドから成る。
特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、１２〜３０個連結したヌクレオシドまたは２０個連結したヌクレオシドから成る。
特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７４の核酸塩基配列に１００％相補的である。
特定の態様において、化合物は、少なくとも一つの修飾ヌクレオシド間結合を有する。特定の態様において、修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。特定の態様において、各々の修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
特定の態様において、化合物は、修飾糖を含む少なくとも一つのヌクレオシドを有する。特定の態様において、少なくとも一つの修飾糖は、二環式糖である。特定の態様において、少なくとも一つの修飾糖は、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’ＭＯＥ）を含む。
特定の態様において、化合物は、修飾核酸塩基を含む少なくとも一つのヌクレオシドを有する。特定の態様において、修飾核酸塩基は、５−メチルシトシンである。
特定の態様において、化合物の修飾オリゴヌクレオチドは、
（ｉ）連結したデオキシヌクレオシドから成るギャップセグメント；
（ii）連結したヌクレオシドから成る５’ウィングセグメント；
（iii）連結したヌクレオシドから成る３’ウィングセグメント
を含み、ここにおいて、ギャップセグメントは、５’ウィングセグメントおよび３’ウィングセグメントに直に隣接して且つそれらの間に位置し、そしてここにおいて、各々のウィングセグメントのヌクレオシドは各々、修飾糖を含む。
特定の態様において、化合物の修飾オリゴヌクレオチドは、
（ｉ）１０個連結したデオキシヌクレオシドから成るギャップセグメント；
（ii）連結したヌクレオシドから成る５’ウィングセグメント；
（iii）連結したヌクレオシドから成る３’ウィングセグメント
を含み、ここにおいて、ギャップセグメントは、５’ウィングセグメントおよび３’ウィングセグメントに直に隣接して且つそれらの間に位置し、そしてここにおいて、各々のウィングセグメントのヌクレオシドは各々、修飾糖を含む。
特定の態様において、化合物の修飾オリゴヌクレオチドは、
（ｉ）１０個連結したデオキシヌクレオシドから成るギャップセグメント；
（ii）５個連結したヌクレオシドから成る５’ウィングセグメント；
（iii）５個連結したヌクレオシドから成る３’ウィングセグメント
を含み、ここにおいて、ギャップセグメントは、５’ウィングセグメントおよび３’ウィングセグメントに直に隣接して且つそれらの間に位置し、ここにおいて、各々のウィングセグメントのヌクレオシドは各々、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み；そしてここにおいて、各々のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。
特定の態様において、化合物の修飾オリゴヌクレオチドは、
（ｉ）１４個連結したデオキシヌクレオシドから成るギャップセグメント；
（ii）３個連結したヌクレオシドから成る５’ウィングセグメント；
（iii）３個連結したヌクレオシドから成る３’ウィングセグメント
を含み、ここにおいて、ギャップセグメントは、５’ウィングセグメントおよび３’ウィングセグメントに直に隣接して且つそれらの間に位置し、ここにおいて、各々のウィングセグメントのヌクレオシドは各々、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み；そしてここにおいて、各々のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。
特定の態様において、化合物の修飾オリゴヌクレオチドは、
（ｉ）１３個連結したデオキシヌクレオシドから成るギャップセグメント；
（ii）２個連結したヌクレオシドから成る５’ウィングセグメント；
（iii）５個連結したヌクレオシドから成る３’ウィングセグメント
を含み、ここにおいて、ギャップセグメントは、５’ウィングセグメントおよび３’ウィングセグメントに直に隣接して且つそれらの間に位置し、ここにおいて、各々のウィングセグメントのヌクレオシドは各々、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み；そしてここにおいて、各々のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。
特定の態様において、提供されるのは、炎症性疾患、障害または状態のリスクがある動物、または炎症性疾患、障害または状態を有する動物を処置する方法、化合物および組成物であって、治療的有効量の１２〜３０個連結したヌクレオシドから成る修飾オリゴヌクレオチドであって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示される第XI因子核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を動物に投与することを含む方法、化合物および組成物である。
特定の態様において、提供されるのは、炎症性疾患、障害または状態のリスクがある動物、または炎症性疾患、障害または状態を有する動物を処置する方法、化合物および組成物であって、治療的有効量の１２〜３０個連結したヌクレオシドから成る且つＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５〜２６９に示される核酸塩基配列のいずれか一つより選択される核酸塩基配列の少なくとも８個隣接した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を動物に投与することを含む方法、化合物および組成物である。
特定の態様において、第XI因子モジュレーターの動物への投与は、動物に有害な出血を引き起こさないしまたは出血状態を悪化させない。
特定の態様において、動物は、一つまたはそれを超える第XI因子モジュレーターで予め処置する。
特定の態様において、動物は、ヒトである。
特定の態様において、本発明の化合物は、動物の炎症反応、炎症性疾患、障害または状態を処置する、予防するまたは改善する。特定の態様において、その反応、疾患、障害または状態は、第XI因子に関連している。特定の態様において、炎症反応、炎症性疾患、障害または状態には、関節炎、結腸炎、線維症、アレルギー性炎症および喘息、心臓血管疾患、糖尿病、敗血症、免疫増殖性疾患、抗リン脂質症候群、移植片関連疾患および自己免疫疾患またはいずれかその組み合わせが含まれてよいが、これに制限されるわけではないし、またはその反応、疾患、障害または状態は、それによってよいしまたはそれに関連してよい。
関節炎の例には、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、尿酸性関節炎、痛風、慢性多発性関節炎、上腕肩甲関節周囲炎、頸部関節炎、腰仙関節炎、変形性関節症、乾癬性関節炎、腸疾患に基づく関節炎および強直性脊椎炎が含まれるが、これに制限されるわけではない。
結腸炎の例には、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患（Inflammatory Bowel Disease）（ＩＢＤ）およびクローン病（Crohn’s Disease）が含まれるが、これに制限されるわけではない。
移植片関連障害の例には、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、移植片移植拒絶に関連した障害、慢性拒絶反応および組織または細胞の同種移植片または異種移植片が含まれるが、これに制限されるわけではない。
免疫増殖性疾患の例には、癌（例えば、肺癌）および良性過形成が含まれるが、これに制限されるわけではない。
自己免疫疾患の例には、狼瘡（例えば、エリテマトーデス、ループス腎炎）、橋本甲状腺炎、原発性粘液水腫、グレーヴズ病、悪性貧血、自己免疫性萎縮性胃炎、アディソン病、糖尿病（例えば、インスリン依存性糖尿病、Ｉ型糖尿病、II型糖尿病）、グッドパスチャー症候群、重症筋無力症、天疱瘡、クローン病、交感性眼炎、自己免疫性ブドウ膜炎、多発性硬化症、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少症、原発性胆汁性肝硬変、慢性作用肝炎、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、リウマチ性疾患（例えば、関節リウマチ）、多発性筋炎、強皮症、乾癬および混合性結合組織病が含まれるが、これに制限されるわけではない。
特定の態様において、化合物および組成物は、炎症性疾患を処置する、予防するまたは改善するために動物に投与する。特定の態様において、動物への投与は、非経口経路による。特定の態様において、非経口投与は、皮下投与または静脈内投与のいずれかである。
特定の態様において、化合物は、一つまたはそれを超える第二物質と共投与する。特定の態様において、第二物質は、ＮＳＡＩＤまたは疾患修飾性薬である。
ＮＳＡＩＤＳには、アセチルサリチル酸、コリンマグネシウムサリチレート、ジフルニサル、サリチル酸マグネシウム、サルサラート、サリチル酸ナトリウム、ジクロフェナク、エトドラク（etodolac）、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラク（ketorolac）、メクロフェナメート、ナプロキセン、ナブメトン（nabumetone）、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチン、アセトアミノフェン、イブプロフェン、Ｃｏｘ−２阻害剤、メロキシカム（meloxicam）およびトラマドールが含まれるが、これに制限されるわけではない。本発明の化合物および一つまたはそれを超えるＮＳＡＩＤＳは、同時にまたは逐次的に投与することができる。
疾患修飾性薬の例には、メトトレキサート、アバタセプト（abatacept）、インフリキシマブ、シクロホスファミド、アザチオプリン、コルチコステロイド、シクロスポリンＡ、アミノサリチレート、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン（hydroxychloroquine）、レフルノミド（leflunomide）、エタナーセプト、エファリズマブ（efalizumab）、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）および腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦα）または他のサイトカイン遮断薬またはアンタゴニストが含まれるが、これに制限されるわけではない。本発明の化合物および一つまたはそれを超える疾患修飾性薬は、同時にまたは逐次的に投与することができる。
特定の態様において、化合物またはオリゴヌクレオチドは、塩の形である。
特定の態様において、化合物または組成物は、薬学的に許容しうる担体または希釈剤と一緒に処方する。
特定の態様において、提供されるのは、炎症反応または炎症性疾患、障害または状態の処置、予防または改善に有用な方法および化合物である。第XI因子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７４に示される配列を有する。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、炎症反応または炎症性疾患、障害または状態を処置するために用いる。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５〜２６９に示される核酸塩基配列の中より選択される核酸塩基配列の少なくとも８個隣接した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
特定の態様において、提供されるのは、炎症反応または炎症性疾患、障害または状態の処置、予防または改善のための薬剤の製造において有用な方法および化合物である。第XI因子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７４に示される配列を有する。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、炎症反応または炎症性疾患、障害または状態を処置するための薬剤の製造に用いる。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５〜２６９に示される核酸塩基配列の中より選択される核酸塩基配列の隣接した核酸塩基の一部分を含む核酸塩基配列を有する、または本明細書中に記載の標的セグメントまたは標的領域に相補的な核酸塩基の一部分を含む。特定の態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５〜２６９に示される核酸塩基配列の中より選択される核酸塩基配列の少なくとも８個隣接した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、または本明細書中に記載の標的セグメントまたは標的領域に相補的な少なくとも８個隣接した核酸塩基を含む。
特定の態様において、提供されるのは、第XI因子に関連した炎症性疾患、障害および状態を処置する、改善するまたは予防するための薬剤の製造における、本明細書中に記載の第XI因子モジュレーターの使用である。
特定の態様において、提供されるのは、本明細書中に記載の炎症反応または炎症性疾患、障害または状態を処置する、予防するまたは改善する場合に用いるための、本明細書中に記載の第XI因子モジュレーターである。第XI因子モジュレーターは、一つまたはそれを超える追加の物質との組み合わせ療法で、または本明細書中に記載の療法で用いることができる。物質または療法は、動物に同時にまたは逐次的に投与することができる。
特定の態様において、提供されるのは、本明細書中に記載の炎症性疾患、障害または状態を処置する、予防するまたは改善するための薬剤の製造における、本明細書中に記載の第XI因子モジュレーターの使用である。第XI因子モジュレーターは、一つまたはそれを超える追加の物質との組み合わせ療法で、または本明細書中に記載の療法で用いることができる。物質または療法は、動物に同時にまたは逐次的に投与することができる。
特定の態様において、提供されるのは、本明細書中に記載の炎症反応、炎症性疾患、障害または状態を処置する、予防するまたは改善するためのキットであって、
（ｉ）本明細書中に記載の第XI因子特異的阻害剤；および場合により、
（ii）本明細書中に記載の追加の物質または療法
を含むキットである。
本発明のキットは、本明細書中に記載の組み合わせ療法によって本明細書中に記載の炎症性疾患、障害または状態を処置する、予防するまたは改善するキットを用いるための取扱説明書を更に包含してよい。
アンチセンス化合物
オリゴマー性化合物には、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、オリゴヌクレオチド類似体、オリゴヌクレオチド模擬体、アンチセンス化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびｓｉＲＮＡが含まれるが、これに制限されるわけではない。オリゴマー性化合物は、標的核酸に「アンチセンス」であってよい、すなわち、標的核酸への水素結合によるハイブリダイゼーションを行うことが可能であるという意味である。
特定の態様において、アンチセンス化合物は、５’〜３’方向で表された場合に、それに標的とされる標的核酸の標的セグメントの逆補体を含む核酸塩基配列を有する。このような特定の態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５’〜３’方向で表された場合に、それに標的とされる標的核酸の標的セグメントの逆補体を含む核酸塩基配列を有する。
特定の態様において、第XI因子核酸を標的とするアンチセンス化合物は、１２〜３０サブユニット長さである。言い換えると、アンチセンス化合物は、１２〜３０個連結したサブユニットである。他の態様において、アンチセンス化合物は、８〜８０個、１２〜５０個、１５〜３０個、１８〜２４個、１９〜２２個または２０個連結したサブユニットである。このような特定の態様において、アンチセンス化合物は、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個または８０個連結したサブユニット長さ、または上のいずれか二つの値によって規定される範囲である。いくつかの態様において、アンチセンス化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、そして連結したサブユニットは、ヌクレオチドである。
特定の態様において、第XI因子核酸を標的とする短いまたは切断された（shortened or truncated）アンチセンス化合物は、５’末端から（５’切断）または或いは、３’末端から（３’切断）欠失している単一サブユニットを有する。第XI因子核酸を標的とする短いまたは切断されたアンチセンス化合物は、そのアンチセンス化合物の５’末端から欠失している二つのサブユニットを有してよいし、または或いは、３’末端からから欠失している二つのサブユニットを有してよい。或いは、欠失しているヌクレオシドは、そのアンチセンス化合物全体に、例えば、５’末端から欠失している一つのヌクレオシドおよび３’末端から欠失している一つのヌクレオシドを有するアンチセンス化合物中に分散していてよい。
単一の追加のサブユニットが、長いアンチセンス化合物中に存在する場合、追加のサブユニットは、そのアンチセンス化合物の５’末端または３’末端に位置していてよい。二つまたはそれを超える追加のサブユニットが存在する場合、加えられたサブユニットは、例えば、そのアンチセンス化合物の５’末端に（５’付加）または或いは、３’末端に（３’付加）加えられた二つのサブユニットを有するアンチセンス化合物中に互いに隣接していてよい。或いは、加えられたサブユニットは、アンチセンス全体に、例えば、５’末端に加えられた一つのサブユニットおよび３’末端に加えられた一つのサブユニットを有するアンチセンス化合物中に分散していてよい。
活性を排除することなく、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのアンチセンス化合物の長さを増加させるまたは低下させること、および／またはミスマッチ塩基を導入することは、可能である。例えば、Woolf et al.（Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7305-7309, 1992）の場合、１３〜２５核酸塩基長さの一連のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、卵母細胞注射モデルにおいて標的ＲＮＡの切断を引き起こすそれらの能力について調べた。アンチセンスオリゴヌクレオチドの両末端付近に８個または１１個のミスマッチ塩基を含む２５核酸塩基長さのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ミスマッチ不含のアンチセンスオリゴヌクレオチドより少ない程度にではあるが、標的ｍＲＮＡの特異的切断を支配することが可能であった。同様に、標的特異的切断は、１個または３個のミスマッチを含むものを含めた１３核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて達成された。
Gautschi et al（J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, March 2001）は、ｂｃｌ−２ｍＲＮＡに１００％相補性を有し且つｂｃｌ−ｘＬｍＲＮＡへ３個のミスマッチを有するオリゴヌクレオチドの、ｂｃｌ−２およびｂｃｌ−ｘＬ双方の in vitro および in vivo の発現を減少させる能力を示した。更に、このオリゴヌクレオチドは、強力な in vivo 抗腫瘍活性を示した。
Maher および Dolnick（Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358,1988）は、一連のタンデムの１４核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドと、二つまたは三つのタンデムアンチセンスオリゴヌクレオチドの配列から構成される２８および４２核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドをそれぞれ、ウサギ網状赤血球検定においてヒトＤＨＦＲの翻訳を止めるそれらの能力について調べた。三つの１４核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチド各々単独では、２８または４２核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドより控えめなレベルではあるが、翻訳を阻止できた。
アンチセンス化合物モチーフ
特定の態様において、第XI因子核酸を標的とするアンチセンス化合物は、増強された阻害活性、標的核酸への増加した結合親和性、または in vivo ヌクレアーゼによる分解への耐性などの性質をそれらアンチセンス化合物に与えるパターンまたはモチーフで配置された化学修飾サブユニットを有する。
キメラのアンチセンス化合物は、典型的に、ヌクレアーゼ分解への増加した耐性、増加した細胞取込み、標的核酸への増加した結合親和性、および／または増加した阻害活性を与えるように修飾された少なくとも一つの領域を含有する。キメラのアンチセンス化合物の第二領域は、細胞エンドヌクレアーゼＲＮアーゼＨの基質として役立つこともありうるが、それは、ＲＮＡ：ＤＮＡ二重らせんのＲＮＡ鎖を切断する。
ギャップマーモチーフを有するアンチセンス化合物は、キメラのアンチセンス化合物と考えられる。ギャップマーの場合、ＲＮアーゼＨ切断を支持する複数のヌクレオチドを有する内部領域は、その内部領域のヌクレオシドとは化学的に異なる複数のヌクレオチドを有する外部領域の間に位置している。ギャップマーモチーフを有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの場合、ギャップセグメントは、概して、エンドヌクレアーゼ切断の基質として役立つが、ウィングセグメントは、修飾ヌクレオシドを含む。特定の態様において、ギャップマーの領域は、各々異なる領域を含む糖残基のタイプによって区別される。いくつかの態様において、ギャップマーの領域を区別するのに用いられる糖残基のタイプには、β−Ｄ−リボヌクレオシド、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、２’−修飾ヌクレオシド（このような２’−修飾ヌクレオシドには、特に、２’−ＭＯＥおよび２’−Ｏ−ＣＨ３が含まれてよい）、および二環式糖修飾ヌクレオシド（このような二環式糖修飾ヌクレオシドには、４’−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−２’架橋（式中、ｎ＝１またはｎ＝２）を有するものが含まれてよい）が含まれてよい。好ましくは、各々異なる領域は、一様な糖残基を含む。ウィング−ギャップ−ウィングモチーフは、しばしば、「Ｘ−Ｙ−Ｚ」と記載され、この場合の「Ｘ」は、５’ウィング領域の長さであり、「Ｙ」は、ギャップ領域の長さであり、そして「Ｚ」は、３’ウィング領域の長さである。本明細書中で用いられる「Ｘ−Ｙ−Ｚ」と記載されるギャップマーは、ギャップセグメントが、５’ウィングセグメントおよび３’ウィングセグメント各々に直に隣接して位置するような立体配置を有する。したがって、５’ウィングセグメントおよびギャップセグメントの間に、またはギャップセグメント（segement）および３’ウィングセグメントの間に存在する介在ヌクレオチドはない。本明細書中に記載のアンチセンス化合物はいずれも、ギャップマーモチーフを有することができる。いくつかの態様において、ＸおよびＺは同じであり、他の態様において、それらは異なる。好ましい態様において、Ｙは、８〜１５ヌクレオチドである。Ｘ、ＹまたはＺは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０またはそれを超えるいずれかのヌクレオチドでありうる。したがって、本発明のギャップマーには、例えば、５−１０−５、４−８−４、４−１２−３、４−１２−４、３−１４−３、２−１３−５、２−１６−２、１−１８−１、３−１０−３、２−１０−２、１−１０−１または２−８−２が含まれるが、これに制限されるわけではない。
特定の態様において、ウィング−ギャップまたはギャップ−ウィング立体配置、すなわち、ギャップマー立体配置について上に記載のＸ−ＹまたはＹ−Ｚ立体配置を有する「ウィングマー」モチーフとしてのアンチセンス化合物。したがって、本発明のウィングマー立体配置には、例えば、５−１０、８−４、４−１２、１２−４、３−１４、１６−２、１８−１、１０−３、２−１０、１−１０、８−２、２−１３または５−１３が含まれるが、これに制限されるわけではない。
特定の態様において、第XI因子核酸を標的とするアンチセンス化合物は、５−１０−５ギャップマーモチーフを有する。
特定の態様において、第XI因子核酸を標的とするアンチセンス化合物は、３−１４−３ギャップマーモチーフを有する。
特定の態様において、第XI因子核酸を標的とするアンチセンス化合物は、２−１３−５ギャップマーモチーフを有する。
特定の態様において、第XI因子核酸を標的とするアンチセンス化合物は、広幅ギャップモチーフを有する。
特定の態様において、第XI因子核酸を標的とする広幅ギャップアンチセンスオリゴヌクレオチドは、３個の化学修飾ヌクレオシドのウィングセグメントに直に隣接して且つそれらの間に位置する１４個の２’−デオキシリボヌクレオシドのギャップセグメントを有する。特定の態様において、化学修飾は、２’−糖修飾を含む。別の態様において、化学修飾は、２’−ＭＯＥ糖修飾を含む。
特定の態様において、第XI因子核酸を標的とする広幅ギャップアンチセンスオリゴヌクレオチドは、２個の化学修飾ヌクレオシドの５’ウィングセグメントおよび５個の化学修飾ヌクレオシドの３’ウィングセグメントに直に隣接して且つそれらの間に位置する１３個の２’−デオキシリボヌクレオシドのギャップセグメントを有する。特定の態様において、化学修飾は、２’−糖修飾を含む。別の態様において、化学修飾は、２’−ＭＯＥ糖修飾を含む。
標的核酸、標的領域およびヌクレオチド配列
第XI因子をエンコードするヌクレオチド配列には、制限されることなく、次が含まれる。１９９９年３月２４日に最初にＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）で寄託され、本明細書中にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１として包含されるＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受託番号ＮＭ＿０００１２８．３；１９５９８０００〜１９６２４０００を切断され、２０００年１１月２９日に最初にＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）で寄託され、そして本明細書中にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２として包含されるＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受託番号ＮＴ＿０２２７９２．１７；２００２年６月２日に最初にＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）で寄託され、本明細書中にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６として包含されるＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受託番号ＮＭ＿０２８０６６．１；およびエクソン１〜１５のＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＷ＿００１１１８１６７．１（本明細書中にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７４として包含される）。
本明細書中にある実施例において各々ＳＥＱ ＩＤ ＮＯで示される配列は、糖残基、ヌクレオシド間結合または核酸塩基へのいずれの修飾とも無関係であるということは理解される。それ自体で、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯによって規定されるアンチセンス化合物は、独立して、糖残基、ヌクレオシド間結合または核酸塩基への一つまたはそれを超える修飾を含んでよい。Isis 番号（Isis No）によって記載されるアンチセンス化合物は、核酸塩基配列およびモチーフの組み合わせを示す。
特定の態様において、標的領域は、標的核酸の構造的に規定された領域である。例えば、標的領域は、３’ＵＴＲ、５’ＵＴＲ、エクソン、イントロン、エクソン／イントロンジャンクション（junction）、コーディング領域、翻訳開始領域、翻訳終結領域または他の規定の核酸領域を包含してよい。第XI因子について構造的に規定された領域は、ＮＣＢＩなどの配列データベースから受託番号によって得ることができ、そしてこのような情報は、本明細書中に援用される。特定の態様において、標的領域は、その標的領域内の一つの標的セグメントの５’標的部位〜標的領域内の別の標的セグメントの３’標的部位の配列を包含してよい。
標的指向することは、アンチセンス化合物が、所望の作用を生じるようにハイブリッド形成する少なくとも一つの標的セグメントの決定を包含する。特定の態様において、所望の作用は、ｍＲＮＡ標的核酸レベルの減少である。特定の態様において、所望の作用は、標的核酸によってエンコードされるタンパク質のレベルの減少、または標的核酸に関連した表現型変化である。
標的領域は、一つまたはそれを超える標的セグメントを含有してよい。標的領域内の多数の標的セグメントは、オーバーラップしていてよい。或いは、それらは、オーバーラップしていなくてよい。特定の態様において、標的領域内の標的セグメントは、約３００以下のヌクレオチドで隔てられている。特定の態様において、標的領域内の標的セグメントは、標的核酸上の２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０または１０ヌクレオチドである、ほぼその数である、それ以下である、ほぼそれ以下である、または前述の値のいずれか二つで規定される範囲である多数のヌクレオチドで隔てられている。特定の態様において、標的領域内の標的セグメントは、標的核酸上の５以下またはほぼそれ以下のヌクレオチドで隔てられている。特定の態様において、標的セグメントは隣接している。考えられるのは、本明細書中に挙げられる５’標的部位または３’標的部位のいずれかである出発核酸を有する範囲で規定される標的範囲である。
適する標的セグメントは、５’ＵＴＲ、コーディング領域、３’ＵＴＲ、イントロン、エクソンまたはエクソン／イントロンジャンクション中に見出すことができる。出発コドンまたは停止コドンを含有する標的セグメントも、適する標的セグメントである。適する標的セグメントは、出発コドンまたは停止コドンなどの特定の構造的に規定された領域を特異的に除外してよい。
適する標的セグメントの決定には、標的核酸の配列の、ゲノム中の他の配列への比較が含まれてよい。例えば、ＢＬＡＳＴアルゴリズムを用いて、異なった核酸の中で類似性を有する領域を識別することができる。この比較は、選択された標的核酸以外の配列（すなわち、非標的または標的外の配列）に非特異的方式でハイブリッド形成するかもしれないアンチセンス化合物配列の選択を妨げることができる。
活性標的領域内のアンチセンス化合物の活性（例えば、標的核酸レベルの減少パーセントによって規定される）には、変動があってよい。特定の態様において、第XI因子ｍＲＮＡレベルの減少は、第XI因子発現の阻害を示すものである。第XI因子タンパク質のレベルの減少も、標的ｍＲＮＡレベルの阻害を示すものである。更に、表現型変化は、第XI因子発現の阻害を示すものである。例えば、長期ａＰＴＴ時間は、第XI因子発現の阻害を示すものでありうる。別の例では、標準ＰＴ時間に関連した長期ａＰＴＴ時間は、第XI因子発現の阻害を示すものでありうる。別の例では、低下した量の血小板因子（Platelet Factor）４（ＰＦ−４）は、第XI因子発現の阻害を示すものでありうる。別の例では、減少した炎症形成（例えば、血栓、喘息、関節炎または結腸炎形成の場合）は、第XI因子発現の阻害を示すものでありうる。或いは、炎症形成について増加した時間（例えば、血栓、喘息、関節炎または結腸炎形成の場合）は、第XI因子発現の阻害を示すものでありうる。
ハイブリダイゼーション
いくつかの態様において、ハイブリダイゼーションは、本明細書中に開示のアンチセンス化合物と、第XI因子核酸との間で起こる。ハイブリダイゼーションの最も一般的な機構は、核酸分子の相補的核酸塩基の間の水素結合（例えば、ワトソン・クリック型、フーグスティーン型または逆フーグスティーン型水素結合）を必要とする。
ハイブリダイゼーションは、いろいろな条件下で起こりうる。ストリンジェント条件は、配列依存性であり、しかもハイブリッド形成される核酸分子の性状および組成によって決定される。
ある配列が、標的核酸に特異的にハイブリッド形成しうるか否かを決定する方法は、当該技術分野において周知である。特定の態様において、本明細書中に与えられるアンチセンス化合物は、第XI因子核酸と特異的にハイブリッド形成しうる。
相補性
アンチセンス化合物および標的核酸は、所望の作用（例えば、第XI因子核酸などの標的核酸のアンチセンス阻害）が生じるであろうように、そのアンチセンス化合物の十分な数の核酸塩基が、標的核酸の該当する核酸塩基と水素結合することができる場合、互いに相補的である。
アンチセンス化合物と第XI因子核酸との間の非相補的核酸塩基は、そのアンチセンス化合物が、標的核酸に特異的にハイブリッド形成可能な状態のままであるという条件付きで、許容することができる。更に、アンチセンス化合物は、介在するまたは隣接するセグメントがハイブリダイゼーションイベントに関与しないように、第XI因子核酸の一つまたはそれを超えるセグメントを越えてハイブリッド形成してよい（例えば、ループ構造、ミスマッチまたはヘアピン構造）。
特定の態様において、本明細書中に与えられるアンチセンス化合物またはそれらの特定部分は、第XI因子核酸、標的領域、標的セグメントまたはその特定部分に７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％相補的または少なくとも相補的である。標的核酸とアンチセンス化合物の相補性パーセントは、常套法を用いて決定することができる。例えば、アンチセンス化合物の２０核酸塩基の内１８個が標的領域に相補的であり、したがって、特異的にハイブリッド形成すると考えられるアンチセンス化合物は、９０パーセント相補性であると考えられる。この例の場合、残りの非相補的核酸塩基は、相補的核酸塩基と一緒に集合していてよいしまたはそれらの間に散在していてよく、互いにまたは相補的核酸塩基に隣接している必要はない。それ自体で、標的核酸と完全相補性の二つの領域に隣接している４（４個の）非相補的核酸塩基を有する１８核酸塩基長さであるアンチセンス化合物は、標的核酸と７７．８％の全相補性を有すると考えられ、したがって、本発明の範囲内であると考えられる。標的核酸の領域とアンチセンス化合物の相補性パーセントは、当該技術分野において知られているＢＬＡＳＴプログラム（基本的な局所整列探索手段）および PowerＢＬＡＳＴプログラムを用いて常套的に決定することができる（Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403 410; Zhang and Madden, Genome Res., 1997, 7, 649 656）。相同性、配列同一性または相補性パーセントは、例えば、Gap プログラム（Wisconsin Sequence Analysis Package, Version 8 for Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, Madison Wis.）により、暗黙値設定を用いて決定することができ、それは、Smith and Waterman（Adv. Appl. Math., 1981, 2, 482 489）のアルゴリズムを用いる。
