PT2380583E

PT2380583E - Pequenos péptidos para o tratamento da doença de alzheimer e outras desordens da fibrilogénese da proteína beta-amilóide

Info

Publication number: PT2380583E
Application number: PT111616140T
Authority: PT
Inventors: Alan D Snow; Gerardo M Castillo; Thomas P Lake; Beth P Nguyen; Virginia J Sanders
Original assignee: Proteotech Inc
Priority date: 2003-12-18
Filing date: 2004-12-17
Publication date: 2013-11-29
Also published as: US20080227721A1; CA2550085C; WO2005060683A2; PT2172208E; EP2172208B1; EP2380583A1; EP1699418A2; EP2380583B1; CA2800228C; CA2800228A1; ES2437134T3; ES2434242T3; EP2172208A1; JP2007535494A; US7759311B2; DK2172208T3; WO2005060683A3; CA2550085A1; JP5221633B2; JP4694506B2

Description

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DESCRIÇÃO "PEQUENOS PÉPTIDOS PARA O TRATAMENTO DA DOENÇA DE ALZHEIMER E OUTRAS DESORDENS DA FIBRILOGÉNESE DA PROTEÍNA BETA- AMILÓIDE" Área Técnica

Esta invenção refere-se a péptidos úteis para o tratamento da doença de Alzheimer e outras desordens da fibrilogenese da proteina beta-amilóide.

Antecedentes da invenção

Uma base adicional para a utilização terapêutica de fragmentos de péptidos no tratamento de doença de Alzheimer e outras amiloidoses pode ser encontrada na Patente US N° 7314724 solicitada a 22 de agosto de 2001, e na Patente US N° 6933280 apresentada a 24 de setembro de 2001.

Proteína Beta-Amilóide como alvo terapêutico para a doença de Alzheimer A doença de Alzheimer (DA) é caracterizada pela deposição e acumulação de um péptido com 39-43 aminoácidos denominado por proteína beta-amilóide, Αβ ou β/Α4 (Glenner e Wong, Biochem. Biophys. Res. Comm. 120:885-890. 1984; Masters et al, Proc. Nat. Acad. Sei. U.S.A 82:4245-424 9, 1985; Husby et al, Buli. WHO 71:105-108,1993). Αβ é derivada de proteínas precursoras maiores denominadas por proteínas precursoras amilóides beta (ou APPs), das quais existem várias variantes alternativas emendadas. As formas mais abundantes dos APPs incluem proteínas que consistem em 695, 751 e 770 aminoácidos (Kitaguchi et al, Nature 331:530-532, 2 1988; Ponte et al, Nature 331:525-527,1988; Tanzi et al, Nature 331:528-530, 1988). O pequeno péptido Αβ é um componente importante que faz parte do núcleo dos depósitos amilóides, designados por "placas" no cérebro de pacientes com DA. Adicionalmente, a AD é caracterizada pela presença de numerosos "emaranhados" neurofibrilares, constituídos por filamentos helicoidais emparelhados, que anormalmente acumulam-se no citoplasma neuronal (Grundke-Iqbal et al Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 83:4 913-4 917, 1986; Kosik et al, Proc Natl Acad Sei U.S.A. 83:4044-4048, 1986; Lee et al, Science 251:675-678, 1991). O outro importante tipo de lesão observada no cérebro com DA é a acumulação de amilóide nas paredes dos vasos sanguíneos, tanto dentro do parênquima cerebral e vasos das meninges, que se encontram fora do cérebro. Os depósitos amilóides localizados nas paredes dos vasos sanguíneos são referidos como amilóide cerebrovascular ou angiopatia congofilica (Mandybur, J. Neuropath. Exp. Neurol. 45:79-90, 1986; Pardridge et al, J. Neurochem, 49:1394-1401, 1987). As caracteristicas patológicas da DA são, por conseguinte, a presença de "placas", "emaranhados", e depósitos amilóides cerebrovasculares.

Durante muitos anos tem decorrido um debate científico sobre a importância da "amilóide" na DA e se as "placas" e "emaranhados" característicos desta doença, são a causa ou apenas as consequências da doença. Estudos recentes indicam que amilóide é realmente um fator causal para a DA e não deve ser considerado apenas como uma consequência. Foi demonstrado que a proteína Αβ da doença de Alzheimer em cultura de células, provoca a degeneração das células nervosas dentro de um curto período de tempo (Pike et al, Br. Res. 563:311-314, 1991; Neurochem. 64:253-265, 1995). Estudos sugerem que é a estrutura fibrilar, característica de todos os amilóides, que é a principal responsável pelos 3 efeitos neurológicos. Αβ também foi encontrada como sendo neurológica em culturas de hipocampo cortado longitudinalmente (Hadrian et al, Neurobiol. Aging 16:779-789, 1995.) e induz a morte das células nervosas em ratinhos transgénicos (Games et al, Nature 373:523-527, 1995; Hsiao et al, Science 274:99-102, 1996). A injeção de Αβ em cérebro de rato, também provoca perda de memória e disfunção neuronal (Flood et al, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 88:3363-3366, 1991; Br. Res. 663:271-276, 1994). Evidências convincentes de que a amilóide Αβ está diretamente envolvida na patogénese da doença de Alzheimer vêm de estudos genéticos. Foi descoberto que o aumento da produção de Αβ pode resultar de mutações no gene que codifica o seu precursor, APP (Van Broeckhoven et al, Science 248:1120-1122, 1990; Murrell et al, Science 254:97-99, 1991; Haass et al, Nature Med. 1:1291-1296, 1995). A identificação de mutações no gene APP, que causa um inicio precoce familiar de DA, é um forte argumento de que Αβ e amilóide são fundamentais para o processo patogénico subjacente a esta doença. Quatro mutações relatadas como sendo causadoras de doenças, já foram descobertas e que demonstram a importância de Αβ em causar DA familiar (revisto em Hardy, Nature Gen. 1:233-234, 1992). Finalmente, estudos recentes sugerem que uma redução na carga de placa amilóide em ratinhos transgénicos APP, leva a melhorias na insuficiência comportamental e perda de memória (Chen et al, Nature 408:978-982, 2000; Janus et al, Nature 408:979-982, 2000; Morgan et al, Nature 408:982-985, 2000) . Este é o argumento mais forte até à data, que implica que a redução da carga amilóide Αβ no cérebro deve ser um alvo central para o desenvolvimento de novos e eficazes tratamentos de DA e outros distúrbios. 4

Doença de Alzheimer e envelhecimento da população A doença de Alzheimer é a principal causa de demência em idosos, afetando 5-10% da população com idade superior a 65 anos (Jorm, A Guide to Understanding of Alzheimer's Disease and Related Disorders, New York University Press, New York, 1987) . Na DA, degeneram as partes do cérebro essenciais para os processos cognitivos, como a memória, atenção, linguagem e raciocinio. Em algumas formas hereditárias da doença de Alzheimer, o inicio ocorre na meia-idade, mas mais comumente, os sintomas aparecem a partir de meados dos anos 60. A DA afeta hoje 4-5 milhões de americanos, com pouco mais de metade dessas pessoas a receber cuidados em diferentes instituições de saúde. A prevalência da doença de Alzheimer e outras demências duplica a cada cinco anos a partir dos 65 anos de idade, e estudos recentes indicam gue quase 50% das pessoas com 85 anos e mais velhos têm sintomas de DA (NIH Progress Report on AD, National Institute on Aging, 2000). Trinta e três milhões de pessoas da população total dos Estados Unidos da América, têm mais de 65 anos de idade, e tal irá aumentar para 51 milhões de pessoas até o ano de 2025 (NIH Progress Report on AD, National Institute on Aging, 2000) . O custo económico anual da DA nos Estados Unidos da América, em termos de despesas de saúde e salários perdidos de ambos os pacientes e seus cuidadores é estimado em US 80$ a US 100$ bilhões (NIH Progress Report on AD, National Institute on Aging, 2000) .

Divulgação da invenção

Num primeiro aspeto da invenção, a presente invenção fornece um péptido de Arg-Val-Ala-Val-Leu-Ile-Met-Gli-NH2. 5 0 péptido pode ser compreendido de L-aminoácidos ou D-. Um ou mais dos aminoácidos podem ser N-metilados.

Num segundo aspeto, a presente invenção fornece um péptido do primeiro aspeto da invenção e um anticorpo especifico para tal péptido, para utilização no tratamento de uma doença caracterizada por fibrilogénese Αβ. 0 péptido pode ser constituído por L-ou D-aminoácidos. Um ou mais dos aminoácidos podem ser N-metilados.

Num segundo aspeto, a presente invenção fornece um péptido para a utilização no tratamento de uma doença caracterizada por fibrilogénese Αβ.

Num terceiro aspeto, a presente invenção fornece a utilização de um péptido do primeiro aspeto da invenção ou um anticorpo especifico para o referido péptido na produção de um medicamento para o tratamento de uma doença caracterizada por fibrilogénese Αβ. A doença pode ser a doença de Alzheimer. 0 péptido ou o anticorpo do segundo e terceiro aspetos podem ainda compreender um veiculo farmaceuticamente aceitável, diluente ou excipiente. Adicionalmente, o péptido ou o anticorpo do segundo e terceiro aspetos podem ser formulados para administração por uma via selecionada de oral, parentérica, intravenosa, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, anal e bucal.

Preferencialmente, é formulada para a administração intranasal nasal.

Num quarto aspeto, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo um péptido do primeiro aspeto da invenção e um veículo farmaceuticamente 6 aceitável, um diluente ou um excipiente. Tal composição pode ainda compreender um composto ativo suplementar.

Os pequenos peptideos são divulgados, os quais demonstram grande eficácia na inibição e/ou interrupção das fibrilas amilóides. Também é descrita a utilização dos mesmos péptidos para imagiologia da localização de Αβ no corpo, com a finalidade de diagnóstico da doença de Alzheimer e outras desordens de fibrilogénese da proteina beta-amilóide (Αβ) , bem como a utilização dos mesmos péptidos para a deteção de Αβ em amostras biológicas, para fins de diagnóstico da doença de Alzheimer e outras desordens de fibrilogénese da proteina beta-amilóide (Αβ) . "Fibrilogénese", tal como aqui utilizado, significa a ligação clinica ou patológica de beta-amilóide a si própria para formar fibrilas e, por vezes, folhas beta, tal como conhecido pelos peritos na especialidade.

Esta divulgação refere-se a compostos e suas composições farmacêuticas, que se podem ligar à proteina beta-amilóide (Αβ) e modular ou moderar a agregação e/ou a fibrilogénese de Αβ, para o tratamento e diagnóstico de doenças Αβ, tais como a doença de Alzheimer e outras desordens que envolvem a acumulação e persistência de Αβ. Estas doenças Αβ incluem, mas não estão limitados a amilóide associada à doença de Alzheimer e sindrome de Down, e várias formas de amiloidose cerebral, tal como será familiar para aqueles conhecedores na especialiade técnica. A descrição refere-se à nova e surpreendente descoberta de que determinados péptidos são ligantes e disruptores de fibrilas amilóides Αβ e, portanto, são úteis para a intervenção terapêutica da doença de Alzheimer e desordens Αβ relacionadas. Os péptidos selecionados são ligantes da 7 Αβ amilóide da doença de Alzheimer e são, portanto, úteis para a imagiologia e diagnóstico da doença de Alzheimer e desordens relacionadas com Αβ. São revelados métodos para o tratamento da doença de Alzheimer e outras desordens Αβ, compreendendo a administração, a um sujeito ou paciente, de uma dose terapeuticamente eficaz de um péptido 6-9mer seleccionado.

Numa forma de realização, na qual de preferência todos os aminoácidos indicados são D-aminoácidos, salvo indicação em contrário (tal como, designando péptidos na forma L, com códigos numéricos "LP", ou colocando o prefixo "L-" nos códigos dos aminoácidos escolhidos), as composições farmacêuticas contêm, preferencialmente, o péptido Arg-Val-Ala-Val-Leu-Ile-Met-Gli-NH2. Também incluídos estão certos análogos, derivados, enantiómeros ou fragmentos das sequências aqui divulgadas e discutidas.

Também é revelado a utilização de análogos de N-metilados dos péptidos da invenção, incluindo a utilização de aN-metilação ou L-aminoácidos (preferencialmente, aminoácidos metilados) exclusiva ou parcialmente, durante a síntese, de modo que os péptidos resultantes terão ligações amida aN-metiladas puras ou parcialmente αΝ-metiladas ou alternadamente αΝ-metiladas e ligações amida não-aN-metiladas. Os compostos preferenciais possuem ligações do tipo amida modificadas, de tal modo que, pelo menos uma das ligações amida na cadeia principal do péptido seja N-metilada, impedindo que o próprio péptido forme uma folha-beta.

Os compostos miméticos (peptidomimético) são também descritos como modelado a partir do péptido da invenção. 0 termo "mimético", geralmente, inclui "isósteros", tais como modificações da cadeia principal dos péptidos (isto é, uma ligação amida mimética) com azoto da amida, carbonilo da amida, ou a substituição completa da ligação amida. A ligação amida pode, vantajosamente, ser substituída por pontes de semelhante extensão, conhecidas pelos peritos na especialidade, tais como: -CH2S-, -CH=CH-, -CH2NH-,-CSNH2-ou -COCH2-.

Os miméticos podem ser gerados utilizando um software que pode derivar de um modelo virtual do péptido a partir de várias estruturas do péptido aqui divulgadas. Tal pode ser realizado utilizando o software derivado algoritmo SLATE. Ver, Perkin, Mills e Dean, 1995 Journal of Computer Aided Design Molecular 9(6) p479-490; Mills et al. 2001 Journal of Computer Aided Molecular Design 15(1) P81-96; De Esch, IJ, et al 2001 Journal of Med. Chem. 44(11) pl666-74; Mills Perkins e Dean 1997 Journal of Computer Aided Design Molecular 11(2) P175-92). Um exemplo do programa derivado do algoritmo SLATE é Quasi por De Novo Pharmaceutical. Este programa sobrepõe vários ativos mas, aparentemente, dessemelhantes moléculas de peptídeos que são ativas para chegar às estruturas mais prováveis essenciais para a atividade (com o mínimo de restrição de energia). Isto pode ser utilizado para gerar um molde ou o local de ligação ao alvo com a posição prevista de átomos de ligação de hidrogénio no espaço tridimensional. Tal pode então ser utilizado para gerar um não-péptido similiar aos ligandos péptidos originais. Estes softwares geradores de moléculas já estão disponíveis comercialmente (por exemplo, Skelgen and Skelgen II).

