JP2012519474A - 液体培養における酵素に基づく流加回分培養技術 - Google Patents
液体培養における酵素に基づく流加回分培養技術 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2012519474A JP2012519474A JP2011552451A JP2011552451A JP2012519474A JP 2012519474 A JP2012519474 A JP 2012519474A JP 2011552451 A JP2011552451 A JP 2011552451A JP 2011552451 A JP2011552451 A JP 2011552451A JP 2012519474 A JP2012519474 A JP 2012519474A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- substrate
- culture
- polymer
- enzyme
- growth
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/22—Processes using, or culture media containing, cellulose or hydrolysates thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Description
本発明は、一般に、ラボスケール、又は、ラージスケールでの振とう液体培養における連続的な、及び、高細胞密度の培養の分野に関する。特に、基質重合体、又は、基質低重合体からの、増殖制限基質単量体の制御された酵素を用いた放出によって、培養生物の増殖速度を操作することが可能な、微生物原核細胞、又は、真核細胞の液体培養のための酵素に基づく流加回分方法(EnBase)に関する。
微生物原核細胞、又は、真核細胞を増殖するための培養方法の多くは、液体培地での培養に基づく。実際には、そのような液体培養は、回分過程実施モードで実行される。回分過程は、連続的でない過程であって、必須基質を全て含む無菌の増殖培地は、純粋培養された微生物原核細胞、又は、真核細胞が、最初に接種され、そして、どんな追加増殖培地も、実施過程の間に、加えられない。これは、回分過程が、部分的に閉鎖されたシステムであることを意味しており、実験過程の間に、加えられ、そして、取り除かれた唯一の物質が、空気/ガス交換、消泡剤、及びpH調整剤(Cinar A.ら、「回分発酵−モデリング、監視、及び、制御」、2003、Marcel Dekker Inc.、5頁)である。これら回分培養は、所望の均質度に、基質、及び、細胞を保つために、連続的に、振とうされ、又は、撹拌されて、好気培養のために酸素移動をできるだけ高く保証する。しかしながら、これら制御されていない振とう回分培養では、相当な不都合、例えば、増殖培地において、高い初期基質濃度を有する。この高い初期基質濃度は、微生物原核細胞、又は、真核細胞の誘導期(lag phases)につながり、豊富な培地、例えば、食物診断に、特に関連している。高い基質濃度では、微生物原核細胞、又は、真核細胞は、オーバーフロー代謝、及び、主に、アセテート、エタノール及び乳酸塩の副産物の多量の分泌に、反応することがある。制御されていない増殖もまた、容易に酸素欠乏が誘導され、もし、嫌気状態で生育すれば、微生物原核細胞、又は、真核細胞は、ギ酸塩、コハク酸エステル塩、水素、及び、さらに二酸化炭素を、分泌する(LU/Li W. R. & W. R. Strohl、Appl. Environ. Microbiol.、1990、56:1004-1011;Riesenberg Dら、J. Biotechnol.、1991、20:17-28)。したがって、嫌気性代謝(発酵反応)及びオーバーフロー代謝は、量において、pHのずれ、及び、発酵産物の分泌を、引き起こし、微生物原核細胞、又は、真核細胞の増殖を抑制したり、組換タンパク質の生成を害したりする。基質濃度、例えば、炭水化物が増加して、呼吸の遺伝子を抑制すると、これらの代謝産物のいくつかもまた、好気的な条件下で合成される。したがって、基質濃度が高いときには、好気的な条件下(解糖)でさえ、通常、最終電子受容体として、酸素で急速に増殖する細胞は、増殖阻害、及び、サイド代謝産物の蓄積(エタノール)、「クラブトリー効果」と呼ばれる現象、が示される(Crabtree H. G.、J. Biochem.、1928、22:1289-1298;Rinas U.ら、Appl. Microbiol. Biotechnol.、1989、31:163-167)。高濃度基質に長期間さらされると、最もエネルギー、及び、増殖効果を細胞に与える基質が、選択的に取り込まれるが、一方で、好ましくない基質の異化、及び、取り込みに関わる様々な機能が抑制される、異化代謝産物抑制によって特徴づけられる(Monod J.、Actualites scientifiques et industrielles、1942、911:70-78)。これは、バイオマス収量の低下、微生物原核細胞、又は、真核細胞生成物の質、及び、量の低下を導く。大腸菌の振とう培養におけるバイオマス収量は、振とうフラスコ培養で、通常、1リットルあたり1-2gの乾燥細胞の範囲内でだけであり、マイクロスケールでは、大抵もっと少ない。したがって、高細胞密度は、回分技術において達成されていない。
本発明の基礎を形成する技術的な課題は、酵素に基づく流加回分技術(EnBase)によって、ラボスケール、又は、ラージスケースでの振とう液体培養培地において、微生物原核細胞、又は、真核細胞の増殖速度を、高細胞密度に制御するための方法を提供することにある。これは、増殖制限基質単量体を培地中にゆっくりと放出するために、消化酵素を用いた処理によって、培養されている間に、代謝的に不活性化した基質重合体、又は、基質低重合体が、十分に可溶性の代謝的に活性化した増殖抑制基質単量体に変換される、液体システムが提供されることを意味する。したがって、増殖制限基質単量体は、酵素作用によって、培地中に、基質重合体、又は、基質低重合体から、制御された方法で放出される。