特定の態様において、本明細書中に与えられるアンチセンス化合物またはそれらの特定部分は、標的核酸またはその特定部分に完全に相補的（すなわち、１００％相補的）である。例えば、アンチセンス化合物は、第XI因子核酸または標的領域または標的セグメントまたはその標的配列に完全に相補的であってよい。本明細書中で用いられる「完全に相補的」は、アンチセンス化合物の核酸塩基各々が、標的核酸の該当する核酸塩基と正確に塩基対合することが可能であることを意味する。例えば、２０核酸塩基アンチセンス化合物は、そのアンチセンス化合物に完全に相補的である標的核酸の該当する２０核酸塩基部分が存在する限りにおいて、４００核酸塩基長さである標的配列に完全に相補的である。完全に相補的は、第一および／または第二核酸の特定部分に関して用いることもできる。例えば、３０核酸塩基アンチセンス化合物の２０核酸塩基部分は、４００核酸塩基長さである標的配列に「完全に相補的」でありうる。３０核酸塩基オリゴヌクレオチドの２０核酸塩基部分は、標的配列が、アンチセンス化合物の２０核酸塩基部分に各々の核酸塩基が相補的である該当する２０核酸塩基部分を有する場合、標的配列に完全に相補的である。同時に、３０核酸塩基アンチセンス化合物全体は、そのアンチセンス化合物の残りの１０核酸塩基も標的配列に相補的であるか否かに依存して、標的配列に完全に相補的であってよいしまたは完全に相補的でなくてよい。
非相補的核酸塩基の場所は、アンチセンス化合物の５’末端または３’末端であってよい。或いは、一つまたは複数の非相補的核酸塩基は、アンチセンス化合物の内部位置であってよい。二つまたはそれを超える非相補的核酸塩基が存在する場合、それらは、隣接して（すなわち、連結して）いてよいし、または隣接していなくてよい。一つの態様において、非相補的核酸塩基は、ギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドのウィングセグメント中に位置する。
特定の態様において、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０核酸塩基長さまたはそれまでであるアンチセンス化合物は、第XI因子核酸またはその特定部分などの標的核酸に相対して、４個以下、３個以下、２個以下または１個以下の非相補的核酸塩基を含む。
特定の態様において、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０核酸塩基長さまたはそれまでであるアンチセンス化合物は、第XI因子核酸またはその特定部分などの標的核酸に相対して、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下または１個以下の非相補的核酸塩基を含む。
本明細書中に与えられるアンチセンス化合物には、更に、標的核酸の一部分に相補的であるものが含まれる。本明細書中で用いられる「部分」は、標的核酸の領域またはセグメント内の規定数の隣接した（すなわち、連結した）核酸塩基を意味する。一「部分」も、アンチセンス化合物の規定数の隣接した核酸塩基を意味することができる。特定の態様において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも８核酸塩基部分に相補的である。特定の態様において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１２核酸塩基部分に相補的である。特定の態様において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１５核酸塩基部分に相補的である。更に考えられるのは、標的セグメントの少なくとも９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれを超える核酸塩基部分、またはこれら値のいずれか二つで規定される範囲に相補的であるアンチセンス化合物である。
同一性
本明細書中に与えられるアンチセンス化合物は、更に、具体的なヌクレオチド配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ、または特定の Isis 番号によって表される化合物またはその部分に一定の同一性パーセントを有してよい。本明細書中で用いられるアンチセンス化合物は、本明細書中に開示の配列が、同じ核酸塩基対合能力を有する場合、それと同一である。例えば、開示されたＤＮＡ配列中でチミジンの代わりにウラシルを含有するＲＮＡは、ウラシルおよびチミジン双方がアデニンと対合するので、そのＤＮＡ配列と同一と考えられるであろう。本明細書中に与えられるアンチセンス化合物に相対して短いおよび長い変型の本明細書中に記載のアンチセンス化合物、更には、同一でない塩基を有する化合物も考えられる。同一でない塩基は、互いに隣接していてよいし、またはアンチセンス化合物中に分散していてよい。アンチセンス化合物の同一性パーセントは、比較されている配列に相対して、同一塩基対合を有する塩基の数によって計算する。
特定の態様において、アンチセンス化合物またはそれらの部分は、本明細書中に開示の一つまたはそれを超えるアンチセンス化合物またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯまたはそれらの一部分に少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である。
修飾
ヌクレオシドは、塩基−糖組み合わせである。ヌクレオシドの核酸塩基（塩基としても知られる）部分は、通常は、複素環式塩基残基である。ヌクレオチドは、ヌクレオシドの糖部分に共有結合で連結したリン酸基を更に包含するヌクレオシドである。ペントフラノシル糖を包含するそれらヌクレオシドについて、リン酸基は、糖の２’、３’または５’ヒドロキシル残基に連結することができる。オリゴヌクレオチドは、隣接するヌクレオシドの互いへの共有結合によって形成されて、直鎖状ポリマー性オリゴヌクレオチドを形成する。オリゴヌクレオチド構造内で、リン酸基は、一般的に、オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合を形成していると云われている。
アンチセンス化合物への修飾は、ヌクレオシド間結合、糖残基または核酸塩基への置換または変化を包含する。修飾されたアンチセンス化合物は、しばしば、例えば、増強された細胞取込み、核酸標的への増強された親和性、ヌクレアーゼ存在下の増加した安定性、または増加した阻害活性などの望まれる性質ゆえに、天然の形より好適である。
化学修飾されたヌクレオシドを用いて、短いまたは切断されたアンチセンスオリゴヌクレオチドのその標的核酸への結合親和性を増加させることもできる。結果として、比較しうる結果は、しばしば、このような化学修飾ヌクレオシドを有するより短いアンチセンス化合物で得ることができる。
修飾ヌクレオシド間結合
ＲＮＡおよびＤＮＡの天然に存在するヌクレオシド間結合は、３’〜５’ホスホジエステル結合である。一つまたはそれを超える修飾された、すなわち、天然に存在しないヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物は、しばしば、例えば、増強された細胞取込み、標的核酸への増強された親和性、およびヌクレアーゼ存在下の増加した安定性などの望まれる性質ゆえに、天然に存在するヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物に優先して選択される。
修飾ヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドは、リン原子を保持するヌクレオシド間結合、更には、リン原子を有していないヌクレオシド間結合を包含する。代表的なリン含有ヌクレオシド間結合には、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホルアミデートおよびホスホロチオエートが含まれるが、これに制限されるわけではない。リン含有結合およびリン不含結合の製造方法は、周知である。
特定の態様において、第XI因子核酸を標的とするアンチセンス化合物は、一つまたはそれを超える修飾ヌクレオシド間結合を含む。特定の態様において、修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。特定の態様において、アンチセンス化合物のヌクレオシド間結合は各々、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
修飾糖残基
本発明のアンチセンス化合物は、糖基が修飾された一つまたはそれを超えるヌクレオシドを含有することもありうる。このような糖修飾ヌクレオシドは、増強されたヌクレアーゼ安定性、増加した結合親和性またはいくつか他の有益な生物学的性質をアンチセンス化合物に与えることができる。特定の態様において、ヌクレオシドは、化学修飾されたリボフラノース環残基を含む。化学修飾リボフラノース環の例には、制限されることなく、置換基（５’および２’置換基を含めた）の付加；二環式核酸（ＢＮＡ）を形成する非 gem 環原子の架橋；リボシル環酸素原子のＳ、Ｎ（Ｒ）またはＣ（Ｒ１）（Ｒ）２（Ｒ＝Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたは保護基）での置換；およびそれらの組み合わせが含まれる。化学修飾された糖の例には、２’−Ｆ−５’−メチル置換ヌクレオシド（他の開示された５’，２’−ビス置換ヌクレオシドについて０８年８月２１日公開のＰＣＴ国際出願ＷＯ２００８／１０１１５７号を参照されたい）またはリボシル環酸素原子の２’位に追加の置換を含むＳでの置換（２００５年６月１６日公開の公開米国特許出願ＵＳ２００５−０１３０９２３号を参照されたい）または或いは、ＢＮＡの５’−置換（ＬＮＡが、例えば、５’−メチル基または５’−ビニル基で置換されている、０７年１１月２２日公開のＰＣＴ国際出願ＷＯ２００７／１３４１８１を参照されたい）が含まれる。
修飾糖残基を有するヌクレオシドの例には、制限されることなく、５’−ビニル、５’−メチル（ＲまたはＳ）、４’−Ｓ、２’−Ｆ、２’−ＯＣＨ３および２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３置換基を含むヌクレオシドが含まれる。２’位にある置換基は、更に、アリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ−アリル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０アルキル、ＯＣＦ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）およびＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）（式中、ＲｍおよびＲｎは、各々独立して、Ｈまたは置換されたまたは未置換のＣ１−Ｃ１０アルキルである）、Ｏ−アルカリルまたはＯ−アラルキル、置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリル、アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリ-アルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断性基、レポーター基、インターカレーター（intercalator）、アンチセンス化合物の薬物動態学的性質を改善する基または薬力学的性質を改善する基、および同様の性質を有する他の置換基より選択することができる。
二環式核酸（ＢＮＡ）の例には、制限されることなく、４’および２’リボシル環原子の間に架橋を含むヌクレオシドが含まれる。特定の態様において、本明細書中に与えられるアンチセンス化合物には、一つまたはそれを超えるＢＮＡヌクレオシドが含まれるが、ここにおいて、架橋は、次の式：４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）；４’−（ＣＨ２）−Ｓ−２’；４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）；４’−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｏ−２’（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６８９２２号を参照されたい）；４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’および４’−Ｃ−Ｈ（ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−２’（２００８年７月１５日発行の米国特許第７，３９９，８４５号を参照されたい）；４’−ＣＨ２−Ｎ（ＯＣＨ３）−２’（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６４５９１号を参照されたい）；４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−２’（２００４年９月２日公開の公開米国特許出願ＵＳ２００４−０１７１５７０号を参照されたい）；４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’（２００８年９月２３日発行の米国特許第７，４２７，６７２号を参照されたい）；４’−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−２’（Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem, 2009, 74, 118-134 を参照されたい）および４’−ＣＨ２−Ｃ−（＝ＣＨ２）−２’（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６６１５４号を参照されたい）の一つを含み；そしてここにおいて、Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたは保護基である。前述のＢＮＡは各々、例えば、α−Ｌ−リボフラノースおよびβ−Ｄ−リボフラノースを含めたいろいろな立体化学的糖立体配置を包含する（ＷＯ９９／１４２２６号として１９９９年３月２５日公開のＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＤＫ９８／００３９３号を参照されたい）。以前には、α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡも、アンチセンス活性を示したアンチセンスオリゴヌクレオチド中に包含された（Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372）。
二環式ヌクレオシドに関する追加の報告は、公表された参考文献に見出されうる（例えば、Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129, 8362-8379；米国特許第７，０５３，２０７号；同第６，２６８，４９０号；同第６，７７０，７４８号；同第６，７９４，４９９号；同第７，０３４，１３３号；および同第６，５２５，１９１号；Elayadi et al., Curr. Opinion Invens. Drugs, 2001, 2, 558-561；Braasch et al., Chem. Biol., 2001, 8, 1-7；および Orum et al., Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243；およびＵ．Ｓ．６，６７０，４６１号；国際出願ＷＯ２００４／１０６３５６号；ＷＯ９４／１４２２６号；ＷＯ２００５／０２１５７０号；米国特許公報ＵＳ２００４−０１７１５７０号；ＵＳ２００７−０２８７８３１号；ＵＳ２００８−００３９６１８号；米国特許第７，３９９，８４５号；米国特許出願第１２／１２９，１５４号；同第６０／９８９，５７４号；同第６１／０２６，９９５号；同第６１／０２６，９９８号；同第６１／０５６，５６４号；同第６１／０８６，２３１号；同第６１／０９７，７８７号；同第６１／０９９-，８４４号；ＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６４５９１号；ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６６１５４号；ＰＣＴ／ＵＳ-２００８／-０６８９２２号；および公開ＰＣＴ国際出願ＷＯ２００７-／-１３４-１８１号）。
特定の態様において、ＢＮＡヌクレオシドの二環式糖残基には、ペントフラノシル糖残基の４’位および２’位の間に少なくとも一つの架橋を有する化合物であって、このような架橋が、独立して、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲａ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒａ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）ｘ−および−Ｎ（Ｒａ）−より独立して選択される１個または２〜４個連結した基を含み；ここにおいて、
ｘは、０、１または２であり；
ｎは、１、２、３または４であり；
ＲａおよびＲｂは、各々独立して、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、置換Ｃ５−Ｃ２０アリール、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ５−Ｃ７脂環式ラジカル、置換Ｃ５−Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｊ１）またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ１）であり；そして
Ｊ１およびＪ２は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、置換Ｃ５−Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキルまたは保護基である化合物が含まれる。
特定の態様において、二環式糖残基の架橋は、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−Ｏ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−または−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−である。特定の態様において、架橋は、４’−ＣＨ２−２’、４’−（ＣＨ２）２−２’、４’−（ＣＨ２）３−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’および４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’−であり、ここにおいて、Ｒは、各々独立して、Ｈ、保護基またはＣ１−Ｃ１２アルキルである。
特定の態様において、二環式ヌクレオシドには、下に示される（Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＢＮＡ、および（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｇ）メチレンチオ（４’−ＣＨ２−Ｓ−２’）ＢＮＡ、（Ｈ）メチレンアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｉ）メチル炭素環式（４’−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−２’）ＢＮＡ、および（Ｊ）プロピレン炭素環式（４’−（ＣＨ２）３−２’）ＢＮＡが含まれるが、これに制限されるわけではない。
Figure 2012524068
式中、Ｂｘは、塩基残基であり、そしてＲは、独立して、Ｈ、保護基またはＣ１−Ｃ１２アルキルである。
特定の態様において、式Ｉ：
Figure 2012524068
［式中、Ｂｘは、複素環式塩基残基であり；
−Ｑａ−Ｑｂ−Ｑｃ−は、−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｃ）−ＣＨ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｃ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒｃ）−、−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−または−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−ＣＨ２であり；
Ｒｃは、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたはアミノ保護基であり；そして
ＴａおよびＴｂは、各々独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、抱合基（conjugate group）、反応性リン基、リン残基、または支持基剤への共有結合である］
を有する二環式ヌクレオシド。
特定の態様において、式II：
Figure 2012524068
（式中、Ｂｘは、複素環式塩基残基であり；
ＴａおよびＴｂは、各々独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、抱合基、反応性リン基、リン残基、または支持基剤への共有結合であり；
Ｚａは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルキニル、アシル、置換アシル、置換アミド、チオールまたは置換チオである）
を有する二環式ヌクレオシド。
一つの態様において、各々の置換基は、独立して、ハロゲン、オキソ、ヒドロキシル、ＯＪｃ、ＮＪｃＪｄ、ＳＪｃ、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）ＪｃおよびＮＪｅＣ（＝Ｘ）ＮＪｃＪｄより独立して選択される置換基で一置換または多置換されていて、ここにおいて、Ｊｃ、ＪｄおよびＪｅは、各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、そしてＸは、ＯまたはＮＪｃである。
特定の態様において、式III：
Figure 2012524068
［式中、Ｂｘは、複素環式塩基残基であり；
ＴａおよびＴｂは、各々独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、抱合基、反応性リン基、リン残基、または支持基剤への共有結合であり；
Ｚｂは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは置換アシル（Ｃ（＝Ｏ）−）である］
を有する二環式ヌクレオシド。
特定の態様において、式IV：
Figure 2012524068
（式中、Ｂｘは、複素環式塩基残基であり；
ＴａおよびＴｂは、各々独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、抱合基、反応性リン基、リン残基、または支持基剤への共有結合であり；
Ｒｄは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルであり；
ｑａ、ｑｂ、ｑｃおよびｑｄは、各々独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシル、置換Ｃ１−Ｃ６アルコキシル、アシル、置換アシル、Ｃ１−Ｃ６アミノアルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ６アミノアルキルである）
を有する二環式ヌクレオシド。
特定の態様において、式Ｖ：
Figure 2012524068
［式中、Ｂｘは、複素環式塩基残基であり；
ＴａおよびＴｂは、各々独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、抱合基、反応性リン基、リン残基、または支持基剤への共有結合であり；
ｑａ、ｑｂ、ｑｅおよびｑｆは、各々独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、置換Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）-ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）-ＮＪｊＪｋまたはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり；または
ｑｅおよびｑｆは一緒に、＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり；
ｑｇおよびｑｈは、各々独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ１２アルキルである］
を有する二環式ヌクレオシド。
メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡモノマーであるアデニン、シトシン、グアニン、５−メチルシトシン、チミンおよびウラシルの合成および製造は、それらのオリゴマー化および核酸認識特性と一緒に記載された（Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630）。ＢＮＡおよびそれらの製造も、ＷＯ９８／３９３５２号およびＷＯ９９／１４２２６号に記載されている。
メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡおよび２’−チオ−ＢＮＡの類似体も製造された（Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222）。核酸ポリメラーゼの基質としてのオリゴデオキシリボヌクレオチド二重らせんを含むロック済み（locked）ヌクレオシド類似体の製造も記載された（Wengel et al., ＷＯ９９／１４２２６号）。更に、新規な立体配座限定（comformationally restricted）高親和性オリゴヌクレオチド類似体である２’−アミノ−ＢＮＡの合成は、当該技術分野において記載された（Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039）。更に、２’−アミノ−ＢＮＡおよび２’−メチルアミノ−ＢＮＡが製造されたが、相補的ＲＮＡおよびＤＮＡ鎖を含むそれらの二重らせんの熱安定性は、以前に報告された。
特定の態様において、式VI：
Figure 2012524068
［式中、Ｂｘは、複素環式塩基残基であり；
ＴａおよびＴｂは、各々独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、抱合基、反応性リン基、リン残基、または支持基剤への共有結合であり；
ｑｉ、ｑｊ、ｑｋおよびｑｌは、各々独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルコキシル、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）-ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）-ＮＪｊＪｋまたはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり；そして
ｑｉおよびｑｊまたはｑｌおよびｑｋは一緒に、＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり、ここにおいて、ｑｇおよびｑｈは、各々独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ１２アルキルである］
を有する二環式ヌクレオシド。
４’−（ＣＨ２）３−２’架橋およびアルケニル類似体架橋４’−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−２’を有する一つの炭素環式二環式ヌクレオシドが記載された（Freier et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443 および Albaek et al., J. Org. Chem., 2006, 71, 7731-7740）。炭素環式二環式ヌクレオシドの合成および製造も、それらのオリゴマー化および生化学研究と一緒に記載された（Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26), 8362-8379）。
特定の態様において、ヌクレオシドは、糖代用物でのリボシル環の置換によって修飾される。このような修飾には、制限されることなく、モルホリノ環、シクロヘキセニル環、シクロヘキシル環、または式：
Figure 2012524068
を有するものなどのテトラヒドロピラニル環などの代用環系（時々、ＤＮＡ類似体と称される）でのリボシル環の置換が含まれる。
アンチセンス化合物中に包含するためのヌクレオシドを修飾するのに用いることができる多数の他のビシクロおよびトリシクロ糖代用環系も、当該技術分野において知られている（例えば、概説論文：Leumann, Christian J., Bioorg. Med. Chem., 2002, 10, 841-854 を参照されたい）。このような環系は、活性を増強するためのいろいろな追加の置換を行うことができる。例えば、式VII：
Figure 2012524068
［式中、式VIIを有するこの少なくとも一つのテトラヒドロピランヌクレオシド類似体各々について独立して、
Ｂｘは、複素環式塩基残基であり；
ＴａおよびＴｂは、各々独立して、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に連結するヌクレオシド間連結基であり、またはＴａおよびＴｂの一方は、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に連結するヌクレオシド間連結基であり、そしてＴａおよびＴｂのもう一方は、Ｈ、ヒドロキシル保護基、連結した抱合基、または５’または３’末端基であり；
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６およびｑ７は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルであり；そしてＲ１およびＲ２は各々、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、置換（subsitituted）または未置換のアルコキシ、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２およびＣＮより選択され、ここにおいて、Ｘは、Ｏ、ＳまたはＮＪ１であり、そしてＪ１、Ｊ２およびＪ３は、各々独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである］
を有する化合物を参照されたい。
特定の態様において、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６およびｑ７が、各々Ｈ（Ｍ）である式VIIを有する修飾ＴＨＰヌクレオシドを提供する。特定の態様において、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６およびｑ７の少なくとも一つは、Ｈ以外である。特定の態様において、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６およびｑ７の少なくとも一つは、メチルである。特定の態様において、Ｒ１およびＲ２の一方が、フルオロ（Ｋ）である式VIIを有するＴＨＰヌクレオシドを提供する。特定の態様において、Ｒ１およびＲ２の一方が、メトキシエトキシである式VIIを有するＴＨＰヌクレオシドを提供する。特定の態様において、Ｒ１はフルオロであり、そしてＲ２はＨである；Ｒ１はＨであり、そしてＲ２はフルオロである；Ｒ１はメトキシであり、そしてＲ２はＨである；そしてＲ１はＨであり、そしてＲ２はメトキシエトキシである。修飾糖の製造方法は、当業者に周知である。
修飾糖残基を有するヌクレオチドの場合、核酸塩基残基（天然の、修飾されたまたはその組み合わせ）は、適当な核酸標的とのハイブリダイゼーションのために維持される。
特定の態様において、第XI因子核酸を標的とするアンチセンス化合物は、修飾糖残基を有する一つまたはそれを超えるヌクレオチドを含む。特定の態様において、修飾糖残基は、２’−ＭＯＥである。特定の態様において、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオチドは、ギャップマーモチーフ中に配置されている。特定の態様において、修飾糖残基は、（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）架橋性基を有する二環式ヌクレオシドである。特定の態様において、（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）修飾ヌクレオチドは、ギャップマーモチーフのウィング中に配置されている。
修飾核酸塩基
核酸塩基（または塩基）修飾または置換は、天然に存在するまたは合成の未修飾核酸塩基とは、構造的に区別可能であるが、機能的に交換可能である。天然の核酸塩基も修飾された核酸塩基も、水素結合に関与することが可能である。このような核酸塩基修飾は、ヌクレアーゼ安定性、結合親和性またはいくつか他の有益な生物学的性質をアンチセンス化合物に与えることができる。修飾核酸塩基には、例えば、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）などの合成および天然の核酸塩基が含まれる。５−メチルシトシン置換を含めた特定の核酸塩基置換は、標的核酸へのアンチセンス化合物の結合親和性を増加させるのに特に有用である。例えば、５−メチルシトシン置換は、核酸二重らせん安定性を０．６〜１．２℃増加させることが分かった（Sanghvi, Y.S., Crooke, S.T. and Lebleu, B., eds., Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278）。
追加の未修飾核酸塩基には、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６−メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２−プロピルおよび他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミンおよび２−チオシトシン、５−ハロウラシルおよびシトシン、５−プロピニル（−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３）ウラシルおよびシトシン、およびピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、６−アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５−ウラシル（プソイドウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシルおよび他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ、具体的には、５−ブロモ、５−トリフルオロメチルおよび他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニンおよび７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノアデニン、８−アザグアニンおよび８−アザアデニン、７−デアザグアニンおよび７−デアザアデニン、および３−デアザグアニンおよび３−デアザアデニンが含まれる。
複素環式塩基残基には、更に、プリンまたはピリミジン塩基が、他の複素環、例えば、７−デアザアデニン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジンおよび２−ピリドンで置き換えられているものが含まれてよい。アンチセンス化合物の結合親和性を増加させるのに特に有用である核酸塩基には、２アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシンを含めた、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジンおよびＮ−２、Ｎ−６およびＯ−６置換プリンが含まれる。
特定の態様において、第XI因子核酸を標的とするアンチセンス化合物は、一つまたはそれを超える修飾核酸塩基を含む。特定の態様において、第XI因子核酸を標的とする広幅ギャップアンチセンスオリゴヌクレオチドは、一つまたはそれを超える修飾核酸塩基を含む。特定の態様において、修飾核酸塩基は、５−メチルシトシンである。特定の態様において、シトシンは各々、５−メチルシトシンである。
医薬組成物を処方するための組成および方法
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、医薬組成物または製剤の製造のために、薬学的に許容しうる活性または不活性な物質と混合することができる。医薬組成物の処方のための組成および方法は、投与経路、疾患の程度または投与される用量が含まれるがこれに制限されるわけではない多数の判定基準に依存する。