Um "mimético" de um composto refere-se também a um composto no qual as estruturas químicas do composto que é necessário para a atividade funcional, foram substituídas por outras estruturas químicas que simulam a conformação do composto 9 ou péptidos do mesmo. 0 termo "mimético" tal como aqui utilizado, também pretende incluir moléculas que simulam a estrutura química de uma estrutura L- ou D-peptídica e reter as propriedades funcionais da estrutura D- ou L-peptídica. Outras abordagens para a conceção de análogos de péptidos, derivados e miméticos são também bem conhecidos na técnica. Por exemplo, ver P.S. Farmer, em Drug Design, E.J. Arianos, ed, Academic Press, New York, 1980, V. 10, pp. 119-143;. Bali and Alewood, J. Mol. Recognition 3:55, 1990; Morgan and Gainor Ann. Rep. Med. Chem. 24:243, 1989, and Freidinger, Trends Pharmacol. Sei. 10:270, 1989. Ver também Sawyer, "Peptidomimetic design and Chemical approaches to peptide metabolism", in MD Taylor and GL Amidon, eds., in Peptide-Based Drug Design: Controlling Transport and Metabolism, Ch. 17, 1995; Smith et al, J. Am. Chem. Chem. Soc. 117:11113-11123, 1995; Smith et al, J. Am. Chem. Chem. Soc. 116:9947-9962, 1994 and Hirschman et al, J. Am. Chem. Soc. 115:12550-12568, 1993. O termo "análogos" inclui variantes da molécula de péptido provocadas, por exemplo, pela substituição homóloga de um ou mais resíduos de aminoácidos, como será considerado por os peritos na especialidade, a reversão da sequência ou a substituição parcial ou completa dos componentes dos aminoácidos com enantiómeros de composição idêntica (L-aminoácidos vs D-). Os análogos incluem "substituições conservativas de aminoácidos", em que um aminoácido é substituído por um aminoácido com uma cadeia lateral semelhante. Exemplos de aminoácidos de cadeia lateral semelhante, são os aminoácidos de cadeia lateral básica (por exemplo, lisina, arginina, histidina), aminoácidos de cadeia lateral ácida (por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico), aminoácidos de cadeia lateral não polar (por exemplo, glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptofano), aminoácidos 10 de cadeia lateral polar sem carga (por exemplo, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), aminoácidos de cadeias laterais ramificadas (por exemplo, treonina, leucina, valina, isoleucina) e aminoácidos de cadeias laterais aromáticas (por exemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina). Os análogos incluem "substituições homólogas de aminoácidos", em que um aminoácido é substituído por aminoácidos homólogos, tais como a substituição de fenilalanina por tirosina, piridilalanina ou homofenilalanina e a substituição de leucina por valina, ou vice-versa. O termo "derivado" inclui alterações químicas mínimas, familiares dos peritos na especialidade, em que um ou mais grupos reativos nos péptidos da invenção, têm sido "derivatizados do péptido", de tal forma que existem péptidos em que a cadeia lateral do aminoácido, o esqueleto do péptido ou o terminal amino- ou carboxi- foi derivatizado, como aqui adiante discutido.

Em qualquer uma das estruturas ou sequências acima, a nomenclatura ou representação simbólica de qualquer ou de todos os aminoácidos individuais são dadas pela norma da abreviatura de 3 letras para os aminoácidos, opcionalmente, precedidos por uma das D- ou L-, que representa as duas formas enantioméricas (imagens de espelho uma da outra) de aminoácidos individuais que compõem a sequência. O acetil-e a -amida no terminal N- e C-, respectivamente, são, opcionalmente, incluídos quando presente ou indicados como preferidos.

Também são revelados compostos que incluem os péptidos da invenção, porções de tais péptidos e seus novos análogos e derivados, para utilização no tratamento da doença de Alzheimer e outras desordens que envolvem a formação e 11 persistência de Αβ. De preferência, os distúrbios são a doença de Alzheimer, sindrome de Down e outras amiloidoses Αβ. Tipicamente, a composição farmacêutica inclui uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto divulgado ou sais farmaceuticamente aceitáveis de um composto, com, opcionalmente, um veiculo farmaceuticamente aceitável, diluente ou excipiente.

Também é descrita a utilização de pílulas, comprimidos, drageias, cápsulas de gelatina mole e dura, pastilhas, saquetas, hóstias, cápsulas vegetais, gotas líquidas, elixires, suspensões, emulsões, soluções, xaropes, sacos de chá, aerossóis (como um sólido ou num meio líquido), supositórios, soluções injectáveis estéreis, e pós embalados estéreis, que contêm um composto descrito para o tratamento de pacientes com doença de Alzheimer e outras amiloidoses Αβ. Por conseguinte, está também contemplada a utilização de um composto descrito para a terapia ou para a produção de um medicamento para o tratamento de uma desordem associada com amiloidoses Αβ. São fornecidas as composições utilizadas para a administração, a um indivíduo, de uma dose terapêutica de um composto selecionado divulgado, que inibe a deposição amilóide Αβ ou amiloidose Αβ, em distúrbios nos quais existe deposição amilóide Αβ. Os compostos revelados podem ser utilizados terapeuticamente para tratar a amiloidose ou podem ser utilizados profilacticamente num sujeito susceptível a amiloidose Αβ. Os métodos baseiam-se, pelo menos em parte, à ligação direta de amilóide Αβ, no cérebro ou na circulação periférica, inibindo a formação de fibrila amilóide Αβ, e/ou causando a dissolução de uma pré-formada fibrila amilóide Αβ. Acredita-se que o sequestro periférico de uma Αβ por péptidos da invenção resulte no movimento de uma Αβ, a partir do cérebro para a circulação periférica, 12 inibindo assim a formação de fibrila amilóide Αβ no cérebro e/ou causando dissolução da pré-formada fibrila amilóide Αβ no cérebro. São fornecidos os métodos para a deteção da presença ou da ausência de péptidos Αβ numa amostra biológica. Estes métodos incluem o contacto de uma amostra biológica com um composto selecionado, em que o composto é marcado com uma substância detetável, por exemplo, com um radionucleótido, composto fosforescente, composto fluorescente, proteínas fluorescentes, compostos paramagnéticos, metais quelantes, ou uma enzima, os quais são facilmente detetáveis em vários ensaios e diagnósticos conhecidos dos especialistas na técnica e, em seguida, a deteção da substância detetável ligada a péptidos β na amostra biológica. São fornecidos os métodos para imagiologia da presença ou da ausência de péptidos Αβ no corpo ou em tecidos biológicos. Estes métodos incluem o contacto de péptidos Αβ no corpo com um composto, em que o composto é marcado com substância detetável, por exemplo, com um radionucleótido, composto fosforescente, composto fluorescente, proteínas fluorescentes, compostos paramagnéticos, metal quelante ou enzima, e a deteção da substância detetável ligada a um péptido Αβ no corpo ou em tecidos biológicos. É apresentada a utilização de anticorpos anti-idiotípicos para os péptidos da invenção, análogos, derivados ou os seus fragmentos, como potentes ligantes de Αβ, e inibidores de formação de amilóide Αβ, a deposição, a acumulação e/ou a persistência da doença de Alzheimer e outras amiloidoses Αβ. 0 termo "anticorpos anti-idiotípicos" refere-se aos anticorpos (A) criados contra ou que reconhecem especificamente as regiões Fab de outros anticorpos (B), e as regiões Fab dos anticorpos B, reconhecem um dos péptidos 13 da invenção. 0 resultado é que os anticorpos anti-idiotípicos A para os péptidos da invenção têm regiões Fab que imitam o péptido, em termos de reatividade, a ligação amilóide e as propriedades de desregulação amilóide. É apresentada a utilização de anticorpos que reconhecem compostos para etiquetagem in vivo; por exemplo, com um radionucleótido, por imagens radiológicas, a ser utilizado para o diagnóstico in vivo, e/ou para o diagnóstico in vitro.

Uma importante amiloidose Αβ em que a terapêutica divulgada é destinada à doença de Alzheimer. Uma quantidade terapeuticamente eficaz preferida do composto descrito é uma dosagem na gama de cerca de 10yg a cerca de 50mg/kg de peso corporal/por dia, e mais preferencialmente na gama de cerca de lOOpg a cerca de lOmg/kg de peso corporal por dia.

Um agente farmacêutico contendo um composto descrito selecionado pode ser, vantajosamente, administrado por injeção ou infusão ou gotas nasais ou spray nasal ou administração oral. Em qualquer uma das estruturas ou sequências acima, a nomenclatura ou representação simbólica de qualquer ou de todos os aminoácidos individuais, podem ser fornecidas por qualquer norma da abreviatura de 3 letras para os aminoácidos, ou o código de letras únicas para os aminoácidos, e, por vezes, tanto ambos os códigos, quando apropriado. 14

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

Os seguintes desenhos são ilustrativos das concretizações da invenção e não se destinam a limitar o âmbito da invenção. A figura 1 são sequências peptidicas e desenhos para os péptidos DP-068 e DP-074. A figura 2 é um espectro CD de Ab42 mais polilisina e DP-065 a DP-072 em (1:2). A figura 3 é um espectro CD de Ab42 mais DP-065 a DP-072 em (1:0,1, 1:1, 1:2, 1:5). A figura 4 é um resumo da resposta à dose CD de Ab42+/- DP-065 a DP-072. A figura 5 é um resumo de Thio T de Ab42+/-DP65-72 (1:0,1, 1:1, 1:2, 1:5) e polilisina. A figura 6 é um resumo da classificação Thio T 65-72. A figura 7A e B são espectros CD que mostram os efeitos de 0,2 mg/mL do péptido DP-074 na estrutura secundária folha-beta de fibrilas amilóides Αβ42 (i.e. Αβ42 +/-DP-074) ou apenas DP-074. A figura 8 é um gráfico que mostra um resumo da comparação do efeito de 0,2 mg/mL dos péptidos DP-065 a LP-081, e polilisina, na estrutura secundária de folha-beta de 25uM fibrilas amilóides Αβ42, como avaliado por CD. É mostrada a elipticidade molar do residuo de Αβ42 a 218nm no eixo y, que representa o sinal associado com a estrutura secundária folha-beta. A perda de elipticidade a 218nm em comparação com o sinal de fibrilas Αβ42 apenas, indica a capacidade dos péptidos para a redução da estrutura secundária folha-beta .

As figuras 9A e B são espectros CD que mostram os efeitos dependentes da dose do péptido DP-074 em estrutura secundária folha-beta das fibrilas amilóides Αβ42 (isto é, Αβ42 +/-DP-074) ou apenas DP-074. 15 A figura 10 é um gráfico que mostra uma comparação sumária do efeito dependente da dose dos péptidos DP-065 a LP-081 na estrutura secundária em folha-beta de 25uM de fibrilas amilóides Αβ42, como avaliado por CD. É mostrada a elipticidade molar do residuo de Αβ42 a 218nm no eixo y, que representa o sinal inversamente relacionado com a estrutura secundária em folha-beta. A figura 11 é um gráfico que mostra uma comparação sumária ordenada do efeito dos péptidos 6-9mer na estrutura secundária em folha-beta de 25uM de fibrilas amilóides Αβ42, como avaliado pela espectropolarimetria CD. É mostrada a percentagem de disruptura das fibrilas Αβ42, conforme avaliado pela perda de elipticidade a 218nm, que representa o sinal que é inversamente relacionado com a estrutura secundária de folha-beta. A figura 12 é um gráfico que mostra uma comparação sumária ordenada do efeito dos péptidos 6-9mer na estrutura secundária em folha-beta de 25uM das fibrilas amilóides Αβ42, como avaliado por fluorimetria tioflavina T. É mostrada a percentagem de disruptura de fibrilas Αβ42 por vários péptidos 6-9mer a uma proporção de peso de 1:2 dos péptidos Ap42:6-9mer. A figura 13 é um gráfico que mostra uma comparação sumária ordenada da eficiência de ligação do péptido 6-9mer sobre um substrato ligado Αβ42, como avaliado por medições LC/MS de péptidos não ligados, após um período de equilíbrio de duas horas. É mostrado o percentual de vários péptidos 6-9mer não ligados a fibrilas Αβ42 após 2 horas de incubação. A figura 14 é um gráfico que demonstra a estabilidade do péptido DP-068 no soro humano dentro de um período de incubação de 32 horas, tal como avaliado por LC/MS.

Figura 15 é um gráfico que demonstra a estabilidade do péptido DP-074 no soro humano dentro de um período de incubação de 32 horas, tal como avaliado por LC/MS.

Melhor modo de realização da invenção EXEMPLO 1

Preparação de Péptidos

Os péptidos aqui descritos foram produzidos em ambas as formas de L-aminoácidos e D-. 0 péptido DP-068 está de acordo com a invenção. Nos exemplos seguintes, DP-068 refere-se a uma "amida" com um terminal N. Será verificado pela figura 1 que esta amida é -NH2. Além disso, os péptidos truncados e péptidos análogos foram produzidos para utilização como potenciais péptidos terapêuticos, para o tratamento de fibrilogénese Αβ, na doença de Alzheimer e doenças relacionadas. Estes péptidos são, de preferência, sintetizados convencionalmente. Por exemplo, os péptidos L-e D- foram sintetizados em sintetizadores de péptidos conhecidos pelos peritos na especialidade, tais como, Advanced ChemTech Model 396 multiple peptide synthesizer (Louisville, KY), utilizando um protocolo automático estabelecido pelo fabricante para a sintese escala 0,025mmole. Foram realizados acoplamentos duplos em todos os ciclos, utilizando metilurónio hexafluorofosfato 2-(lH-benzotriazol-l-il)-l,l,3,3-tetra (HBTU)/N,N-diisopropiletilamina (DIEA)/HOBt/FMOC-AA em excesso de quatro vezes, durante 30 minutos, seguido por DIC/HOBt/FMOC -AA em excesso de quatro vezes, durante 45 minutos. O péptido foi em seguida desprotegido e removido da resina por tratamento com TFA/água (95%/5%), durante 3 horas e, em seguida, precipitou-se com éter frio. O sólido resultante foi, então sedimentado por centrifugação (2400 rpm x 10 min), e o éter foi rejeitado. O sólido foi, em seguida, re-suspenso em éter e re-centrifugado pela segunda vez, sendo 17 que após o éter foi decantado, pela segunda vez. 0 sólido foi dissolvido em ácido acético a 10 % e liofilizado, até à secura (~30 mg para péptidos de 12 aminoácidos; 18 mg para péptidos de 7 aminoácidos) . O péptido em bruto foi purificado por HPLC preparativo, utilizando instrumentos conhecidos pelos peritos na especialidade, tais como uma série HP 1100 com detetor de arranjo de díodos, com uma coluna Vydac C18 (21 x 250 mm), utilizando um gradiente de acetonitrilo a 15%-40% durante 80 minutos (a uma taxa de fluxo de 5 mL/min). A fração primária foi então recolhida e re-analisada quanto à pureza utilizando HPLC analítica para garantir um pico único simétrico, para todos os comprimentos de onda. A confirmação da estrutura e sequências foi baseada na comparação dos pesos moleculares previstos, para pesos moleculares obtidos por espectroscopia de massa ESI. Estas análises foram realizadas utilizando instrumentos conhecidos pelos peritos na especialidade, tais como um espectrómetro de massa de pulverização iónica triplo quádruplo Sciex API IIIE ou ESI Agilent MSD-SL. Os péptidos 12-13me foram sintetizados com as sequências seguintes, de preferência todos os que empregam D-aminoácidos, salvo indicação em contrário:

Arg-Lis-Arg-Leu-Gln-Vai-Gln-Leu-Ser-Ile-Arg-Thr (DP-001), Arg-Gln-Val-Fen-Gln-Val-Ala-Tir-Ile-Ile-Ile-Lis-Ala (DP- 002) ,

Tir-eu-Ser-Lis-Gli-Arg-Leu-Val-Fen-Ala-Leu-Gli (DP-003), Thr-Leu-Fen-Leu-Ala-His-Gli-Arg-Leu-Val-Fen-Met(DP-004), Ala-Gli-Gln-Trp-His-Arg-Val-Ser-Val-Arg-Trp-Gli (DP-005), Asp-Gli-Arg-Trp-His-Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met-Gli (DP-006),

His-Gln-Thr-Trp-Thr-Arg-Asn-Leu-Gln-Vai-Thr-Leu (DP-007), Ile-Ser-Asn-Val-Fen-Val-Gln-Arg-Leu-Ser-Leu-Ser (DP-008), Arg-Gli-Leu-Val-Fen-His-Thr-Gli-Thr-Lis-Asn-Ser-Fen (DP- 009) ,

Gli-Asn-Ser-Thr-Ile-Ser-Ile-Arg-Ala-Pro-Val-Tir (DP-010), 18

Val-Arg-Trp-Gli-Met-Gln-Gln-Ile-Gln-Leu-Val-Val (DP-011) , Ala-Pro-Val-Asn-Val-Thr-Ala-Ser-Val-Gln-Ile-Gln (DP-012), Thr-Arg-Ile-Ser-Leu-Gln-Val-Gln-Leu-Arg-Lis-Arg (DP-013), Ala-Lis-Ile-Ile-Ile-Tir-Ala-Val-Gln-Fen-Val-Gln-Arg (DP- 014) ,

Gli-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-Gli-Lis-Ser-Leu-Tir (DP-015), Met-Fen-Val-Leu-Arg-Gli-His-Ala-Leu-Fen-Leu-Thr (DP-016), Gli-Trp-Arg-Val-Ser-Val-Arg-His-Trp-Gln-Gli-Ala (DP-017), Gli-Met-Ile-Val-Ala-Val-Arg-His-Trp-Arg-Gli-Asp (DP-018), L-Arg-L-Lis-L-Arg-L-Leu-L-Gln-L-Val-L-Gln-L-Leu-L-Ser-L-

Ile-L-Arg-L-Thr (DP-019), e Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met-Pro-Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met (DP- 050) .