本明細書において使用される用語「微生物の」とは、「微生物」としても知られる生物のことであり、すなわち、通常は裸眼で見るには小さすぎる微小な生物のことである。
本発明は、ラボスケール、又は、ラージスケールでの振とう液体培養において、微生物原核細胞、又は、真核細胞の高細胞密度培養を目的とした、酵素に基づく流加回分技術(EnBase)を提供することにある。したがって、組換タンパク質の生産を考慮しても、液体培地における微生物原核細胞、又は、真核細胞の測定可能な高細胞密度過程の容易な解決法が提供される。「酵素に基づく基質輸送技術」としても知られている液体培養におけるこの酵素に基づく流加回分技術は、基質結合重合体、又は、ゲルに基づいた、二相の酵素に基づく流加回分技術の実行可能な代替手段である。
1)栄養輸送システムの調整がより簡単になる。
2)栄養物生産する酵素のための基質が、液相で完全に可溶性のままで残っているので、培養過程の間に、培地の酸素輸送能、又は、生物の代謝能が変化しない。
3)膜ディスク又はゲルが必要でないので、サンプリング及び解析がより簡単になる。
4)培地が、細胞を有する共堆積物質を少しも含んでいないので、微生物原核細胞、又は、真核細胞生産物の分離がより簡単になる。
デキストリンからのグルコース放出速度は、基質重合体としてデキストリンと、異なる濃度のデキストリン分解酵素グルコアミラーゼを含有する無機塩液体培地において、実施された。
デキストリン含有無機塩液体培地における大腸菌BL21(DE3)の増殖に対する酵素グルコアミラーゼの異なった量の効果。培養は、各ウェルあたり1.5mLの培養液量を有する48のウェルを持つディープウェルプレート(Ritter、ドイツ)で実行された。
基質重合体としてデキストリンを含有する無機塩液体培地における大腸菌株BL21(DE3)の培養が、Terrific Broth(TB)を用いた普通のフラスコ振とう回分培養と比較された。各培養システムの2つの類似した振とうフラスコの平均が、図3に示される。
大腸菌株BL21(DE3)の増殖に対する異なる量の酵素インベルターゼの効果が、基質低重合体サッカロースを含有する無機塩液体培地で試験された。無機塩液体培地(MSM;Neubauer P.ら、Biotechnol. Bioeng.、1995、47:139-146)は、(1リットルあたり)2gの硫酸ナトリウム、2.7gの硫酸アンモニウム、0.5gの塩化アンモニウム、14.6gのリン酸水素二カリウム、3.6gのリン酸二水素ナトリウム一水和物、1.0gの(NH4)2-H-citrateを含む、培養培地の一般的なベースとして使用された。本実験において、10g/Lのサッカロースは、炭素源及びエネルギー源として、すなわち、基質低重合体として、加えられた。その成分は、1リットルの蒸留水に混ぜられて、オートクレーブ処理されて、冷却された。接種の前に、基礎培地は、3mMの硫酸マグネシウム、2mL/Lの微量元素溶液(Holme T.ら、Process Biochem.、1970、5:62-66)、及び、0.1g/Lのチアミン塩酸塩が、補われた。前培養は、無機塩培地(1プレートあたり2mL)を含む新たに培養されたLuria Bertani(LB)プレートから細菌を洗浄することによって、調整された。プレートウォッシュアウトは、各培養ウェルにおいて、OD600=0.1の初期細胞濃度を得るための接種材料として使用された。
15 kDa Aドメインのヒトタンパク質ジスルフィドイソメラーゼ(PDI、E.C. 5.3.4.1.)をコードする遺伝子を含むプラスミドpET21を持つ大腸菌株BL21(DE3)-851が、2つの異なる培地において、組み換えPDI生産のために培養された。フラスコ1(100mLの培地で満たされた1Lのフラスコ)は、(1リットルあたり)2gの硫酸ナトリウム、2.7gの硫酸アンモニウム、0.5gの塩化アンモニウム、14.6gのリン酸水素二カリウム、3.6gのリン酸二水素ナトリウム一水和物、1.0 gの(NH4)2-H-citrateを含む、培養培地の一般的なベースとして、無機塩液体培地(MSM;Neubauer P.ら、Biotechnol. Bioeng.、1995、47:139-146)を含んだ。その培地は、0.24gのトリプトンと、0.48gの酵母エキスをさらに補われた。本実験において、40g/Lの可溶性デキストリンが、炭素源及びエネルギー源として、すなわち、基質重合体として、加えられた。その成分は、1Lの蒸留水に混ぜられて、オートクレーブ処理されて、冷却された。接種の前に、デキストリン含有基礎培地は、3mMの硫酸マグネシウム、2mL/Lの微量元素溶液(Holme T.ら、Process Biochem.、1970、5:62-66)、及び、0.1g/Lのチアミン塩酸塩が、補われた。フラスコ2(500mLの培地で満たされた5Lのフラスコ)、Luria Bertani(LB)培地を含んだ。
(1)グルコース源として、基質重合体、例えば、デキストリンを含有する既製の無菌無機塩液体培地
グルコース源として、例えば、デキストリンを含有する制御された高細胞密度培養のための既製の無菌液体培地は、(1リットルあたり)2gの硫酸ナトリウム、2.7gの硫酸アンモニウム、0.5gの塩化アンモニウム、14.6gのリン酸水素二カリウム、3.6gのリン酸二水素ナトリウム一水和物、1.0gの(NH4)2-H-citrateを含む、無機塩液体培地(MSM; Neubauer P.ら、Biotechnol. Bioeng.、1995、47:139-146)の成分を混合することによって、実行される。また、1リットルあたり、0.24gのトリプトン、0.48gの酵母エキス、及び、基質重合体として50g/Lの可溶性デキストリンが、加えられた。培地は、オートクレーブで滅菌されて、冷却された。
