JP2011067176A - 圧力変化を利用する動物細胞への物質導入 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】細胞内導入物質が動物細胞の近傍に存在する状態で、該細胞を大気圧から0.04〜0.40MPaGの範囲内の圧力まで0.5MPa/s以上の速度で加圧し次いで該範囲内の圧力に保持する加圧工程および、その後該細胞を減圧する減圧工程からなる操作を3〜500回繰り返すことで、細胞内導入物質を細胞に導入する。さらに、前記方法に使用する、加圧用バルブと減圧用バルブを有する耐圧容器を備える装置からなる。
【選択図】なし
Description
(1)細胞内導入物質が動物細胞の近傍に存在する状態で、該細胞を大気圧から0.04〜0.40MPaGの範囲内の圧力まで0.5MPa/s以上の速度で加圧し次いで該範囲内の圧力に保持する加圧工程および、続いて該細胞を減圧する減圧工程からなる工程を3〜500回繰り返す、細胞内導入物質を細胞に導入する方法。
(2)前記加圧工程が0.06〜120秒である、(1)に記載の方法。
(3)前記動物細胞が容器に付着している、(1)または(2)に記載の方法。
(4)加圧用バルブと減圧用バルブを有する耐圧容器を備える、(1)〜(3)のいずれかに記載の方法に使用する装置。
(5)加圧用バルブと減圧用バルブが電磁バルブであり、該加圧用バルブが開となると同時に該減圧用バルブが閉となり、該加圧用バルブが閉となると同時に該減圧用バルブが開となるよう、該加圧用バルブと該減圧用バルブを開閉する手段を有する、(4)に記載の装置。
なお、減圧用バルブのみを備える耐圧容器でも加圧と減圧の両方を行うことは可能であるが、圧力変化の速度は遅く使用できない。
*実験装置
導入処理に使用した装置の構造を図1に示す。シャーレ1はガラス製耐圧容器2に入っている。樹脂製ふた3はねじ込み式である。このふた3には加圧用バルブ4と減圧用バルブ5と電気式圧力計6が接続している。圧力調整器つきガスボンベ7からのガスが加圧用バルブ4を通して耐圧容器に入るようになっている。加圧用バルブ4と減圧用バルブ5はいずれも電磁バルブであり、加圧用バルブ4は電圧印加時に開、減圧用バルブ5は電圧印加時に閉になるようになっていて電圧印加の有無で同時に制御できる。
4.0×104cells/dish の濃度でチャイニーズハムスター卵巣細胞(CHO細胞)をシャーレに加え、2日間 37℃、二酸化炭素 5%で牛胎児血清10%入りアルファMEM培地で培養した。
実施例1と同様の条件で、添加するプラスミド溶液の量、繰り返し回数、繰り返しの間隔を変化させて遺伝子導入細胞数を計測した。繰り返しの間隔の変更は、減圧工程の時間を変更することにより行った。その結果を表1に示す。
実施例1と同様の条件で、加圧工程の時間、繰り返しの間隔を変化させて遺伝子導入細胞数を計測した。
導入処理における繰り返し回数を1回のみとした以外は、実施例1と同様の実験を行った。その結果、遺伝子導入された細胞数は30個以下であった。
実験装置の耐圧容器内部の体積を2Lにし、減圧バルブのみ電磁バルブにして加圧バルブは開放で圧力制御した。加圧終了時の圧力は0.13MPaG、減圧後の圧力を大気圧ではなく0.01MPaGとした他は実施例1と同様の実験を行った。加圧工程開始後、0.13MPaGまで0.3秒を要した。その結果、遺伝子導入された細胞は30個以下であった。
2 ガラス製耐圧容器
3 樹脂製ふた
4 加圧用電磁バルブ
5 減圧用電磁バルブ
6 電気式圧力計
7 圧力調整器付きガスボンベ
Claims (5)
- 細胞内導入物質が動物細胞の近傍に存在する状態で、該細胞を大気圧から0.04〜0.40MPaGの範囲内の圧力まで0.5MPa/s以上の速度で加圧し次いで該範囲内の圧力に保持する加圧工程および、続いて該細胞を減圧する減圧工程からなる工程を3〜500回繰り返す、細胞内導入物質を細胞に導入する方法。
- 前記加圧工程が0.06〜120秒である、請求項1に記載の方法。
- 前記動物細胞が容器に付着している、請求項1または2に記載の方法。
- 加圧用バルブと減圧用バルブを有する耐圧容器を備える、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法に使用する装置。
- 加圧用バルブと減圧用バルブが電磁バルブであり、該加圧用バルブが開となると同時に該減圧用バルブが閉となり、該加圧用バルブが閉となると同時に該減圧用バルブが開となるよう、該加圧用バルブと該減圧用バルブを開閉する手段を有する、請求項4に記載の装置。
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