Adicionalmente, os péptidos 6-9mer incluindo, ίΑβ5 (LP-025) e ρίΑβ5 (LP-081) foram sintetizados com as seguintes sequências e/ou modificações: L-Leu-L-Pro-L-Fen-L-Fen-L-Asp (LP-025), Ala-Gli-Gln-Trp-His-Arg-Val (DP-026), Gli-Gln-Trp-His-Arg-Val-Ser (DP-027), Gln-Trp-His-Arg-Val-Ser-Val (DP-028), Trp-His-Arg-Val-Ser-Val-Arg (DP-029), His-Arg-Val-Ser-Val-Arg-Trp (DP-030), Arg-Val-Ser-Val-Arg-Trp-Gli (DP-031) , Asp-Gli-Arg-Trp-His-Arg-Val (DP-032), Gli-Arg-Trp-His-Arg-Val-Ala (DP-033),

Arg-Trp-His-Arg-Val-Ala-Val (DP-034) , Trp-His-Arg-Val-Ala-Val-Ile (DP-035), His-Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met (DP-036),

Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met-Gli (DP-037) , Thr-Leu-Fen-Leu-Ala-His-Gli (DP-038), Leu-Fen-Leu-Ala-His-Gli-Arg (DP-039),

Fen-Leu-Ala-His-Gli-Arg-Leu (DP-040), Leu-Ala-His-Gli-Arg-Leu-Val (DP-041), Ala-His-Gli-Arg-Leu-Val-Fen (DP-042),

His-Gli-Arg-Leu-Val-Fen-Met (DP-043), Gli-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg (DP-044), Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-Gli (DP-045),

Ala-Fen-Val-Leu-Arg-Gli-Lis (DP-046), Fen-Val-Leu-Arg-Gli-Lis-Ser (DP-047), Val-Leu-Arg-Gli-Lis-Ser-Leu (DP-048),

Leu-Arg-Gli-Lis-Ser-Leu-Tir (DP-049), Trp-His-Arg-Val-Ala- 19

Vai Ile Met (DP 051), Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met (DP-052), His-Arg-Pro-Ala-Val-Ile-Met (DP-053) , His-Arg-Val-Pro-Val-Ile-Met (DP-054), His-Arg-Val-Ala-Val-Pro-Met (DP-055),

Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg (DP-056), Leu-Pro-Fen-Val-Leu-Arg (DP-057), Arg-Arg-Pro-Ala-Fen-Val-Leu-Arg (DP-058), Thr-Arg-Ile-Ser-Leu-Gln-Val (DP-059), Ser-Leu-Gln-Val-Gln-Leu-Arg (DP-060), Gln-Val-Gln-Leu-Arg-Lis-Arg (DP-061), Arg-Val-Ser-Val-Arg-Trp (DP-062), Arg-Val-Ser-Val-Arg (DP-063), His-Pro-Arg-Leu-Val-Fen-Met (DP-064), Trp-His-Arg-Val-Ala-Val_Ile_Met~amida (DP-065), Trp-His-Arg-Val-Ala-Val-Ile-amida (DP-066), Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met-amida (DP-067) ,

Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met-Gli-amida (DP-068), Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-amida (DP-069), His-Gli-Arg-Leu-Val-Fen-Met-amida (DP-070), Thr-Leu-Fen-Leu-Ala-Arg (DP-071), Trp-His-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg (DP-072), Acetil-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-amida (DP-073) , Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-Lis-amida (DP-074), Thr-Leu-Fen-Leu-Ala-Arg-amida (DP-075) , Acetil-Thr-Leu-Fen-Leu-Ala-Arg-amida (DP-076), Thr-Leu-Fen-Leu-Ala-Arg-Lis (DP—077), Thr-Leu-Fen-Leu-Ala-Arg-Lis-amida (DP-078), Trp-His-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-amida (DP-079),

Trp-His-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-Lis-amida (DP-080), e Acetil-L-Leu-L-Pro-L-Fen-L-Asp-L-amida (LP-081) . D- indica D-aminoácidos e L- indica L-aminoácidos. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 1

Disrupção da estrutura secundária em folha-beta de fibrilas de Alzheimer por péptido 12-13mer, como avaliado através de espectropolarimetria CD

Os espectros de dicroismo circular (CD) de Αβ42, na presença ou ausência de péptidos sintéticos descritos no Exemplo 1, foram registados a 25°C num espectropolarímetro JASCO-810, utilizando uma cuvete de quartzo com uma faixa 20 de transmissão de 0,5 mm e na gama de 190-260 nm. 0 instrumento foi calibrado com uma solução aquosa de ácido canforsulfónico ( + ) . 0 instrumento foi então definido para coletar dados a uma largura de banda de 5 nm, tempo de resposta de 32 segundos, data pitch de 0,5 nm e uma velocidade de digitalização de lOnm/min. Cada espectro de CD foi numa média de 5 espectros, cada um realizado a partir de uma solução de replicação em separado. Os resultados de CD foram relatados como a Elipticidade Molar de Residuo (EMR) de Αβ42, após a subtração do espectro do solvente de fundo e/ou o espectro do péptido de teste. Para este estudo, a Αβ42 fibrilar (0,1 mg/m em TPBSF (10% de TFE, 150 mM NaF, 50 mM HNaP04, pH 7,4) foi incubada durante 3 dias a 37°C, na presença e ausência de vários péptidos 12-13mer a uma proporção (p/p) de Αβ42:péptido, préviamente à gravação dos espectros CD. A percentagem de disrupção da estrutura em folha-beta foi determinada pelo cálculo da percentagem de perda de elipticidade negativa a 218 nm em comparação com Αβ42 sozinha, após a subtração das placas correspondentes.

Os desruptores da estrutura secundária em folha-beta de Αβ42 entre os péptidos 12-13 mer análogos são dispostos em ordem de eficácia, como avaliada através da espectropolarimetria CD. Outros péptidos que são também eficazes, não são incluídos na lista. Os péptidos preferidos incluem, por ordem de eficácia:

Ala-Gli-Gln-Trp-His-Arg-Val-Ser-Val-Arg-Trp-Gli (DP-005), Asp-Gli-Arg-Trp-His-Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met-Gli (DP-006), Thr-Leu-Fen-Leu-Ala-His-Gli-Arg-Leu-Val-Fen-Met (DP-004), Gli-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-Gli-Lis-Ser-Leu-Tir (DP-015), Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met-Pro-Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met (DP-050), Gli-Trp-Arg-Val-Ser-Val-Arg-His-Trp-Gln-Gli-Ala (DP-017), Tir-eu-Ser-Lis-Gli-Arg-Leu-Val-Fen-Ala-Leu-Gli (DP- 21 003) , Gli-Met-Ile-Val-Ala-Val-Arg-His-Trp-Arg-Gli-Asp (ΌΡΟΙ0) , L-Arg-L-Lis-L-Arg-L-Leu-L-Gln-L-Val-L-Gln-L-Leu-L-Ser-L-Ile-L-Arg-L-Thr (DP-019), Met-Fen-Val-Leu-Arg-Gli-His-Ala-Leu-Fen-Leu-Thr (DP-016), Thr-Arg-Ile-Ser-Leu-Gln-Val-Gln-Leu-Arg-Lis-Arg (DP-013), Arg-Gln-Val-Fen-Gln-Val-Ala-Tir-Ile-Ile-Ile-Lis-Ala (DP-002), Arg-Gli-Leu-Val-Fen-His-Thr-Gli-Thr-Lis-Asn-Ser-Fen (DP-009), Gli-Asn-Ser-Thr-Ile-Ser-Ile-Arg-Ala-Pro-Val-Tir (DP-010), Val-Arg-Trp-Gli-Met-Gln-Gln-Ile-Gln-Leu-Val-Val (DP-Oll), Ala-Pro-Val-Asn-Val-Thr-AIa-Ser-Vai-Gin-Ile-Gin (DP—012), Ala—Lis—Ile —He — Ile-Tir-Ala-Val-Gln-Fen-Val-Gln-Arg (DP-014), e Ile-Ser-Asn-Val-Fen-Val-Gln-Arg-Leu-Ser-Leu-Ser (DP-008). DP-005, DP-006, DP-004 e DP-015 mostram uma disrupção fibrilar de Αβ42 > 75%, enquanto que DP-050, DP-017 e DP-003, mostram uma disrupção fibrilar de Αβ42 > 50%. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 2

Disrupção de fibrilas Αβ de Alzheimer por péptidos 12-13mer como avaliada através de fluorometria tioflavina T Vários péptidos sintetizados como referido no exemplo 1, foram testados quanto ao potencial de atividade de disrupção amilóide Αβ, usando uma variedade de ensaios in vitro. Um desses ensaios, fluorometria tioflavina T, que mede a quantidade de fibrilas amilóides (LeVine III, Protein Sei. 2:404-410, 1993; Amyloid: Int. J. Exp. Clin.

Invest. 2:1-6, 1995; Naiki and Nakakuki, Lab. Invest., 74:374-383, 1996; Castillo et al, J. Neurochem. 69:2452- 2465, 1997) foi utilizada para identificar péptidos sintéticos capazes de disrupção das fibrilas amilóides Αβ42. Para estes estudos, 0,1 mg/mL de Αβ42 (Bachem Inc) foi incubada em tubos de microcentrifuga a 37°C, durante 3 dias (em triplicado), quer sozinho ou na presença de 22 0,2mg/mL de péptido (a uma proporção em peso de 1:2 de Αβ :péptido) em TPBSF (10% de TFE, 150 mM de NaF, 50 mM de HNaP04, pH 7,4). Alíquotas de cinquenta yL foram colhidas para análise no dia 3, e aliquotas de 200 ul de 125pMde Tioflavina T em 62mM NaP04 (pH 6,0), foram adicionados para dar uma concentração final de Tioflavina T de 100μΜ e 62mM de NaP04. A emissão de fluorescência a 480 nm foi medida numa microplaca de 96 poços num fluorimetro (Labsystem) a um comprimento de onda de excitação de 450 nm. Para todas as determinações, qualquer fluorescência emitida pelos péptidos na presença do reagente de Tioflavina T, foi sempre subtraída de todas as leituras pertinentes. Estudos anteriores indicaram que concentrações crescentes de fibrilar A 42 fornecem um aumento proporcional na fluorescência na presença de ΙΟΟμΜ de Tioflavina T, descartando a presença de quaisquer efeitos de filtro interno desproporcionais, nesta concentração de Tioflavina T (Castillo et ai J. Neurochem. 69:2452-2465, 1997).

Os desruptores de Tioflavina T ligantes a Αβ42 entre os aminoácidos 12-13 do péptido análogo são classificados em ordem de eficácia. Os péptidos na ordem de eficácia, tal como determinada por fluorometria Tioflavina T, incluem, mas não estão limitados a Gli-Trp-Arg-Val-Ser-Val-Arg-His-Trp-Gln-Gli-Ala (DP- 017),

Vai-Arg-Trp-Gli-Met-Gln-Gln-Ile-Gln-Leu-Vai-Vai (DP-011), Gli-Met-Ile-Val-Ala-Val-Arg-His-Trp-Arg-Gli-Asp (DP-018), His-Gln-Thr-Trp-Thr-Arg-Asn-Leu-Gln-Val-Thr-Leu (DP-007), Arg-Lis-Arg-Leu-Gln-Val-Gln-Leu-Ser-Ile-Arg-Thr (DP-001), Ile-Ser-Asn-Val-Fen-Val-Gln-Arg-Leu-Ser-Leu-Ser (DP-008), Arg-Vai-AIa-Vai-Ile-Met-Pro-Arg-Vai-AIa-Vai-Ile-Met (DP-050), Asp-Gli-Arg-Trp-His-Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met-Gli (DP-006), Gli-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-Gli-Lis-Ser-Leu-Tir (DP-015) , Gli-Asn-Ser-Thr-Ile-Ser-Ile-Arg-Ala-Pro-Val-Tir (DP- 23 010), Arg-Gli-Leu-Val-Fen-His-Thr-Gli-Thr-Lis-Asn-Ser-Fen (DP-009) , Ala-Pro-Val-Asn-Val-Thr-Ala-Ser-Val-Gln-Ile-Gln (DP-012), Tir-eu-Ser-Lis-Gli-Arg-Leu-Val-Fen-Ala-Leu-Gli (DP-003) , Ala-Gli-Gln-Trp-His-Arg-Val-Ser-Val-Arg-Trp-Gli (DP-0 0 5), e Ala-Lis-Ile-Ile-Ile-Tir-Ala-Val-Gln-Fen-Val-Gln-Arg (DP-014). DP-017 e DP-011 demonstram uma disrupção fibrilar de Αβ42, DP-018 e DP-007 demonstram uma disrupção fibrilar de Αβ42 > 60%, enquanto DP-001, DP-008, DP-050, DP-006 e DP-015 demonstram uma disrupção fibrilar de Αβ42 > 40%. EXEMPLO 2

