JP2012504147A

JP2012504147A - 多検出器型コンピュータ断層撮影法において使用するための心拍数コントロール薬およびＡ−２−α受容体作動薬の組み合わせ

Info

Publication number: JP2012504147A
Application number: JP2011529367A
Authority: JP
Inventors: ルイスベラーディネリー，; ブレントブラックバーン，
Original assignee: ギリアードサイエンシーズ，インコーポレイテッド
Priority date: 2008-09-29
Filing date: 2009-09-29
Publication date: 2012-02-16
Also published as: RU2011115815A; BRPI0918962A2; WO2010037122A1; CN102164591A; US20100086483A1; CA2737077A1; EP2344145A1; AU2009296235A1; KR20110063556A; MX2011003168A

Abstract

本発明は、心拍数コントロール薬および１つ以上のアデノシンＡ_２Ａ受容体作動薬の用量を哺乳動物に投与することを含む、多検出器型コンピュータ断層撮影心筋血流イメージングのための方法に関する。Ａ_２Ａアデノシン受容体作動薬は、βアドレナリン遮断薬および／またはカフェインのような心拍数コントロール薬とともに患者に投与される場合、患者の冠動脈疾患を診断するために多検出器型コンピュータ断層撮影法と併せて用いることができる。

Description

（関連する出願との相互参照）
本願は、米国特許法§１１９（e）に基づき、２００８年９月２９日に出願された米国仮特許出願第６１／１０１，０４３号の利益を主張する。この仮特許出願は、その全体が参照により本明細書に援用される。

（発明の分野）
本発明は、心拍数コントロール薬および１つ以上のアデノシンＡ_２Ａ受容体作動薬の用量を哺乳動物に投与することを含む、多検出器型コンピュータ断層撮影心筋血流イメージングのための方法に関する。

（発明の背景）
近年、多検出器型コンピュータ断層撮影法（ＭＤＣＴ：ｍｕｌｔｉｄｅｔｅｃｔｏｒｃｏｍｐｕｔｅｄｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ）が冠動脈疾患の診断に用いられてきた、非特許文献１および非特許文献２。ＭＤＣＴを用いる利点は、精度がより高く、放射線被曝がより少なくて、スキャン時間がより短い（２０から３０秒）ことである。しかしながら、ＭＤＣＴは、心臓の静止相を増加させて動きアーチファクトを低減するために、より低い心拍数を必要とする。ＭＤＣＴでは心拍数を低減するために、βアドレナリン遮断薬が用いられてきた。残念ながら、βアドレナリン遮断薬を使用すると心筋血流が増加することも知られている。

リガデノソン（ＣＶＴ−３１４６）は、Ａ_２Ａアデノシン受容体作動薬であり、心筋血流イメージングのための薬物負荷試験における冠動脈血管拡張薬としての使用が、２００８に米国ＦＤＡによって承認された。リガデノソンは、選択的で効能のある冠血管拡張薬であり、アデノシンと違って体重に依存しないボーラス用量投与が可能である。アデノシンは、潮紅、胸部不快感、深呼吸の衝動、頭痛、喉、首および顎の痛みのような副作用のために使用が制限される。アデノシンのこれらの有害作用は、アデノシンの血管拡張効果に介在するＡ_２Ａに加えて、他のアデノシン受容体サブタイプも活性化することが原因である。その上に、アデノシンは半減期が短く手順の間に複数の処置を必要とすることもその使用をさらに制限する。

リガデノソンは、ボーラス用量投与が可能であり、ＭＤＣＴで用いるのに極めて魅力的な薬剤である。しかしながら、ＭＤＣＴで用いるのにリガデノソンが適するかどうかは、それが心拍数の増加ももたらすであるという事実によって複雑になる。それ故に、リガデノソンの投与に伴う心拍数の増加をなくし、ＭＤＣＴによる心筋血流イメージングに資する方法が依然として必要である。好ましい化合物は、Ａ_２Ａアデノシン受容体に選択的であって、（アデノシンのような化合物より長く作用するが）作用持続時間は短く、それ故に複数投薬の必要性を解消するであろう。

Ｋｉｄｏｅｔａｌ．（２００８）ＣｉｒｃＪ，７２：１０８６−１０９１Ｇｅｏｒｇｅｅｔａｌ．（２２０６）ＪＡＣＣ４８（１）：１５３−１６０

Ａ_２Ａアデノシン受容体作動薬は、βアドレナリン遮断薬および／またはカフェインのような心拍数コントロール薬とともに患者に投与される場合、患者の冠動脈疾患を診断するために多検出器型コンピュータ断層撮影法と併せて用いることができる。本発明は、このような驚くべき発見に関するものである。

本発明の様態は、次の通りである：
心拍数コントロール薬、少なくとも１０μｇの少なくとも１つのＡ_２Ａ受容体作動薬、および医薬として許容される少なくとも１つの担体を含む医薬組成物。

治療有効量の心拍数コントロール薬、および少なくとも１０μｇの少なくとも１つのＡ_２Ａ受容体作動薬を哺乳動物に投与すること、ならびに該哺乳動物の心筋を画像化することを含む、該哺乳動物の該心筋の、血管拡張薬によって誘発された負荷心筋血流の多検出器型コンピュータ断層撮影イメージングの方法。

治療有効量の心拍数コントロール薬、および約１０００μｇを超えない少なくとも１つのＡ_２Ａ受容体作動薬を哺乳動物に投与すること、ならびに該哺乳動物の心筋を画像化することを含む、該哺乳動物の該心筋の、血管拡張薬によって誘発された負荷心筋血流の多検出器型コンピュータ断層撮影イメージングの方法。

治療有効量の心拍数コントロール薬、および少なくとも１０μｇの少なくとも１つのＡ_２Ａ受容体作動薬を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物の、血管拡張薬によって誘発された負荷心筋血流の多検出器型コンピュータ断層撮影イメージングの方法であって、該心拍数コントロール薬は、該少なくとも１つのＡ_２Ａ受容体作動薬より前か、または同時に該哺乳動物に投与される方法。

心拍数コントロール薬、および約１０００μｇを超えないＡ_２Ａ受容体作動薬を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物の、血管拡張薬によって誘発された心筋負荷血流の多検出器型コンピュータ断層撮影イメージングの方法。

心拍数コントロール薬、および約１０から約６００μｇに及ぶ量のＡ_２Ａ受容体作動薬を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物の、血管拡張薬によって誘発された負荷心筋血流の多検出器型コンピュータ断層撮影イメージングの方法。

心拍数コントロール薬、および約１０から約６００μｇに及ぶ量のＡ_２Ａ受容体作動薬を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物の、血管拡張薬によって誘発された負荷心筋血流の多検出器型コンピュータ断層撮影イメージングの方法であって、該Ａ_２Ａ受容体作動薬は、約１０秒未満に投与される方法。

心拍数コントロール薬、および約１０から約６００μｇに及ぶ量のＡ_２Ａ受容体作動薬を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物の、血管拡張薬によって誘発された負荷心筋血流の多検出器型コンピュータ断層撮影イメージングの方法であって、該Ａ_２Ａ受容体作動薬は、約１０μｇを超える量で投与される方法。

心拍数コントロール薬、および約１０から約６００μｇに及ぶ量のＡ_２Ａ受容体作動薬を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物の、血管拡張薬によって誘発された負荷心筋血流の多検出器型コンピュータ断層撮影イメージングの方法であって、該Ａ_２Ａ受容体作動薬は、約１００μｇを超える量で投与される方法。

心拍数コントロール薬、および約１０から約６００μｇに及ぶ量のＡ_２Ａ受容体作動薬を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物の、血管拡張薬によって誘発された負荷心筋血流の多検出器型コンピュータ断層撮影イメージングの方法であって、該Ａ_２Ａ受容体作動薬は、６００μｇ以下の量で投与される方法。

心拍数コントロール薬、および約１０から約６００μｇに及ぶ量のＡ_２Ａ受容体作動薬を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物の、血管拡張薬によって誘発された負荷心筋血流の多検出器型コンピュータ断層撮影イメージングの方法であって、該Ａ_２Ａ受容体作動薬は、５００μｇ以下の量で投与される方法。

心拍数コントロール薬、および約１０から約６００μｇに及ぶ量のＡ_２Ａ受容体作動薬を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物の、血管拡張薬によって誘発された負荷心筋血流の多検出器型コンピュータ断層撮影イメージングの方法であって、該Ａ_２Ａ受容体作動薬は、約１００μｇから約５００μｇに及ぶ量で投与される方法。

心拍数コントロール薬、および約１０から約６００μｇに及ぶ量のＡ_２Ａ受容体作動薬を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物の、血管拡張薬によって誘発された負荷心筋血流の多検出器型コンピュータ断層撮影イメージングの方法であって、該Ａ_２Ａ受容体作動薬は、ＣＶＴ−３０３３、リガデノソン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される方法。

心拍数コントロール薬、および約１０から約６００μｇに及ぶ量のリガデノソンを単回ＩＶボーラスで投与することを含む、哺乳動物の、血管拡張薬によって誘発された負荷心筋血流の多検出器型コンピュータ断層撮影イメージングの方法。

