JP2011525539A - 過酸および2−ヒドロキシ有機酸組成物および農産物を処理する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、2008年6月24日付出願の、米国仮出願シリアル番号第61/075,267号の優先権を主張し、その内容はすべての目的としてその全体を本明細書の一部とする。
適用なし
適用なし
農産物、例えば、フルーツおよび野菜の表から微生物を除去する安全かつ確実な方法はその国際貿易および消費の発展の促進をもたらす公衆衛生問題を高めることである。食品から微生物を除去するかまたは減少させるための既存の方法は、疾患をもたらす可能性があるかまたは農産物を腐敗する微生物を十分に制御しない。したがって、農産物における微生物の存在を著しく減少させうる新規の方法および組成物が大いに必要とされている。
本発明は、農産物、例えば、フルーツおよび野菜を殺菌し、その品質を維持するのに有用な組成物および方法を提供する。第1の態様において、本発明は、農産物を殺菌するのに有用な組成物を提供する。組成物は、2.5〜6.0のpHを有し、i)式RC(O)OOH(式中:Rはメチル、エチル、n−プロピル、またはs−プロピルである)の有機過酸;ii)酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、マンデル酸、および乳酸から選択される2−ヒドロキシ有機酸;iii)水;および所望によりiv)陰イオン界面活性剤を含む水溶液である。好ましい実施態様において、過酸はペルオキシ酢酸(過酢酸またはアセチルヒドロペルオキシドとしても知られている)であり、有機酸は乳酸(2−ヒドロキシプロピオン酸としても知られている)であり、存在する場合、好ましい陰イオン界面活性剤はラウリル硫酸ナトリウムである。過酸の水性殺菌溶液は、過酸化水素、その対応する酸、および水の濃縮溶液と平衡状態で存在しうるかまたはその濃縮溶液から形成されうるので、水性殺菌溶液はまた、過酸化水素および対応する酸(例えば、ペルオキシ酢酸の場合における酢酸)を含有しうる。殺菌溶液は、濃縮物としてまたはすぐに使える水性製剤として提供されうる。組成物はまた、農産物を殺菌または処理するのに用いるためのキットの一部として提供されうる。
本発明は、ペルオキシ酢酸、乳酸、および(所望により)ラウリル硫酸ナトリウムを含む水性溶液が、意外にも、農産物の処理に有効であり、処理された農産物の表面上の微生物汚染を減少させ、処理された農産物の腐敗または劣化を防止するという知見に関する。これらの利点は、レタス、ホウレンソウおよび種々のベビーレタスおよび葉野菜のスプリング・ミックスで示されている。成分の組み合わせは、単独で作用する成分のいずれか1つより葉付着微生物を減少させるのに非常に有効であり、また、農産物の劣化または腐敗を減少させるのに特に有効である。
本明細書および添付の特許請求の範囲に用いられる、単数形「a」、「an」および「the」には、内容を明確に示さない限り、複数の指示対象が含まれることを留意しなければならない。したがって、例えば、「界面活性剤」の言及には、2種または複数のかかる界面活性剤が含まれる。
([RCOOOH][H2O])/([RCOOH][H2O2])=Kap (方程式1)
[式中:[RCOOOH]は過酸のモル/L濃度であり;[H2O]は水のモル/L濃度であり;[RCOOH]は有機酸のモル/L濃度であり;および[H2O2]は過酸化水素のモル/L濃度であり;およびKapは過酸平衡方程式(方程式I)の見掛け平衡定数である]
から算出されうる。
したがって、第1の態様において、本発明は、2.5〜6.0のpHを有し、1)式RC(O)OOH(式中:Rはメチル、エチル、n−プロピル、またはs−プロピルである)の有機過酸;ii)酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、マンデル酸、および乳酸から選択される2−ヒドロキシ有機酸;iii)水;および所望によりiv)陰イオン界面活性剤を含む水性溶液を提供する。いくつかの実施態様において、pHは、2.5〜3.5、2.5〜4.0、2.7〜3.5、2.5〜5.0、3.0〜4.0、3.0〜5.0、3.0〜6.0、または3.5〜4.5である。
いくつかの実施態様において、本発明は、本発明の水性殺菌溶液および農産物の処理に用いるための使用説明書を含むキットを提供する。いくつかのさらなる実施態様において、キットは、平衡状態または平衡状態近傍の過酸溶液を含む第1部を提供する。典型的には、すぐに使えるかあるいは約5重量%〜約35重量%の過酸、例えば、ペルオキシ酢酸、または過酸の混合物を含む、溶液が提供され、使用前にどの程度水で希釈すべきかについての使用説明書を備えている。キットは、浸漬ボウルおよびストレーナーを含有する。すぐに使える製剤は、噴霧ボトル中に提供されうる。他の実施態様において、キットは、すぐに使える製剤の量を所望により含有する再充填噴霧ボトルと一緒に1つの容器中で濃縮物として水性殺菌溶液を提供しうる。該キットには、濃縮物を水で送達する場合に、使用するために希釈する適当な因子についての指示書が含まれるであろう。典型的には、濃縮物は、すぐに使える製剤より4、5、6、8、10または20倍以上濃縮されるであろう。かかるキットは、特に、消費者用として適当であろう。
