JP2011093916A - アルツハイマー病と他のβ−アミロイドタンパク原線維形成障害の治療のための低分子量ペプチド - Google Patents

Abstract

【課題】アミロイド原線維を阻害及び／又は破壊することに大きな効力を示す低分子ペプチド及び該ペプチドを含むアルツハイマー病と他のＡβ障害を治療するための医薬組成物の提供。さらには、アルツハイマー病と他のβ−アミロイドタンパク質（Ａβ）原線維形成障害の診断の目的でＡβの体内での位置を造影するための同ペプチドの使用方法、並びにアルツハイマー病と他のβ−アミロイドタンパク質（Ａβ）原線維形成障害の診断の目的でＡβを生物学的試料中に検出するための同ペプチドの使用方法の提供。
【解決手段】式：Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met-Gly-アミドのペプチドを含む医薬組成物。
【選択図】なし

Description

本発明は、５〜１３マーのペプチド及びペプチド誘導体の、アルツハイマー病と他のβ−アミロイドタンパク原線維形成障害の治療への使用に関する。

アルツハイマー病と他のアミロイド症の治療におけるペプチド断片の治療上の使用についての追加背景は、米国特許出願０９／９３８，２７５号（２００１年８月２２日出願）と米国特許出願０９／９６２，９５５号（２００１年９月２４日出願）に見出すことができて、このそれぞれの本文及び図面は、本明細書に完全に示されるかのように、参照により本出願へ組み込まれる。

アルツハイマー病の治療標的としてのβ−アミロイドタンパク質
アルツハイマー病（ＡＤ）は、β−アミロイドタンパク質、Ａβ又はβ／Ａ４と呼ばれる３９〜４３アミノ酸ペプチドの沈着及び蓄積を特徴とする（Glenner and Wong, Biochem. Biophys. Res. Comm. 120: 885-890, 1984; Masters et al., Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 82; 4245-4249, 1985; Husby et al, Bull. WHO 71: 105-108, 1993）。Ａβは、いくつかの選択的にスプライスされた変異体が存在する、β−アミロイド前駆体タンパク質（又はＡＰＰ）と呼ばれるより大きな前駆体タンパク質より派生する。最も豊富なＡＰＰの形態には、６９５、７５１、及び７７０のアミノ酸からなるタンパク質が含まれる（Kitaguchi et al, Nature 331: 530-532, 1988; Ponte et al, Nature 331: 525-527, 1988; Tanzi et al, Nature 331: 528-530）。この低分子量（small）Ａβペプチドは、ＡＤの患者の脳にある「斑（plaque）」と呼ばれるアミロイド沈着物のコアを構成する主要成分である。さらに、ＡＤは、ニューロン細胞質に異常に蓄積する対合らせんフィラメントからなる、無数の神経原線維の「もつれ」の存在を特徴とする（Grundke-Iqbal et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83: 4913-4917, 1986; Kosik et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83: 4044-4048, 1986; Lee et al, Science 251: 675-678, 1991）。ＡＤ脳に見出される他の主要なタイプの病変は、脳実質内と脳の外側に存在する髄膜管内の両方にある血管の壁におけるアミロイドの蓄積である。血管の壁に局在化するアミロイド沈着物は、脳血管アミロイド又はコンゴレッド親和性（congophilic）血管症と呼ばれる（Mandybur, J. Neuropath. Exp. Neurol. 45: 79-90, 1986; Pardridge et al, J. Neurochem. 49: 1394-1401, 1987）。故に、ＡＤの病理学的な目印は、「斑」、「もつれ」、及び脳血管アミロイド沈着物の存在である。

多年の間、ＡＤにおける「アミロイド」の重要性と、この疾患を特徴づける「斑」及び「もつれ」がこの疾患の原因であるのか又は単に結果であるのかについて継続中の学術論争がある。最近の研究は、アミロイドが実際にＡＤの原因となる因子であり、単に結果としてみてはならないことを示している。細胞培養中のアルツハイマー病のＡβタンパク質は、神経細胞の変性を短い時間の間に引き起こすことが示された（Pike et al, Br. Res. 563: 311-314, 1991; J. Neurochem. 64: 253-265, 1995）。諸研究は、この神経学的な効果の主に原因となるのがすべてのアミロイドを特徴づける原線維構造であることを示唆する。Ａβはまた、海馬のスライス培養において神経学的であることが見出され（Hadrian et al, Neurobiol. Aging 16: 779-789, 1995）、トランスジェニックマウスにおいて神経細胞死を誘導する（Games et al, Nature 373: 523-527, 1995; Hsiao et al, Science 274: 99-102, 1996）。Ａβのラット脳への注射はまた、記憶障害とニューロン機能不全を引き起こす（Flood et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 88: 3363-3366, 1991; Br. Res. 663: 271-276, 1994）。ＡβアミロイドがＡＤの病理発生に直接関与するという確実な証拠は、遺伝学的研究に由来する。Ａβの増加した産生は、その前駆体、ＡＰＰをコードする遺伝子における突然変異から生じ得ることが発見された（Van Broeckhoven et al, Science 248: 1120-1122, 1990; Murrell et al, Science 254: 97-99, 1991; Haass et al, Nature Med. 1: 1291-1296, 1995）。家族性ＡＤの早期発症を引き起こすＡＰＰ遺伝子における突然変異の同定は、Ａβとアミロイドがこの疾患の根底にある病理発生プロセスの中心にあるという強い論拠である。家族性ＡＤを引き起こすことにおけるＡβの重要性を実証する、４つの報告された疾患起因性突然変異が今や発見されている（Hardy, Nature Gen. 1: 233-234, 1992 に概説されている）。最後に、最近の研究は、ＡＰＰトランスジェニックマウスにおいてアミロイド斑のロードを低下させると、行動障害及び記憶喪失の改善をもたらすことを示唆する（Chen et al, Nature 408: 978-982, 2000; Janus et al, Nature 408: 979-982, 2000; Morgan et al, Nature 408: 982-985, 2000）。これは、脳中のＡβアミロイドロードを低下させることがＡＤと関連障害の新しくて有効な治療法の開発にとって中心的な標的であるべきだと示唆する、これまでで最も強い論拠である。

アルツハイマー病と高齢化人工
アルツハイマー病は、高齢者の痴呆の主因であり、６５歳の年齢を超える人口の５〜１０％が罹患している（Jorm,「アルツハイマー病と関連障害の理解の手引き（A Guide to Understanding of Alzheimer's Disease and Ralated Disorders）」ニューヨーク大学出版局、ニューヨーク、１９８７年）。ＡＤでは、記憶、注意、言語、及び推論のような認知プロセスに必須な脳の部分が変性する。遺伝型ＡＤの中には発症が中年期であるものもあるが、より一般的には、症状が現れるのは、６０歳代中期以降からである。今日４〜５百万のアメリカ人がＡＤに罹患していて、この人々のうち半分強しか多くの異なる医療機関でケアを受けていない。ＡＤや他の痴呆の罹患率は、６５歳を過ぎると５年ごとに倍増して、最近の研究は、８５歳以上の人々のほぼ５０％がＡＤの症状を有することを示している（「ＮＩＨ ＡＤ進捗報告（NIH Progress Report on AD）」国立老化研究所、２０００年）。米国の全人口のうち３３００万人が６５歳以上であり、これは、２０２５年までに５１００万人へ上昇するだろう（「ＮＩＨ ＡＤ進捗報告（NIH Progress Report on AD）」国立老化研究所、２０００年）。米国におけるＡＤの年間経済損失は、患者とその介護者の両方の医療費と損失賃金でみて、８００〜１０００億ドルと推定される（「ＮＩＨ ＡＤ進捗報告（NIH Progress Report on AD）」国立老化研究所、２０００年）。

発明の開示
本出願は、米国特許出願０９／９３８，２７５号（２００１年８月２２日出願）の一部継続出願である米国特許出願０９／９６２，９５５号（２００１年９月２４日出願）の一部継続出願であり、そのいずれの本文及び図面も、本明細書に完全に示されるかのように、参照により本出願へ組み込まれる。

アミロイド原線維を阻害及び／又は破壊することに大きな効力を明示する低分子ペプチドを開示する。また開示するのは、アルツハイマー病と他のβ−アミロイドタンパク質（Ａβ）原線維形成障害の診断の目的でＡβの体内での位置を造影するための同ペプチドの使用、並びにアルツハイマー病と他のβ−アミロイドタンパク質（Ａβ）原線維形成障害の診断の目的でＡβを生物学的試料中に検出するための同ペプチドの使用である。本明細書に使用する「原線維形成」は、当業者に知られるように、β−アミロイドがそれ自身へ臨床的又は病理学的に結合して、原線維、時にはβシートを形成することを意味する。

本開示は、β−アミロイドタンパク質（Ａβ）へ結合してＡβの凝集及び／又は原線維形成を変調又は緩和させることができる、アルツハイマー病やＡβの蓄積及び存続が関与する他の障害のようなＡβ疾患の治療及び診断のための化合物とその医薬組成物に関する。これらのＡβ疾患には、限定されないが、アルツハイマー病及びダウン症候群と関連したアミロイド症と、当該技術分野に知悉した人々に馴染みであるような、様々な形態の脳アミロイド症が含まれる。

本開示は、ある種のペプチドがＡβアミロイド原線維の結合剤及び破壊剤であり、それ故にアルツハイマー病と関連Ａβ障害の治療介入に有用であるという新規の驚くべき発見に関する。選択されるペプチドは、アルツハイマー病のＡβアミロイドの結合剤であり、それ故にアルツハイマー病と関連Ａβ障害のイメージング及び診断に有用である。治療有効量の選択６〜９マーペプチドを被検者又は患者へ投与することを含んでなる、アルツハイマー病と他のＡβ障害を治療する方法を開示する。

１つの態様において［ここでは、好ましくは、他に示す場合（「ＬＰ」番号コードのあるＬ型ペプチドを明記すること、又は選択されるアミノ酸コードに「Ｌ」の接頭語を付けることのように）を除いて、示すすべてのアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸である］、医薬組成物は、好ましくは：

［ａｍｉｄｅ＝アミド；Ａｃｅｔｙｌ＝アセチル］を含んでなるペプチドの群より選択される少なくとも１つのペプチドを含有する。この群にはまた、本明細書おいてさらに考察されるように、上記に開示された配列のある種の類似体、誘導体、エナンチオマー、又は断片が含まれ、以下、このすべてを簡便な参照のために「配列群Ａ」と呼ぶ。

ある種の好ましい態様において、化合物は、一般式又は構造：
Ｙ−（Ｘ−ａａ）−Ｚ
［式中：（Ｘ−ａａ）は、本質的に

からなる群より選択されるペプチドであり、
式中、Ｙ−は、別のアミノ酸、Ｎ−アシル化アミノ酸、ペプチド、Ｎ−アシル化ペプチド、又は水素であり得るアミノ末端（Ｎ末端）修飾基、又は他の既知のＮ末端修飾化合物であり；
式中、Ｚは、水素、アミノ酸、Ｃ−アミド化アミノ酸、ペプチド、Ｃ−アミド化ペプチドからなる群より選択されるカルボキシル末端（Ｃ末端）修飾基、又は他の既知のＣ末端修飾基である］を有する。

Ｙ−（Ｘ−ａａ）−Ｚモデルにおいて作用する「配列群Ａ」由来のペプチドの例（以下、「配列群Ｂ」と呼ぶ）には、

［ａｍｉｄｅ＝アミド；Ａｃｅｔｙｌ＝アセチル］が含まれる。
上記に規定されるが、

より選択される（Ｘ−ａａ）ペプチドを含有するペプチド：Ｙ−（Ｘ−ａａ）−Ｚを選択することが好ましい。以下「配列群Ｃ」と呼ぶこれらの好ましい構造の例には、

［ａｍｉｄｅ＝アミド；Ａｃｅｔｙｌ＝アセチル］が含まれる。
本開示における好ましい有効なペプチド断片は、

である。これらの好ましい断片は、さらなる合成の基礎として、又は本明細書において別に開示されるように、単独で、又は互いと組み合わせて、療法的に利用してよい。
また開示するのは、配列群Ａ、Ｂ、又はＣのＮ−メチル化類似体の使用であり、生じるペプチドが純粋にαＮ−メチル化アミド結合、又は一部αＮ−メチル化又は交互のαＮ−メチル化及び非αＮ−メチル化アミド結合を有するように、αＮ−メチル化又はＬ−アミノ酸（好ましくは、メチル化アミノ酸）を合成の間独占的に、又は部分的に使用することが含まれる。好ましい化合物は、ペプチド骨格中のアミド結合の少なくとも１つがＮ−メチル化されて、ペプチド自身がβシート形成することを妨げるように修飾されたアミド結合のある配列群Ａ、Ｂ、又はＣより選択される。

模倣体（ペプチド模倣体）化合物も、配列群Ａ、Ｂ、又はＣのペプチドが含まれる、本明細書に開示する他のペプチドから設計されるものとして開示する。用語「模倣体」には、一般に、ペプチド骨格のアミド窒素、アミドカルボニルでの修飾（即ち、アミド結合模倣体）、又はアミド結合の完全な置き換えのような「等量体（isosteres）」が含まれる。アミド結合は、有利にも、当業者に知られた、−ＣＨ_２Ｓ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ_２ＮＨ−、−ＣＳＮＨ_２−、又はＣＯＣＨ_２のような類似の長さの架橋に置き換えることができる。