心拍数コントロール薬、および約１００から約５００μｇに及ぶ量のリガデノソンを単回ＩＶボーラスで投与することを含む、哺乳動物の、血管拡張薬により誘発された負荷心筋血流の多検出器型コンピュータ断層撮影イメージングの方法。

上記方法のすべてにおいて、哺乳動物は典型的にヒトである。

上記方法のすべてにおいて、用量は典型的に単回ＩＶボーラスで投与される。

上記方法のすべてにおいて、心拍数コントロール薬は、Ａ_２Ａ作動薬の投与に伴う心拍数の増加を低減することができる任意の薬剤とすることができる。適切な心拍数コントロール薬は、限定なしに、カフェイン、ならびに例えば、アミノフィリンカフェイン、ジフィリン、エンプロフィリン（ｅｎｐｒｏｐｈｙｌｌｉｎｅ）、ペントキシフィリン（ｐｅｎｔｏｘｙｐｈｙｌｌｉｎｅ）、およびテオフィリンなどの他の非選択的アデノシン拮抗薬、ならびにメトプロロールおよびプロプラノロールのようなβ−アドレナリン受容体遮断薬を含む。

定義および一般的なパラメータ
本明細書に用いるすべての技術用語および科学用語は、別に定義されなければ、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味をもつ。本発明の実施または試験に際して、本明細書に記載されるものと同様かまたは等価な任意の方法および材料を用いることができるが、好ましい方法、デバイスおよび材料は、以下に記載される。本明細書に引用されるすべての刊行物は、該刊行物に報告された、本発明と関連して用いられるかもしれない方法論、試薬およびツールを記載して開示するために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書のいかなる内容も、本発明が、先行発明を理由として、かかる開示に先行する権利を持たないことを了承すると解釈されるべきではない。

本明細書および添付の特許請求の範囲において、文脈が明らかに別に指示しなければ、単数形「ひとつの（ａ）」、「ひとつの（ａｎ）」、「該、前記（ｔｈｅ）」は、複数の参照を含むことに留意しなくてはならない。

本明細書では、用語「を含む」は、組成物および方法が、列挙される要素を含むが、他を除外しない意味をもつことが意図される。「から本質的になる」は、組成物および方法を規定するために用いる場合、意図される用途のためにその組み合わせにとって本質的に重要な他の要素を除外することを意味するものとする。従って、本明細書に規定されるような要素から本質的になる組成物は、本明細書に開示される組成物の成分の単離および精製方法からの微量混入物質を除外しないことになる。「からなる」は、本発明の組成物の他の成分の微量より多い要素を除外することを意味するものとする。これらの各移行用語によって規定される実施形態は、本発明の範囲内にある。

「随意的な」あるいは「随意的に」は、続いて記載される事象または環境が生じても生じなくてもよいこと、および上記事象または環境が生じる事例と生じない事例とをその記載が含むことを意味する。

用語「ベータ遮断薬」は、ベータアドレナリン受容体に結合し、ベータアドレナリン刺激の効果を阻害する薬剤を指す。ベータ遮断薬は、ＡＶ結節伝導を増加させる。加えて、ベータ遮断薬は、心拍数をコントロールするシナプス後神経末端に対するノルエピネフリンの効果を阻止することによって心拍数を減少させる。ベータ遮断薬は、細胞内のＣａ^＋＋過負荷も減少させて、後脱分極が介在する自動能を抑制する。ベータ遮断薬の例は、限定なしに、アセブトロール、アルブテロール、アモスラロール、アロチノロール、アテノロール、ベフノロール、ベタキソロール、ベバントロール、ビソプロロール、ビソプロロールフマル酸塩、ボピンドロール、ブシンドロール、ブフェトロール、ブニトロロール、ブタキサミン（ｂｕｔａｘａｍｉｎｅ）、ブトフィロロール、カラゾロール、カルテオロール、カルベジロール、セリプロロール、クロラノロール、ジバルプロエクス、エパノロール、カルベジロール、エスモロール、インデノロール、ランジオロール、ラベタロール、レボブノロール、レボモプロロール、リシノプリル、メドロキサロール、メピンドロール、メチプラノロール、メトプロロール、ナドロール、ネビボロール、ニフェナロール、ニプラジロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロパフェノン、プロプラノロール、サルメテロール、ソタロール、タリノロール、テルタトロール、チリソロール、チモロール、ベラパミル、キサモテロールおよびシベノロールを含む。

用語の「治療有効量」は、かかる治療を必要とする哺乳動物に投与されたときに、以下に定義されるような、治療をもたらすのに十分な心拍数コントロール薬の量を指す。言い換えれば、この用語は、心拍数コントロール薬が、Ａ_２Ａ受容体作動薬と組み合わせて投与されたときに、患者の心筋を画像化するのに十分な条件を提供する心拍数コントロール量と呼ぶこともできよう。治療有効量は、用いられる治療薬の比活性、患者の病状の重篤度、および年齢、身体状況、他の疾患状態の存在、ならびに患者の栄養状況に依存して変化するであろう。加えて、患者が受けているかもしれない他の医薬によっても、投与すべき治療薬の治療有効量が決定されることになろう。

本明細書では、「医薬として許容される担体」は、溶剤、分散媒、コーティング、抗菌薬および抗真菌薬、等張剤および吸収遅延剤などのいずれかまたはすべてを含む。医薬活性物質に対するかかる媒質および薬剤の使用は、当分野でよく知られている。従来の媒質または薬剤のいずれかが活性成分と適合しない場合を除いて、それらを治療用組成物に用いることが考慮される。補足的な活性成分も本組成物に取り込むことができる。

本明細書では、「多検出器型コンピュータ断層撮影法」または「ＭＤＣＴ」は、多検出器型ＣＴ、多列検出器型コンピュータ断層撮影法、多列検出器型ＣＴ、マルチセクションＣＴ、マルチスライス・コンピュータ断層撮影法およびマルチスライスＣＴとも呼ぶことができる。

本発明の実施形態
ＣＢＦを増加させるが末梢血流を有意に増加させない、新しくて効能のあるＡ_２Ａ部分作動薬が見出されている。Ａ_２Ａ部分作動薬は、リガデノソンおよびＣＶＴ−３０３３を含めて、投与されたときに作用発現が速く持続時間が短い。これらの新しい化合物について新たに確認された予想外の利点は、単回ボーラスの静脈内注射で微量に投与されるときに、それらが非常に有用なことである。Ａ_２Ａ受容体部分作動薬は、１０μｇと少量および６００μｇ以上と多量に投与することができて依然として効果があり、副作用があったとしてもわずかである。最適な静脈内用量は、約１００から約５００μｇの少なくとも１つのＡ_２Ａ受容体部分作動薬を含むであろう。典型的に約１４０μｇ／ｋｇ／ｍｉｎの速度でＩＶにより連続的に投与されるアデノシンと比較したときに、この量は予想外に小さい。アデノシンとは異なり、Ａ_２Ａ受容体部分作動薬、特にリガデノソンおよびＣＶＴ−３０３３は、ヒト患者にその患者の体重に関わらず同じ投薬量を投与することができる。それ故に、心筋イメージングのためのＩＶボーラスによるＡ_２Ａ受容体作動薬の単回均一量の投与は、時間および体重に依存するアデノシンの投与に比べて、劇的に簡単でありエラーが発生しにくい。

Ａ_２Ａアデノシン受容体に対して選択的な他の作動薬も知られており、それらも本発明の方法で使用するのに適している。例えば、アデノシンの誘導体であるＭＲＥ−０４７０（Ｍｅｄｃｏ）は、効能のある選択的なアデノシンＡ_２Ａ受容体作動薬であり、イメージングにおける補助剤として用いることができる。ＭＲＥ−０４７０は、ビノデノソンとしても知られており、典型的にＩＶボーラスまたはＩＶ注入によって、１.５ｍｃｇ／ｋｇボーラスまたは１.５ｍｃｇ／ｋｇ／ｍｉｎの典型的な用量で投与される。Ｕｄｅｌｓｏｎｅｔａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．２００４Ｆｅｂ３；１０９（４）：４５７−６４を参照。

驚くべきことに、Ａ_２Ａ受容体作動薬は、適切な心拍数コントロール薬とともに投与される場合、血流ＭＤＣＴ心筋イメージングにも使用できることが見出された。ＭＤＣＴは、画像診断のためのコンピュータ断層撮影法（ＣＴ）の形態である。ＭＤＣＴでは、典型的な従来型およびヘリカルＣＴスキャナで用いられる検出素子の直線状アレイを、検出素子の２次元アレイが置き換える。２次元の検出器アレイは、ＣＴスキャナが複数のスライスまたはセクションを同時に取得することを可能にして、ＣＴ画像の取得速度を大幅に向上させる。ＭＤＣＴにおける画像再構成は、単一セクションＣＴに比べて複雑である。それにも関わらず、ＭＤＣＴの開発は、ＣＴ血管造影およびＣＴ大腸内視鏡検査のような高解像度ＣＴ応用の進展をもたらした（ＭＨＫＨｏｆｆｍａｎｎ，ｅｔａｌ．ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＲｏｅｎｔｇｅｎｏｌｏｇｙ，２００４，１８２：６０１-６０８）。