Disrupção da estrutura secundária em folha-β em fibrilas de Alzheimer pelos péptidos 6-9mer tal como avaliada por espectropolarimetria CD A espectropolarimetria de dicroismo circular (CD) é uma outra técnica in vitro utilizada para determinar a eficácia de um determinado péptido na disrupção da estrutura secundária em folha-β das Αβ-fibrilas. Espectro de CD de Αβ42, na presença ou ausência de péptidos sintéticos, foram registados a 25°C, num espectropolarímetro JASCO-810, utilizando uma cuvete de quartzo com uma faixa de

transmissão de 0,5 mm e na gama de 190-260 nm. O instrumento foi calibrado com uma solução aquosa de ácido canforsulfónico ( + ) . O instrumento foi então definido para coletar dados numa largura de banda de 5 nm, tempo de resposta de 32 segundos, data pitch de 0,5 nm, e uma velocidade de digitalização de lOnm/min. Cada espectro CD foi numa média de 5 espectros, cada um realizado a partir de uma solução de replicação em separado. Os resultados de CD foram relatados como uma Elipticidade Molar de Residuo 24 (EMR) de Αβ42, após a subtração do espectro do solvente de fundo e/ou o espectro de teste do péptido. Para este estudo, a fibrilar Αβ42 (0,1 mg/m em TPBSF (10% de TFE, 150 mM NaF, 50 mM HNaPC>4, pH 7,4) foi incubada durante 3 dias a 37°C, na presença e ausência de vários péptidos a uma proporção (p/p) de 1:2 de Αβ42rpéptido, préviamente à gravação dos espectros de CD. A percentagem de disrupção da estrutura folha-beta foi determinada através do cálculo da percentagem de perda de elipticidade negativa a 218 nm, em comparação com Αβ42 sozinha e após a subtração das placas correspondentes. A Figura 11 mostra os desruptores da estrutura folha-beta de Αβ42, entre os péptidos 6-9mer e análogos, classificados em ordem de eficácia, tal como avaliada por espectropolarimetria CD. Os péptidos preferidos, em ordem de eficácia incluem, mas não estão limitados a Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met-Gli-amida (DP-068), Trp-His-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-Lis-amida (DP-080), Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-Lis-amida (DP-074), Trp-His-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg (DP-072), Acetil-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-amida (DP-073), Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-amida (DP-069), Trp-His-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-amida (DP-079), Acetil-Thr-Leu-Fen-Leu-Ala-Arg-amida (DP-076), Trp-His-Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met (DP-051), Thr-Leu-Fen-Leu-Ala-Arg (DP-071), Thr-Leu-Fen-Leu-Ala-Arg-amida (DP-075), His-Arg-Val-AIa-Val-Ile-Met (DP-036), Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met-Gli (DP-037), Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg (DP-055), Thr-Leu-Fen-Leu-Ala-Arg-Lis-amida (DP-078), Trp-His-Arg-Val-Ala-Val-Ile (DP-035), Arg-Val-Ser-Val-Arg-Trp-Gli (DP-031), Ala, His-Gli-Arg-Leu-Val-Fen (DP-042), His-Gli-Arg-Leu-Val-Fen-Met (DP-043), Trp-His-Arg-Val-Ala-Val-Ile-amida (DP-066) , His-Gli-Arg-Leu-Val-Fen-Met-amida (DP-070), e His-Arg-Val-Ser-Val-Arg-Trp (DP-030). DP-068 demonstra uma disrupção da estrutura β-folha de Αβ42 > 90%, 25

Enquanto que DP-080, DP-074, DP-072, DP-073, DP-069, DP- 079, DP-076, DP-051, DP-071 e DP-075 todos demonstram uma disrupção da estrutura β-folha de Αβ42 > 60% (Figura 11). EXEMPLO DE REFERÊNCIA 3

Disrupção de fibrilas Αβ de Alzheimer por péptidos 6-9mer tal como avaliada por fluorometria de tioflavina T A fluorometria de Tioflavina T, a qual mede a quantidade de fibrilas amilóides (LeVine III, Protein Sei. 2:404-410, 1993; Amyloid: Int. J. Exp. Clin. Invest. 2:1-6, 1995;

Naiki and Nakakuki, Lab. Invest., 74:374-383, 1996;

Castillo et al, J. Neurochem. 69:2452-2465, 1997) foi também utilizada para determinar a eficácia de péptidos 6-9mer na disrupção de fibrilas amilóides Αβ42. Para estes estudos, 0,1 mg/mL de Αβ42 (Bachem Inc) foi incubada em tubos de microcentrifuga a 37°C, durante 3 dias (em triplicado), quer sozinho ou na presença de 0,2 mg/mL péptido (na proporção em peso de 1:2 de Aβ:péptido) em TPBSF (10% de TFE, 150mM NaF, 50 mM HNaP04, pH 7,4).

Aliquotas de cinquenta yL foram colhidas para análise no dia 3 e aliquotas de 200 ul de 125μΜ de Tioflavina T em 62mM NaPCg (pH 6,0), foram adicionados dando uma concentração final de Tioflavina T de 100μΜ e 62mM de NaPCp. A emissão de fluorescência a 480 nm foi medida num fluorimetro em microplacas 96 poços (Labsystem), a um comprimento de onda de excitação de 450 nm. Para todas as determinações, qualquer fluorescência emitida por péptidos na presença do reagente de Tioflavina T foi sempre subtraída de todas as leituras pertinentes. Estudos anteriores indicaram que concentrações crescentes de fibrilar Αβ42, origina um aumento proporcional na fluorescência, na presença de 100μΜ de Tioflavina T, 26 descartando a presença de quaisquer efeitos de filtro interno desproporcionais nesta concentração de Tioflavina T (Castillo et al J. Neurochem. 69:2452-2465, 1997). A figura 12 mostra os desruptores de Tioflavina T ligantes a Αβ42 entre os péptidos 6-9mer e análogos, classificados por ordem de eficácia. Os péptidos preferidos em ordem de eficácia incluem, mas não estão limitados a, Trp-His-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-Lis-amida (DP-080), Acetil-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-amida (DP-073), Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-Lis-amida (DP-074), Trp-His-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-amida (DP-079), Acetil-Thr-Leu-Fen-Leu-Ala-Arg-amida (DP-076), Trp-His-Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met (DP-051), Thr-Leu-Fen-Leu-Ala-Arg-Lis-amida (DP-078), Thr-Leu-Fen-Leu-Ala-Arg-amida (DP-075), Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-Gli (DP-045), Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met-Gli (DP-037), Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met (DP-052), His-Pro-Arg-Leu-Val-Fen-Met (DP-064), Thr-Leu-Fen-Leu-Ala-Arg-Lis (DP-077), Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg (DP-056), Arg-Val-Ser-Val-Arg-Trp-Gli (DP-031), Trp-His-Arg-Val-Ala-Val-Ile (DP-035), His-Arg-Val-Ser-Val-Arg-Trp (DP-030), Thr-Arg-Ile-Ser-Leu-Gln-Val (DP-059), Ala-His-Gli-Arg-Leu-Val-Fen (DP-042), Ser-Leu-Gln-Val-Gln-Leu-Arg (DP-060), His-Gli-Arg-Leu-Val-Fen-Met (DP-043), Arg-Val-Ser-Val-Arg-Trp (DP-062), Leu-Pro-Fen-Val-Leu-Arg (DP-057), e Ala-Fen-Val-Leu-Arg-Gli-Lis (DP-046). DP-080, DP-073, DP-074, DP-079, DP-076 e DP-051 todos demonstraram uma disrupção/inibição de fibrilas Αβ42 > 75 %, enquanto DP-078 e DP-075 demonstraram uma disrupção/inibição de fibrilas Αβ42 > 50 %. EXEMPLO 3

Ligação dos péptidos 6-9mer às fibrilas Αβ42 de Alzheimer 27 A capacidade de vários péptidos para ligarem-se a um substrato ligado a Αβ42 foi determinada por um ensaio de ligação em fase sólida, juntamente com a determinação de frações de péptidos não ligados, utilizando cromatografia liquida de alta pressão, ligada a um detetor seletivo de massa (HPLC/MSD; sistema Agilent 1100 HPLC). Os péptidos foram submetidos a HPLC utilizando uma coluna RP Synergi-Max (2 x 0,4 cm, 2 um) de Fennomenex, com uma taxa de fluxo de 1 mL/min e um gradiente de 0-60% de acetonitrilo em água, contendo 1% de ácido fórmico durante mais de 5,5 minutos. Os péptidos foram detetados, assim que saíram da coluna usando MSD SL (Agilent) . A MSD teve as seguintes configurações: monitorização de iões positivos em modo scan de 200-1200Da; voltagem do fragmentor, 150; secagem em fluxo de gás, 13 L/min N2; pressão do nebulizador, 45psi; temperatura de secagem do gás, 350°C; e voltagem capilar, 3500 volts. 0 ensaio de ligação de fase sólida foi realizado como se segue: aliquotas de 10 ug de Αβ42 foram ligadas a uma membrana de PVDF no fundo de uma microplaca de 96 poços (disponível de Millipore), de acordo com as instruções do fabricante. A placa foi deixada a secar e aliquotas de 150ul de 0,1 mg de péptidos 6-9mer foram aplicadas em cada poço. Cada péptido 6-9mer foi aplicado em triplicado nos poços que contêm Αβ42 (poços de teste) e, em triplicado, nos poços que não contêm Αβ42 (poços em branco). As placas contendo 16 diferentes péptidos 6-9mer foram incubadas a 37°C, durante 2 horas. O péptido não ligado em cada poço foi então transferido para frascos HPLC/MSD, para análise com as configurações acima descritas. Os péptidos recuperados dos poços sem Αβ42 foram considerados como o total de péptidos, ao passo que os péptidos recuperados a partir de poços com Αβ42, foram considerados como o total de péptidos ligados. As percentagens dos vários péptidos 28 ligados após 2h de incubação, foram então representados em gráfico (Figura 13). A Figura 13 mostra os ligantes de Αβ42 dentre os péptidos 6-9mer e análogos, classificados por ordem de eficácia. Os péptidos preferidos em ordem de eficácia incluem, mas não estão limitados a His-Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met (DP-036), Trp —His—Arg—Vai—AIa—Vai—Ile—amida (DP-066), His—Pro—Arg—

Leu-Val-Fen-Met (DP-064), Trp-His-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-Lis-amida (DP-080), Trp-His-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg (DP-072), Acetil-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-amida (DP-073), Ala-Fen-Val-Leu-Arg-Gli-Lis (DP-046), Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-amida (DP-069), Gli-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg (DP-044), Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-Lis-amida (DP-074), Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met-amida (DP-067), His-Arg-Val-Pro-Val-Ile-Met (DP-054), His-Arg-Val-Ser-Val-Arg-Trp (DP-030),Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg (DP-056) , His-Arg-Pro-Ala-Val-Ile-Met (DP-053),His-Gli-Arg-Leu-Val-Fen-Met-amida(DP-070), Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met-Gli-amida (DP-068), Ala-His-Gli-Arg-Leu-Val-Fen (DP-042), His-Gli-Arg-Leu-Val-Fen-Met (DP-043),Arg-Val-Ser-Val-Arg-Trp-Gli (DP-031), Fen-Leu-Ala-His-Gli-Arg-Leu(DP-040), Trp-His-Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-amida(DP-079) , Thr-Leu-Fen-Leu-Ala-Arg-Lis-amida(DP-078),Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met-Gli (DP-037), Gli-Arg-Trp-His-Arg-Val-Ala (DP-033) , Asp-Gli-Arg-Trp-His-Arg-Val (DP-032), Ala-Gli-Gln-Trp-His-Arg-Val (DP-026), Leu-Ala-Fen-Val-Leu-Arg-Gli (DP-045), e Arg-Trp-His Arg-Vai-AIa-Vai (DP-034). DP-036 e DP-066 demonstraram que houve >40% com ligação ao substrato ligado a Αβ42, enquanto DP-064 e DP-080 demonstraram que houve >30% com ligação, e DP-0072 e DP-073 demonstraram >20% com ligação (Figura 13). 29 EXEMPLO 4

Disrupção da estrutura secundária em folha-β das fibrilas de Alzheimer através dos péptidos 6-9mer como avaliada por espectropolarimetria CD A espectropolarimetria de dicroísmo circular (CD) é outra técnica in vitro utilizada para determinar a eficácia de um dado péptido na disrupção da estrutura secundária de folha-β de fibrilas Αβ. Os espectros de CD de Αβ42, na presença ou ausência de péptidos sintéticos 6-9mer péptidos foram registados a 25°C, num espectropolarimetro JASCO-810, utilizando uma cuvete de quartzo com uma faixa de

transmissão de 0,5 mm e na gama de 190-260 nm. O instrumento foi calibrado com uma solução aquosa de ácido canforsulfónico(+). O instrumento foi então definido para coletar dados numa largura de banda de 5 nm, tempo de resposta de 32 segundos, data pitch de 0,5 nm, e uma velocidade de digitalização de lOnm/min. Cada espectro de CD foi realizado numa média de 5 espectros, em que cada um realizado a partir de uma solução de replicação separada. Os resultados de CD foram relatados como a Elipticidade Molar de Resíduo (EMR) (mais) de Αβ42, após subtração do espectro do solvente de fundo e/ou o espectro do péptido teste. Para este estudo, a fibrilar Αβ42 (0,1 mg/mL) em TPBSF (10% de TFE, 150 mM NaF, 50 mM HNaP04, pH 7,4) foi incubada durante 3 dias a 37°C, na presença e na ausência de vários péptidos 6-9mer a uma proporção (p/p) de 1:2 de Αβ42:péptido, préviamente à gravação dos espectros de CD.

Os espectros de CD de apenas Αβ42, Αβ42 juntamente com péptido 6-9mer e apenas o péptido 6-9mer, são apresentados na figura 7, com um resumo geral na Figura 8. 30 A Figura 7 mostra o espectro de CD de 0,1 mg/mL de Αβ42 após 3 dias de incubação (linha continua). Tanto a elipticidade negativa a 218 nm e a elipticidade positiva a 195 nm, indicam a presença de estrutura secundária em folha-beta. Adicionalmente, na Figura 7 encontra-se o espectro de CD de 0,1 mg/mL de Αβ42, na presença de 0,2 mg/mL de DP-074, depois de 3 dias de incubação (linha pontilhada), com correção para o espectro do péptido DP-074. A perda significativa de elipticidade negativa a 218 nm na presença de DP-074, indica uma perda de estrutura em folha-beta em Αβ42. A Figura 7 mostra o espectro de CD de 0,2 mg/mL de DP-074 sozinho (linha pontilhada), com elipticidades positivas e máximos por volta de 200 nm, indicando uma espiral aleatória invertida, consistente com um aminoácido de um péptido com muito pouca estrutura em folha-beta. Também mostrados na Figura 7, para comparação, são os espectros de CD de 0,1 mg/mL de Αβ42, após 3 dias de incubação (linha continua). A Figura 8 mostra as elipticidades CD 0,1 mg/mL de Αβ42 a 218 nm, na presença de 0,2 mg/mL de vários péptidos 6-9mer, após 3 dias de incubação e após correção para elipticidades CD de vários péptidos. Os péptidos aqui testados são DP-065 a LP-081 e polilisina. Deve notar-se que, os péptidos DP-065, DP-067 e LP-081 provocaram um aumento da elipticidade negativa em 218 nm, indicando que, surpreendentemente, estes péptidos promovem a formação de estrutura em folha-beta de Αβ42. Consulte a Figura 11 para o ranking da eficácia de vários péptidos 6-9mer. 31 EXEMPLO 5

Disrupção dose-dependente da estrutura secundária em folha-β das Fibrilas de Alzheimer através dps péptidos 6-9mer tal como avaliado por espectropolarimetria CD A espectropolarimetria de dicroismo circular é uma outra técnica in vitro utilizada para determinar a eficácia de um dado péptido na disrupção da estrutura secundária de folha-β de fibrilas Αβ. Os espectros de CD de Αβ42, na presença ou ausência de péptidos sintéticos 6-9mer péptidos foram registados a 25°C, num espectropolarimetro JASCO-810, utilizando uma cuvete de quartzo com uma faixa de transmissão de 0,5 mm e na gama de 190-260 nm. O instrumento foi calibrado com uma solução aquosa de ácido canforsulfónico ( + ) . O instrumento foi então definido para coletar dados numa largura de banda de 5 nm, tempo de resposta de 32 segundos, data pitch de 0,5 nm, e uma velocidade de digitalização de lOnm/min. Cada espectro de CD foi realizado numa média de 5 espectros, em que cada um realizado a partir de uma solução de replicação separada. Os resultados de CD foram relatados como a Elipticidade

Molar de Residuo (EMR) (mais) de Αβ42, após subtração do espectro do solvente de fundo e/ou o espectro do péptido teste. Para este estudo, a fibrilar Αβ42 (0,1 mg/mL) em TPBSF (10% de TFE, 150 mM NaF, 50 mM HNaP04, pH 7,4) foi incubada durante 3 dias a 37°C, na presença e na ausência de vários péptidos 6-9mer a uma proporção (p/p) de 1:0,1, 1:1, 1:2 e 1:10 de Αβ42:péptido, préviamente à gravação dos espectros de CD.