模倣体は、本明細書に開示するペプチド構造のいくつかからのバーチャルペプチドモデルを誘導することができるソフトウェアを使用して産生することができる。これは、ＳＬＡＴＥアルゴリズムより導かれるソフトウェアを使用して行うことができる。Perkin, Mills and Dean, 1995 Journal of Computer Aided Molecular Design 9(6) p479-490; Mills et al. 2001 Journal of Computer Aided Molecular Design 15(1) p81-96; De Esch, IJ et al 2001 Journal of Med Chem. 44(11) p1666-74; Mills Perkin and Dean, 1997 Journal of Computer Aided Molecular Design 11(2) p175-92 を参照のこと。ＳＬＡＴＥアルゴリズムより導かれるプログラムの１つの例は、Ｄｅ Ｎｏｖｏ ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌによるＱｕａｓｉである。このプログラムは、活性に必須な最もあり得る構造に（最小のエネルギー束縛で）到達して活性である、いくつかの活性であるが明らかに異なるペプチド分子を重ね合わせる。これを使用して、三次元空間での水素結合原子の予測位置とともに鋳型又は標的結合部位を産出することができる。次いで、これを使用して、元のリガンドペプチドの非ペプチド模倣体を産出することができる。これらの分子産出ソフトウェアは、今日市販されている（例えば、ＳｋｅｌｇｅｎとＳｋｅｌｇｅｎ ＩＩ）。

化合物の「模倣体」はまた、機能活性に必要である化合物の化学構造を、化合物又はそのペプチドのコンホメーションを模倣する他の化学構造で置き換えた化合物も意味する。本明細書に使用する用語「模倣体」には、Ｌ又はＤ−ペプチド構造の化学構造を模倣して、Ｌ又はＤ−ペプチド構造の機能特性を保持する分子も含まれると企図される。ペプチド類似体、誘導体、及び模倣体を設計する他のアプローチも当該技術分野でよく知られている。例えば、「ドラッグデザイン（Drug Design）」E. J. Ariens 監修、アカデミック・プレス、ニューヨーク（1980）、10巻、119-143頁中、P. S. Farmer; Ball and Alewood, J. Mol. Recognition 3: 55, 1990; Morgan and Gainor, Ann. Rep. Med. Chem. 24: 243, 1989; 及び Freidinger, Trends Pharmacol. Sci. 10: 270, 1989 を参照のこと。MD Taylor and GL Amidon 監修「ペプチドベースのドラッグデザイン：輸送及び代謝の制御（Peptide-Based Drug Design: Controlling Transport and Metabolism）」第17章（1995年）中、Sawyer,「ペプチド模倣体の設計とペプチド代謝への化学アプローチ（Peptidomimetic design and chemical approaches to peptide metabolism）」；Smith et al, J. Am. Chem. Soc. 117: 11113-11123, 1995; Smith et al, J. Am. Chem. Soc. 116: 9947-9962, 1994; 及び Hirschman et al, J. Am. Chem. Soc. 115: 12550-12568, 1993 も参照のこと。

用語「類似体」には、例えば、当業者により理解されるような、１以上のアミノ酸残基の相同的な置換、配列の逆転、又は成分アミノ酸の組成上は同一のエナンチオマー（Ｄ−対Ｌ−アミノ酸）での部分的又は完全な置き換えによりもたらされるペプチド分子の変異体が含まれる。類似体には、あるアミノ酸が類似の側鎖を有するアミノ酸で置換される「保存的アミノ酸置換」も含まれる。類似の側鎖アミノ酸の例は、塩基性側鎖アミノ酸（例、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖アミノ酸（例、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非極性側鎖アミノ酸（例、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、非荷電極性側鎖アミノ酸（例、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、シスチン）、分岐側鎖アミノ酸（例、スレオニン、ロイシン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖アミノ酸（例、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）である。類似体には、アミノ酸が相同のアミノ酸で置換される、フェニルアラニンのチロシン、ピリジルアラニン、又はホモフェニルアラニンでの置き換えや、ロイシンのバリンでの置き換え、又はその逆のような「相同性アミノ酸置換」も含まれる。

用語「誘導体」には、アミノ酸側鎖、ペプチド骨格、又はアミノ若しくはカルボキシ末端が本明細書においてさらに考察されるように誘導されたペプチドが存在するように、配列群Ａ、Ｂ、又はＣのペプチド上の１以上の反応基を「ペプチド誘導化」した、当業者には馴染みのわずかな化学変化が含まれる。

上記の構造又は配列のいずれでも、個別アミノ酸の一部又は全部の命名法又は記号表記は、配列を構成する個別アミノ酸の２つのエナンチオマー型（互いの鏡像）を表すＤ−又はＬ−のいずれかが随意に先行する、アミノ酸の標準的な３文字略語により示す。Ｎ末端及びＣ末端のそれぞれアセチル−及び−アミドは、存在するか又は好ましいものとして示す場合、任意に含まれる。

また開示されるのは、その投与がアルツハイマー病と他のＡβアミロイド症を治療するための方法を含む、配列群Ａ、Ｂ、又はＣのペプチド、配列群Ａ、Ｂ、又はＣのペプチドの部分とそれらの新規類似体とそれらの誘導体である。従って、アルツハイマー病とＡβの形成及び存続が関与する他の障害を治療するための方法を提供し、該方法は、Ａβアミロイド症に関連した障害について被検者が治療されるように、治療有効量の化合物を被検者へ投与することを含んでなる。好ましくは、障害は、アルツハイマー病、ダウン症候群、及び他のＡβアミロイド症である。典型的には、医薬組成物には、開示化合物又は化合物の医薬的に許容される塩の治療有効量と随意の医薬的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤が含まれる。

また開示されるのは、アルツハイマー病と他のＡβアミロイド症の患者を治療するための開示化合物を含有する、丸剤、錠剤、カプレット剤、軟及び硬ゼラチンカプセル剤、甘味入り錠剤、サシェ剤、カシェ剤、ベジキャップ剤（vesicaps）、液滴剤、エリキシル剤、懸濁液剤、乳剤、溶液剤、シロップ剤、ティーバッグ、エアゾール剤（固体として、又は液体媒体中）、坐剤、無菌注射可能溶液剤、及び滅菌包装散剤の使用である。故に、Ａβアミロイド症に関連した障害の治療のための療法、又はそのための医薬品の製造への開示化合物の使用も考慮される。

Ａβアミロイド沈着、又はＡβアミロイド沈着が起こる障害におけるＡβアミロイド症を阻害する、選択される開示化合物の治療量を被検者へ投与することに関わる組成物及び方法を提供する。開示化合物は、アミロイド症を治療するために療法的に使用しても、Ａβアミロイド症に罹りやすい被検者において予防的に使用してもよい。本方法は、少なくとも一部は、脳中又は末梢循環中のいずれかのＡβアミロイドへ直接結合すること、Ａβアミロイド原線維形成を阻害すること、及び／又は前形成Ａβアミロイド原線維の分解を引き起こすことに基づく。配列群Ａ、Ｂ、又はＣの化合物によるＡβの末梢隔離（peripheral sequestration）は、Ａβの脳から末梢循環への移動をもたらし、それにより脳Ａβアミロイド原線維形成を阻害する、及び／又は前形成された脳Ａβアミロイド原線維の分解を引き起こすと考えられる。

Ａβペプチドの生物学的試料における存在又は非存在を検出する方法を提供する。上記の方法には、選択された化合物と生物学的試料を接触させること（ここでは、該化合物を検出可能な物質で、例えば、放射性ヌクレオチド、リン光化合物、蛍光化合物、蛍光タンパク質、常磁性化合物、金属キレート剤、又は酵素で標識するが、そのいずれも当業者に知られた様々なアッセイ及び診断法で容易に検出可能である）、そして次いで、生物学的試料中のＡβペプチドへ結合した検出可能な物質を検出することが含まれる。

Ａβペプチドの身体又は生物学的試料中の存在又は非存在を造影するための方法を提供する。これらの方法には、身体中のＡβペプチドを化合物と接触させること（ここでは、該化合物を検出可能な物質で、例えば、放射性ヌクレオチド、リン光化合物、蛍光化合物、蛍光タンパク質、常磁性化合物、金属キレート剤、又は酵素で標識する）、そして、身体又は生物組織中のＡβペプチドへ結合した検出可能な物質を検出することが含まれる。

配列群Ａ、Ｂ、又はＣのペプチド、その類似体、誘導体、又は断片への抗イディオタイプ抗体の、Ａβの強力な結合剤と、アルツハイマー病と他のＡβアミロイド症におけるＡβアミロイドの形成、沈着、蓄積、及び／又は存続の阻害剤としての使用を提示する。用語「抗イディオタイプ抗体」は、他の抗体（Ｂ）のＦａｂ領域に対して産生されたか又はそれを特異的に認識する抗体（Ａ）を意味し、抗体ＢのＦａｂ領域は、配列群Ａ、Ｂ、又はＣ中のペプチドの１つを認識する。この結果は、配列群Ａ、Ｂ、又はＣのペプチドに対する抗イディオタイプ抗体Ａが、反応性、アミロイド結合、及びアミロイド破壊の特性に関して、配列群Ａ、Ｂ、又はＣを模倣するＦａｂ領域を有することである。

化合物を認識する抗体の in vivo 標識への使用を提示する；例えば、放射性ヌクレオチドでは、in vivo 診断及び／又は in vitro 診断のために放射造影が利用される。
開示する治療薬により対処される重要なＡβアミロイド症は、アルツハイマー病である。開示化合物の好ましい治療有効量は、約１０μｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲、そしてより好ましくは、約１００μｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲の投与量である。

選択される開示化合物を含有する医薬剤は、有利には、注射又は注入又は経鼻滴下又は経鼻スプレー又は経口投与により与えることができる。上記の構造又は配列のいずれでも、個別アミノ酸の一部又は全部の命名法又は記号表記は、アミノ酸の標準的な３文字略語、又はアミノ酸の標準的な１文字コードにより、そして適切な場合はその両方により示してよい。