アンチセンス化合物を含む医薬組成物は、ヒトを含めた動物への投与時に、生物学的に活性な代謝産物またはその残留物を（直接的にまたは間接的に）与えることが可能であるいずれかの薬学的に許容しうる塩、エステル、またはこのようなエステルの塩、またはいずれか他のオリゴヌクレオチドを包含する。したがって、例えば、開示は、アンチセンス化合物の薬学的に許容しうる塩、プロドラッグ、このようなプロドラッグの薬学的に許容しうる塩、および他の生物学的同等物にも及ぶ。適する薬学的に許容しうる塩には、ナトリウム塩およびカリウム塩が含まれるが、これに制限されるわけではない。
特定の態様において、本発明の一つまたはそれを超える修飾オリゴヌクレオチドは、プロドラッグとして処方することができる。プロドラッグは、in vivo 投与時に活性化合物が再生されるであろうように薬学的に活性な化合物を修飾することによって製造することができる。例えば、プロドラッグは、アンチセンス化合物の一方または双方の末端に、内因性ヌクレアーゼによって体内で切断されて活性アンチセンス化合物を形成させる追加のヌクレオシドの包含を包含することができる。そのプロドラッグは、薬物の代謝安定性または輸送特性を変更する、副作用または毒性を隠す、薬物の香味を改善する、または薬物の他の特性または性質を変更するように設計することができる。特定の態様において、in vivo 投与時に、プロドラッグは、生物学的に、薬学的にまたは治療的に一層活性な形の修飾オリゴヌクレオチドへと化学変換される。特定の態様において、プロドラッグは、それらの該当する活性形よりも投与するのが容易であるので、有用である。例えば、特定の態様において、プロドラッグは、該当する活性形の場合よりも（例えば、経口投与によって）生物学的に利用可能でありうる。特定の態様において、プロドラッグは、該当する活性形と比較して、改善された溶解性を有することがありうる。特定の態様において、プロドラッグは、該当する活性形よりも水溶性が少ない。特定の場合、このようなプロドラッグは、細胞膜を越える優れた透過を有するが、この場合、水への溶解度は、移動度に不利益である。特定の態様において、プロドラッグは、エステルである。特定のこのような態様において、そのエステルは、投与時にカルボン酸へと代謝加水分解される。特定の場合、カルボン酸含有化合物は、該当する活性形である。特定の態様において、プロドラッグは、酸基に結合した短いペプチド（ポリアミノ酸）を含む。特定のこのような態様において、そのペプチドは、投与時に切断されて、該当する活性形を形成する。
特定の態様において、本発明の医薬組成物は、単位剤形（例えば、錠剤、カプセル剤、巨丸剤等）で投与される。特定の態様において、このような医薬組成物は、修飾オリゴヌクレオチドを、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、１００ｍｇ、１０５ｍｇ、１１０ｍｇ、１１５ｍｇ、１２０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１３５ｍｇ、１４０ｍｇ、１４５ｍｇ、１５０ｍｇ、１５５ｍｇ、１６０ｍｇ、１６５ｍｇ、１７０ｍｇ、１７５ｍｇ、１８０ｍｇ、１８５ｍｇ、１９０ｍｇ、１９５ｍｇ、２００ｍｇ、２０５ｍｇ、２１０ｍｇ、２１５ｍｇ、２２０ｍｇ、２２５ｍｇ、２３０ｍｇ、２３５ｍｇ、２４０ｍｇ、２４５ｍｇ、２５０ｍｇ、２５５ｍｇ、２６０ｍｇ、２６５ｍｇ、２７０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２８５ｍｇ、２９０ｍｇ、２９５ｍｇ、３００ｍｇ、３０５ｍｇ、３１０ｍｇ、３１５ｍｇ、３２０ｍｇ、３２５ｍｇ、３３０ｍｇ、３３５ｍｇ、３４０ｍｇ、３４５ｍｇ、３５０ｍｇ、３５５ｍｇ、３６０ｍｇ、３６５ｍｇ、３７０ｍｇ、３７５ｍｇ、３８０ｍｇ、３８５ｍｇ、３９０ｍｇ、３９５ｍｇ、４００ｍｇ、４０５ｍｇ、４１０ｍｇ、４１５ｍｇ、４２０ｍｇ、４２５ｍｇ、４３０ｍｇ、４３５ｍｇ、４４０ｍｇ、４４５ｍｇ、４５０ｍｇ、４５５ｍｇ、４６０ｍｇ、４６５ｍｇ、４７０ｍｇ、４７５ｍｇ、４８０ｍｇ、４８５ｍｇ、４９０ｍｇ、４９５ｍｇ、５００ｍｇ、５０５ｍｇ、５１０ｍｇ、５１５ｍｇ、５２０ｍｇ、５２５ｍｇ、５３０ｍｇ、５３５ｍｇ、５４０ｍｇ、５４５ｍｇ、５５０ｍｇ、５５５ｍｇ、５６０ｍｇ、５６５ｍｇ、５７０ｍｇ、５７５ｍｇ、５８０ｍｇ、５８５ｍｇ、５９０ｍｇ、５９５ｍｇ、６００ｍｇ、６０５ｍｇ、６１０ｍｇ、６１５ｍｇ、６２０ｍｇ、６２５ｍｇ、６３０ｍｇ、６３５ｍｇ、６４０ｍｇ、６４５ｍｇ、６５０ｍｇ、６５５ｍｇ、６６０ｍｇ、６６５ｍｇ、６７０ｍｇ、６７５ｍｇ、６８０ｍｇ、６８５ｍｇ、６９０ｍｇ、６９５ｍｇ、７００ｍｇ、７０５ｍｇ、７１０ｍｇ、７１５ｍｇ、７２０ｍｇ、７２５ｍｇ、７３０ｍｇ、７３５ｍｇ、７４０ｍｇ、７４５ｍｇ、７５０ｍｇ、７５５ｍｇ、７６０ｍｇ、７６５ｍｇ、７７０ｍｇ、７７５ｍｇ、７８０ｍｇ、７８５ｍｇ、７９０ｍｇ、７９５ｍｇおよび８００ｍｇより選択される用量で含む。特定の態様において、本発明の医薬組成物は、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇおよび８００ｍｇより選択される用量の修飾オリゴヌクレオチドを含む。
特定の態様において、医薬組成物は、適する希釈剤、例えば、注射用滅菌水または注射用滅菌生理食塩水で再構成される滅菌凍結乾燥済み修飾オリゴヌクレオチドを含む。再構成される製品は、生理食塩水中に希釈後、皮下注射としてまたは静脈内注入として投与する。凍結乾燥済み薬物製品は、注射用水または注射用生理食塩水中で調製し、調製中に酸または塩基でｐＨ７．０〜９．０に調整後、凍結乾燥された修飾オリゴヌクレオチドから成る。凍結乾燥済み修飾オリゴヌクレオチドは、２５〜８００ｍｇの、または上記の２５〜８００ｍｇのいずれかの用量の修飾オリゴヌクレオチドであってよい。凍結乾燥済み薬物製品は、２ｍＬの Type Ｉ透明ガラスバイアル（硫酸アンモニウム処理済み）中に包装し、ブロモブチルゴムクロージャーで栓をし、そしてアルミニウムＦＬＩＰ−ＯＦＦ．ＲＴＭ．オーバーシールで密封されていてよい。
特定の態様において、本発明の組成物は、更に、医薬組成物中で慣用的に見出される他の補助成分を、それらの当該技術分野で確立された使用レベルで含有してよい。したがって、例えば、組成物は、追加の、適合性の、薬学的に活性な物質、例えば、止痒薬、収斂薬、局所麻酔薬または抗炎症薬などを含有してよいし、または染料、着香剤、保存剤、酸化防止剤、乳白剤、増粘剤および安定化剤などの、本発明の組成物のいろいろな剤形を物理的に処方する場合に有用な追加の物質を含有してよい。このような物質は、加えられる場合、本発明の組成物の成分の生物学活性を過度に妨害すべきではない。製剤は、滅菌することができるし、そして所望ならば、製剤の一つまたは複数のオリゴヌクレオチドと有害に相互作用することがない補助物質、例えば、滑沢剤、保存剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響する塩類、緩衝剤、着色剤、着香剤および／または芳香物質等と混合することができる。
特定の態様において、本発明の医薬組成物は、一つまたはそれを超える修飾オリゴヌクレオチドおよび一つまたはそれを超える賦形剤を含む。特定の態様において、賦形剤は、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミラーゼ、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロースおよびポリビニルピロリドンより選択される。
特定の態様において、本発明の医薬組成物は、混合する、溶解させる、造粒する、糖衣錠製造する、磨砕する、乳化させる、カプセル封入する、閉じ込めるまたは錠剤成形する方法が含まれるがこれに制限されるわけではない既知の技法を用いて製造される。
特定の態様において、第XI因子核酸を標的とする本発明の化合物は、アンチセンス化合物を適する薬学的に許容しうる希釈剤または担体と組み合わせることによって、医薬組成物中で利用することができる。薬学的に許容しうる希釈剤には、水、油、アルコールまたはリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）が含まれるが、これに制限されるわけではない。ＰＢＳは、非経口送達される組成物中で用いるのに適する希釈剤である。したがって、一つの態様において、本明細書中に記載の方法で用いられるのは、第XI因子核酸を標的とする化合物および薬学的に許容しうる希釈剤を含む医薬組成物である。特定の態様において、薬学的に許容しうる希釈剤は、ＰＢＳである。特定の態様において、化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。
特定の態様において、本発明の医薬組成物は、液体（例えば、懸濁液、エリキシルおよび／または溶液）である。特定のこのような態様において、液状医薬組成物は、水、緩衝化生理食塩水、グリコール、油、アルコール、着香剤、保存剤および着色剤が含まれるがこれに制限されるわけではない当該技術分野において知られている成分を用いて製造される。
特定の態様において、本発明の医薬組成物は、固体（例えば、粉末、錠剤および／またはカプセル）である。特定のこのような態様において、一つまたはそれを超えるオリゴヌクレオチドを含む固形医薬組成物は、デンプン、糖、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤および崩壊剤が含まれるがこれに制限されるわけではない当該技術分野において知られている成分を用いて製造される。
特定の態様において、本発明の医薬組成物は、デポ製剤として処方される。特定のこのようなデポ製剤は、典型的に、非デポ製剤よりも長時間作用性である。特定の態様において、このような製剤は、植込み（例えば、皮下または筋肉内）によってまたは筋肉内注射によって投与される。特定の態様において、デポ製剤は、適するポリマー性または疎水性物質（例えば、許容しうる油中のエマルジョン）またはイオン交換樹脂を用いて、または僅かに可溶性の誘導体として、例えば、僅かに可溶性の塩として製造される。
特定の態様において、本発明の医薬組成物は、送達システムを含む。送達システムの例には、リポソームおよびエマルジョンが含まれるが、これに制限されるわけではない。特定の送達システムは、疎水性化合物を含むものを含めた特定の医薬組成物を製造するのに有用である。特定の態様において、ジメチルスルホキシドなどの特定の有機溶媒を用いる。
特定の態様において、本発明の医薬組成物は、本発明の一つまたはそれを超える医薬物質を、特定の組織または細胞タイプへ送達するように設計された一つまたはそれを超える組織特異的送達分子を含む。例えば、特定の態様において、医薬組成物は、組織特異的抗体で被覆されたリポソームを包含する。
特定の態様において、本発明の医薬組成物は、補助溶媒システム（co-solvent system）を含む。特定のこのような補助溶媒システムは、例えば、ベンジルアルコール、無極性界面活性剤、水混和性有機ポリマーおよび水性相を含む。特定の態様において、このような補助溶媒システムは、疎水性化合物に用いられる。このような補助溶媒システムの非制限例は、ＶＰＤ補助溶媒システムであり、それは、３％ｗ／ｖのベンジルアルコール、８％ｗ／ｖの無極性界面活性剤 Polysorbate ８０．ＴＭおよび６５％ｗ／ｖのポリエチレングリコール３００を含む無水エタノールの溶液である。このような補助溶媒システムの比率は、それらの溶解性および毒性を有意に変更することなく、かなり変動することがありうる。更に、補助溶媒成分の同一性は、変動することがありうる。例えば、他の界面活性剤を、Polysorbate ８０．ＴＭ．の代わりに用いることができる；ポリエチレングリコールの分別サイズは、変動することがありうる；他の生体適合性ポリマーは、ポリエチレングリコール、例えば、ポリビニルピロリドンに代わることができる；そして他の糖または多糖は、デキストロースの代わりにすることができる。
特定の態様において、本発明の医薬組成物は、徐放性システムを含む。このような徐放性システムの非制限例は、固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスである。特定の態様において、徐放性システムは、それらの化学的性質に依存して、医薬物質を何時間か、何日間か、何週間かまたは何ヶ月間かにわたって放出することができる。
特定の態様において、本発明の医薬組成物は、経口投与用に製造される。特定のこのような態様において、医薬組成物は、修飾オリゴヌクレオチドを含む一つまたはそれを超える化合物を、一つまたはそれを超える薬学的に許容しうる担体と組み合わせることによって処方される。特定のこのような担体は、医薬組成物を、対象による経口摂取用に、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤等として処方することを可能にする。特定の態様において、経口使用のための医薬組成物は、オリゴヌクレオチドおよび一つまたはそれを超える固形賦形剤を混合することによって得られる。適する賦形剤には、ラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールを含めた糖などの充填剤；セルロース製品、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、バレイショデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよび／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などが含まれるが、これに制限されるわけではない。特定の態様において、このような混合物は、粉砕されてよいし、そして助剤を加えてよい。特定の態様において、医薬組成物は、錠剤または糖衣錠のコアを得るように形成される。特定の態様において、崩壊剤（例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸またはアルギン酸ナトリウムなどのその塩）を加える。
特定の態様において、糖衣錠コアは、コーティングと一緒に与えられる。特定のこのような態様において、濃厚糖溶液を用いることができ、それは、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポルゲル（carbopol gel）、ポリエチレングリコールおよび／または二酸化チタン、ラッカー溶液、および適する有機溶媒または溶媒混合物を含有してもよい。色素または顔料を、錠剤または糖衣錠のコーティングに加えることができる。
特定の態様において、経口投与用の医薬組成物は、ゼラチン製の押し嵌め（push-fit）カプセル剤である。特定のこのような押し嵌めカプセル剤は、本発明の一つまたはそれを超える医薬物質を、一つまたはそれを超えるラクトースなどの充填剤、デンプンなどの結合剤、および／またはタルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤および場合により、安定化剤との混合物中で含む。特定の態様において、経口投与用の医薬組成物は、ゼラチンと、グリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤から作られる軟シールカプセル剤である。特定の軟カプセル剤の場合、本発明の一つまたはそれを超える医薬物質は、脂肪油、流動パラフィンまたは液状ポリエチレングリコールなどの適する液体中に溶解させるまたは懸濁させる。更に、安定化剤を加えることができる。
特定の態様において、医薬組成物は、口腔内投与用に製造される。特定のこのような医薬組成物は、慣用的な方式で処方される錠剤またはロゼンジである。
特定の態様において、医薬組成物は、注射（例えば、静脈内、皮下、筋肉内等）による投与用に製造される。特定のこのような態様において、医薬組成物は、担体を含み、そして水、またはハンクス液、リンガー液または生理食塩水緩衝液（例えば、ＰＢＳ）などの生理学的に適合性の緩衝液などの水溶液中で処方される。特定の態様において、他の成分（例えば、溶解性の助けとなるまたは保存剤として役立つ成分）が含まれる。特定の態様において、注射可能懸濁剤は、適当な液状担体、懸濁化剤等を用いて製造される。注射用の特定の医薬組成物は、単位剤形で、例えば、アンプル中、または複数回用量容器中で与えられる。注射用の特定の医薬組成物は、油状または水性のビヒクル中の懸濁剤、液剤または乳剤であり、そして懸濁化剤、安定化剤および／または分散助剤などの配合剤を含有してよい。注射用の医薬組成物中で用いるのに適する特定の溶媒には、親油性溶媒およびゴマ油などの脂肪油、オレイン酸エチルまたはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、およびリポソームが含まれるが、これに制限されるわけではない。水性注射用懸濁剤は、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトールまたはデキストランなどの、懸濁液の粘度を増加させる物質を含有してよい。場合により、このような懸濁剤は、更に、適する安定化剤、または極めて濃厚な液剤の製造を可能にするように医薬物質の溶解度を増加させる物質を含有してよい。
特定の態様において、医薬組成物は、経粘膜投与用に製造される。特定のこのような態様において、透過する関門に適当な浸透剤を、製剤中に用いる。このような浸透剤は、概して、当該技術分野において知られている。
特定の態様において、医薬組成物は、吸入による投与用に製造される。吸入用の特定のこのような医薬組成物は、加圧パックまたはネブライザー中のエアゾルスプレーの形で製造される。特定のこのような医薬組成物は、噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適するガスを含む。加圧エアゾルを用いる特定の態様において、投薬単位は、一定計量を送達するバルブで決定することができる。特定の態様において、吸入器または吹入器中で用いるためのカプセル剤およびカートリッジを処方することができる。特定のこのような製剤は、本発明の医薬物質と、ラクトースまたはデンプンなどの適する粉末塩基の粉末混合物を含む。
特定の態様において、医薬組成物は、坐剤または停留浣腸などの、直腸投与用に製造される。特定のこのような医薬組成物は、カカオ脂および／または他のグリセリドなどの既知の成分を含む。
特定の態様において、医薬組成物は、局所投与用に製造される。特定のこのような医薬組成物は、軟膏剤またはクリーム剤などの無刺激吸湿性基剤を含む。代表的な適する軟膏基剤には、ワセリン、揮発性シリコーンを加えたワセリン、およびラノリンおよび油中水エマルジョンが含まれるが、これに制限されるわけではない。代表的な適するクリーム基剤には、コールドクリームおよび親水性軟膏が含まれるが、これに制限されるわけではない。
特定の態様において、本発明の医薬組成物は、治療的有効量の修飾オリゴヌクレオチドを含む。特定の態様において、治療的有効量は、疾患の症状を予防する、軽減するまたは改善する、または処置されている対象の生存を延長するのに十分である。
投与経路
特定の態様において、対象へ投与することは、非経口投与を含む。特定の態様において、対象へ投与することは、静脈内投与を含む。特定の態様において、対象へ投与することは、皮下投与を含む。
特定の態様において、投与には、肺投与が含まれる。特定の態様において、肺投与は、エアゾール適用オリゴヌクレオチドの吸入器による対象の肺への送達を含む。エアゾール適用オリゴヌクレオチドの対象による吸入後、オリゴヌクレオチドは、肺胞マクロファージ、好酸球、上皮、血管内皮および細気管支上皮を含めた、正常および炎症双方の肺組織の細胞に分布する。修飾オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物の送達に適する装置には、標準的なネブライザー装置が含まれるが、これに制限されるわけではない。追加の適する装置には、乾燥粉末吸入器または定量吸入器が含まれる。
特定の態様において、医薬組成物は、全身暴露よりもむしろ局所暴露を達成するように投与される。例えば、肺投与は、医薬組成物を肺へ、最小限の全身暴露で送達する。
追加の適する投与経路には、経口、直腸内、経粘膜、腸管、経腸、局部、坐剤、髄腔内、脳室内、腹腔内、鼻腔内、眼内、筋肉内、髄内および腫瘍内が含まれるが、これに制限されるわけではない。
抱合アンチセンス化合物
特定の態様において、本発明の化合物は、得られたアンチセンスオリゴヌクレオチドの活性、細胞分布または細胞取込みを増強する一つまたはそれを超える残基または抱合体（conjugate）に共有結合で連結することができる。典型的な抱合基には、コレステロール残基および脂質残基が含まれる。追加の抱合基には、炭水化物、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸塩、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリンおよび染料が含まれる。
特定の態様において、アンチセンス化合物は、更に修飾されて、概して、アンチセンス化合物の一方または双方の末端に結合して、例えば、ヌクレアーゼ安定性などの性質を増強する一つまたはそれを超える安定性基を有することができる。安定性基に包含されるのは、キャップ構造である。これら末端修飾は、末端核酸を有するアンチセンス化合物を、エキソヌクレアーゼ分解から保護し、しかも細胞内の送達および／または局在化に役立つことができる。そのキャップは、５’末端（５’キャップ）または３’末端（３’キャップ）に存在することができるし、または双方の末端上に存在することができる。キャップ構造は、当該技術分野において周知であり、それには、例えば、逆方向デオキシ脱塩基キャップが含まれる。アンチセンス化合物の一方または双方の末端をキャップして、ヌクレアーゼ安定性を与えるのに用いることができる追加の３’および５’安定性基には、２００３年１月１６日公開のＷＯ０３／００４６０２号に開示されたものが含まれる。
細胞培養およびアンチセンス化合物処理
第XI因子核酸のレベル、活性または発現へのアンチセンス化合物の作用は、いろいろな細胞タイプにおいて in vitro で調べることができる。このような分析に用いられる細胞タイプは、販売業者（例えば、American Type Culture Collection, Manassus, VA; Zen-Bio, Inc., Research Triangle Park, NC; Clonetics Corporation, Walkersville, MD）から入手可能であり、そして細胞は、販売業者の取扱説明書にしたがって、商業的に入手可能な試薬（例えば、Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA）を用いて培養する。典型的な細胞タイプには、ＨｅｐＧ２細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞および一次肝細胞が含まれるが、これに制限されるわけではない。
アンチセンスオリゴヌクレオチドの in vitro 試験
本明細書中に記載されるのは、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの細胞の処理方法であり、それは、他のアンチセンス化合物での処理用に適当に修飾することができる。
概して、細胞は、それら細胞が、培養中に約６０〜８０％密集に達した時点で、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理する。
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞中に導入するのに一般的に用いられる一つの試薬には、陽イオン脂質トランスフェクション試薬ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）（Invitrogen, Carlsbad, CA）が含まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）１（Invitrogen, Carlsbad, CA）中でＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）と混合して、アンチセンスオリゴヌクレオチドの所望の最終濃度、および典型的に、１００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドにつき２〜１２ｕｇ／ｍＬであるＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）濃度を達成する。
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞中に導入するのに用いられる別の試薬には、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）（Invitrogen, Carlsbad, CA）が含まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）１低血清基剤（Invitrogen, Carlsbad, CA）中でＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）と混合して、アンチセンスオリゴヌクレオチドの所望の濃度、および典型的に、１００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドにつき２〜１２ｕｇ／ｍＬであるＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）濃度を達成する。
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞中に導入するのに用いられる別の技法には、エレクトロポレーションが含まれる。
細胞は、常套法により、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理する。細胞は、典型的に、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理後１６〜２４時間に採取するが、その時点で、標的核酸のＲＮＡまたはタンパク質レベルを、当該技術分野において知られている方法および本明細書中に記載の方法によって測定する。概して、処理を、多数反復試験で行う場合、データは、反復処理の平均として示される。
用いられるアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度は、細胞系毎に異なる。特定の細胞系の最適アンチセンスオリゴヌクレオチド濃度を決定する方法は、当該技術分野において周知である。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）でトランスフェクションする場合、典型的に、１ｎＭ〜３００ｎＭの濃度で用いられる。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、エレクトロポレーションを用いてトランスフェクションする場合、６２５〜２０，０００ｎＭのより高い濃度で用いられる。
ＲＮＡ単離
ＲＮＡ分析は、全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡについて行うことができる。ＲＮＡ単離方法は、当該技術分野において周知である。ＲＮＡは、当該技術分野において周知の方法を用いて、例えば、ＴＲＩＺＯＬ（登録商標）Reagent（Invitrogen, Carlsbad, CA）を用いて、製造者の推奨プロトコルにしたがって調製する。
標的のレベルまたは発現の阻害分析
第XI因子核酸のレベルまたは発現の阻害は、当該技術分野において知られているいろいろな方法で検定することができる。例えば、標的核酸レベルは、例えば、ノーザンブロット分析、競合的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）または定量リアルタイムＰＣＲによって定量することができる。ＲＮＡ分析は、全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡについて行うことができる。ＲＮＡ単離方法は、当該技術分野において周知である。ノーザンブロット分析も、当該技術分野において常套である。定量リアルタイムＰＣＲは、ＰＥ−Applied Biosystems, Foster City, CA より入手可能で且つ製造者の取扱説明書にしたがって用いられる、商業的に入手可能なＡＢＩ ＰＲＩＳＭ（登録商標）７６００、７７００または７９００ Sequence Detection System を用いて、好都合に行うことができる。
標的ＲＮＡレベルの定量リアルタイムＰＣＲ分析
標的ＲＮＡレベルの定量は、定量リアルタイムＰＣＲにより、ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ（登録商標）７６００、７７００または７９００ Sequence Detection System（ＰＥ−Applied Biosystems, Foster City, CA）を用いて、製造者の取扱説明書にしたがって行うことができる。定量リアルタイムＰＣＲの方法は、当該技術分野において周知である。
リアルタイムＰＣＲの前に、単離されたＲＮＡを、逆転写酵素（ＲＴ）反応に供するが、それは、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を生じた後、それを、リアルタイムＰＣＲ増幅の基質として用いる。ＲＴ反応およびリアルタイムＰＣＲ反応は、同じ試料ウェル中で逐次的に行われる。ＲＴ試薬およびリアルタイムＰＣＲ試薬は、Invitrogen（Carlsbad, CA）より入手する。ＲＴ反応、リアルタイムＰＣＲ反応は、当業者に周知の方法によって行われる。
リアルタイムＰＣＲによって得られる遺伝子（またはＲＮＡ）標的量は、シクロフィリンＡまたはＧＡＰＤＨなどの、発現が一定している遺伝子の発現レベルを用いてか、または全ＲＮＡをＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）（Invitrogen, Inc. Carlsbad, CA）を用いて定量することによって規格化される。シクロフィリンＡまたはＧＡＰＤＨ発現は、リアルタイムＰＣＲにより、標的と同時に、多重にまたは別々に行うことによって定量する。全ＲＮＡは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Invitrogen, Carlsbad, CA）を用いて定量する。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によるＲＮＡ定量化の方法は、Jones, L.J., et al,（Analytical Biochemistry, 1998, 265, 368-374）に示されている。ＣＹＴＯＦＬＵＯＲ（登録商標）４０００計測器（ＰＥ Applied Biosystems）は、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）蛍光を測定するのに用いられる。
プローブおよびプライマーは、第XI因子核酸にハイブリッド形成するように設計される。リアルタイムＰＣＲプローブおよびプライマーを設計する方法は、当該技術分野において周知であり、それには、ＰＲＩＭＥＲ ＥＸＰＲＥＳＳ（登録商標）Software（Applied Biosystems, Foster City, CA）などのソフトウェアの使用が含まれてよい。
ＰＣＲプローブは、５’末端に共有結合で連結したＪＯＥまたはＦＡＭ、および３’末端に共有結合で連結したＴＡＭＲＡまたはＭＧＢを有するが、この場合、ＪＯＥまたはＦＡＭは、蛍光レポーター染料であり、そしてＴＡＭＲＡまたはＭＧＢは、消光剤染料である。いくつかの細胞タイプにおいて、異なった種からの配列へと設計されたプライマーおよびプローブは、発現を測定するのに用いられる。例えば、ヒトＧＡＰＤＨプライマー・プローブセットは、サル由来の細胞および細胞系におけるＧＡＰＤＨ発現を測定するのに用いることができる。
タンパク質レベルの分析
第XI因子核酸のアンチセンス阻害は、第XI因子タンパク質レベルを測定することによって評価することができる。第XI因子のタンパク質レベルは、免疫沈降、ウェスタンブロット分析（免疫ブロット法）、固相酵素免疫検定法（enzyme-linked immunosorbent assay）（ＥＬＩＳＡ）、定量タンパク質検定、タンパク質活性検定（例えば、カスパーゼ活性検定）、免疫組織化学、免疫細胞化学または蛍光活性化セルソーティング（fluorescence-activated cell sorting）（ＦＡＣＳ）などの、当該技術分野において周知のいろいろな方法で評価するまたは定量することができる。標的へ向けられる抗体は、抗体のＭＳＲＳカタログ（Aerie Corporation, Birmingham, MI）などのいろいろな源から識別し且つ入手することができるし、または当該技術分野において周知の慣用的な単クローン性または多クローン性抗体生成法によって製造することができる。ヒトおよびラット第XI因子の検出に有用な抗体は、商業的に入手可能である。
アンチセンス化合物の in vivo 試験
アンチセンス化合物、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドを、動物において調べて、第XI因子の発現を阻害する且つ長期ａＰＴＴ、標準ＰＴに関連した長期ａＰＴＴ時間、低下した量の血小板因子４（ＰＦ−４）、減少した喘息誘発、減少した関節炎形成、減少した結腸炎形成、喘息形成、関節炎形成について増加した時間、および結腸炎形成について増加した時間などの表現型変化を生じるそれらの能力を評価する。試験は、正常な動物においてまたは実験的疾患モデルにおいて行うことができる。動物への投与用に、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、リン酸緩衝化生理食塩水などの薬学的に許容しうる希釈剤中で処方する。投与には、腹腔内、静脈内および皮下などの非経口投与経路が含まれる。一つの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドで一定期間処置後、ＲＮＡを、肝組織から単離し、そして第XI因子核酸発現の変化を測定する。第XI因子タンパク質レベルの変化は、クロット時間（clot times）、例えば、ＰＴおよびａＰＴＴを、被処置動物からの血漿を用いて決定することによって、または炎症、炎症性状態（例えば、喘息、関節炎、結腸炎）、または被験動物中に存在する炎症マーカー（炎症性サイトカイン）のレベルを測定することによって測定することができる。
特定の適応症
特定の態様において、本発明は、個体を処置する方法であって、一つまたはそれを超える本発明の医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。特定の態様において、その個体は、炎症性疾患、障害または状態を有する、またはそのリスクがある。特定の態様において、その個体は、上記のような炎症性疾患、障害または状態のリスクがある。特定の態様において、本発明は、個体の第XI因子発現を予防的に減少させる方法を提供する。特定の態様は、処置を必要としている個体を、治療的有効量の第XI因子核酸を標的とするアンチセンス化合物を個体に投与することによって処置することを包含する。
特定の態様において、治療的有効量の第XI因子核酸を標的とするアンチセンス化合物の投与は、個体の血清中の第XI因子レベルを監視して、アンチセンス化合物の投与への個体の応答を決定することを伴う。アンチセンス化合物の投与への個体の応答は、治療的介入の量および持続時間を医師が決定するのに用いられる。
特定の態様において、第XI因子核酸を標的とするアンチセンス化合物の投与は、第XI因子発現の少なくとも１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％、またはこれら値のいずれか二つで規定される範囲の減少を引き起こす。特定の態様において、第XI因子核酸を標的とするアンチセンス化合物の投与は、標準的な試験、例えば、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）試験、プロトロンビン時間（ＰＴ）試験、トロンビン時間（ＴＣＴ）、出血時間、またはＤダイマーがあるがこれに制限されるわけではない試験によって測定される血液凝固の尺度の変化を引き起こす。或いは、炎症（例えば、喘息、関節炎または結腸炎レベル）の変化は、炎症（例えば、誘発された喘息、関節炎または結腸炎）を有する動物モデルにおいて決定することができる。特定の態様において、第XI因子アンチセンス化合物の投与は、その尺度を少なくとも１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％、またはこれら値のいずれか二つで規定される範囲増加させる。いくつかの態様において、第XI因子アンチセンス化合物の投与は、その尺度を少なくとも１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％、またはこれら値のいずれか二つで規定される範囲低下させる。
