JP2011059131A - 免疫分析法及び細胞培養によるタンパク質生産プラントのタンパク質分析装置 - Google Patents
免疫分析法及び細胞培養によるタンパク質生産プラントのタンパク質分析装置 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2011059131A JP2011059131A JP2010260752A JP2010260752A JP2011059131A JP 2011059131 A JP2011059131 A JP 2011059131A JP 2010260752 A JP2010260752 A JP 2010260752A JP 2010260752 A JP2010260752 A JP 2010260752A JP 2011059131 A JP2011059131 A JP 2011059131A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- measured
- cell
- antibody
- primary antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Automatic Analysis And Handling Materials Therefor (AREA)
Abstract
【解決手段】基盤に測定対象タンパク質と結合するタンパク質を共有結合させ、抗原抗体反応を利用して測定対象タンパク質を測定した後、酸性条件下で測定対象タンパク質を脱離し、基盤上に共有結合されたタンパク質のみを残すことを特徴とする免疫分析法、タンパク質生産プラントのタンパク質計測装置及び免疫分析用フローセルを開示する。
【選択図】図4
Description
(実施例1)共有結合法でのELISA法の妥当性
(マイクロ流路への1次抗体の共有結合)
次の手順に従ってマイクロ流路内面にタンパク質を共有結合させた。ただし、タンパク質が面に共有結合させることができればよく、以下の手法に限定されるものではない。
アクリル材質チップにマイクロ流路が施され(図1)、その流路内面にアミノ基の付与された流路に2%グルタルアルデヒドを、シリンジポンプを用いて流速50μL/minで15分間送液した(図2(a1))。続いて純水を流速50μL/minで10分間送液して洗浄した後、1次抗体(Anti−IgG Mouse,Chicken−Poly;Immunsystem AB社:200倍希釈で使用)を流速50μL/minで15分間送液した(図2(a2))。更に0.05%のTween20(ICI Americans Inc.登録商標、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート)を含んだリン酸緩衝液(PBS)を流速50μL/minで10分間送液することで洗浄した。これにより、図2(a3)に示すように流路内面に1次抗体が共有結合された。その後、ブロッキング液(毎日骨太スキムミルク;雪印製)を送液し、流路内面のブロッキングを行った。ブロッキングの後、そのまま継続して測定することが可能であるし、4℃に保ち、液が乾燥しないようにしておけば、少なくとも2週間は保存することができる。
アクリル材質チップにマイクロ流路が施され(図1)、その流路内面にカルボキシル基の付与された流路に10mg/mL水溶性カルボジイミド(pH5.8のPBSに溶解)を、シリンジポンプを用いて流速50μl/minで15分間送液した(図2(b1))。続いてPBS(pH5.8)を流速50μl/minで10分間送液して洗浄した後、1次抗体(Anti−IgG Mouse,Chicken−Poly;Immunsystem AB社:200倍希釈で使用)を流速50μL/minで15分間送液した(図2(b2))。更に0.05%Tween20を含んだリン酸緩衝液(PBS)を流速50μL/minで10分間送液することで洗浄した。これにより、図2(b3)に示すように流路内面に1次抗体が共有結合された。ブロッキング液(ブロックエース;雪印製)を送液し、流路内面のブロッキングを行った。アミノ基の場合と同様にブロッキングの後、そのまま継続して測定することが可能であるし、保存することもできる。
1次抗体を共有結合させたマイクロフローセルを用いてタンパク質の検出を行った。以下、アミノ基修飾流路の場合について述べるが、カルボキシル基修飾流路の場合も全く同様である。
同一流路を用いて測定対象タンパク質の反復測定を行った。まず、(実施例1)と同様にして、流路への1次抗体の共有結合、ブロッキング、1次抗体反応、2次抗体反応を行い、測定対象タンパク質の検出を行った。その後、同一流路に塩酸を3分間送液することにより、1次抗体だけを流路内に残し、測定対象タンパク質、2次抗体を除去した。一度目の測定と同条件でブロッキング液を送液し、再度同一濃度の測定対象タンパク質を送液し、2次抗体を反応させ、基質液を送液したその吸光度を測定した。対象実験として、1次抗体を流路に非特異的吸着(共有結合させない)した場合を行った。
本発明の免疫抗体検出法を用いた自動タンパク質測定装置の一実施例を図5に示す。
(装置の構成)
図5に示すようにタンパク質自動分析装置16は洗浄液、基質液等の入った試薬タンク12、送液切替え装置6、免疫抗体反応をさせるマイクロフローセル(反応槽)4、発色した液を計測する計測部19、廃液を回収する廃液タンク11からなる。試料および試薬の送液に関してはポンプ5を用いて行う。
(動作の説明)
ELISAに必要な試薬(洗浄液、2次抗体、基質液、ブロッキング液、キャリブレーション用試薬、酸性溶液)は試薬タンク12の中に納められている。
Claims (8)
- 流路の表面にアミノ基又はカルボキシル基を付与したマイクロフローセルの基板に一次抗体タンパク質を共有結合させ、前記一次抗体タンパクに測定対象タンパク質を結合し、更に前記測定対象タンパク質に二次抗体タンパク質を結合させ、前記二次抗体タンパク質に酵素を標識し、酵素標識免疫吸着分析法(ELISA)による抗原抗体反応を利用して前記一次抗体タンパク質に結合した前記測定対象タンパク質を測定した後、前記酵素、前記二次抗体及び前記測定対象タンパク質を脱離させ、基板上に共有結合された前記一次抗体タンパク質のみを残し、前記一次抗体を固定した前記マイクロフローセルを反復使用することを特徴とする免疫分析法。