以下の図面は、本発明の態様の例示であり、本発明の範囲を制限するものではない。
図１Ａは、５〜１３マーのペプチド、ＤＰ１〜１８、ＬＰ１９〜２５、ＤＰ２６〜８０、及びＬＰ８１のペプチド配列及び図面である。 図１Ｂは、５〜１３マーのペプチド、ＤＰ１〜１８、ＬＰ１９〜２５、ＤＰ２６〜８０、及びＬＰ８１のペプチド配列及び図面である。 図１Ｃは、５〜１３マーのペプチド、ＤＰ１〜１８、ＬＰ１９〜２５、ＤＰ２６〜８０、及びＬＰ８１のペプチド配列及び図面である。 図１Ｄは、５〜１３マーのペプチド、ＤＰ１〜１８、ＬＰ１９〜２５、ＤＰ２６〜８０、及びＬＰ８１のペプチド配列及び図面である。 図１Ｅは、５〜１３マーのペプチド、ＤＰ１〜１８、ＬＰ１９〜２５、ＤＰ２６〜８０、及びＬＰ８１のペプチド配列及び図面である。 図１Ｆは、５〜１３マーのペプチド、ＤＰ１〜１８、ＬＰ１９〜２５、ＤＰ２６〜８０、及びＬＰ８１のペプチド配列及び図面である。 図１Ｇは、５〜１３マーのペプチド、ＤＰ１〜１８、ＬＰ１９〜２５、ＤＰ２６〜８０、及びＬＰ８１のペプチド配列及び図面である。 図１Ｈは、５〜１３マーのペプチド、ＤＰ１〜１８、ＬＰ１９〜２５、ＤＰ２６〜８０、及びＬＰ８１のペプチド配列及び図面である。 図１Ｉは、５〜１３マーのペプチド、ＤＰ１〜１８、ＬＰ１９〜２５、ＤＰ２６〜８０、及びＬＰ８１のペプチド配列及び図面である。 図１Ｊは、５〜１３マーのペプチド、ＤＰ１〜１８、ＬＰ１９〜２５、ＤＰ２６〜８０、及びＬＰ８１のペプチド配列及び図面である。 図１Ｋは、５〜１３マーのペプチド、ＤＰ１〜１８、ＬＰ１９〜２５、ＤＰ２６〜８０、及びＬＰ８１のペプチド配列及び図面である。 図２は、円二色性（ＣＤ）分光偏光法により評価される、２５μＭ Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対する様々な１２〜１３マーペプチドの効果の整った要約比較を示すグラフである。示すのは、βシート二次構造に逆相関するシグナルを表す、２１８ｎｍでの楕円率の損失により評価される、Ａβ４２原線維の破壊百分率である。 図３は、チオフラビンＴフルオロメトリーにより評価される、２５μＭ Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対する１２〜１３マーペプチドの効果の整った要約比較を示すグラフである。示すのは、１：２のＡβ４２：１２〜１３マーペプチド重量比での、様々な１２〜１３マーペプチドによるＡβ４２原線維の破壊百分率である。 図４は、ＤＰ−０４９までのすべてのペプチドのＣＤ分光法の結果の要約である。 図５は、ペプチドＬＰ−０２５及びＤＰ−０２６〜０４９についてのＡβ４２結合の要約である。 図６〜２０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０〜ＤＰ−０６４（それぞれ１：２）のＣＤスペクトルである。 図６〜２０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０〜ＤＰ−０６４（それぞれ１：２）のＣＤスペクトルである。 図６〜２０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０〜ＤＰ−０６４（それぞれ１：２）のＣＤスペクトルである。 図６〜２０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０〜ＤＰ−０６４（それぞれ１：２）のＣＤスペクトルである。 図６〜２０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０〜ＤＰ−０６４（それぞれ１：２）のＣＤスペクトルである。 図６〜２０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０〜ＤＰ−０６４（それぞれ１：２）のＣＤスペクトルである。 図６〜２０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０〜ＤＰ−０６４（それぞれ１：２）のＣＤスペクトルである。 図６〜２０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０〜ＤＰ−０６４（それぞれ１：２）のＣＤスペクトルである。 図６〜２０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０〜ＤＰ−０６４（それぞれ１：２）のＣＤスペクトルである。 図６〜２０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０〜ＤＰ−０６４（それぞれ１：２）のＣＤスペクトルである。 図６〜２０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０〜ＤＰ−０６４（それぞれ１：２）のＣＤスペクトルである。 図６〜２０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０〜ＤＰ−０６４（それぞれ１：２）のＣＤスペクトルである。 図６〜２０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０〜ＤＰ−０６４（それぞれ１：２）のＣＤスペクトルである。 図６〜２０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０〜ＤＰ−０６４（それぞれ１：２）のＣＤスペクトルである。 図６〜２０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０〜ＤＰ−０６４（それぞれ１：２）のＣＤスペクトルである。 図２１〜３０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０、５１、５２、５６〜６１、及びＤＰ−０６４（それぞれ１：０．１、１：１、１：２，１：５）のＣＤスペクトルである。 図２１〜３０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０、５１、５２、５６〜６１、及びＤＰ−０６４（それぞれ１：０．１、１：１、１：２，１：５）のＣＤスペクトルである。 図２１〜３０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０、５１、５２、５６〜６１、及びＤＰ−０６４（それぞれ１：０．１、１：１、１：２，１：５）のＣＤスペクトルである。 図２１〜３０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０、５１、５２、５６〜６１、及びＤＰ−０６４（それぞれ１：０．１、１：１、１：２，１：５）のＣＤスペクトルである。 図２１〜３０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０、５１、５２、５６〜６１、及びＤＰ−０６４（それぞれ１：０．１、１：１、１：２，１：５）のＣＤスペクトルである。 図２１〜３０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０、５１、５２、５６〜６１、及びＤＰ−０６４（それぞれ１：０．１、１：１、１：２，１：５）のＣＤスペクトルである。 図２１〜３０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０、５１、５２、５６〜６１、及びＤＰ−０６４（それぞれ１：０．１、１：１、１：２，１：５）のＣＤスペクトルである。 図２１〜３０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０、５１、５２、５６〜６１、及びＤＰ−０６４（それぞれ１：０．１、１：１、１：２，１：５）のＣＤスペクトルである。 図２１〜３０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０、５１、５２、５６〜６１、及びＤＰ−０６４（それぞれ１：０．１、１：１、１：２，１：５）のＣＤスペクトルである。 図２１〜３０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０、５１、５２、５６〜６１、及びＤＰ−０６４（それぞれ１：０．１、１：１、１：２，１：５）のＣＤスペクトルである。 図３１は、ＤＰ−５０〜ＤＰ−０６４の（１：２）でのＣＤ分光法結果の要約である。 図３２は、ＤＰ−５０、５１、５２、５６〜６１、及びＤＰ−０６４についての（１：０．１、１：１、１：２，１：５）でのＣＤ分光法結果の要約である。 図３３は、Ａβ４２＋／−ＤＰ５０〜６４の（１：０．１、１：１、１：２、１：５）でのＴｈｉｏ Ｔの要約である。 図３４は、ＤＰ−０１〜ＤＰ−０６４（１：２）のＣＤ要約である。 図３５は、ＩＡｂ５．（ＬＰ−０２５）（１：２）と比較した、ＤＰ１〜６４より選択した１１のペプチドのＣＤ要約である。 図３６は、ＤＰ１〜６４（１：２）より選択した１１のペプチドのＴｈｉｏ Ｔ要約である。 図３７〜４１は、Ａβ４２＋ポリリジン及びＤＰ−０６５〜ＤＰ−０７２の（１：２）でのＣＤスペクトルである。 図３７〜４１は、Ａβ４２＋ポリリジン及びＤＰ−０６５〜ＤＰ−０７２の（１：２）でのＣＤスペクトルである。 図３７〜４１は、Ａβ４２＋ポリリジン及びＤＰ−０６５〜ＤＰ−０７２の（１：２）でのＣＤスペクトルである。 図３７〜４１は、Ａβ４２＋ポリリジン及びＤＰ−０６５〜ＤＰ−０７２の（１：２）でのＣＤスペクトルである。 図３７〜４１は、Ａβ４２＋ポリリジン及びＤＰ−０６５〜ＤＰ−０７２の（１：２）でのＣＤスペクトルである。 図４２〜４９は、Ａβ４２＋ＤＰ−０６５〜ＤＰ−０７２の（１：０．１、１：１、１：２、１：５）でのＣＤスペクトルである。 図４２〜４９は、Ａβ４２＋ＤＰ−０６５〜ＤＰ−０７２の（１：０．１、１：１、１：２、１：５）でのＣＤスペクトルである。 図４２〜４９は、Ａβ４２＋ＤＰ−０６５〜ＤＰ−０７２の（１：０．１、１：１、１：２、１：５）でのＣＤスペクトルである。 図４２〜４９は、Ａβ４２＋ＤＰ−０６５〜ＤＰ−０７２の（１：０．１、１：１、１：２、１：５）でのＣＤスペクトルである。 図４２〜４９は、Ａβ４２＋ＤＰ−０６５〜ＤＰ−０７２の（１：０．１、１：１、１：２、１：５）でのＣＤスペクトルである。 図４２〜４９は、Ａβ４２＋ＤＰ−０６５〜ＤＰ−０７２の（１：０．１、１：１、１：２、１：５）でのＣＤスペクトルである。 図４２〜４９は、Ａβ４２＋ＤＰ−０６５〜ＤＰ−０７２の（１：０．１、１：１、１：２、１：５）でのＣＤスペクトルである。 図４２〜４９は、Ａβ４２＋ＤＰ−０６５〜ＤＰ−０７２の（１：０．１、１：１、１：２、１：５）でのＣＤスペクトルである。 図５０は、Ａβ４２＋／−ＤＰ−０６５〜ＤＰ−０７２の用量応答ＣＤの要約である。 図５１は、Ａβ４２＋／−ＤＰ６５〜７２（１：０．１、１：１、１：２、１：５）及びポリリジンのＴｈｉｏ Ｔの要約である。 図５２は、６５〜７２を順位付けるＴｈｉｏ Ｔの要約である。 図５３Ａは、Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対する０．２ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７３の効果を示すＣＤスペクトルである（即ち、Ａβ４２＋／−ＤＰ−０７３）。図５３Ｂは、Ａβ４２又はＤＰ−０７３のみのＣＤスペクトルを示す。 図５４Ａは、Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対する０．２ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７４の効果を示すＣＤスペクトルである（即ち、Ａβ４２＋／−ＤＰ−０７４）。図５４Ｂは、Ａβ４２又はＤＰ−０７４のみのＣＤスペクトルを示す。 図５５Ａは、Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対する０．２ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７５の効果を示すＣＤスペクトルである（即ち、Ａβ４２＋／−ＤＰ−０７５）。図５５Ｂは、Ａβ４２又はＤＰ−０７５のみのＣＤスペクトルを示す。 図５６Ａは、Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対する０．２ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７６の効果を示すＣＤスペクトルである（即ち、Ａβ４２＋／−ＤＰ−０７６）。図５６Ｂは、Ａβ４２又はＤＰ−０７６のみのＣＤスペクトルを示す。 図５７Ａは、Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対する０．２ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７７の効果を示すＣＤスペクトルである（即ち、Ａβ４２＋／−ＤＰ−０７７）。図５７Ｂは、Ａβ４２又はＤＰ−０７７のみのＣＤスペクトルを示す。 図５８Ａは、Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対する０．２ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７８の効果を示すＣＤスペクトルである（即ち、Ａβ４２＋／−ＤＰ−０７８）。図５８Ｂは、Ａβ４２又はＤＰ−０７８のみのＣＤスペクトルを示す。 図５９Ａは、Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対する０．２ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７９の効果を示すＣＤスペクトルである（即ち、Ａβ４２＋／−ＤＰ−０７９）。図５９Ｂは、Ａβ４２又はＤＰ−０７９のみのＣＤスペクトルを示す。 図６０Ａは、Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対する０．２ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０８０の効果を示すＣＤスペクトルである（即ち、Ａβ４２＋／−ＤＰ−０８０）。図６０Ｂは、Ａβ４２又はＤＰ−０８０のみのＣＤスペクトルを示す。 図６１Ａは、Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対する０．２ｍｇ／ｍｌのペプチドＬＰ−０８１の効果を示すＣＤスペクトルである（即ち、Ａβ４２＋／−ＬＰ−０８１）。図６１Ｂは、Ａβ４２又はＬＰ−０８１のみのＣＤスペクトルを示す。 図６２は、ＣＤにより評価される、２５μＭ Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対する０．２ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０６５〜ＬＰ−０８１、及びポリリジンの効果の要約比較を示すグラフである。示すのは、βシート二次構造に関連したシグナルを表す、ｙ軸の２１８ｎｍでのＡβ４２のモル残留楕円率（molar residue ellipticity）である。Ａβ４２原線維のみのシグナルに比較した、２１８ｎｍでの楕円率の損失は、βシート二次構造を抑制するペプチドの能力を示す。 図６３Ａは、Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対するペプチドＤＰ−０７３の用量依存的な効果を示すＣＤスペクトルである（即ち、Ａβ４２＋／−ＤＰ−０７３）。図６３Ｂは、Ａβ４２又はＤＰ−０７３のみのＣＤスペクトルを示す。 図６４Ａは、Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対するペプチドＤＰ−０７４の用量依存的な効果を示すＣＤスペクトルである（即ち、Ａβ４２＋／−ＤＰ−０７４）。図６４Ｂは、Ａβ４２又はＤＰ−０７４のみのＣＤスペクトルを示す。 図６５Ａは、Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対するペプチドＤＰ−０７５の用量依存的な効果を示すＣＤスペクトルである（即ち、Ａβ４２＋／−ＤＰ−０７５）。図６５Ｂは、Ａβ４２又はＤＰ−０７５のみのＣＤスペクトルを示す。 図６６Ａは、Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対するペプチドＤＰ−０７６の用量依存的な効果を示すＣＤスペクトルである（即ち、Ａβ４２＋／−ＤＰ−０７６）。図６６Ｂは、Ａβ４２又はＤＰ−０７６のみのＣＤスペクトルを示す。 図６７Ａは、Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対するペプチドＤＰ−０７７の用量依存的な効果を示すＣＤスペクトルである（即ち、Ａβ４２＋／−ＤＰ−０７７）。図６７Ｂは、Ａβ４２又はＤＰ−０７７のみのＣＤスペクトルを示す。 図６８Ａは、Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対するペプチドＤＰ−０７８の用量依存的な効果を示すＣＤスペクトルである（即ち、Ａβ４２＋／−ＤＰ−０７８）。図６８Ｂは、Ａβ４２又はＤＰ−０７８のみのＣＤスペクトルを示す。 図６９Ａは、Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対するペプチドＤＰ−０７９の用量依存的な効果を示すＣＤスペクトルである（即ち、Ａβ４２＋／−ＤＰ−０７９）。図６９Ｂは、Ａβ４２又はＤＰ−０７９のみのＣＤスペクトルを示す。 図７０Ａは、Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対するペプチドＤＰ−０８０の用量依存的な効果を示すＣＤスペクトルである（即ち、Ａβ４２＋／−ＤＰ−０８０）。図７０Ｂは、Ａβ４２又はＤＰ−０８０のみのＣＤスペクトルを示す。 図７１Ａは、Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対するペプチドＬＰ−０８１の用量依存的な効果を示すＣＤスペクトルである（即ち、Ａβ４２＋／−ＬＰ−０８１）。図７１Ｂは、Ａβ４２又はＬＰ−０８１のみのＣＤスペクトルを示す。 図６２は、ＣＤにより評価される、２５μＭ Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対するペプチドＤＰ−０６５〜ＬＰ−０８１の用量依存的な効果の要約比較を示すグラフである。示すのは、βシート二次構造に逆相関するシグナルを表す、ｙ軸、４５の２１８ｎｍでのＡβ４２のモル残留楕円率である。 図７３は、ＣＤ分光偏光法により評価される、２５μＭ Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対する６〜９マーペプチドの効果の整った要約比較を示すグラフである。示すのは、βシート二次構造に逆相関するシグナルを表す、２１８ｎｍでの楕円率の損失により評価される、Ａβ４２原線維の破壊百分率である。 図７４は、チオフラビンＴフルオロメトリーにより評価される、２５μＭ Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対する６〜９マーペプチドの効果の整った要約比較を示すグラフである。示すのは、１：２のＡβ４２：６〜９マーペプチド重量比での、様々な６〜９マーペプチドによるＡβ４２原線維の破壊百分率である。 図７５は、２時間の平衡期間後の未結合ペプチドのＬＣ／ＭＳ測定により評価される、基質結合Ａβ４２に対する６〜９マーペプチドの結合効率の整った要約比較を示すグラフである。示すのは、２時間のインキュベーション後にＡβ４２原線維へ未結合の様々な６〜９マーペプチドの百分率である。 図７６は、ＬＣ／ＭＳにより評価される、３２時間インキュベーション期間内でのヒト血清におけるペプチドＬＰ−０１９（陰性対照）の安定性の不足を明示するグラフである。 図７７は、ＬＣ／ＭＳにより評価される、３２時間インキュベーション期間内でのヒト血清におけるペプチドＤＰ−０６８の安定性を明示するグラフである。 図７８は、ＬＣ／ＭＳにより評価される、３２時間インキュベーション期間内でのヒト血清におけるペプチドＤＰ−０６９の安定性を明示するグラフである。 図７９は、ＬＣ／ＭＳにより評価される、３２時間インキュベーション期間内でのヒト血清におけるペプチドＤＰ−０７４の安定性を明示するグラフである。 図８０は、ＬＣ／ＭＳにより評価される、３２時間インキュベーション期間内でのヒト血清におけるペプチドＤＰ−０７６の安定性を明示するグラフである。 図７７は、ＬＣ／ＭＳにより評価される、３２時間インキュベーション期間内でのヒト血清におけるペプチドＤＰ−０８０の安定性を明示するグラフである。

実施例１
ペプチドの製造
本明細書に開示するペプチドは、Ｌ及びＤ−アミノ酸の両方の型で生成した。さらに、アルツハイマー病と関連障害におけるＡβ原線維形成の治療用の潜在的な治療ペプチドとしての使用のために、先端切断（truncated）ペプチドとペプチド類似体を組み立てた。これらのペプチドは、好ましくは慣用的に合成する。例えば、Ｌ及びＤ−ペプチドは、当業者に知られた、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ Ｍｏｄｅｌ ３９６多重ペプチド合成機（ケンタッキー州ルイスビル）のようなペプチド合成機で、製造業者により０．０２５ミリモルスケール合成用に確立された自動化プロトコールを使用して合成した。４倍過剰の２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＨＢＴＵ）／Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）／ＨＯＢｔ／ＦＭＯＣ−ＡＡを３０分間、続いて４倍過剰のＤＩＣ／ＨＯＢｔ／ＦＭＯＣ−ＡＡを４５分間使用するすべてのサイクルで二重カップリングを実施した。