特定の態様において、第XI因子を標的とするアンチセンス化合物を含む医薬組成物は、炎症性疾患、障害または状態に苦しむまたはそれに感受性の患者を処置するための薬剤の製造に用いられる。
特定の組み合わせ療法
特定の態様において、一つまたはそれを超える本発明の医薬組成物は、一つまたはそれを超える他の医薬物質と共投与する。特定の態様において、このような一つまたはそれを超える他の医薬物質は、一つまたはそれを超える本発明の医薬組成物と同じ疾患、障害または状態を処置するように設計される。特定の態様において、このような一つまたはそれを超える他の医薬物質は、一つまたはそれを超える本発明の医薬組成物とは異なった疾患、障害または状態を処置するように設計される。特定の態様において、このような一つまたはそれを超える他の医薬物質は、一つまたはそれを超える本発明の医薬組成物の望ましくない副作用を処置するように設計される。特定の態様において、一つまたはそれを超える本発明の医薬組成物は、別の医薬物質と共投与されて、その他の医薬物質の望ましくない作用を処置する。特定の態様において、一つまたはそれを超える本発明の医薬組成物は、別の医薬物質と共投与されて、組み合わせ作用を生じる。特定の態様において、一つまたはそれを超える本発明の医薬組成物は、別の医薬物質と共投与されて、共力作用を生じる。
特定の態様において、一つまたはそれを超える本発明の医薬組成物および一つまたはそれを超える他の医薬物質は、同時に投与する。特定の態様において、一つまたはそれを超える本発明の医薬組成物および一つまたはそれを超える他の医薬物質は、異なった時点で投与する。特定の態様において、一つまたはそれを超える本発明の医薬組成物および一つまたはそれを超える他の医薬物質は、単一製剤中で一緒に製造する。特定の態様において、一つまたはそれを超える本発明の医薬組成物および一つまたはそれを超える他の医薬物質は、別々に製造する。
特定の態様において、本発明の医薬組成物と共投与することができる医薬物質には、上記のようなＮＳＡＩＤＳおよび／または疾患修飾性薬が含まれる。特定の態様において、疾患修飾性薬は、本発明の医薬組成物の投与前に投与する。特定の態様において、疾患修飾性薬は、本発明の医薬組成物の投与後に投与する。特定の態様において、疾患修飾性薬は、本発明の医薬組成物と同時に投与する。特定の態様において、共投与される疾患修飾性薬の用量は、その疾患修飾性薬が単独投与された場合に投与されると考えられる用量と同じである。特定の態様において、共投与される疾患修飾性薬の用量は、その疾患修飾性薬が単独投与された場合に投与されると考えられる用量より少ない。特定の態様において、共投与される疾患修飾性薬の用量は、その疾患修飾性薬が単独投与された場合に投与されると考えられる用量より多い。
特定の態様において、第二化合物の共投与は、第一化合物の作用を増強するので、それら化合物の共投与は、第一化合物を単独投与する作用より大きい作用を引き起こす。他の態様において、共投与は、それら化合物の単独投与時の作用の相加である作用を引き起こす。特定の態様において、共投与は、それら化合物の単独投与時の作用の相加より大きい作用を引き起こす。特定の態様において、第一化合物は、アンチセンス化合物である。特定の態様において、第二化合物は、アンチセンス化合物である。
特定の態様において、解毒薬は、第XI因子特異的阻害剤の投与後いつでも投与する。特定の態様において、解毒薬は、第XI因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与後いつでも投与する。特定の態様において、解毒薬は、第XI因子に標的指向するアンチセンス化合物の投与後何分か、何時間か、何日か、何週間かまたは何ヶ月かに投与する。特定の態様において、解毒薬は、第XI因子に標的指向するアンチセンス化合物に相補的（例えば、センス鎖）である。特定の態様において、解毒薬は、第７因子、第７ａ因子、第XI因子または第XIａ因子タンパク質である。特定の態様において、第７因子、第７ａ因子、第XI因子または第XIａ因子タンパク質は、ヒト第７因子、ヒト第７ａ因子、ヒト第XI因子またはヒト第XIａ因子タンパク質である。特定の態様において、第７因子タンパク質は、NovoSeven である。
発明の利点
本明細書中に最初に提供されるのは、炎症反応を処置する、予防するおよび／または改善することができる、第XI因子のモジュレーションのための方法および組成物である。具体的な態様において、提供されるのは、関節炎または結腸炎などの炎症性状態を改善するための第XI因子オリゴヌクレオチド（第XI因子タンパク質をエンコードしている核酸に標的指向するオリゴヌクレオチド）である。
非制限開示および援用
本明細書中に記載の特定の化合物、組成物および方法を、特定の態様によって具体的に記載してきたが、次の実施例は、単に、本明細書中に記載の化合物を詳しく説明するのに役立ち、それらを制限するためのものではない。本出願に引用される参考文献は各々、本明細書中にそのまま援用される。
実施例１：ＨｅｐＧ２細胞中におけるヒト第XI因子のアンチセンス阻害
第XI因子核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを、第XI因子ｍＲＮＡへのそれらの作用について in vitro で調べた。１０，０００個／ウェルの細胞密度で培養されたＨｅｐＧ２細胞を、リポフェクチン試薬を用いて７５ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクションした。約２４時間の処理時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そして第XI因子ｍＲＮＡレベルを、定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。第XI因子ｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定される全ＲＮＡ含量によって調整した。結果は、未処理対照細胞に相対する第XI因子の阻害パーセントとして示す。
表１および表２のキメラのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計した。それらギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々５ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。５’ウィングセグメント中の各々のヌクレオチドおよび３’ウィングセグメント中の各々のヌクレオチドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。各々のギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。各々のギャップマー中のシチジン残基は全て、５−メチルシチジンである。「標的出発部位」は、ギャップマーに標的とされている最も５’のヌクレオチドを示す。「標的停止部位」は、ギャップマーに標的とされている最も３’のヌクレオチドを示す。表１に挙げられているギャップマーは各々、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０００１２８．３）を標的とし、そして表２に挙げられているギャップマーは各々、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２（１９５９８０００〜１９６２４０００を切断されたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０２２７９２．１７）を標的としている。
Figure 2012524068
Figure 2012524068
Figure 2012524068
Figure 2012524068
実施例２：ＨｅｐＧ２細胞中におけるヒト第XI因子の用量依存性アンチセンス阻害
８４パーセントまたはそれより大を超えるヒト第XI因子の in vitro 阻害を示す１２種類のギャップマーを、ＨｅｐＧ２細胞中においていろいろな用量で調べた。細胞は、１０，０００個／ウェルの細胞密度で平板培養し、そしてリポフェクチン試薬を用いて、表３に明記される９．３７５ｎＭ、１８．７５ｎＭ、３７．５ｎＭ、７５ｎＭおよび１５０ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクションした。約１６時間の処理時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そして第XI因子ｍＲＮＡレベルを、定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒト第XI因子プライマー・プローブセットＲＴＳ２９６６（正配列：ＣＡＧＣＣＴＧＧＡＧＣＡＴＣＧＴＡＡＣＡ、本明細書中にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３として包含される；逆配列：ＴＴＴＡＴＣＧＡＧＣＴＴＣＧＴＴＡＴＴＣＴＧＧＴＴ、本明細書中にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４として包含される；プローブ配列：ＴＴＧＴＣＴＡＣＴＧＡＡＧＣＡＣＡＣＣＣＡＡＡＣＡＧＧＧＡＸ、ここにおいて、Ｘは、発蛍光団であり、本明細書中にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５として包含される）を用いて、ｍＲＮＡレベルを測定した。第XI因子ｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定される全ＲＮＡ含量によって調整した。結果は、未処理対照細胞に相対する第XI因子の阻害パーセントとして示す。表３に示されるように、第XI因子ｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理された細胞において、用量依存方式で減少した。
Figure 2012524068
実施例３：ＨｅｐＧ２細胞中における、ミクロウォーク（microwalk）で設計されたオリゴヌクレオチドによるヒト第XI因子のアンチセンス阻害
更に別のギャップマーを、表３に示されたギャップマーに基づいて設計した。これらギャップマーは、表３による元のギャップマーの上流および下流に僅かにシフトした（すなわち、「ミクロウォーク」）ギャップマーを作ることによって設計した。ギャップマーは、更に、いろいろなモチーフ、例えば、５−１０−５ＭＯＥ、３−１４−３ＭＯＥおよび２−１３−５ＭＯＥで作成した。これらギャップマーを、in vitro で調べた。１０，０００個／ウェルの細胞密度で培養されたＨｅｐＧ２細胞を、リポフェクチン試薬を用いて７５ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクションした。約２４時間の処理時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そして第XI因子ｍＲＮＡレベルを、定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。第XI因子ｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定される全ＲＮＡ含量によって調整した。結果は、未処理対照細胞に相対する第XI因子の阻害パーセントとして示す。
次に、ミクロウォークで設計されたギャップマーについての in vitro 阻害データを、表４、表５、表６、表７および表８に示されるように、表３によるギャップマーについての in vitro 阻害データと比較した。オリゴヌクレオチドは、それらが位置するヒトｍＲＮＡ上の領域（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０００１２８．３）にしたがって表示している。
表４のキメラのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥ、３−１４−３ＭＯＥおよび２−１３−５ＭＯＥギャップマーとして設計した。表４に最初に挙げられているギャップマーは、残りのギャップマーがミクロウォークによって設計された元のギャップマーであり（表３を参照されたい）、星印で示されている。５−１０−５ギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々５ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。３−１４−３ギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１４個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々３ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。２−１３−５ギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１３個の２’−デオキシヌクレオチドから構成されている。その中心ギャップは、５’末端上に２ヌクレオチドを含むウィング、そして３’末端上に５ヌクレオチドを含むウィングと隣接している。各々のモチーフ（５−１０−５、３−１４−３および２−１３−５）について、５’ウィングセグメント中の各々のヌクレオチドおよび３’ウィングセグメント中の各々のヌクレオチドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。各々のギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。各々のギャップマー中のシチジン残基は全て、５−メチルシチジンである。「標的出発部位」は、ギャップマーに標的とされている最も５’のヌクレオチドを示す。「標的停止部位」は、ギャップマーに標的とされている最も３’のヌクレオチドを示す。表４に挙げられているギャップマーは各々、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０００１２８．３）を標的としている。
表４に示されるように、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の標的出発部位６５６で始まり且つ標的停止部位６７５で終わる標的領域（すなわち、核酸塩基６５６〜６７５）を標的とする５−１０−５ＭＯＥギャップマー、３−１４−３ＭＯＥギャップマーおよび２−１３−５ＭＯＥギャップマーの全てが、少なくとも２０％の第XI因子ｍＲＮＡ阻害を示す。大部分のギャップマーは、少なくとも６０％の阻害を示す。ＩＳＩＳ番号：４１６８０６、４１６８０９、４１６８１１、４１６８１４、４１６８２１、４１６８２５、４１６８２６、４１６８２７、４１６８２８、４１６８６８、４１６８６９、４１６８７８、４１６８７９、４１６８８１、４１６８８３、４１６８９０、４１６８９１、４１６８９２、４１６８９３、４１６８９４、４１６８９５、４１６８９６、４１６９４５、４１６９４６、４１６９６９、４１６９７０、４１６９７１、４１６９７２、４１６９７３、４１２２０３、４１３４６７、４１３４６８および４１３４６９を含めたいくつかのギャップマーは、少なくとも８０％の阻害を示す。次のＩＳＩＳ番号：４１２２０３、４１３４６７、４１６８２５、４１６８２６、４１６８２７、４１６８６８、４１６８７８、４１６８７９、４１６８９２、４１６８９３、４１６８９５、４１６８９６、４１６９４５、４１６９７２および４１６９７３は、少なくとも９０％の阻害を示した。次のＩＳＩＳ番号：４１６８７８、４１６８９２、４１６８９５および４１６８９６は、少なくとも９５％の阻害を示した。
Figure 2012524068
Figure 2012524068
Figure 2012524068
表５のキメラのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥ、３−１４−３ＭＯＥおよび２−１３−５ＭＯＥギャップマーとして設計した。表５に最初に挙げられているギャップマーは、残りのギャップマーが、ミクロウォークによって設計された元のギャップマーであり（表３を参照されたい）、星印で示されている。５−１０−５ギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々５ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。３−１４−３ギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１４個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々３ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。２−１３−５ギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１３個の２’−デオキシヌクレオチドから構成されている。その中心ギャップは、５’末端上に２ヌクレオチドを含むウィング、そして３’末端上に５ヌクレオチドを含むウィングと隣接している。各々のモチーフ（５−１０−５、３−１４−３および２−１３−５）について、５’ウィングセグメント中の各々のヌクレオチドおよび３’ウィングセグメント中の各々のヌクレオチドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。各々のギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。各々のギャップマー中のシチジン残基は全て、５−メチルシチジンである。「標的出発部位」は、ギャップマーに標的とされている最も５’のヌクレオチドを示す。「標的停止部位」は、ギャップマーに標的とされている最も３’のヌクレオチドを示す。表５に挙げられているギャップマーは各々、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０００１２８．３）を標的としている。
表５に示されるように、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の標的出発部位７３８で始まり且つ標的停止部位７６２で終わる標的領域（すなわち、核酸塩基７３８〜７６２）を標的とする５−１０−５ＭＯＥギャップマー、３−１４−３ＭＯＥギャップマーおよび２−１３−５ＭＯＥギャップマーの全てが、少なくとも４５％の第XI因子ｍＲＮＡ阻害を示す。大部分のギャップマーは、少なくとも６０％の阻害を示す。ＩＳＩＳ番号：４１２２０６、４１６８３０、４１６８３１、４１６８９８、４１６８９９、４１６９００、４１６９０３、４１６９７５、４１６９７６、４１６９７７および４１６９８０を含めたいくつかのギャップマーは、少なくとも８０％の阻害を示す。次のＩＳＩＳ番号：４１２２０６、４１６８３１および４１６９００は、少なくとも９０％の阻害を示した。
Figure 2012524068
表６のキメラのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥ、３−１４−３ＭＯＥおよび２−１３−５ＭＯＥギャップマーとして設計した。表６に最初に挙げられているギャップマーは、残りのギャップマーが、ミクロウォークによって設計された元のギャップマーであり（表３を参照されたい）、星印で示されている。５−１０−５ギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々５ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。３−１４−３ギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１４個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々３ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。２−１３−５ギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１３個の２’−デオキシヌクレオチドから構成されている。その中心ギャップは、５’末端上に２ヌクレオチドを含むウィング、そして３’末端上に５ヌクレオチドを含むウィングと隣接している。各々のモチーフ（５−１０−５、３−１４−３および２−１３−５）について、５’ウィングセグメント中の各々のヌクレオチドおよび３’ウィングセグメント中の各々のヌクレオチドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。各々のギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。各々のギャップマー中のシチジン残基は全て、５−メチルシチジンである。「標的出発部位」は、ギャップマーに標的とされている最も５’のヌクレオチドを示す。「標的停止部位」は、ギャップマーに標的とされている最も３’のヌクレオチドを示す。表６に挙げられているギャップマーは各々、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０００１２８．３）を標的としている。
表６に示されるように、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の標的出発部位１０１８で始まり且つ標的停止部位１０４２で終わる標的領域（すなわち、核酸塩基１０１８〜１０４２）を標的とする５−１０−５ＭＯＥギャップマー、３−１４−３ＭＯＥギャップマーおよび２−１３−５ＭＯＥギャップマーの全てが、少なくとも８０％の第XI因子ｍＲＮＡ阻害を示す。次のＩＳＩＳ番号：４１３４７４、４１６８３７、４１６８３８、４１６９０４、４１６９０７および４１６９０８は、少なくとも９０％の阻害を示した。
Figure 2012524068
表７のキメラのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥ、３−１４−３ＭＯＥおよび２−１３−５ＭＯＥギャップマーとして設計した。表７に最初に挙げられているギャップマーは、残りのギャップマーがミクロウォークによって設計された元のギャップマーであり（表３を参照されたい）、星印で示されている。５−１０−５ギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々５ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。３−１４−３ギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１４個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々３ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。２−１３−５ギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１３個の２’−デオキシヌクレオチドから構成されている。その中心ギャップは、５’末端上に２ヌクレオチドを含むウィング、そして３’末端上に５ヌクレオチドを含むウィングと隣接している。各々のモチーフ（５−１０−５、３−１４−３および２−１３−５）について、５’ウィングセグメント中の各々のヌクレオチドおよび３’ウィングセグメント中の各々のヌクレオチドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。各々のギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。各々のギャップマー中のシチジン残基は全て、５−メチルシチジンである。「標的出発部位」は、ギャップマーに標的とされている最も５’のヌクレオチドを示す。「標的停止部位」は、ギャップマーに標的とされている最も３’のヌクレオチドを示す。表７に挙げられているギャップマーは各々、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０００１２８．３）を標的としている。
表７に示されるように、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の標的出発部位１０６２で始まり且つ標的停止部位１０９１で終わる標的領域（すなわち、核酸塩基１０６２〜１０９１）を標的とする５−１０−５ＭＯＥギャップマー、３−１４−３ＭＯＥギャップマーおよび２−１３−５ＭＯＥギャップマーの全てが、少なくとも２０％の第XI因子ｍＲＮＡ阻害を示す。４１２２１５、４１３４７６、４１３４７６、４１６８３９、４１６８４０、４１６８４１、４１６８４２、４１６８４３、４１６８４４、４１６８４５、４１６８４６、４１６８４７、４１６９０９、４１６９１０、４１６９１１、４１６９１２、４１６９１３、４１６９１４、４１６９１５、４１６９１６、４１６９１７、４１６９１８、４１６９８６、４１６９８７、４１６９８８、４１６９８９、４１６９９０、４１６９９１、４１６９９２、４１６９９３、４１６９９４、４１６９９５を含めた大部分のギャップマーは、少なくとも５０％の阻害を示す。次のＩＳＩＳ番号：４１２２１５、４１３４７６、４１３４７６、４１６８３９、４１６８４０、４１６８４１、４１６８４２、４１６８４３、４１６８４４、４１６８４５、４１６９１０、４１６９１１、４１６９１２、４１６９１３、４１６９１４、４１６９１６、４１６９１７、４１６９８６、４１６９８７、４１６９８９、４１６９９１、４１６９９２、４１６９９３および４１６９９４は、少なくとも８０％の阻害を示した。次のＩＳＩＳ番号：４１３４７６、４１３４７６、４１６８４２、４１６８４４、４１６９１０、４１６９１１、４１６９１２、４１６９１３、４１６９１６、４１６９１７および４１６９９３は、少なくとも９０％の阻害を示した。
Figure 2012524068
表８のキメラのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥ、３−１４−３ＭＯＥおよび２−１３−５ＭＯＥギャップマーとして設計した。表８に最初に挙げられているギャップマーは、残りのギャップマーがミクロウォークによって設計された元のギャップマーであり（表３を参照されたい）、星印で示されている。５−１０−５ギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々５ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。３−１４−３ギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１４個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々３ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。２−１３−５ギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１３個の２’−デオキシヌクレオチドから構成されている。その中心ギャップは、５’末端上に２ヌクレオチドを含むウィング、そして３’末端上に５ヌクレオチドを含むウィングと隣接している。各々のモチーフ（５−１０−５、３−１４−３および２−１３−５）について、５’ウィングセグメント中の各々のヌクレオチドおよび３’ウィングセグメント中の各々のヌクレオチドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。各々のギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。各々のギャップマー中のシチジン残基は全て、５−メチルシチジンである。「標的出発部位」は、ギャップマーに標的とされている最も５’のヌクレオチドを示す。「標的停止部位」は、ギャップマーに標的とされている最も３’のヌクレオチドを示す。表８に挙げられているギャップマーは各々、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０００１２８．３）を標的としている。
表８に示されるように、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の標的出発部位１２７５で始まり且つ標的停止部位１３１８で終わる標的領域（すなわち、核酸塩基１２７５〜１３１８）を標的とする５−１０−５ＭＯＥギャップマー、３−１４−３ＭＯＥギャップマーおよび２−１３−５ＭＯＥギャップマーの全てが、少なくとも７０％の第XI因子ｍＲＮＡ阻害を示す。４１２２２３、４１２２２４、４１２２２５、４１３４８２、４１６８４８、４１６８４９、４１６８５０、４１６８５１、４１６８５２、４１６８５３、４１６８５４、４１６８５５、４１６８５６、４１６８５７、４１６８５８、４１６８５９、４１６８６０、４１６８６１、４１６８６２、４１６８６３、４１６８６４、４１６８６５、４１６８６６、４１６８６７、４１６９２０、４１６９２１、４１６９２２、４１６９２３、４１６９２４、４１６９２５、４１６９２６、４１６９２７、４１６９２８、４１６９２９、４１６９３０、４１６９３１、４１６９３２、４１６９３３、４１６９３４、４１６９３５、４１６９３６、４１６９３７、４１６９３８、４１６９３９、４１６９４０、４１６９４１、４１６９４２、４１６９４３、４１６９４４、４１６９９７、４１６９９８、４１６９９９、４１７０００、４１７００１、４１７００２、４１７００３、４１７００４、４１７００６、４１７００７、４１７００８、４１７００９、４１７０１０、４１７０１１、４１７０１３、４１７０１４、４１７０１５、４１７０１６、４１７０１７、４１７０１８、４１７０１９および４１７０２０を含めた大部分のギャップマーは、少なくとも８０％の阻害を示す。次のＩＳＩＳ番号：４１２２２４、４１６８５０、４１６８５３、４１６８５６、４１６８５７、４１６８５８、４１６８６１、４１６８６２、４１６８６４、４１６９２２、４１６９２３、４１６９２４、４１６９２５、４１６９２６、４１６９２８、４１６９３１、４１６９３２、４１６９３３、４１６９３４、４１６９３５、４１６９３７、４１６９３８、４１６９４０、４１６９４１、４１６９４３、４１６９９９および４１７００２は、少なくとも９０％の阻害を示した。
Figure 2012524068
Figure 2012524068
実施例４：ＨｅｐＧ２細胞中におけるヒト第XI因子の用量依存性アンチセンス阻害
ヒト第XI因子の in vitro 阻害を示す、実施例３によるギャップマー（表４、表５、表６、表７および表８を参照されたい）を、ＨｅｐＧ２細胞中においていろいろな用量で調べた。細胞は、１０，０００個／ウェルの細胞密度で平板培養し、そしてリポフェクチン試薬を用いて、表９に明記される９．３７５ｎＭ、１８．７５ｎＭ、３７．５ｎＭおよび７５ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクションした。約１６時間の処理時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そして第XI因子ｍＲＮＡレベルを、定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒト第XI因子プライマー・プローブセットＲＴＳ２９６６を用いて、ｍＲＮＡレベルを測定した。第XI因子ｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定される全ＲＮＡ含量によって調整した。結果は、未処理対照細胞に相対する第XI因子の阻害パーセントとして示す。表９に示されるように、第XI因子ｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理された細胞において、用量依存方式で減少した。
Figure 2012524068
ギャップマーを、更に、エレクトロポレーションによってトランスフェクションし、そしてそれらの用量依存性のヒト第XI因子ｍＲＮＡ阻害を測定した。細胞は、２０，０００個／ウェルの細胞密度で平板培養し、そしてエレクトロポレーションによって、表１０に明記される０．７μＭ、２．２μＭ、６．７μＭおよび２０μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクションした。約１６時間の処理時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そして第XI因子ｍＲＮＡレベルを、定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒト第XI因子プライマー・プローブセットＲＴＳ２９６６を用いて、ｍＲＮＡレベルを測定した。第XI因子ｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定される全ＲＮＡ含量によって調整した。結果は、未処理対照細胞に相対する第XI因子の阻害パーセントとして示す。表１０に示されるように、第XI因子ｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理された細胞において、用量依存方式で減少した。
Figure 2012524068
実施例５：ＨｅｐＧ２細胞中におけるヒト第XI因子の有効な用量依存性アンチセンス阻害の選択および確認
実施例４においてヒト第XI因子の有意の用量依存性阻害を示したギャップマーを選択し、そしてＨｅｐＧ２細胞中においていろいろな用量で調べた。細胞は、１０，０００個／ウェルの細胞密度で平板培養し、そしてリポフェクチン試薬を用いて、表１１に明記される２．３４ｎＭ、４．６９ｎＭ、９．３７５ｎＭ、１８．７５ｎＭ、３７．５ｎＭおよび７５ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクションした。約１６時間の処理時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてヒト第XI因子ｍＲＮＡレベルを、定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒト第XI因子プライマー・プローブセットＲＴＳ２９６６を用いて、ｍＲＮＡレベルを測定した。第XI因子ｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定される全ＲＮＡ含量によって調整した。結果は、未処理対照細胞に相対するヒト第XI因子の阻害パーセントとして示す。表１１に示されるように、第XI因子ｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理された細胞において、対照と比較したところ、用量依存方式で減少した。
Figure 2012524068
ギャップマーを、更に、エレクトロポレーションによってトランスフェクションし、そしてそれらの用量依存性のヒト第XI因子ｍＲＮＡ阻害を測定した。細胞は、２０，０００個／ウェルの細胞密度で平板培養し、そしてエレクトロポレーションによって、表１２に明記される６２５ｎＭ、１２５０ｎＭ、２５００ｎＭ、５，０００ｎＭ、１０，０００ｎＭおよび２０，０００ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクションした。約１６時間の処理時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてヒト第XI因子ｍＲＮＡレベルを、定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒト第XI因子プライマー・プローブセットＲＴＳ２９６６を用いて、ｍＲＮＡレベルを測定した。第XI因子ｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定される全ＲＮＡ含量によって調整した。結果は、未処理対照細胞に相対するヒト第XI因子の阻害パーセントとして示す。表１２に示されるように、第XI因子ｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理された細胞において、対照と比較したところ、用量依存方式で減少した。
Figure 2012524068
実施例６：ｃｙｎｏ一次肝細胞中におけるヒト第XI因子の有効な用量依存性アンチセンス阻害の選択および確認
ヒト第XI因子の有意の用量依存性 in vitro 阻害を示した実施例４によるギャップマーを、更に、カニクイザル（cynomolgus monkey）（ｃｙｎｏ）一次肝細胞中においていろいろな用量で調べた。細胞は、３５，０００個／ウェルの細胞密度で平板培養し、そしてエレクトロポレーションによって、表１３に明記される０．７４ｎＭ、２．２ｎＭ、６．７ｎＭ、２０ｎＭ、６０ｎＭおよび１８０ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクションした。約１６時間の処理時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてヒト第XI因子ｍＲＮＡレベルを、定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒト第XI因子プライマー・プローブセットＲＴＳ２９６６を用いて、ｍＲＮＡレベルを測定した。第XI因子ｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定される全ＲＮＡ含量によって調整した。結果は、未処理対照細胞に相対するヒト第XI因子の阻害パーセントとして示す。表１３に示されるように、第XI因子ｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理された細胞において、対照と比較したところ、用量依存方式で減少した。