(2)グルコース源として、基質重合体、例えば、デキストリンを含有する前滅菌された無機塩液体培地粉末
増殖制限基質重合体として、(1リットルあたり)例えば、50g/Lの可溶性デキストリンを含有する、上で説明したような無機塩液体培地の処方の成分は、プラスチック容器に分けられ(それぞれが、既製培地の100mLの一部を生産する)、照射殺菌によって滅菌された、よく混合された粉末を調整するために使用された。その粉末は、無菌の振とうフラスコに分配することができ、迅速な培地の調整に使用することができる。したがって、その粉末は、100mLの滅菌蒸留水で混合され、1分間、電子レンジ(700ワット)で加熱されることによって溶解するか、または代わりに、その培地を、溶解させるために、オートクレーブ処理することができる。
(3)迅速な培地の調整のために、基質重合体として、基質重合体、例えば、デキストリンを含有する前滅菌された無機塩培地タブレット
増殖制限基質重合体として、(1リットルあたり)例えば、50g/Lの可溶性デキストリンを含有する、上で説明したような無機塩液体培地の処方(MSM)の成分が、50mLの培養に十分なタブレットを調整するために使用された。タブレット製造に適している濃厚スラリーを得るために、1リットルの培地のために測定された化学薬品混合物に、30mLの70%エタノールが、加えられた。混合物は、20部分に分けられ、そして、直径22mmと厚さ約25mmを有するタブレットが、水圧機を用いて、調整された。(望ましくは、照射殺菌で滅菌された)これらのタブレットは、水(1つのタブレットあたり50mL)が加えられ、そして、電子レンジで、1分、加熱して(700ワット)、タブレットを溶解することによって、迅速な培地の調整のために利用された。
10倍の濃度の無機塩液体培地(例えば、MSM、Neubauer P.ら、Biotechnol. Bioeng.、1995、47:139-146)が、調整された:(1リットルあたり)20gの硫酸ナトリウム、27gの硫酸アンモニウム、5gの塩化アンモニウム、146gのリン酸水素二カリウム、36gのリン酸二水素ナトリウム一水和物、10gの(NH4)2-H-citrateを含む。さらに、2.4gのトリプトンと、4.8gの酵母エキスが加えられた。また、基質重合体として、2.5倍の濃度の可溶性デキストリン(100g/L)が、調整された。これら成分は、オートクレーブ処理によって滅菌され、冷却され、以下の関係で、混合された: 10倍の培地濃縮物を1リットルと、2.5倍の可溶性デキストリンを4リットル。結果として生じるMSM/デキストリン混合物の2倍濃縮物が、培養容器に、例えば、1サンプルウェルあたり75μLが、全容量が200μLのマイクロタイタープレートに、分注された。前充填されたマイクロタイタープレートは、直接梱包されることができ、照射殺菌されることによって滅菌されることが可能であり、或いは、その液体は、培養培地の層で覆われたサンプルウェルを、37℃で、放置することで、最初に乾燥させることができる。乾燥培地の場合には、培養培地の固層は、滅菌蒸留水、例えば、150μLの水の添加によって溶解することができ、そして、微生物原核細胞、又は、真核細胞の液体培養に使用することができる。
基質重合体と基質重合体分解酵素を含有する無機塩液体培地は、マイクロバイオリアクターから数立方メートルのリアクターに及ぶバイオリアクターにおいて、酵素に基づく流加回分技術のための一般的なベースの培養培地として、使用され得る。
<実施例8a>
培養実験は、上述のように、純粋培養の大腸菌株BL21(DE3)と、無機塩液体培地を用いて実行された。大腸菌株BL21(DE3)の前培養は、37℃で、その株を一晩培養することによって、寒天で固められたMSMグルコース培地上に固定された、凍結グリセロールストックから、調整された。接種において、各サンプルプレートあたり大腸菌株BL21(DE3)の1つのコロニーが、無菌のマイクロピペットチップで選ばれ、培養ウェルに移された。
<実施例8b>
培養実験において、50g/Lの可溶性デキストリンを含有する無機塩液体培地の処方の乾燥成分が、100mLの培養に十分なタブレットの調整に使用された。タブレット製造に適した濃厚スラリーを得るために、1リットルの培地のために測定された化学薬品混合物に、30mLの70%エタノールが、加えられた。混合物は、10部分に分けられ、そして、直径22mmと厚さ約25mmを有するタブレットが、水圧機を用いて、調整された。これらのタブレットは、水(1つのタブレットあたり100mL)が加えられ、そして、電子レンジで、2分、加熱して(700ワット)、タブレットを溶解することによって、迅速な培地調整に使用された。培養実験は、純粋培養の大腸菌株BL21(DE3)を用いて、実行された。前培養は、グルコースもデキストリンも含まない無機塩液体培地(1プレートあたり2mL)を用いて、新たに培養されたLBプレートから細菌を洗浄することによって、調整された。プレートウォッシュアウトは、OD600=0.1の初期細胞濃度を得るための接種材料として、使用された。
<実施例8c>
培養実験は、上述したように、50g/Lの可溶性デキストリンを含有する無機塩液体培地と、大腸菌株BL21(DE3)を用いて実行された。
Claims (15)
- 酵素に基づく流加回分技術によって、液相培地における微生物原核細胞、又は、真核細胞の増殖を、高細胞密度に制御するための方法であって、
基質重合体、又は、基質低重合体が、酵素の添加を制御することによって、分解されて、管理された方法で、培地中に、増殖基質単量体を放出することを特徴とする方法。 - 前記基質重合体、又は、基質低重合体は、前記微生物原核細胞、又は、真核細胞によって、直接分解されない、
請求項1に記載の方法。 - 前記基質低重合体、又は、基質重合体は、培養開始時、又は、培養中に、1回、又は、数回に分けて、或いは、連続した供給によって、加えられる、
