JP2010539091A - 放射性フッ素化方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、式（Ｖ）又は（ＶＩ）のコンジュゲート、放射性医薬品としてのその使用、その製造方法、及びかかる方法で使用する合成中間体に関する。
【選択図】なし

Description

本発明は、陽電子放出核種で標識した生物学的活性ベクターを含む診断薬及び放射性診断薬に関する。本発明はさらに、特異的な生物学的標的に対して親和性を有する分子として定義されるベクター、好ましくはペプチドであるベクターの［¹⁸Ｆ］フッ素化のための方法及び試薬に関する。こうして得られる¹⁸Ｆ標識コンジュゲートは、放射性医薬品として、具体的には陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）で使用するための放射性医薬品として有用である。

放射性標識された生物活性ベクターを診断イメージングのために応用することは、核医学において重要性を増しつつある。特定の細胞タイプと選択的に相互作用する生物学的活性分子は、標的組織に放射能を送達するために有用である。例えば、放射性標識ペプチドは、診断イメージング及び放射線療法のため、腫瘍、梗塞巣部及び感染組織に放射性核種を送達するための大きな潜在的可能性を有している。約１１０分の半減期を有する¹⁸Ｆは、多くのレセプターイメージング調査のために最適な陽電子放出核種である。したがって、¹⁸Ｆ標識された生物活性ペプチドは、多種多様の疾患を定量的に検出して特性決定するためにＰＥＴで利用できるので大きな臨床的可能性を有している。

¹⁸Ｆ標識ペプチドに関する難点の１つは、既存の¹⁸Ｆ標識剤が調製するのに多くの時間を要することである。¹⁸Ｆによるペプチド及びタンパク質の効率的な標識は、適当な補欠分子族を用いることでのみ達成される。文献中には、Ｎ−スクシンイミジル−４−［¹⁸Ｆ］フルオロベンゾエート、ｍ−マレイミド−Ｎ−（ｐ−［¹⁸Ｆ］フルオロベンジル）ベンズアミド、Ｎ−（ｐ−［¹⁸Ｆ］フルオロフェニル）マレイミド及び４−［¹⁸Ｆ］フルオロフェナシルブロミドを含む数種のかかる補欠分子族が提唱されている。¹⁸Ｆによるペプチド及びタンパク質の標識のために現在使用されている方法のほとんどすべてが、フッ素標識シントンの活性エステルを利用している。ペプチド及びタンパク質は活性エステルと反応し得る多数の官能基を含むことがあるので、これらの現行方法は部位特異的でない。例えば、３つのリシン残基を含むペプチドは、標識シントンに対する反応性が全く同じ３つのアミン官能基を有する。したがって、特にペプチド中に¹⁸Ｆを温和な条件下で迅速かつ化学選択的に導入して、高い放射化学収量及び純度で¹⁸Ｆ標識生成物を得ることを可能にする¹⁸Ｆ標識補欠分子族及び方法に対するニーズが依然として存在している。さらに、かかる方法であって、臨床現場での放射性医薬品の調製を容易にするための自動化に適した方法に対するニーズも存在している。我々は以前にＰＥＴ標識方法におけるアミノオキシ化学の使用を記載した（国際公開第０３／００６４９１号）が、この発明の化合物はアルデヒド及びケトンと容易に反応しないものの、ある種のハロゲン含有化合物に対して選択性を有する。Ｎ−アルキルアミノオキシ部分の化学的安定性はさらに高いので、副反応が最小限に抑えられかつ中間体が一層安定である結果として中間体の取扱い及び貯蔵を首尾よく行うことが可能となり、したがって以前に開示したアミノオキシ基に比べて利点が得られる。

国際公開第２００８／０８３１９１号パンフレット

本発明は、以下の式（Ｉ）の化合物を以下の式（ＩＩ）の化合物と反応させるか、或いは以下の式（ＩＩＩ）の化合物を以下の式（ＩＶ）の化合物と反応させることを含んでなる放射性フッ素化方法を提供する。

式中、
Ｒ１はハロアセチル、ハロアリル又は基又はフェナシルハライドのような反応性ハロゲン含有基であるか、すべての基がアルキル化反応への関与に適したエポキシド環であるか、マレイミド基或いはアクリル酸又は置換アクリル酸誘導体のようなマイケル（Ｍｉｃｈａｅｌ）受容体であるか、ビニルスチレン（好ましくはニトロビニルスチレン）であるか、ビニルスルホンアミドであるか、或いはビニルスルホンである。
Ｒ２はＮ−アルキルアミノオキシ基であり、これは水性緩衝液及びわずかに酸性のｐＨのような温和な条件下でＲ１と部位特異的に反応して以下の式（Ｖ）の化合物を生じる。
式（ＩＩＩ）のＲ３はＲ２に等しく、式（ＩＶ）のＲ４はＲ１に等しい。式（ＩＩＩ）の化合物と式（ＩＶ）の化合物との連結は以下の式（ＶＩ）の生成物を生じる。

式中、いずれの場合にも、Ｙはアルキルであり、好ましくはＹ＝−ＣＨ₃である。

化合物３の¹⁸Ｆ−コンジュゲートのＨＰＬＣクロマトグラム。 化合物６の¹⁸Ｆ−コンジュゲートのＨＰＬＣクロマトグラム。 化合物７の¹⁸Ｆ−コンジュゲートのＨＰＬＣクロマトグラム。 化合物８の¹⁸Ｆ−コンジュゲートのＨＰＬＣクロマトグラム。 化合物１１の¹⁸Ｆ−コンジュゲートのＨＰＬＣクロマトグラム。

式（Ｖ）の化合物が最も好ましく、式（ＩＩ）の化合物の¹⁸Ｆ−リンカー成分は好ましくは以下の式（ＶＩＩ）〜（ＸＩ）に示される種類の化合物からなる。

式中、
ｎは０〜２０の整数であり、
ＺはＯ、Ｎ又はＳである。

式（ＩＩ）の化合物中のリンカー基は、得られる式（Ｖ）のコンジュゲートにおいて好ましい排泄特性のような最適のインビボ薬物動態が得られるように選択することもできる。親油性の異なるリンカー基を使用することで、診断上のニーズに応じてペプチドのインビボ薬物動態を大きく変化させることができる。例えば、式（Ｖ）のコンジュゲートを腎排泄によって体外に排除することが望ましい場合には、式（Ｘ）〜（ＸＩ）から導かれるリンカー成分を含む親水性リンカーが使用される。同様に、肝胆道排泄による排除が望ましい場合には、式（ＶＩＩ）〜（ＩＸ）から導かれるリンカー成分を含む疎水性リンカーが選択できる。

本発明は、ペプチド又はベクター前駆体の合成に際して標識の正確な導入部位が予め選択される一層化学選択的な放射性標識アプローチを提供する。分子中の所定部位で起こる連結反応は、ただ１種の標識生成物を与える。したがって、このような方法は化学選択的であり、その用途は多種多様の薬物様分子、ペプチド及び生体分子（例えば、小タンパク質）の標識に役立つ包括的なものであると考えられる。

さらに別の態様では、本発明は、以下の式（Ｉａ）の化合物を以下の式（ＩＩａ）の化合物と反応させるか、或いは以下の式（ＩＩＩａ）の化合物を以下の式（ＩＶａ）の化合物と反応させてそれぞれ以下の式（Ｖａ）又は（ＶＩａ）のコンジュゲートを得ることを含んでなる放射性フッ素化方法を提供する。