Figure 2012524068
実施例７：ＨｅｐＢ３細胞中における、ギャップマーによるヒト第XI因子の有効な用量依存性アンチセンス阻害の選択および確認
実施例４においてヒト第XI因子の in vitro 阻害を示したギャップマーを、ヒトＨｅｐＢ３細胞中においていろいろな用量で調べた。細胞は、４，０００個／ウェルの細胞密度で平板培養し、そしてリポフェクチン試薬を用いて、表１４に明記される２．３ｎＭ、４．７ｎＭ、９．４ｎＭ、１８．７５ｎＭ、３７．５ｎＭおよび７５ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクションした。約１６時間の処理時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてヒト第XI因子ｍＲＮＡレベルを、定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒト第XI因子プライマー・プローブセットＲＴＳ２９６６を用いて、ｍＲＮＡレベルを測定した。第XI因子ｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定される全ＲＮＡ含量によって調整した。結果は、未処理対照細胞に相対する第XI因子の阻害パーセントとして示す。表１４に示されるように、第XI因子ｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理された細胞において、対照と比較したところ、用量依存方式で減少した。
Figure 2012524068
ギャップマーを、更に、エレクトロポレーションによってトランスフェクションし、そしてそれらの用量依存性のヒト第XI因子ｍＲＮＡ阻害を測定した。細胞は、２０，０００個／ウェルの細胞密度で平板培養し、そしてエレクトロポレーションによって、表１５に明記される４１．１５ｎＭ、１２３．４５７ｎＭ、３７０．３７ｎＭ、１１１１．１１ｎＭ、３３３３．３３ｎＭおよび１０，０００ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクションした。約１６時間の処理時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてヒト第XI因子ｍＲＮＡレベルを、定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒト第XI因子プライマー・プローブセットＲＴＳ２９６６を用いて、ｍＲＮＡレベルを測定した。第XI因子ｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定される全ＲＮＡ含量によって調整した。結果は、未処理対照細胞に相対するヒト第XI因子の阻害パーセントとして示す。表１５に示されるように、第XI因子ｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理された細胞において、対照と比較したところ、用量依存方式で減少した。
Figure 2012524068
実施例８：一次マウス肝細胞中におけるネズミ第XI因子のアンチセンス阻害
ネズミ第XI因子に標的指向するキメラのアンチセンスオリゴヌクレオチドを、ネズミ第XI因子（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６として本明細書中に包含されるＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０２８０６６．１）に標的指向する５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計した。それらギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々５ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。各々のウィングセグメント中のヌクレオチドは各々、２’−ＭＯＥ修飾を有する。各々のギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。各々のギャップマー中のシチジン残基は全て、５−メチルシチジンである。それらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、一次マウス肝細胞中においてネズミ第XI因子ｍＲＮＡを減少させるそれらの能力について評価した。
一次マウス肝細胞は、６．２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、２５ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭおよび２００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドで、約２４時間処理した。ＲＮＡを細胞から単離し、そしてネズミ第XI因子ｍＲＮＡレベルを、定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ネズミ第XI因子プライマー・プローブセットＲＴＳ２８９８（正配列ＡＣＡＴＧＡＣＡＧＧＣＧＣＧＡＴＣＴＣＴ、本明細書中にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７として包含される；逆配列ＴＣＴＡＧＧＴＴＣＡＣＧＴＡＣＡＣＡＴＣＴＴＴＧＣ、本明細書中にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８として包含される；プローブ配列ＴＴＣＣＴＴＣＡＡＧＣＡＡＴＧＣＣＣＴＣＡＧＣＡＡＴＸ、本明細書中にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９として包含される）を用いて、ｍＲＮＡレベルを測定した。第XI因子ｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定される全ＲＮＡ含量によって調整した。いくつかのネズミアンチセンスオリゴヌクレオチドは、第XI因子ｍＲＮＡレベルを用量依存方式で減少させた。
実施例９：一次マウス肝細胞中におけるネズミ第XI因子の交差反応性アンチセンス阻害
ネズミ第XI因子核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを、第XI因子ｍＲＮＡへのそれらの作用について in vitro で調べた。１０，０００個／ウェルの細胞密度で培養された一次マウス肝細胞を、１００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドで処理した。約２４時間の処理時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてマウス第XI因子ｍＲＮＡレベルを、定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。第XI因子ｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定される全ＲＮＡ含量によって調整した。結果は、未処理対照細胞に相対する第XI因子の阻害パーセントとして示す。
表１６のキメラのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計した。それらギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々５ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。５’ウィングセグメント中の各々のヌクレオチドおよび３’ウィングセグメント中の各々のヌクレオチドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。各々のギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。各々のギャップマー中のシチジン残基は全て、５−メチルシチジンである。「マウス標的出発部位」は、ギャップマーに標的とされている最も５’のヌクレオチドを示す。「マウス標的停止部位」は、ギャップマーに標的とされている最も３’のヌクレオチドを示す。挙げられているマウスオリゴヌクレオチドは全て、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６として本明細書中に包含されるマウス第XI因子ｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０２８０６６．１）と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１として本明細書中に包含されるヒト第XI因子ｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０００１２８．３）との間に交差反応性を示す。「ヒト標的出発部位」は、アンチセンスオリゴヌクレオチドに標的とされているヒトｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０００１２８．３）中の最も５’のヌクレオチドを示す。「ヒト標的停止部位」は、アンチセンスオリゴヌクレオチドに標的とされているヒトｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０００１２８．３）中の最も３’のヌクレオチドを示す。「ミスマッチ数」は、マウスオリゴヌクレオチドとヒトｍＲＮＡ配列との間のミスマッチを示す。
Figure 2012524068
実施例１０：ネズミ第XI因子の in vivo アンチセンス阻害
in vitro 研究により統計的に有意の用量依存性阻害を示した、ネズミ第XI因子ｍＲＮＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６として本明細書中に包含されるＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０２８０６６．１，）を標的とするいくつかのアンチセンスオリゴヌクレオチドを、in vivo で評価した。ＢＡＬＢ／ｃマウスを、ＩＳＩＳ４０４０５７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０として本明細書中に包含されるＴＣＣＴＧＧＣＡＴＴＣＴＣＧＡＧＣＡＴＴ、標的出発部位４８７）およびＩＳＩＳ４０４０７１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１として本明細書中に包含されるＴＧＧＴＡＡＴＣＣＡＣＴＴＴＣＡＧＡＧＧ、標的出発部位８６９）で処置した。
処置
ＢＡＬＢ／ｃマウスに、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４０４０５７またはＩＳＩＳ４０４０７１を、週２回３週間注射した。対照群マウスには、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）を週２回３週間注射した。最後の用量を与えて５日後に、マウスを屠殺した。全肝を、ＲＮＡ分析用に採取し、そして血漿を、タンパク質分析用に集めた。
ＲＮＡ分析
ＲＮＡは、第XI因子のリアルタイムＰＣＲ分析用に、肝組織より抽出した。表１７に示されるように、それらアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＰＢＳ対照を越えて、ネズミ第XI因子の用量依存性減少を達成した。結果は、対照に相対する第XI因子の阻害パーセントとして示す。
Figure 2012524068
タンパク質分析
表１８に示されるように、ＩＳＩＳ４０４０７１での処置は、第XI因子タンパク質の有意の用量依存性減少を引き起こした。結果は、ＰＢＳ対照に相対する第XI因子の阻害パーセントとして示す。
Figure 2012524068
実施例１１：ネズミ第XI因子のアンチセンス阻害のコラーゲン誘発性関節炎への in vivo 作用
第XI因子の阻害作用および関節炎症および関節リウマチをもたらす関節中のフィブリン蓄積におけるその役割の作用を、ネズミコラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）モデルにおいて評価した。被験動物へのコラーゲンの投与は、関節炎を誘発する周知の方法であり、従来、Trentham et al. (J Exp Med, 146:857-68, 1977)、Courtenay et al. (Nature, 283:666-668, 1980)、Cathcart et al. (Lab Invest, 54:26-31, 1986)、Wooley (Methods Enzymol 162:361-373, 1988) および Holmdahl et al. (Arthritis Rheum 29:106, 1986) によって記載された。コラーゲンを投与されたマウスで誘発された関節炎は、Marty et al. (J Clin Invest, 107:631-640, 2001) によって記載のように、目視評価し且つ臨床評点することができるが、この場合、母指を除く腫脹した指各々について１点とし（最大値４）、足根骨または手根骨関節について１点とし、そして中足骨または中手骨関節について、後足に６および前足に５の最大スコアで１点とする。各々の足を、個々に採点したが、マウス毎の累積臨床関節炎スコアは、最大２２点に達した。
ＩＳＩＳ４０４０７１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１として本明細書中に包含されるＴＧＧＴＡＡＴＣＣＡＣＴＴＴＣＡＧＡＧＧ）は、ネズミ第XI因子（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６として本明細書中に包含されるＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０２８０６６．１；８６９位で始まるオリゴヌクレオチド標的部位）に標的指向する５−１０−５ ＭＯＥギャップマーとして設計されたキメラのアンチセンスオリゴヌクレオチドである。そのギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１０個連続した２’−デオキシヌクレオシドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々５ヌクレオシドを含むウィングが隣接している。各々のウィングセグメント中のヌクレオシドは各々、２’−ＭＯＥ修飾を有する。ギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）ヌクレオシド間結合である。ギャップマー中のシチジン残基は全て、５−メチルシチジンである。
ＩＳＩＳ４０３１０２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７５として本明細書中に包含されるＣＣＡＴＡＧＡＡＣＡＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧ）は、ネズミ第VII因子に標的指向する５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計されたキメラのアンチセンスオリゴヌクレオチドである。そのギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１０個連続した２’−デオキシヌクレオシドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々５ヌクレオシドを含むウィングが隣接している。各々のウィングセグメント中のヌクレオシドは各々、２’−ＭＯＥ修飾を有する。ギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）ヌクレオシド間結合である。ギャップマー中のシチジン残基は全て、５−メチルシチジンである。
ＩＳＩＳ４０４０７１について８個のミスマッチ（ＭＭ）を含む対照オリゴヌクレオチドであるＩＳＩＳ４２１２０８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４として本明細書中に包含されるＴＣＧＧＡＡＧＣＧＡＣＴＣＴＴＡＴＡＴＧ）を、対照として用いた。ＩＳＩＳ４２１２０８は、ネズミ第XI因子（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６として本明細書中に包含されるＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０２８０６６．１；８６９位で始まるオリゴヌクレオチド標的部位）に標的指向する５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計されたキメラのアンチセンスオリゴヌクレオチドである。そのギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１０個連続した２’−デオキシヌクレオシドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々５ヌクレオシドを含むウィングが隣接している。各々のウィングセグメント中のヌクレオシドは各々、２’−ＭＯＥ修飾を有する。ギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）ヌクレオシド間結合である。ギャップマー中のシチジン残基は全て、５−メチルシチジンである。
ＩＳＩＳ４０４０５７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０として本明細書中に包含されるＴＣＣＴＧＧＣＡＴＴＣＴＣＧＡＧＣＡＴＴ）は、ネズミ第XI因子（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６として本明細書中に包含されるＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０２８０６６．１；４８７位で始まるオリゴヌクレオチド標的部位）に標的指向する５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計されたキメラのアンチセンスオリゴヌクレオチドである。そのギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１０個連続した２’−デオキシヌクレオシドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々５ヌクレオシドを含むウィングが隣接している。各々のウィングセグメント中のヌクレオシドは各々、２’−ＭＯＥ修飾を有する。ギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）ヌクレオシド間結合である。ギャップマー中のシチジン残基は全て、５−メチルシチジンである。
雄ＤＢＡ／１Ｊマウスは、The Jackson Laboratory（Bar Harbor, Maine）より入手した。
関節炎研究Ａ：第XI因子阻害（ＩＳＩＳ４０４０７１）の関節炎への作用
ＩＳＩＳ４０４０７１で第XI因子を阻害する作用および関節炎を改善する場合のその役割の作用を、コラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）モデルにおいて評価した。
雄ＤＢＡ／１Ｊマウスを、表１９に示されるように群に分け且つ処置した。
Figure 2012524068
１５匹のＤＢＡ／１Ｊマウスの群に、２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４０４０７１を、週２回１２週間皮下注射した。一つの対照群の１５匹のマウスに、２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４０３１０２を、週２回１２週間注射した。各１５匹の二つの対照群のマウスに、ＰＢＳを、週２回１２週間注射した。最初のオリゴヌクレオチド用量の２週間後、II型ウシコラーゲン（Chondrex Inc, Redmond, WA）を、完全フロイントアジュバントと混合し、氷上で均一化し、そして１００μｇのコラーゲンを含有するエマルジョンを、第XI因子群、第VII因子群および一つのＰＢＳ対照群の尾の基部に皮下注射した。不完全フロイントアジュバント中に１００μｇのII型コラーゲンを含有するブースター注射は、最初のコラーゲン注射後２１日目に、これら群の尾の基部の異なった注射部位に皮下注射した。
最初のコラーゲン注射から３５日に開始して、全ての群のマウスの末梢関節を、腫脹および硬直などの関節炎の目視外観について毎日調べた。それら結果を、表２０（ＰＢＳ対照の百分率として表される）および図１〜３に示す。
Figure 2012524068
「ＣＩＡの発生率」は、４０日目にＣＩＡを有した各群のマウスの百分率を意味する。「罹患した足の百分率」は、関節炎に罹患したマウスの各群における全６０の足からの足の百分率を意味する。「罹患した足の平均数」は、関節炎を有すると診断されたマウスおける罹患した足の数を意味する。「ＣＩＡの臨床的重症度」は、Marty et al. (J Clin Invest, 107:631-640, 2001) によって記載のように且つ次のように評点した。母指を除く腫脹した指各々について１点とし（最大値４）、足根骨または手根骨関節について１点とし、そして中足骨または中手骨関節について、後足に６および前足に５の最大スコアで１点とする。各々の足を、個々に採点したが、マウス毎の累積臨床関節炎スコアは、最大２２点に達した。
表２０および図１〜３に示されるように、ＩＳＩＳ４０４０７１での処置は、ＣＩＡの発生率を有意に阻害することが認められた。
関節炎研究Ｂ：第XI因子阻害（ＩＳＩＳ４０４０７１およびＩＳＩＳ４０４０５７）の関節炎への作用
ＩＳＩＳ４０４０７１またはＩＳＩＳ４０４０５７で第XI因子を阻害する作用および関節炎を改善する場合のそれらの役割の作用を、コラーゲン誘発性関節炎モデルにおいて評価した。
雄ＤＢＡ／１Ｊマウスを、表２１に示されるように群に分け且つ処置した。
Figure 2012524068
２０匹のＤＢＡ／１Ｊマウスの群に、２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４０４０７１を、週２回１０週間皮下注射した。第二群の２０匹のＤＢＡ／１Ｊマウスに、２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４０４０５７を、週２回１０週間皮下注射した。第三の対照群の２０匹のマウスに、２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４２１２０８を、週２回１０週間皮下注射した。各２０匹の二つの対照群のマウスに、ＰＢＳを、週２回１０週間注射した。
最初のオリゴヌクレオチド用量の２週間半後、完全フロイントアジュバント中のII型ウシコラーゲンを、全ての実験群と一つのＰＢＳ対照群の尾の基部に皮下注射した。不完全フロイントアジュバント中に１００μｇのII型コラーゲンを含有するブースター注射は、最初のコラーゲン注射後２１日目に、これら群の尾の基部の異なった注射部位に皮下注射した。
最初のコラーゲン注射後３０日目の後に、全ての群のマウスの末梢関節を、関節炎の目視外観について毎日調べた。研究の最後の第XI因子アンチセンスオリゴヌクレオチド処置の作用を、表２２および図４〜６に示す。表２２の結果は、肝および脾臓重量を除いて、ＰＢＳ対照と比較した変化パーセントとして表されている。
Figure 2012524068
第XI因子アンチセンスオリゴヌクレオチドＩＳＩＳ４０４０７１でのコラーゲン誘発性関節炎マウスの処置は、マウスにおいて評価される関節炎の量を、未処置マウスに比較して有意に低下させた（表２２および図４Ａ）。第XI因子アンチセンスオリゴヌクレオチドＩＳＩＳ４０４０５７でのコラーゲン誘発性関節炎マウスの処置は、未処置マウスに比較して、マウスにおいて評価される関節炎の量に影響を与えなかった。それら二つの第XI因子アンチセンスオリゴヌクレオチド間の有効性の相違は、図４Ｂに示されるように、第XI因子ｍＲＮＡを阻害する場合の各々のオリゴヌクレオチドの相対有効性に関係することがありうる。ＩＳＩＳ４０４０５７による第XI因子阻害の欠如は、マウスにおける関節炎阻害の欠如に相関した。
要約すると、この実施例は、本発明者に初めて知られた、第XI因子が、関節炎においてある役割を果たしているということ、および第XI因子阻害剤での動物の処置は、その動物の関節炎を改善するであろうということを示している。第XI因子阻害剤での処置は、動物の関節炎のリスクおよび進行を減少させることも分かっている。
実施例１２：ネズミ第XI因子のアンチセンス阻害のＤＳＳ誘発性結腸炎への in vivo 作用
第XI因子のアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害の作用および結腸炎を改善する場合のその役割の作用を、デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発性結腸炎モデルにおいて評価した。被験動物へのＤＳＳの投与は、結腸炎を誘発する周知の方法であり、従来、Okayasu et al. (Gastroenterology, 1990, 98:694-702)、Cooper et al. (Lab Invest, 1993, 69:238-249) および Dieleman et al. (Clin Exp Immunol, 1998, 114:385-391) によって記載された。
ヒトの結腸炎は、持続性下痢（弛緩性、水様、または頻回便通）、痙攣性腹痛、発熱、直腸出血、食欲不振および体重減少が含まれうる症状を有する。結腸炎の病理学的変化には、結腸短縮（Gore, 1992, AJR, 158:59-61）、炎症性病変の形成、拡散した好中球浸潤、粘膜下浮腫および固有筋肥厚などの結腸への変化が含まれうる。
第XI因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドは、上の実施例１１に記載した。Swiss Webb マウスは、Charles River Laboratories（Wilmington, MA）からであった。
結腸炎研究Ａ：第XI因子阻害（ＩＳＩＳ４０４０７１）の結腸炎への作用
ＩＳＩＳ４０４０７１で第XI因子を阻害する作用および結腸炎を改善する場合のその役割の作用を、デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発性結腸炎モデルにおいて評価した。
メスSwiss Webb マウスを、表２３に示されるように群に分け且つ処置した。
Figure 2012524068
８匹ずつの Swiss Webb マウスの群に、２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４０４０７１またはＩＳＩＳ４０３１０２を、週２回３週間皮下注射した。各８匹の二つの対照群のマウスには、ＰＢＳを週２回３週間注射した。オリゴヌクレオチド処置後、水中の４％ＤＳＳを、実験群と一つのＰＢＳ対照群に随意に６日間投与した。
全ての群のマウスの体重を、０日目に量った。ＤＳＳを投与後７日目の研究の最後に、マウスを屠殺し、そしてそれらの体重および結腸長さを測定した。結果は、表２４（ＰＢＳ対照の百分率として表される）および図７に示す。
Figure 2012524068
結腸長さを、ＤＳＳ誘発性結腸炎マウスにおいて評価した。第XI因子オリゴヌクレオチドでの処置は、結腸炎の症状を示す結腸短縮の量を低下させた。
第VII因子または第XI因子オリゴヌクレオチドで処置されたマウス（ＤＳＳ誘発性）潰瘍結腸炎モデルからのマウス結腸組織を調べて、存在する炎症の量を決定した。
それらマウスは、ナトリウムペントバルビタール（１６０ｍｇ／ｋｇ）を用いて屠殺した。結腸部分は、三等分し、縦に切断し、そして１０％中性緩衝化ホルマリン中で固定し、パラフィンで包埋し、４μｍ切片とし、そして光学顕微鏡検査用にヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。それらスライドは、病理学者が顕微鏡で調べ、そして図８および表２５に示されるように、腸炎症についての組織学的重症度スコアで評価した。８Ｃ（第VII因子被処置）および８Ｄ（第XI因子被処置）の炎症の量を、８Ａ（炎症なし）の負の対照および８Ｂ（最大炎症）の正対照と比較して、炎症の重症度を決定した。
Figure 2012524068
多病変結腸炎は、ＤＳＳで処置されなかった結腸（図８Ａ）と比較したところ、ＤＳＳ被処置結腸において認められた（図８Ｂ）。図８Ｃの結腸は、第VII因子に標的指向する対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ４０３１０２で処置したが、図８ＢのＤＳＳ被処置結腸と同様の外観の病変を示す。図８Ｄの結腸は、ＩＳＩＳ４０４０７１で処置したが、図８Ｂまたは図８Ｃの結腸よりも有意に少ない潰瘍性粘膜病変を示す。
結腸研究Ｂ：第XI因子阻害（ＩＳＩＳ４０４０７１およびＩＳＩＳ４０４０５７）の結腸炎への作用
ＩＳＩＳ４０４０７１およびＩＳＩＳ４０４０５７で第XI因子を阻害する作用および結腸炎を改善する場合のそれらの役割の作用を、デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発性結腸炎モデルにおいて評価した。
Swiss Webb マウスを、表２６に示されるように群に分け且つ処置した。
Figure 2012524068
第一群の８匹の Swiss Webb マウスに、２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４０４０７１を、週２回３週間皮下注射した。第二群の８匹の Swiss Webb マウスに、２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４０４０５７を、週２回３週間皮下注射した。第三対照群の８匹の Swiss Webb マウスに、２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳＩ４２１２０８を、週２回３週間皮下注射した。各８匹の二つの対照群のマウスには、ＰＢＳを週２回３週間注射した。オリゴヌクレオチド処置後、水中の４％ＤＳＳを、全ての実験群と一つのＰＢＳ対照群に随意に６日間投与した。
全ての群のマウスの体重を、０日目と、ＤＳＳの投与後毎日、量った。ＤＳＳを投与後７日目の研究の最後に、マウスを屠殺し、それらの肝および結腸を、ＲＮＡ分析用に採取し、そしてそれらの体重および結腸長さを測定した。
アンチセンスオリゴヌクレオチドの体重変化および体結腸長さへの作用を、表２７および図９に示す。
第XI因子ｍＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲ分析を行った。表２７および図１０に示されるように、第XI因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドは、肝においてＰＢＳ対照を越えて統計的に有意の用量依存性のネズミ第XI因子減少を達成した。測定値は全て、シクロフィリンに規格化する。
Figure 2012524068
表２７の結果は全て、ＰＢＳ対照と比較した変化パーセントとして表されている。
結腸炎研究Ｃ：第XI因子阻害（ＩＳＩＳ４０４０７１）の結腸炎への作用
第XI因子オリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ４０４０７１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）を用いた結腸炎についての第三の研究を行った。その研究は、本質的には、この実施例の始めの方に記載のように行った。軟便／下痢研究を行った。７日後、ＤＳＳ非投与の対照マウスには下痢がなく、ＤＳＳを投与されたマウスは、下痢を生じ、そして第XI因子オリゴヌクレオチドを投与されたマウスは、普通〜軟便を生じたが、下痢はなかった。
Ｐ−セレクチンは、結腸炎を悪化させることに関与していたが、Ｐ−セレクチンの剥離は、結腸炎を改善することが判明した（Gironella, M. et al., J. Leukoc. Biol. 2002. 72: 56-64）。血清Ｐ−セレクチンレベルへの第XI因子のアンチセンス阻害の作用を、この研究で評価した。ＤＳＳ投与は、Ｐ−セレクチンレベルの増加をもたらしたが、それは、ＩＳＩＳ４０４０７１での処置によって減少した。それら結果を、表２８に示す。
Figure 2012524068
結腸炎研究Ｄ：いろいろな用量の第XI因子阻害（ＩＳＩＳ４０４０７１）の結腸炎への作用
結腸炎を改善する場合にいろいろな用量のＩＳＩＳ４０４０７１で第XI因子を阻害する作用を、デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発性結腸炎モデルにおいて評価した。
メス Swiss Webb マウスを、表２９に示されるように群に分け且つ処置した。
Figure 2012524068
第一群の８匹の Swiss Webb マウスに、１０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４０４０７１を、週２回３週間皮下注射した。第二群の８匹の Swiss Webb マウスに、２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４０４０５７を、週２回３週間皮下注射した。第三対照群の８匹の Swiss Webb マウスに、４０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳＩ４０４０５７を、週２回３週間皮下注射した。各８匹の二つの対照群のマウスには、ＰＢＳを週２回３週間注射した。オリゴヌクレオチド処置後、水中の４％ＤＳＳを、全ての実験群と一つのＰＢＳ対照群に随意に７日間投与した。
全ての群のマウスの体重を、図１１Ａに示されるように、０日目と、ＤＳＳの投与後３日目に開始して毎日量った。マウスの軟便／下痢を、図１１Ｂに示されるように、ＤＳＳを投与後７日目に分析した。ＤＳＳを投与後７日目の研究の最後に、マウスを屠殺し、そしてそれらの結腸長さを、図１１Ｃに示されるように測定した。
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、体重および下痢スコアへの統計的に有意の用量作用を示した（図１１Ａおよび図１１Ｂ）。いろいろな用量のオリゴヌクレオチドは、それらいろいろな用量の間では、結腸長さへの統計的に有意の作用を示さなかったが、それら３種類の用量のいずれの投与も、図１１Ｃに示されるように、プラシーボと比較した場合、結腸長さを有意に改善した。
デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発性結腸炎のマウスは、血中のトロンビン・アンチトロンビン（ＴＡＴ）複合体のレベルを上昇させたが（Anthoni, C. et al., J. Exp. Med. 204: 1595-1601, 2007）、それは、潰瘍性大腸炎の患者でも認められる（Kume, K. et al., Intern Med. 2007. 46: 1323-9）。結腸中のＴＡＴレベルへの第XI因子のアンチセンス阻害の作用を評価したが（Thrombi-Anti-Thrombin III complex, Siemens Healthcare Diagnostics, Deerfield, IL）、それら結果を、表３０に示す。示されるように、ＤＳＳ投与は、ＴＡＴレベルを増加させたが、それは、ＩＳＩＳ４０４０７１での処理により、用量依存方式で低下した。
可溶性ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）の血漿レベルは、炎症性腸疾患の場合に上昇することが知られているので（Ludwiczek, O. et al., Int. J. Colorectal Disease. 2003. 18: 142-147）、腸炎症のマーカーと考えることができる。血漿中のＣＤ４０Ｌレベルへの第XI因子のアンチセンス阻害の作用を評価したが（Bender Medsystems, Vienna, Austria; eBioscience, San Diego, CA）、それら結果を、表３１に示す。示されるように、ＤＳＳ投与は、ＣＤ４０Ｌレベルを増加させたが、それは、ＩＳＩＳ４０４０７１での処置により低下した。