請求項1又は2に記載の方法。 - 前記基質重合体、又は、基質低重合体は、グルコース重合体、又は、グルコース低重合体であり、好ましくは、セルロース(β-1,4-グルカン)、カードラン(β-1,3-グルカン)、デキストラン(α-1,6-グルカン)、グリコーゲン(α-1,4-及びα-1,6-グルカン)、ラミナリン(β-1,3-及びβ-1,6-グルカン)、レンチナン(β-1,6:β-1,3-グルカン)、リケニン、プルーラン(β-1,3-、及び、β-1,6-グルカン)、プルラン(α-1,4-及びα-1,6-グルカン)、デンプン(α-1,4-及びα-1,6-グルカン)、及び、ザイモサン(β-1,3-グルカン)より成る群から選択されるグルコース重合体である、
請求項1から3のいずれか1項に記載の方法。 - 前記基質重合体、又は、基質低重合体は、可溶性デンプン誘導体であり、好ましくは、デキストリンである、
請求項1から3のいずれか1項に記載の方法。 - 前記基質重合体、又は、基質低重合体は、セルロース誘導体であり、好ましくは、メチルセルロース、又は、カルボキシメチルセルロースである、
請求項1から6のいずれか1項に記載の方法。 - 前記酵素は、アミラーゼ、プロテアーゼ、ペプチダーゼ、ヌクレアーゼ、及び、アミダーゼより成る群から選択される、
請求項1から6のいずれか1項に記載の方法。 - 前記基質重合体、又は、基質低重合体は、10から50g/Lの範囲の量で、加えられる、
請求項1から7のいずれか1項に記載の方法。 - 複数の添加物を含有する前記液相培地は、前記細胞によって炭素源として部分的に使用されるペプトン、カザミノ酸、又は、酵母エキスよりなる群から選択される、
請求項1から8のいずれか1項に記載の方法。 - 前記液相培地は、1種類以上の無機塩、微生物原核細胞、又は、真核細胞、前記基質重合体、及び、前記基質低重合体、酵母エキス、トリプトン、及び、任意でMOPSバッファーを含む、
請求項1から9のいずれか1項に記載の方法。 - 前記微生物原核細胞、又は、真核細胞は、細菌、古細菌、原生生物、菌類、微細な植物又は哺乳類の懸濁細胞培養を含む、
請求項1から10のいずれか1項に記載の方法。 - 前記培養は、スモールスケール、又は、ラボスケールでの振とう培養で、又は、バイオリアクターで、実行される、
請求項1から11のいずれか1項に記載の方法。 - 前記培養は、ラージスケールでの振とう培養、又は、バイオリアクター培養で、実行される、
請求項1から11のいずれか1項に記載の方法。 - 前記微生物、又は、真核細胞の前記培養は、プラスチックバッグにおいて行われる、
請求項1から11のいずれか1項に記載の方法。 - 前記細胞は、表面、又は、生体膜に付着することで増殖する、
請求項1から14のいずれか1項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP20090154440 EP2226380B1 (en) | 2009-03-05 | 2009-03-05 | Enzyme-based fed-batch technique in liquid cultures |
EP09154440.3 | 2009-03-05 | ||
PCT/EP2010/052780 WO2010100239A1 (en) | 2009-03-05 | 2010-03-04 | Enzyme-based fed-batch technique in liquid cultures |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2012519474A true JP2012519474A (ja) | 2012-08-30 |
JP5886050B2 JP5886050B2 (ja) | 2016-03-16 |
Family
ID=40849217
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011552451A Expired - Fee Related JP5886050B2 (ja) | 2009-03-05 | 2010-03-04 | 液体培養における酵素に基づく流加回分培養技術 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9127261B2 (ja) |
EP (2) | EP2226380B1 (ja) |
JP (1) | JP5886050B2 (ja) |
AU (1) | AU2010220253B2 (ja) |
CA (1) | CA2752262A1 (ja) |
DK (1) | DK2226380T5 (ja) |
NZ (1) | NZ594505A (ja) |
WO (1) | WO2010100239A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103748211B (zh) | 2011-07-13 | 2016-05-18 | 食品安全测试系统公司 | 用于李斯特菌的培养基和培养方法以及检测李斯特菌的方法 |
DK2898053T3 (da) | 2012-09-20 | 2021-11-22 | Danisco Us Inc | Mikrotiterplader til styret frigivelse af kulturbestanddele til cellekulturer |
EP3224341B1 (en) | 2014-11-25 | 2021-05-19 | Corning Incorporated | Cell culture media extending materials and methods |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS6049792A (ja) * | 1983-08-29 | 1985-03-19 | Kikkoman Corp | 微生物の流加培養法 |