第2の態様において、本発明は、農産物の処理方法であって、表面を本発明に記載の水性殺菌溶液と接触させることを含む、方法を提供する。溶液は、当業者に周知の任意の適当な手法によって農産物に接触または適用されうる。例えば、溶液は、殺菌される表面と殺菌溶液の間で強く接触させる任意の方法によって適用されうる。かかる方法には、水浴、洗浄、コーティング、ブラッシング、ディッピング、イマージング、ワイピング、ミスティング、噴霧、およびフォギングが含まれる。これらの工程は、完全な接触を確保するために繰り返されうる。適用されると、所望の殺菌作用(例えば、4、5、6、7、または8 log倍の微生物汚染物質の除去)を確保するのに十分な滞留時間の後に、溶液は、遠心分離および/または脱水および/または食品に用いるのに適当な水(例えば、飲料水)で農産物をすすぎもしくは洗浄することによって農産物の表面から物理的に除去されうる。これらの工程の任意の組み合わせは、順々に行われうる。すすぎは、過酸、2−ヒドロキシ有機酸、およびラウリル硫酸ナトリウムがGRAS量で存在する場合には必須ではない。特に、好ましく用いられる過酸は揮発性物質であるので、乾燥すると農産物上に残留物はほとんど残らないであろう。
実施例1.本実施例は、本発明に記載の水性殺菌溶液の使用を説明する。図1〜16に示されるように、本発明に記載の溶液は、有利なことには、種々の農産物の表面から微生物を除去し、処理された農産物上の常在微生物の増殖を抑制し、農産物の表面からモデル病原体を除去しうる。本発明の方法および組成物はまた、農産物の保存期間を大幅に改善し、農産物の劣化を大幅に遅らせることが示されている。該知見は、細菌、酵母、およびカビなどの種々の微生物にまで及ぶ。
該方法は、殺菌溶液、一般的におよび特に、本発明のものによって処理されている農産物の保存期間を決定するために用いられうる。
8個の75%水を有する20ガロン容器を〜45°Fに冷却した。
プロセシングの前に少なくとも1日、12個のスズ箔で十分に覆われている5ガロンチューブをオートクレーブする。
1.農産物の種類によって、対応するOTRチューブを使用する;切断し、印を付け、密封して、バッグを形成する。汚染を最小限にするために紫外線照射下生物学的安全キャビネット中で2時間静置する。
1.使用直前に化学的殺菌剤を処方する。すべての計算は、質量/質量に基づく。
2.プロセシング中にあふれないように容器の3/4のみを満たす。
3.生の農産物を蓋付きステンレス製バスケットにそっと入れ、それを全体の3/4まで満たす。
4.バスケットを化学的殺菌剤に浸す時にタイマーを開始する。
5.満たされたバスケットを30秒間そっと上下する。
6.化学溶液を有する溶液から農産物を有する処理されたバスケットを取り除き、すぐに、それをすすぎのために水で3/4満たした別の容器に移す。
7.処理された農産物表面上の残存化学物質の大部分を取り除くために水中で10回上下する。
8.逆の方法で処理された農産物を有するバスケットを入れ、該含有物を乾燥機ポリ袋(dryer bin liner)にそっと注ぐ。
9.乾燥機ポリ袋が満たされるまで工程「3」〜「8」を繰り返す。20分間、乾燥機の蓋および遠心分離機を閉めた。
10.乾燥農産物をポリ袋から滅菌タブに移し、対応する生産設備と同一の水分率を達成する環境と水分平衡させるために乾燥処理された農産物をさらに10〜15分間寝かせる。
11.すべての道具、装置、および容器を消毒する。
12.他の殺菌剤処理の工程「1」〜「11」を繰り返す。
1.毎回、バッグを有するスケールの包装の重さを量る。
2.バッグを標的農産物の量で満たす。
3.バッグを適当な密封機で密封する。
4.45Fにて箱に保存し、評価を行う:微生物分析、オープンバッグ評価(OBE)、目的とする適当な日数の外観検査
1.OBEの適当な形態を使用する。
2.農産物を目視し、種々の化学物質からの試料の相違点を撮影する。
a.OBE水分定量−葉の初期重量を量り、折り畳んだペーバータオル上に葉を広げ、外水分を除去して、最終重量を量るために圧縮することによって水分を拭き取る。
計算:
濃縮溶液を有するストック溶液の用いられる容量:
4.連続希釈およびスプレッドプレーティング(spread plating)を用いて処理された農産物の微生物個体群を計数する。
5.微生物およびOBE分析の試料は、例えば、1、5、7、9、12、および15日目に回収されうる。
該手順は、液体に懸濁される微生物に対する殺菌剤の抗菌活性を測定するために用いられる。
1.温度:45F
2.滞留時間:30+/−10秒