潰瘍性大腸炎を有する実験モデルおよびヒトについての知見は、炎症性腸疾患におけるカリクレイン・キニン系の病原の役割を示唆する（Devani, M. et al., Digestive and Liver Disease. 2005. 37: 665-673）。結腸中のキニンレベルへの第XI因子のアンチセンス阻害の作用を評価したが（Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA）、それら結果を、表３２に示す。示されるように、ＤＳＳ投与は、ブラジキニンレベルを増加させたが、それは、ＩＳＩＳ４０４０７１での処置により低下した。
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要約すると、この実施例は、第XI因子オリゴヌクレオチド処置が、被験動物におけるＤＳＳ誘発性潰瘍性大腸炎を有意に改善したということを示す。第XI因子阻害剤での処置は、被験動物における結腸炎のリスクおよび進行を減少させることも分かっている。
結腸研究Ｅ：天然ヒト第XI因子タンパク質が、結腸炎モデルにおいて第XI因子阻害（ＩＳＩＳ４０４０７１）の作用を逆転させうるかどうかを決定すること。
ＩＳＩＳ４０４０７１で第XI因子を阻害する作用を逆転させる場合のヒト第XI因子タンパク質の効力を、デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発性結腸炎モデルにおいて評価した。
メスSwiss Webb マウスを、表３３に示されるように群に分け且つ処置した。
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二つの群の８匹ずつの Swiss Webb マウスに、４０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４０４０７１を皮下注射で週２回３週間投与した。二つの対照群の８匹ずつの Swiss Webb マウスに、ＰＢＳを週２回３週間皮下投与した。次に、双方のＡＳＯ被処置群および一つの対照群に、蒸留水中の４％ＤＳＳを７日間随意に与えた。ＡＳＯおよびＤＳＳ被処置群の一つには、更に、２０μｇの組換えヒト第XI因子タンパク質（Haematologic Technologies Inc.）の静脈内注射を、ＤＳＳ処置の前日に開始して連続７日間与えた。ＤＳＳを投与後７日目の研究の最後に、マウスを屠殺した。
第XI因子ｍＲＮＡレベルへのＩＳＩＳ４０４０７１によるアンチセンス阻害の作用を、表３４に示す。第XI因子レベルは、ＩＳＩＳ４０４０７１単独で処置されたマウスにおいて、未処置ＰＢＳ対照と比較して有意に低下した。
全ての群のマウスの体重を、０日目と研究の最後に量った。それら結果は、表３５に示すが、異なった群における研究時間にわたる体重変化を示している。ＤＳＳを投与後７日目の研究の最後に、マウスを屠殺し、そしてそれらの結腸長さを測定した。結果は、表３６に示すが、ＩＳＩＳ４０４０７１での処置による結腸長さの増加が、組換え第XI因子タンパク質の投与によって排除されることを示している。マウスの軟便／下痢を、ＤＳＳを投与後７日目に分析したが、そのスコアを表３７に示す。ＩＳＩＳ４０４０７１で処置されたマウスの下痢の改善は、組換え第XI因子タンパク質の付加で排除される。
デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発性結腸炎のマウスは、血中のトロンビン・アンチトロンビン（ＴＡＴ）複合体のレベルを上昇させたが（Anthoni, C. et al., J. Exp. Med. 204: 1595-1601, 2007）、潰瘍性大腸炎の患者でも認められる（Kume, K. et al., Intern Med. 2007. 46: 1323-9）。結腸中のＴＡＴレベルへの第XI因子のアンチセンス阻害の作用を、ＤＳＳを投与後７日目の研究の最後に評価したが（Siemens Healthcare Diagnostics, Deerfield, IL）、それら結果を、表３８に示す。示されるように、ＤＳＳ投与は、ＴＡＴレベルを増加させたが、それは、ＩＳＩＳ４０４０７１での処理により低下した。組換え第XI因子タンパク質の投与は、ＴＡＴレベルを、ＤＳＳ被処置マウスの場合へとほぼ回復させた。
可溶性ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）の血漿レベルは、炎症性腸疾患の場合に上昇することが知られているので（Ludwiczek, O. et al., Int. J. Colorectal Disease. 2003. 18: 142-147）、腸炎症のマーカーと考えることができる。血漿中のＣＤ４０Ｌレベルへの第XI因子のアンチセンス阻害の作用を、ＤＳＳを投与後７日目の研究の最後に評価したが、それら結果を、表３９に示す。血漿中のＣＤ４０Ｌレベルは、商業的に入手可能なＥＬＩＳＡキット（Bender MedSystems, Vienna, Austria, eBioscience, San Diego, CA）により、製造者のプロトコルにしたがって測定した。示されるように、ＤＳＳ投与は、ＣＤ４０Ｌレベルを増加させたが、それは、ＩＳＩＳ４０４０７１での処置により低下した。組換え第XI因子タンパク質の投与は、ＣＤ４０Ｌレベルを、ＤＳＳ被処置マウスの場合へと回復させた。
潰瘍性大腸炎を有する実験モデルおよびヒトについての知見は、炎症性腸疾患におけるカリクレイン・キニン系の病原の役割を示唆する（Devani, M. et al., Digestive and Liver Disease. 2005. 37: 665-673）。結腸中のキニンレベルへの第XI因子のアンチセンス阻害の作用を、ＤＳＳを投与後７日目の研究の最後に評価したが（Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA）、それら結果を、表４０に示す。示されるように、ＤＳＳ投与は、ブラジキニンレベルを増加させたが、それは、ＩＳＩＳ４０４０７１での処置により低下した。組換え第XI因子タンパク質の投与は、ブラジキニンレベルを、ＤＳＳ被処置マウスの場合へと回復させた。
ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＴＮＦ−αおよび角化細胞化学誘引物質（ＫＣ）のサイトカインレベルを、それらマウス群の結腸において、ＤＳＳを投与後７日目の研究の最後に測定した。結腸を、プロテアーゼ阻害剤（Sigma, St. Louis, MO）を補足したＰＢＳ中において氷上で均一化し、そして４℃で１時間の回転で抽出した。遠心分離による不溶性物質の除去後、結腸ホモジネートを、サイトカイン分析のために、多様なＥＬＩＳＡ（Mouse TH1/TH2 9-Plex Ultra-Sensitive Kit, Meso Scale Discovery, Gaithersburg, MD）により、製造者のプロトコルにしたがって用いた。結腸抽出物中のサイトカインレベルは、タンパク質検定キット（BioRad, Hercules, CA）によって測定されたタンパク質濃度に規格化した。サイトカインレベル結果を、表４１に示す。炎症誘発性サイトカインであるＩＦＮ−γ、ＩＬ−１β、ＩＬ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＴＮＦ−αおよびＫＣのレベルは、ＤＳＳ投与によって上昇し、そしてＩＳＩＳ４０４０７１での処置によって低下した。組換え第XI因子タンパク質の投与は、サイトカインレベルを、ＤＳＳ被処置マウスの場合へと回復させた。
要約すると、この実施例は、被験動物のＤＳＳ誘発性潰瘍性大腸炎のアンチセンス処置が、潰瘍性大腸炎を改善し、そしてＴｈ１サイトカインであるＩＮＦ−γ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−αおよびＫＣなどの特定の炎症誘発性サイトカインを低下させたということを示している。更に、Ｔｈ２サイトカインであるＩＬ−４およびＩＬ−５などの炎症誘発性サイトカインは、未処置マウスと比較して低下した。この実施例は、更に、ヒト第XI因子タンパク質処置が、被験動物のＤＳＳ誘発性潰瘍性大腸炎のアンチセンス処置の作用を首尾よく逆転させうるということを示している。したがって、組換えヒト第XI因子タンパク質は、ＩＳＩＳ４０４０７１処置のための解毒薬として役立つことができる。
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結腸炎研究Ｆ：ＩＳＩＳ４０４０７１の結腸炎への作用
結腸炎を改善する場合にＩＳＩＳ４０４０７１で第XI因子を阻害する作用を、デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発性結腸炎モデルにおいて評価した。
メスSwiss Webb マウスを、表４２に示されるように群に分け且つ処置した。
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第一群の８匹の Swiss Webb マウスに、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４０４０７１を、週２回３週間皮下注射した。二つの対照群の各８匹のマウスに、ＰＢＳを週２回３週間注射した。オリゴヌクレオチド処置後、水中の４％ＤＳＳを、実験群および一つのＰＢＳ対照群に７日間随意に投与した。ＤＳＳを投与後７日目の研究の最後に、マウスを屠殺した。
全ての群のマウスの体重を、０日目と、ＤＳＳの投与後７日間毎日量った。０日目と７日目のマウス体重を、表４３に示す。マウスの軟便／下痢を、表４４に示されるように、ＤＳＳを投与後７日間分析した。ＤＳＳを投与後７日目の研究の最後に、マウスを屠殺し、そしてそれらの結腸長さおよび体重を、表４５に示されるように測定した。
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、下痢スコアおよび結腸長さへの統計的に有意の用量作用を示した（表４４および表４５）。ＩＳＩＳ４０４０７１は、表４３に示されるように、プラシーボと比較した場合、体重に有意に影響を与えなかった。
サイトカインＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７およびＴＮＦ−αのｍＲＮＡレベルを、それらマウス群の結腸において、ＤＳＳを投与後７日目の研究の最後に測定した。結腸を、プロテアーゼ阻害剤（Sigma, St. Louis, MO）を補足したＰＢＳ中において氷上で均一化し、そして４℃で１時間の回転で抽出した。遠心分離による不溶性物質の除去後、結腸ホモジネートを、サイトカイン分析のために、多様なＥＬＩＳＡ（Meso Scale Discovery, Gaithersburg, MD）により、製造者のプロトコルにしたがって用いた。結腸抽出物中のサイトカインレベルは、タンパク質検定キット（BioRad, Hercules, CA）によって測定されたタンパク質濃度に規格化した。それら結果を、表４６に示す。ＤＳＳ投与によって上昇した、Ｔｈ１サイトカインＩＬ−１およびＩＬ−６を含めた炎症誘発性サイトカインのレベルは、ＩＳＩＳ４０４０７１での処置によって低下した。ＧＡＴＡ−３は、転写因子であるが、Ｔｈ２細胞からのサイトカインであるＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３の分泌を促進することが分かった。ＧＡＴＡ−３へのアンチセンスオリゴヌクレオチドの作用を、表４６に示す。
アミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴおよびＡＳＴ）の血漿レベル、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン（ＣＲＥＡＴ）、コレステロール（ＣＨＯＬ）および総ビリルビン（ＴＢＩＬ）は、処置後に測定したが、表４７に示す。
ＩＳＩＳ４０４０７１による処置後の第XI因子ｍＲＮＡの肝レベルおよび結腸レベルでのアンチセンス阻害の作用を、表４８に（ＰＢＳ被処置対照のパーセントとして）示す。
要約すると、この実施例は、第XI因子オリゴヌクレオチドが、被験動物のＤＳＳ誘発性潰瘍性大腸炎を有意に改善したということを示している。第XI因子阻害剤での処置は、更に、被験動物の結腸炎のリスクおよび進行を減少させることが分かっている。第XI因子阻害剤での処置は、更に、Ｔｈ１サイトカインＩＬ−１およびＩＬ−６を低下させた。
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実施例１３：ネズミ第XI因子のアンチセンス阻害のＯＶＡ誘発性喘息モデルへの in vivo 作用
第XI因子のアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害の作用および喘息を改善する場合のその役割の作用を、ＯＶＡ／ミョウバン誘発性喘息モデルにおいて評価した。被験動物へのオボアルブミンの投与は、結腸炎を誘発する周知の方法であり、従来、Henderson et al. (J. Exp. Med., 1996, 184: 1483-1494) によって記載された。
ヒトの喘息は、喘鳴音、呼吸困難、乾性咳、胸部の絞窄感（tightness）および痛み、急速心拍数および発汗が含まれうる症状を有する。喘息発作または喘息の悪化の際は、肺組織中に炎症、気管支の平滑筋細胞の収縮、気道の遮断および呼吸困難が存在する（Fanta, C.H. N. Engl. J. Med. 2009. 360: 1002-1014）。
第XI因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドは、上の実施例１１に記載した。
処置
ＢＡＬＢ／ｃマウス（Charles River Laboratories, Wilmington, MA より入手可能）を、１２時間明／暗サイクルで維持し、Teklad 実験用飼料（Harlan Laboratories, Indianapolis, IN）を随意に与えた。被験動物を、研究設備内で少なくとも７日間順応させた後、実験を開始した。アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）は、ＰＢＳ中で調製し、そして０．２ミクロンフィルターを介して濾過することによって滅菌した。オリゴヌクレオチドを、注射用に０．９％ＰＢＳ中に溶解させた。
マウスを、各５匹の四つの処置群に分けた。一つの群に、ＩＳＩＳ４０４０７１の皮下注射を５０ｍｇ／ｋｇの用量で週２回４週間与えた。一つの群のマウスに、対照オリゴヌクレオチドであって、ＩＳＩＳ４０４０７１のミスマッチオリゴヌクレオチド配列であるＩＳＩＳ４２１２０８の皮下注射を、５０ｍｇ／ｋｇの用量で週２回４週間与えた。二つの群のマウスに、ＰＢＳの皮下注射を週２回４週間与えた。一つのＰＢＳ群は、未処置のままにし、対照群とした。第二のＰＢＳ群と、双方のオリゴヌクレオチド被処置群に、ＯＶＡ／ミョウバンを０日目と１４日目に注射し、そしてＰＢＳ中のＯＶＡを、２４日目、２５日目および２６日目に噴霧した。最初のＯＶＡ適用は、ＯＶＡに対してマウスを感作するのに役立ったが、二回目は、喘息反応を引き起こすチャレンジ適用であった。最終用量後２日に、マウスを安楽死させ、気管支洗浄（ＢＡＬ）を集め、分析を行った。
気管支喘息は、その軽症形でも、Ｔリンパ球、マクロファージ、好酸球およびマスト細胞を含めた、炎症細胞およびイムノエフェクター細胞の活性化および局所浸潤を特徴とする（Smith D.L. et al., Am. Rev. Respir. Dis. 1993. 148: 523-532）。気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）好酸球動員へのＩＳＩＳ４０４０７１での処置の作用を評価した。ＢＡＬ細胞を、ヘマトキシリン（hemotoxylin）およびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。それら結果を、表４９に、ＢＡＬ中の全細胞の百分率として示す。そのデータは、ＩＳＩＳ４０４０７１での処置が、好酸球動員を低下させたということを示している。
肺部分を、喘息発作の際に生じる粘液を染色する過ヨウ素酸シフト（shift）（ＰＡＳ）基剤染色で染色した（Rogers, D.F. Curr. Opin Pharmacol. 2004. 4: 241-250）。肺における全気道の百分率としての粘液含有気道の数を評価した。そのデータは、表５０に示すが、ＩＳＩＳ４０４０７１での処置が、肺における粘液生産を低下させたということを示している。
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要約すると、この実施例は、第XI因子オリゴヌクレオチド処置が、被験動物のＯＶＡ誘発性喘息を有意に改善したということを示している。第XI因子阻害剤での処置は、被験動物の喘息のリスクおよび進行を減少させることも分かっている。
実施例１４：ＨｅｐＧ２細胞中におけるミクロウォークで設計されたオリゴヌクレオチドによるヒト第XI因子のアンチセンス阻害
更に別のギャップマーを、ＩＳＩＳ４１６８５０およびＩＳＩＳ４１６８５８に基づいて設計した（上の表８を参照されたい）。これらギャップマーは、ＩＳＩＳ４１６８５０およびＩＳＩＳ４１６８５８の上流および下流に僅かにシフトしていた（すなわち、「ミクロウォーク」）。それらミクロウォークギャップマーは、５−８−５ＭＯＥかまたは６−８−６ＭＯＥモチーフで設計した。
これらミクロウォークギャップマーを、in vitro で調べた。２０，０００個／ウェルの細胞密度で培養されたＨｅｐＧ２を、エレクトロポレーションを用いて８，０００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクションした。約２４時間の処理時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そして第XI因子ｍＲＮＡレベルを、定量リアルタイムＰＣＲで測定した。第XI因子ｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮで測定される全ＲＮＡ含量によって調整した。結果は、未処理対照細胞に相対する第XI因子の阻害パーセントとして示す。
ＩＳＩＳ４１６８５０およびＩＳＩＳ４１６８５８、更には、表１および表８より選択されるギャップマー（すなわち、ＩＳＩＳ４１２２０６、ＩＳＩＳ４１２２２３、ＩＳＩＳ４１２２２４、ＩＳＩＳ４１２２２５、ＩＳＩＳ４１３４８１、ＩＳＩＳ４１３４８２、ＩＳＩＳ４１６８２５、ＩＳＩＳ４１６８４８、ＩＳＩＳ４１６８４９、ＩＳＩＳ４１６８５０、ＩＳＩＳ４１６８５１、ＩＳＩＳ４１６８５２、ＩＳＩＳ４１６８５３、ＩＳＩＳ４１６８５４、ＩＳＩＳ４１６８５５、ＩＳＩＳ４１６８５６、ＩＳＩＳ４１６８５７、ＩＳＩＳ４１６８５８、ＩＳＩＳ４１６８５９、ＩＳＩＳ４１６８６０、ＩＳＩＳ４１６８６１、ＩＳＩＳ４１６８６２、ＩＳＩＳ４１６８６３、ＩＳＩＳ４１６８６４、ＩＳＩＳ４１６８６５、ＩＳＩＳ４１６８６６およびＩＳＩＳ４１６８６７）を、上記と同じ条件下において、ミクロウォークギャップマーと一緒に in vitro で再試験した。
表５１のキメラのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥ、５−８−５および６−８−６ＭＯＥギャップマーとして設計した。表５１に挙げられている最初の二つのギャップマーは、ＩＳＩＳ４４５４９３〜４４５５４３がミクロウォークによって設計された元のギャップマー（ＩＳＩＳ４１６８５０およびＩＳＩＳ４１６８５８）であり、星印で示されている。５−１０−５ギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々５ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。５−８−５ギャップマーは、１８ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、８個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々５ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。６−８−６ギャップマーは、２０ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、８個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々６ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。各々のモチーフ（５−１０−５、５−８−５および６−８−６）について、５’ウィングセグメント中の各々のヌクレオチドおよび３’ウィングセグメント中の各々のヌクレオチドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。各々のギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。各々のギャップマー中のシチジン残基は全て、５−メチルシチジンである。「ヒト標的出発部位」は、ギャップマーに標的とされているヒト配列中の最も５’のヌクレオチドを示す。「ヒト標的停止部位」は、ギャップマーに標的とされているヒト配列中の最も３’のヌクレオチドを示す。表５１に挙げられているギャップマーは各々、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０００１２８．３）を標的としている。表５１にある各々のギャップマーは、本明細書中においてＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７４（エクソン１−１５のＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＷ＿００１１１８１６７．１）と称されるアカゲザル（rhesus monkey）第XI因子遺伝子配列と完全に交差反応性でもある。「アカゲザル出発部位」は、ギャップマーに標的とされているアカゲザル配列中の最も５’のヌクレオチドを示す。「アカゲザル停止部位」は、ギャップマーに標的とされているアカゲザル配列に最も３’のヌクレオチドを示す。
表５１に示されるように、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の標的出発部位１２７５で始まり且つ標的停止部位１３１７で終わる標的領域（すなわち、核酸塩基１２７５〜１３１７）を標的とするギャップマーに設計されたミクロウォークは全て、少なくとも６０％の第XI因子ｍＲＮＡ阻害を示した。同様に、表１および表８からの再試験されたギャップマーは全て、少なくとも６０％の阻害を示した。
ＩＳＩＳ番号：ＩＳＩＳ４１２２０６、４１２２２４、４１２２２５、４１３４８１、４１３４８２、４１６８２５、４１６８４８、４１６８４９、４１６８５０、４１６８５１、４１６８５２、４１６８５３、４１６８５４、４１６８５５、４１６８５６、４１６８５７、４１６８５８、４１６８５９、４１６８６０、４１６８６１、４１６８６２、４１６８６３、４１６８６４、４１６８６５、４１６８６６、４１６８６７、４４５４９４、４４５４９５、４４５４９６、４４５４９７、４４５４９８、４４５４９９、４４５５００、４４５５０１、４４５５０２、４４５５０３、４４５５０４、４４５５０５、４４５５０６、４４５５０７、４４５５０８、４４５５０９、４４５５１０、４４５５１１、４４５５１２、４４５５１３、４４５５１４、４４５５１５、４４５５１６、４４５５１７、４４５５１８、４４５５１９、４４５５２０、４４５５２１、４４５５２２、４４５５２３、４４５５２４、４４５５２５、４４５５２６、４４５５２７、４４５５２８、４４５５２９、４４５５３０、４４５５３１、４４５５３２、４４５５３３、４４５５３４、４４５５３５、４４５５３６、４４５５３７、４５５５３８、４４５５３９、４４５５４０、４４５５４１、４４５５４２および４４５５４３を含めたいくつかのギャップマーは、少なくとも７０％の阻害を示した。
ＩＳＩＳ番号：ＩＳＩＳ４１２２０６、４１２２２４、４１２２２５、４１３４８１、４１３４８２、４１６８２５、４１６８４８、４１６８４９、４１６８５０、４１６８５１、４１６８５２、４１６８５３、４１６８５４、４１６８５５、４１６８５６、４１６８５７、４１６８５８、４１６８５９、４１６８６０、４１６８６１、４１６８６２、４１６８６３、４１６８６４、４１６８６５、４１６８６６、４１６８６７、４４５４９４、４４５４９５、４４５４９６、４４５４９７、４４５４９８、４４５５００、４４５５０１、４４５５０２、４４５５０３、４４５５０４、４４５５０５、４４５５０６、４４５５０７、４４５５０８、４４５５０９、４４５５１０、４４５５１３、４４５５１４、４４５５１９、４４５５２０、４４５５２１、４４５５２２、４４５５２５、４４５５２６、４４５５２９、４４５５３０、４４５５３１、４４５５３２、４４５５３３、４４５５３４、４４５５３５、４４５５３６、４５５５３８、４４５５４１および４４５５４２を含めたいくつかのギャップマーは、少なくとも８０％の阻害を示した。
ＩＳＩＳ番号：ＩＳＩＳ４１２２０６、４１６８２５、４１６８５０、４１６８５７、４１６８５８、４１６８６１、４４５５２２および４４５５３１を含めたいくつかのギャップマーは、少なくとも９０％の阻害を示した。
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実施例１５：ＨｅｐＧ２細胞中におけるヒト第XI因子の用量依存性アンチセンス阻害
ヒト第XI因子の in vitro 阻害を示す実施例１４によるギャップマーを、ＨｅｐＧ２細胞中においていろいろな用量で調べた。細胞は、２０，０００個／ウェルの細胞密度で平板培養し、そしてエレクトロポレーションを用いて、表５２に明記される１２３．４６ｎＭ、３７０．３７ｎＭ、１，１１１．１１ｎＭ、３，３３３．３３ｎＭおよび１０，０００ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクションした。約１６時間の処理時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そして第XI因子ｍＲＮＡレベルを、定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒト第XI因子プライマー・プローブセットＲＴＳ２９６６を用いて、ｍＲＮＡレベルを測定した。第XI因子ｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮで測定される全ＲＮＡ含量によって調整した。結果は、未処理対照細胞に相対する第XI因子の阻害パーセントとして示す。表５２に示されるように、第XI因子ｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理された細胞において、用量依存方式で減少した。
各々のオリゴヌクレオチドの半最大阻害濃度（ＩＣ５０）は、用いられたアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度を、各々の濃度で達成された第XI因子ｍＲＮＡ発現の阻害パーセントに対してプロットし、そしてＰＢＳ対照と比較して第XI因子ｍＲＮＡ発現の５０％阻害を達成したアンチセンスオリゴヌクレオチド濃度に注目することによって計算した。ＩＣ５０値を、表５２に示す。
Figure 2012524068
実施例１６：ＨｅｐＧ２細胞中における、ミクロウォークで設計されたオリゴヌクレオチドによるヒト第XI因子の用量依存性アンチセンス阻害
更に別のギャップマーを、ＩＳＩＳ４１６８５０およびＩＳＩＳ４１６８５８に基づいて設計した（上の表８を参照されたい）。これらギャップマーは、ＩＳＩＳ４１６８５０およびＩＳＩＳ４１６８５８の上流および下流に僅かにシフトしている（すなわち、ミクロウォーク）。ミクロウォークで設計されたギャップマーは、３−８−３ＭＯＥ、４−８−４ＭＯＥ、２−１０−２ＭＯＥ、３−１０−３ＭＯＥまたは４−１０−４ＭＯＥモチーフを有する。
これらギャップマーを、ＨｅｐＧ２細胞中においていろいろな用量で調べた。細胞は、２０，０００個／ウェルの細胞密度で平板培養し、そしてエレクトロポレーションを用いて、表５４に明記される３７５ｎＭ、７５０ｎＭ、１，５００ｎＭ、３，０００ｎＭ、６，０００ｎＭおよび１２，０００ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクションした。約１６時間の処理時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そして第XI因子ｍＲＮＡレベルを、定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒト第XI因子プライマー・プローブセットＲＴＳ２９６６を用いて、ｍＲＮＡレベルを測定した。第XI因子ｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮで測定される全ＲＮＡ含量によって調整した。結果は、未処理対照細胞に相対する第XI因子の阻害パーセントとして示す。
ＩＳＩＳ４１６８５０、ＩＳＩＳ４１６８５８、ＩＳＩＳ４４５５２２およびＩＳＩＳ４４５５３１（上の表５２を参照されたい）を、上記と同じ条件下において、ミクロウォークギャップマーと一緒に in vitro 再試験した。
表５３のキメラのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、３−８−３ＭＯＥ、４−８−４ＭＯＥ、２−１０−２ＭＯＥ、３−１０−３ＭＯＥまたは４−１０−４ＭＯＥギャップマーとして設計した。３−８−３ギャップマーは、１４ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、８個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々３ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。４−８−４ギャップマーは、１６ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、８個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々４ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。２−１０−２ギャップマーは、１４ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々２ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。３−１０−３ギャップマーは、１６ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々３ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。４−１０−４ギャップマーは、１８ヌクレオチド長さであり、ここにおいて、中心ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオチドから構成され、そして両側に（５’および３’方向に）、各々４ヌクレオチドを含むウィングが隣接している。各々のモチーフ（３−８−３、４−８−４、２−１０−２、３−１０−３および４−１０−４）について、５’ウィングセグメント中の各々のヌクレオチドおよび３’ウィングセグメント中の各々のヌクレオチドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。各々のギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。各々のギャップマー中のシチジン残基は全て、５−メチルシチジンである。「ヒト標的出発部位」は、ギャップマーに標的とされているヒト配列中の最も５’のヌクレオチドを示す。「ヒト標的停止部位」は、ギャップマーに標的とされているヒト配列中の最も３’のヌクレオチドを示す。表５３に挙げられているギャップマーは各々、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０００１２８．３）を標的としている。表５３にある各々のギャップマーは、本明細書中においてＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７４（エクソン１−１５のＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＷ＿００１１１８１６７．１）と称されるアカゲザル第XI因子遺伝子配列と完全に交差反応性でもある。「アカゲザル出発部位」は、ギャップマーに標的とされているアカゲザル配列中の最も５’のヌクレオチドを示す。「アカゲザル停止部位」は、ギャップマーに標的とされているアカゲザル配列に最も３’のヌクレオチドを示す。
Figure 2012524068
用量反応阻害データを、表５４に与える。表５４に示されるように、第XI因子ｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド被処置細胞において用量依存方式で減少した。アンチセンスオリゴヌクレオチド各々のＩＣ５０も計算し、表５４に示した。表５４に挙げられている最初の二つのギャップマーは、残りのギャップマーがミクロウォークによって設計された元のギャップマー（ＩＳＩＳ４１６８５０およびＩＳＩＳ４１６８５８）であり、星印で示されている。
Figure 2012524068
実施例１７：ＣＤ１マウスにおけるヒト第XI因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドの耐容性
ＣＤ１マウスを、ヒト第XI因子に標的指向するＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、そしていろいろな代謝マーカーのレベルの変化について評価した。
処置
各５匹のＣＤ１マウスの群に、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４１６８２５、ＩＳＩＳ４１６８２６、ＩＳＩＳ４１６８３８、ＩＳＩＳ４１６８５０、ＩＳＩＳ４１６８５８、ＩＳＩＳ４１６８６４、ＩＳＩＳ４１６８９２、ＩＳＩＳ４１６９２５、ＩＳＩＳ４１６９９９、ＩＳＩＳ４１７００２またはＩＳＩＳ４１７００３を、週２回２週間、４週間または６週間皮下注射した。対照群の５匹のマウスには、ＰＢＳを２週間皮下注射した。全ての実験群（すなわち、２週間、４週間、６週間でのＡＳＯ被処置マウス）を、対照群（すなわち、ＰＢＳ、２週間）と比較した。
最後の用量を全ての群に投与後３日に、マウスを屠殺した。臓器重量を測定し、そして血液を、更なる分析用に集めた。
臓器重量
肝、脾臓および腎臓重量は、研究の最後に測定したが、表５５、表５６および表５７に、体重に規格化されたＰＢＳ対照のパーセントとして示されている。ＰＢＳ対照より上の、肝および脾臓重量の６倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
Figure 2012524068
Figure 2012524068
肝機能
肝機能へのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの作用を評価するために、トランスアミナーゼの血漿濃度を、自動臨床化学分析器（Hitachi Olympus ＡＵ４００ｅ，Melville, NY）を用いて測定した。アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）の測定値は、ＩＵ／Ｌで表し、それら結果を、表５８および表５９に示す。ビリルビンおよびアルブミンの血漿レベルも、同じ臨床化学分析器を用いて測定し、ｍｇ／ｄＬで表した。それら結果を、表６０および表６１に示す。ＡＬＴ／ＡＳＴレベルの、対照レベルの７倍より上の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。ビリルビンレベルを対照レベルの２倍しか増加させなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
Figure 2012524068
Figure 2012524068
Figure 2012524068
腎機能
腎機能へのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの作用を評価するために、血中尿素窒素（ＢＵＮ）およびクレアチニンの血漿濃度を、自動臨床化学分析器（Hitachi Olympus ＡＵ４００ｅ，Melville, NY）を用いて測定した。結果を、表６２および表６３に示し、ｍｇ／ｄＬで表している。ＢＵＮレベルの、ＰＢＳ対照と比較して２倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
Figure 2012524068
血液学検定