次いで、ペプチドを脱保護して、ＴＦＡ／水（９５％／５％）で３時間の処理により樹脂より外してから、冷エーテルで沈殿させた。次いで、生じる固形物を遠心分離（２４００ｒｐｍｘ１０分）によりペレットにして、エーテルを捨てた。次いで、固形物をエーテルに再懸濁させて、二度目の再遠心分離をした後で、エーテルを再び捨てた。この固形物を１０％酢酸に溶かして、凍結乾固させた（１２アミノ酸ペプチドでは約３０ｍｇ；７アミノ酸ペプチドでは１８ｍｇ）。当業者に知られたダイオードアレイ検出器付きのＨＰ１１００シリーズのような機器を、１５％〜４０％アセトニトリル勾配を（５ｍｌ／分の流速で）８０分にわたり使用するＶｙｄａｃ Ｃ１８カラム（２１ｘ２５０ｍｍ）とともに使用する分取用ＨＰＬＣによりこの粗製ペプチドを精製した。次いで、主要な分画を採取して、分析用ＨＰＬＣを使用して純度を再分析して、単一の対称ピークをすべての波長で確かめた。構造及び配列の確定は、ＥＳＩ質量分析法により得られる分子量に対する予測分子量の比較に基づいた。上記の分析は、当業者に知られた、Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ ＩＩＩＥ三重四重極イオンスプレー質量分析計又はＥＳＩ Ａｇｉｌｅｎｔ ＭＳＤ−ＳＬのような機器を使用して実施した。１２〜１３マーペプチドは、好ましくは、他に示す場合を除いて、すべてＤ−アミノ酸を利用して、以下の配列で合成した：

さらに、ｉＡβ５（ＬＰ−０２５）及びｐｉＡβ５（ＬＰ−０８１）が含まれる、６〜９マーペプチドを以下の配列及び／又は修飾で合成した：

［ａｍｉｄｅ＝アミド；Ａｃｅｔｙｌ＝アセチル］Ｄ−は、Ｄ−アミノ酸を示し、Ｌ−は、Ｌ−アミノ酸を示す。
実施例２
ＣＤ分光偏光法により評価される、アルツハイマー原線維βシート二次構造の１２〜１３マーペプチドによる破壊
実施例１に概説した合成ペプチドの存在又は非存在下でのＡβ４２の円二色性（ＣＤ）スペクトルを、０．５ｍｍパス長さ石英キュベットを使用するＪＡＳＣＯ ８１０分光偏光計で、１９０〜２６０ｎｍの範囲にわたり２５℃で記録した。この機器は、（＋）ショウノウスルホン酸の水溶液で較正した。次いで、この機器を、５ｎｍの帯域幅、３２秒の応答時間、０．５ｎｍのデータピッチ、及び１０ｎｍ／分のスキャン速度でデータを採取するように設定した。各ＣＤスペクトルは、それぞれ別々の反復溶液より撮った、５つのスペクトルの平均であった。このＣＤ結果は、バックグラウンドの溶媒スペクトル及び／又は試験ペプチドスペクトルの控除後のＡβ４２のモル残留楕円率（ＭＲＥ）として報告した。この試験では、ＴＰＢＳＦ（１０％ ＴＦＥ，１５０ｍＭ ＮａＦ，５０ｍＭ ＨＮａＰＯ_４，ｐＨ７．４）中の原線維Ａβ４２（０．１ｍｇ／ｍｌ）を、様々な１２〜１３マーペプチドの存在及び非存在下に１：２のＡβ４２：ペプチド（重量／重量）比で、３７℃で３日間インキュベートした後で、ＣＤスペクトルを記録した。βシート構造の破壊百分率は、対応するブランク値を差し引いた後で、Ａβ４２単独と比較した２１８ｎｍでの負の楕円率の損失百分率を計算することによって決定した。

図２は、ＣＤ分光偏光法により評価される、１２〜１３マーペプチド類似体間のＡβ４２βシート二次構造の破壊剤を有効性の順位でソートして示す。やはり有効である他のペプチドは、このリストに含めない。好ましいペプチドには、図２において有効性の順位で示すように：

が含まれる。ＤＰ−００５、ＤＰ−００６、ＤＰ−００４、及びＤＰ−０１５は、原線維Ａβ４２の＞７５％破壊を示し、一方、ＤＰ−０５０、ＤＰ−０１７、及びＤＰ−００３は、Ａβ４２原線維の＞５０％破壊を示す（図２）。

実施例３
チオフラビンＴフルオロメトリーにより評価される、アルツハイマーＡβ原線維の１２〜１３マーペプチドによる破壊
実施例１に概説したように合成した様々なペプチドについて、多様な in vitro アッセイを使用して、潜在的なＡβアミロイド破壊活性を試験した。１つのそのようなアッセイである、アミロイド原線維の量を測定するチオフラビンＴフルオロメトリー（Le Vine III, Protein Sci. 2: 404-410, 1993; Amyloid: Int. J. Exp. Clin. Invest. 2: 1-6, 1995; Naiki and Nakakuki, Lab. Invest., 74: 373-383, 1996; Castillo et al, J. Neurochem. 69: 2452-2465, 1997）を使用して、Ａβ４２アミロイド原線維を破壊することが可能な合成ペプチドを同定した。これらの試験では、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２（Ｂａｃｈｅｍ Ｉｎｃ）を、単独で、又はＴＰＢＳＦ（１０％ ＴＦＥ，１５０ｍＭ ＮａＦ，５０ｍＭ ＨＮａＰＯ_４，ｐＨ７．４）中０．２ｍｇ／ｍｌのペプチド（１：２のＡβ：ペプチド重量比で）の存在下に、ミクロ遠心管において３７℃で３日間（同一３検体で）インキュベートした。３日目に、解析用に５０μｌのアリコートを取り、６２ｍＭ ＮａＰＯ_４（ｐＨ６．０）中の１２５μＭチオフラビンＴの２００μｌアリコートを加えて、１００μＭの最終チオフラビンＴ濃度と６２ｍＭのＮａＰＯ_４を得た。４８０ｎｍでの蛍光放射を、４５０ｎｍの励起波長でマイクロプレート９６ウェルフルオロメーター（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍ）において測定した。すべての定量で、チオフラビンＴ試薬の存在下でのペプチドにより放出される蛍光は、すべての関連した読取り値よりいつでも差し引いた。これまでの試験は、原線維Ａβ４２の上昇濃度は、１００μＭチオフラビンＴの存在下に蛍光の比例した増加をもたらすことを示し、このチオフラビンＴ濃度でのあらゆる不均衡な内部フィルター効果の存在を排除する（Castillo et al. J. Neurochem. 69: 2452-2465, 1997）。

図３は、有効性の順位でソートした、１２〜１３アミノ酸ペプチド類似体からのＡβ４２へ結合するチオフラビンＴの好ましい破壊剤を示す。チオフラビンＴフルオロメトリーにより定量した、有効性の順位のペプチドには、限定されないが：

が含まれる。ＤＰ−０１７とＤＰ−０１１はＡβ４２原線維の＞８０％破壊を明示し、ＤＰ−０１８とＤＰ−００７はＡβ４２原線維の＞６０％破壊を明示する。一方、ＤＰ−００１、ＤＰ−００８、ＤＰ−０５０、ＤＰ−００６、及びＤＰ−０１５は、Ａβ４２原線維の＞４０％破壊を明示する（図３）。

実施例４
ＣＤ分光偏光法により評価される、アルツハイマー原線維βシート二次構造の６〜９マーペプチドによる破壊
円二色性（ＣＤ）分光偏光法は、Ａβ原線維のβシート二次構造を破壊する所与のペプチドの有効性を決定するのに使用する別の in vitro 技術である。合成ペプチドの存在又は非存在下でのＡβ４２のＣＤスペクトルを、０．５ｍｍパス長さ石英キュベットを使用するＪＡＳＣＯ−８１０分光偏光計で、１９０〜２６０ｎｍの範囲にわたり２５℃で記録した。この機器は、（＋）ショウノウスルホン酸の水溶液で較正した。次いで、この機器を、５ｎｍの帯域幅、３２秒の応答時間、０．５ｎｍのデータピッチ、及び１０ｎｍ／分のスキャン速度でデータを採取するように設定した。各ＣＤスペクトルは、それぞれ別々の反復溶液より撮った、５つのスペクトルの平均であった。このＣＤ結果は、バックグラウンドの溶媒スペクトル及び／又は試験ペプチドスペクトルの控除後のＡβ４２のモル残留楕円率（ＭＲＥ）として報告した。この試験では、ＴＰＢＳＦ（１０％ ＴＦＥ，１５０ｍＭ ＮａＦ，５０ｍＭ ＨＮａＰＯ_４，ｐＨ７．４）中の原線維Ａβ４２（０．１ｍｇ／ｍｌ）を、様々なペプチドの存在及び非存在下に１：２のＡβ４２：ペプチド（重量／重量）比で、３７℃で３日間インキュベートした後で、ＣＤスペクトルを記録した。βシート構造の破壊百分率は、対応するブランク値を差し引いた後で、Ａβ４２単独と比較した２１８ｎｍでの負の楕円率の損失百分率を計算することによって決定した。

図７３は、ＣＤ分光測定法により評価される有効性の順位でソートした、６〜９マーペプチド及び類似体からのＡβ４２のβシート構造の破壊剤を示す。好ましいペプチドには、有効性の順位で、限定されないが：

［ａｍｉｄｅ＝アミド：Ａｃｅｔｙｌ＝アセチル］が含まれる。ＤＰ−０８０、ＤＰ−０７４、ＤＰ−０７２、ＤＰ−０７３、ＤＰ−０６９、ＤＰ−０７９、ＤＰ−０７６、ＤＰ−０５１、ＤＰ−０７１、及びＤＰ−０７５が、いずれもＡβ４２のβシート構造の＞６０％破壊を明示するのに対して、ＤＰ−６８は、Ａβ４２のβシート構造の＞９０％破壊を明示する（図７３）。

実施例５
チオフラビンＴフルオロメトリーにより評価される、アルツハイマーＡβ原線維の６〜９マーペプチドによる破壊
アミロイド原線維の量を測定するチオフラビンＴフルオロメトリー（Le Vine III, Protein Sci. 2: 404-410, 1993; Amyloid: Int. J. Exp. Clin. Invest. 2: 1-6, 1995; Naiki and Nakakuki, Lab. Invest., 74: 373-383, 1996; Castillo et al, J. Neurochem. 69: 2452-2465, 1997）も使用して、Ａβ４２アミロイド原線維を破壊することに関する６〜９マーペプチドの有効性を決定した。これらの試験では、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２（Ｂａｃｈｅｍ Ｉｎｃ）を、単独で、又はＴＰＢＳＦ（１０％ ＴＦＥ，１５０ｍＭ ＮａＦ，５０ｍＭ ＨＮａＰＯ_４，ｐＨ７．４）中０．２ｍｇ／ｍｌのペプチド（１：２のＡβ：ペプチド重量比で）の存在下に、ミクロ遠心管において３７℃で３日間（同一３検体で）インキュベートした。３日目に、解析用に５０μｌのアリコートを取り、６２ｍＭ ＮａＰＯ_４（ｐＨ６．０）中の１２５μＭチオフラビンＴの２００μｌアリコートを加えて、１００μＭの最終チオフラビンＴ濃度と６２ｍＭのＮａＰＯ_４を得た。４８０ｎｍでの蛍光放射を、４５０ｎｍの励起波長でマイクロプレート９６ウェルフルオロメーター（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍ）において測定した。すべての定量で、チオフラビンＴ試薬の存在下でのペプチドにより放出される蛍光は、すべての関連した読取り値よりいつでも差し引いた。これまでの試験は、原線維Ａβ４２の上昇濃度は、１００μＭチオフラビンＴの存在下に蛍光の比例した増加をもたらすことを示し、このチオフラビンＴ濃度でのあらゆる不均衡な内部フィルター効果の存在を排除する（Castillo et al. J. Neurochem. 69: 2452-2465, 1997）。

図７４は、有効性の順位でソートした、６〜９マーペプチド及び類似体からのＡβ４２へ結合するチオフラビンＴの破壊剤を示す。チオフラビンＴフルオロメトリーにより定量した、有効性の順位のペプチドには、限定されないが：

［ａｍｉｄｅ＝アミド：Ａｃｅｔｙｌ＝アセチル］が含まれる。ＤＰ−０７８とＤＰ−０７５がＡβ４２原線維の＞５０％阻害／破壊を明示したのに対し、ＤＰ−０８０、ＤＰ−０７３、ＤＰ−０７４、ＤＰ−０７９、ＤＰ−０７６、及びＤＰ−０５１は、いずれもＡβ４２原線維の＞７５％阻害／破壊を明示した。

実施例６
６〜９マーペプチドのアルツハイマーＡβ４２原線維への結合
基質結合Ａβ４２へ結合する様々なペプチドの能力を、質量選択検出器付属の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ／ＭＳＤ；Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣシステム）を使用して、未結合ペプチド分画の決定とともに、固相結合アッセイにより決定した。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ製のＳｙｎｅｒｇｉ−Ｍａｘ ＲＰ（２ｘ０．４ｃｍ；２μｍ）カラムを１ｍｌ／分の流速と、１％ギ酸を含有する水中０〜６０％アセトニトリルの勾配で５．５分にわたり使用するＨＰＬＣにおいてペプチドを分割した。ペプチドは、ＭＳＤ ＳＬ（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用するカラムより流出するときに検出した。ＭＳＤは、以下のように設定した：２００〜１２００Ｄａのスキャン形式での陽イオンモニタリング；切断電圧、１５０；乾燥気体フロー、１３Ｌ／分のＮ_２；ネブライザー圧、４５ｐｓｉ；乾燥気体温度、３５０℃；及びキャピラリー電圧、３５００ボルト。