JPH06261741A (ja) * | 1993-03-11 | 1994-09-20 | Nippon Sharyo Seizo Kaisha Ltd | 微生物増殖方法 |
JP2005512545A (ja) * | 2001-12-18 | 2005-05-12 | ジェネンコー・インターナショナル・インク | bgl4β−グルコシダーゼ及びそれをエンコードする核酸 |
JP2005287570A (ja) * | 2004-03-31 | 2005-10-20 | Takasago Internatl Corp | 水性蛍光芳香消臭剤組成物 |
WO2007060235A1 (de) * | 2005-11-28 | 2007-05-31 | Basf Se | Fermentative herstellung organischer verbindungen |
JP2007246443A (ja) * | 2006-03-16 | 2007-09-27 | Unitika Ltd | アディポネクチン分泌促進剤、インスリン抵抗性改善剤及び抗動脈硬化剤 |
WO2008065254A1 (en) * | 2006-11-30 | 2008-06-05 | Oulun Yliopisto | Method for controlling the growth of cell culture |
JP2008167665A (ja) * | 2007-01-09 | 2008-07-24 | Tosoh Corp | カロテノイド類の製法 |
WO2009025547A1 (en) * | 2007-08-23 | 2009-02-26 | Wageningen Universiteit | Mild alkaline pretreatment and simultaneous saccharification and fermentation of lignocellulosic biomass into organic acids |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3926723A (en) | 1974-08-08 | 1975-12-16 | Massachusetts Inst Technology | Method of controllably releasing glucose to a cell culture medium |
JPH06291741A (ja) | 1993-04-01 | 1994-10-18 | Fujitsu Ten Ltd | ステレオ放送の送信装置 |
US6190913B1 (en) * | 1997-08-12 | 2001-02-20 | Vijay Singh | Method for culturing cells using wave-induced agitation |
CA2386169A1 (en) | 1999-09-30 | 2001-04-12 | Cognis Corporation | Improved fermentation process |
US20030203454A1 (en) * | 2002-02-08 | 2003-10-30 | Chotani Gopal K. | Methods for producing end-products from carbon substrates |
AU2003217338A1 (en) * | 2002-02-08 | 2003-09-02 | Genencor International, Inc. | Methods for producing ethanol from carbon substrates |
DE102005022045A1 (de) | 2005-05-09 | 2006-11-16 | Rwth Aachen | Fermentationsverfahren und Anordnung zu dessen Durchführung |
DK2130906T3 (da) * | 2008-06-04 | 2014-05-12 | Biosilta Oy | Fremgangsmåde til tilførsel af vækstkomponenter til cellekulturer |
-
2009
- 2009-03-05 EP EP20090154440 patent/EP2226380B1/en not_active Not-in-force
- 2009-03-05 DK DK09154440.3T patent/DK2226380T5/da active
-
2010
- 2010-03-04 CA CA 2752262 patent/CA2752262A1/en not_active Abandoned
- 2010-03-04 EP EP10709187.8A patent/EP2403936B1/en active Active
- 2010-03-04 NZ NZ59450510A patent/NZ594505A/xx unknown
- 2010-03-04 JP JP2011552451A patent/JP5886050B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2010-03-04 WO PCT/EP2010/052780 patent/WO2010100239A1/en active Application Filing
- 2010-03-04 US US13/201,869 patent/US9127261B2/en active Active
- 2010-03-04 AU AU2010220253A patent/AU2010220253B2/en not_active Ceased