全てのマウス群から得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）、平均赤血球容積（ＭＣＶ）、平均赤血球ヘモグロビン（ＭＣＨ）および平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）の測定および分析、更には、ＷＢＣ（好中球、リンパ球および単球）、ＲＢＣおよび血小板などのいろいろな血液細胞および全ヘモグロビン含量の測定のために、Antech Diagnostics へ送った。それら結果を、表６４〜７４に示す。それら表に与えられている百分率は、全血液細胞計数のパーセントを示す。５０％より大の血小板計数の低下および／または３倍より大の単球計数の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
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実施例１８：ＣＤ１マウス肝におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの半減期の測定
ＣＤ１マウスを、ヒト第XI因子に標的指向するＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、そしてオリゴヌクレオチド半減期、更には、肝からのオリゴヌクレオチドの分解および排除の経過時間を評価した。
処置
各１５匹のＣＤ１マウスの群に、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４１６８２５、ＩＳＩＳ４１６８２６、ＩＳＩＳ４１６８３８、ＩＳＩＳ４１６８５０、ＩＳＩＳ４１６８５８、ＩＳＩＳ４１６８６４、ＩＳＩＳ４１６８９２、ＩＳＩＳ４１６９２５、ＩＳＩＳ４１６９９９、ＩＳＩＳ４１７００２またはＩＳＩＳ４１７００３を、週２回２週間皮下注射した。最終用量後３日、２８日および５６日に、各群から５匹ずつのマウスを屠殺した。肝を分析用に採取した。
オリゴヌクレオチド濃度の測定
完全長オリゴヌクレオチドの濃度、更には、（分解された形を含めた）全オリゴヌクレオチド濃度を測定した。用いられる方法は、従来公表された、フェノール−クロロホルム（液−液）抽出後、固相抽出から成る方法（Leeds et al., 1996; Geary et al., 1999）の修飾である。内部標準（ＩＳＩＳ３５５８６８、２７マーの２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、ＧＣＧＴＴＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＣＧＴＴＴＴＴＴ、本明細書中においてＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７０と称される）を加えた後、抽出を行った。組織試料濃度は、検量線を用いて、約１．１４μｇ／ｇの定量下限（ＬＬＯＱ）で計算した。次に、半減期を、WinNonlin ソフトウェア（ＰＨＡＲＳＩＧＨＴ）を用いて計算した。
それら結果を、表７５および表７６に示し、μｇ／ｇ（肝組織）として表している。各々のオリゴヌクレオチドの半減期を、表７７に示す。
Figure 2012524068
Figure 2012524068
Figure 2012524068
実施例１９：Sprague-Dawley ラットにおける、ヒト第XI因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドの耐容性
Sprague-Dawley ラットを、ヒト第XI因子に標的指向するＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、そしていろいろな代謝マーカーのレベルの変化について評価した。
処置
各４匹の Sprague Dawley ラットの群に、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４１６８２５、ＩＳＩＳ４１６８２６、ＩＳＩＳ４１６８３８、ＩＳＩＳ４１６８５０、ＩＳＩＳ４１６８５８、ＩＳＩＳ４１６８４８、ＩＳＩＳ４１６８６４、ＩＳＩＳ４１６８９２、ＩＳＩＳ４１６９２５、ＩＳＩＳ４１６９９９、ＩＳＩＳ４１７００２またはＩＳＩＳ４１７００３を、週２回６週間皮下注射した。対照群の４匹の Sprague Dawley ラットに、ＰＢＳを週２回６週間皮下注射した。体重測定値を、処置期間の前と期間中に得た。尿試料を、処置の開始前に得た。最後の用量後３日に、尿試料を得、そしてラットを屠殺した。臓器重量を測定し、そして血液を、更なる分析用に集めた。
体重および臓器重量
ラットの体重を、研究の開始時と、その後週２回測定した。体重は、表７８に示し、研究の開始時に得られた体重への変化パーセントとして表されている。肝、脾臓および腎臓重量は、研究の最後に測定したが、表７８に、体重に規格化された生理食塩水対照のパーセントとして示されている。ＰＢＳ対照より上の、肝および脾臓重量の６倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
肝機能
肝機能へのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの作用を評価するために、トランスアミナーゼの血漿濃度を、自動臨床化学分析器（Hitachi Olympus ＡＵ４００ｅ，Melville, NY）を用いて測定した。アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）の測定値は、ＩＵ／Ｌで表し、それら結果を、表７９に示す。ＡＬＴ／ＡＳＴレベルの、対照レベルの７倍より上の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。ビリルビンおよびアルブミンの血漿レベルも、同じ臨床分析器を用いて測定したが、それら結果も、表７９に示し、ｍｇ／ｄＬで表している。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置により、ビリルビンのレベルの、対照レベルの２倍より大の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
腎機能
腎機能の作用を評価するために、血中尿素窒素（ＢＵＮ）およびクレアチニンの血漿濃度を、自動臨床化学分析器（Hitachi Olympus ＡＵ４００ｅ，Melville, NY）を用いて測定した。結果を、表８０に示し、ｍｇ／ｄＬで表している。ＢＵＮレベルの、ＰＢＳ対照と比較して２倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。全尿試料中の尿タンパク質対クレアチニンの比率も、アンチセンスオリゴヌクレオチド処置の前と後に計算しており、表８１に示す。尿タンパク質／クレアチニン比の、ＰＢＳ対照と比較して５倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
Figure 2012524068
血液学検定
全てのラット群から得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）、平均赤血球容積（ＭＣＶ）、平均赤血球ヘモグロビン（ＭＣＶ）および平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）の測定および分析、更には、ＷＢＣ（好中球、リンパ球および単球）、ＲＢＣおよび血小板などのいろいろな血液細胞並びに全ヘモグロビン含量の測定のために、Antech Diagnostics へ送った。それら結果を、表８２および表８３に示す。５０％より大の血小板計数の低下および３倍より大の単球計数の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
Figure 2012524068
実施例２０：Sprague-Dawley ラット肝および腎臓におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの半減期の測定
Sprague Dawley ラットを、ヒト第XI因子に標的指向するＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、そしてオリゴヌクレオチド半減期、更には、肝および腎臓からのオリゴヌクレオチドの分解および排除の経過時間を評価した。
処置
各４匹の Sprague Dawley ラットの群に、２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４１６８２５、ＩＳＩＳ４１６８２６、ＩＳＩＳ４１６８３８、ＩＳＩＳ４１６８５０、ＩＳＩＳ４１６８５８、ＩＳＩＳ４１６８６４、ＩＳＩＳ４１６８９２、ＩＳＩＳ４１６９２５、ＩＳＩＳ４１６９９９、ＩＳＩＳ４１７００２またはＩＳＩＳ４１７００３を、週２回２週間皮下注射した。最終用量後３日に、ラットを屠殺し、そして肝および腎臓を、分析用に集めた。
オリゴヌクレオチド濃度の測定
完全長オリゴヌクレオチドの濃度、更には、（分解された形を含めた）全オリゴヌクレオチド濃度を測定した。用いられる方法は、従来公表された、フェノール−クロロホルム（液−液）抽出後、固相抽出から成る方法（Leeds et al., 1996; Geary et al., 1999）の修飾である。内部標準（ＩＳＩＳ３５５８６８、２７マーの２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、ＧＣＧＴＴＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＣＧＴＴＴＴＴＴ、本明細書中においてＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７０と称される）を加えた後、抽出を行った。組織試料濃度は、検量線を用いて、約１．１４μｇ／ｇの定量下限（ＬＬＯＱ）で計算した。それら結果を、表８４および表８５に示し、μｇ／ｇ（肝または腎臓組織）として表している。次に、半減期を、WinNonlin ソフトウェア（ＰＨＡＲＳＩＧＨＴ）を用いて計算し、表８６に示した。
Figure 2012524068
Figure 2012524068
Figure 2012524068
実施例２１：ＣＤ１マウスにおけるヒト第XI因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドの耐容性
ＣＤ１マウスを、ヒト第XI因子に標的指向するＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、そしていろいろな代謝マーカーのレベルの変化について評価した。
処置
各５匹のＣＤ１マウスの群に、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４１２２２３、ＩＳＩＳ４１２２２４、ＩＳＩＳ４１２２２５、ＩＳＩＳ４１３４８１、ＩＳＩＳ４１３４８２、ＩＳＩＳ４１６８４８、ＩＳＩＳ４１６８４９、ＩＳＩＳ４１６８５０、ＩＳＩＳ４１６８５１、ＩＳＩＳ４１６８５２、ＩＳＩＳ４１６８５３、ＩＳＩＳ４１６８５４、ＩＳＩＳ４１６８５５、ＩＳＩＳ４１６８５６、ＩＳＩＳ４１６８５７、ＩＳＩＳ４１６８５８、ＩＳＩＳ４１６８５９、ＩＳＩＳ４１６８６０、ＩＳＩＳ４１６８６１、ＩＳＩＳ４１６８６２、ＩＳＩＳ４１６８６３、ＩＳＩＳ４１６８６４、ＩＳＩＳ４１６８６５、ＩＳＩＳ４１６８６６またはＩＳＩＳ４１６８６７を、週２回６週間皮下注射した。対照群の１０匹のマウスには、ＰＢＳを週２回６週間皮下注射した。体重測定値を、処置期間の前と期間中に得た。最後の用量後３日に、マウスを屠殺し、臓器重量を測定し、そして血液を、更なる分析用に集めた。
体重および臓器重量
体重は、研究の開始時と、その後週２回測定した。マウスの体重を、表８７に示し、処置の開始前に得られたＰＢＳ対照体重へのグラムでの増加を表している。肝、脾臓および腎臓重量は、研究の最後に測定したが、それらも、表８７に、体重の百分率として示されている。ＰＢＳ対照より上の、肝および脾臓重量の６倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
肝機能
肝機能へのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの作用を評価するために、トランスアミナーゼの血漿濃度を、自動臨床化学分析器（Hitachi Olympus ＡＵ４００ｅ，Melville, NY）を用いて測定した。アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）の測定値は、ＩＵ／Ｌで表し、それら結果を、表８８に示す。ＡＬＴ／ＡＳＴレベルの、対照レベルの７倍より上の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。ビリルビン、コレステロールおよびアルブミンの血漿レベルも、同じ臨床化学分析器を用いて測定したが、表８８に示し、ｍｇ／ｄＬで表している。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置により、ビリルビンのレベルの、対照レベルの２倍より大の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
腎機能
腎機能へのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの作用を評価するために、血中尿素窒素（ＢＵＮ）の血漿濃度を、自動臨床化学分析器を用いて測定したが、結果は、表８９に示し、ｍｇ／ｄＬで表している。ＢＵＮレベルの、ＰＢＳ対照と比較して２倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
血液学検定
全てのマウス群から得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）測定、更には、ＷＢＣ（好中球、リンパ球および単球）、ＲＢＣおよび血小板などのいろいろな血液細胞の測定、更には、全ヘモグロビン含量分析のために、Antech Diagnostics へ送った。それら結果を、表９０および表９１に示す。５０％より大の血小板計数の低下および３倍より大の単球計数の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
Figure 2012524068
実施例２２：ＣＤ１マウス肝におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの半減期の測定
ＣＤ１マウスにおいて評価された（実施例２１）１５種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更に評価した。ＣＤ１マウスを、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、そしてオリゴヌクレオチド半減期、更には、肝中のオリゴヌクレオチドの分解および排除の経過時間を評価した。
処置
各１５匹のＣＤ１マウスの群に、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４１２２２３、ＩＳＩＳ４１２２２５、ＩＳＩＳ４１３４８１、ＩＳＩＳ４１３４８２、ＩＳＩＳ４１６８５１、ＩＳＩＳ４１６８５２、ＩＳＩＳ４１６８５６、ＩＳＩＳ４１６８６０、ＩＳＩＳ４１６８６１、ＩＳＩＳ４１６８６３、ＩＳＩＳ４１６８６６、ＩＳＩＳ４１６８６７、ＩＳＩＳ４１２２２４、ＩＳＩＳ４１６８４８またはＩＳＩＳ４１６８５９を、週２回２週間皮下注射した。最終用量後３日、２８日および５６日に、各群から５匹ずつのマウスを屠殺し、肝を分析用に集めた。
オリゴヌクレオチド濃度の測定
完全長オリゴヌクレオチドの濃度を測定した。用いられる方法は、従来公表された、フェノール−クロロホルム（液−液）抽出後、固相抽出から成る方法（Leeds et al., 1996; Geary et al., 1999）の修飾である。内部標準（ＩＳＩＳ３５５８６８、２７マーの２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、ＧＣＧＴＴＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＣＧＴＴＴＴＴＴ、本明細書中においてＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７０と称される）を加えた後、抽出を行った。組織試料濃度は、検量線を用いて、約１．１４μｇ／ｇの定量下限（ＬＬＯＱ）で計算した。それら結果を、表９２に示し、μｇ／ｇ（肝組織）として表している。各々のオリゴヌクレオチドの半減期も、表９２に示した。
Figure 2012524068
実施例２３：Sprague-Dawley ラットにおける、ヒト第XI因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドの耐容性
ＣＤ１マウスにおいて評価された（実施例２１）１５種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、Sprague-Dawley ラットにおいて、いろいろな代謝マーカーのレベルの変化について更に評価した。
処置
各４匹の Sprague Dawley ラットの群に、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４１２２２３、ＩＳＩＳ４１２２２４、ＩＳＩＳ４１２２２５、ＩＳＩＳ４１３４８１、ＩＳＩＳ４１３４８２、ＩＳＩＳ４１６８４８、ＩＳＩＳ４１６８５１、ＩＳＩＳ４１６８５２、ＩＳＩＳ４１６８５６、ＩＳＩＳ４１６８５９、ＩＳＩＳ４１６８６０、ＩＳＩＳ４１６８６１、ＩＳＩＳ４１６８６３、ＩＳＩＳ４１６８６６またはＩＳＩＳ４１６８６７を、週２回６週間皮下注射した。対照群の４匹の Sprague Dawley ラットに、ＰＢＳを週２回６週間皮下注射した。体重測定値を、処置期間の前と期間中に得た。最後の用量後３日に、尿試料を集めた後、ラットを屠殺し、臓器重量を測定し、そして血液を、更なる分析用に集めた。
体重および臓器重量
ラットの体重を、研究の開始時と、その後週２回測定した。体重は、表９３に示し、処置の開始前に得られたＰＢＳ対照体重へのグラムでの増加として表されている。肝、脾臓および腎臓重量は、研究の最後に測定したが、それも、表９３に、体重の百分率として示されている。ＰＢＳ対照より上の、肝および脾臓重量の６倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
肝機能
肝機能へのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの作用を評価するために、トランスアミナーゼの血漿濃度を、自動臨床化学分析器（Hitachi Olympus ＡＵ４００ｅ，Melville, NY）を用いて測定した。アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）の測定値は、ＩＵ／Ｌで表し、それら結果を、表９４に示す。ＡＬＴ／ＡＳＴレベルの、対照レベルの７倍より上の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。ビリルビンおよびアルブミンの血漿レベルも、同じ臨床化学分析器を用いて測定したが、それら結果も、表９４に示し、ｍｇ／ｄＬで表している。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置により、ビリルビンのレベルの、対照レベルの２倍より大の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
腎機能
腎機能へのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの作用を評価するために、血中尿素窒素（ＢＵＮ）およびクレアチニンの血漿濃度を、自動臨床化学分析器（Hitachi Olympus ＡＵ４００ｅ，Melville, NY）を用いて測定した。結果を、表９５に示し、ｍｇ／ｄＬで表している。ＢＵＮレベルの、ＰＢＳ対照と比較して２倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置後の全尿タンパク質および全尿試料中の尿タンパク質対クレアチニンの比率を計算したが、それも、表９５に示す。尿タンパク質／クレアチニン比の、ＰＢＳ対照と比較して５倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
血液学検定
全てのラット群から得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）測定、更には、ＷＢＣ（好中球およびリンパ球）、ＲＢＣおよび血小板などのいろいろな血液細胞、並びに全ヘモグロビン含量の測定のために、Antech Diagnostics へ送った。それら結果を、表９６および表９７に示す。５０％より大の血小板計数の低下および３倍より大の単球計数の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
Figure 2012524068
実施例２４：Sprague-Dawley ラットの肝および腎臓におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの半減期の測定
Sprague Dawley ラットを、ヒト第XI因子に標的指向するＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、そしてオリゴヌクレオチド半減期、更には、肝および腎臓からのオリゴヌクレオチドの分解および排除の経過時間を評価した。
処置
各４匹の Sprague Dawley ラットの群に、２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４１２２２３、ＩＳＩＳ４１２２２４、ＩＳＩＳ４１２２２５、ＩＳＩＳ４１３４８１、ＩＳＩＳ４１３４８２、ＩＳＩＳ４１６８４８、ＩＳＩＳ４１６８５１、ＩＳＩＳ４１６８５２、ＩＳＩＳ４１６８５６、ＩＳＩＳ４１６８５９、ＩＳＩＳ４１６８６０、ＩＳＩＳ４１６８６１、ＩＳＩＳ４１６８６３、ＩＳＩＳ４１６８６６またはＩＳＩＳ４１６８６７を、週２回２週間皮下注射した。最終用量後３日に、ラットを屠殺し、そして肝および腎臓を採取した。
オリゴヌクレオチド濃度の測定
完全長オリゴヌクレオチドの濃度、更には、（分解された形を含めた）全オリゴヌクレオチド濃度を測定した。用いられる方法は、従来公表された、フェノール−クロロホルム（液−液）抽出後、固相抽出から成る方法（Leeds et al., 1996; Geary et al., 1999）の修飾である。内部標準（ＩＳＩＳ３５５８６８、２７マーの２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、ＧＣＧＴＴＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＣＧＴＴＴＴＴＴ、本明細書中においてＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７０と称される）を加えた後、抽出を行った。組織試料濃度は、検量線を用いて、約１．１４μｇ／ｇの定量下限（ＬＬＯＱ）で計算した。それら結果を、表９８および表９９に示し、μｇ／ｇ（肝または腎臓組織）として表している。次に、半減期を、WinNonlin ソフトウェア（ＰＨＡＲＳＩＧＨＴ）を用いて計算し、表１００に示した。
Figure 2012524068
Figure 2012524068
Figure 2012524068
実施例２５：ＣＤ１マウスにおけるヒト第XI因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドの耐容性
ヒト第XI因子に標的指向する、６−８−６ＭＯＥおよび５−８−５ＭＯＥモチーフを有するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、ＣＤ１マウスに投与し、いろいろな代謝マーカーのレベルの変化について評価した。
処置
各５匹のＣＤ１マウスの群に、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４１６８５０、ＩＳＩＳ４４５４９８、ＩＳＩＳ４４５５０３、ＩＳＩＳ４４５５０４、ＩＳＩＳ４４５５０５、ＩＳＩＳ４４５５０９、ＩＳＩＳ４４５５１３、ＩＳＩＳ４４５５２２、ＩＳＩＳ４４５５３０、ＩＳＩＳ４４５５３１またはＩＳＩＳ４４５５３２を、週２回６週間皮下注射した。対照群の５匹のマウスには、ＰＢＳを週２回６週間皮下注射した。体重測定値を、処置期間の前と最後に得た。最後の用量後３日に、マウスを屠殺し、臓器重量を測定し、そして血液を、更なる分析用に集めた。
体重および臓器重量
マウスの体重変化は、表１０１に示し、処置の開始前に得られたＰＢＳ対照体重へのグラムでの増加を表している。肝、脾臓および腎臓重量は、研究の最後に測定したが、それらも、表１０１に、体重の百分率として示されている。ＰＢＳ対照より上の、肝および脾臓重量の６倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
肝機能
肝機能へのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの作用を評価するために、トランスアミナーゼの血漿濃度を、自動臨床化学分析器（Hitachi Olympus ＡＵ４００ｅ，Melville, NY）を用いて測定した。アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）の測定値は、ＩＵ／Ｌで表し、それら結果を、表１０２に示す。ＡＬＴ／ＡＳＴレベルの、対照レベルの７倍より上の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。ビリルビンおよびアルブミンの血漿レベルも測定したが、それら結果も、表１０２に示し、ｍｇ／ｄＬで表している。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置により、ビリルビンのレベルの、対照レベルの２倍より大の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
腎機能
腎機能へのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの作用を評価するために、血中尿素窒素（ＢＵＮ）の血漿濃度を、自動臨床化学分析器（Hitachi Olympus ＡＵ４００ｅ，Melville, NY）を用いて測定した。結果は、表１０３に示し、ｍｇ／ｄＬで表している。ＢＵＮレベルの、ＰＢＳ対照と比較して２倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
血液学検定
全てのマウス群から得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）測定、更には、ＷＢＣ（好中球およびリンパ球）、ＲＢＣおよび血小板などのいろいろな血液細胞、および全ヘモグロビン含量の測定のために、Antech Diagnostics へ送った。それら結果を、表１０４および表１０５に示す。５０％より大の血小板計数の低下および３倍より大の単球計数の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
Figure 2012524068
実施例２６：Sprague-Dawley ラットにおける、ヒト第XI因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドの耐容性
ＣＤ１マウスにおいて評価された（実施例２５）８種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、Sprague-Dawley ラットにおいて、いろいろな代謝マーカーのレベルの変化について更に評価した。
処置
各４匹の Sprague Dawley ラットの群に、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４４５４９８、ＩＳＩＳ４４５５０４、ＩＳＩＳ４４５５０５、ＩＳＩＳ４４５５０９、ＩＳＩＳ４４５５１３、ＩＳＩＳ４４５５２２、ＩＳＩＳ４４５５３０またはＩＳＩＳ４４５５３１を、週２回６週間皮下注射した。対照群の Sprague Dawley ラットに、ＰＢＳを週２回６週間皮下注射した。体重測定値を、処置期間の前と期間中に得た。最後の用量後３日に、尿試料を集めた後、ラットを屠殺し、臓器重量を測定し、そして血液を、更なる分析用に集めた。
体重および臓器重量
ラットの体重を、研究の開始時と、その後週２回測定した。体重は、表１０６に示し、処置の開始前に得られたＰＢＳ対照体重へのグラムでの増加として表されている。肝、脾臓および腎臓重量は、研究の最後に測定したが、それも、表１０６に、体重の百分率として示されている。ＰＢＳ対照より上の、肝および脾臓重量の６倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
肝機能
肝機能へのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの作用を評価するために、トランスアミナーゼの血漿濃度を、自動臨床化学分析器（Hitachi Olympus ＡＵ４００ｅ，Melville, NY）を用いて測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）およびＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿濃度を測定したが、それら結果は、表１０７に示し、ＩＵ／Ｌで表している。ＡＬＴ／ＡＳＴレベルの、対照レベルの７倍より上の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。ビリルビンおよびアルブミンの血漿レベルも、同じ臨床化学分析器を用いて測定した；それら結果を、表１０７に示し、ｍｇ／ｄＬで表している。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置により、ビリルビンのレベルの、対照レベルの２倍より大の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
腎機能
腎機能へのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの作用を評価するために、血中尿素窒素（ＢＵＮ）およびクレアチニンの血漿濃度を、自動臨床化学分析器（Hitachi Olympus ＡＵ４００ｅ，Melville, NY）を用いて測定した。結果を、表１０８に示し、ｍｇ／ｄＬで表している。ＢＵＮレベルの、ＰＢＳ対照と比較して２倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置後の全尿タンパク質および全尿試料中の尿タンパク質対クレアチニンの比率を計算したが、それも、表１０８に示す。尿タンパク質／クレアチニン比の、ＰＢＳ対照と比較して５倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
血液学検定
全てのラット群から得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）測定、更には、ＷＢＣ（好中球、リンパ球および単球）、ＲＢＣおよび血小板などのいろいろな血液細胞、および全ヘモグロビン含量の測定のために、Antech Diagnostics へ送った。それら結果を、表１０９および表１１０に示す。５０％より大の血小板計数の低下および３倍より大の単球計数の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
Figure 2012524068
実施例２７：ＣＤ１マウスにおけるヒト第XI因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドの耐容性
ヒト第XI因子に標的指向する、４−８−４ＭＯＥ、３−８−３ＭＯＥ、２−１０−２ＭＯＥ、３−１０−３ＭＯＥおよび４−１０−４ＭＯＥモチーフを有するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、ＣＤ１マウスに投与し、いろいろな代謝マーカーのレベルの変化について評価した。
処置
各５匹のＣＤ１マウスの群に、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４４９７０７、ＩＳＩＳ４４９７０８、ＩＳＩＳ４４９４０９、ＩＳＩＳ４４９７１０またはＩＳＩＳ４４９７１１を、週２回６週間皮下注射した。対照群の５匹のマウスには、ＰＢＳを週２回６週間皮下注射した。体重測定値を、処置期間の前と最後に得た。最後の用量後３日に、マウスを屠殺し、臓器重量を測定し、そして血液を、更なる分析用に集めた。
体重および臓器重量
研究の最後に得られたマウスの体重を、表１１１に示し、グラムで表している。肝、脾臓および腎臓重量も、研究の最後に測定したが、それらも、表１１１に、体重の百分率として示されている。ＰＢＳ対照より上の、肝および脾臓重量の６倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
肝機能
肝機能へのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの作用を評価するために、トランスアミナーゼの血漿濃度を、自動臨床化学分析器（Hitachi Olympus ＡＵ４００ｅ，Melville, NY）を用いて測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）およびＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿濃度を測定したが、それら結果は、表１１２に示し、ＩＵ／Ｌで表している。ＡＬＴ／ＡＳＴレベルの、対照レベルの７倍より上の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。ビリルビンおよびアルブミンの血漿レベルも、同じ臨床化学分析器を用いて測定したが、結果を表１１２に示し、ｍｇ／ｄＬで表している。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置により、ビリルビンのレベルの、対照レベルの２倍より大の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
腎機能
腎機能へのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの作用を評価するために、血中尿素窒素（ＢＵＮ）およびクレアチニンの血漿濃度を、自動臨床化学分析器（Hitachi Olympus ＡＵ４００ｅ，Melville, NY）を用いて測定した。結果は、表１１３に示し、ｍｇ／ｄＬで表している。ＢＵＮレベルの、ＰＢＳ対照と比較して２倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
血液学検定
全てのマウス群から得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）測定、更には、ＷＢＣ（好中球、リンパ球および単球）、ＲＢＣおよび血小板などのいろいろな血液細胞、および全ヘモグロビン含量の測定のために、Antech Diagnostics へ送った。それら結果を、表１１４および表１１５に示す。５０％より大の血小板計数の低下および３倍より大の単球計数の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
Figure 2012524068
実施例２８：Sprague-Dawley ラットにおける、ヒト第XI因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドの耐容性
ＣＤ１マウスにおいて評価された（実施例２７）５種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、Sprague-Dawley ラットにおいて、いろいろな代謝マーカーのレベルの変化について更に評価した。
処置
各４匹の Sprague Dawley ラットの群に、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４４９７０７、ＩＳＩＳ４４９７０８、ＩＳＩＳ４４９７０９、ＩＳＩＳ４４９７１０またはＩＳＩＳ４４９７１１を、週２回６週間皮下注射した。対照群の４匹の Sprague Dawley ラットに、ＰＢＳを週２回６週間皮下注射した。体重測定値を、処置期間の前と期間中に得た。最後の用量後３日に、尿試料を集めた後、ラットを屠殺し、臓器重量を測定し、そして血液を、更なる分析用に集めた。
体重および臓器重量
ラットの体重を、研究の開始時および研究の最後に測定した。体重変化を、表１１６に示し、処置の開始前に得られたＰＢＳ対照体重へのグラムでの増加として表している。肝、脾臓および腎臓重量は、研究の最後に測定したが、それも、表１１６に、体重の百分率として示している。ＰＢＳ対照より上の、肝および脾臓重量の６倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
肝機能