固相結合アッセイは、以下のように実施した：製造業者の使用説明書に従って、Ａβ４２の１０μｇアリコートを９６ウェルマイクロプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅより入手可能）の底でＰＶＤＦ膜へ結合した。このプレートを乾燥させて、０．１ｍｇ／ｍｌの６〜９マーペプチドの１５０μｌのアリコートを各ウェルに適用した。それぞれの６〜９マーペプチドをＡβ４２含有ウェル（試験ウェル）に同一３検体で、そして非Ａβ４２含有ウェル（ブランクウェル）に同一３検体で適用した。１６の異なる６〜９マーペプチドを含有するプレートを３７℃で２時間インキュベートした。次いで、各ウェル中の未結合ペプチドを、上記に概説した設定の分析用ＨＰＬＣ／ＭＳＤバイアルへ移した。Ａβ４２無しのウェルより回収したペプチドをペプチド全体とみなして、一方、Ａβ４２入りのウェルより回収したペプチドを全結合ペプチドとみなした。次いで、２時間のインキュベーション後に結合した様々なペプチドの百分率をプロットした（図７５）。

図７５は、有効性の順位でソートした、６〜９マーペプチド及び類似体からのＡβ４２の結合剤を示す。好ましいペプチドには、有効性の順位で、限定されないが：

［ａｍｉｄｅ＝アミド；Ａｃｅｔｙｌ＝アセチル］
が含まれる。ＤＰ−０３６とＤＰ−０６６は、基質結合性Ａβ４２に対する＞４０％結合を明示したが、ＤＰ−０６４とＤＰ−０８０は＞３０％結合を明示して、ＤＰ−０７２とＤＰ−０７３は＞２０％結合を明示した（図７５）。

実施例７
ＣＤ分光偏光法により評価される、アルツハイマー原線維βシート二次構造の６〜９マーペプチドによる破壊
円二色性（ＣＤ）分光偏光法は、Ａβ原線維のβシート二次構造を破壊する所与のペプチドの有効性を決定するのに使用する別の in vitro 技術である。合成６〜９マーペプチドの存在又は非存在下でのＡβ４２のＣＤスペクトルを、０．５ｍｍパス長さ石英キュベットを使用するＪＡＳＣＯ−８１０分光偏光計で、１９０〜２６０ｎｍの範囲にわたり２５℃で記録した。この機器は、（＋）ショウノウスルホン酸の水溶液で較正した。次いで、この機器を、５ｎｍの帯域幅、３２秒の応答時間、０．５ｎｍのデータピッチ、及び１０ｎｍ／分のスキャン速度でデータを採取するように設定した。各ＣＤスペクトルは、それぞれ別々の反復溶液より撮った、５つのスペクトルの平均であった。このＣＤ結果は、バックグラウンドの溶媒スペクトル及び／又は試験ペプチドスペクトルの控除後のＡβ４２のモル残留楕円率（ＭＲＥ）として報告した。この試験では、ＴＰＢＳＦ（１０％ ＴＦＥ，１５０ｍＭ ＮａＦ，５０ｍＭ ＨＮａＰＯ_４，ｐＨ７．４）中の原線維Ａβ４２（０．１ｍｇ／ｍｌ）を、様々な６〜９マーペプチドの存在及び非存在下に１：２のＡβ４２：ペプチド（重量／重量）比で、３７℃で３日間インキュベートした後で、ＣＤスペクトルを記録した。

Ａβ４２単独、Ａβ４２＋６〜９マーペプチド、及び６〜９マーペプチド単独のＣＤスペクトルを図５１〜６１に提示して、全体の要約を図６２に提示する。
図５３Ａは、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（実線）。２１８ｎｍでの負の楕円率と１９５ｎｍでの正の楕円率は、いずれもβシート二次構造の存在を示す。図５３Ａにはまた、０．２ｍｇ／ｍｌのＤＰ−０７３の存在下にある０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後の、ペプチドＤＰ−０７３のスペクトルで補正したＣＤスペクトルがある（点線）。２１８ｎｍでの負の楕円率の、ＤＰ−０７３の存在下での有意な損失は、Ａβ４２におけるβシート構造の損失を示す。図５３Ｂは、正の楕円率と２００ｎｍでの最大値がある、０．２ｍｇ／ｍｌのＤＰ−０７３単独のＣＤスペクトルを示し（点線）、βシート構造をほとんど含有しないアミノ酸ペプチドと一致した逆（inverted）ランダムコイルを示す。図５３Ｂにはまた、比較用に、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（実線）。

図５４Ａは、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（実線）。２１８ｎｍでの負の楕円率と１９５ｎｍでの正の楕円率は、いずれもβシート二次構造の存在を示す。図５４Ａにはまた、０．２ｍｇ／ｍｌのＤＰ−０７４の存在下にある０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後の、ペプチドＤＰ−０７４のスペクトルで補正したＣＤスペクトルがある（点線）。２１８ｎｍでの負の楕円率の、ＤＰ−０７４の存在下での有意な損失は、Ａβ４２におけるβシート構造の損失を示す。図５４Ｂは、正の楕円率と２００ｎｍ付近の最大値がある、０．２ｍｇ／ｍｌのＤＰ−０７４単独のＣＤスペクトルを示し（点線）、βシート構造がほとんどないアミノ酸ペプチドと一致した逆ランダムコイルを示す。図５４Ｂにはまた、比較用に、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（実線）。

図５５Ａは、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（実線）。２１８ｎｍでの負の楕円率と１９５ｎｍでの正の楕円率は、いずれもβシート二次構造の存在を示す。図５５Ａにはまた、０．２ｍｇ／ｍｌのＤＰ−０７５の存在下にある０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルがある（点線）。２１８ｎｍでの負の楕円率の、ＤＰ−０７５の存在下での有意な損失は、Ａβ４２におけるβシート構造の損失を示す。図５５Ｂは、正の楕円率と２００ｎｍでの最大値がある、０．２ｍｇ／ｍｌのＤＰ−０７５単独のＣＤスペクトルを示し（点線）、βシート構造をほとんど含有しないアミノ酸ペプチドと一致した逆ランダムコイルを示す。図５５Ｂにはまた、比較用に、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（実線）。

図５６Ａは、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（実線）。２１８ｎｍでの負の楕円率と１９５ｎｍでの正の楕円率は、いずれもＡβ４２におけるβシート二次構造の存在を示す。図５６Ａにはまた、０．２ｍｇ／ｍｌのＤＰ−０７６の存在下にある０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルがある（点線）。２１８ｎｍでの負の楕円率の、ＤＰ−０７６の存在下での有意な損失は、Ａβ４２におけるβシート構造の損失を示す。図５６Ｂは、正の楕円率と２００ｎｍでの最大値がある、０．２ｍｇ／ｍｌのＤＰ−０７６単独のＣＤスペクトルを示し（点線）、βシート構造をほとんど含有しないアミノ酸ペプチドと一致した逆ランダムコイルを示す。図５６Ｂにはまた、比較用に、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（実線）。

図５７Ａは、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（実線）。２１８ｎｍでの負の楕円率と１９５ｎｍでの正の楕円率は、いずれもＡβ４２におけるβシート二次構造の存在を示す。図５７Ａにはまた、０．２ｍｇ／ｍｌのＤＰ−０７７の存在下にある０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルがある（点線）。２１８ｎｍでの負の楕円率の、ＤＰ−０７７の存在下でのわずかな損失は、Ａβ４２におけるβシート構造のごくわずかな損失を示す。図５７Ｂは、正の楕円率と２００ｎｍでの最大値がある、０．２ｍｇ／ｍｌのＤＰ−０７７単独のＣＤスペクトルを示し（点線）、βシート構造をほとんど含有しないアミノ酸ペプチドと一致した逆ランダムコイルを示す。図５７Ｂにはまた、比較用に、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（実線）。

図５８Ａは、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（実線）。２１８ｎｍでの負の楕円率と１９５ｎｍでの正の楕円率は、いずれもＡβ４２におけるβシート二次構造の存在を示す。図５８Ａにはまた、０．２ｍｇ／ｍｌのＤＰ−０７８の存在下にある０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルがある（点線）。２１８ｎｍでの負の楕円率の、ＤＰ−０７８の存在下での有意な損失は、Ａβ４２におけるβシート構造の損失を示す。図５８Ｂは、正の楕円率と約２００ｎｍでの最大値がある、０．２ｍｇ／ｍｌのＤＰ−０７８単独のＣＤスペクトルを示し（点線）、βシート構造をほとんど含有しないアミノ酸ペプチドと一致した逆ランダムコイルを示す。図５８Ｂにはまた、比較用に、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（実線）。

図５９Ａは、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（実線）。２１８ｎｍでの負の楕円率と１９５ｎｍでの正の楕円率は、いずれもＡβ４２におけるβシート二次構造の存在を示す。図５９Ａにはまた、０．２ｍｇ／ｍｌのＤＰ−０７９の存在下にある０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルがある（点線）。２１８ｎｍでの負の楕円率の、ＤＰ−０７９の存在下での有意な損失は、Ａβ４２におけるβシート構造の損失を示す。しかしながら、最小値の２１８ｎｍから２２５ｎｍへのシフトは予期されないので、２１８ｎｍでの楕円率の損失は、βシート構造の損失だけによるのではないかもしれない。図５９Ｂは、正の楕円率と２２５ｎｍでの最大値と２００ｎｍでの最小値がある、０．２ｍｇ／ｍｌのＤＰ−０７９単独のＣＤスペクトルを示し（点線）、βシート構造のあるアミノ酸ペプチドと一致した逆βシートを示す。しかしながら、２２５ｎｍでの最大値は、架橋連結性又はジスルフィド結合性のタンパク質を想起させる構造を示す。図５９Ｂにはまた、比較用に、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（実線）。

図６０Ａは、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（実線）。２１８ｎｍでの負の楕円率と１９５ｎｍでの正の楕円率は、いずれもＡβ４２におけるβシート二次構造の存在を示す。図６０Ａにはまた、０．２ｍｇ／ｍｌのＤＰ−０８０の存在下にある０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルがある（点線）。２１８ｎｍでの負の楕円率の、ＤＰ−０８０の存在下での有意な損失は、Ａβ４２におけるβシート構造の損失を示す。図６０Ｂは、正の楕円率と約１９５ｎｍでの最大値がある、０．２ｍｇ／ｍｌのＤＰ−０８０単独のＣＤスペクトルを示し（点線）、βシート構造をほとんど含有しないアミノ酸ペプチドと一致した逆ランダムコイルを示す。図６０Ｂにはまた、比較用に、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（実線）。

図６１Ａは、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（実線）。２１８ｎｍでの負の楕円率と１９５ｎｍでの正の楕円率は、いずれもＡβ４２におけるβシート二次構造の存在を示す。図６１Ａにはまた、０．２ｍｇ／ｍｌのＬＰ−０８１の存在下にある０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルがある（点線）。２１８ｎｍでの負の楕円率の、ＬＰ−０８１の存在下での有意な増加は、Ａβ４２におけるβシート構造の増加を示す。図６１Ｂは、負の楕円率と約２００ｎｍでの最大値がある、０．２ｍｇ／ｍｌのＬＰ−０８１単独のＣＤスペクトルを示し（点線）、Ｌ−ペプチドのランダムコイル構造を示す。図６１Ｂにはまた、比較用に、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（実線）。ＬＰ−０８１は、文献に以前報告されたβシート破壊（breaker）ペプチドであることに留意されたい（Permanne et al, FASEB J. Published online April 10, 2002; Soto-Jara et al, 米国特許第５，９４８，７６３号、１９９９年９月７日；Soto-Jara, ＰＣＴ ＷＯ０１／３４６３１ Ａ２ ２００１年５月１７日）。

図６２は、０．２ｍｇ／ｍｌの様々な６〜９マーペプチドの存在下にある０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の、３日のインキュベーション後と様々なペプチドのＣＤ楕円率で補正後の２１８ｎｍでのＣＤ楕円率を示す。ここで試験したペプチドは、ＤＰ−０６５〜ＬＰ−０８１とポリリジンである。ペプチドＤＰ−０６５、ＤＰ−０６７、及びＬＰ−０８１が２１８ｎｍでの負の楕円率の増加を引き起こし、これらのペプチドが驚くべきことにＡβ４２のβシート構造の形成を促進することを示したことに留意されたい。様々な６〜９マーペプチドの有効性の順位付けについては図７３を参照のこと。

実施例８
ＣＤ分光偏光法により評価される、アルツハイマー原線維βシート二次構造の６〜９マーペプチドによる用量依存的な破壊
円二色性（ＣＤ）分光偏光法は、Ａβ原線維のβシート二次構造を破壊する所与のペプチドの有効性を決定するのに使用する別の in vitro 技術である。合成６〜９マーペプチドの存在又は非存在下でのＡβ４２のＣＤスペクトルを、０．５ｍｍパス長さ石英キュベットを使用するＪＡＳＣＯ−８１０分光偏光計で、１９０〜２６０ｎｍの範囲にわたり２５℃で記録した。この機器は、（＋）ショウノウスルホン酸の水溶液で較正した。次いで、この機器を、５ｎｍの帯域幅、３２秒の応答時間、０．５ｎｍのデータピッチ、及び１０ｎｍ／分のスキャン速度でデータを採取するように設定した。各ＣＤスペクトルは、それぞれ別々の反復溶液より撮った、５つのスペクトルの平均であった。このＣＤ結果は、バックグラウンドの溶媒スペクトル及び／又は試験ペプチドスペクトルの控除後のＡβ４２のモル残留楕円率（ＭＲＥ）として報告した。この試験では、ＴＰＢＳＦ（１０％ ＴＦＥ，１５０ｍＭ ＮａＦ，５０ｍＭ ＨＮａＰＯ_４，ｐＨ７．４）中の原線維Ａβ４２（０．１ｍｇ／ｍｌ）を、様々なペプチドの存在及び非存在下に１：０．１、１：１、１：２、及び１：１０のＡβ４２：ペプチド（重量／重量）比で、３７℃で３日間インキュベートした後で、ＣＤスペクトルを記録した。