心拍数コントロール薬は、Ａ_２Ａ受容体作動薬の投与前に患者に投与することができる。事前投与とは、心拍数コントロール薬の治療有効量が、Ａ_２Ａ受容体作動薬が投与される時点で哺乳動物の血液中に残存することを可能にする、Ａ_２Ａ受容体作動薬の投与前の時点における投与を指す。より好ましくは、事前投与は、Ａ_２Ａ受容体作動薬の投与前約１２０分以内、なおさらに好ましくは、３０分以内のカフェイン投与を指す。

代わりに、心拍数コントロール薬は、Ａ_２Ａ受容体作動薬と同時に投与することもできる。このような目的で、医薬組成物を含んだＡ_２Ａ受容体作動薬中に心拍数コントロール薬を取り込むか、あるいは別の医薬組成物として投与することもできる。

心拍数コントロール薬は、本発明の方法および組成物に従って、治療有効量が哺乳動物に投与されることになろう。該治療有効量は、毎分１００拍未満の心拍数を提供するのに十分なカフェイン量であろう。例えば、非選択的なアデノシン受容体拮抗薬を用いる場合には、治療有効量は、約５０ｍｇから約１０００ｍｇに及ぶカフェイン用量であろう。より好ましくは、カフェイン用量は、約１００ｍｇから約５００ｍｇに及ぶであろう。最も好ましくは、カフェイン用量は、約２００ｍｇから約４００ｍｇに及ぶであろう。

本組成物は、経口で、静脈内に、表皮を通して、あるいは治療薬の投与に関する分野で知られる任意の他の手段によって投与することができるが、ボーラスＩＶ投与が好ましい。

心拍数コントロール薬は、液体製剤または固体製剤によって哺乳動物に投与することができる。上述のように、心拍数コントロール薬は、Ａ_２Ａ受容体作動薬とともに、あるいは独立に投与することができる。心拍数コントロール薬をＡ_２Ａ受容体作動薬とともに投与する場合には、この組み合わせを単回ＩＶボーラスとして投与することが好ましい。心拍数コントロール薬を独立に、すなわちＡ_２Ａ受容体作動薬とは別に投与する場合には、錠剤のような固体経口剤形、あるいはＩＶ注射またはＩＶボーラスによることを含めて、任意の知られた方法で心拍数コントロール薬を投与することができる。

本発明の化合物および／またはその誘導体を含む医薬組成物は、非経口投与のための液剤または凍結乾燥散剤として製剤することができる。散剤は、適切な希釈剤もしくは他の医薬として許容される担体を使用前に加えることによって、再構成できる。液体形態で用いる場合、本発明の組成物は、好ましくは等張緩衝水溶液中に取り込まれる。適切な希釈剤の例は、等張生理食塩水、標準的な５％ブドウ糖水溶液、酢酸ナトリウムまたは酢酸アンモニウム緩衝溶液である。かかる液体形態は、非経口投与に適するが経口投与にも用いることができる。ポリビニルピロリジノン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｏｎｅ）、ゼラチン、ヒドロキシセルロース、アカシア、ポリエチレングリコール、マンニトール、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウムまたは当業者に知られる任意の他の賦形剤などの賦形剤を、本発明の化合物を含む医薬組成物に加えることが望ましいこともある。

Ａ_２Ａアデノシン受容体に対して非常に有用で効能があり、かつ選択的な作動薬は、リガデノソンまたは（１−{９−[（４Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル]−６−アミノプリン−２−イル}ピラゾール−４−イル）−Ｎ−メチルカルボキサミドであり、次の化学式をもつ。

作用持続時間の短い選択的なＡ_２Ａアデノシン受容体作動薬として有用な別の好ましい化合物は、次の化学式の化合物である。

ＣＶＴ−３０３３は、化学名（３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−２−（６−アミノ−２−（１−ペンチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−９Ｈ−プリン−９−イル）−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオールをもち、心臓病学的イメージングにおける補助剤として特に有用である。

本発明の方法に用いるのに適した他の化合物は、それぞれの明細書が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，４０３，５６７号および第６，２１４，８０７号においてより詳細に記載されている。本発明の方法に用いるのに適した化合物のさらなる種類は、米国特許第５，２７８，１５０号、第６，３２２，７７１号、および第７，２１４，６６５号ならびに国際公開第２００６／０７６６９８号および国際公開第１９９９／０３４８０４号においても特定され、議論されている。

次の実施例は、本発明の好ましい実施形態を実証するために含まれる。当業者には当然のことながら、以下に続く実施形態に開示される技術は、本発明を実施する際によく機能することが本発明者によって見出された技術、すなわちそれを実施するのに好ましい様態を構成すると考えうる技術を表す。しかしながら、当業者は、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、開示された特定の実施形態に多くの変更を施し依然として同様もしくは類似の結果を達成できることを、本開示の観点から理解すべきである。

機能的に同等ないずれの方法も、本発明の範囲内にある。本明細書における記載に加えて、本発明の様々な修正が、前述の記載および添付図から当業者に明らかになるであろう。かかる修正は、本添付の特許請求の範囲の範囲内にある。

別に注記されなければ、すべての温度は、摂氏温度である。同様に、これらの実施例などの略語は、次の意味をもつ：
μｇ＝マイクログラム
μＭ＝マイクロモーラー（ｍｉｃｒｏｍｏｌａｒ）
ＡＥ＝有害事象
ＡＶ＝房室
ｂｐｍ＝拍／分
ＣＢＦ＝冠血流
ＥＣＧ＝心電図
ＨＲ＝心拍数
ＩＭ＝筋肉内に
ＩＶ＝静脈内
ｋｇ＝キログラム
ＬＶｄＰ／ｄｔ_Ｍａｘ＝左心室圧の最大上昇速度
ＬＶＳＰ＝左心室の収縮期圧
ＭＡＰ＝平均動脈圧
ｍｇ＝ミリグラム
ｍｉｎ＝分
ｍＬ＝ミリリットル
ｍｍ＝ミリメートル
ｍｓｅｃ＝ミリ秒
ＮＳ＝有意でない
ＰＯまたはｐｏ＝経口
ｓｅｃ＝秒
ＳＥＭ＝標準誤差
（実施例１）
背景：
リガデノソン（Ｒｅｇ）、Ａ_２Ａアデノシン受容体作動薬かつ冠動脈血管拡張薬、は心筋血流イメージングのための薬物負荷用薬剤として承認されている。Ｒｅｇは、交感神経興奮および頻拍をもたらす可能性がある。近年、冠動脈疾患の診断に、多検出器型コンピュータ断層撮影法（ＭＤＣＴ）が用いられてきた。ＭＤＣＴを用いる利点は、精度がより高く、放射線被曝がより少なく、スキャン時間がより短い（２０から３０ｓｅｃ）ことである。しかしながら、ＭＤＣＴは、心臓の静止相を増加させて動きアーチファクトを低減するために、より低い心拍数を必要とする。ＭＤＣＴでは、心拍数（ＨＲ）を減少するためにβアドレナリン遮断薬を用いることができる。本発明者の目標は、β_１アドレナリン作動遮断が、意識のあるイヌでＲｅｇによって誘発された冠動脈血管拡張を減少させることなく、頻拍を抑制することができるか否かを判定することであった。

方法：
５匹の雑種犬に、全身血行動態および冠血流（ＣＢＦ）を測定するための機器を慢性的に装着した。β_１アドレナリン受容体遮断薬メトプロロール（１.５ｍｇ／ｋｇ）投与の前後に、ＨＲおよびＣＢＦに対するリガデノソン（１、２.５および５μｇ／ｋｇ、ＩＶ）の効果を評価した。Ｒｅｇによって誘発される冠血管拡張を評価するために、ＣＢＦのピーク値、およびベースラインより上の、ＣＢＦにおける２倍増加持続時間の値を用いた。

結果：
Ｒｅｇ（１、２.５および５μｇ／ｋｇ）は、用量依存的な増加をＣＢＦピーク値（それぞれ、ΔＣＢＦ：１２９±１０，１４９±７および１７４±１０ｍＬ／ｍｉｎ、平均±ＳＥＭ、ｎ＝４〜５、すべてｐ＜０.０５）および充血の持続時間にもたらした。ＣＢＦの２倍増加持続時間は、１、２.５および５μｇ／ｋｇＲｅｇでそれぞれ９３±２２、３１６±５７および５９３±８６ｓｅｃであった。Ｒｅｇは、用量依存的なＨＲの増加ももたらした（それぞれ、ΔＨＲ：４９±８、６３±５、および７１±７ｂｐｍ、すべてｐ＜０.０５）。Ｒｅｇによって誘発された頻拍は、メトプロロールのＩＶ投与後に顕著に減少し（１，２.５および５μｇ／ｋｇＲｅｇで、それぞれΔＨＲ：１９±４、２８±３、および３９±５ｂｐｍ、すべてｐ＜０.０５ｖｓ．対照）、対照の５５±１２、５４±７および４５±４％になった。Ｒｅｇ（１、２.５および５μｇ／ｋｇ）によって誘発された冠血管拡張は、メトプロロールの存在下において対照から１１±７、１０±４および２１±２％減少し（それぞれ、ΔＣＢＦ：１１２±５（ＮＳ）、１３６±１６（ＮＳ）および１３８±９（ｐ＜０.０５）ｍＬ／ｍｉｎ）、ＣＢＦの２倍増加の持続時間は、それぞれ７１±３４、２１５±４５および３６４±８６ｓｅｃ（ｐ＜０.０５ｖｓ．対照）まで減少した。

結論：
本結果は、１〜５のμｇ／ｋｇのリガデノソンが、用量依存的な冠血管拡張とＨＲの増加とをもたらしたことを示す。メトプロロールを用いたβ_１アドレナリン作動遮断は、Ｒｅｇによって誘発された頻拍を有意に減弱させた。Ｒｅｇによって誘発される冠血管拡張は、メトプロロールによって低減されたが、減少率はＨＲに比べて少なかった。これらの結果は、ＭＤＣＴで冠動脈疾患を診断するために、β_１アドレナリン受容体拮抗薬と併せてリガデノソンを使用するとよいことを示す。

（実施例２）
意識のあるイヌにおける冠血管拡張カフェイン（１から１０ｍｇ／ｋｇ）の効果およびリガデノソン（５μｇ／ｋｇ、ＩＶ）による血行動態変化に対するを測定した。カフェインは、冠血管拡張の持続時間を用量依存的に減弱させたが、リガデノソンによって誘発される冠動脈充血のピーク増加は減少させなかった。カフェイン（４および１０ｍｇ／ｋｇ）は、平均動脈圧および心拍数に対するリガデノソンの効果を有意に減少させた。この結果は、Ａ_２Ａアデノシン受容体作動薬を用いた薬物負荷試験の直前にカフェインを消費することによって、この薬物がもたらす冠血管拡張の持続時間を短縮できることを示唆する。

方法
慢性的に機器が装着された体重２２〜３０ｋｇのオスの雑種犬１６匹を試験に用いた。動物プロトコルは、ニューヨーク医科大学の施設内動物管理使用委員会によって承認され、米国国立衛生研究所による実験動物の管理および使用に関する指針に準拠したものである。

外科手技
アセプロマジン（０.３ｍｇ／ｋｇ、ＩＭ）を用いて、イヌを鎮静させ、そしてペントバルビタールナトリウム（２５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ）を用いて、イヌを麻酔させた。挿管後に、室内空気を用いた呼吸器をイヌに繋いだ。無菌操作を用いて第５肋間で開胸した。Ｔｙｇｏｎカテーテル（ＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｗａｋｅｆｉｅｌｄ，ＭＡ）を下行胸部大動脈に挿入し、別の１本を左心房に挿入した。９匹のイヌでは、左冠動脈回旋枝の周りに超音波流量トランスデューサ（ＴｒａｎｓｏｎｉｃＳｙｓｔｅｍｓ，Ｉｔｈａｃａ，ＮＹ）を配置した。固体圧力計（Ｐ６．５，ＫｏｎｉｓｂｅｒｇＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｐａｓａｄｅｎａ，ＣＡ）を、心尖部を通して左心室中に配置した。胸部を層ごとに閉じた。カテーテルおよびワイヤは、皮下を通過させてイヌの首の後ろで皮膚を通して取り出した。実験を行う前にイヌを外科手術から回復させて、テーブル上に横たわるように訓練した。

冠血流および血行動態測定
大動脈カテーテルを歪みゲージトランスデューサ（Ｐ２３ＩＤ，ＬＤＳＴｅｓｔａｎｄＭｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ，ＶａｌｌｅｙＶｉｅｗ，ＯＨ）に接続することによって、位相性の動脈圧を測定した。固体圧力計によって左心室内圧を測定した。Ｔｒａｎｓｏｎｉｃフローメータ（Ｔ２０６，ＴｒａｎｓｏｉｃＳｙｓｔｅｍｓ，Ｉｔｈａｃａ，ＮＹ）を用いて、ＣＢＦ（ｍＬ／ｍｉｎ）を超音波流量トランスデューサから測定した。リガデノソンによって誘発される冠血管拡張を記述するために、２つの指標を用いた。１）ＣＢＦにおける最大増加、および２）ＣＢＦにおける２倍増加持続時間（ＣＢＦが、ベースラインＣＢＦの≧２倍のレベルに引き上げられた時間）。すべての圧力および流量データは、ＰｏｎｅｍａｈＳｙｓｔｅｍ（Ｖｅｒｓｉｏｎ３．３０または４．２０，ＬＤＳＴｅｓｔａｎｄＭｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ，ＶａｌｌｅｙＶｉｅｗ，ＯＨ）を用いて取得し、解析した。ＭＡＰおよびＨＲは位相性の血圧から計算し、ＬＶｄＰ／ｄｔ_Ｍａｘは左心室の収縮期圧から計算した。

実験プロトコル
実験日にイヌをテーブル上に置いて、実験の間そこに静かに横たわらせた。カテーテルを脚の末梢静脈に挿入して注入ラインに接続し、イヌに不安を与えることなく薬物を投与した。実験は、ＭＡＰ、ＨＲおよびＣＢＦが安定になった後に開始した。

ＭＡＰおよびＨＲに対するカフェインのみの効果、および血漿中カフェイン濃度（第Ｉ部）：
グループの各イヌに対して３つの実験を行った。それぞれの実験において、イヌは、２、４または１０ｍｇ／ｋｇのカフェインのＩＶ注射を（１から３ｍｉｎにわたって）受けた。それぞれのイヌは、３用量のカフェインを（異なった日に）ランダムに受けた。ＭＡＰおよびＨＲは連続的に１２０ｍｉｎ記録し、血漿中カフェイン濃度を測定するために、カフェイン投与後２.５、５、１５、３０、６０、９０および１２０ｍｉｎに３ｍＬの血液を大動脈カテーテルから採取した。

リガデノソンによって誘発された冠血管拡張および血行動態変化に対するカフェインの効果（第ＩＩ部）：
それぞれのイヌは、５μｇ／ｋｇのリガデノソンのＩＶ注射を受けた。４５ｍｉｎ後に、１ｍｇ／ｋｇのカフェイン（ＩＶ）を投与した。カフェイン注射の約４５ｍｉｎ後に、リガデノソンの２回目の注射を行った。ＬＶＳＰ、ＬＶｄＰ／ｄｔ_Ｍａｘ、ＭＡＰ、ＨＲおよびＣＢＦを連続的に記録した。リガデノソンの注射後１、３、５、１５、３０、４５および６０ｍｉｎに、左心房のカテーテルから血液サンプルを採取した。

続く日々に、異なった用量のカフェイン（２、４または１０ｍｇ／ｋｇ）を用いて、同じイヌでこのプロトコルと採血とを繰り返した。

リガデノソンによって誘発される冠血管拡張にタキフィラキシーがあるかどうか判定するために、４匹のイヌにリガデノソンの２用量（５μｇ／ｋｇ、ＩＶ）を（採血なしに）９０ｍｉｎ間隔をあけて与えた。

薬物
リガデノソンは、ＣＶＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．から無菌原液（Ｌｏｔ＃：８０３６０４，０.０８ｍｇ／ｍＬ）として供給されたもので、１５％プロピレングリコールを用いてこれを作製し（ｐＨ７）、注射の前に生理食塩水で希釈した。カフェインは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入し、生理食塩水（１０ｍｇ／ｍＬ）に溶解させた。

統計的解析
ベースラインにおけるパラメータ値と、薬物投与後の指示された時点におけるパラメータ値との差に関する統計学的有意性をＯｎｅ−ＷａｙＲｅｐｅａｔｅｄＭｅａｓｕｒｅｓＡＮＯＶＡ、続いてＴｕｋｅｙ試験を用いて判定した。カフェインの不在下と、存在下とのリガデノソンに対する応答の差に関する統計学的有意性をＴｗｏ−ＷａｙＲｅｐｅａｔｅｄＭｅａｓｕｒｅｓＡＮＯＶＡ、続いてＴｕｋｅｙ試験を用いて判定した。ｐ＜０．０５の結果を有意と見做した。コンピュータベースのソフトウェアパッケージ（ＳｉｇｍａＳｔａｔ２．０３）を統計学的解析に用いた。すべてのデータは、平均±ＳＥＭで提示されている。

結果
ＭＡＰおよびＨＲに対するカフェインのみの影響、ならびに血漿中カフェイン濃度
２ｍｇ／ｋｇのカフェインのＩＶ注射は、ＭＡＰおよびＨＲに有意な変化をもたらさなかった。４ｍｇ／ｋｇのカフェインは、注射後２．５および５ｍｉｎの両方でＭＡＰに約１２ｍｍＨｇの有意な増加をもたらし、ＨＲには有意な変化がなかった。１０ｍｇ／ｋｇのカフェインは、ＭＡＰに有意ではない増加（２．５、５、および１５ｍｉｎで５から９ｍｍＨｇ、ｐ＞０．０５）をもたらしたが、注射後３０から１２０ｍｉｎでＨＲを１６から２４拍／ｍｉｎ減少させた。血漿中カフェイン濃度は、カフェイン注射後３０から１２０ｍｉｎまで比較的狭い範囲内のままであった（表１）。これらの結果に基づいて、リガデノソンによって誘発されるＣＢＦおよび血行動態の変化に対する、カフェインの効果を判定するためには、カフェイン投与後４５ｍｉｎが最適であると結論付けた。