式中、Ｒ１及びＲ４はそれぞれ式（Ｉ）及び式（ＩＶ）の化合物に関して上記に定義した通りであり、リンカー基は上記の化合物に関して定義した通りである。

反応は、適当な溶媒（例えば、ｐＨ３〜１１の範囲内の水性緩衝液）中において５〜７０℃の極端でない温度、最も好ましくは周囲温度で実施できる。

本発明のさらに別の態様では、Ｒ１はマレイミド化合物及びビニルスチレン化合物の部類から導かれ、最も好ましくは以下の式（Ｉｂ）及び式（Ｉｃ）中に表される。

式（Ｉ）及び式（ＩＩＩ）中並びに本発明の他の態様では、特記しない限り、ベクターは疾患過程に付随する関連レセプターに対して親和性を有する生物学的薬剤として定義できる。生物学的薬剤は小分子薬物様の薬物団、タンパク質又は抗体として定義できるが、好ましくは分子量３０ｋＤａ未満のタンパク質であり、最も好ましくはアミノ酸１００未満のペプチドである。本発明の方法を用いる標識用の好ましいペプチドベクターの例には、オクトレオチドのようなソマトスタチン類似体、ボンベシン、血管作用性小腸ペプチド、走化性ペプチド類似体、α−メラノサイト刺激ホルモン、ニューロテンシン、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド、ヒトプロインスリン結合ペプチド、エンドセリン、アンギオテンシン及びホルミル−ノルロイシル−ロイシル−フェニルアラニル−ノルロイシル−チロシル−リシンがある。標識用の好ましいペプチドは、国際公開第０１／７７４１５号及び同第０３／００６４９１号に記載されているもののようなＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド及びその類似体である。好ましいペプチドベクターは、以下の式（Ａ）のフラグメントを含んでいる。

式中、Ｘ⁷は−ＮＨ₂又は次式のエチレングリコール含有構造であり、

（式中、「ａ」は１〜１０の整数であり、最も好ましくはａは１である。）
Ｒ１は式（Ｉ）に関して前記に記載した通りである。

当業者には容易に理解される通り、本発明の方法は、タンパク質、ホルモン、オリゴヌクレオチド及び抗体フラグメントのような他の生体分子並びに薬物様小分子の放射性フッ素化によって各種のＰＥＴトレーサーを得るためにも使用できる。

式（Ｉ）及び式（ＩＩＩ）の化合物は、例えば、Ａｔｈｅｒｔｏｎ，Ｅ．ａｎｄ Ｓｈｅｐｐａｒｄ，Ｒ．Ｃ．；“Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”；ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ：Ｏｘｆｏｒｄ，１９８９中に記載されている固相ペプチド合成法のような標準的ペプチド合成法によって製造できる。式（Ｉ）又は（ＩＩＩ）の化合物中への基Ｒ１又はＲ３の導入は、ペプチドのＮ末端又はＣ末端の反応、或いはペプチド配列中に含まれる何らかの他の官能基であって、その修飾がベクターの結合特性に影響を及ぼさない官能基との反応によって達成できる。好ましい例では、Ｃａｒｒａｓｃｏ ｅｔ ａｌ（Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００６，Ｖｏｌ ８４（４），ｐａｇｅ ４１４）によって記載されたアミノ酸を用いて、Ｎ−アルキルアミノオキシ基（Ｙ−ＮＨ₂−Ｏ−）をペプチド配列中に直接導入できる。官能基Ｒ１及びＲ３は、好ましくはペプチドのアミン官能基と活性化酸との反応による安定なアミド結合の形成によって導入され、ペプチド合成の実施中又は実施後に導入される。前駆体が酸である場合、Ｒ１及びＲ３は、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）又はＮ−［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−１−イルメチレン］−Ｎ−メチルメタンアンモニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキシド（ＨＡＴＵ）のようなインサイチュ活性化剤を用いて導入できる。

式（ＩＩ）の化合物は、以下の式（ＸＩＩ）の対応する前駆体から製造できる。

式中、Ｌは脱離基、好ましくはｐ−トルエンスルホネート、トリフルオロメタンスルホネート又はメタンスルホネート或いはハライドであり、Ｙ及びリンカーは前記に定義した通りであり、Ｒ５は窒素原子を保護するための適当な保護基（例えば、ｔ−ブチルオキシカルボニル基）である。かくして、サイクロトロンで生成された水性［¹⁸Ｆ］−フッ化物を好適には塩基（例えば、テトラブチルアンモニウム又はＫ₂ＣＯ₃／クリプトフィックス（Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ）２２２）からの蒸発によって予備活性化したものと、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシドのような適当な溶媒中において、通例は高温（例えば、６０〜１５０℃、好適には６０〜１２０℃）又はマイクロ波加熱下で反応させ、次いで酸分解処理のような標準的方法を用いてＮ−保護基を除去することができる。

式（ＩＶ）の化合物は、以下の式（ＸＸ）の対応する前駆体又はその保護誘導体から製造できる。

式中、Ｌは脱離基、好ましくはｐ−トルエンスルホネート、トリフルオロメタンスルホネート又はメタンスルホネート或いはハライドであり、リンカー及びＲ４は前記に定義した通りである。Ｌは、サイクロトロンで生成された水性［¹⁸Ｆ］−フッ化物を好適には塩基（例えば、テトラブチルアンモニウム又はＫ₂ＣＯ₃／クリプトフィックス２２２）からの蒸発によって予備活性化したものと、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシドのような適当な溶媒中において、通例は高温（例えば、６０〜１２０℃）で反応し得る。

本発明はまた、一般式（Ｖ）又は（ＶＩ）の化合物の有効量（例えば、インビボＰＥＴイメージングで使用するのに有効な量）を１種以上の薬学的に許容される補助剤、賦形剤又は希釈剤と共に含んでなる放射性医薬品組成物を提供する。

本発明の好ましい実施形態は、医学で使用するための、特に（好適にはＰＥＴによる）腫瘍イメージングで使用するための一般式（Ｖ）又は（ＶＩ）の化合物であって、ベクターが国際公開第０１／７７４１５号及び同第０３／００６４９１号に記載されているもののようなＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド又はその類似体である化合物に関する。かかるベクターは、好ましくは次式のフラグメントを含み、

さらに好ましくは以下の式（Ａ）のペプチドである。

式中、Ｘ⁷は−ＮＨ₂又は次式の基であり、

（式中、「ａ」は１〜１０の整数であり、最も好ましくはａは１である。）
Ｒ５はペプチドの反応後にリシン残基のε−アミノとアミド結合を形成し、Ｒ１によって定義されるが、最も好ましくは下記の構造（Ｉｄ）及び（Ｉｅ）によって例示される。

かくして、以下の式（Ｉｆ）及び（Ｉｇ）に示される構造を有する式（Ｉ）が得られる。

本発明の放射性標識コンジュゲートは、ＰＥＴイメージングのため、所望の信号を得るのに十分な量で患者に投与すればよい。通常、体重７０ｋｇ当たり０．０１〜１００ｍＣｉ、好ましくは０．１〜５０ｍＣｉの典型的な放射性核種投与量で十分であろう。