Ａβ４２単独、Ａβ４２＋６〜９マーペプチド、及びペプチド単独のＣＤスペクトルを図６３〜７１に提示して、全体の要約を図７２に提示する。
図６３Ａは、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（青線）。２１８ｎｍでの負の楕円率と１９５ｎｍでの正の楕円率は、いずれもＡβ４２におけるβシート構造の存在を示す。図６３Ａにはまた、０．０１、０．１、０．２、及び０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７３の存在下にある０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後の（ペプチドＤＰ−０７３のスペクトルで補正した）ＣＤスペクトルがある。２１８ｎｍでの負の楕円率の有意な損失は、Ａβ４２におけるβシート構造の損失を示す。用量依存的な効果は、０．２ｍｇ／ｍｌ以下でのみ観察される。０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７３では、この傾向が止まって、経過を逆転させる。これは、おそらくはきわめて高い濃度の試験ペプチドにより入射光の有意な吸収を引き起こすためであろう。図６３Ｂは、正の楕円率と２００ｎｍでの最大値がある、０．０１、０．１、０．２、及び０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７３単独のＣＤスペクトルを示し、βシート構造がほとんどないＤ−アミノ酸ペプチドと一致した逆ランダムコイルを示す。しかしながら、高濃度（０．５ｍｇ／ｍｌ）では、逆βシート構造が観察される。図６３Ｂにはまた、比較用に、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（青線）。

図６４Ａは、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（青線）。２１８ｎｍでの負の楕円率と１９５ｎｍでの正の楕円率は、いずれもＡβ４２におけるβシート構造の存在を示す。図６４Ａにはまた、０．０１、０．１、０．２、及び０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７４の存在下にある０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後の（ペプチドＤＰ−０７４のスペクトルで補正した）ＣＤスペクトルがある。２１８ｎｍでの負の楕円率の有意な損失は、Ａβ４２におけるβシート構造の損失を示す。用量依存的な効果は、０．２ｍｇ／ｍｌ以下でのみ観察される。０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７４では、この傾向が止まって、経過を逆転させる。これは、おそらくはきわめて高い濃度の試験ペプチドにより入射光の有意な吸収を引き起こすためであろう。図６４Ｂは、正の楕円率とほぼ２００ｎｍでの最大値がある、０．０１、０．１、０．２、及び０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７４単独のＣＤスペクトルを示し、βシート構造がほとんどないＤ−アミノ酸ペプチドと一致した逆ランダムコイルを示す。図６４Ｂにはまた、比較用に、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（青線）。

図６５Ａは、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（青線）。２１８ｎｍでの負の楕円率と１９５ｎｍでの正の楕円率は、いずれもＡβ４２におけるβシート構造の存在を示す。図６５Ａにはまた、０．０１、０．１、０．２、及び０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７５の存在下にある０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後の（ペプチドＤＰ−０７５のスペクトルで補正した）ＣＤスペクトルがある。２１８ｎｍでの負の楕円率の有意な損失は、Ａβ４２におけるβシート構造の損失を示す。用量依存的な効果は、０．１ｍｇ／ｍｌ以下でのみ観察される。０．０１ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７５では、Ａβ４２のβシート構造が強められる。図６５Ｂは、正の楕円率とほぼ２００ｎｍでの最大値がある、０．０１、０．１、０．２、及び０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７５単独のＣＤスペクトルを示し、βシート構造がほとんどないＤ−アミノ酸ペプチドと一致した逆ランダムコイルを示す。図６５Ｂにはまた、比較用に、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（青線）。

図６６Ａは、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（青線）。２１８ｎｍでの負の楕円率と１９５ｎｍでの正の楕円率は、いずれもＡβ４２におけるβシート構造の存在を示す。図６６Ａにはまた、０．０１、０．１、０．２、及び０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７６の存在下にある０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後の（ペプチドＤＰ−０７６のスペクトルで補正した）ＣＤスペクトルがある。２１８ｎｍでの負の楕円率の有意な損失は、Ａβ４２におけるβシート構造の損失を示す。用量依存的な効果は、０．１ｍｇ／ｍｌ以下でのみ観察される。０．０１ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７６では、Ａβ４２のβシート構造が強められる。図６６Ｂは、正の楕円率とほぼ２００ｎｍでの最大値がある、０．０１、０．１、０．２、及び０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７６単独のＣＤスペクトルを示し、βシート構造がほとんどないＤ−アミノ酸ペプチドと一致した逆ランダムコイルを示す。しかしながら、０．５ｍｇ／ｍｌの濃度では、逆βシート構造の有意な形成が観察される。図６６Ｂにはまた、比較用に、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（青線）。

図６７Ａは、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（青線）。２１８ｎｍでの負の楕円率と１９５ｎｍでの正の楕円率は、いずれもＡβ４２におけるβシート構造の存在を示す。図６７Ａにはまた、０．０１、０．１、０．２、及び０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７７の存在下にある０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後の（ペプチドＤＰ−０７７のスペクトルで補正した）ＣＤスペクトルがある。２１８ｎｍでの負の楕円率の損失は、Ａβ４２におけるβシート構造の損失を示す。用量依存的な効果は、０．１ｍｇ／ｍｌ以上でのみ観察される。図６７Ｂは、正の楕円率とほぼ２００ｎｍでの最大値がある、０．０１、０．１、０．２、及び０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７７単独のＣＤスペクトルを示し、βシート構造がほとんどないＤ−アミノ酸ペプチドと一致した逆ランダムコイルを示す。図６７Ｂにはまた、比較用に、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（青線）。

図６８Ａは、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（青線）。２１８ｎｍでの負の楕円率と１９５ｎｍでの正の楕円率は、いずれもＡβ４２におけるβシート構造の存在を示す。図６８Ａにはまた、０．０１、０．１、０．２、及び０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７８の存在下にある０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後の（ペプチドＤＰ−０７８のスペクトルで補正した）ＣＤスペクトルがある。２１８ｎｍでの負の楕円率の有意な損失は、Ａβ４２におけるβシート構造の損失を示す。用量依存的な効果が観察される。図６８Ｂは、正の楕円率とほぼ２００ｎｍでの最大値がある、０．０１、０．１、０．２、及び０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７８単独のＣＤスペクトルを示し、βシート構造がほとんどないＤ−アミノ酸ペプチドと一致した逆ランダムコイルを示す。図６８Ｂにはまた、比較用に、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（青線）。

図６９Ａは、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（青線）。２１８ｎｍでの負の楕円率と１９５ｎｍでの正の楕円率は、いずれもＡβ４２におけるβシート構造の存在を示す。図６９Ａにはまた、０．０１、０．１、０．２、及び０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７９の存在下にある０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後の（ペプチドＤＰ−０７９のスペクトルで補正した）ＣＤスペクトルがある。２１８ｎｍでの負の楕円率の有意な損失は、Ａβ４２におけるβシート構造の損失を示す。しかしながら、最小値の２１８ｎｍから２２５ｎｍへのシフトは予期されないので、２１８ｎｍでの楕円率の損失は、βシート構造の損失だけによるのではないかもしれない。しかしながら、２１８ｎｍでの楕円率の損失は、用量依存的である。図６９Ｂは、正の楕円率とほぼ２２５ｎｍでの最大値と２００ｎｍでの最小値がある、０．０１、０．１、０．２、及び０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０７９単独のＣＤスペクトルを示し、βシート構造があるＤ−アミノ酸ペプチドと一致した逆βシートを示す。しかしながら、２２５ｎｍでの最大値は、メチオニン又はシスチンの欠如にもかかわらず、架橋連結性又はジスルフィド結合性のタンパク質を想起させる構造を示す。図６９Ｂにはまた、比較用に、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（青線）。

図７０Ａは、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（青線）。２１８ｎｍでの負の楕円率と１９５ｎｍでの正の楕円率は、いずれもＡβ４２におけるβシート構造の存在を示す。図７０Ａにはまた、０．０１、０．１、０．２、及び０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０８０の存在下にある０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後の（ペプチドＤＰ−０８０のスペクトルで補正した）ＣＤスペクトルがある。２１８ｎｍでの負の楕円率の用量依存的な損失があり、Ａβ４２におけるβシート構造の用量依存的な損失を示す。図７０Ｂは、正の楕円率とほぼ１９５ｎｍでの最大値がある、０．０１、０．１、０．２、及び０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＤＰ−０８０単独のＣＤスペクトルを示し、βシート構造がわずかしかないＤ−アミノ酸ペプチドと一致した逆ランダムコイルを示す。図７０Ｂにはまた、比較用に、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（青線）。

図７１Ａは、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（青線）。２１８ｎｍでの負の楕円率と１９５ｎｍでの正の楕円率は、いずれもＡβ４２におけるβシート二次構造の存在を示す。図７１Ａにはまた、０．０１、０．１、０．２、及び０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＬＰ−０８１の存在下にある０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後の（ペプチドＬＰ−０８１のスペクトルで補正した）ＣＤスペクトルがある。２１８ｎｍでの負の楕円率の有意な増加は、βシート構造の増加を示す。しかしながら、用量依存的な効果は観察されない。図７１Ｂは、正の楕円率とほぼ２００ｎｍでの最大値がある、０．０１、０．１、０．２、及び０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドＬＰ−０８１単独のＣＤスペクトルを示し、Ｌ−ペプチドのランダムコイル構造を示す。図７１Ｂにはまた、比較用に、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ４２の３日のインキュベーション後のＣＤスペクトルを示す（青線）。ＬＰ−０８１は、文献に以前報告されたβシート破壊ペプチドであることに留意されたい（Permanne et al, FASEB J. Published online April 10, 2002; Soto-Jara et al, 米国特許第５，９４８，７６３号、１９９９年９月７日；Soto-Jara, ＰＣＴ ＷＯ０１／３４６３１ Ａ２ ２００１年５月１７日）。図７２は、上記に詳しく考察したように、増加量のＤＰ−０６５〜ＤＰ−０８０とＬＰ−０８１の存在下でのＡβ４２のＣＤスペクトルを示して、そのデータの要約を表す。

実施例９
ペプチドのヒト血清における安定性
潜在的な治療用又は医薬候補品の望ましい特性は、血中の酵素による分解に抵抗し、その標的に達する十分な時間を有する能力である。配列群Ａ、Ｂ、又はＣのペプチドの安定性を決定するために使用する in vitro アッセイの１つは、これらのペプチドをヒト血清においてインキュベートして、インタクトなペプチド（とあり得る分解）のレベルを様々な時点で決定することによる。様々なペプチドの５０μｌアリコートを７００μｌのヒト血清へ（同一３検体の試料で）加えた。次いで、１００μｌのアリコートを０、２、４、６、２４、及び３２時間で取ってから、直ちに２００μｌのエタノール（又は２０μｌのトリフルオロ酢酸又は３００μｌのメタノール）を加えて、１４，０００ｘｇ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）で１０分間遠心分離した。次いで、ＬＣ／ＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＰＬＣ／ＭＳ ＳＬ１１００シリーズ）を使用して、上清中のインタクトペプチドのレベルを定量した。１価、２価、及び３価の電荷ペプチドイオンに対応する質量でのＳＩＭモード陽イオンモニタリングを使用して、ＨＰＬＣから流出するときに各ペプチドをＭＳによりモニタリングした。生じるイオンクロマトグラム中のピークを積分して、各試料中の全体イオン存在度を得た。次いで、それぞれの血清インキュベーション時点での全体イオン存在度の同一３検体定量の平均を血清インキュベーション時間の関数としてプロットした。体内のほとんどのペプチド分解酵素は、すべてＬ−アミノ酸より構成される天然ペプチドを認識する。本ペプチドはＤ−アミノ酸からなるので、生体液中のその分解は、本実施例と以下の図に明示されるように、遅延される可能性がある。

図７６は、３２時間のインキュベーション時間にわたる時間を関数とした、ペプチドＬＰ−０１９のヒト血清におけるレベルを示す。ペプチドＬＰ−０１９はすべてＬ−アミノ酸からなり、図７６に示すように、それは血清において１時間未満のうちに速やかに分解される。

図７７は、３２時間のインキュベーション時間にわたる時間を関数とした、ペプチドＤＰ−０６８のヒト血清におけるレベルを示す。ペプチドＤＰ−０６８はすべてＤ−アミノ酸からなり、図７７に示すように、それは血清において３２時間までと３２時間を含めて分解に抵抗する。

図７８は、３２時間のインキュベーション時間にわたる時間を関数とした、ペプチドＤＰ−０６９のヒト血清におけるレベルを示す。ペプチドＤＰ−０６９はすべてＤ−アミノ酸からなり、図７８に示すように、それは血清において３２時間までと３２時間を含めて分解に抵抗する。

図７９は、３２時間のインキュベーション時間にわたる時間を関数とした、ペプチドＤＰ−０７４のヒト血清におけるレベルを示す。ペプチドＤＰ−０７４はすべてＤ−アミノ酸からなり、図７９に示すように、それは血清において３２時間までと３２時間を含めて分解に抵抗する。

図８０は、３２時間のインキュベーション時間にわたる時間を関数とした、ペプチドＤＰ−０７６のヒト血清におけるレベルを示す。ペプチドＤＰ−０７６はすべてＤ−アミノ酸からなり、図８０に示すように、それは血清において３２時間までと３２時間を含めて分解に抵抗する。

図８１は、３２時間のインキュベーション時間にわたる時間を関数とした、ペプチドＤＰ−０８０のヒト血清におけるレベルを示す。ペプチドＤＰ−０８０はすべてＤ−アミノ酸からなり、図８１に示すように、それは血清において３２時間までと３２時間を含めて分解に抵抗する。