3.pH:3+/−0.3
4.病原体サロゲート:イー・コリK12、リステリア・イノキュア(Listeria innocua)
5.汚染微生物サロゲート:シュードモナス・フルオレッセンス(Pseudomonas flourescens)、サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)
1.1.00mLの108cfu/gストック培養物を9.00gmの試験溶液を含有する試験管に移す。
2.混合物を15秒間ボルテックスする。
3.1mLの処理された試料を9mLのバターフィールドリン酸バッファーに移して反応を停止する。
4.連続希釈およびスプレッドプレーティングで生存残存細胞を計数する。
5.必ず操作温度を45±1oFで維持する(全試験を室温にて実施する場合には化学物質の動態が有意に変化するので一度冷蔵庫から唯一の試験管を取り出す)。
該方法は、葉の表面に付着する微生物に対する殺菌剤の抗菌活性を測定するために用いられうる。
1.温度:45°F
2.滞留時間:45秒
3.pH:3+/−0.3
4.処理:水、塩素処理水、CS、乳酸、ペルオキシ酢酸、16レベルのFE殺菌剤(すなわち、ここでは、ペルオキシ酢酸および乳酸を含む水性溶液)
5.試験農産物:ロメインレタス、ホウレンソウ、スプリング・ミックス
6.病原体サロゲート:イー・コリK12、リステリア・イノキュア
7.試験微生物:農産物の葉上の常在微生物(全生菌数[APC]、酵母、およびカビ[YM])
1.3〜4枚の試験農産物の葉を取得し、6”x6”x5”の滅菌ポリプロピレン(PP)バスケットに加える。試験農産物がロメインレタスである場合には、ロメインレタスを2”x4”の長方形に切る。
2.1.00mLの108cfu/gストック培養物を1mLピペットマンで回収し、葉表面上に小滴の接触材料を滴下することによって葉表面を徐々にスパイクする。PPバスケットを振盪しないように注意し、乾燥前に葉から小滴を落とす。
3.1.75時間風を送りながら(約0.5W.C.)、スパイクされた葉を有するバスケットを生物学的安全キャビネット中に寝かせる。
4.キャビネットからスパイクされた葉を有するPPバスケットを取り除き、それらを0.25時間40〜45°Fにて冷蔵室/冷蔵庫に移動する。
1.45秒間撹拌させながらスパイクされた葉を有するPPバスケットを3Lの45F水を含有する滅菌容器に加える。
2.処理されたバスケットを45Fにて水道水に浸してすぐに10秒間すすぐ。
3.処理された葉をバスケットから得、それらを滅菌トングを用いてストマッカーバッグに加える。
4.ストマッカーバッグを葉に対する関連処理で標識する。
5.試験物を他の処理をして工程1〜4を繰り返す。
1.10倍希釈を達成するまで処理された葉を有するストマッカーバッグにリン酸バッファーを加える。
2.30秒間リン酸バッファーおよび処理された葉を有するバッグを消化する。
3.リン酸バッファー溶液に葉を戻して振盪して、さらに30秒間消化を繰り返す。
4.消化された試料からバッファーを除去し、連続希釈およびスプレッドプレーティングによって残存細胞を計数する。
5.すべての他の処理について工程1〜4を繰り返す。
該手順は、浮遊および付着細胞攻撃試験のための108〜109cfu/mLストック培養物を調製するために用いられる。ストック培養物の細胞濃度は、溶液を試験する前に測定される。
a.すべての手順は滅菌環境下で行われる(例えば、生物学的安全キャビネット内)。
b.細胞のループは、殺菌ループによって純粋なストック培養物から回収される。細胞のループは、無菌状態にて10mLの滅菌成長培地(培養液)を有する試験管に移される。
c.工程「b」は3回繰り返される。
d.活性化される微生物について最適成長温度下で2日間、工程「b」および「c」から接種管を培養する。
e.工程「b」〜「d」は、第1輸送(第1T)と称される。
f.第1Tの試験管から0.1mLの成長培地を回収し、それを無菌状態にて10mLの滅菌成長培地を有する別の試験管に移す。
g.第1Tからの管が純粋な培養物を有することを寒天培地上に成長培地の50〜100uL試料をスプレッドプレーティングによって確認する。
h.工程「g」を2回繰り返す。
i.両方のプレートを培養し、選択された最適温度にて2日間、管#2に移す。
j.工程「f」〜「i」は、第2Tと称される。
k.第3Tのために100mLの成長培地で工程「f」〜「i」を繰り返す。
l.第3Tから得られたエルレンマイヤー培養物フラスコを冷蔵庫中で一晩保存する。
m.工程「l」から第3Tフラスコを得、それを均等に4つの遠心分離管に移した。
n.10分間10,000RPMにて純粋なストック培養物を含む管を遠心分離する。
o.成長培地をすぐに廃棄する。細胞のペレットは、遠心分離管の底に形成されるであろう。
p.同量の滅菌脱イオン水を細胞のペレットに加える。
q.細胞のペレットを緩め、再懸濁するためにボルテックスする。