したがって、本発明に係る放射性標識コンジュゲートは、完全に当業者の技術常識に属するやり方で、生理学的に許容されるキャリヤー又は賦形剤を用いて投与のために製剤化できる。例えば、薬学的に許容される賦形剤を任意に添加した化合物を水性媒質中に懸濁又は溶解し、次いで得られた溶液又は懸濁液を滅菌すればよい。

さらに別の態様から見れば、本発明は、放射性医薬品をヒト又は動物の身体に投与する段階及び前記身体の少なくとも一部の画像を生成する段階を含むインビボイメージング方法（好適にはＰＥＴ）、好ましくは腫瘍イメージング方法で使用するための放射性医薬品の製造における本発明の放射性標識コンジュゲートの使用を提供する。

さらに別の態様から見れば、本発明は、ヒト又は動物の身体の画像を生成する方法であって、本発明に係る放射性標識コンジュゲートを含む放射性医薬品を前記身体（例えば、脈管系中）に投与する段階、及びＰＥＴを用いて前記放射性医薬品が分布した前記身体の少なくとも一部の画像を生成する段階を含んでなる方法を提供する。

さらに別の態様から見れば、本発明は、癌に関連した病態（好ましくは血管新生）に対処するための薬物（例えば、細胞毒性薬剤）によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニターする方法であって、本発明に係る放射性標識コンジュゲートを前記身体に投与する段階及び細胞レセプター（好ましくは内皮細胞レセプター、特にαｖβ３レセプター）による前記コンジュゲートの取込みを検出する段階を含んでなり、前記投与及び検出は任意ではあるが好ましくは（例えば前記薬物による治療前、治療中及び治療後に）繰り返して実施される方法を提供する。

本発明のさらに別の態様では、式（ＩＩ）又は（ＩＶ）の補欠分子族及び式（Ｉ）又は（ＩＩＩ）の化合物を含む放射能フッ素化トレーサーを製造するためのキットが提供される。

本発明のさらに別の態様に従えば、式（ＸＸ）の補欠分子族及び式（Ｉ）の化合物を含む放射能フッ素化トレーサーを製造するためのキットが提供される。本発明の別の態様に従えば、式（）又は（）の補欠分子族及び式（ＩＩＩ）の化合物を含む放射能フッ素化トレーサーを製造するためのキットが提供される。

キットの使用に際しては、それぞれ上述した方法を用いて、式（）の化合物は対応する式（ＩＩ）の化合物に転化され、式（）又は（）の化合物は対応する式（ＩＶ）の化合物に転化される。好ましくは、反応混合物をＳｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ（ＳＰＥ）カートリッジに通すことにより、式（ＩＩ）又は（ＩＶ）の化合物を廃反応体から分離できる。ＳＰＥカートリッジは、黒鉛パッド、Ｃ１８固定相又はイオン交換樹脂を含み得る。次いで、式（ＩＩ）又は（ＩＶ）の化合物を、好適には水性緩衝液（ｐＨ３〜１１）に溶解し得る式（Ｉ）又は（ＩＩＩ）の化合物にそれぞれ添加する。極端でない温度で１〜７０分間反応させた後、標識ペプチドを例えばＳＰＥにより精製して回収することができる。

以下の実施例によって本発明を例示するが、実施例中では下記の略語を用いる。
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＮＭＲ：核磁気共鳴
ｈｒ（ｓ）：時間
ｍｉｎ（ｓ）：分
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＴＢＡＦ：フッ化テトラブチルアンモニウム
ＭｅＯＨ：メタノール
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
Ｂｏｃ：ｔ−ブトキシカルボニル
ＲＴ：室温
ｉ−Ｐｒ₂−Ｎｅｔ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ｔ−ＢＤＰＳｉＣｌ：ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルクロリド
ＮａＨ：水素化ナトリウム
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＭＢｑ：メガベクレル
次の移動相／勾配系を使用した。溶媒Ａ：水（０．１％ＴＦＡ）、溶媒Ｂ：アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）。

例１
トルエン−４−スルホン酸４−（Ｎ−メチル−Ｎ−Ｂｏｃ−アミノオキシ）ブチルエステルの製造

（ａ）Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−メチルヒドロキシルアミン
Ｎ−メチルヒドロキシルアミン（４．２ｇ、０．０５ｍｏｌ）を５０％水性テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（２０ｍｌ）に溶解し、撹拌しながら氷上で冷却した。氷冷溶液に炭酸カリウム（３．６ｇ、０．０２７５ｍｏｌ）を添加し、次いで１５ｍｌのＴＨＦに溶解したジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（１２ｇ、０．０５５ｍｏｌ）を添加した。混合物を０℃で２時間撹拌し、室温で２時間撹拌した。ＴＨＦを減圧下で除去し、残留物をＤＣＭに溶解した。溶液を水で２回洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、濃縮することで、ピンク色の低粘度油状物６．４７ｇ（８８％）を得た。生成物をエレクトロスプレー質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）によって同定した（ＭＨ⁺計算値１４７．０９、実測値１４７．６）。生成物はそれ以上精製せずに使用した。

（ｂ）（４−ブロモブトキシ）−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシラン
ｉ−Ｐｒ₂−Ｎｅｔ（１０ｍｌ）を含むＤＣＭ（１０ｍｌ）に４−ブロモ−１−ブタノール（２．７５ｇ、１８ｍｍｏｌ）を溶解した溶液に、アルゴン雰囲気下でｔ−ＢＤＰＳｉＣｌ（５ｍｌ、１８ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を室温で２時間撹拌し、真空中で濃縮し、クロマトグラフィー処理（ヘキサン／酢酸エチル １０：１）することで、低粘度で無色の油状物４．３９ｇ（６２％）を得た。構造をＮＭＲで確認した。

（ｃ）Ｏ−［４−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシラニルオキシ）ブチル］−Ｎ−メチル−Ｎ−Ｂｏｃ−ヒドロキシルアミン
Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−メチルヒドロキシルアミン（ａ）（０．７４ｇ、５ｍｍｏｌ）を１０ｍｌのＤＭＦに溶解し、ＮａＨ（２００ｍｇ、鉱油中６０％分散液、４．７５ｍｍｏｌ）で処理し、アルゴン雰囲気下で１時間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、（４−ブロモブトキシ）−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシラン（ｂ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液で処理し、０℃でさらに３時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）に溶解し、分液漏斗内に注入した。有機層を０．１Ｍ ＮａＯＨ（５×５０ｍＬ）、Ｈ₂Ｏ（５０ｍＬ）、０．１Ｍ ＫＨＳＯ₄及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、次いでＭｇＳＯ₄で乾燥した。溶媒の除去後、残留物をシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ １０：１）して０．５８８ｇ（２４％）の生成物を得た。生成物をエレクトロスプレー質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）によって同定した（ＭＨ⁺計算値４５７．２６、実測値４５７．８）。