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS6049792A (ja) * | 1983-08-29 | 1985-03-19 | Kikkoman Corp | 微生物の流加培養法 |
JPH06261741A (ja) * | 1993-03-11 | 1994-09-20 | Nippon Sharyo Seizo Kaisha Ltd | 微生物増殖方法 |
JP2005512545A (ja) * | 2001-12-18 | 2005-05-12 | ジェネンコー・インターナショナル・インク | bgl4β−グルコシダーゼ及びそれをエンコードする核酸 |
JP2005287570A (ja) * | 2004-03-31 | 2005-10-20 | Takasago Internatl Corp | 水性蛍光芳香消臭剤組成物 |
WO2007060235A1 (de) * | 2005-11-28 | 2007-05-31 | Basf Se | Fermentative herstellung organischer verbindungen |
JP2007246443A (ja) * | 2006-03-16 | 2007-09-27 | Unitika Ltd | アディポネクチン分泌促進剤、インスリン抵抗性改善剤及び抗動脈硬化剤 |
WO2008065254A1 (en) * | 2006-11-30 | 2008-06-05 | Oulun Yliopisto | Method for controlling the growth of cell culture |
JP2008167665A (ja) * | 2007-01-09 | 2008-07-24 | Tosoh Corp | カロテノイド類の製法 |
WO2009025547A1 (en) * | 2007-08-23 | 2009-02-26 | Wageningen Universiteit | Mild alkaline pretreatment and simultaneous saccharification and fermentation of lignocellulosic biomass into organic acids |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JPN6014027767; Biotechnology and Bioengineering Vol.37, 1991, p.1087-1094 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2010100239A1 (en) | 2010-09-10 |
NZ594505A (en) | 2013-06-28 |
US9127261B2 (en) | 2015-09-08 |
CA2752262A1 (en) | 2010-09-10 |
EP2226380B1 (en) | 2014-12-17 |
JP5886050B2 (ja) | 2016-03-16 |
DK2226380T5 (da) | 2015-07-20 |
DK2226380T3 (da) | 2015-02-16 |
EP2403936A1 (en) | 2012-01-11 |
US20120045836A1 (en) | 2012-02-23 |
AU2010220253B2 (en) | 2016-02-25 |
EP2403936B1 (en) | 2016-05-18 |
EP2226380A1 (en) | 2010-09-08 |
AU2010220253A1 (en) | 2011-09-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Duan et al. | Optimization of pullulanase production in Escherichia coli by regulation of process conditions and supplement with natural osmolytes | |
Ramakrishna et al. | Microbial fermentations with immobilized cells | |
Konsoula et al. | Thermostable α-amylase production by Bacillus subtilis entrapped in calcium alginate gel capsules | |
Kolasa et al. | Co-cultivation of Trichoderma reesei RutC30 with three black Aspergillus strains facilitates efficient hydrolysis of pretreated wheat straw and shows promises for on-site enzyme production | |
Sulaiman et al. | Ultrasound-assisted fermentation enhances bioethanol productivity | |
Divakaran et al. | Comparative study on production of α-amylase from Bacillus licheniformis strains | |
Cheng et al. | Production of high-content galacto-oligosaccharide by enzyme catalysis and fermentation with Kluyveromyces marxianus | |
CN102933714B (zh) | 用于同步糖化和发酵以生产乙醇的方法 | |