r.工程「n」および「o」を2回以上繰り返す。
s.最終108−109cfu/gmの浮遊細胞培養物を得るために、初期容量1/10量の滅菌脱イオン水を工程「r」の細胞ペレットに加える。
t.最終懸濁ストック培養物を形成するために、すべての再懸濁細胞培養物を1つの遠心分離管に統合する。
実験処理群は、水道水、塩素処理水、FE殺菌剤洗浄水(所定の実験にてさらに規定される、FE、FE殺菌剤、ペルオキシ酢酸および乳酸の溶液)であった。実験パラメータは、40〜45oF;滞留時間20秒;pH:
水(〜7)
塩素処理水(6.5〜7.1)
乳酸(3.8〜4.0)
ペルオキシ酢酸(6.5〜6.8)
FE殺菌剤洗浄水(2.7〜3.2)
であった。
1.1.00mLの約108cfu/gラクトバチリス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)(ATCC14917)ストック培養物を9.00mLの処理試験溶液を含有する試験管に移す。
2.15秒間混合物をボルテックスする。
3.1mLの処理試料を9mLのバターフィールドリン酸バッファーに移すことによって反応を停止する。
4.連続希釈および1mL輸送物でスプレッドプレーティングして生存残存細胞を計数する。
5.必ず操作温度を40〜45oFで維持する(全試験を室温にて実施する場合には化学物質の動態が有意に変化するので一度冷蔵庫から唯一の試験管を取り出す)。
6.2回以上、工程1〜5を繰り返す。
7.フリューム水で工程1〜6を繰り返す。
8.塩素処理水で工程1〜6を繰り返す。
9.種々のレベルのFEで工程1〜8を繰り返す。
10.種々のレベルの乳酸で工程1〜8を繰り返す。
11.種々のレベルのペルオキシ酢酸で工程1〜8を繰り返す。
12.リステリア・イノキュア(ATCC33090)で工程1〜11を繰り返す。
1.対数活性は、殺菌プロセス中に不活化される微生物の割合の測定値であり、対数不活性=Log10(No/NT)(式中:Noは生存微生物の初期流入濃度であり;NTは残存微生物の濃度である)として定義される。M(cfu/g)=ストック培養物の微生物個体群;W(cfu/g)=「水処理群」の溶液中の微生物個体群およびX(cfu/g)=「X処理群」の溶液中の微生物個体群であるので、「処理群X」に起因する対数減少値=Log(w/x)である。
プロセシングパラメータおよび処理
処理:水道水、塩素処理水、FE殺菌剤洗浄水;温度:40〜45oF;滞留時間:30秒
pH:
水(〜7)
塩素処理水(6.5〜7.1)
FE殺菌剤洗浄水(2.7〜3.2)
病原体:
イー・コリO157:H7の5株混合物(F4546、F4637、SEA13B88、TW14359、960218)
リステリア・モノサイトゲネスの5株混合物(ATCC19115、ATCC51414、ATCC15313、FRR B2472(SCOTT A)、1838)
サルモネラ菌の5株混合物(エス・ニューポート(S. Newport)、エス・テネシー(S. Tennessee)、エス・ミュンヘン(S. muenchen)、エス・クバーナ(S. cubana)、エス・セント・ポール(S. St. Paul))
1.ストック培養物の活性化は、生物学的安全キャビネット中で無菌状態にて一連のストック培養物の最適成長培地への移動を介して達成される。
2.保存中ストック培養物から小ループ(約100uL)の純粋培養物を回収し、それを10mLのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(American Type Culture Collection)(ATCC)または公開された論文によって推奨される各微生物に対し特異的な最適成長培養液を含有する試験管に移す。
3.ATCCまたは公開された論文によって推奨されるその最適成長温度にて対数成長期の終期に達するまで培養物を培養する。
4.ストリークプレーティング(streak plating)およびスプレッドプレーティングによって移した培養物の純度を確認する。
5.工程3から1.5mlの培養液を回収し、それを150mLのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(ATCC)または公開された論文によって推奨される各微生物に特異的な最適成長培養液を含有する250mLのエルレンマイヤー・フラスコに移す。
6.ATCCまたは公開された論文によって推奨されるその最適成長温度にて対数成長期の終期に達するまで培養物を培養する。
7.スプレッドプレーティングによって移した培養物の純度を確認する。
8.スプレッドプレーティングによって工程6から培養液の濃度を並べ、1mLに連続希釈して、移す。
9.接種前に1〜4時間冷蔵温度にて150mLのエルレンマイヤー・フラスコのストック培養物を冷却する。
1.第2輸送エルレンマイヤー・フラスコ中の150mLの冷却ストック培養物を等量(各50mL)にて3つの50mL遠心分離管に分ける。
