JP2011523850A - 食品 - Google Patents
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Abstract
Description
r. acuminata、Myrtus communis var. italica (Mill.)、Myrtus communis var. lusitanica、Myrtus borbonis Sennen、Myrtus acutifolia (L.)、Myrtus augustinii、Myrtus baui、Myrtus briquetii、Myrtus christinae、Myrtus communis var. balearica、Myrtus communis var. foucaudii、Myrtus communis var. grandifolia、Myrtus communis var. joussetii、Myrtus communis var. neapolitana、Myrtus eusebii、Myrtus gervasii、Myrtus josephi、Myrtus mirifolia、Myrtus petri-ludovici、Myrtus rodesi、Myrtus theodori、およびMyrtus vidaliiを含むギンバイカのこの種を称するために他の名称が使用されることも理解されよう。
ギンバイカが、お口の健康を改善するまたは維持するために動物に使用するのに適しているか否かを判定するために、最初のアッセイを構成した。
アッセイ接種材料:犬からサンプリングした歯垢および唾液
このアッセイには、接種のために新たな犬の歯肉縁上歯垢と唾液が必要である。その接種材料は、年齢、血統およびお口の健康状態が様々である、14匹の犬の群からサンプリングした、プールされた歯垢と未濾過の唾液からなる。
プレート・バイオフィルム・アッセイ(PBA)では24ウェルプレートのフォーマットを使用し、ここで、犬の歯垢を表すバイオフィルムをヒドロキシアパタイト(HA)ディスク上で増殖させる。24ウェルのアッセイプレートに導入する前に、各HAディスクを、犬の人工唾液中の濾過滅菌した50%の犬の唾液の溶液中で2時間に亘り試験準備する。この試験準備工程により、HAディスクの表面上の唾液ペリクルの形成が促進される。この試験準備後、各HAディスクを24ウェルプレート上の各ウェル内に個別に配置する。接種材料を2つの等しいアリコートに分割し、一方のアリコートに活性成分を適切な濃度で加える。他方のアリコートは対照(活性成分なし)を表す。1mlの接種材料を各ウェルに加え、アッセイプレートを、48時間に亘り38℃で振とうしながら、好気的に培養する。24時間後と30時間後に、ディスクを、既に述べたように、活性成分を適切な濃度で含有する新鮮な人工唾液中に移す。48時間後に、バイオフィルム被覆HAディスクを分析のためにアッセイから取り出す。バイオマス定量化のために使用されるものを除いて、各HAディスクを500μlのPBS中に入れ、30秒間に亘り渦流混合して、そのディスクからの増殖したバイオフィルムを溶液中に取り除く。次いで、バイオフィルム懸濁液を分析に使用する。バイオマス定量化に使用されているバイオフィルム被覆HAディスクを24ウェルアッセイプレートから取り出し、クリスタルバイオレット・アッセイに直接使用する。
PBA中でテストしたギンバイカ抽出物
ギンバイカのメタノール抽出物を犬PBAにおける試験に使用した。抽出物は先に記載したように行った。
バイオフィルム測定
以下の分析を使用して、犬PBAにおいて産生されたバイオフィルムおよびバイオフィルムの発達へのギンバイカおよび非植物化合物の影響を評価した:
バイオマス定量化(クリスタルバイオレット・アッセイ)
プロテアーゼ活性
細菌生存数
各アッセイの簡単な説明を以下に示す。
HAディスク上で増殖したバイオフィルムの総量をクリスタルバイオレット染色法を使用して定量した。バイオマスは、対照と比較したサンプルの595nmでのOD読取り値(OD595)に正比例しているものと表された。結果は、非活性対照と比較した活性処理サンプル中に見られたOD595の減少として表され、ディスク上で増殖したバイオフィルムの量への活性処理の影響を反映している。
トリプシン様プロテアーゼ活性を液体BAPNAアッセイを使用して測定した。これは、サンプル中に存在するトリプシンの量が、発色した色の彩度に正比例している比色法である。サンプルをトリプシン標準曲線に対して定量化し、結果は、対照と比較した活性処理サンプル中のプロテアーゼ活性の阻害パーセントとして表される。
細菌の生存数を、ヘミンおよびメナジオンを添加したコロンビア血液寒天培地を使用して定量した。好気性菌を2日間の培養後に計数し、黒色集落形成コロニー(BPC)を含む嫌気性菌を9日間の適切な条件下での培養後に計数した。プレート計数は、ml当たりのコロニー形成単位(cfu)として表され、対照と活性培地との間の差は対数で表される。
データの統計的分析
各サンプルをアッセイ内で5回繰り返した。別記しない限り、全ての抽出物はアッセイにおいて5000μg/mlの濃度で試験した。各サンプルについて、得られた値の全てを記録し、その記録値から平均を計算した。
原料の試験
ギンバイカの植物原料、並びに上述した抽出物もプレート・バイオフィルム・アッセイにおいて試験した。この植物原料は、250μmの孔径の篩に通して調製し、アッセイにおいて5000μg/mlで試験した。この原料は、バイオフィルム形成を阻害するのに、先に試験した抽出物と同じくらい効果的であった。
ヒトの歯垢の阻害
ギンバイカの葉の粉末を、プレート・バイオフィルム・アッセイのヒトの形態におけるバイオフィルム形成の阻害について試験した。各試験試薬の最終濃度は250μg/mlであった。試験は、別々のアッセイにおいて5回繰り返した。