Schuerg et al. | Xylose induces cellulase production in Thermoascus aurantiacus | |
JP2019503688A (ja) | 多糖分解酵素を分泌するように遺伝子改変された乳酸利用細菌 | |
Genari et al. | Configuration of a bioreactor for milk lactose hydrolysis | |
Abdel-Naby et al. | Biosynthesis of cyclodextrin glucosyltransferase by immobilized Bacillus amyloliquefaciens in batch and continuous cultures | |
JP5886050B2 (ja) | 液体培養における酵素に基づく流加回分培養技術 | |
Zhan et al. | Economical production of isomaltulose from agricultural residues in a system with sucrose isomerase displayed on Bacillus subtilis spores | |
Germec et al. | Kinetic modeling and sensitivity analysis of inulinase production in large-scale stirred tank bioreactor with sugar beet molasses-based medium | |
Hendges et al. | Production and characterization of endo-polygalacturonase from Aspergillus niger in solid-state fermentation in double-surface bioreactor | |
JP2023534879A (ja) | N-アセチルグルコサミン産生菌株並びにその構築方法及び使用 | |
Mutturi et al. | Isolation, characterization, and application of thermotolerant Streptomyces sp. K5 for efficient conversion of cellobiose to chitinase using pulse-feeding strategy | |
Antranikian | Industrial relevance of thermophiles and their enzymes | |
Leschine et al. | Ethanol production from cellulose by a coculture of Zymomonas mobilis and a clostridium | |
Marim et al. | Porungo cheese whey: β-galactosidase production, characterization and lactose hydrolysis | |
Bose | Production of alkaline protease from Bacillus subtilis by different entrapment techniques | |
CN117229979B (zh) | 一株产褐藻胶裂解酶的延长微泡菌及其应用 | |
CN115029264B (zh) | 一株耐酸热纤梭菌及其降解木质纤维素的方法 | |
Naidu et al. | Evaluation of different matrices for production of alkaline protease from Bacillus subtilis–K 30 by entrapment technique |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20130213 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140701 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140909 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150303 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150527 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20150630 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20151030 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20151201 |
|
A911 | Transfer of reconsideration by examiner before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20151224 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160119 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160210 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5886050 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |