JP2012152189A - シート形成判定システム - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 シート形成細胞をシート化培養する培養容器を収納する収納部、シート形成細胞と培養容器との接着状態を測定するための測定部、および前記測定部によって得られた結果を解析して接着率を算出する解析部を含む、シート形成細胞のシート化状態を判定するためのシステムを提供することにより、上記課題が解決された。
【選択図】 なし
Description
これらの原因と重症度に応じて弁形成術や置換術、冠動脈バイパス術、左室形成術、機械的補助循環などが適用される。
重症心筋梗塞等においては、心筋細胞が機能不全に陥り、さらに線維芽細胞の増殖、間質の線維化が進行し心不全を呈するようになる。心不全の進行に伴い、心筋細胞は傷害されてアポトーシスに陥るが、心筋細胞は殆ど細胞分裂をおこさないため、心筋細胞数は減少し心機能の低下もさらに進む。
このような重症心不全患者に対する心機能回復には細胞移植法が有用とされ、既に自己骨格筋芽細胞による臨床応用が開始されている。
[1]シート形成細胞をシート化培養する培養容器を収納する収納部、シート形成細胞と培養容器との接着状態を測定するための測定部、および前記測定部によって得られた結果を解析して接着率を算出する解析部を含む、シート形成細胞のシート化状態を判定するためのシステム。
[2]測定部が、撮像部を含む、[1]に記載のシステム。
[3]接着率が、接着細胞率である、[1]または[2]に記載のシステム。
[4]接着状態の測定が、接着細胞数の計数である、[1]〜[3]のいずれか一項に記載のシステム。
[5]撮像部が、微粒子可視化システムを含む、[2]に記載のシステム。
[6]接着率が、接着面積率である、[2]のシステム。
[7]解析が、撮像部からの画像データにおいて所定の階調値以上に黒い階調値を有する画素の割合を算出することを含む、[2]または[6]に記載のシステム。
[8]シート形成細胞をシート化培養する工程、およびシート形成細胞と培養容器との接着率を算出し、接着率が設定値以上である場合にシート状細胞培養物が形成されたと判定する工程を含む、シート状細胞培養物の製造方法。
本発明において「液体培地」とは、細胞の培養に用い得る細胞培養液を意味し、単に「培地」または「培養液」という場合もある。上述のとおり、本発明において液体培地は、細胞の生存を維持でき、シート状細胞培養物を形成し得るものであれば何を用いてもよいが、好ましくは成長因子を含まない液体培地である。典型的には、アミノ酸、ビタミン類、電解質を主成分としたものが利用できる。本発明の一態様において、液体培地は、細胞培養用の基礎培地をベースにしたものである。かかる基礎培地には、これに限定するものではないが例えば、DMEM、MEM、F12、DME、RPMI1640、MCDB(MCDB102、104、107、131、153、199など)、L15、SkBM、RITC80−7などが含まれる。これらの基礎培地の多くは市販されており、その組成も公知となっている。
ヒト全血から得た血清を、20%w/vとなるようにDMEM/F12培地(Invitrogen製)に加え、フィルターユニット(ナルジェヌンクインターナショナル社製、孔サイズ0.2μm)にてろ過してシート形成培地とした。このシート形成培地10mLに6×107個の骨格筋芽細胞を懸濁し、10cm温度応答性培養皿(セルシード製)に播種し、37℃、5%CO2濃度の条件で、12〜26時間培養した。細胞播種直後、1.5時間後、3時間後、4.5時間後、6時間後にそれぞれ細胞を倒立型リサーチ顕微鏡で観察し、撮像した。結果を図2に示す。
図3には、本発明の一態様における処理のフローチャートを例示し、図4にはかかる態様のシステムのブロック図を示す。この例において、測定部は微粒子可視化システムを含む撮像装置を含んでいる。
本態様では、シート化培養開始後、任意の所定の時間で接着細胞の接着状態を、微粒子可視化システムで観察する。一視野を単位面積とし、一視野中の接着細胞数をカウントする。かかる接着細胞数から、培養容器の底面全体に接着している細胞が播種細胞数に対してどの程度の割合であるか(すなわち接着細胞率)を算出する。本態様においては、接着細胞率の閾値を80%に設定し、80%以上の細胞が接着している場合、シートが形成されていると判断する。
Claims (8)
- シート形成細胞をシート化培養する培養容器を収納する収納部、シート形成細胞と培養容器との接着状態を測定するための測定部、および前記測定部によって得られた結果を解析して接着率を算出する解析部を含む、シート形成細胞のシート化状態を判定するためのシステム。
- 測定部が、撮像部を含む、請求項1に記載のシステム。
- 接着率が、接着細胞率である、請求項1または2に記載のシステム。
- 接着状態の測定が、接着細胞数の計数である、請求項1〜3のいずれか一項に記載のシステム。
- 撮像部が、微粒子可視化システムを含む、請求項2に記載のシステム。
- 接着率が、接着面積率である、請求項2に記載のシステム。
- 解析が、撮像部からの画像データにおいて所定の階調値以上に黒い階調値を有する画素の割合を算出することを含む、請求項2または6に記載のシステム。
- シート形成細胞をシート化培養する工程、およびシート形成細胞と培養容器との接着率を算出し、接着率が設定値以上である場合にシート状細胞培養物が形成されたと判定する工程を含む、シート状細胞培養物の製造方法。
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