様々な食品の用途には、120℃までの温度への曝露後に原料活性が残存する必要がある。これを試験するために、生のギンバイカの葉を10分間に亘り120℃に加熱し、プレート・バイオフィルム・アッセイにおいて試験した活性を、非加熱処理対照と比較した。
製品の受けを評価するために、ギンバイカの葉を3%のレベルで25gのチュウの形態に含ませ、3種類の他のチュウタイプとのクロスオーバー研究において、ミニチュア・シュナウツァー、コッカースパニエルおよびラブラドールに与えた。チュウを4日間に亘り毎日1回与え、次の給餌段階を開始する前に、3日間の中断期間を設けた。ギンバイカを含有しない標準のチュウと比較すると、ギンバイカのチュウの受けは、全ての犬において同程度であった。
伴侶動物におけるお口の健康の維持および改善に関するギンバイカの効き目を評価するために、ギンバイカの葉を2.65%のレベルでチュウ形態に含ませ、ミニチュア・シュナウツァー(17gのチュウ)、コッカースパニエル(25gのチュウ)およびラブラドール(40gのチュウ)に与えた。第2のデンタル・チュウである標準的なチュウから得られたものと、ドライ粗挽きタイプの規定食と比較した、ギンバイカ組成物のお口の健康への効果を評価した。32匹の健康な成犬を4群の1つに割り当てた。これらは、合計で、12匹のラブラドール・レトリーバー、12匹のコッカースパニエルおよび8匹のミニチュア・シュナウツァーであった。これらの動物を、血統、性別および適切な年齢の照合を確実にするように、加重団体(weighted blocks)内の群に無作為に割り当てた。
上顎: I3 (103,203), C (104,204), P2 (106,206), P3 (107,207), P4 (108,208), および M1 (109,209).
下顎: C (304,404), P2 (306,406), P3 (307,407), P4 (308,408), and M1 (309, 409)。
0 − 厳密な調査の際に炎症も出血もない、歯肉炎のない、ピンク色(または色素性)の健康な歯肉;
1 − 非常に軽い歯肉炎(厳密な調査の際に赤く、腫れているが、出血なし);
2 − 軽い歯肉炎(厳密な調査の際に赤く、腫れており、遅れて出血した);
3 − 中程度の歯肉炎(厳密な調査の際に赤く、腫れており、直ちに出血した);
4 − ひどい歯肉炎(厳密な調査の際に潰瘍形成、自発出血、おびただしい出血)
ギンバイカの葉の粉末を含有するデンタル・チュウは、基本の規定食と比較して、平均歯肉炎レベルを著しく(P≦0.05)減少させ、一方で、標準的なチュウは、基本の規定食と比較して著しい減少は示さなかった。ギンバイカを含有するデンタル・チュウが給餌された犬は、2週間の歯磨き後に、ベースラインで観察されたものより低い平均歯肉炎レベルをもたらした。
本発明の食品の実施の形態は共押出により調製できる。その食品は犬向けに適している。外部と内部は、以下に詳しく説明するようなものである。
本発明の食品の代わりの実施の形態を犬向けに調製した。
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2、2’ 内部
7、4’ 端部
Claims (20)
- 内部と外部からなる食品であって、該内部が、ギンバイカを含み、約10%から約25%の含水率を有することを特徴とする食品。
- 前記外部が前記内部よりも硬いことを特徴とする請求項1記載の食品。
- 充填された管の形態にあることを特徴とする請求項1または2記載の食品。
- 前記内部がペーストまたはゲルの形態にあることを特徴とする請求項1から3いずれか1項記載の食品。
- 前記内部がデンプンマトリクスであることを特徴とする請求項1から3いずれか1項記載の食品。
- 前記外部がギンバイカを含むことを特徴とする請求項1から5いずれか1項記載の食品。
- 前記ギンバイカが前記食品全体の1質量%から10質量%の量で前記内部に含まれることを特徴とする請求項1から6いずれか1項記載の食品。
- 前記ギンバイカが前記内部の約4質量%の量で該内部に含まれることを特徴とする請求項1から7いずれか1項記載の食品。
- ペットフード製品であることを特徴とする請求項1から8いずれか1項記載の食品。
- ドッグフード製品であることを特徴とする請求項1から9いずれか1項記載の食品。
- 動物のお口の健康の維持または改善に使用するための請求項1から10いずれか1項記載の食品。
- 動物における歯肉炎の予防または治療に使用するための請求項1から10いずれか1項記載の食品。
- 動物におけるタータおよび/または歯垢を減少させるのに使用するための請求項1から10いずれか1項記載の食品。
- 前記ギンバイカがMyrtus communisであることを特徴とする請求項1から13いずれか1項記載の食品。
- 前記動物が猫、犬またはヒトであることを特徴とする請求項1から14いずれか1項記載の食品。
- 動物のお口の健康を維持または改善する方法であって、該動物に請求項1から10いずれか1項記載の食品を効果的な量で与える工程を有してなる方法。
- 請求項1から9いずれか1項記載の食品を製造する方法であって、前記外部を形成する成分を混合し、前記内部を形成する成分を混合し、該外部と該内部を共押出しして請求項1から10いずれか1項記載の食品を形成する各工程を有してなる方法。
- 実質的に図面に示された食品。
- 実施例に記載されたように使用するための食品。
- 実質的に実施例に記載された、動物のお口の健康を維持または改善する方法。
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