（ｄ）４−（Ｎ−メチル−Ｎ−Ｂｏｃ−ヒドロキシルアミン）ブタン−１−オール
２０ｍＬの乾燥ＴＨＦに溶解したＯ−［４−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシラニルオキシ）ブチル］−Ｎ−メチル−Ｎ−Ｂｏｃ−ヒドロキシルアミン（ｃ）（５８８ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）にＴＢＡＦ（１．６ｍＬ、１．５８６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物をアルゴン下で一晩撹拌した。溶液にＮＨ₄Ｃｌ（飽和）（１０ｍＬ×３）を添加し、ＴＨＦを蒸発させた。溶液をＤＣＭで抽出し、有機相を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させた。残留物をシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ １：１）して０．１７０ｇ（６３％）の生成物を得た。生成物をＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２），４．６×５０ｍｍ、検出：２１４ｎｍ、勾配：１０分で５０〜１００％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ）、流量：２ｍＬ／分、Ｒｔ＝２．７０分）によって分析した。ＮＭＲ分析によって追加の確認を行った。

（ｅ）トルエン−４−スルホン酸４−（Ｎ−メチル−Ｎ−Ｂｏｃ−ヒドロキシルアミン）ブチルエステル
４−（Ｎ−メチル−Ｎ−Ｂｏｃ−ヒドロキシルアミン）ブタン−１−オール（ｄ）（１７０ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１６１μＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの乾燥ＤＣＭに溶解した氷浴冷却撹拌溶液に、乾燥ＤＣＭ（５ｍＬ）中のトルエン−４−スルホニルクロリド（１９０．８ｍｇ、１．００１ｍｍｏｌ）をアルゴン下で添加した。１５分後に氷浴を取り除き、反応混合物を室温に放置した。２時間後、新しい反応剤（トリエチルアミン（３２μＬ、０．２３ｍｍｏｌ）、トルエン−４−スルホニルクロリド（２９．３６ｍｇ、０．１５４ｍｍｏｌ））を添加した。２４時間後、ＴＬＣ上で想定生成物を認めることができる。３０時間後、新しい反応剤（トリエチルアミン（５３μＬ、０．３８５ｍｍｏｌ）、トルエン−４−スルホニルクロリド（７３．５ｍｇ、０．３８５ｍｍｏｌ））を反応混合物に添加し、一晩放置した。有機相を１０％ＮａＨＣＯ₃（１０ｍＬ×３）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥した。有機相を真空下で除去し、シリカ上でフラッシュする（ヘキサン：酢酸エチル ６：４）ことで１１１ｍｇ（４１．５％）の生成物を得た。ＮＭＲは、生成物中におけるトルエン−４−スルホニルクロリド不純物の存在を示した。４−スルホニルクロリドを除去するために追加の精製が必要であった。ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（８：２）を用いることで、シリカフラッシュカラム上で良好な分離が達成され、４−スルホニルクロリドが除去された。収量：６４ｍｇ（２２％）。生成物をＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２），４．６×５０ｍｍ、検出：２１４ｎｍ、勾配：１０分で２０〜８０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ）、流量：２ｍＬ／分、Ｒｔ＝２．７０分）によって分析した。生成物をエレクトロスプレー質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）によって同定した（ＭＨ⁺計算値３７３．１６、実測値３７３．９）。ＮＭＲ分析によって追加の確認を行った。

例２
非放射性標準としてのＯ−（４−フルオロブチル）−（Ｎ−メチル−Ｎ−Ｂｏｃ−ヒドロキシルアミン）の製造

ＫＦ（４．６４ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）及びクリプトフィックス（３０．１ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）を乾燥アセトニトリル（０．７５ｍＬ）に溶解した。混合物を５分間撹拌した後、乾燥アセトニトリル（０．２５０ｍＬ）に溶解した化合物１（１５ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ）をアルゴン下で添加した。混合物を６０℃で１時間加熱した。１時間後、ＴＬＣは反応が完了したことを示した。溶媒を蒸発させ、残留物をシリカ上でフラッシュする（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１：１））ことで４．５ｍｇ（５１％）の生成物を得た。生成物をＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２），４．６×５０ｍｍ、検出：２１４ｎｍ、勾配：１０分で２０〜７０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ）、流量：２ｍＬ／分、Ｒｔ＝２．７０分）によって分析した。生成物をエレクトロスプレー質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）によって同定した（ＭＨ⁺計算値２２１．１４、実測値２２１．７）。構造をＮＭＲで確認した。

例３
¹⁸ Ｆ−化合物２の放射合成及び２−ブロモアセトフェノンへのコンジュゲーション

Ｒａｙｔｅｓｔ社からのＳｙｎＣｈｒｏｍ Ｒ＆Ｄモジュール上で放射合成を実施した。Ｎ₂下で９０°に分間加熱することにより、クリプトフィックス２２２（１ｍＬのアセトニトリル中３９．１ｍｇ）及び炭酸カリウム（１ｍＬの水中６５．７ｍｇ）の存在下で¹⁸Ｆ−フッ化物（１ＧＢｑ以下）を共沸的に乾燥した。この間に、２×１ｍＬのアセトニトリルを添加して蒸発させた。＜４０°に冷却した後、トルエン−４−スルホン酸４−（Ｎ−メチル−Ｎ−Ｂｏｃ−アミノオキシ）ブチルエステル（化合物１）の溶液（１ｍＬのアセトニトリル中３ｍｇ）を添加した。反応器を７０℃に２０分間加熱して標識を行った。６０／４０ ＣＨ₃ＣＮ／Ｈ₂Ｏからなる定組成流を使用しながら、粗反応混合物を２１４ｎｍでＨＰＬＣにかけた。クロマトグラムは、非放射性標準と共溶出する良好な収量の標識化合物（約８６％ＲＣＰ）を示した。２ｍＬのＡＣＮを用いて粗反応混合物をＳｅｐ−Ｐａｋアルミニウムカラムから溶出させることで遊離フッ化物を除去し、遊離フッ化物の活量を測定した（遊離フッ化物は１５％未満であった）。「精製」混合物をＨＰＬＣで再分析したところ、遊離フッ化物は除去されていることがわかった。１ｍＬ（１００ＭＢｑ）の精製生成物を１ｍＬの１Ｍ ＨＣｌ中において９０℃で２０分間加水分解してＢＯＣ保護基を除去することで、１００％の非保護Ｆ−１８放射性標識化合物を得た。１ｍＬの加水分解生成物を１０ｍＬのミリＱ水で希釈し、ｐＨをｐＨ１１〜１２に調整し、プレコンディショニングを施したＳＥＰ−ＰＡＫ Ｃ−１８カラムから溶出させた。カラム上の放射能は３０．１ＭＢｑと測定された。２ｍＬのＤＭＦでカラムから反応バイアル中に溶出させることで、２３ＭＢｑを有する２ｍＬの液体が得られた。６ｍｇのブロモアセトフェノンを１０μＬのジイソプロピルエチルアミンと共に添加し、９０℃で１０分間加熱した。反応混合物をＨＰＬＣで分析したところ、「遊離」前駆体に対応するピークより大きい面積（５７％）を有する新しいピークが５．４６分の位置に溶出したことにより、コンジュゲート形成の証拠が示された。ＨＰＬＣは次の通りであった。カラム：Ｘｔｅｒｒａ（Ｗａｔｅｒｓ社）５μ Ｃ１８ ４．６×２５０ｍｍ、検出：２５０ｎｍ及び２１４ｎｍ、ＮａＩ検出器、勾配：定組成、４０％Ａ＝Ｈ₂Ｏ及び６０％Ｂ＝アセトニトリル、流量：１ｍＬ／分。