Os espectros de CD de apenas Αβ42, Αβ42 juntamente com péptido 6-9mer e apenas o péptido, são apresentados na figura 9, com um resumo geral na Figura 10. 32 A Figura 9 mostra o espectro de CD de 0,1 mg/mL de Αβ42 após 3 dias de incubação (azul). Tanto a elipticidade negativa a 218 nm e a elipticidade positiva a 195 nm, indicam a presença de estrutura secundária em folha-beta. Adicionalmente, na Figura 9 encontra-se o espectro de CD de 0,1 mg/mL de Αβ42, na presença de 0,01, 0,1, 0,2 e 0,5 mg/mL de péptido DP-074, depois de 3 dias de incubação, com correção para o espectro do péptido DP-074. A perda significativa de elipticidade negativa a 218 nm na presença de DP-074, indica uma perda de estrutura em folha-beta em Αβ42. O efeito dose-dependente é apenas observado a 0,2 mg/mL e a concentrações inferiores. A 0,5 mg/mL de péptido DP-074 a tendência cessa e o curso é invertido. Tal é, possivelmente, devido à elevada concentração do péptido de teste, provocando uma absorção significativa da luz recebida. A Figura 9 mostra o espectro de CD de 0,01, 0,1, 0,2 e 0,5 mg/mL do péptido DP-074 sozinho, com elipticidades positivas e máximos de cerca de 200 nm, indicando uma espiral aleatória invertida, consistente com um D-aminoácido do péptido, com uma estrutura muito pouco em folha-beta. É ainda, mostrada, na Figura 9, para comparação o espectro de CD de 0,1 mg/mL de Αβ42 após 3 dias de incubação (azul). EXEMPLO 6

Estabilidade dos Péptidos em Soro Humano

Uma característica desejável de qualquer potencial agente terapêutico ou um candidato a fármaco é a capacidade de resistir à degradação pelas enzimas presentes no sangue, de modo a haver o tempo suficiente para que possa atingir o seu destino alvo. Um dos testes in vitro utilizados para 33 determinar a estabilidade dos péptidos aqui descritos, é através da incubação desses peptídeos em soro humano e a determinação do nivel dos péptidos intactos (e possível degradação) em vários pontos temporais. Aliquotas de cinquenta ul de vários péptidos foram adicionadas a 700ul de soro humano (em amostras em triplicado) . Aliquotas de cem ul foram então retiradas nos tempos 0, 2, 4, 6, 24 e 32 horas, imediatamente seguida da adição de 200 ul de etanol (ou de 20ul de ácido trif luoroacético ou de 300ul de metanol) e centrifugado a 14.000 xg (Eppendorf) durante 10 minutos. O nível de péptidos intactos no sobrenadante foi determinado por LC/MS (Agilent HPLC/MS SL Série 1100) . MS monitorizou cada peptídeo assim que saía do HPLC, utilizando o modo SIM ião positivo, monitorizando as massas correspondentes aos iões de carga individual, dupla e tripla dos péptidos. O pico no cromatograma do ião resultante foi integrado para obter-se a abundância iónica total em cada amostra. A média de determinações em triplicado da abundância iónica total, para cada ponto temporal de incubação de soro foi, em seguida, representada como uma função do tempo de incubação do soro. A maioria das enzimas degradantes de péptidos no corpo, reconhecem os péptidos naturais compostos com todos L-aminoácidos. Como os péptidos consistem em D-aminoácidos, a sua degradação nos fluidos biológicos será, provavelmente, retardada, tal como demonstrado no presente Exemplo e nas figuras seguintes. A Figura 14 mostra o nível do péptido DP-068 no soro humano como uma função do tempo durante uma incubação de 32 horas. O péptido DP-068 é constituído por D-aminoácidos, e como mostrado na Figura 14, é resistente à degradação no soro até e incluindo, 32 horas. 34 A Figura 15 mostra o nivel do péptido DP-074 no soro humano como uma função do tempo durante uma incubação de 32 horas. 0 péptido DP- 74 é constituído por D-aminoácidos e como é mostrado na Figura 15, é resistente à degradação no soro até e incluindo, 32 horas.

Outros dados estão ilustrados como se segue: A Figura 1 mostra as sequências dos péptidos e desenhos para os péptidos 5-13 mer, DP-068 e DP-074. A Figura 2 mostra os espectros de CD de Ab42 juntamente com a polilisina e DP-065 a DP-072 na concentração (p/p) de 1:2 de Ab42/péptido. A Figura 3 mostra os espectros de CD de Ab42 mais DP-065 a DP-072 a (1:0,1, 1:1, 1:2, 1:5), com a Figura 4 como um resumo da resposta CD à dose de Ab42+/-DP-065 a DP-072. A Figura 5 é um resumo de Thio T de Ab42+/-DP65-72 (1:0,1, 1:1, 1:2, 1:5) e da lisina, enquanto a Figura 6 é um resumo da classificação Thio T 65-72.

Outros aspectos e utilizações

Uma aplicação terapêutica é a utilização dos péptidos da invenção como ligantes ou sequestradores de Αβ, inibidores da formação de fibrila amilóide Αβ, inibidores da deposição de fibrila amilóide Αβ, inibidores da acumulação e/ou persistência de fibrila amilóide Αβ, na doença de Alzheimer, síndrome de Down e outras desordens envolvendo fibrilogénese Αβ. "Péptido" refere-se a dois ou mais aminoácidos ligados entre si por ligações peptídicas, como é conhecido dos peritos na especialidade. Os péptidos preferidos são aqueles aqui descritos, mas pode também, vantajosamente, 35 incluir péptidos que possuam pelo menos 70% e, mais preferivelmente, 80-90% de identidade a um péptido divulgado. "% de identidade", como é aqui utilizado, para os péptidos significa os mesmos aminoácidos no mesmo local. Assim, dois péptidos de 10 aminoácidos são 90% idênticos se a sua justaposição mostrar que a colocação e a identidade de cada um dos aminoácidos é idêntica, exceto para um aminoácido. Se um péptido de dez aminoácidos é justaposto com um outro péptido de dez aminoácidos e a colocação e a identidade dos aminoácidos é idêntica, exceto para dois aminoácidos, então, os dois péptidos de 10 aminoácidos têm uma identidade de 80% um com o outro.

Os péptidos descritos são produzidos através de processos químicos de síntese. A síntese química de péptidos é uma área técnica em rápida evolução e os métodos de síntese de péptidos em fase sólida estão bem descritos nas seguintes referências: Merrifield, J.Amer.Chem.Soc . 85:2149-2154, 1963; Merrifield, Science 232:341-347, 1986; Fields, Int.J.Polypeptide Prot. Res. 35, 161, 1990. Os péptidos divulgados também podem ser utilizados como reagentes de investigação e materiais para a descoberta de tratamentos e diagnósticos para doenças humanas. A via de administração inclui a via oral, intravenosa, intra-peritoneal, intra-muscular, subcutânea, intra-articular, intra-nasal, intra-tecal, intra-dérmica, transdérmica ou por inalação. Uma dose eficaz de cada um dos péptidos aqui revelados, como potenciais agentes terapêuticos para utilização no tratamento de amiloidose Αβ na doença de Alzheimer e outras desordens, é de cerca de lyg a 500 mg/kg de peso corporal, por administração única, que pode ser facilmente determinada por um perito na especialidade. A dosagem depende da idade, sexo, saúde e peso do indivíduo, tipo de tratamento concomitante, se 36 algum, e frequência de tratamento. Outras dosagens eficazes encontram-se em limites superiores de 100 mg/kg de peso corporal, de 50 mg/kg de peso corporal, 25 mg/kg de peso corporal e 10 mg/kg de peso corporal.

Como aqui utilizado, os polipéptidos podem consistir em L-aminoácidos, D-aminoácidos ou uma mistura de ambas as formas. Os aminoácidos na natureza, geralmente consistem em L-aminoácidos. No entanto, a substituição com D-aminoácidos demonstra, geralmente, um aumento na biodisponibilidade, devido à menor degradação nos fluidos biológicos (por exemplo, no plasma) e uma penetração reforçada através da barreira hematoencefálica. Os polipéptidos que possuem uma sequência idêntica de aminoácidos à encontrada num péptido descrito mas em que todos ou parte dos L-aminoácidos foram substituídos por D-aminoácidos, é uma parte do desenvolvimento divulgado de terapias para o tratamento da doença de Alzheimer e outras amiloidoses Αβ.

Tal como aqui utilizado, "transportador farmaceuticamente aceitável" inclui qualquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotónicos e retardadores da absorção e semelhantes, que são fisiologicamente compatíveis. Numa forma de realização, o veículo é adequado para administração parentérica. De preferência, o veículo é adequado para a administração no sistema nervoso central (por exemplo, intraespinalmente ou intracerebralmente) . Alternativamente, o veículo pode ser adequado para a administração intravenosa, intraperitoneal ou intramuscular. Numa outra forma de realização, o veículo é adequado para administração oral. Os veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem soluções aquosas ou dispersões estéreis e pós esterilizados para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões injectáveis 37 estéreis. A utilização de tais meios e agentes para as substâncias farmaceuticamente ativas é bem conhecida na técnica. Exceto, na medida em que, qualquer meio convencional ou agente é compatível com o composto ativo, a sua utilização nas composições farmacêuticas é contemplada. Compostos ativos suplementares podem também ser incorporados nas composições.

Tal como é aqui utilizado, "amiloidoses Αβ" refere-se a doenças amilóides que envolvem a formação, a deposição, a acumulação e/ou a persistência de Αβ (ou seja, a proteina beta-amilóide), incluindo, mas não limitado a Αβ que contêm 39-43 aminoácidos mas, mais preferivelmente, a Αβ de 1-40 aminoácidos, ou a Αβ de 1-42 aminoácidos e suas misturas ou fragmentos. "Amiloidoses Αβ" e "doenças de fibrilogénese Αβ" incluem, mas não estão limitados à doença de Alzheimer, sindrome de Down, formas de amiloidose familiar, a amiloidose vascular cerebral e hemorragia cerebral, angiopatia amilóide de cistatina C, hemorragia cerebral hereditária com amiloidose (tipo holandês), hemorragia cerebral hereditária com amiloidose (tipo islandês) e inclusão corpo miosite.

Aplicações Terapêuticas

Nas formas de realização preferidas, os péptidos da invenção, os fragmentos, os análogos e seus derivados são utilizados como agentes terapêuticos inibidores de amilóides. Os péptidos da invenção, os fragmentos, os análogos e os seus derivados podem ser sintetizados utilizando técnicas comuns (isto é, utilizando um sintetizador automatizado). Numa forma de realização preferida, péptidos especificos da invenção, fragmentos, análogos ou os seus derivados podem ser utilizados para a 38 ligação ou o sequestro de Αβ amilóide, a inibição da formação de Αβ amilóide, a deposição, a acumulação e/ou a persistência num dado paciente. Da mesma forma, numa outra forma de realização preferida, os anticorpos anti-idiotipicos contra os péptidos da invenção, fragmentos, análogos ou seus derivados (como acima descrito) podem ser dados a um paciente humano, como potenciais anticorpos de ligação ou sequestradores de Αβ, que podem causar a disrupção ou a inibição da formação de Αβ amilóide, deposição, acumulação e/ou persistência num determinado paciente.

Uma formulação para utilização no tratamento de amiloidoses Αβ compreende uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um péptido da invenção, de um fragmento, análogo ou de um seu derivado, de um anticorpo anti-idiotipico ou de um fragmento do anticorpo anti-idiotipico, que inclui um veiculo farmaceuticamente aceitável. As formulações podem adicionalmente incluir outros anticorpos ou conjugados. Para a administração parentérica, as formulações preferidas incluem soluções estéreis aquosas ou não aquosas, suspensões e emulsões, que podem conter agentes auxilares ou excipientes, que são conhecidos na técnica. As formulações com um anticorpo anti-idiotipico podem ser administradas utilizando modos convencionais de administração incluindo, mas não limitado a, administração tópica, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal, oral, intralinfática, intramuscular ou intralumbar. A administração intravenosa consiste no modo de administração preferido. As formulações farmacêuticas, tais como comprimidos, pílulas, drageias, cápsulas de gelatina moles e duras, pastilhas, saquetas, hóstias, cápsulas vegetais, gotas líquidas, elixires, suspensões, emulsões, soluções, xaropes, sacos de chá, aerossóis (como um sólido ou num meio líquido), supositórios, soluções injectáveis estéreis, 39 pós embalados estéreis, podem ser preparadas de acordo com os métodos de rotina e que são conhecidos na técnica. A administração de uma tal composição pode ser feita por via oral ou através de várias vias parentéricas, tais como subcutânea, intravenosa, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intranasal, transdérmica, vias anal ou bucal. A administração parentérica pode ser por injeção em bolus ou por perfusão gradual ao longo do tempo. Os modos preferidos de administração das formulações dos péptidos da invenção, dos fragmentos, dos análogos ou dos seus derivados consistem na administração oral, intravenosa ou aplicação intranasal.

Os péptidos da invenção, os fragmentos, os análogos e os seus derivados, podem ser administrados sob a forma de uma formulação farmacêutica, por quaisquer meios que atinjam a sua finalidade, por exemplo, no tratamento de patologias, tais como a doença de Alzheimer e outras doenças Αβ amilóides, ou de outras patologias relacionadas. As formulações terapêuticas podem ser de uma variedade de formas de dosagem, em que a forma preferida depende do modo de administração e da aplicação terapêutica. A dosagem ideal, frequência, duração e modos de administração para um paciente individual podem ser facilmente determinados através de protocolos convencionais, conhecidos pelos peritos na especialidade. É entendido que a dosagem do péptido da invenção, do fragmento, derivado e do seu análogo, administrado in vivo ou in vitro irá ser dependente da idade, sexo, saúde e peso do indivíduo, tipo de tratamento concomitante (se houver), a frequência do tratamento e da natureza do efeito desejado. A dosagem mais preferencial será adaptada para o sujeito individual tal como é compreendido e determinável 40 por um perito na especialidade, sem experimentação indevida.