リガデノソンによって誘発される冠血管拡張に対するカフェインの効果
時間対照群：
４匹のイヌでリガデノソンのＩＶ注射（５μｇ／ｋｇ）は、ＣＢＦに有意な増加をもたらした。最大ＣＢＦは、ベースライン値３７±１から１７８±１７ｍＬ/ｍｉｎまで増加し、ＣＢＦにおける２倍増加持続時間は、４０１±４５ｓｅｃであった。リガデノソンの２回目の注射は、同じ冠血管拡張を９０ｍｉｎ後にもたらした。最大ＣＢＦは、ベースライン値３５±１から１７６±６ｍＬ/ｍｉｎまで増加し、ＣＢＦにおける２倍増加持続時間は、３９５±４３ｓｅｃであった。ベースラインＣＢＦ、リガデノソンの２回の注射によって誘発された最大ＣＢＦあるいはＣＢＦの２倍増加の持続時間に、統計学的な有意差はなかった。

リガデノソンによって誘発された冠血管拡張に対するカフェインの効果
カフェインの不在下において、リガデノソン（５μｇ／ｋｇ）のＩＶ注入は、ベースライン値３４±２からピーク１９１±７ｍＬ／ｍｉｎまでＣＢＦを増加させ、リガデノソンによって生じたＣＢＦにおける２倍増加持続時間は、５１５±７１ｓｅｃであった（ｎ＝８）。

ＣＢＦのベースライン値は、カフェイン処置の前および後（１、２、４、および１０ｍｇ／ｋｇ投与後４５ｍｉｎ）で有意差がなかった。１、２、４および１０ｍｇ／ｋｇのカフェインの存在下において、リガデノソンによって生じたＣＢＦの最大増加は、（カフェインの不在下における）対照から有意には減少しなかった。リガデノソンによって誘発されたＣＢＦの最大増加は、１、２、４および１０ｍｇ／ｋｇのカフェインの存在下において、それぞれ２±３、−０．７±３、−１６±５および−１３±８％変化したに過ぎなかった（すべてｐ＞０．０５）。それとは対照的に、リガデノソンによって生じたＣＢＦの２倍増加持続時間は、テストしたすべてのカフェイン投薬量で有意に減少した。１、２、４および１０ｍｇ／ｋｇのカフェインの存在下において、ＣＢＦにおける２倍増加持続時間の減少は、それぞれ対照から１７±４、４８±８、６２±５および８２±５％であった（すべてｐ＜０.０５）。しかしながら、１、２および４ｍｇ／ｋｇのカフェインの存在下において、リガデノソンによって増加したＣＢＦは、≧３ｍｉｎにわたってベースラインレベルの≧２倍のままであった
リガデノソンおよびカフェインの血漿中濃度
カフェインの不在下において、リガデノソン（５μｇ／ｋｇ）のＩＶ注射は、約１ｍｉｎでピークに達して急速に減少する、血漿中リガデノソン濃度の短時間の増加をもたらした。リガデノソンの薬物動態プロフィールは、１、２、４および１０ｍｇ／ｋｇのカフェインによって変化しなかった。

血漿中カフェイン濃度は、１、２、４および１０ｍｇ／ｋｇのカフェインの投与後４５ｍｉｎ、かつリガデノソンの２回目の注射の直前に、それぞれ５±０.２、１０±０.６、１８±０.８および５２±１.８μＭであった。血漿中カフェイン濃度は、注射前の時間（時間０）からリガデノソンの２回目の注射後３０ｍｉｎまで比較的安定したレベルのままであった。

リガデノソンによって誘発される血行動態の変化に対するカフェインの効果
表２は、１、２、４および１０ｍｇ／ｋｇのカフェインの不在下または存在下のいずれかにおける、リガデノソン投与後の異なった時点でのＭＡＰおよびＨＲの値を示す（ピーク応答は含まれない）。表２（対照に対するベースライン値、ならびに１、２、４および１０ｍｇ／ｋｇのカフェイン）に示されるように、１、２、４または１０ｍｇ／ｋｇのカフェインは、カフェイン投与後４５ｍｉｎにおける血行動態を有意には変化させなかった。

リガデノソン（５μｇ／ｋｇ）のＩＶ注射は、ＭＡＰに軽度の減少をもたらした。リガデノソンは、カフェインの不在下において、ＭＡＰ（ピーク）をベースライン値１０２±２ｍｍＨｇから１５±２％減少させた（ｎ＝９）。１および２ｍｇ／ｋｇのカフェインの存在下において、リガデノソンによって生じるＭＡＰのピーク減少は、変化しなかった（それぞれ、ベースラインから１３±２％ｖｓ．１３±１％）。しかしながら、４ｍｇ／ｋｇのカフェインの存在下において、リガデノソンは、ピークＭＡＰをベースラインから２±５％のみ減少させた。１０ｍｇ／ｋｇのカフェインの存在下において、リガデノソンは、ＭＡＰを有意ではないがベースラインから９±６％増加させた。

リガデノソン（５μｇ／ｋｇ）のＩＶ注射は、８から９ｍｉｎ間続くＨＲの増加をもたらした。リガデノソンは、ＨＲ（ピーク）を、ベースライン値８０±４拍／ｍｉｎから１１４±１４％増加させた（ｎ＝９）。１ｍｇ／ｋｇのカフェインは、リガデノソンによって誘発される頻拍を顕著には変化させなかった。ピークＨＲは、ベースラインから１２４±１２％増加した。２ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇのカフェインは、リガデノソンによって誘発される頻拍を用量依存的に有意に減弱させた。ピークＨＲは、ベースラインからそれぞれ１０９±２１％、７９±２０％、および７４±１６％増加した（すべてｐ＜０．０５、対照と比較）。

リガデノソンは、ＬＶＳＰ（ピーク）をベースライン値１３９±５ｍｍＨｇから９±１％減少させた（ｎ＝８）。１ｍｇ／ｋｇおよび２ｍｇ／ｋｇのカフェインの存在下において、リガデノソンは、依然としてＬＶＳＰをベースラインからそれぞれ９±３％および６±２％有意に減少させた。４ｍｇ／ｋｇのカフェインの存在下において、リガデノソンは、ＬＶＳＰの有意な減少をもたらさず（対照から１±５％減少、ｐ＞０．０５）、一方で１０ｍｇ／ｋｇのカフェインの存在下において、リガデノソンは、ＬＶＳＰを有意に増加させた（対照から１１±７％増加）。

５μｇ／ｋｇのリガデノソンのＩＶ注射は、ＬＶｄＰ／ｄｔ_Ｍａｘの増加をもたらした。リガデノソンは、ＬＶｄＰ／ｄｔ_Ｍａｘ（ピーク）をベースライン値３２４０±１９６ｍｍＨｇ／ｓｅｃから６５±７％増加させた。リガデノソンによって誘発されたＬＶｄＰ／ｄｔ_Ｍａｘの増加に対するカフェインの効果には一貫性がなかった。リガデノソンによって生じたＬＶｄＰ／ｄｔ_Ｍａｘの増加は、１ｍｇ／ｋｇのカフェインの存在下において、わずかにより大きかった。２および４ｍｇ／ｋｇのカフェインの存在下において、リガデノソンによって誘発されたＬＶｄＰ／ｄｔ_Ｍａｘの増加は、わずかにより小さかった。リガデノソンによって誘発されるＬＶｄＰ／ｄｔ_Ｍａｘの増加は、１０ｍｇ／ｋｇのカフェインの存在下において、変化しなかった。

ＣＢＦの増加の大きさおよび冠血管拡張の持続時間の両方が、心筋血流イメージングにおける正確な診断にとって重要である。この研究の最も重要な知見は、カフェインが、冠血管拡張の持続時間を減弱させるが、リガデノソンに応答したＣＢＦのピーク増加を減弱させないことである。従って、Ａ_２Ａ受容体が介在する冠血管拡張の持続時間は、ピークＣＢＦに比べて、カフェインによる拮抗作用への感受性がより高い。