2.管を4℃にて15分間10,000RPMで遠心分離する。
3.細胞のペレットを残して各遠心分離管から液体培養液を廃棄する。
4.工程3から遠心分離管を5mLの滅菌0.1%ペプトン水で満たし、細胞のペレットを緩め、混合するためにボルテックスする。
5.すべての再懸濁ストック培養物を1つの遠心分離管に注ぎ、約108cfu/gmの接種材料を形成する。
1mL輸送物で連続希釈して、スプレットプレーティングによって工程5から得られた接種材料の微生物個体群を計数して、確認する。
1.1.00mLの約108cfu/gイー・コリO157:H7の5種混合物のストック培養物を9.00mLの試験溶液を含有する試験管に移す。
2.15秒間混合物をボルテックスする。
3.1mLの処理試料を9mLのバターフィールドリン酸バッファーに移すことによって反応を停止する。
4.連続希釈および1mL輸送物でスプレッドプレーティングして生存残存細胞を計数する。
5.必ず操作温度を40〜45oFで維持する(全試験を室温にて実施する場合には化学物質の動態が有意に変化するので一度冷蔵庫から唯一の試験管を取り出す)。
6.2回以上、工程1〜5を繰り返す。
7.フリューム水で工程1〜6を繰り返す。
8.塩素処理水(pH6.5〜7の10ppm活性塩素)で工程1〜6を繰り返す。
9.別レベルのFEで工程1〜8を繰り返す。
10.リステリア・モノサイトゲネスの別の5株混合物で工程1〜8を繰り返す。
11.サルモネラ菌の別の5株混合物で工程1〜8を繰り返す。
プロセシングパラメータおよび処理
処理:水道水、塩素処理水、試験FE殺菌剤洗浄水;
温度:40〜45°F;滞留時間:30秒;
pH:
水(〜7)
塩素処理水(6.5〜7.1)
FE殺菌剤洗浄水(2.7〜3.2)
試験農産物:ダイスカットロメインレタス葉および変異ホウレンソウ葉
病原体:
イー・コリO157の5株混合物:H7(F4546、F4637、SEA13B88、TW14359、960218)
リステリア・モノサイトゲネスの5株混合物(ATCC19115、ATCC51414、ATCC15313、FRR B2472(SCOTT A)、1838)
サルモネラ菌の5株混合物(エス・ニューポート、エス・テネシー、エス・ミュンヘン、エス・クバーナ、エス・セント・ポール)
1.ストック培養物の活性化は、生物学的安全キャビネット中で無菌状態にて一連のストック培養物の最適成長培地への移動を介して達成される。
2.保存中ストック培養物から小ループ(約100uL)の純粋培養物を回収し、それを10mLのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(ATCC)または公開された論文によって推奨される各微生物に特異的な最適成長培養液を含有する試験管に移す。
3.ATCCまたは公開された論文によって推奨されるその最適成長温度にて対数成長期の終期に達するまで培養物を培養する。
4.ストリークプレーティングおよびスプレッドプレーティングによって移した培養物の純度を確認する。
5.工程3から1.5mlの培養液を回収し、それを150mLのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(ATCC)または公開された論文によって推奨される各微生物に特異的な最適成長培養液を含有する250mLのエルレンマイヤー・フラスコに移す。
6.ATCCまたは公開された論文によって推奨されるその最適成長温度にて対数成長期の終期に達するまで培養物を培養する。
7.ストリークプレーティングによって移した培養物の純度を確認する。
8.スプレッドプレーティングおよび1mL輸送物での連続希釈によって工程6からの培養液の濃度を計数する。
9.接種前に1〜4時間冷蔵温度にて150mLのエルレンマイヤー・フラスコのストック培養物を冷却する。
1.第2輸送エルレンマイヤー・フラスコ中150mLの冷却ストック培養物を等量(各50mL)で3つの50mL遠心分離管に分離する。
2.4℃にて15分間10,000RPMにて管を遠心分離する。
3.細胞のペレットを残しながら培養液を各遠心分離管から廃棄する。
4.工程3からの遠心分離管を5mLの滅菌5%ウマ血清溶液で満たし、細胞のペレットを緩め、混合するためにボルテックスする。
5.すべての再懸濁したストック培養物を1つの遠心分離管に流し込み、約108cfu/gmの接種材料を形成する。
6.1mL輸送物で連続希釈して、スプレッドプレーティングによって工程5から得られた接種材料の微生物個体群を計数して、確認する。
1.4枚の試験農産物の葉を得、それらを6”x6”x5”滅菌ポリプロピレン(PP)バスケットに加える。試験農産物がロメインレタスである場合、ロメインレタスを1.5”x2.5”の長方形に切る。
2.工程1における4枚の葉のうち、2枚は上向きのその表皮上層を有し、2枚は上向きのその表皮下層を有するであろう。