- 前記抗原抗体反応による測定対象のタンパク質の結合解離は、酸、アルカリ、塩又は尿素を含む液によって行うことを特徴とする請求項1記載の免疫分析法。
- 抗原抗体間の結合を酸性条件下で解離することを特徴とする請求項1又は3記載の免疫分析法。
- マイクロフローセルの反応部の断面積が0.04mm2以下であることを特徴とする請求項1〜4のいずれかに記載の免疫分析法。
- 細胞の培養手段と、培養により生産した培養生産物を分離する手段及び分離した培養生産物の精製手段とを含むフローと、該フローから試料液を採取するサンプリング部と、アミノ基又はカルボキシル基を流路表面に形成し、かつアミノ基又はカルボキシル基と一次抗体、測定対象タンパク質、該測定対象タンパク質に結合した二次抗体、該二次抗体と標識した酵素を結合させたマイクロフローセルと、測定対象タンパク質を前記マイクロフローセルに流通させる手段と、前記測定対象タンパク質に酵素を標識するための試薬を供給する手段、前記酵素を発色させるための基質を供給する手段、該一次抗体と測定対象タンパク質の酵素標識免疫吸着分析法(ELISA)により前記測定対象タンパク質を測定する手段と、前記一次抗体に結合した測定対象タンパク質、二次抗体及び酵素を解離させて、前記一次抗体のみを残すための試薬を前記マイクロフローセルに供給する手段、前記一次抗体を固定したマイクロフローセルを反復使用可能にするための試薬を供給する手段、を有することを特徴とする細胞培養によるタンパク質生産プラントのタンパク質分析装置。
- 前記測定対象タンパク質を含む試料液を希釈及び濾過の少なくとも一方を実施して、前記試料液が前記マイクロフローセルを流通し得るように液組成を調整する前処理部を備えることを特徴とする請求項5記載の細胞培養によるタンパク質生産プラントのタンパク質分析装置。
- 前記解離のための試薬は酸、アルカリ、塩又は尿素を含む液である請求項5又は6記載のタンパク質生産プラントのタンパク質分析装置。
- 上記マイクロフローセルの反応部の断面積が0.04mm2以下であることを特徴とする請求項5〜7のいずれかに記載のタンパク質生産プラントのタンパク質分析装置。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010260752A JP2011059131A (ja) | 2010-11-24 | 2010-11-24 | 免疫分析法及び細胞培養によるタンパク質生産プラントのタンパク質分析装置 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010260752A JP2011059131A (ja) | 2010-11-24 | 2010-11-24 | 免疫分析法及び細胞培養によるタンパク質生産プラントのタンパク質分析装置 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2005345112A Division JP2007147539A (ja) | 2005-11-30 | 2005-11-30 | 免疫分析法、タンパク質分析装置及び免疫分析用マイクロフローセル |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011059131A true JP2011059131A (ja) | 2011-03-24 |
Family
ID=43946887
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010260752A Pending JP2011059131A (ja) | 2010-11-24 | 2010-11-24 | 免疫分析法及び細胞培養によるタンパク質生産プラントのタンパク質分析装置 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2011059131A (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102353772A (zh) * | 2011-06-30 | 2012-02-15 | 华南农业大学 | 检测糖精钠残留的酶联免疫试剂盒及使用方法 |
JP2020112486A (ja) * | 2019-01-15 | 2020-07-27 | 国立大学法人東京工業大学 | 複合体の検出方法、並びにそれに用いる担体及び検出キット |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05232113A (ja) * | 1991-06-07 | 1993-09-07 | Hewlett Packard Co <Hp> | マスバイオセンサーによる測定方法 |
JP2003270248A (ja) * | 2002-03-19 | 2003-09-25 | Showa Seiki Kk | 抗原検出システム |
JP2004061328A (ja) * | 2002-07-30 | 2004-02-26 | Toto Ltd | 検出素子 |
JP2004219094A (ja) * | 2003-01-09 | 2004-08-05 | Hitachi Ltd | 細胞培養による蛋白質生産プラントにおける蛋白質計測方法及びその装置 |
-
2010
- 2010-11-24 JP JP2010260752A patent/JP2011059131A/ja active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05232113A (ja) * | 1991-06-07 | 1993-09-07 | Hewlett Packard Co <Hp> | マスバイオセンサーによる測定方法 |