カフェインは、すべてのアデノシン受容体サブタイプの非特異的かつ非選択的な拮抗薬である。ヒトアデノシンＡ_１、Ａ_２Ａ、Ａ_２ＢおよびＡ_３受容体に対するカフェインの親和性（Ｋｉ）は、それぞれ１２、２．４、１３および８０μＭである（Ｆｒｅｄｈｏｌｍｅｔａｌ．（１９９９）．ＰｈａｒｍａｃｏｌＲｅｖ，５１：８３−１３３）。多数の研究は、ヒトおよびイヌにおいて、カフェインが、アデノシン（Ｓｍｉｔｓｅｔａｌ．（１９９０）ＣｌｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌＴｈｅｒ，４８：４１０−８；Ｋｕｂｏｅｔａｌ．（２００４）ＪＮｕｃｌＭｅｄ，４５：７３０−８；Ｌａｐｅｙｒｅｅｔａｌ．（２００４）ＪＮｕｃｌＣａｒｄｉｏｌ，１１：５０６−１１）によって、ジピリダモール（Ｓｍｉｔｓｅｔａｌ．（１９９１）ＪＮｕｃｌＭｅｄ，３２：１５３８−４１；Ｋｕｂｏｅｔａｌ．（２００４）ＪＮｕｃｌＭｅｄ，４５：７３０−８；Ｌａｐｅｙｒｅｅｔａｌ．（２００４）ＪＮｕｃｌＣａｒｄｉｏｌ，１１：５０６−１１）によって、およびＡ_２Ａ受容体作動薬、ＡＴＬ−１４６ｅ（Ｒｉｏｕｅｔａｌ．（２００２）ＪＡｍＣｏｌｌＣａｒｄｉｏｌ，４０：１６８７−９４）によって誘発された冠血管拡張を減弱させうることを示した。延いては、これらの負荷用薬剤（Ｓｍｉｔｓｅｔａｌ．（１９９１）ＪＮｕｃｌＭｅｄ，３２：１５３８−４１）を用いた試験では、カフェインの作用が、偽陰性の心筋血流イメージングをもたらすことがありうる。しかしながら、カフェインが、アデノシンによって誘起される冠動脈充血を変化させなかったことを、冠動脈疾患をもつ患者の血流予備量比を測定することによって示した報告もある（Ａｑｅｌｅｔａｌ．（２００４）ＡｍＪＣａｒｄｉｏｌ，９３：３４３−６）。

本結果は、カフェインが、リガデノソンによって誘発された冠動脈充血を独特のパターンで減弱させることを初めて明らかにする：カフェインは、リガデノソンによって誘発される冠血管拡張の持続時間を、用量依存的なやり方で選択的に減弱させるが、ＣＢＦの最大増加は顕著には変化させない。１から１０ｍｇ／ｋｇ用量のカフェインは、ピーク血漿中リガデノソン濃度を減少させず、リガデノソンの薬物動態プロフィールも変化させなかった。リガデノソンによって生じる冠動脈充血の、カフェインの存在下における独特の減弱パターンは、Ａ_２Ａ受容体の異なった親和性と、リガデノソンおよびカフェインの薬物動態プロフィールとによって説明されるかもしれない。注射の直後には、リガデノソン分子が冠循環におけるＡ_２Ａ受容体のほとんどと結合することができるので、いずれの用量のカフェインの存在下でも同様にＣＢＦの最大増加をもたらすことができる。血漿中リガデノソン濃度は、注射後程無く急速に減少したが、血漿中カフェイン濃度は比較的一定のままであった。従って、カフェインの存在下において、カフェイン分子がより多くのＡ_２Ａ受容体を占有するにつれて、リガデノソンへのピーク応答後のＣＢＦの増加はより急速に減少し、その結果として、リガデノソンによって生じた冠血管拡張の持続時間が短縮されることになる。これらの結果は、カフェインが、意識のあるイヌでリガデノソンによって誘発された冠血管拡張の持続時間の用量依存的な減弱をもたらしたことを示すが、リガデノソンによって増加したＣＢＦは、１、２および４ｍｇ／ｋｇのカフェイン（１杯から２杯のコーヒーの消費と同等）の存在下において、≧３ｍｉｎ間にわたってベースライン・レベルの≧２倍に維持された。より最近になって、アデノシン投与より１時間前に摂取された８オンスカップ一杯のコーヒーは、単一光子放射断層撮像法によって試験される、可逆的欠損の存在あるいは重症度をマスクしないことが報告された。（Ｚｏｇｈｂｉｅｔａｌ．（２００６）ＪＡｍＣｏｌｌＣｏｒｄｉｏｌ，４７：２２９６−３０２）。

Ａ_２Ａ受容体の脱感作が細胞ベースの実験モデルで報告されている（Ａｎａｎｄ−Ｓｒｉｖａｓｔａｖａｅｔａｌ．（１９８９）ＭｏｌＣｅｌｌＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，６２：２７３−９，Ｒａｍｋｕｍａｒｅｔａｌ．（１９９１）ＭｏｌＰｈａｒｍａｃｏｌ，４０：６３９−４７）。しかしながら、関連研究は、意識のあるイヌで１.０μｇ／ｋｇのリガデノソンの（５から１０ｍｉｎ間隔をあけた）３回連続の用量が同様のＣＢＦピーク増加をもたらすことを実証した（Ｔｒｏｃｈｕｅｔａｌ．（２００３）ＪＣａｒｄｉｏｖａｓｃＰｈａｒｍａｃｏｌ，４１：１３２−９）。さらに、本研究では、リガデノソンによって誘発される冠血管拡張にタキフィラキシーが存在するか否かを判定するために、意識のある４匹のイヌに対して時間対照実験を行った。結果は、リガデノソンの２つの注射によって生じたＣＢＦの最大増加あるいはＣＢＦの２倍増加持続時間のいずれにも、有意差が存在しないことを示した。従って、リガデノソンによって誘発される冠動脈充血の、カフェインの存在下における減弱は、カフェインによるＡ_２Ａ受容体の競合的拮抗作用による可能性が最も高い。

本研究は、リガデノソンのＩＶ注射が、意識のあるイヌでＭＡＰ（表２）およびＬＶＳＰの軽度の減少、ならびにＨＲ（表２）およびＬＶｄＰ／ｄｔ_Ｍａｘのわずかな増加をもたらすことも示した。本研究においてリガデノソンによって誘発されたＭＡＰおよびＨＲの変化は、関連研究と辻褄が合った（Ｔｒｏｃｈｕｅｔａｌ．（２００３）ＪＣａｒｄｉｏｖａｓｃＰｈａｒｍａｃｏｌ，４１：１３２−９、Ｚｈａｏｅｔａｌ．（２００３）ＪＰｈａｒｍａｃｏｌＥｘｐＴｈｅｒ，３０７：１８２−９）。これらは、リガデノソンによって誘発されたＭＡＰの軽度の減少が、末梢血管の拡張に起因することを示唆した。これは、リガデノソンによる総末梢抵抗（ＴＰＲ：ｔｏｔａｌｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）の減少と下半身における血管拡張とによって立証された（Ｚｈａｏｅｔａｌ．（２００３）ＪＰｈａｒｍａｃｏｌＥｘｐＴｈｅｒ，３０７：１８２−９）。

カフェインは、ヒトでジピリダモールによって誘発された血圧の増加を、用量依存的な仕方で減弱させることが示されている（Ｓｍｉｔｓｅｔａｌ．（１９９１）ＣｌｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌＴｈｅｒ，５０：５２９−３７）。本研究は、カフェインが、意識のあるイヌでリガデノソン、新規なアデノシンＡ_２Ａ受容体作動薬、によって誘発された低血圧を、用量依存的な減弱させることをさらに確認した。アデノシンは、ヒトの交感神経活動を高めることができ、それによって頻拍を生じることが報告されている。（Ｂｉａｇｇｉｏｎｉｅｔａｌ．（１９９１）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、８３：１６６８−７５）。本結果は、リガデノソンのＩＶ注射が意識のあるイヌに有意な頻拍をもたらすことを示しており、関連研究と一致する（Ｔｒｏｃｈｕｅｔａｌ．（２００３）ＪＣａｒｄｉｏｖａｓｃＰｈａｒｍａｃｏｌ，４１：１３２−９、Ｚｈａｏｅｔａｌ．（２００３）ＪＰｈａｒｍａｃｏｌＥｘｐＴｈｅｒ．３０７：１８２−９）。さらに重要なことに、最近のある研究は、覚醒ラットでリガデノソンによって誘発される頻拍に交感神経興奮が直接に介在することを示した（Ｄｈａｌｌａｅｔａｌ．（２００６）ＪＰｈａｒｍａｃｏｌＥｘｐＴｈｅｒ，３１６：６９５−７０２）。上記の研究では、リガデノソンによって誘発された頻拍が、キサメトニウム（神経節遮断薬）によって除かれた。本研究は、カフェインが、意識のあるイヌでリガデノソンによって誘発された頻拍を、用量依存的なやり方で減弱させることを実証した。しかしながら、リガデノソンによって誘導される頻拍のカフェインによる低減メカニズム（単数または複数）はまだ確定していない。

要約すれば、上記の実施例の結果は、１から１０ｍｇ／ｋｇのＩＶカフェイン用量が、
（１）カフェインの血漿中濃度が５２±２μＭと高いときには、４５ｍｉｎにおけるベースラインＣＢＦおよび血行動態を変化させなかったこと；
（２）リガデノソンによって誘発されたＣＢＦのピーク増加を有意に減少させなかったこと；
（３）リガデノソンによって誘発された冠血管拡張の持続時間の用量依存的な減少をもたらしたこと；ならびに
（４）リガデノソンによって誘発された洞頻拍および低血圧を弱めたこと、を示す。