例４
トルエン−４−スルホン酸２−［２−（Ｎ−メチル−Ｎ−ＢＯＣ−アミノオキシ）エトキシ］エチルエステルの製造

（ａ）Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−メチルヒドロキシルアミン
Ｎ−メチルヒドロキシルアミン（４．２ｇ、０．０５ｍｏｌ）を５０％水性テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（２０ｍｌ）に溶解し、撹拌しながら氷上で冷却した。氷冷溶液に炭酸カリウム（３．６ｇ、０．０２７５ｍｏｌ）を添加し、次いで１５ｍｌのＴＨＦに溶解したジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（１２ｇ、０．０５５ｍｏｌ）を添加した。混合物を０℃で２時間撹拌し、室温で２時間撹拌した。ＴＨＦを減圧下で除去し、残留物をＤＣＭに溶解した。溶液を水で２回洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、濃縮することで、ピンク色の低粘度油状物６．４７ｇ（８８％）を得た。生成物をエレクトロスプレー質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）（ＭＨ⁺計算値１４７．０９、実測値１４７．６）及びＮＭＲによって同定した。生成物はそれ以上精製せずに使用した。

（ｂ）トルエン−４−スルホン酸２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチルエステル
ジエチレングリコール（２２ｇ、２０７．５ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１００ｍｌ）溶液にトリエチルアミン（１０．５ｇ、１０３．７５ｍｍｏｌ）を添加した。９．８９ｇ（５１．８ｍｍｏｌ）のトルエン−４−スルホニルクロリドを一度に添加した。溶液を室温で１時間撹拌した。ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨを用いてＴＬＣを実施した。１／２時間後、ＴＬＣは生成物の生成物を示した。１時間１５分後、反応混合物を０．１Ｍ ＫＨＳＯ₃及び５％ＮａＨＣＯ₃で洗浄した。有機相をＮａ₂ＳＯ₃で乾燥し、減圧下で蒸発させた。粗反応混合物をシリカゲル上に捕捉し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ５０：５０を用いたコンビフラッシュ・コンパニオン（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ）装置（３３０ｇカラム）上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。ＮＭＲで構造を確認した。

（ｃ）４−トルエンスルホン酸２−［２−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシラニルオキシ）エトキシ］エチルエステル
ｉ−Ｐｒ₂−Ｎｅｔ（６ｍＬ、１．２Ｅｑ）を含むＣＨ₂Ｃｌ₂（３０ｍｌ）にトルエン−４−スルホン酸２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチルエステル（ｂ）（７．６２２ｇ、２９．２８ｍｍｏｌ）を溶解した溶液に、アルゴン雰囲気下でｔ−ＢＤＰＳｉＣｌ（９ｍｌ、１．２ｅｑ、３５．１３６ｍｍｏｌ）及び触媒量のＤＭＡＰを添加した。溶液を室温で２日間撹拌した。ＴＬＣは反応の完了を示唆した。粗反応混合物を１００ｍＬのＤＣＭで希釈し、２×１００ｍＬの水及び１００ｍＬのブラインで洗浄した。ＭｇＳＯ₄を用いて有機相を乾燥し、真空下で蒸発させ、３０分で０〜５０％酢酸エチルの勾配（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を用いるコンパニオン・コンビフラッシュ（１２０ｇカラム）上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。外観は透明で粘稠な油状物であった。ＮＭＲで構造を確認した。

（ｄ）Ｏ−｛２−［２−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシラニルオキシ）エトキシ］エチル｝−Ｎ−メチル−Ｎ−ＢＯＣ−ヒドロキシルアミン
オーブン乾燥したフラスコ（５０ｍＬ）に、ＮａＨ（鉱油中６０％分散液）４８１ｍｇ（１２．０３ｍｍｏｌ）をアルゴン下で加えた。分散液をペンタンで３回洗浄して鉱油を除去した。純ＮａＨに５ｍＬのＴＨＦ（乾燥）を添加した。５ｍＬのＴＨＦに溶解した１．５３ｍｇ（１０．４３ｍｍｏｌ）のＮ−ＢＯＣ−Ｎ−メチルヒドロキシルアミン（ａ）をゆっくりと添加した。反応混合物を、それ以上のガス発生が見られなくなるまで１／２時間放置する。溶液を氷浴上に載せ、１／２時間撹拌した後、４ｇ（８．０２ｍｍｏｌ）の４−トルエンスルホン酸２−［２−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシラニルオキシ）エトキシ］エチルエステル（ｃ）を滴下した。溶液を氷浴上に１／２時間放置し、次いでＲＴで一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に溶解し、分液漏斗内に注入した。有機層を０．１Ｍ ＮａＯＨ（５×５０ｍＬ）、Ｈ₂Ｏ（５０ｍＬ）、０．１Ｍ ＫＨＳＯ₄及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、次いでＭｇＳＯ₄で乾燥した。溶媒の除去後、ＤＣＭ中のメタノール勾配（メタノール：１９分で０〜２０％）を用いるコンパニオン・コンビフラッシュ上でのフラッシュクロマトグラフィーによって残留物を精製した。ＮＭＲで構造を確認した。

（ｅ）２−［２−（Ｎ−メチル−Ｎ−ＢＯＣ−アミノオキシ）エトキシ］エタノール
乾燥ＴＨＦ（１５ｍＬ）に溶解したＯ−｛２−［２−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシラニルオキシ）エトキシ］エチル｝−Ｎ−メチル−Ｎ−ＢＯＣ−ヒドロキシルアミン（ｄ）（３ｇ、６．３３ｍｍｏｌ）にＴＢＡＦ（６．７８ｍＬ、６．７８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を一晩撹拌した。ＴＨＦを蒸発させ、残留物をＤＣＭに溶解し、ＮＨ₄Ｃｌ（飽和）（４０ｍＬ）、水及びブラインで洗浄した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、蒸発させた。残留物をコンパニオン・コンビフラッシュ（４０ｇカラム）上でのフラッシュクロマトグラフィー（勾配：ＤＣＭ中において２０分で０〜５％ＭｅＯＨ）によって精製した。ＮＭＲで構造を確認した。

（ｆ）トルエン−４−スルホン酸２−［２−（Ｎ−メチル−Ｎ−ＢＯＣ−アミノオキシ）エトキシ］エチルエステル
２−［２−（Ｎ−メチル−Ｎ−ＢＯＣ−アミノオキシ）エトキシ］エタノール（ｅ）１ｇ（４．２５ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（１５ｍＬ）に溶解した撹拌溶液に、１５ｍＬのＤＣＭ中のトリエチルアミン（９１０ｍｇ、１２５４μＬ、９ｍｍｏｌ）及びトルエン−４−スルホニルクロリド（１６２０ｍｇ、８．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をアルゴン下で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ヘキサン／酢酸エチル ６：４）は反応の完了を示した。反応混合物を５０ｍＬのＤＣＭで希釈し、有機相を５％ＮａＨＣＯ₃、ブライン及び水で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ₄上で乾燥し、濾過し、減圧下で蒸発させた。生成物を、ヘキサン／酢酸エチルの勾配を用いるコンパニオン・コンビフラッシュ（４０ｇカラム）によって精製した。ＮＭＲで構造を確認した。