肝機能へのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの作用を評価するために、ＡＬＴおよびＡＳＴの血漿濃度を、自動臨床化学分析器（Hitachi Olympus ＡＵ４００ｅ，Melville, NY）を用いて測定した。アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）の血漿濃度を測定したが、それら結果は、表１１７に示し、ＩＵ／Ｌで表している。ＡＬＴ／ＡＳＴレベルの、対照レベルの７倍より上の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。ビリルビンおよびアルブミンの血漿レベルも測定したが、結果は、表１１７に示し、ｍｇ／ｄＬで表している。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置により、ビリルビンのレベルの、対照レベルの２倍より大の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
腎機能
腎機能へのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、ＢＵＮおよびクレアチニンの血漿濃度を、自動臨床化学分析器（Hitachi Olympus ＡＵ４００ｅ，Melville, NY）を用いて測定した。結果を、表１１８に示し、ｍｇ／ｄＬで表している。ＢＵＮレベルの、ＰＢＳ対照と比較して２倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置後の全尿タンパク質および全尿試料中の尿タンパク質対クレアチニンの比率を計算したが、それも、表１１８に示す。尿タンパク質／クレアチニン比の、ＰＢＳ対照と比較して５倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
血液学検定
全てのラット群から得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）測定、更には、ＷＢＣ（好中球、リンパ球および単球）、ＲＢＣおよび血小板などのいろいろな血液細胞、および全ヘモグロビン含量の測定のために、Antech Diagnostics へ送った。それら結果を、表１１９および表１２０に示す。５０％より大の血小板計数の低下および３倍より大の単球計数の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
Figure 2012524068
実施例２９：カニクイザルにおける、ヒト第XI因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドの用量依存性薬理作用
いくつかのアンチセンスオリゴヌクレオチドを、カニクイザルにおいて調べて、第XI因子活性、抗凝固および出血時間、肝および腎臓分布、および耐容性へのそれらオリゴヌクレオチドの薬理作用を決定した。この研究に用いられたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドは全て、ヒト第XI因子ｍＲＮＡに標的指向し、そして更に、アカゲザル遺伝子配列と完全に交差反応性である（表５１を参照されたい）。アカゲザルＩＳＩＳオリゴヌクレオチドは、更に、カニクイザル遺伝子配列と完全に交差反応性であると考えられる。研究を行った時点で、カニクイザルゲノム配列は、National Center for Biotechnology Information（ＮＣＢＩ）データベースで利用不能であった；したがって、カニクイザル遺伝子配列との交差反応性は、確かめることができなかった。
処置
各々、２頭の雄サルおよび３頭の雌サルから成る群に、ＩＳＩＳ４１６８３８、ＩＳＩＳ４１６８５０、ＩＳＩＳ４１６８５８、ＩＳＩＳ４１６８６４またはＩＳＩＳ４１７００２を、段階的増加用量で皮下注射した。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、それらサルに、５ｍｇ／ｋｇで週３回を１週目；５ｍｇ／ｋｇで週２回を２週目および３週目；１０ｍｇ／ｋｇで週３回を４週目；１０ｍｇ／ｋｇで週２回を５週目および６週目；２５ｍｇ／ｋｇで週３回を７週目；そして２５ｍｇ／ｋｇで週２回を８週目、９週目、１０週目、１１週目および１２週目に投与した。２頭の雄サルおよび３頭の雌サルから成る一つの対照群に、同じ投与計画にしたがってＰＢＳを皮下注射した。２頭の雄サルおよび３頭の雌サルから成る追加の実験群に、ＩＳＩＳ４１６８５０を、長期の一層低用量の計画で皮下注射した。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、それらサルに、５ｍｇ／ｋｇで週３回を１週目；５ｍｇ／ｋｇで週２回を２週目および３週目；１０ｍｇ／ｋｇで週３回を４週目；そして１０ｍｇ／ｋｇで週２回を５〜１２週目に投与した。体重は、毎週測定した。血液試料は、血漿中の第XI因子タンパク質活性分析およびいろいろな血液学的因子の測定のために、処置の開始前１４日および５日と、その後週１回集めた。８５日目に、それらサルを、深麻酔下の間に全採血によって安楽死させ、そして臓器を、更なる分析用に採取した。
ＲＮＡ分析
８５日目に、ＲＮＡを、プライマー・プローブセットＬＴＳ００３０１（正プライマー配列ＡＣＡＣＧＣＡＴＴＡＡＡＡＡＧＡＧＣＡＡＡＧＣ、本明細書中においてＳＥＱ ＩＤ ＮＯ ２７１と称される；逆プライマー配列ＣＡＧＴＧＴＣＡＴＧＧＴＡＡＡＡＴＧＡＡＧＡＡＴＧＧ、本明細書中においてＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７２と称される；およびプローブ配列ＴＧＣＡＧＧＣＡＣＡＧＣＡＴＣＣＣＡＧＴＧＴＴＣＴＸ、ここにおいて、Ｘは、発蛍光団（fluorphore）であり、本明細書中においてＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２７３と称される）を用いた第XI因子のリアルタイムＰＣＲ分析用に、肝組織から抽出した。結果を、ＰＢＳ対照に相対する第XI因子の阻害パーセントとして示す。表１２１に示されるように、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドでの処置は、ＰＢＳ対照に比較して、第XI因子ｍＲＮＡの有意の減少を引き起こした。
Figure 2012524068
タンパク質分析
異なった日数で得られた全てのサル群からの血漿試料を、サンドイッチ型ＥＬＩＳＡ検定（Affinity Biologicals Inc.）により、アフィニティー精製した多クローン性抗第XI因子抗体を捕捉抗体としておよびペルオキシダーゼ結合多クローン性抗第XI因子抗体を検出用抗体として用いて分析した。サル血漿は、検定用に１：５０希釈した。ペルオキシダーゼ活性は、基質ｏ−フェニレンジアミンとのインキュベーションによって表した。生じた色は、ミクロプレートリーダーを用いて４９０ｎｍで定量したが、試料中の第XI因子の濃度に比例すると考えられた。
それら結果を、表１２２に示し、ＰＢＳ対照の場合に相対する減少百分率として表している。ＩＳＩＳ４１６８５０およびＩＳＩＳ４１６８５８での処置は、タンパク質レベルの時間依存性低下を引き起こした。
Figure 2012524068
体重および臓器重量
体重は、投与計画中に週１回得た。各々の群の測定値を、表１２３に、グラムで表して与える。それら結果は、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処置が、ＰＢＳ対照と比較して有意の体重変化を引き起こしたかもしれない被験動物の健康状態に不都合な変化を全く引き起こさなかったということを示している。臓器重量は、被験動物を安楽死させた後に得たが、肝、腎臓および脾臓を採取し且つ秤量した。それら結果は、表１２４に示すが、脾臓重量の増加を示しているＩＳＩＳ４１６８５８の場合を除いて、ＰＢＳ対照と比較して有意の体重変化がないことも示している。長期投与計画で与えられたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドであるＩＳＩＳ４１６８５０は、星印（＊）で、他のオリゴヌクレオチドと区別している。
Figure 2012524068
Figure 2012524068
肝機能
肝機能へのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、トランスアミナーゼの血漿濃度を、自動臨床化学分析器（Hitachi Olympus ＡＵ４００ｅ，Melville, NY）を用いて測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）およびＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿濃度を測定したが、それら結果は、表１２５および表１２６に示し、ＩＵ／Ｌで表している。ＡＬＴ／ＡＳＴレベルの、対照レベルの７倍より上の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。ビリルビンの血漿レベルも測定したが、結果を表１２７に示し、ｍｇ／ｄＬで表している。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置により、ビリルビンのレベルの、対照レベルの２倍より大の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。長期投与計画で与えられたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドであるＩＳＩＳ４１６８５０は、星印（＊）で、他のオリゴヌクレオチドと区別している。
Figure 2012524068
Figure 2012524068
Figure 2012524068
腎機能
腎機能へのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、尿試料を集めた。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置後の尿試料中の尿タンパク質対クレアチニンの比率を計算したが、表１２８に示している。ＰＢＳ対照と比較して、尿タンパク質／クレアチニン比の５倍増加しか影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。
Figure 2012524068
オリゴヌクレオチド濃度の測定
完全長オリゴヌクレオチドの濃度、更には、肝および腎臓からのオリゴヌクレオチドの分解および排除の経過時間を評価した。用いられる方法は、従来公表された、フェノール−クロロホルム（液−液）抽出後、固相抽出から成る方法（Leeds et al., 1996; Geary et al., 1999）の修飾である。内部標準（ＩＳＩＳ３５５８６８、２７マーの２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、ＧＣＧＴＴＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＣＧＴＴＴＴＴＴ、本明細書中においてＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７０と称される）を加えた後、抽出を行った。組織試料濃度は、検量線を用いて、約１．１４μｇ／ｇの定量下限（ＬＬＯＱ）で計算した。次に、半減期を、WinNonlin ソフトウェア（ＰＨＡＲＳＩＧＨＴ）を用いて計算した。それら結果を、表１２９および表１３０に示し、μｇ／ｇ（肝または腎臓組織）として表している。
Figure 2012524068
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血液学検定
全てのサル群から得た血液を、ＨＣＴ、ＭＣＶ、ＭＣＨおよびＭＣＨＣ分析、更には、ＷＢＣ（好中球、リンパ球、単球、好酸球、好塩基球、網状赤血球）、ＲＢＣ、血小板などのいろいろな血液細胞、および全ヘモグロビン含量の測定のために、Korea Institute of Toxicology（ＫＩＴ）へ送った。それら結果を、表１３１〜１４４に示す。５０％より大の血小板計数の低下および３倍より大の単球計数の増加に影響を与えなかったそれらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究用に選択した。長期投与計画で与えられたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドであるＩＳＩＳ４１６８５０は、星印（＊）で、他のオリゴヌクレオチドと区別している。
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サイトカインおよびケモカイン検定
段階的増加投与計画で投与されたＰＢＳ、ＩＳＩＳ４１６８５０およびＩＳＩＳ４１６８５８で処置されたサル群から得た血液試料を、ケモカインおよびサイトカインのレベルの測定のために、Pierce Biotechnology（Woburn, MA）へ送った。ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αのレベルを、それぞれの霊長類抗体を用いて測定し、そしてＩＬ−８、ＭＩＰ−１α、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１βおよびＲＡＮＴＥＳのレベルを、それぞれの交差反応性ヒト抗体を用いて測定した。測定値は、処置の開始前１４日と、それらサルを安楽死させた８５日目に得た。それら結果を、表１４５および表１４６に示す。
Figure 2012524068
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実施例３０：カニクイザルにおける、ヒト第XI因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドの薬理作用
齧歯類動物耐容性研究（実施例２５〜２８）より選択されたいくつかのアンチセンスオリゴヌクレオチドを、カニクイザルにおいて調べて、それらの薬理作用、第XI因子活性への相対効力、およびカニクイザルモデルにおける耐容性を決定した。それらアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更に、前の方に記載したサル研究（実施例２９）より選択されたＩＳＩＳ４１６８５０およびＩＳＩＳ４１６８５８と比較した。この研究に用いられたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドは全て、ヒト第XI因子ｍＲＮＡに標的指向し、そして更に、アカゲザル遺伝子配列と完全に交差反応性である（表５１および表５３を参照されたい）。アカゲザルＩＳＩＳオリゴヌクレオチドは、更に、カニクイザル遺伝子配列と完全に交差反応性であると考えられる。研究を行った時点で、カニクイザルゲノム配列は、National Center for Biotechnology Information（ＮＣＢＩ）データベースで利用不能であった；したがって、カニクイザル遺伝子配列との交差反応性は、確かめることができなかった。
処置
各々、２頭の雄サルおよび２頭の雌サルから成る群に、２５ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４１６８５０、ＩＳＩＳ４４９７０９、ＩＳＩＳ４４５５２２、ＩＳＩＳ４４９７１０、ＩＳＩＳ４４９７０７、ＩＳＩＳ４４９７１１、ＩＳＩＳ４４９７０８、４１６８５８およびＩＳＩＳ４４５５３１を皮下注射した。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、それらサルに、２５ｍｇ／ｋｇで週３回を１週目に、そして２５ｍｇ／ｋｇで週２回２〜８週目に投与した。２頭の雄サルおよび２頭の雌サルから成る対照群に、同じ投与計画にしたがってＰＢＳを皮下注射した。体重は、処置の開始前１４日および７日に得た後、処置期間中に毎週測定した。血液試料は、いろいろな血液学的因子の測定のために、処置の開始前１４日および５日と、その後、投与計画中に数回集めた。５５日目に、それらサルを、深麻酔下の間に全採血によって安楽死させ、そして臓器を、更なる分析用に採取した。
ＲＮＡ分析
５５日目に、ＲＮＡを、プライマー・プローブセットＬＴＳ００３０１を用いた第XI因子のリアルタイムＰＣＲ分析用に、肝組織から抽出した。結果を、ＰＢＳ対照に相対する第XI因子の阻害パーセントとして示す。表１４７に示されるように、ＩＳＩＳ４１６８５０、ＩＳＩＳ４４９７０９、ＩＳＩＳ４４５５２２、ＩＳＩＳ４４９７１０、ＩＳＩＳ４４９７０７、ＩＳＩＳ４４９７０８、ＩＳＩＳ４１６８５８およびＩＳＩＳ４４５５３１での処置は、ＰＢＳ対照に比較して、第XI因子ｍＲＮＡの有意の減少を引き起こした。
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タンパク質分析
異なった日に得られた全てのサル群からの血漿試料を、サンドイッチ型ＥＬＩＳＡ検定（Affinity Biologicals Inc.）により、アフィニティー精製した多クローン性抗第XI因子抗体を捕捉抗体としておよびペルオキシダーゼ結合多クローン性抗第XI因子抗体を検出用抗体として用いて分析した。サル血漿は、検定用に１：５０希釈した。ペルオキシダーゼ活性は、基質ｏ−フェニレンジアミンとのインキュベーションによって表した。生じた色は、ミクロプレートリーダーを用いて４９０ｎｍで定量したが、試料中の第XI因子の濃度に比例すると考えられた。
それら結果を、表１４８に示し、ＰＢＳ対照の場合に相対する減少百分率として表している。ＩＳＩＳ４１６８５０、ＩＳＩＳ４４９７０９、ＩＳＩＳ４４５５２２およびＩＳＩＳ４１６８５８での処置は、タンパク質レベルの時間依存性低下を引き起こした。
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体重および臓器重量
各々の群の体重を、表１４９に、グラムで表して与える。それら結果は、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処置が、ＰＢＳ対照と比較して有意の体重変化を引き起こしたかもしれない被験動物の健康状態に不都合な変化を全く引き起こさなかったということを示している。臓器重量は、５５日目に被験動物を安楽死させた後に得たが、肝、腎臓および脾臓を採取した。それら結果は、表１５０に示し、体重の百分率として表し、そして更に、脾臓重量の増加を引き起こしたＩＳＩＳ４４９７１１を除いて、ＰＢＳ対照と比較して有意の体重変化がないことも示している。
Figure 2012524068
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肝機能
肝機能へのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、ＡＬＴおよびＡＳＴの血漿濃度を、自動臨床化学分析器（Hitachi Olympus ＡＵ４００ｅ，Melville, NY）を用いて測定した。アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）の血漿濃度を測定したが、それら結果は、表１５１および表１５２に示し、ＩＵ／Ｌで表している。ビリルビンの血漿レベルも測定したが、結果を表１５３に示し、ｍｇ／ｄＬで表している。表１５１〜１５３で認められるように、アンチセンスオリゴヌクレオチド処置後のいずれの肝代謝マーカーにも有意の増加は存在しなかった。
Figure 2012524068
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腎機能
腎機能へのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、尿試料を、異なった日に集めた。ＢＵＮレベルを、いろいろな時点で、自動臨床化学分析器（Hitachi Olympus ＡＵ４００ｅ，Melville, NY）を用いて測定したが、それら結果は、表１５４に示す。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置後の尿試料中の尿タンパク質対クレアチニンの比率も、４９日目に計算したが、結果は、表１５５に示す。表１５４および表１５５で認められるように、アンチセンスオリゴヌクレオチド処置後のいずれの腎代謝マーカーにも有意の増加は存在しなかった。
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血液学検定
異なった日に全てのサル群から得た血液を、ＨＣＴ、ＭＣＶ、ＭＣＨおよびＭＣＨＣ測定、更には、ＷＢＣ（好中球および単球）、ＲＢＣおよび血小板などのいろいろな血液細胞、並びに全ヘモグロビン含量の測定のために、Korea Institute of Toxicology（ＫＩＴ）へ送った。それら結果を、表１５６〜１６５に示す。
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サイトカインおよびケモカイン検定
全てのサル群から得た血液試料を、ケモカインおよびサイトカインのレベルの測定のために、Pierce Biotechnology（Woburn, MA）へ送った。ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αのレベルを、それぞれの霊長類抗体を用いて測定し、そしてＩＬ−８、ＭＩＰ−１α、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１βおよびＲＡＮＴＥＳのレベルを、それぞれの交差反応性ヒト抗体を用いて測定した。測定値は、処置の開始前１４日と、それらサルを安楽死させた８５日目に得た。それら結果を、表１６６および表１６７に示す。
Figure 2012524068
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実施例３１：ヒト第XI因子に標的指向するＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの粘度の測定
ヒト第XI因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドの粘度を、１６５〜１８５ｍｇ／ｍＬの濃度で４０ｃＰより大の粘度を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを選別する目的で測定した。
ＩＳＩＳオリゴヌクレオチド（３２〜３５ｍｇ）を、ガラスバイアル中に秤量し、１２０μＬの水を加え、そしてアンチセンスオリゴヌクレオチドを、５０℃でバイアルを加熱することによって溶液中に溶解させた。予熱された試料の一部分（７５μＬ）を、ミクロ粘度計（Cambridge）にピペットで移した。ミクロ粘度計（micro-viscometter）の温度を、２５℃に設定し、試料の粘度を測定した。予熱された試料の別の部分（２０μＬ）を、８５℃において２６０ｎＭでＵＶ読み取りのために、１０ｍＬの水中にピペットで移した（Cary ＵＶ測定器）。それら結果を、表１６８に示す。
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配列リスト
本出願は、電子フォーマットでの配列リストと一緒に出願している。配列リストは、２０１０年４月１４日作成の、８４ＫｂサイズのＢＩＯＬ０１０９ＷＯＳＥＱ．ＴＸＴと称するファイルとして提供する。配列リストの電子フォーマットでの情報は、本明細書中にそのまま援用される。

Claims (49)

  1. 炎症反応をモジュレーションする方法であって、動物に、化合物であって、第XI因子モジュレーターを含む化合物を投与することによる方法。
  2. 第XI因子モジュレーターが、第XI因子に標的指向する修飾オリゴヌクレオチドである、請求項１に記載の方法。
  3. 動物の炎症性疾患、障害または状態を改善する方法であって、第XI因子に標的指向する化合物を該動物に投与することを含み、ここにおいて、該動物に投与される化合物が、該動物の炎症性疾患、障害または状態を改善する方法。
  4. 炎症性疾患、障害または状態のリスクがある動物を処置する方法であって、治療的有効量の第XI因子に標的指向する化合物を該動物に投与することを含み、ここにおいて、該動物に投与される化合物が、該動物の炎症性疾患、障害または状態を処置する方法。
  5. 炎症性疾患、障害または状態に苦しむ動物において第XI因子発現を阻害する方法であって、第XI因子に標的指向する化合物を該動物に投与することを含み、ここにおいて、該動物に投与される化合物が、炎症性疾患、障害または状態に苦しむ動物における第XI因子発現を阻害する方法。
  6. 動物の炎症性疾患、障害または状態のリスクを減少させる方法であって、第XI因子に標的指向する化合物を該動物に投与することを含み、ここにおいて、該動物に投与される化合物が、該動物の炎症性疾患、障害または状態のリスクを減少させる方法。
  7. 第XI因子が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示される配列を有する、請求項１、請求項３、請求項４、請求項５または請求項６に記載の方法。
  8. 第XI因子に標的指向する化合物が、修飾オリゴヌクレオチドである、請求項３、請求項４、請求項５または請求項６に記載の方法。
  9. 修飾オリゴヌクレオチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５〜２６９に示される核酸塩基配列の中より選択される核酸塩基配列の少なくとも８個隣接した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、請求項８に記載の方法。
  10. 修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７４の核酸塩基配列に１００％相補的である、請求項９に記載の方法。
  11. 修飾オリゴヌクレオチドが、一本鎖修飾オリゴヌクレオチドから成る、請求項８に記載の方法。
  12. 修飾オリゴヌクレオチドが、１２〜３０個連結したヌクレオシドから成る、請求項８に記載の方法。
  13. 修飾オリゴヌクレオチドが、２０個連結したヌクレオシドから成る、請求項１２に記載の方法。
  14. 少なくとも一つのヌクレオシド間結合が、修飾ヌクレオシド間結合である、請求項１２に記載の方法。
  15. 各々の修飾ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項１４に記載の方法。
  16. 少なくとも一つのヌクレオシドが、修飾糖を含む、請求項１２に記載の方法。
  17. 少なくとも一つの修飾糖が、二環式糖である、請求項１６に記載の方法。
  18. 少なくとも一つの修飾糖が、２’−Ｏ−メトキシエチルを含む、請求項１６に記載の方法。
  19. 少なくとも一つのヌクレオシドが、修飾核酸塩基を含む、請求項１２に記載の方法。
  20. 修飾核酸塩基が、５−メチルシトシンである、請求項１９に記載の方法。
  21. 修飾オリゴヌクレオチドが、
    （ａ）連結したデオキシヌクレオシドから成るギャップセグメント；
    （ｂ）連結したヌクレオシドから成る５’ウィングセグメント；
    （ｃ）連結したヌクレオシドから成る３’ウィングセグメント
    を含み；ここにおいて、該ギャップセグメントは、５’ウィングセグメントおよび３’ウィングセグメントに直に隣接して且つそれらの間に位置し、そしてここにおいて、各々のウィングセグメントのヌクレオシドは各々、修飾糖を含む、請求項８に記載の方法。
  22. 修飾オリゴヌクレオチドが、
    （ａ）１０個連結したデオキシヌクレオシドから成るギャップセグメント；
    （ｂ）５個連結したヌクレオシドから成る５’ウィングセグメント；
    （ｃ）５個連結したヌクレオシドから成る３’ウィングセグメント
    を含み；ここにおいて、該ギャップセグメントは、５’ウィングセグメントおよび３’ウィングセグメントに直に隣接して且つそれらの間に位置し、ここにおいて、各々のウィングセグメントのヌクレオシドは各々、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み；そしてここにおいて、各々のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である、請求項８に記載の方法。
  23. 修飾オリゴヌクレオチドが、
    （ａ）１４個連結したデオキシヌクレオシドから成るギャップセグメント；
    （ｂ）３個連結したヌクレオシドから成る５’ウィングセグメント；
    （ｃ）３個連結したヌクレオシドから成る３’ウィングセグメント
    を含み；ここにおいて、該ギャップセグメントは、５’ウィングセグメントおよび３’ウィングセグメントに直に隣接して且つそれらの間に位置し、ここにおいて、各々のウィングセグメントのヌクレオシドは各々、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み；そしてここにおいて、各々のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である、請求項８に記載の方法。
  24. 修飾オリゴヌクレオチドが、
    （ａ）１３個連結したデオキシヌクレオシドから成るギャップセグメント；
    （ｂ）２個連結したヌクレオシドから成る５’ウィングセグメント；
    （ｃ）５個連結したヌクレオシドから成る３’ウィングセグメント
    を含み；ここにおいて、該ギャップセグメントは、５’ウィングセグメントおよび３’ウィングセグメントに直に隣接して且つそれらの間に位置し、ここにおいて、各々のウィングセグメントのヌクレオシドは各々、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み；そしてここにおいて、各々のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である、請求項８に記載の方法。
  25. 炎症性疾患のリスクがある動物を処置する方法であって、治療的有効量の１２〜３０個連結したヌクレオシドから成る修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を該動物に投与することを含み、ここにおいて、該修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示される第XI因子核酸に相補的であり、そしてここにおいて、該動物に投与される化合物が、炎症性疾患のリスクがある動物を処置する方法。
  26. 炎症性疾患のリスクがある動物を処置する方法であって、治療的有効量の１２〜３０個連結したヌクレオシドから成る且つＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５〜２６９に示される核酸塩基配列のいずれか一つより選択される核酸塩基配列の少なくとも８個隣接した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を該動物に投与することを含み、そしてここにおいて、該動物に投与される化合物が、炎症性疾患のリスクがある動物を処置する方法。
  27. 炎症性疾患を有する動物を処置する方法であって、治療的有効量の１２〜３０個連結したヌクレオシドから成る修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を該動物に投与することを含み、ここにおいて、該修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示される第XI因子核酸に相補的であり、そしてここにおいて、該動物に投与される化合物が、炎症性疾患を有する動物を処置する方法。
  28. 炎症性疾患を有する動物を処置する方法であって、治療的有効量の１２〜３０個連結したヌクレオシドから成る且つＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５〜２６９に示される核酸塩基配列のいずれか一つより選択される核酸塩基配列の少なくとも８個隣接した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を該動物に投与することを含み、そしてここにおいて、該動物に投与される化合物が、炎症性疾患を有する動物を処置する方法。
  29. 動物が、ヒトである、請求項１、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、請求項２５、請求項２６、請求項２７または請求項２８に記載の方法。
  30. 炎症性疾患が、関節炎、結腸炎、糖尿病、敗血症、アレルギー性炎症、喘息、免疫増殖性疾患、抗リン脂質症候群または移植片関連障害である、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、請求項２５、請求項２６、請求項２７または請求項２８に記載の方法。
  31. 炎症性疾患が、自己免疫疾患である、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、請求項２５、請求項２６、請求項２７または請求項２８に記載の方法。
  32. 関節炎が、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、尿酸性関節炎、痛風、慢性多発性関節炎、上腕肩甲関節周囲炎、頸部関節炎、腰仙関節炎、変形性関節症、乾癬性関節炎、腸疾患に基づく関節炎および強直性脊椎炎より選択される、請求項３０に記載の方法。
  33. 結腸炎が、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患（Inflammatory Bowel Disease）（ＩＢＤ）およびクローン病（Crohn’s Disease）より選択される、請求項３０に記載の方法。
  34. 炎症性疾患、障害または状態が、Ｔｈ１で媒介されている、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、請求項２５、請求項２６、請求項２７または請求項２８に記載の方法。
  35. Ｔｈ１で媒介される炎症性疾患、障害または状態のマーカーを減少させる、請求項３４に記載の方法。
  36. Ｔｈ１のマーカーが、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦ−αまたはＫＣといういずれかのサイトカインである、請求項３５に記載の方法。
  37. 炎症性疾患、障害または状態が、Ｔｈ２で媒介されている、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、請求項２５、請求項２６、請求項２７または請求項２８に記載の方法。
  38. Ｔｈ２で媒介される炎症性疾患、障害または状態のマーカーを減少させる、請求項３７に記載の方法。
  39. Ｔｈ２のマーカーが、ＩＬ−４、ＩＬ−５、好酸球浸潤または粘液生産のいずれかである、請求項３８に記載の方法。
  40. 化合物を、非経口投与する、請求項１、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、請求項２５、請求項２６、請求項２７または請求項２８に記載の方法。
  41. 非経口投与が、皮下投与または静脈内投与のいずれかである、請求項４０に記載の方法。
  42. 第二物質を更に含む、請求項１、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、請求項２５、請求項２６、請求項２７または請求項２８に記載の方法。
  43. 第二物質を、化合物と同時にまたは逐次的に投与する、請求項４２に記載の方法。
  44. 化合物が、塩の形である、請求項１、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、請求項２５、請求項２６、請求項２７または請求項２８に記載の方法。
  45. 薬学的に許容しうる担体または希釈剤を更に含む、請求項１、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、請求項２５、請求項２６、請求項２７または請求項２８に記載の方法。
  46. 炎症性疾患を処置するための、第XI因子を標的とする化合物の使用。
  47. 化合物が、修飾オリゴヌクレオチドである、請求項４６に記載の使用。
  48. 第XI因子が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示される配列を有する、請求項４６に記載の使用。
  49. 修飾オリゴヌクレオチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５〜２６９に示される核酸塩基配列の中より選択される核酸塩基配列の少なくとも８個隣接した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、請求項４７に記載の使用。
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