3.50uLの約108cfu/gストック培養物を100uLピペットで回収し、上向きの葉の平面および中央脈上に小滴(10〜15滴)の接種材料を滴下することによって各葉を徐々にスパイクする。葉をスパイクする前にピペットチップの側面で過剰ストックを必ず取り除く。PPバスケットを振盪しないように注意し、乾燥前に小滴を葉から落とす。
4.70〜80Fおよび38〜48%相対湿度にて1〜1.5時間、フォト1に示されるDrieriteを有する生物学的安全キャビネット中にてスパイクされた葉を有するバスケットを配列する。フード温度を乾燥工程の間必ず一定にする(<±2F)。
5.必ず葉が乾燥期間の終わりにしおれた状態にならないようにする。
PPカーボイからの3Lの試験溶液を5L滅菌PPタブに移す。
1.必要量の最終成分を3L溶液に加え、必要に応じて滅菌トングで完全に混合する。
2.2枚のスパイクされた葉(1枚は表皮上層にスパイクされ、もう1枚は表皮下層にスパイクされる)を空の滅菌PPバスケットに移す。
3.スパイクされた葉を有するPPバスケットを3Lの試験溶液の完全な処方を含有する滅菌容器に入れる。
4.40−45°Fにて試験溶液の温度を維持する。
5.葉全体を常に浸水させ、葉の折り畳みおよび重なりを防止するために試験溶液中の葉を徐々に圧縮するためのトングを使用する。
6.葉全体を浸すとすぐに30秒の時間を計るためにストップウォッチを開始する。
7.バスケットから処理された葉を得、滅菌トングを用いてそれらをストマッカーバッグに入れる。
8.葉の関連処理でストマッカーバッグを標識する。
9.滅菌ゴム製メロンハンマーを用いて葉を粉々にした。
10.試験の他の処理で工程1〜7を繰り返す。
11.工程13の後に、各工程を3回行わなければならない。
12.乾燥工程中の細菌の死滅からのエラーを避けるために各複製を別々に行わなければならない。試験の順序は以下のとおりである:
a.第1の複製:1サンプルのスパイクされていない対照、スパイクされた細菌を有する対照、水洗浄したスパイクされた対照、塩素処理水洗浄したスパイクされた細菌、FE1洗浄したスパイクされた細菌、およびFE2洗浄したスパイクされた細菌。
b.第2の複製:1サンプルのスパイクされていない対照、スパイクされた細菌を有する対照、水洗浄したスパイクされた対照、塩素処理水洗浄したスパイクされた細菌、FE1洗浄したスパイクされた細菌、およびFE2洗浄したスパイクされた細菌。
c.第3の複製:1サンプルのスパイクされていない対照、スパイクされた細菌を有する対照、水洗浄したスパイクされた対照、塩素処理水洗浄したスパイクされた細菌、FE1洗浄したスパイクされた細菌、およびFE2洗浄したスパイクされた細菌。
試料の計数は各複製直後に行わなければならない。
1.100倍希釈されるまで、100mLリン酸バッファーをすりつぶり処理した葉を有するストマッカーバッグに加える。
2.30秒間リン酸バッファーおよび処理された葉を有するバッグを消化する。
3.リン酸バッファーに葉を戻して振盪し、さらに30秒間消化を繰り返す。
4.消化された試料からバッファーを除去し、連続希釈および1mL輸送物でスプレッドプレーティングによって残存細胞を計数する。
5.すべての他の処理について工程1〜4を繰り返す。
対数減少値の予測
M(cfu/g)=任意の処理を伴わない葉上の微生物個体群;
R(cfu/g)=「水処理群」の水溶液中微生物個体群;
W(cfu/g)=「水処理群」からの葉上の微生物個体群;
X(cfu/g)=「X処理群」からの葉上の微生物個体群;
したがって、「処理群X」に起因する対数減少値=Log(w/x)
機械的洗浄によって除去される微生物=R
乾燥プロセス間に死滅した微生物=M−W−R
塩素処理水に比べて、FE殺菌剤は、葉に付着した病原体をさらに2− log10減少させた。さらに、40Fにてスプレッドプレートを保存することは、傷害細胞が1週間以内に冷凍温度にて増殖し得なかったことを示した。細菌細胞が栄養富化寒天プレート上で増殖できなければ、それらは、処理された新鮮な農産物上で増殖しない可能性が高いであろう。
プロセシングパラメータおよび処理
処理:塩素処理水、ペルオキシ酢酸洗浄水、およびFE殺菌剤洗浄水
温度:38〜40oF
滞留時間:20秒
pH:
塩素処理水(6.5〜7.1)
ペルオキシ酢酸(6.5〜6.8)
FE殺菌剤洗浄水(2.7〜3.2)
農産物:1.5”x2”ダイスカットロメインレタス
1.パイロット・ライン・システム(Pilot Line System)で完全に殺菌する。
2.第2フリューム式タンク、第2容器、および第2濾過タンクを水道水で満たす。
3.システム中の水が40°Fに冷却されるまでシステムを介して水を再利用する。
4.プロミネントシステム(Prominent System)を調整し、洗浄水中のPAA濃度をモニターするためにプロミネントシステムを使用する。
5.標的プロセシング制限値に達するまでPAAを第2濾過タンクに加える。