Um regime tipico para prevenir, suprimir ou tratar as patologias, tais como, a amiloidose da doença de Alzheimer, compreende a administração de uma quantidade eficaz de um péptido da invenção, de um fragmento, derivado ou de um seu análogo, administrado ao longo de um periodo de um a vários dias, até e incluindo entre uma semana e cerca de 72 meses. A dose total necessária para cada tratamento pode ser administrada em doses múltiplas ou numa dose única. Um péptido da invenção, fragmento, derivado e um seu análogo pode ser administrado sozinho ou em conjunto com outros terapêuticos dirigido para as patologias, tais como, a doença de Alzheimer ou outras doenças amilóides de Αβ, tal como aqui descrito.

As quantidades eficazes de um péptido da invenção, de um fragmento, derivado e de um seu análogo, são cerca de 0,01 yg a cerca de lOOmg/kg de peso corporal e de preferência de cerca de 10 yg a cerca de 50 mg/kg de peso corporal, tal como 0, LO O 0,07, O o O LO O \—1 0,7, 0,9, 1, 2, 5, 10, 20, 25, 30, 40 , 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ou 100 mg/kg.

As composições farmacêuticas compreendendo pelo menos um péptido da invenção ou anticorpo anti-idiotípico, podem também incluir soluções adequadas para administração por via intravenosa, subcutânea, dérmica, nasal, oral, mucosa, por via rectal ou por injeção ou oralmente e conter cerca de 0,01 a 99 porcento, de preferência cerca de 20 a 75 porcento de um componente ativo (isto é, péptidos ou anticorpos), em conjunto com o excipiente. As composições farmacêuticas para administração oral incluem pílulas, 41 comprimidos, drageias, cápsulas de gelatina moles e duras, pastilhas, saquetas, hóstias, cápsulas vegetais, gotas liquidas, elixires, suspensões, emulsões, soluções e xaropes. 0 péptido da invenção, o fragmento, análogo e seu derivado, para o tratamento da doença de Alzheimer e outras amiloidoses Αβ do sistema nervoso central, podem ser modificados de forma a atravessar a barreira hematoencefálica. São conhecidas na técnica várias modificações para aumentar o transporte através da barreira hematoencefálica (para revisão de tais modificações, por exemplo, ver Pardridge W.M. (1994) Trends in Biotechnol. 12:239-245; Van Bree, J. et al (1993) Pharm World Sei. 15:2-9; and Pardridge W.M. (1992) Pharmacol. Toxicol. 71:3-10). Uma abordagem consiste em aumentar a lipofilicidade (log P) do péptido através de uma ligação covalente do terminal amino ou carboxilico de um ácido gordo ou um grupo acilo (tal como acetilo). Outra abordagem consiste em conjugar o péptido a uma proteína, que normalmente sofre transcitose mediada por absorção ou transcitose mediada por recetores, através da barreira hematoencefálica. Estas proteínas incluem ligandos para os recetores endoteliais capilares cerebrais, tais como um anticorpo monoclonal para o recetor de transferrina, histonas, biotina, ácido fólico, niacina, ácido pantoténico ou glicopéptidos. Outra abordagem é a ligação do péptido a um composto altamente carregado positivamente, tal como a lisina, polilisina, arginina, poliarginina, péptido de lisina-arginina, putrescina, espermidina, espermina, etc., todos eles são conhecidos para facilitar a passagem através da barreira hematoencefálica, presumivelmente através da ligação a um recetor. 42

Uma outra abordagem para melhorar o transporte dos péptidos através da barreira hematoencefálica, é por encapsulação num vetor transportador, tais como lipossomas ou microesferas poliméricas, de preferência com carga positiva, pela mesma razão que acima descrita. 0 vetor transportador pode também ser modificado para atingir os recetores de transporte da barreira hematoencefálica, tais como o recetor de transferrina, através da ligação do péptido, por exemplo, a um anticorpo contra o receptor da transferrina.

Uma outra abordagem consiste na co-administração do péptido juntamente com agentes que permeabilizam a barreira hematoencefálica, tais como a bradicinina ou um agonista de bradicinina. 0 fármaco permeável à barreira hematoencefálica é uma caracteristica desejável para os medicamentos para aplicação no sistema nervoso central, em geral. No entanto, as formas de realização descritas não têm que, necessariamente, preencher os requisitos de permeabilidade da barreira hematoencefálica, a fim de cumprir com os propósitos pretendidos (por exemplo, tratamento eficaz da doença de Alzheimer e outras amiloidoses) . A sequestração periférica de Αβ pelos péptidos da invenção, fragmentos, análogos e derivados dos mesmos, e os anticorpos anti-idiotípicos, irá resultar no movimento de Αβ do cérebro para a circulação periférica, esgotando a Αβ do cérebro, inibindo a formação de fibrilas amilóide Αβ no cérebro e/ou causando a dissolução de fibrilas amilóides pré-formadas de Αβ no cérebro. Tal deve-se ao facto de que, como demonstrado em estudos anteriores, Αβ atravessa livremente a barreira hematoencefálica (Poduslo et al., Neurobiol. Dis. 4:27-34, 1997; Ghilardi et al., Neuroreport 17:2607- 43 11, 1996; Pluta et al., Neurorepbrt. 7:1261-51996, 1996; Zlokovic, Neurobiol Dis. 4:23-6, 1996). 0 péptido da invenção, fragmento, derivado e o seu análogo para o tratamento da doença de Alzheimer e outras amiloidoses Αβ do sistema nervoso central, pode ser administrado através de várias formas. Os métodos de administração incluem, mas não estão limitados a administração sistémica, administração parentérica, isto é, via intraperitoneal, intravenosa, perioral, subcutânea, intramuscular, intra-arterial, intradérmica, intramuscular, intranasal, epidural e oral. Numa forma de realização preferida, um péptido da invenção, fragmento, derivado e um seu análogo pode ser administrado directamente para o fluido cerebrospinal através de injeção intraventricular. Numa forma de realização preferida, o composto de sequência do grupo A, B ou C, fragmento, análogo e um seu derivado pode ser administrado diretamente para o fluido cerebrospinal através de injeção intraventricular. Numa forma de realização específica, pode ser desejável administrar um péptido da invenção, fragmento, derivado e um seu análogo localmente na área ou tecido em necessidade de tratamento; tal pode ser conseguido através de, por exemplo, e não como forma de limitação, infusão local durante a cirurgia, a aplicação tópica, por injeção, através de infusão utilizando uma cânula com uma bomba osmótica, por meio de um cateter, por meio de um supositório ou por meio de um implante.

Ainda numa outra forma de realização, um péptido da invenção, fragmento, derivado e um seu análogo pode ser administrado através de um sistema de libertação controlada, tal como uma bomba osmótica, bem calibrada. Ainda numa outra forma de realização, um sistema de libertação controlada pode ser colocado na proximidade do 44 alvo terapêutico, isto é, o cérebro, requerendo assim apenas uma fração da dose sistémica.

Num outro aspecto, os compostos peptidomiméticos modelados a partir de péptidos da invenção, identificados como ligantes de Αβ ou outras roteinas amilóides, servem como potentes inibidores da formação amilóide, deposição, da acumulação e/ou da persistência, na doença de Alzheimer e outras amiloidoses Αβ. A modelagem peptidomimética é implementada através de procedimentos padrão, conhecidos pelos peritos na especialidade. Estes compostos peptidomiméticos podem ser administrados com as formulações, dosagens, frequências, duração e vias, conforme descrito acima, para a finalidade terapêutica no tratamento de amiloidose Αβ.

Aplicações de diagnóstico

Nos métodos revelados, Αβ amilóide pode ser colocada em contacto com um péptido divulgado, quer in vitro ou in vivo. Assim, o termo "em contacto com" pretende abranger tanto a incubação dos anticorpos anti-idiotípicos e péptidos com a preparação Αβ amilóide in vitro e a entrega dos péptidos e anticorpos anti-idiotípicos para um local in vivo onde está presente a Αβ amilóide. Uma vez que os péptidos e os anticorpos anti-idiotípicos interagem com Αβ amilóide, eles podem ser utilizados para detetar Αβ amilóide, quer in vitro ou in vivo. Por conseguinte, os compostos podem também ser utilizados como agentes de diagnóstico, para detetar a presença ou ausência de Αβ amilóide numa amostra biológica ou in vivo num indivíduo. Além disso, a deteção de Αβ amilóide, utilizando compostos, pode ser utilizada para diagnosticar amiloidose Αβ, num sujeito. 45 45 urease,

Numa forma de realização, um composto é utilizado in vitro para detetar e quantificar a Αβ amilóide em amostra (tais como, o liquido cefalorraquidiano de pacientes com DA, pacientes suspeitos de terem DA, uma pessoa com um historial familiar de DA ou um adulto normal). Para auxiliar na deteção, o composto pode ser modificado com uma substância detetável. A Αβ amilóide, na amostra, pode ser imobilizada e o composto com a substância detetável é colocado em contacto com a Αβ amilóide imobilizada ou a amostra, tal como, nas secções de tecido. 0 composto não acoplado remanescente é removido e o composto ligado a Αβ pode ser detetado. Alternativamente, o composto não ligado que é inversamente proporcional ao composto ligado e consequentemente, a quantidade de Αβ na amostra, pode ser detetada através de vários meios, tais como espectrometria de massa e outras determinações espectrometricas, incluindo fluorescência, fosforescência e a absorvância de vários comprimentos de onda de luz UV a infravermelho, até a ondas de rádio, tal como para RMN. Por exemplo, a substância detetável pode ser a biotina (isto é, um péptido da invenção biotinilado com terminal amino, que pode ser detetada utilizando avidina marcada com uma enzima. A enzima, por sua vez, quanto mais tarde for exposta a um substrato apropriado, irá reagir com o substrato de tal modo que haverá a produção de uma porção química que pode ser detetada, por exemplo, por espectrofotometria, fluorométricos ou através de meios visuais. As enzimas que podem ser utilizadas, de forma detetável, para marcar o anticorpo incluem, mas não estão limitadas a, desidrogenase malato, nuclease estafilococos, isomerase delta-5-esteróide, desidrogenase de álcool de levedura, desidrogenase alfa-glicerofosfato, isomerase de fosfato de triose, peroxidase, fosfatase alcalina, asparaginase, oxidase glucose, betagalactosidase, ribonuclease, 46 catalase, desidrogenase glucose-6-fosfato, glucoamilase e acetilcolinesterase. A deteção pode ser realizada através de métodos colométricos que empregam um substrato cromogénico para a enzima. A deteção pode ser realizada através de métodos colométricos que empregam um substrato cromogénico para a enzima. A deteção pode também ser conseguida através de comparação visual da extensão da reação enzimática de um substrato com semelhantes padrões preparados (see Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory 1988; Ausubel et al, eds., Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience, N.Y. 1987, 1992).

Os compostos selecionados divulgados também podem ser utilizados para detetar quantitativamente ou qualitativamente a Αβ amilóide numa amostra biológica. Tal pode ser conseguido através de técnicas de imunofluorescência, que empregam um composto divulgado marcado por fluorescência, acoplado com luz microscópica, citometria de fluxo e deteção fluorométrica. A deteção pode ser realizada utilizando qualquer um de uma variedade de outros imunoensaios. Por exemplo, por radiomarcação do composto. Uma boa descrição deste ensaio pode ser encontrada em Laboratory Techniques and Biochemistry in Molecular Biology, by Work et al, North Holland Publishing Company, NY (1978), com particular referência ao capítulo intitulado "An Introduction to Radioimmune Assay and Related Techniques" por Chard. 0 isótopo radioativo pode ser detetado através de meios, tais como, a utilização de um contador gama, um contador de cintilação ou por auto-radiografia. E também contemplado a marcação do composto com um composto fluorescente. Quando o composto marcado fluorescentemente é 47 exposto à luz com um comprimento de onda adequado, a sua presença pode então ser detetada devido à fluorescência. Entre os compostos de marcação fluorescente mais comummente utilizados, encontram-se o isotiocianato de fluoresceina, rodamina, ficoeritrina, ficocianina, aloficocianina, o-ftaldeído e fluorescamina, que estão comercialmente disponíveis, por exemplo, a partir de Molecular Probes, Inc. (Eugene, Oregon, U.S.A.).

Os compostos também podem ser marcados de forma detetável acoplando-os a um composto quimioluminescente. A presença de um composto marcado quimioluminescente, é então determinada através da deteção da presença de luminescência que surge no decurso de uma reação química. Exemplos de compostos de marcação quimioluminescentes, particularmente úteis, são o luminol, isoluminol, éster de acridinio aromático, imidazole, sal de acridinio e éster de oxalato.

Da mesma forma, um composto bioluminescente pode ser utilizado para marcar um composto. A bioluminescência é um tipo de quimiluminescência encontrada em sistemas biológicos em que uma proteína catalítica aumenta a eficiência da reação quimioluminescente. A presença de uma proteína bioluminescente é determinada através da deteção da presença de luminescência. Compostos bioluminescentes importantes para fins de marcação são a luciferina, Lucifers e aequorina.

Os compostos também podem ser utilizados histologicamente, como em microscopia de imunofluorescência ou imunoelectrónica, para a deteção in situ de Αβ amilóide. A remoção de um espécime histológico de um paciente e ao providenciar o composto marcado a tal espécime, pode realizar a deteção in situ. 0 composto é de preferência proporcionado através de aplicação ou por sobreposição do 48 composto marcado (ou fragmento) a uma amostra biológica. Através da utilização de tal procedimento, é possivel determinar não só a presença de Αβ amilóide, mas também a sua distribuição no tecido examinado. Assim, aqueles que são peritos na área irão, prontamente, perceber que qualquer um dos vários métodos histológicos (tais como procedimentos de coloração) pode ser modificado, de modo a alcançar tal deteção in situ.

Os compostos que interagem com Αβ ou os seus derivados também são aqui revelados. Os compostos podem ser utilizados para uma série de importantes aplicações de diagnóstico e/ou terapêuticas, tal como aqui descrito. Num aspecto, os péptidos que se ligam a Αβ podem ser utilizados para uma análise de hibridação do ligando (utilizando técnicas padrão de hibridação do ligando, conhecidas pelos peritos na especialidade) para detetar a presença de fragmentos de proteínas Αβ amilóides, em tecidos humanos e em tecidos de outras espécies. A análise de hibridação do ligando também pode ser utilizada para a determinação do tamanho aparente de cada fragmento da proteína amilóide. Além disso, a hibridação do ligando seguida por densitometria (conhecida pelos peritos na especialiade) pode ser utilizada para quantificar e comparar os níveis de cada um dos péptidos nas amostras de tecido, fluidos biológicos ou biópsias obtidas de indivíduos com doenças específicas (tais como, as doenças amilóides), em comparação com amostras de tecido, fluidos biológicos ou biópsias obtidas de indivíduos ou controles normais. Os fluidos biológicos incluem, mas não estão limitados a, sangue, plasma, soro, fluido cefalorraquidiano, expectoração, saliva, urina e fezes.