例５
Ｏ−［２−（２−フルオロエトキシ）エチル］−Ｎ−メチル−Ｎ−ＢＯＣ−ヒドロキシルアミンの製造

ＫＦ（５８ｍｇ、１ｍｍｏｌ）及びクリプトフィックス（３７６ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を乾燥アセトニトリル（２ｍＬ）に溶解した。混合物を５分間撹拌した後、乾燥アセトニトリル（０．２５０ｍＬ）に溶解した化合物１（２００ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）をアルゴン下で添加した。混合物を８０℃で１時間加熱した。１時間後、ＴＬＣは反応の完了を示した。減圧を用いて有機相を蒸発させ、ＤＣＭに再溶解し、シリカゲル上に捕捉した。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル １：１）を用いて物質を精製した。収量：８３ｍｇ（０．３５ｍｍｏｌ）。ＮＭＲで構造を確認した。

例６
マレイミド−プロピオニル−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＯＨの製造

ＨＢＴＵ活性化を用いるスローｍｏｃ・シングル・カップル（Ｓｌｏｗｍｏｃ Ｓｉｎｇｌｅ Ｃｏｕｐｌｅ）方法に従い、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｓａｓｒｉｎ樹脂（０．１ｍｍｏｌ）を用いて全自動ペプチド合成機（ＡＢＩ ４３３Ａ合成機）上でモデルペンタペプチドＬｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＯＨをアセンブルした。３−（マレイミド）プロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（０．５２ｍｍｏｌ）を用いてマレイミド−プロピオニル酸を手作業でカップリングした。トリイソプロピルシラン及び水を含むトリフルオロ酢酸（９５：２．５：２．５ ｖ／ｖ／ｖ）中で、樹脂からのペプチド除去及び側鎖保護基の脱保護を同時に実施した。濾過後、溶液を減圧下で濃縮し、残留物をジエチルエーテルで洗浄した。粗生成物を逆相分取クロマトグラフィー（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）カラム，２５０×５０ｍｍ，１０μｍ、勾配：６０分で０〜３０％溶媒Ｂ、流量：５０ｍＬ／分）で精製して６６ｍｇ（９５％）の純化合物を得た。生成物をＬＣ−ＭＳ［Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８−（２），５０×２．０ｍｍ，５μｍ、勾配：５分で０〜３０％溶媒Ｂ、流量：０．６ｍＬ／分、ｔ_R＝２．８６分］で分析したところ、ｍ／ｚ＝６８７．６(Ｍ＋Ｈ)⁺、ｍ／ｚ計算値＝６８７．３４(Ｍ＋Ｈ)⁺であった。

例７
¹⁸ Ｆ−化合物２の放射合成及び化合物３へのコンジュゲーション

ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社からのＴｒａｃｅｒＬａｂ ＦｘＦｎモジュール上で放射合成を実施した。Ｎ₂下で１００°に９分間加熱することにより、クリプトフィックス２２２（１ｍＬのアセトニトリル中３９．１ｍｇ）及び炭酸カリウム（１ｍＬの水中６５．７ｍｇ）の存在下で¹⁸Ｆ−フッ化物（３５０ＭＢｑ以下）を共沸的に乾燥した。この間に、２×０．７ｍＬのアセトニトリルを添加して蒸発させた。＜５０°に冷却した後、トルエン−４−スルホン酸２−［２−（Ｎ−メチル−Ｎ−ＢＯＣ−アミノオキシ）エトキシ］エチルエステル（化合物１）の溶液（１ｍＬの乾燥アセトニトリル中５ｍｇ）を添加した。反応器を９０℃に１０分間加熱して標識を行った。粗反応混合物を５ｍＬの水で希釈した。ＴＬＣ用の試料を採取すると共に、５０μＬをＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｇｅｍｉｎｅ １５０ｍｍ×４．６０ Ｃ１８ ５μｍ、２１４ｎｍ、２５４ｎｍ及びγ線検出器で検出、１５分で２０〜８０％の溶媒Ｂを用いた勾配流）にかけた。ＴＬＣ（１：１ 酢酸エチル／ヘキサン）は、約７０％という良好な収率の標識化合物を示した（ｎ＝３）。化合物は非放射性対照標準と共溶出した。粗反応混合物をさらに４ｍｌの水で希釈し、（５ｍＬのＭｅＣＮ及び１０ｍＬのＨ₂Ｏでプレコンディショニングした）Ｏａｓｉｓ ＨＬＢ Ｓｅｐ−Ｐａｋカートリッジに通した。Ｏａｓｉｓカートリッジを５０ｍＬの２５％メタノール水溶液で洗浄し、１．５ｍＬのＭｅＣＮを用いて精製化合物を溶出した。ＭｅＣＮ溶出液に０．３ｍＬのエーテル中２Ｎ ＨＣｌを添加し、ＲＴで５分間撹拌してＢＯＣ基を定量的に除去した後、有機相をＮ₂流及び減圧下で６５℃で３分間蒸発させ、１ｍＬのＭｅＣＮを添加した後にさらに３分間蒸発させた。０．８ｍＬの０．４Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５）に溶解した５ｍｇの化合物３を乾燥混合物に添加し、反応物を７０℃に６０分間加熱してコンジュゲーションを行った。０分及び６０分に試料を採取した。反応混合物をＨＰＬＣで分析したところ、面積（７４％）を有する新しいピークが１１分の位置にＦ１９−対照標準と共溶出したことにより、化合物３へのコンジュゲート形成の証拠が示された（図１）。ＨＰＬＣは次の通りであった。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｇｅｍｉｎｅ １５０ｍｍ×４．６０ Ｃ１８ ５μｍ、勾配：１０分で０〜４０％溶媒Ｂ及び１０〜１５分に４０％溶媒Ｂ。

例８
４−（２−ニトロビニル）ベンゾイル−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＯＨの製造

例６に記載したようにしてモデルペンタペプチドＬｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＯＨをアセンブルした。純ＤＭＦ中の樹脂（０．２ｍｍｏｌ）に５８ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）のトランス−β−ニトロスチレン及び１５６．５ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）のＰｙＡＯＰを添加した後、１０２μＬ（０．６ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡを添加し、反応物を１時間放置した。トリイソプロピルシラン及び水を含むトリフルオロ酢酸（９５：２．５：２．５ ｖ／ｖ／ｖ）中で、樹脂からのペプチド除去及び側鎖保護基の脱保護を同時に実施した。濾過後、溶液を減圧下で濃縮し、残留物をジエチルエーテルで洗浄した。粗生成物を逆相分取クロマトグラフィー（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）カラム，２５０×５０ｍｍ，１０μｍ、勾配：６０分で０〜４０％溶媒Ｂ、流量：５０ｍＬ／分）で精製して１０１ｍｇ（７０％）の純化合物を得た。生成物をＬＣ−ＭＳ［Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８−（２），５０×２．０ｍｍ，５μｍ、勾配：５分で０〜３０％溶媒Ｂ、流量：０．６ｍＬ／分、ｔ_R＝４．１０分］で分析したところ、ｍ／ｚ＝７１１．３(Ｍ＋Ｈ)⁺、ｍ／ｚ計算値＝７１１．３(Ｍ＋Ｈ)⁺であった。