（実施例３）
目的：
第一の目的は、リガデノソンによって誘発される心筋血流（ＭＢＦ）をカフェイン摂取のおよそ２時間後に測定し、ＭＢＦの増加に対するカフェインの経口用量２００ｍｇの効果を評価することであった。第二の目的は、
・事前のカフェインありおよびなしで、リガデノソンによって誘発される心拍数（ＨＲ）の応答を評価すること；
・リガデノソンによって誘発されるＭＢＦの増加とＨＲの変化との関係、および経口カフェインによってそれが変化するか否かを評価すること；
・事前のカフェインありおよびなしで、リガデノソンによって誘発される血圧（ＢＰ）の応答を評価すること；
・事前のカフェインありおよびなしで、リガデノソンの安全性および耐容性を見積もること；および
・リガデノソンへのＭＢＦの応答に対する事前のカフェインの効果が、男女のボランティア間で異なるか否かを見積もること、を含んだ。

方法論：
これは、カフェインありおよびなしの健常な被験者におけるリガデノソンの無作為化二重盲検交差試験であった。２試験日のそれぞれに、リガデノソン投与（４００μｇ単回静脈内（ＩＶ）用量、１０ｓｅｃにわたって投与、その後５ｍＬ生理食塩水フラッシュ）後、およびカフェイン２００ｍｇまたはプラシーボ投薬後に、安静時および負荷時の陽電子断層撮影（ＰＥＴ）スキャンを行った。ＰＥＴスキャンにおける放射性核種として１５Ｏ水を用いた。投薬日の間に、１から１４日のウォッシュアウト期間があった。血液サンプルおよび安全性の評価基準を治験薬投与後１２０ｍｉｎまでに収集した。

（計画および解析した）被験者数：
本試験は、４０人の被験者が評価可能なデータで試験を完了することを目指して、５２人の被験者（各交差シークエンスに２６人）を登録するようにデザインした。４５人の被験者を登録し、無作為化して４３の被験者にリガデノソンを投薬した。そのうち４１人の被験者が試験を完了し、４０人の被験者について効力の評価が可能であった。２人の被験者は途中で終了した。

診断および包含の主要基準
文書によるインフォームドコンセントを提供した健常な成人男性または女性（≧１８歳）であって、規則的にコーヒーを飲む（１日あたり少なくとも１杯）非喫煙者を本試験に含むことを考慮した。登録被験者は、臨床的に意義のある身体的知見も心電図（ＥＣＧ：Ｅｌｅｃｔｒｏｃａｒｄｉｏｇｒａｍ）所見も、ベースライン時に持たないこととした。彼らは、各試験日前の２４時間にわたってカフェインまたは他のメチルキサンチン類の摂取を控えること、およびベースライン評価の４時間前から最後の血液サンプルが採取される（負荷ＰＥＴスキャンの５ｍｉｎ後）まですべての食料および水以外の飲料を控えることも要請された。出産可能な女性被験者は、陰性ベースライン妊娠テストを受けていなければならず、入院前の３ヶ月にわたって、および試験後の１週間を通じて許容可能な避妊法を用いなくてはならなかった。

継続的な処置を必要とする任意の病気を被験者がもつ場合、彼らは本研究に登録するのに適格ではなかった。アルコール中毒もしくは薬物嗜癖の経歴、または既知かもしくは疑似の気管支収縮性および気管支攣縮性肺疾患の病歴、あるいはテオフィリンもしくはアミノフィリンに対する既知のアレルギーをもつ被験者は、登録を許可しなかった。

テスト製品、用量および投与モード、バッチ番号
５ｍＬのリガデノソン（０．０８ｍｇ／ｍＬ）をそれぞれ含む使い捨てバイアル中に、オープンラベルの治験薬を無菌原液として供給した。リガデノソン４００μｇを、急速ボーラスとしてＩＶカテーテルを通じて約１０ｓｅｃ間にわたって投与し、その直後に５ｍＬの生理食塩水でフラッシュした。リガデノソン（治験薬）は、次のＣＶＴロット番号を有した：８０３６０４。

処置の持続時間
２試験日のそれぞれに、被験者は、急速（１０ｓｅｃ）ボーラスとして静脈内投与された、５ｍＬのリガデノソンの単回投与を受け、その後５ｍＬの生理食塩水でフラッシュされた。投薬の間に１から１４日のウォッシュアウト期間があった。

参照治療、用量および投与モード、バッチ番号
リガデノソンの約１０５ｍｉｎ前に、カフェイン２００ｍｇｐｏ、またはプラシーボカプセルを投与した。カフェインカプセルのＣＶＴ追跡番号は、１３４１（Ｌｅｇ３）であった。これらのカプセルは、Ｂｒｉｓｔｏｌ−ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂからのロット番号４０５５４２のカフェイン錠剤（ＮｏＤｏｚ（登録商標））を含んだ。プラシーボカプセルのＣＶＴ追跡番号は、１３４１（Ｌｅｇ２）であった。

評価のための基準：
効力：
効力の主要な評価基準は、リガデノソン投薬後の負荷時ＭＢＦ：安静時ＭＢＦの比である冠血流予備能（ＣＦＲ：ｃｏｒｏｎａｒｙｆｌｏｗｒｅｓｅｒｖｅ）の対数であった。血漿中カフェイン、テオフィリンおよびリガデノソン濃度を測定して診査解析に用いることにした。

安全性：
安全性の評価基準は、有害事象（ＡＥ：ａｄｖｅｒｓｅｅｖｅｎｔ）、重篤有害事象、バイタルサイン（ＨＲおよびＢＰ）、ＥＣＧ、併用薬、ならびに耐容性アンケートを含んだ。リガデノソンの単回投与を受けた被験者から入手可能なすべてのデータを統計的概要に含めることにした。

主要な効力解析は、カフェインが、リガデノソン投与後のＣＦＲを少なくとも１０％減少させるか否かを、順序、順序内の被験者、期間、および処置の項をもつ分散分析（ＡＮＯＶＡ：ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｖａｒｉａｎｃｅ）を用いてテストすることであった。処置の平均値の差（カフェイン−プラシーボ；対数スケール）に対する９５％および９０％信頼区間（ＣＩ：ｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅｉｎｔｅｒｖａｌ）の限界を指数化して、生スケールの中央値の比に対するＣＩを得ることにした。この後者の９０％ＣＩの下限が０．９を超えれば、事前のカフェイン投与がＣＦＲを１０％未満減少させると、９５％の信頼度で言うことができるであろう。データは、Ｗｉｌｃｏｘｏｎの順位和検定でも分析することにした。

カフェインの効果を男性および女性被験者で比較することにした。薬力学な診査解析は、ＨＲおよびＢＰに対する、ならびにＭＢＦとＨＲ／ＢＰとの関係に対するカフェインの効果、さらにＣＦＲと血漿中カフェイン濃度との相関関係を含んだ。リガデノソン投与後に生じたか、あるいは悪化したＡＥを、重篤度、治験薬との関係、および事前のカフェインの状態によってまとめることにした。バイタルサイン（ＨＲ、収縮期および拡張期ＢＰ、ならびに計算された平均動脈圧）を個々の時点でまとめて、ベースラインからの変化値を計算することにした；平均値の差（カフェイン−プラシーボ）に対するＣＩを決定することにした。

カフェインおよびテオフィリンの血漿中濃度間の関係、ならびにＨＲおよびＢＰを調査することにした。ＥＣＧの間隔とＥＣＧの間隔におけるベースライン値からの変化とを、律動異常もしくは伝導異常の発生と同様に提示することにした。併用薬の使用法についてまとめることにした。

Ｗｉｌｃｏｘｅｎ順位和検定（質問「あなたはどう感じたか？」）、および正確なＣｏｃｈｒａｎ−Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｓｚｅｌ検定（２日目だけ質問「このテストは１回目のテストと比べてどうか？」）を用いて、耐容性アンケートの回答を分析することにした。

効力の結果：
プラシーボ群（ｎ＝４０）に対するｌｏｇＣＦＲ±ＳＥは１．０３±０．０６であり、カフェイン群（ｎ＝４０）に対するｌｏｇＣＦＲは０．９５±０．０６であった。ＣＦＲ（負荷時／安静時）は、プラシーボ群に対して２．９７±０．１６であり、カフェイン群に対して２．７５±０．１６であった。

この試験で検出されたＣＦＲには変化がなかったが、この試験は、ｌｏｇＣＦＲにおけるリガデノソンとカフェインとの有意な相互作用を除外も確立もしない。ｌｏｇＣＦＲ（カフェインｖｓ．プラシーボの差）に対する９５％および９０％信頼区間の指数化された上限および下限は、それぞれ１．０８および０．７８、ならびに１．０６および０．８０である。

この下限は０．９未満であるが上限は＞１なので、この試験は、相互作用を確立することも除外もすることもできない。しかしながら、９５％の信頼度でＣＦＲの変化は≧２０％ではない。