Numa outra forma de realização, um composto é utilizado in vivo para detetar e, se desejado, quantificar, a deposição 49 de Αβ amilóide num sujeito, por exemplo, para auxiliar no diagnóstico da Αβ amiloidose no sujeito. Para auxiliar na deteção, o composto pode ser modificado com uma substância detetável, de preferência iodo radioactivo ou 99mTc. Os métodos para a marcação de compostos peptidicos com tecnécio são conhecidos na área técnica. Pode ser escolhido m grupo modificador que fornece um local, no qual o grupo de quelação para 99mTc pode ser introduzido, tal como um derivado de ácido eólico, que tem um grupo amino livre. São também facultados péptidos da invanção marcados com iodo radioactivo, através do seu aminoácido aromático, ou já presente ou incorporado, para efeitos de marcação. Qualquer um dos vários isótopos de iodo radioactivo pode ser incorporado para criar um agente de diagnóstico. Preferencialmente, 123I (meia-vida = 13,2 horas) pode ser utilizado para toda a cintigrafia corporal, 124I (meia-vida = 4 dias) ou 18F para a tomografia por emissão de positrões (PET) , 125I (meia-vida = 60 dias) para estudos de turnover metabólico e 131I ( meia-vida = 8 dias) para a contagem para corpo inteiro e estudos de imagem de baixa resolução atrasados.

Listagem de Sequências <11 ©> PSOTEOTECH, SNC

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Pro Pro pro Lys pro Gin Thr Thr 10 15 val Leu Tyr Leu Gly Ser Lys Asn 25 30 Ala Ile Lys Asn Asp Asn Leu val 45 Asp val GlU Ile 60 Leu Leu Asp Ser Tyr Phe Ser Ile val Lys ile Glu 75 80 Phe Leu Thr val Pro Ser Ser ser 90 95 Lys Lys Gly Glu Phe Ala Gly Asp 105 110 Glu ASp Thr val Phe Tyr Val Gly 125 Pro Ala Ser Leu Asn Leu Pro Ser 140 Thr Leu Asn Asn Asp val Ile Ser 155 160 Asn Met Asp Pro ser Lys ser val 170 175 Phe Thr Gin Ser Arg Ala Ala ser 185 190 Ala val val Arg Asp Ile Thr Arg 205 Arg Phe ASp Ile Glu Ile Arg Thr 220 Leu Met val Asn Gly Ser Met phe 235 240 Tyr Leu His val Phe Tyr Asp Phe 64 245 250 255 Gly Phe Ser Asn Gly Pro vai HÍS Leu Glu Asp Thr Leu Lys Lys Ala 260 265 270 Gin lie Asn 275 Asp Ala Lys Tyr Arg 280 Glu Ile ser Ile Ile 285 Tyr His Asn Asp Lys Lys Met ile Leu Vai val ASp Arg Arg HÍS Val Lys ser Thr 290 295 300 Asp Asn Glu Lys Lys Lys Ile Pro Phe Thr Ile Tyr Ile Gly Gly 305 310 315 320 Ala Pro Gin Glu Vai Leu Gin Ser Arg Thr Leu Arg Ala His Leu Pro 32S 330 335 Leu Asp Ile Asn Phe Arg Gly Cys Met Lys Gly ile Gin Phe Gin Lys 340 345 350 Lys Asp Phe 355 Asn Leu Leu Glu Gin 360 Thr Glu Thr Leu !& Val Gly Tyr Gly Cys Pro Glu Asp Ser Leu Ile Ser Arg Arg Ala Tyr Phe Asn Gly 370 375 380 Gin ser Phe ile Ala Ser ile Gin Lys Ile Ser Phe Phe Asp Gly Phe 385 390 395 400 Glu Gly Gly Phe Asn Phe Arg Thr Leu Gin Pro Asn Gly Leu Leu Phe 405 410 415 Tyr Tyr Thr Ser Gly ser Asp val Phe Ser Ile Ser Leu Asp Asn Gly 420 425 430 Thr vai vai Met Asp vai Lys Gly ile Lys val Met Ser Thr Asp Lys 435 440 445 Gin Tyr His Asp Gly Leu Pro His Phe val val Thr Ser Ile Ser Asp 450 455 460 Thr Arg Tyr Glu Leu vai val Asp Lys Ser Arg Leu Arg Gly Lys Asn 465 470 475 480 Pro Thr Lys Gly Lys Ala Glu Gin Thr Gin Thr Thr Glu Lys Lys phe 485 490 495 Tyr Phe Gly Gly Ser pro ile Ser pro Gin Tyr Ala Asn Phe Thr Gly 500 505 510 cys Ile Ser Asn Ala Tyr Phe Thr Arg Leu Asp Arg Asp val Glu val 515 520 525 Glu Ala Phe Gin Arg Tyr Ser Glu Lys Val His Thr Ser Leu Tyr Glu 530 535 540 Cys Pro Ile Glu Ser Ser Pro Leu Phe Leu Leu His Lys Lys Gly Lys 545 550 555 560 Asn ser ser Lys Pro 565 Lys Thr Asn Lys Gin 570 Gly Glu Lys Ser Lys 575 Asp Ala Pro Ser Trp ASp Pro Ile Gly Leu Lys Phe Leu Glu Gin Lys Ala 580 585 590 Pro Arg Asp ser HIS Cys HIS Leu Phe Ser Ser Pro Arg Ala Ile Glu 595 600 605 65

HlS Ala 610 Tyr Gin Tyr Gly Gly 615 Thr Ala Asn Ser Arg 620 Gin Glu Phe Glu HÍS Glu Gin Gly ASp Phe Gly Glu Lys ser Gin Phe Ser Ile Arg Leu 625 630 635 640 Lys Thr Arg Ser Ser His Gly Met Ile Phe Tyr Val Ser Asp Gin Glu 645 650 655 Glu Asn Asp Phe Met Thr Leu Phe Leu Ala His Gly Arg Leu val Phe 660 665 670 Met Phe Asn Vai Gly His Lys Lys Leu Lys Ile Arg Ser Gin Glu Lys 675 680 685 Tyr Asn 690 ASp Gly Leu Trp His 695 Asp val ile Phe Ile 700 Arg Glu Lys ser Ser Gly Arg Leu vai Ile Asp Gly Leu Arg val Leu Glu Glu Arg Leu 705 710 715 720 pro pro ser Gly Ala Ala Trp Lys ile Lys Gly Pro ile Tyr Leu Gly 725 730 735 Gly Vai Ala Pro Gly Arg Ala Val Lys Asn Val Gin ile Thr ser val 740 745 750 Tyr Ser Phe Ser Gly cys Leu Gly Asn Leu Gin Leu Asn Gly Ala ser 755 760 765 Ile Thr Ser Ala ser Gin Thr Phe Ser val Thr pro Cys Phe Glu Gly 770 775 780 pro Met Glu Thr Gly Thr Tyr Phe ser Thr Glu Gly Gly Tyr val val 785 790 795 800 Leu Asp Glu ser Phe Asn ile Gly Leu Lys Phe Glu Ile Ala Phe Glu 805 810 815 vai Arg Pro Arg Ser Ser Ser Gly Thr Leu val His Gly His ser val 820 825 830 Asn Gly Glu Tyr Leu Α5Π vai His Met Arg Asn Gly Gin val Ile val 835 840 845 Lys vai Asn Asn Gly vai Arg ASp Phe Ser Thr Ser Val Thr Pro Lys 850 855 860 Gin Asn Leu Cys Asp Gly Arg Trp His Arg Ile Thr val Ile Arg Asp 865 870 875 880 Ser Asn vai vai Gin Leu Asp val Asp ser GlU val Asn HÍS val val 885 890 895 Gly pro Leu Asn pro Lys pro val ASP HÍS Arg Glu Pro val Phe Val 900 905 910 Gly Gly vai Pro Glu Ser Leu Leu Thr Pro Arg Leu Ala Pro ser Lys 915 920 925 Pro Phe Thr Gly Cys Ile Arg His Phe val ile ASp Ser Arg pro val 930 935 940 Ser Phe Ser Lys Ala Ala Leu val Ser Gly Ala val Ser ile Asn ser 945 950 955 960 Cys Pro Thr Ala «21α> 40 «211> 0¾ <2.12> FRT «213> Mus museuíus 6 6

Thr Ala Leu Lys Phe His ile Gin Ser Pro val Pro Ala Pro Glu Pro 1 5 10 15 Gly Lys Asn Thr Gly ASp His phe val Leu Tyr Met Gly Ser Arg Gin 20 25 30 Ala Thr Gly Asp Tyr Met Gly val Ser Leu Arg Asn Gin Lys val His 35 40 45 Trp vai Tyr Arg Leu Gly Lys Ala Gly Pro Thr Thr Leu ser ile Asp 50 55 60 Glu Asn Ile Gly Glu Gin Phe Ala Ala val Ser ile Asp Arg Thr Leu 65 70 75 80 Gin Phe Gly His Met Ser val Thr val Glu Lys Gin Met val His Glu 85 90 95 Ile Lys Gly Asp Thr val Ala Pro Gly Ser Glu Gly Leu Leu Asn Leu 100 105 110 HÍS Pro Asp Asp Phe val Phe Tyr val Gly Gly Tyr Pro Ser Asn phe 115 120 125 Thr Pro Pro Glu Pro Leu Arg phe Pro Gly Tyr Leu Gly Cys ile Glu 130 135 140 Met Glu Thr Leu Asn Glu Glu val val ser Leu Tyr Asn Phe Glu Gin 145 150 155 160 Thr Phe Met Leu Asp Thr Ala val ASp Lys Pro Cys Ala Arg Ser Lys 165 170 175 Ala Thr Gly ASP pro Trp Leu Thr Asp Gly Ser Tyr Leu ASp Gly Ser 180 185 190 Gly Phe Al a Arg ile Ser Phe Glu Lys Gin Phe Ser Asn Thr Lys Arg 195 200 205 Phe Asp Gin Glu Leu Arg Leu val ser Tyr Asn Gly Ile ile Phe Phe 210 215 220 Leu Lys Gin Glu Ser Gin Phe Leu cys Leu Ala val Gin Glu Gly Thr 225 230 235 240 Leu vai Leu Phe Tyr Asp Phe Gly Ser Gly Leu Lys Lys Ala Asp Pro 245 250 255 Leu Gin pro Pro Gin Ala Leu Thr Ala Ala Ser Lys Ala Ile Gin val 260 265 270 Phe Leu Leu Ala Gly Asn Arg Lys Arg val Leu val Arg val Glu Arg 275 280 285 Ala Thr val Phe Ser val Asp Gin ASp Asn Met Leu Glu Met Ala Asp 290 295 300 Ala Tyr Tyr Leu Gly Gly val Pro Pro Glu Gin Leu Pro Leu Ser Leu 305 310 315 320 67

Arg Gin Leu Phe pro 325 Ser Gly Gly Ser val 330 Arg Gly cys Ile V& Gly Ile Lys Ala Leu Gly Lys Tyr val ASp Leu Lys Arg Leu Asn Thr Thr 340 345 350 Gly Ile Ser Phe Gly Cys Thr Ala Asp Leu Leu val Gly Arg Thr Met 355 360 365 Thr Phe His Gly His Gly Phe Leu Pro Leu Ala Leu pro Asp val Ala 370 375 380 Pro ile Thr Glu val Val Tyr Ser Gly Phe Gly Phe Arg Gly Thr Gin 385 390 395 400 ASP Asn Asn Leu Leu 405 Tyr Tyr Arg Thr Ser 410 Pro Asp Gly Pro Tyr 415 Gin val Ser Leu Arg Glu Gly His val Thr Leu Arg Phe Met Asn Gin Glu 420 425 430 Val Glu Thr Gin Arg val Phe Ala Asp Gly Ala Pro His Tyr Val Ala 435 440 445 Phe Tyr ser Asn val Thr Gly val Trp Leu Tyr val ASp ASp Gin Leu 450 455 460 Gin Leu val Lys Ser His Glu Arg Thr Thr pro Met Leu Gin Leu Gin 465 470 475 480 Pro Glu Glu Pro ser Arg Leu Leu Leu Gly Gly Leu pro val Ser Gly 485 490 495 Thr Phe His Asn Phe Ser Gly cys ile Ser Asn val phe val Gin Arg 500 505 510 Leu Arg Gly Pro Gin Arg val Phe Asp Leu His Gin Asn Met Gly Ser 515 520 S2S val Asn val Ser val Gly Cys Thr Pro Ala Gin Leu ile Glu Thr Ser 530 535 540 Arg Ala Thr Ala Gin Lys Val Ser Arg Arg ser Arg Gin Pro Ser Gin 545 550 555 560 ASp Leu Ala Cys Thr Thr Pro Trp Leu Pro Gly Thr Ile Gin Asp Ala 565 570 575 Tyr Gin Phe Gly Gly Pro Leu pro Ser Tyr Leu Gin Phe Val Gly Ile 580 585 590 Ser Pro Ser His Arg Asn Arg Leu His Leu Ser Met Leu Val Arg Pro 595 600 605 - His Ala Ala ser Gin Gly Leu Leu Leu Ser Thr Ala Pro Met Ser Gly 610 615 620 Arg Ser Pro Ser Leu val Leu Phe Leu Asn HiS Gly HiS Phe Val Ala 625 630 635 640 Gin Thr Glu Gly pro Gly Pro Arg Leu Gin Val Gin Ser Arg Gin His 645 650 655 ser Arg Ala Gly Gin Trp His Arg val ser val Arg Trp Gly Met Gin 660 665 670

Gin ile Gin Leu vai vai Asp Gly Ser Gin Thr Trp ser Gin Lys Ala 675 680 685 68

Leu His His Arg vai pro Arg Ala Glu Arg Pro Gin Pro Tyr Thr Leu 690 695 700 Ser vai Gly Gly Leu Pro Ala Ser Ser Tyr Ser Ser Lys Leu Pro val 70S 710 715 720 Ser vai Gly Phe Ser Gly Cys Leu Lys Lys Leu Gin Leu Asp Lys Gin 725 730 735 Pro Leu Arg Thr Pro Thr Gin Met val Gly Val Thr Pro Cys val Ser 740 745 750 Gly pro Leu Glu Asp Gly Leu Phe Phe Pro Gly Ser Glu Gly Val val 755 760 765 Thr Leu Glu Leu Pro Lys Ala Lys Met Pro Tyr val Ser Leu Glu Leu 770 775 780 Glu Met Arg Pro Leu Ala Ala Ala Gly Leu lie Phe His Leu Gly Gin 785 790 795 800 Ala Leu Ala Thr Pro Tyr Met Gin Leu Lys Val Leu Thr Glu Gin Val 805 810 815 Leu Leu Gl Π Ala Asn Asp Gly Ala Gly Glu Phe Ser Thr Trp Val Thr 820 825 830 Tyr Pro Lys Leu Cys Asp Gly Arg Trp His Arg val Ala Val lie Met 835 840 845 Gly Arg Asp Thr Leu Arg Leu Glu val Asp Thr Gin ser Asn His Thr 850 855 860 Thr Gly Arg Leu Pro Glu ser Leu Ala Gly ser pro Ala Leu Leu His 865 870 875 880 Leu Gly Ser Leu Pro Lys Ser Ser Thr Ala Arg Pro Glu Leu Pro Ala 885 890 895 Tyr Arg Gly cys Leu Arg Lys Leu Leu lie Asn Gly Ala Pro Val Asn 900 905 910 vai Thr Ala ser vai Gin lie Gin Gly Ala val Gly Met Arg Gly Cys 915 920 925 Pro Ser Gly Thr Leu Ala Leu Ser Lys Gin Gly Lys Ala Leu Thr Gin 930 935 940 Arg His Ala Lys Pro Ser Vai Ser pro Leu Leu His 945 950 955 69 <210» 41 <211> 12 «212» PRT «213» Mus musculus «400» 41 lys Pro Arg teu Glrt Phe ser teu A$f> xle Gin rhr I 5 10