さらなるデータを以下のように例示する：
図１ａ〜ｋは、５〜１３マーのペプチド、ＤＰ１−１８、ＬＰ１９−２５、ＤＰ２６−８０、及びＬＰ８１のペプチド配列及び図面である。

図２は、円二色性（ＣＤ）分光偏光法により評価される、２５μＭ Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対する様々な１２〜１３マーペプチドの効果の整った要約比較を示すグラフである。示すのは、βシート二次構造に逆相関するシグナルを表す、２１８ｎｍでの楕円率の損失により評価される、Ａβ４２原線維の破壊百分率である。図３は、チオフラビンＴフルオロメトリーにより評価される、２５μＭ Ａβ４２アミロイド原線維のβシート二次構造に対する１２〜１３マーペプチドの効果の整った要約比較を示すグラフである。示すのは、１：２のＡβ４２：１２〜１３マーペプチド重量比での、様々な１２〜１３マーペプチドによるＡβ４２原線維の破壊百分率である。

図４は、ＤＰ−０４９までのすべてのペプチドのＣＤ分光法の結果の要約である。図５は、ペプチドＬＰ−０２５とＤＰ−０２６〜０４９についてのＡβ４２結合の要約である。

図６〜２０は、Ａβｂ４２＋ＤＰ−５０〜ＤＰ−０６４の、それぞれ（１：２）のＡβ４２／ペプチド（重量／重量）濃度での全ＣＤスペクトルであり、それぞれの阻害及び破壊効力を示す。図２１〜３０は、Ａβ４２＋ＤＰ−５０、５１、５２、５６〜６１、及びＤＰ−０６４の、それぞれ（１：０．１、１：１、１：２，１：５）でのＣＤスペクトルである。

図３１は、ＤＰ−５０〜ＤＰ−０６４の（１：２）でのＣＤ分光法結果の要約であり、一方、図３２は、ＤＰ−５０、５１、５２、５６〜６１、及びＤＰ−０６４についての（１：０．１、１：１、１：２，１：５）でのＣＤ分光法結果の要約である。

図３３は、Ａβ４２＋／−ＤＰ５０〜６４の（１：０．１、１：１、１：２、１：５）でのＴｈｉｏ Ｔの要約であり；図３４は、ＤＰ−０１〜ＤＰ−０６４（１：２）のＣＤ要約であり；図３５は、ＩＡｂ５．（ＬＰ−０２５）（１：２）と比較した、ＤＰ１〜６４より選択した１１のペプチドのＣＤ要約であり；図３６は、ＤＰ１〜６４（１：２）より選択した１１のペプチドのＴｈｉｏ Ｔ要約である。

図３７〜４１は、Ａβ４２＋ポリリジン及びＤＰ−０６５〜ＤＰ−０７２の、（１：２）のＡβ４２／ペプチド（重量／重量）濃度でのでのＣＤスペクトルである。図４２〜４９は、Ａβ４２＋ＤＰ−０６５〜ＤＰ−０７２の（１：０．１、１：１、１：２、１：５）でのＣＤスペクトルであり、図５０は、Ａβ４２＋／−ＤＰ−０６５〜ＤＰ−０７２の用量応答ＣＤの要約である。

図５１は、Ａβ４２＋／−ＤＰ６５〜７２（１：０．１、１：１、１：２、１：５）及びリジンのＴｈｉｏ Ｔの要約であり、一方、図５２は、６５〜７２を順位付けるＴｈｉｏ Ｔの要約である。

さらなる側面及び利用
１つの治療上の応用は、アルツハイマー病、ダウン症候群、及びＡβ原線維形成が関与する他のアミロイド障害において、配列群Ａ、Ｂ、又はＣのペプチドをＡβの結合剤又は隔離剤（sequesters）、Ａβアミロイド原線維形成の阻害剤、Ａβアミロイド原線維沈着の阻害剤、Ａβアミロイド原線維蓄積及び／又は存続の阻害剤として使用することである。

「ペプチド」は、当業者に知られるように、ペプチド結合により一緒に連結した２以上のアミノ酸を意味する。好ましいペプチドは、本明細書に開示するものであるが、有利には、開示するペプチドに対して少なくとも７０％、そしてより好ましくは８０〜９０％の同一性を有するペプチドも含めてよい。ペプチドについてここで使用する「％同一性」は、同じ場所の同じアミノ酸を意味する。従って、２つの１０アミノ酸ペプチドは、互いへの並置により各アミノ酸の配置と同一性が１つのアミノ酸以外に同一であることが示されたならば、９０％同一である。１０アミノ酸ペプチドを別の１０アミノ酸ペプチドと並置して、アミノ酸の配置及び同一性が２つのアミノ酸以外に同一であれば、この２つの１０アミノ酸ペプチドは、互いと８０％同一性を有する。

開示するペプチドは、化学合成手順により生成する。化学ペプチド合成は当該技術分野で急速に進化している領域であり、固相ペプチド合成の方法は、参照によりそのまま本明細書に組み込まれる以下の文献に十分記載されている（Merrifield, J. Amer. Chem. Soc. 85: 2149-54, 1963; Merrifield, Science 232: 341-347, 1986; Fields, Int. J. Polypeptide Prot. Res. 35, 161, 1990）。開示するペプチドは、ヒト疾患の治療薬及び診断薬の発見のための研究試薬及び材料として利用してもよい。

投与の経路には、経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、関節内、鼻腔内、鞘内、皮内、経皮、又は吸入（による）が含まれる。アルツハイマー病や他の障害におけるＡβアミロイド症を治療するのに使用の潜在的な治療薬として本明細書に開示するペプチドのそれぞれの有効量は、単回投与につき約１μｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ体重であり、当業者は容易に決定することができる。投与量は、レシピエントの年齢、性別、健康、及び体重、（もしあれば）併用療法の種類、及び治療の頻度に依存する。他の有効な投与量範囲の上限は、１００ｍｇ／ｋｇ体重、５０ｍｇ／ｋｇ体重、２５ｍｇ／ｋｇ体重、及び１０ｍｇ／ｋｇ体重である。

本明細書に使用するように、ポリペプチドは、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、又は両型の混合物からなってよい。天然のアミノ酸は、通常、Ｌ−アミノ酸からなる。しかしながら、Ｄ−アミノ酸で置換すると、一般に、生体液（血漿のような）中のより少ない分解によるバイオアベイラビリティの亢進と、血液脳関門を通した浸透の亢進が明示される。開示するペプチド内に見出されるものと同一のアミノ酸配列を有するが、その中のＬ−アミノ酸の全部又は一部がＤ−アミノ酸で置換されたポリペプチドは、アルツハイマー病や他のＡβアミロイド症を治療するための治療薬の開示される開発品の一部である。

本明細書に使用するように、「医薬的に許容される担体」には、生理学的適合性がある、一部及び全部の溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤、等が含まれる。１つの態様において、担体は、非経口投与に適している。好ましくは、担体は、中枢神経系への投与に適している（例えば、脊髄内又は大脳内）。あるいは、担体は、静脈内、腹腔内、又は筋肉内の投与に適する場合がある。別の態様において、担体は、経口投与に適している。医薬的に許容される担体には、無菌の水溶液剤又は分散液剤と、無菌の注射可能溶液剤又は分散液剤の用時調製用の無菌散剤が含まれる。そのような媒体及び薬剤の医薬活性物質への使用は、当該技術分野でよく知られている。どの慣用の媒体又は薬剤も、活性化合物と適合可能である限りにおいて、医薬組成物におけるその使用が考慮される。補助的な活性化合物も本組成物へ取り込んでよい。

本明細書に使用するように、「Ａβアミロイド症」は、限定されないが、長さ３９〜４３のアミノ酸を含有するＡβ、但しより好ましくは、Ａβ１−４０、又はＡβ１−４２、及びこれらの混合物又は断片が含まれる、Ａβ（即ち、β−アミロイドタンパク質）の形成、沈着、蓄積、及び／又は存続が関与するアミロイド疾患を意味する。

「Ａβアミロイド症」及び「Ａβ原線維形成疾患」には、限定されないが、アルツハイマー病、ダウン症候群、家族性アミロイド症の諸形態、脳血管アミロイド症及び脳出血、シスタチンＣアミロイド血管症、アミロイド症を伴う遺伝性脳出血（オランダ型）、アミロイド症を伴う遺伝性脳出血（アイスランド型）、及び封入体性筋炎が含まれる。

治療上の応用
好ましい態様では、配列群Ａ、Ｂ、及びＣのペプチド、その断片、類似体、及び誘導体をアミロイド阻害性の治療薬剤として使用する。配列群Ａ、Ｂ、及びＣのペプチド、その断片、類似体、及び誘導体は、標準技術を利用して（即ち、自動合成機を使用して）合成することができる。好ましい態様では、所与の患者において、Ａβアミロイドへ結合するか又はそれを隔離し、Ａβアミロイドの形成、沈着、蓄積、及び／又は存続を阻害するために特定の配列群Ａ、Ｂ、及びＣのペプチド、その断片、類似体、及び誘導体を使用することができる。同様に、別の好ましい態様では、配列群Ａ、Ｂ、又はＣのペプチド、その断片、類似体、及び誘導体（上記に記載のような）に対して作製した抗イディオタイプ抗体を、所与の患者においてＡβアミロイドを破壊するか又はその形成、沈着、蓄積、及び／又は存続を阻害することができる潜在的なＡβ結合又は隔離抗体としてヒト患者へ投与してよい。

Ａβアミロイド症の治療に使用の製剤は、配列群Ａ、Ｂ、又はＣ中のペプチド、その断片、類似体、又は誘導体、抗イディオタイプ抗体、又は抗イディオタイプ抗体断片の医薬有効量を含み、医薬的に許容される担体が含まれる。本製剤には、追加的に、他の抗体又はコンジュゲートを含めてよい。非経口投与では、好ましい製剤には、無菌の水系又は非水系の溶液剤、懸濁液剤、及び乳剤が含まれ、それは、当該技術分野で知られた補助剤又は賦形剤を含有してよい。抗イディオタイプ抗体製剤は、限定されないが、局所、静脈内、動脈内、腹腔内、経口、リンパ管内、筋肉内、又は腰内が含まれる、慣用の投与形式を使用して投与することができる。静脈内投与が好ましい。錠剤、丸剤、カプレット剤、軟及び硬ゼラチンカプセル剤、甘み入り錠剤、サシェ剤、カシェ剤、ベジキャップ剤、液滴剤、エリキシル剤、懸濁液剤、乳剤、溶液剤、シロップ剤、ティーバッグ、エアゾール剤（固体として、又は液体媒体中）、坐剤、無菌注射可能溶液剤、滅菌包装散剤のような医薬製剤は、当該技術分野で知られている定型的な方法に従って調製することができる。そのような組成物の投与は、経口によっても、皮下、静脈内、皮内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、経皮、肛門、又は頬内の経路のような様々な非経口の経路によってもよい。非経口投与は、ボーラス注射によっても、経時的な漸次の灌流によってもよい。配列群Ａ、Ｂ、又はＣ、その断片、類似体、又は誘導体の製剤の好ましい投与形式は、経口投与、静脈内、又は鼻腔内の適用による。

配列群Ａ、Ｂ、又はＣの化合物、その断片、類似体、及び誘導体は、医薬組成物の形態において、例えば、アルツハイマー病と他のＡβアミロイド疾患のような病理、又は他の関連病理を治療するというその企図された目的を達成するあらゆる手段により投与することができる。治療製剤は多様な剤形であり得るが、好ましい形態は、投与の形式と治療上の適用に依存する。個別の患者に最適の投与量、頻度、投与の長さ及び形式は、当業者に知られた、慣用のプロトコールにより容易に決定することができる。

in vivo 又は in vitro で投与される、配列群Ａ、Ｂ、又はＣ中の化合物、その断片、類似体、及び誘導体の投与量は、レシピエントの年齢、性別、健康、及び体重、（もしあれば）併用療法の種類、治療の頻度、そして望まれる効果の種類に依存する。最も好ましい投与量は、当業者により不当な実験なしに理解されて決定可能であるように、個別の被検者に対して調整されるものである。

アルツハイマー病アミロイド症のような病理を予防、抑制、又は治療するのに典型的な方式は、１〜数日から１週と約７２ヶ月の間までとそれが含まれる期間にわたり投与される、配列群Ａ、Ｂ、又はＣ中の化合物、その断片、類似体、又は誘導体の有効量の投与を含む。

各治療に必要とされる全体の用量は、頻回投薬、又は単回投薬で投与してよい。配列群Ａ、Ｂ、又はＣ中の化合物、その断片、類似体、及び誘導体は、単独で投与しても、アルツハイマー病や本明細書に記載の他のＡβアミロイド疾患のような病理へ向けられる他の治療薬と一緒に投与してもよい。

配列群Ａ、Ｂ、又はＣ中の化合物、その断片、類似体、及び誘導体の有効量は、０．０５、０．０７、０．０９、０．１、０．５、０．７、０．９、１、２、５、１０、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００ｍｇ／ｋｇのように、約０．０１μｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重であり、好ましくは、約１０μｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重である。

少なくとも１つの配列群Ａ、Ｂ、又はＣの化合物又は抗イディオタイプ抗体を含んでなる医薬組成物には、静脈内、皮下、皮内、経鼻、経口、粘膜、直腸からの投与に適した溶液剤も含まれ、注射により、又は経口で投与してよく、約０．０１〜９９パーセント、好ましくは約２０〜７５パーセントの有効成分（即ち、ペプチド又は抗体）を賦形剤と一緒に含有する。経口投与用の医薬組成物には、丸剤、錠剤、カプレット剤、軟及び硬ゼラチンカプセル剤、甘味入り錠剤、サシェ剤、カシェ剤、ベジキャップ剤、液滴剤、エリキシル剤、懸濁液剤、乳剤、溶液剤、及びシロップ剤が含まれる。

