JP2012040497A - アゾ染料分解剤およびアゾ染料の分解方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明のアゾ染料分解剤は、白色腐朽菌からの粗酵素が、Tween80、MnSO4、およびH2O2を含む外膜で内包された固定化酵素を含有するものである。
【選択図】なし
Description
本発明に用いられる白色腐朽菌は、アゾ染料分解作用を有するものであれば特に限定されず、例えば、前述した特許文献3および4に記載の白色腐朽菌を用いることができる。白色腐朽菌としては、例えばヒラタケ科、コウヤクタケ科、タコウキン科、カワタケ科などに属する微生物が挙げられ、具体的には、コウヤクタケ科カワタケ属に属する微生物(例えばカワタケ属267菌株、カワタケ属PC×267菌株に属する微生物など、ヒラタケ科ヒラタケ属に属する微生物(ヒラタケ1、ヒラタケ2など)、タコウキン科シュタケ属に属する微生物(ヒイロタケ1など)、フザリウム科アベナセウム属に属する微生物[例えばフザリウム・アベナセウム(コルダ:フライズ)サッカルド65菌株、フザリウム・アベナセウム(コルダ:フライズ)サッカルドPC×65菌株など]などが例示される。このうち好ましいのは、ヒラタケ科ヒラタケ属に属する微生物(ヒラタケ1、ヒラタケ2など)、タコウキン科シュタケ属に属する微生物(ヒイロタケ1など)である。以下では、ヒラタケ1をPL1菌で代表させる場合がある。
MnP活性:おおむね、0.1〜2U/mL、Lac活性:おおむね、0.001〜0.2U/mL、カテコール1,2−ジオキシゲナーゼ活性:おおむね、0.0001〜0.1U/mL
好ましくは更に、LiP活性:おおむね、0.0001〜0.01U/mL、カテコール2,3−ジオキシゲナーゼ活性:おおむね、0.0001〜0.01U/mL
本発明のアゾ染料分解剤は、上記のようにして得られた粗酵素が、所定の成分を含有する外膜で内包されている。すなわち、本発明の分解剤は、内膜に粗酵素を、外膜に所定の成分を含有する二重カプセル構造を有している。上記二重カプセル構造の調製方法は、後述する。
上述した内膜・外膜の二重カプセル構造を有する本発明のアゾ染料分解剤は、前述した方法によって得られた粗酵素を用い、酵素固定化手段として通常用いられる包括法を用いて調製することができる。上記包括法は、例えば下記文献に記載されている公知の酵素固定化手段であり、マイクロカプセル型と格子型が代表的に例示される。いずれもゲル化剤(カプセル化剤)などの高分子などによって酵素を内部に格納(固定化)する方法であり、包括法によれば、酵素が直接外気と接触することなく、酵素活性を長時間持続させることができる。
Zorica, Knezevic, Svetleana Bobic, Aleksandra Milutinovic, Bojana Obradovic, Ljiljana Mojovic, Branko Bugarski: Alginate-immobilized lipase by electrostatic extrusion for the purpose of palm oil hydrolysis in lecithin/isooctane system, Process Biochemistry, 38 (2002) 313-318.
本発明では、上記のようにして得られた分解剤を用いてアゾ染料を分解する。
槽数:約2〜4槽
槽構成:好気槽約2〜4槽(嫌気槽はなし)
各槽の容量:約0.1〜10L
本実施例では、白色腐朽菌由来の粗酵素を固定化した二重カプセル構造の分解剤を用いたとき、三角フラスコでの振とう速度がアゾ染料の分解率に及ぼす影響を調べた。
ここでは、白色腐朽菌として、ヒラタケ1菌[Pleurotus ostreatus (PL1菌)]を用いた。上記PL1の継代には、下記表1に示す組成のCzapek−Dox寒天培地を用いた。
ここでは、(ア)シグマ社製のReactive Green 19(以下、「R.Green 19」と略記する場合がある。)、(イ)シグマ−アルドリッチ社製のReactive Red4(以下、「R.Red 4」と略記させる場合がある。)、および(ウ)和光純薬(株)製のReactive Black 5(以下、「R.Black 5」と略記する場合がある。)の3種類のアゾ染料を用いた。
まず、クリーンベンチ内でCzapek−Dox寒天培地の入ったプラスチックシャーレに上記PL1菌を接種し、25℃で168時間培養した。
上記のようにしてPL1菌から抽出した粗酵素3.6Uに、1.5%アルギン酸ナトリウム溶液10mLを加えて撹拌しながら均一な溶液を得た。パスツールピペットを用いて上記溶液10mLを採取し、0.1M塩化カルシウム溶液20mL中に1滴ずつ滴下することにより、アルギン酸カルシウムのゲル化半透膜で上記粗酵素が内包された一重カプセルの固定化酵素を得た。
100mLの三角フラスコに、50mMのマロン酸緩衝液(pH4)30mLおよび各々のアゾ染料(100ppm)を加えた。上記の二重カプセルを全量加え、暗所下にて25℃で48時間、振とう速度を0〜120rpmの範囲で変化させて反応させた。
分解反応後、80℃で20分間の熱処理を行なった溶液を用い、以下のようにしてアゾ染料分解率を測定した。
分解率(%)=100×{(ODt0−ODtf)/ODt0}
式中、ODt0:コントロールの吸光度
ODtf:反応後の吸光度である。
本実施例では、白色腐朽菌由来の粗酵素を固定化した二重カプセル構造の分解剤をバイオリアクターに充填したときのアゾ染料分解率を調べた。図5に、本実施例に用いたバイオリアクターの概略図を示す。
本実施例では、白色腐朽菌由来の粗酵素を固定化した二重カプセル構造の分解剤をバイオリアクターに充填したとき、バイオリアクター内で循環させる処理溶液の流速がアゾ染料分解率に及ぼす影響を調べた。
Claims (5)
- 白色腐朽菌からの粗酵素が、Tween80、MnSO4、およびH2O2を含む外膜で内包された固定化酵素を含有することを特徴とするアゾ染料分解剤。
- 請求項1に記載のアゾ染料分解剤を用いてアゾ染料を分解するアゾ染料の分解方法。
- 分解時の振とう速度が10〜150rpmの範囲内に制御されたものである請求項2に記載の分解方法。
- 請求項1に記載のアゾ染料分解剤をバイオリアクターに充填してアゾ染料を分解するものである請求項2または3に記載の分解方法。
- 分解対象であるアゾ染料含有物を前記バイオリアクターに循環させるときの流速が0.5mL/min以上に制御されたものである請求項4に記載の分解方法。
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