<210» 42 <21\> 12 «212» PRT <213> Mus mu seu sus <400» 42

Arg Asm Arg teu His Leu ser Met Leu vai Arg Pro 15 10 <21')> 43 «211> 12 <2:12» PRT «213» Homo sapsens <4Q3> 43

Ala ser>he Gly Phe Gin Ttír Phe Gin Pro Ser Gly i ' s 10 «21 G> 44 <211> 12

«212> PRT «213> Hsm© sapiens «400> 44

Phe Lys Leu pfg Gin Glu Leu teu Lys Pro Arg ser 1 5 10

<210> 4S «211> 12

<212» PRT

«213> Home s-apssrss <400» 4S

iys Asn ser Fhe Met Ala Leu Tyr Leu Ser Lys Gly 1 5 IO 70 «210» 46 <211» 12 «212» PRT «213» Mus rouseuius «400» 46 teu His vai Phe Tyr Asp Phe Gly Phe ser Asn Gly 1 S 10 <21Q» 47 «211» 12 <212» PRT «213» Mus m«afos <400» 47 vai teu vai Arg vai ôlu Arg Ala Thr vai Phe ser 1 s m «210» 46 «211» 12

<212» PRT «213» Mus rnuseuius 71 <40S> 48

Phe Leu Pro teu Ala Léu pfo Asp vai Ala pre xfe 1 5 10 <2 ·0'> 49 <211> 12 <212» PRT <213> Mus musculus <400» m

Gly Pro Leu Pro ser Tyr teu Glfi Phe va? Gly Xle 1 $ 10 <218» SS <211 > 12 <212» PRT <213» Mus mosculLs

<400» SC

Asp Gly Arg rrp «is Arg vai Ala vai ile «et Gly

1 5 XO <210» SI <211> 12 <212» PRT <213» yus mussuiLs

<400» SI 72 $er vai elrt ile 6lrs sly Ala vai sly mt Ar§ sly i s io

<2 :D> 52 <2:11 >S <2:12» PRT <213» Arisficsal S&qusr&e <22S> <223» Descri ptksn ol ÂsISeíaS Ssquenes; Synthsífe pepride <400» S2

Leu Pro Phe Pine Asp 1 5

<21 o» 53 <2:11 >8 <2:12> PRT <2:1:3» Artsficssi Sequeíice <2£Q> <223» Descri ptioa a? ArtiíksaÈ Sequencs: Syothetic peptide <2:20»

<221» VARIANT 73 <222> (8)..(8) <223> Repises- <40S> S3

Lys Arg Leu Gin vai Gin xyr

<210» 54 <211> S <212> PRT <213> Asíslfcsa! Sequence <22S> <223> Descripfon cl Aftsfieíal Sequeose: Synlhetíc peptkis <220>

<22 : > VARiANT <222> (8)..(8) <223> Aeplaes- <480> 54

Lys Arg teu δΐη vai Gin Leu Tvr 1 5

<210> 55 <211> S <212> PRT <213> Aslsílesa! Seqysace <220> <223> DescHptkm cl ÂrtiSdai Seqtseaca: SyaShetie peptide <220>

<221> VARIANT <222> (6),,(8} <223> /reptoce®** <400> 55

Arg Leu Gin vai Gl

<210 56 <211>S <212> PRT <213> Ârtsicssl Sequence <22B> <223> Descri pífen ol Ar&íoaíi Sequenc©: Syníhetfc pepide <220 <221 > VARIANT <222> {§),, (8) «223» /repteoe^ «40Θ» 58 75

teu Gin vai Gin teu ser xle Tyr i S

<218» 57 <211» 8 <212» PRT <213» ArtsSesail Sequence <220» <223» Dssesipiksrs «f Ârtffidal sequenoe: Synthelk; pepids <220» <221» VAR1ANT <222» (8),..(8} <223» /repises-”* <4O0» 57

Gin vai Gin leu Ser Xle Arg Tyr

<2te» 58 <211»8 <21.2» PRT <213» AAsSoial Sequence <228» <223» Descfjptson of Artsfscsaí Sequence: Synthstíc psptide <220» <221» VAR1ANT <222» (8),,,(8) <223» /repfees^"” 76 «400> m 76vai Gin teu ser lie Arg Thr Tyr 1 5

<210> 59 <21:> 7 <212> PRT «213> Arttfclsi Sequence <220> «223*· Descripíbn of Artificial Sequence: Syníhsfâc peptíds <4D0> 59

«210> 80

Si π vai Phê Gin vai Ala Tyr 1 S

«2®> 81 «211>7 «212» PRT «213> Artificial Sequence «22S> <223> Descri ptbn cf Ariíidsf Sequence: Syrsíhetb pepfide <m> 61

Vai phe Gin vai Ala Tyr jlt 1 s

<210> 62 «211»7 <212> PRT «213» Artificial Sequem:® <22õ> «223» Descri piora ©f Artificial Sequence’ Syntheiic pepide <40C» 82

Phs Gin vai Ala Tyr li® ilé 1 5 78

<2.10 63 <211*7 <212* PRT <213* Afife® I sequence <220* «223> Descnptto« of Aitfidal Seqperíce·. Syníhefe pepikte <400* 63

Cln vai Ala Tyr lie fie lie i S

<210> 64 «211> 7 «212> PRT «213> Afifeel Ssqusnc© «220> «223> Dsseripfbo of Afísftóat Sequeoce; Syníheíic pepísde vai Ala Tyr ile fie xle Lvs

1 S 79

<210 85 <211 >7 <212» PRT <213» Artificiai Sequence <220» <223» Descriptkín o? Aítlidal Sequem;®; Synthetic peptiée <400» 85

Ala Tyr lie i'le lie lys Ala 1 5

<2io» m <211»8 <212» PRT <213» Artificial S squsnce <220» <223» Desssiptsan of Artificial Sequenee; Syaihefic pspíí-de <220» <221» VARIANT <222» (8)..(8) <223» Α-βρΙβεβ-'" <400» 88

Tyr Leu Ser tys cly .&r§ teu Tyr 80

<210» 87 <211 >8 <212» PRT <213» Artifess! Sequer&se <220» <223» Descri ption ol Arisfíclai Sequence: Syníhetic p-epticte <220» <221» VARiANT <222» {8).48} <223» /repiaoe^"* <400» 87 teu Ser Lys cly Arq Leu vai ryr <21:0» BB <211»8 <21:2» FRf <21:3» Artsfessl: Sequsnce <223» <223» Descri ption cf ArSffcfei Seqtsense: Syníhstfc pepitíe <220> 81 <221 > VARIANT «222> (8)..(8) «223> íbeplace^’" <m> m

Ser Lys Cly Arg Leu vai Phe Tyr <210- 8§

<211> 8 <212> PRT <213> ÂrSficiaí Sequenes <220> «223> Descriptksn of Artificiai! Sequence: Syníheic peptíde <220> «221 > YAFUANT <222> (8}.<£8) <223> /replsse-’* <400*·· m

LyS Gly Arg Leu Vai Phô Ala Tyr 1 S

<210> 70 «211>8 «212> PRT «213> ArSftdaí Sequsm® 82 <220 <220 Descrlpfcc of Artsfsoiiaf Ssqyence: 8yníhstic pepikfe <220 <221> VARiANT <222> (8).48) <220 /rsplace=,w <480 70

Gl! Are wu val

phe Ala Leu Tyr I

<210 71 <211>8 <212> PRT <210 Artificial Sequeace <220 <220 Descri pfers of Artificiai Sequence: Synthetic pepíide <220 <221> VARIANT <222> (8:)..(8) <220 /repises^** 83 <400» 71

Aro Leu Vai Phe Ala Leu Gly Tyr

1 S

<210» 72 <211»S <212» PRT <213» Arísfcsal Sequence <228» <223» Descri ptbn of Artificiai Sequenca: Synthetic peptlde <228» <221 > VÂRIANT <222» (8)..(8) <223» /repiaoe™™ <4G8» 72

Thr Leu Phe Leu Ala hIs Gly Tyr 1 5 <218» 73 <211»8

<212» PRT <213» Ârtiicssl Sequence <223» <223» Descri píson oí Arisricsal Sequence: Synthetíc pep&te 84 <22ϋ» <221 > VARIANT <222» {8)...48} <223» /repisee^*1 <408» 73 teu Pbe teu Ala His Gly Arg Tyr 1 s

<210» 74 <211» 8 <212» PRT <213» Afisfcel! Sequsnse <220» <223» Descnpíscn sí Ârtffkãai Sequence: Syntheík- peptfcfe <220» <221» VARÍANT <222» (3).,..(8} <223» /repiacs^*® <400» 74

Phe teu Ala «is Gly Aff teu Tyr 1 S 85

«210 75 <21V> 8 «212> PRT «210 ÂrifidsÈ sequencs «220 . «220 Descripfon aí Artificial Seqpenc©: SyAeíic peptkte «220 ««221> VARiAMT «222> (8)48) <223> Repisas-w «400 75 teu Ala His Gly Ar| leu Vai Tyr

«210 78 «211> S <212> PRT «213> Artificial Sequence· «220> «220 Descripfion of Artificia! Sequence: Synihefic peptMe «220

«221> VARIANT «220 {8)..m

«220 /repiac.e-'''N 86 «4§ϋ> 76

Ala Hls Gly Arg Le« vai Phe Tyr

<210> 77 <21 : > '8 <212> PRT <213» Aslsfcísí Seguence <220> <223» Descripíbn of Artsíídsl Seq^uease: synthsik; peptíá© <220?» <221 > VARIANT <222» 11)48) <223» /repíac®»”® <400> 77 hís sly Arg Leu vai Fhe Met Tyr 1 s

<210> 76 <21:> 8 <212» PRT <213> >%ií§csal Sequence 87 <220> <223> Dessdpfen ο! ÂrisfidsS Sequeoes: Syníhefe pepGde <220

<221 > VARÍANT <222» (3).....(8) <223» /repte8=“” <490» 78

Ala sly Gin rrp His Arg vai Tyr

1 S

<210*· 79 <211» i <212» PRT <213» ÂásicísÊ Seqyence <220» <223» Descripisofs of Artificiai Sequencs; SyntheÊlc pepiÉde <223» <221» VARiÂNT <222» (8),,(8) <223» freptece»*" <4DG» 79

Gly Gin Trp His Arg vai ser tyr X f 88

<210» 80 <211»8 <212» PRT <213» Artifesal Sequence <220» <223» Descri:p&jR of Ârtifcsaí Ssqysnce; Syníheíic |$spSde <220»

<221» ¥AR:iANT <222» (8).....(8) <223» /rsplace-1tN <400» 80

OlnTrp hís Arg vai ser vai ryr X s <210» 81 <211»a

<212» PRT <213» Artsfcsai Sequeis <220» <223» Descriipfoirs of Aíísfcsaí Seqyenca: Synlhelic pep&fe <228» 89 <22í> VARiANT <222» (8).48) «223> /replace-™ <400> 81

Trp η) s Af'9 vai Ser vai Arg jyr

<210> 82 <211> 8 <212> PRT <213» Âslsfcsaf Ssqueace <220» <223» Descêpfen ©f Artifkãd sequer-se: Synthsik; paplids <220» <221» VARSANT <222» (8)..(8) <223» /replaoe"™ <400» 82 hís Ar§ Vai Ser vai A mg Trp Tyr

<210» 83 <211» 8 <212» PRT <213» Aásficsaf Sequence 90 <220 <220 Descriptbn of Artifidal sequence: Syníhetk; peptscte <220

<221 > VARSANT <222» (8),.,(8) <223> /replace='“ <4m> 83

Arg Vai ser vai A.rg Trp Gly Tyr 1. 5

<210» 84 <211» 8 <212» PRT <213» AfSSeiaÈ Sequeacse <220> «223» Descrip^ors of Aftsfsdal se-qysrses: SynÈmúia· psptsde <220> <221 » VARIANT «222» {8),.(8) «223» ftepiace·-'" 91 <4:Ο0> Μ

Asp ely αγ§ Trp «is Ar§ vai Tyr 1 $ <210 85

«.211.» 8 <212> PRT «213» Aríifsdai sequenss <220> «223» DsscHpfcn ©fAítffidsl Sequence: SyrÉhsio peptíde <220» «221» VAFtlANT «222» (8)..(8) «223» /repíaee-”” <400» 85 €ly Arg Trp HiS Afq Vâl Ala Tyr 1 5

<210» 86 <211»8 «212» PRT <213» Artsfcsai sequenoe «220» «223» DescHplbn o? Aílsficsa! Sequense: Syníheic peptíde 92 <220 <221 > VARIANT <220 (8),.(8) <220 /repise®»"* <400 8β

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Arg vai Ala Vai ile Met Gly Tyr 1 5

Lisboa, 22 de Novembro de 2013

Claims

1 REIVINDICAÇÕES 1. Um péptido que consiste em Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met-Gli-NH2.

2. 0 péptido da reivindicação 1, em que o péptido é constituído por L- ou D-aminoácidos.

3. 0 péptido da reivindicação 1 ou da reivindicação 2, em que um ou mais dos aminoácidos são N-metilados.

4. Um péptido constituído por Arg-Val-Ala-Val-Ile-Met-Gli-NH2 ou um anticorpo específico para um tal péptido para a utilização no tratamento de uma doença caracterizado por fibrilogénese Αβ.

5. 0 péptido ou o anticorpo da reivindicação 4, em que a doença é a doença de Alzheimer.

6. 0 péptido ou o anticorpo da reivindicação 4 ou da reivindicação 5, em que o péptido é constituído por L-ou D-aminoácidos.

7. 0 péptido ou o anticorpo da reivindicação 4, 5 ou 6, em que um ou mais dos aminoácidos são N-metilados.

8. 0 péptido ou o anticorpo de qualquer uma das reivindicações 4 a 7, que compreende ainda um veículo farmaceuticamente aceitável, diluente ou excipiente.

9. 0 péptido ou o anticorpo de qualquer uma das reivindicações 4 a 8, que é formulado para administração por uma via selecionada a partir do 2 grupo constituído por oral, spray nasal, lavagem, injeção subcutânea, injeção intraperitoneal, injeção intramuscular, injeção parentérica e infusão.

10. O péptido ou o anticorpo da reivindicação 9, que é formulado como um spray nasal.

11. Utilização de um péptido que consiste em Arg-Val- Ala-Val-Ile-Met-Gli-NH2 ou um anticorpo específico para um tal péptido no fabrico de um medicamento para o tratamento de uma doença caracterizada por fibrilogénese Αβ.

12. A utilização da reivindicação 11, modificada pelas características de qualquer uma das reivindicações 5 a 10.

13. Uma composição farmacêutica compreendendo um péptido, tal como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 3, e um veículo farmaceuticamente aceitável, diluente ou excipiente.

14. A composição farmacêutica da reivindicação 13, que compreende adicionalmente um composto ativo suplementar. Lisboa, 22 de Novembro de 2013