6.translicerでロメインレタスをダイスカットする。
7.トート(tote)中に2”x2”ダイスカットロメインレタスを回収する。
8.それを第2フリュームに移す前に各トートの重量を記録する。
9.各ビンから3つの未処理バッグのロメインレタスを回収する(1つは上部、1つは中間、および1つは下部)。
10.F2の最後部にて3つの処理バッグのロメインレタスを回収する(1つはビンの先頭、1つはビンの中間、および1つはビンの最後)。
11.水がこぼれた位置の下部に白色トートを入れる。必要に応じて、フリューム式タンクにこぼれた水を戻す。
12.葉から取り除かれる液体を回収するために遠心分離機の下部出口に白色トートを入れる。必要に応じて、フリューム式タンクに回収した水を戻す。
13.FE濃度が最も低いプロセシング制限値を下回るまで、残りのビンについて工程「e」〜「k」を繰り返す。
14.回収した試料上の微生物個体群(APCおよび酵母およびカビ)を計数する。
1.パイロット・ライン・システムで完全に殺菌する。
2.第1フリューム式タンク、第2フリューム式タンク、第1容器、第2容器、第1濾過タンク、および第2濾過タンクを水道水で満たす。
3.システム中の水が40°Fに冷却されるまでシステムを介して水を再利用する。
4.水が濾過システムを通過するのではなく、連続してフリューム式タンクからその付随容器へ再利用するのみとなるように第1および第2フリューム式タンクのバイパスの電源を入れる。
5.標的プロセシング制限値に達するまで化学的成分を両方のタンクに加える。
6.第1フリューム式タンク(F1)、第1容器(R1)、第2フリューム式タンク(F2)、および第2容器(R2)でプロミネントモニタリングシステムのプローブによってFEの濃度を確認する。
7.F1およびF2から水試料を回収する。
8.ダンプスターの隣にロメインレタスビンを取り付ける。
9.ビンからコンベヤーにすべてのロメインレタスの葉を移す。
10.必ずF1の上のフタを閉める。translicerの「オン/オフ」スイッチを「オン」にする。
11.葉をtranslicerに移すためのコンベヤーを「オン」にする。
12.必ず刻んだロメインレタスをフリューム式タンクに均等に供給する。
13.各ビンから3つの未処理バッグのロメインレタスを回収する(1つは上部、1つは中間、および1つは下部)。
14.F2の最後部にて3つの処理バッグのロメインレタスを回収する(1つはビンの先頭、1つはビンの中間、および1つはビンの最後)。
15.ビンをプロセシングする前後に、第1フリューム式タンク(F1)、第1容器(R1)、第2フリューム式タンク(F2)、および第2容器(R2)にてpH、温度、およびFEの濃度を確認する。
16.水がこぼれた位置の下部に白色トートを入れる。必要に応じて、フリューム式タンクにこぼれた水を戻す。
17.葉から取り除かれる液体を回収するために遠心分離機の下部出口に白色トートを入れる。必要に応じて、フリューム式タンクに回収した水を戻す。
18.FE濃度が最も低いプロセシング制限値を下回るまで、残りのビンについて工程「e」〜「o」を繰り返す。
19.回収した試料上の微生物個体群(APCおよび酵母およびカビ)を計数する。
1.パイロット・ライン・システムで完全に殺菌する。
2.第1フリューム式タンク、第2フリューム式タンク、第1容器、第2容器、第1濾過タンク、および第2濾過タンクを水道水で満たす。
3.システム中の水が40°Fに冷却されるまでシステムを介して水を再利用する。
4.水が濾過システムを通過するのではなく、連続してフリューム式タンクからその付随容器へ再利用するのみとなるように第1および第2フリューム式タンクのバイパスの電源を入れる。
5.標的プロセシング制限値に達するまで化学的成分を両方のタンクに加える。
6.第1フリューム式タンク(F1)、第1容器(R1)、第2フリューム式タンク(F2)、および第2容器(R2)でHACHシステムのプローブによって塩素処理水の濃度を確認する。
7.F1およびF2から水試料を回収する。
8.ダンプスターの隣にロメインレタスビンを取り付ける。
9.ビンからコンベヤーにすべてのロメインレタスの葉を移す。
10.必ずF1の上のフタを閉める。translicerの「オン/オフ」スイッチを「オン」にする。
11.葉をtranslicerに移すためのコンベヤーを「オン」にする。
12.凝集および塊にならないように刻んだロメインレタスをフリューム式タンクに必ず均等に供給する。
13.各ビンから3つの未処理バッグのロメインレタスを回収する(1つは上部、1つは中間、および1つは下部)。
14.F2の最後部にて3つの処理バッグのロメインレタスを回収する(1つはビンの先頭、1つはビンの中間、および1つはビンの最後)。
15.ビンをプロセシングする前後に、第1フリューム式タンク(F1)、第1容器(R1)、第2フリューム式タンク(F2)、および第2容器(R2)にてpH、温度、および塩素処理水の濃度を確認する。