性別によるＣＦＲにカフェインとリガデノソンとの有意な相互作用はなかった。

安全性の結果：
いずれかの時点で以下の分類、パーセンテージの被験者にＡＥが生じた：心臓障害２５／４３（５８％）、呼吸器、胸部および縦郭障害２５／４３（５８％）、神経系障害１８／４３（４２％）、血管障害１３／４３（３０％）、筋骨格および結合組織障害１２／４３（２８％）、一般的障害および投与部位状態１１／４３（２６％）、胃腸障害２／４３（５％）、ならびに耳および迷路障害１／４３（２％）。

最も頻繁に生じたＡＥは、呼吸困難２４/４３（５６％）、動悸２１/４３（４９％）、潮紅１３/４３（３０％）、頭痛１２/４３（２８％）、重感１２/２７（２８％）および錯感覚８/４３（１９％）であった。

被験者の４０パーセント（１７／４３）は、最大重篤度が軽度、４９％（２１／４３）は中程度、９％（４／４３）は重篤である少なくとも１つのＡＥを有した。被験者の９５％（４１／４３）は、リガデノソンの処置にたぶん関係すると見做され、患者の２％（１／４３）は、リガデノソンの処置に関係するかもしれないと見做される少なくとも１つのＡＥを有した。

リガデノソンによって誘発される頭痛の重症度は、カフェインで減少した（ｐ＝０.０１２）。死亡またはＳＡＥの報告はなかった。

カフェインは、リガデノソンによって生じるＨＲの増加を減弱させた（ｐ＜０.００１）。リガデノソンの存在下において、収縮期または拡張期血圧に対するカフェインの効果はなかった。

リガデノソンの投薬後に、１人の被験者は、第１度房室ブロックを発症したようであり、１人の被験者は、ＥＣＧ分析によって判定されたようにＱＴｃ延長（＞５００ｍｓｅｃ、および＞６０ｍｓｅｃの変化）を有したようである。これらは、ＡＥとして報告されなかった。

耐容性アンケートによれば、被験者は、カフェインを用いたテストの間により快適と感じ（ｐ＜０．００１）、プラシーボテスト後に比べてカフェインテスト後の方が気分がよいと感じた（ｐ＜０．００１）。

この試験で検出されたＣＦＲに変化はなかったが、この試験は、ｌｏｇＣＦＲにおけるリガデノソンとカフェインとの有意な相互作用を除外も確立もしない。ｌｏｇＣＦＲ（カフェインｖｓ．プラシーボの差）に対する９５％および９０％信頼区間の指数化された上限および下限は、それぞれ１．０８および０．７８、ならびに１．０６および０．８０である。

この下限は０．９未満であるが上限は＞１なので、この試験は、相互作用を確立することも除外することもできない。しかしながら、９５％の信頼度でＣＦＲの変化は≧２０％ではない。

プラシーボおよびカフェイン群の間に、ＡＥの全発生率の差はなかった；しかしながら、カフェインは、ＡＥの重篤度を減弱させた。リガデノソンによって誘発される頭痛の重篤度は、カフェインで減少した。

Claims

心拍数コントロール薬、少なくとも１０μｇの少なくとも１つのＡ_２Ａ受容体作動薬、および医薬として許容される少なくとも１つの担体を含む医薬組成物。
前記心拍数コントロール薬は、非選択的なアデノシン拮抗薬である、請求項１に記載の医薬組成物。
前記心拍数コントロール薬は、カフェイン、アミノフィリンカフェイン、ジフィリン、エンプロフィリン（ｅｎｐｒｏｐｈｙｌｌｉｎｅ）、ペントキシフィリン（ｐｅｎｔｏｘｙｐｈｙｌｌｉｎｅ）、テオフィリン、βアドレナリン受容体遮断薬、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
前記βアドレナリン受容体遮断薬は、アセブトロール、アルブテロール、アモスラロール、アロチノロール、アテノロール、ベフノロール、ベタキソロール、ベバントロール、ビソプロロール、ビソプロロールフマル酸塩、ボピンドロール、ブシンドロール、ブフェトロール、ブニトロロール、ブタキサミン（ｂｕｔａｘａｍｉｎｅ）、ブトフィロロール、カラゾロール、カルテオロール、カルベジロール、セリプロロール、クロラノロール、ジバルプロエクス、エパノロール、カルベジロール、エスモロール、インデノロール、ランジオロール、ラベタロール、レボブノロール、レボモプロロール、リシノプリル、メドロキサロール、メピンドロール、メチプラノロール、メトプロロール、ナドロール、ネビボロール、ニフェナロール、ニプラジロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロパフェノン、プロプラノロール、サルメテロール、ソタロール、タリノロール、テルタトロール、チリソロール、チモロール、ベラパミル、キサモテロール、シベノロール、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３に記載の医薬組成物。
前記Ａ_２Ａ受容体作動薬は、リガデノソン、ビノデノソン、ＣＶＴ−３０３３、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
前記Ａ_２Ａ受容体作動薬は、リガデノソンである、請求項１に記載の医薬組成物。
前記Ａ_２Ａ受容体作動薬は、リガデノソンであり、前記心拍数コントロール薬は、カフェイン、アミノフィリンカフェイン、ジフィリン、エンプロフィリン（ｅｎｐｒｏｐｈｙｌｌｉｎｅ）、ペントキシフィリン（ｐｅｎｔｏｘｙｐｈｙｌｌｉｎｅ）、およびテオフィリン、メトプロロール、ならびにプロプラノロールからなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
治療有効量の心拍数コントロール薬、および少なくとも１０μｇの少なくとも１つのＡ_２Ａ受容体作動薬を哺乳動物に投与すること、ならびに該哺乳動物の心筋を画像化することを含む、該哺乳動物の前記心筋の、血管拡張薬によって誘発された負荷心筋血流の多検出器型コンピュータ断層撮影イメージングの方法。
治療有効量の心拍数コントロール薬、および約１０００μｇを超えない少なくとも１つのＡ_２Ａ受容体作動薬を哺乳動物に投与すること、ならびに該哺乳動物の心筋を画像化することを含む、該哺乳動物の前記心筋の、血管拡張薬によって誘発された負荷心筋血流の多検出器型コンピュータ断層撮影イメージングの方法。
前記心拍数コントロール薬は、前記少なくとも１つのＡ_２Ａ受容体作動薬より前か、または同時に前記哺乳動物に投与される、請求項８または９に記載の方法。
Ａ_２Ａ受容体作動薬は、約１０から約６００μｇに及ぶ量で前記哺乳動物に投与される、請求項１０に記載の方法。
前記Ａ_２Ａ受容体作動薬は、約１０秒未満で投与される、請求項８または９に記載の方法。
前記Ａ_２Ａ受容体作動薬は、約１０μｇを超える量で投与される、請求項８または９に記載の方法。
前記Ａ_２Ａ受容体作動薬は、約１００μｇを超える量で投与される、請求項８または９に記載の方法。
前記Ａ_２Ａ受容体作動薬は、６００μｇ以下の量で投与される、請求項８または９に記載の方法。
前記Ａ_２Ａ受容体作動薬は、５００μｇ以下の量で投与される、請求項１５に記載の方法。
前記Ａ_２Ａ受容体作動薬は、約１００μｇから約５００μｇに及ぶ量で投与される、請求項８または９に記載の方法。
前記Ａ_２Ａ受容体作動薬は、ＣＶＴ−３０３３、リガデノソン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項８または９に記載の方法。
前記心拍数コントロール薬は、カフェイン、アミノフィリンカフェイン、ジフィリン、エンプロフィリン（ｅｎｐｒｏｐｈｙｌｌｉｎｅ）、ペントキシフィリン（ｐｅｎｔｏｘｙｐｈｙｌｌｉｎｅ）、およびテオフィリン、βアドレナリン受容体遮断薬、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項８または９に記載の方法。
前記βアドレナリン遮断薬は、アセブトロール、アルブテロール、アモスラロール、アロチノロール、アテノロール、ベフノロール、ベタキソロール、ベバントロール、ビソプロロール、ビソプロロールフマル酸塩、ボピンドロール、ブシンドロール、ブフェトロール、ブニトロロール、ブタキサミン（ｂｕｔａｘａｍｉｎｅ）、ブトフィロロール、カラゾロール、カルテオロール、カルベジロール、セリプロロール、クロラノロール、ジバルプロエクス、エパノロール、カルベジロール、エスモロール、インデノロール、ランジオロール、ラベタロール、レボブノロール、レボモプロロール、リシノプリル、メドロキサロール、メピンドロール、メチプラノロール、メトプロロール、ナドロール、ネビボロール、ニフェナロール、ニプラジロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロパフェノン、プロプラノロール、サルメテロール、ソタロール、タリノロール、テルタトロール、チリソロール、チモロール、ベラパミル、キサモテロール、シベノロール、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
前記βアドレナリン遮断薬は、メトプロロールまたはプロプラノロールから選択される、請求項２０に記載の方法。
前記哺乳動物はヒトである、請求項８〜２１のいずれか１つに記載の方法。
前記Ａ_２Ａ受容体作動薬は、単回ＩＶボーラスで投与される、請求項８〜２１のいずれか１つに記載の方法。