例９
化合物６への ¹⁸ Ｆ−化合物４のコンジュゲーション

上記例７に記載したようにして¹⁸Ｆ−化合物４の放射合成及び精製を実施した。¹⁸Ｆ−化合物４を含むＭｅＣＮ溶出液に０．２ｍＬのエーテル中２Ｎ ＨＣｌを添加し、ＲＴで５分間撹拌してＢＯＣ基を定量的に除去した後、有機相をＮ₂流及び減圧下で６５℃で３分間蒸発させ、１ｍＬのＭｅＣＮを添加した後にさらに３分間蒸発させた。０．８ｍＬの０．４Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５）に溶解した５ｍｇの化合物６を乾燥混合物に添加し、反応物を３０℃に５分間加熱した。反応混合物をＨＰＬＣで分析したところ、面積（７２％）を有する新しいピークが１０．４分の位置に¹⁹Ｆ−対照標準と共溶出したことにより、コンジュゲート形成の証拠が示された（図２）。ＨＰＬＣは次の通りであった。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｇｅｍｉｎｅ １５０ｍｍ×４．６０ Ｃ１８ ５μｍ、勾配：１０分で０〜４０％溶媒Ｂ及び１０〜１５分に４０％溶媒Ｂ。

例１０
マレイミド−プロピオニル−ＲＤＧペプチドの製造

５ｍＬ容器内で５０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）のペプチドＮＣ１００７１７を１ｍＬのＤＭＦに溶解した。２１．３ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）の３−（マレイミド）プロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを１３．６μＬ（０．０８ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡと共に１ｍＬのＤＭＦに溶解し、ペプチド溶液に添加した。反応物をＲＴで１時間撹拌した。ＤＭＦを蒸発させた。粗生成物を逆相分取クロマトグラフィー（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）カラム，２５０×５０ｍｍ，１０μｍ、勾配：６０分で０〜４０％溶媒Ｂ、流量：５０ｍＬ／分）で精製して２３ｍｇ（４０％）の純化合物を得た。生成物をＬＣ−ＭＳ［Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８−（２），５０×２．０ｍｍ，５μｍ、勾配：５分で５〜４０％溶媒Ｂ、流量：０．６ｍＬ／分、ｔ_R＝２．７４分］で分析したところ、ｍ／ｚ＝１４０９．９(Ｍ＋Ｈ)⁺、ｍ／ｚ計算値＝１４０９．５(Ｍ＋Ｈ)⁺であった。

例１１
化合物７への ¹⁸ Ｆ−化合物４のコンジュゲーション

上記例７に記載したようにして¹⁸Ｆ−化合物４の放射合成及び精製を実施した。ＭｅＣＮ溶出液に０．２ｍＬのエーテル中２Ｎ ＨＣｌを添加し、ＲＴで５分間撹拌してＢＯＣ基を定量的に除去した後、有機相をＮ₂流及び減圧下で６５℃で３分間蒸発させ、１ｍＬのＭｅＣＮを添加した後にさらに３分間蒸発させた。０．６ｍＬの０．４Ｍ酢酸塩緩衝液（ｐＨ５）＋０．４ｍＬのＤＭＦに溶解した５．７５ｍｇの化合物７を乾燥残留物に添加した。ペプチド混合物を７０℃に加熱し、４５分後に試料を採取した。粗反応混合物を放射性ＨＰＬＣで分析したところ、４５分後にペプチド中への¹⁸Ｆ−シントンの２４％取込みが見られ、¹⁸Ｆ−化合物がその真正標準と共溶出した（図３）。ＨＰＬＣは次の通りであった。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｇｅｍｉｎｅ １５０ｍｍ×４．６０ Ｃ１８ ５μｍ、勾配：１０分で０〜４０％溶媒Ｂ及び１０〜１５分に４０％溶媒Ｂ。

例１１
ベンゾイル−トランス−β−ニトロスチレン−ＲＤＧの製造

４０ｍｇ（０．０３２ｍｍｏｌ）のペプチドＮＣ１００７１７を２ｍＬのＤＭＦに溶解した。２ｍＬのＤＭＦ及び１６μＬ（０．０９６ｍｍｏｌ）に溶解した１２．３ｍｇ（０．０６４ｍｍｏｌ）のトランス−β−ニトロスチレン及び２５ｍｇ（０．０４８ｍｍｏｌ）のＰｙａＯＰを添加した。混合物を１０分間予備活性化した後、それをペプチド（ＮＣ１００７１７）に添加した。１５分後、ＬＣ−ＭＳは反応の完了を示し、反応混合物をＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ（２０ｍＬ）で奪活した。有機相を減圧下で除去した。

粗生成物を逆相分取クロマトグラフィー（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）カラム，２５０×５０ｍｍ，１０μｍ、勾配：６０分で５〜４５％溶媒Ｂ、流量：５０ｍＬ／分）で精製して１２ｍｇ（２６％）の純化合物を得た。生成物をＬＣ−ＭＳ［Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８−（２），５０×２．０ｍｍ，５μｍ、勾配：５分で５〜４０％溶媒Ｂ、流量：０．６ｍＬ／分、ｔ_R＝２．７４分］で分析したところ、ｍ／ｚ＝１４３３．６(Ｍ＋Ｈ)⁺、ｍ／ｚ計算値＝１４３３．５(Ｍ＋Ｈ)⁺であった。

例１２
化合物８への ¹⁸ Ｆ−化合物４のコンジュゲーション

上記例７に記載したようにして¹⁸Ｆ−化合物４の放射合成及び精製を実施した。ＭｅＣＮ溶出液に０．２ｍＬのエーテル中２Ｎ ＨＣｌを添加し、ＲＴで５分間撹拌してＢＯＣ基を定量的に除去した後、有機相をＮ₂流及び減圧下で６５℃で３分間蒸発させ、１ｍＬのＭｅＣＮを添加した後にさらに３分間蒸発させた。０．８ｍＬの０．４Ｍ酢酸塩緩衝液（ｐＨ５）＋０．４ｍＬのＤＭＦに溶解した化合物８（５ｍｇ）を乾燥残留物に添加した。反応物を３０℃で５分間放置した。粗反応混合物を放射性ＨＰＬＣで分析したところ、５分後にペプチド中への¹⁸Ｆ−シントンの２５％取込みが見られ、１２分後に¹⁸Ｆ−化合物がその真正標準と共溶出した（図４）。ＨＰＬＣは次の通りであった。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｇｅｍｉｎｅ １５０ｍｍ×４．６０ Ｃ１８ ５μｍ、勾配：１０分で０〜４０％溶媒Ｂ及び１０〜１５分に４０％溶媒Ｂ。