16.水がこぼれた位置の下部に白色トートを入れる。必要に応じて、フリューム式タンクにこぼれた水を戻す。
17.葉から取り除かれる液体を回収するために遠心分離機の下部出口に白色トートを入れる。必要に応じて、フリューム式タンクに回収した水を戻す。
18.回収した試料上の微生物個体群(APCおよび酵母およびカビ)を計数する。
Claims (24)
- i)式RC(O)OOH(式中:Rはメチル、エチル、n−プロピル、またはs−プロピルである)で示される有機過酸;
ii)酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、マンデル酸、および乳酸から選択される2−ヒドロキシ有機酸;および、所望により
iii)陰イオン界面活性剤
を含む水性溶液であって、2.5〜6.0のpHを有し、過酸の濃度が40〜250ppm(w/w)であり、2−ヒドロキシ有機酸の濃度が0.1〜1%(w/w)である、水性溶液。 - 過酸がペルオキシ酢酸であり、2−ヒドロキシ有機酸がL−(+)−乳酸である、請求項1記載の溶液。
- ペルオキシ酢酸の溶液中濃度が50〜100ppm(w/w)であり、乳酸の溶液中濃度が0.1%〜0.6%(w/w)である、請求項2記載の溶液。
- ペルオキシ酢酸の溶液中濃度が60〜80ppm(w/w)であり、乳酸の溶液中濃度が0.1%〜0.4%(w/w)である、請求項2記載の溶液。
- pHが2.5〜4.5である、請求項2記載の溶液。
- pHが2.8〜3.2である、請求項1記載の溶液。
- pHが約3.0である、請求項1記載の溶液。
- 溶液が35°F〜45°Fの温度である、請求項1記載の溶液。
- 溶液が、非イオン性界面活性剤、陽イオン界面活性剤または陰イオン界面活性剤を実質的に含まない、請求項1記載の溶液。
- i)式RC(O)OOH(式中:Rはメチル、エチル、n−プロピル、またはs−プロピルである)で示される有機過酸;
ii)酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、マンデル酸、および乳酸から選択される2−ヒドロキシ有機酸;および、所望により
iii)陰イオン界面活性剤
を含む水性溶液と農産物の表面とを接触させることによって農産物を処理する方法であって、該水性溶液が2.5〜6.0のpHを有し、過酸の濃度が40〜250ppm(w/w)であり、2−ヒドロキシ有機酸の濃度が0.1〜1%(w/w)である、方法。 - 接触時間が少なくとも10秒間である、請求項10記載の方法。
- 接触時間が10秒〜1分間である、請求項10記載の方法。
- 過酸がペルオキシ酢酸であり、2−ヒドロキシ有機酸がL−(+)−乳酸である、請求項10記載の方法。
- 過酢酸の溶液中濃度が50〜100ppm(w/w)であり、乳酸の溶液中濃度が0.1%〜0.6%(w/w)である、請求項13記載の方法。
- ペルオキシ酢酸の溶液中濃度が60〜80ppm(w/w)であり、乳酸の溶液中濃度が0.1%〜0.4%(w/w)である、請求項13記載の方法。
- ペルオキシ酢酸の濃度が70〜80ppm(w/w)であり、乳酸の濃度が0.2〜0.4%(w/w)である、請求項13記載の方法。
- 溶液の温度が、室温、常温、または35°F〜85°Fから選択される、請求項13記載の方法。
- 溶液の温度が、室温、常温、または35°F〜45°Fから選択される、請求項13記載の方法。
- 溶液が、非イオン性界面活性剤、陽イオン界面活性剤または陰イオン界面活性剤を実質的に含まない、請求項10記載の方法。
- 追加量の過酸または2−ヒドロキシ有機酸が、農産物の接触に使用している間水性溶液のpH、過酸、または2−ヒドロキシ有機酸濃度を維持するために、1つまたは複数のpH、過酸濃度、酸化還元力、または2−ヒドロキシ有機酸濃度の測定値に応じて水性溶液に加えられる、請求項10記載の方法。
- 水性溶液が、過酸化水素を実質的に含まない2−ヒドロキシ有機酸の溶液を過酸の溶液に加えることによってまたは過酸の溶液を過酸化水素を実質的に含まない2−ヒドロキシ有機酸の溶液に加えることによって形成される、請求項10記載の方法。
- 任意の過酸化水素を実質的に含まない2−ヒドロキシ有機酸および過酸が、農産物を輸送または洗浄するために用いられる水性流体に別々に加えられる、請求項10記載の方法。
- 処理が、農産物上のまたは農産物に付着した細菌を死滅させるかまたはその増殖を抑制することによって農産物を殺菌する、請求項10記載の方法。
- 農産物を殺菌するためのキットであって、
i)請求項1記載の水性殺菌剤溶液を保持する容器または請求項1記載の水性殺菌剤溶液を得るために希釈されうる濃縮水性溶液を保持する容器、および
ii)水性殺菌剤溶液を農産物に適用するための使用説明書
を含むキット。
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