アルツハイマー病や他の中枢神経系Ａβアミロイド症の治療用の配列群Ａ、Ｂ、又はＣの化合物、その断片、類似体、及び誘導体は、血液脳関門を通過するように修飾してよい。血液脳関門を通過する輸送を高めるための様々な修飾が当該技術分野で知られている（このような修飾の概説については、例えば、Pardridge W. M. (1994) Trends in Biotechnol. 12: 239-245; Van Bree, J. et al (1993) Pharm World Sci. 15: 2-9; 及び Pardridge W. M. (1992) Pharmacol. Toxicol. 71: 3-10 を参照のこと）。１つのアプローチは、配列群Ａ、Ｂ、又はＣのペプチドのいくつかでなされたように、アミノ又はカルボキシル末端の脂肪酸又はアシル基（アセチルのような）への共有連結により、ペプチドの親油性（ｌｏｇＰ）を高めることである。別のアプローチは、血液脳関門を通した吸収仲介性トランスサイトーシス（transcytosis）又は受容体仲介性トランスサイトーシスを通常受けるタンパク質へペプチドをコンジュゲートさせることである。これらのタンパク質には、トランスフェリン受容体へのモノクローナル抗体、ヒストン、ビオチン、葉酸、ニアシン、パントテン酸、又は糖ペプチドのような、脳毛細血管内皮受容体へのリガンドが含まれる。別のアプローチは、そのいずれもおそらくは受容体へ結合することによって血液脳関門を通した通過を促進することが知られている、リジン、ポリリジン、アルギニン、ポリアルギニン、リジン−アルギニンペプチド、プトレシン、スペルミジン、スペルミン、等のような高度に陽性の荷電化合物へ（配列群Ａ、Ｂ、及びＣのペプチドのいくつかでなされたように）ペプチドを連結させることである。

ペプチドの血液脳関門輸送を高める別のアプローチは、好ましくは上記と同じ理由により陽性に荷電した、リポソーム又は高分子ミクロスフェアのような担体ベクター中へのカプセル化による。担体ベクターは、トランスフェリン受容体のように、例えば、トランスフェリン受容体に対する抗体へペプチドを連結させることによって、血液脳関門輸送受容体へ標的指向するように修飾させてもよい。

別のアプローチは、血液脳関門を透過する、ブラジキニン又はブラジキニンアゴニストのような薬剤とペプチドを同時投与することである。
血液脳関門透過可能な薬物は、一般の中枢神経系薬の望ましい特徴である。しかしながら、開示する態様は、企図される目的（即ち、アルツハイマー病や他のアミロイド症の有効な治療）を達成するのに血液脳関門透過性の必要条件を必ずしも満たす必要はない。配列群Ａ、Ｂ、又はＣの化合物、その断片、類似体、誘導体と抗イディオタイプ抗体によるＡβの末梢隔離は、脳から末梢循環へのＡβの移動、脳Ａβを枯渇させること、脳Ａβアミロイド原線維形成を阻害すること、及び／又は前形成された脳Ａβアミロイド原線維の分解を引き起こすことをもたらすだろう。これは、Ａβが脳血液関門を自由に通過するという、先の研究で証明された事実による（Poduslo et al., Neurobiol. Dis. 4: 27-34, 1997; Ghilardi et al., Neuroreport 17: 2607-11, 1996; Pluta et al., Neuroreport 7: 1261-51996, 1996; Zlokovic, Neurobiol Dis. 4: 23-6, 1996）。

配列群Ａ、Ｂ、又はＣの化合物、その断片、類似体、及び誘導体は、アルツハイマー病と他の中枢神経系Ａβアミロイド症の治療のために、様々なやり方で投与してよい。投与の方法には、限定されないが、全身投与、非経口投与（即ち、腹腔内、静脈内、口周囲、皮下、筋肉内、動脈内、皮内、筋肉内、鼻腔内、硬膜外による）、又は経口経路が含まれる。好ましい態様では、配列群Ａ、Ｂ、又はＣの化合物、その断片、類似体、及び誘導体を脳室内注射により脳脊髄液へ直接投与することができる。特定の態様では、配列群Ａ、Ｂ、又はＣの化合物、その断片、類似体、及び誘導体を治療の必要な部位又は組織へ局所的に投与することが望ましい場合があり、このことは、例えば、そして限定されないが、外科手術の間の局所注入により、局所適用、注射により、カニューレを浸透ポンプとともに使用する注入により、カテーテルの手段により、坐剤の手段により、又はインプラントの手段により達成することができる。

なお別の態様では、配列群Ａ、Ｂ、又はＣの化合物、その断片、類似体、及び誘導体を、十分較正された浸透ポンプのような制御放出システムにおいて投与することができる。なお別の態様では、制御放出システムを治療標的、即ち脳の近傍に配置してよく、それにより全身投薬量の一部しか必要とされない。

なお別の態様では、配列群Ａ、Ｂ、又はＣのペプチドよりモデル化されて、Ａβや他のアミロイドタンパク質へ結合することが確認されたペプチド模倣化合物がアルツハイマー病と他のＡβアミロイド症におけるアミロイドの形成、沈着、蓄積、及び／又は存続の強力な阻害剤として役立つ。ペプチド模倣のモデリングは、当業者に知られた標準手順により実施する。これらのペプチド模倣化合物は、Ａβアミロイド症を治療する療法上の目的のために、上記に概説した製剤、投与量、頻度、期間、及び経路で投与することができる。

診断上の応用
開示する方法では、Ａβアミロイドを開示ペプチドと in vitro 又は in vivo のいずれで接触させてもよい。このように、用語「と接触させる」には、ペプチド及び抗イディオタイプ抗体のＡβアミロイド調製物との in vitro インキュベーションと、Ａβアミロイドが存在する部位へのペプチド及び抗イディオタイプ抗体の in vivo 送達の両方が含まれると企図される。ペプチドと抗イディオタイプ抗体がＡβアミロイドと相互作用するので、それらは、Ａβアミロイドを in vitro 又は in vivo のいずれかで検出するために使用することができる。故に、本化合物は、生物学的試料中又は in vivo での被検者中のＡβアミロイドの存在又は非存在を検出するための診断薬剤として使用してもよい。さらに、本化合物を使用するＡβアミロイドの検出を使用して、被検者においてＡβアミロイド症を診断することができる。

１つの態様では、化合物を in vitro で使用して、試料（ＡＤ患者、ＡＤが疑われる患者、ＡＤの家族歴がある人、又は正常な成人からの脳脊髄液のような）中のＡβアミロイドを検出して定量する。検出に役立てるために、該化合物を検出可能な物質で修飾してよい。試料中のＡβアミロイドを固定化してよく、この固定化したＡβアミロイド、又は組織切片におけるような試料と、検出可能な物質の付いた化合物を接触させる。残余の非結合化合物を除去して、Ａβへ結合した化合物を検出することができる。あるいは、結合した化合物、即ち試料中のＡβの量と反比例する非結合化合物を、質量分析法や、蛍光、リン光、及びＵＶ〜赤外線、さらにはＮＭＲ用のそれのような無線波に至る様々な光の波長の吸収が含まれる他の分光定量のような様々な手段により検出してよい。例えば、検出可能な物質は、ビオチン（即ち、アミノ末端をビオチニル化した配列群Ａ、Ｂ、又はＣのペプチド）であってよく、酵素標識したアビジンを使用して検出することができる。この酵素は、次いで、後に適切な基質へ曝露されるとき、例えば、分光光学測定、蛍光測定により、又は可視的な手段により検出することができる化学的部分を産生するようなやり方でその基質と反応する。抗体を検出可能的に標識するのに使用し得る酵素には、限定されないが、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ぶどう球菌ヌクレアーゼ、Δ−５−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α−グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、及びアセチルコリンエステラーゼが含まれる。この検出は、酵素の発色基質を利用する比色法によって達成することができる。検出はまた、同様に調製した標準品と基質の酵素反応の程度の可視比較により達成してもよい（Harlow and Lane「抗体：実験マニュアル（Antibodies: A Laboratory Manual）」コールドスプリングハーバーラボラトリー、1988；Ausubel et al. 監修「分子生物学の最新プロトコール（Current Protocols in Molecular Biology）」ウィリー・インターサイエンス、ニューヨーク、1987，1992 を参照のこと）。

選択した開示化合物を使用して、生物学的試料中のＡβアミロイドを定量的又は定性的に検出することもできる。これは、蛍光標識した開示化合物を光学顕微鏡、フローサイトメトリー、又は蛍光測定検出と共役して利用する免疫蛍光技術によって達成することができる。

検出は、多様な他の免疫アッセイのいずれを使用して達成してもよい。例えば、化合物の放射標識によって。このアッセイの良好な記載は、Work et al による「分子生物学における実験技術及び生化学（Laboratory Techniques and Biochemistry in Molecular Biology）」North Holland Publishing Company, ニューヨーク（1987）に見出すことができて、参照によりそのまま本明細書に組み込まれる、Chard による「放射免疫アッセイと関連技術への入門（An Introduction to Radioimmune Assay and Related Techniques）」と題した章が特に参考になる。放射活性同位体は、γ−カウンター、シンチレーションカウンターの使用のような手段によるか又はオートラジオグラフィーにより検出することができる。

化合物を蛍光化合物で標識することも考慮される。蛍光標識された化合物を適切な波長の光へ曝露するとき、その存在を蛍光により検出することができる。最も一般的に使用されている蛍光標識化合物は、例えば、モレキュラー・プローブ社（オレゴン州ユージーン、アメリカ）より市販されている、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、フィコエリスリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルデヒド、及びフルオレスカミンである。

化合物は、化学発光化合物へそれをカップリングすることによって検出可能的に標識してもよい。次いで、化学発光体のタグが付いた化合物の存在は、化学反応の経過の間に生じる発光の存在を検出することによって決定される。特に有用な化学発光標識化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、Ｔｈｅｒｏｍａｔｉｃアクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩、及びシュウ酸エステルである。

同様に、生物発光化合物を使用して、化合物を標識してよい。生物発光は、触媒タンパク質により化学発光反応の効率が高まった、生物系に見出される化学発光の１種である。生物発光タンパク質の存在は、発光の存在を検出することによって決定される。標識の目的に重要な生物発光化合物は、ルシフェリン、ルシファー（lucifers）、及びエクオリンである。

化合物は、Ａβアミロイドの in situ 検出のために、免疫蛍光又は免疫電子顕微鏡におけるように、組織学的に使用してもよい。患者より組織学的標本を取り出して、そのような標本へ標識化合物を提供することにより、in situ 検出を達成することができる。化合物は、好ましくは、標識化合物（又は断片）を生物学的試料へ塗布することによるか又はそれへ重ねることによって提供する。そのような手順の使用により、検査する組織におけるＡβアミロイドの存在だけでなくその分布も決定することが可能である。従って、当業者は、そのような in situ 検出を達成するために多種多様な組織学的方法（染色法のような）のいずれを改良してもよいことを容易に認められよう。

Ａβと相互作用する化合物、又はその誘導体も本明細書に開示する。該化合物は、本明細書に記載するようないくつかの重要な診断及び／又は治療上の応用に使用することができる。１つの側面では、Ａβと結合するペプチドをリガンドブロット分析に利用して（当業者に知られた標準リガンドブロッティング技術を使用する）、ヒト組織中と他の種の組織中のＡβアミロイドタンパク断片の存在を検出することができる。リガンドブロット分析は、各アミロイドタンパク断片のみかけの大きさを定量することに使用してもよい。さらに、リガンドブロッティングに続いて走査型デンシトメトリー（当業者に知られている）を使用して、特定の疾患（アミロイド疾患のような）のある個体より入手した組織試料、生体液、又は生検中のペプチドのそれぞれのレベルを、正常な個体又は対照より入手した組織試料、生体液、又は生検と比べて、定量して比較することができる。生体液には、限定されないが、血液、血漿、血清、脳脊髄液、喀痰、唾液、尿、及び便が含まれる。

別の態様では、化合物を in vivo で使用して、例えば、被検者におけるＡβアミロイド症の診断に役立てるために、被検者におけるＡβアミロイド沈着を検出して、望まれるならば、定量する。検出に役立てるために、該化合物を検出可能な物質、好ましくは^９９ｍＴｃ又は放射活性ヨウ素で修飾してよい。ペプチド化合物をテクネチウムで標識する方法は、当該技術分野で知られている。^９９ｍＴｃのキレート形成基を導入することができる部位を提供する、フリーアミノ基を有するコール酸の誘導体のような修飾基を選択することができる。また提供するのは、すでに存在するか、又は標識する目的で取り込んだ、その芳香族アミノ酸を介して放射活性ヨウ素で標識した配列群Ａ、Ｂ、又はＣのペプチドである。放射活性ヨウ素の様々な同位体のいずれも取り込んで診断薬剤を創出してよい。好ましくは、^１２３Ｉ（半減期＝１３．２時間）は全身シンチグラフィーに、^１２４Ｉ（半減期＝４日）又は^１８Ｆは陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）に、^１２５Ｉ（半減期＝６０日）は代謝回転試験に、そして^１３１Ｉ（半減期＝８日）は全身カウンティング及び遅延型低解像イメージング（delayed low resolution imaging）試験に使用することができる。

法規に準拠して、構造特性に関して多かれ少なかれ具体的な言語で本発明を記載してきた。しかしながら、示した手段と解釈は本発明を実行する好ましい形態を含むので、本発明は、示した具体的な特性に限定されないと理解されたい。故に、本発明は、等価物の原理に従って適切に解釈される、付帯の特許請求項の法的かつ正当な範囲内にあるその形態又は修飾のいずれにおいても特許請求される。

Claims (4)

1. 式：Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met-Gly-アミド
   のペプチドを含む医薬組成物。
2. ペプチドの個別アミノ酸がＬ又はＤ−アミノ酸のいずれでもよい、請求項１の医薬組成物。
3. 医薬的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤をさらに含んでなる、請求項１または２の医薬組成物。
4. ペプチド中のアミノ酸の１以上がＮ−メチル化されている、請求項１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。

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