JP2003270248A (ja) * | 2002-03-19 | 2003-09-25 | Showa Seiki Kk | 抗原検出システム |
JP2004061328A (ja) * | 2002-07-30 | 2004-02-26 | Toto Ltd | 検出素子 |
JP2004219094A (ja) * | 2003-01-09 | 2004-08-05 | Hitachi Ltd | 細胞培養による蛋白質生産プラントにおける蛋白質計測方法及びその装置 |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102353772A (zh) * | 2011-06-30 | 2012-02-15 | 华南农业大学 | 检测糖精钠残留的酶联免疫试剂盒及使用方法 |
JP2020112486A (ja) * | 2019-01-15 | 2020-07-27 | 国立大学法人東京工業大学 | 複合体の検出方法、並びにそれに用いる担体及び検出キット |
JP7231923B2 (ja) | 2019-01-15 | 2023-03-02 | 国立大学法人東京工業大学 | 複合体の検出方法、並びにそれに用いる担体及び検出キット |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
WO2006073170A1 (ja) | 担体封入チップ、担体処理装置、および担体処理方法 | |
CN101883527B (zh) | 用于样品的生化处理和分析的装置 | |
WO2005090983A2 (en) | Membrane assay system including preloaded particles | |
EP3460474B1 (en) | Method and kit for target molecule detection | |
JP3819847B2 (ja) | 細胞培養による蛋白質生産プラントにおける蛋白質計測方法及びその装置 | |
JP2020535416A5 (ja) | ||
US20090162944A1 (en) | Method of Measuring Biomolecular Reaction at Ultrahigh Speed | |
EP4010433A1 (en) | Chemiluminescent compounds for multiplexing | |
JP2007147539A (ja) | 免疫分析法、タンパク質分析装置及び免疫分析用マイクロフローセル | |
WO2018090652A1 (zh) | 一种高通量体液蛋白质样品预处理装置及其应用 | |
JP6737185B2 (ja) | 相互作用する分子を有する血中細胞の同時検出方法 | |
Valekova et al. | Multiplex immunoassays for quantification of cytokines, growth factors, and other proteins in stem cell communication | |
JP2011059131A (ja) | 免疫分析法及び細胞培養によるタンパク質生産プラントのタンパク質分析装置 | |
JP6713601B2 (ja) | 分析デバイス | |
JP2007003410A (ja) | ヘモグロビンA1cの測定方法及びヘモグロビンA1c測定用キット | |
JP4840398B2 (ja) | 抗原の分離装置並びにこれを利用した抗原の計測方法及び装置 | |
JP2007187616A (ja) | 分析チップおよび分析方法 | |
JP4171974B2 (ja) | 抗原の分離装置並びにこれを利用した抗原の計測方法及び装置 | |
WO2009093157A1 (en) | Combined cell and protein analysis on a substrate | |
CN109374882A (zh) | 检测黄盖鲽鱼卵黄蛋白原免疫胶体金试纸条及制备方法及应用 | |
JP6190472B2 (ja) | 新規のPoC検査システムおよび方法 | |
WO2023141703A1 (en) | Rapid detection of at least one toxin using a microfluidic device | |
US8105844B2 (en) | Apparatus and method of using porous material for antigen separation, identification, and quantification with electrophoresis techniques | |
WO2022085790A1 (ja) | 標的物質の検出方法および装置並びに試薬 | |
CN111007242A (zh) | 基于多层高分子多孔膜的荧光免疫检测方法、装置及应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A977 | Report on retrieval |
Effective date: 20130417 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130423 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130620 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20130704 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130708 |
|
A02 | Decision of refusal |
Effective date: 20130730 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 |