例１３
エテンスルホニル酢酸の合成

２５０ｍＬの三つ口丸底フラスコ内で１．１ｇ（４７．５ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）のナトリウムを２５ｍＬの無水アルコールに溶解した。Ｈ₂の発生及びナトリウムの消失が完了した後、２−メルカプト酢酸エチル（４．６０ｍＬ、４０．７ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を滴下した。得られた混合物を２０分間撹拌した後、５７ｍＬ（５７ｍｍｏｌ、１．４ｅｑ）の臭化ビニル（ＴＨＦ中１Ｍ溶液）を添加した。混合物をオートクレーブに移し、１０５℃に１時間加熱した。反応混合物を４時間撹拌し続けた。次いで、ＴＨＦ及びＥｔＯＨを真空中で蒸発させ、残留物を水（１０ｍＬ）に溶解し、ジエチルエーテル（５×６０ｍＬ）で抽出した。有機相をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、ＸＳ溶媒を真空中で除去した。次いで、粗物質（２．９ｇ）を１０ｍＬの氷酢酸に溶解し、０℃に冷却した。３６〜４０％過酢酸（７．４ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を０℃で３０分間撹拌した後、さらに２時間にわたって撹拌し続けて温度を室温に上昇させた。再び溶媒を真空下で除去し、粗生成物を自動コンビフラッシュ装置上でのフラッシュクロマトグラフィー（１０分でヘキサン中２０〜１００％酢酸エチル）によって精製した。ＮＭＲにより、構造がスルホキシドであることを確認した。すべての画分を集め、スルホキシド（１．５ｇ、９．２ｍｍｏｌ）に関してさらに過酢酸（２ｅｑ）で酸化してすべての出発原料を消失させた。粗生成物をそれ以上精製せずに使用した。エテンスルホニル酢酸エチルエステルを２０ｍＬの０．１Ｍ ＨＣｌに溶解し、混合物を１００℃で１３時間還流させることでエテンスルホニル酢酸（１２．８ｇ、８ｍｍｏｌ）を得た。ＮＭＲで構造を確認した。

エテンスルホニル−アセチル−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＯＨの製造

例６に記載したようにしてモデルペンタペプチドＬｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＯＨをアセンブルした。純ＤＭＦ（５ｍＬ）中のペプチド結合樹脂（０．１ｍｍｏｌ）に７５ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）のエテンスルホニル酢酸及び２６１ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）のＰｙＡＯＰを添加した後、１７１μＬ（１ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡを添加し、反応物を２時間放置した。トリイソプロピルシラン及び水を含むトリフルオロ酢酸（９５：２．５：２．５ ｖ／ｖ／ｖ）中で、樹脂からのペプチド除去及び側鎖保護基の脱保護を同時に実施した。濾過後、溶液を減圧下で濃縮し、残留物をジエチルエーテルで洗浄した。粗生成物を逆相分取クロマトグラフィー（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）カラム，２５０×５０ｍｍ，１０μｍ、勾配：６０分で０〜３０％溶媒Ｂ、流量：１０ｍＬ／分）で精製して５１ｍｇ（７６％）の純化合物を得た。生成物をＬＣ−ＭＳ［Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８−（２），５０×２．０ｍｍ，５μｍ、勾配：５分で０〜３０％溶媒Ｂ、流量：０．６ｍＬ／分、ｔ_R＝２．６１分］で分析したところ、ｍ／ｚ＝６６８．４(Ｍ＋Ｈ)⁺、ｍ／ｚ計算値＝６６８．３(Ｍ＋Ｈ)⁺であった。

ＧＥ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ社からのＴｒａｃｅｒＬａｂ ＦｘＦｎモジュール上で放射合成を実施した。Ｎ₂流及び真空下で１００°に９分間加熱することにより、２１５μＬの水及び７８５μＬのアセトニトリル（総量０．８ｍＬ）に溶解した５６ｍｇのクリプトフィックス２２２（Ｋ₂₂₂、４，７，１３，１６，２１，２４−ヘキサオキサ−１，１０−ジアザビシクロ［８．８．８］ヘキサコサン）及び１０ｍｇのＫ₂ＣＯ₃の存在下で¹⁸Ｆ−フッ化物（２００ＭＢｑ）を共沸的に乾燥した。この間に、２×０．８ｍＬのアセトニトリルを添加して蒸発させた。＜５０°に冷却した後、トルエン−４−スルホン酸２−［２−（Ｎ−メチル−Ｎ−Ｂｏｃ−アミノオキシ）エトキシ］エチルエステル（化合物３）の溶液（１ｍＬの乾燥アセトニトリル中３ｍｇ）を添加した。密閉した反応器を９０℃に１０分間加熱して標識を行った。粗反応混合物を９ｍｌの水で希釈し、（５ｍＬのＭｅＣＮ及び１０ｍＬのＨ₂Ｏでプレコンディショニングした）Ｏａｓｉｓ ＨＬＢ Ｓｅｐ−Ｐａｋカートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ社）に通した。Ｏａｓｉｓカートリッジを５０ｍＬの２５％ＭｅＯＨ水溶液で洗浄し、１．５ｍＬのＭｅＣＮを用いて精製化合物を溶出した。ＭｅＣＮ溶出液にエーテル中の２Ｎ ＨＣｌ（０．２ｍＬ）を添加し、混合物をＲＴで５分間撹拌してＢｏｃ基を定量的に除去した。有機相を真空中及びＮ₂流下で６５℃で３分間蒸発させ、次いで１ｍＬのＭｅＣＮを添加し、再び真空中で３分間蒸発させた。

０．８ｍＬの０．４Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５）に溶解した５ｍｇの化合物１０を乾燥混合物に添加し、反応物を７０℃に１０分間加熱してコンジュゲーションを行った。反応混合物をＨＰＬＣで分析したところ、コンジュゲート形成の証拠（８．９２分の位置に¹⁹Ｆ−対照標準と共溶出した新しいピーク、収率４０％）が示された。ＨＰＬＣは次の通りであった。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｇｅｍｉｎｅ １５０ｍｍ×４．６０ Ｃ１８ ５μｍ、勾配：１０分で０〜４０％溶媒Ｂ及び１０〜１５分に４０％溶媒Ｂ。

Claims (28)

1. 以下の式（Ｉ）の化合物を以下の式（ＩＩ）の化合物と反応させるか、或いは以下の式（ＩＩＩ）の化合物を以下の式（ＩＶ）の化合物と反応させてそれぞれ以下の式（Ｖ）又は（ＶＩ）のコンジュゲートを得ることを含んでなる放射性フッ素化方法。
   （式中、
   Ｒ１はハロゲン含有部分であり、
   Ｒ２はＮ含有アミノオキシ基であり、
   Ｒ３はＮ含有アミノオキシ基であり、
   Ｒ４はハロゲン含有部分である。）
   （式中、Ｙはアルキル又はアリールであり、式（ＩＩ）及び式（Ｖ）の化合物中の¹⁸Ｆ−リンカー基は安定な結合を介して¹⁸Ｆ原子に結合されたＮ含有アミノオキシ基を含むシントン群から選択され、式（ＩＶ）及び式（ＶＩ）の化合物中の¹⁸Ｆ−リンカー基はハロゲン含有シントンから選択される。）
2. Ｒ１がハロアセチル基又はフェナシルハロ基である、請求項１記載の方法。
3. Ｒ４がハロアセチル基又はフェナシルハロ基である、請求項１記載の方法。
4. Ｙがメチルである、請求項１記載の方法。
5. 式（ＩＩ）及び式（Ｖ）の化合物中の¹⁸Ｆ−リンカー基が下記のものから選択される、請求項１記載の方法。
   （式中、
   Ｖはハロゲン原子、好ましくは臭素、塩素又はヨウ素であり、
   ｎは０〜２０の整数であり、
   ＺはＯ、Ｎ又はＳである。）
6. 式（ＩＶ）及び式（ＶＩ）の化合物中の¹⁸Ｆ−リンカー基が下記のものから選択される、請求項１記載の方法。
   （式中、
   Ｖはハロゲン原子、好ましくは臭素、塩素又はヨウ素であり、
   ｎは０〜２０の整数であり、
   ＺはＯ、Ｎ又はＳである。）
7. 以下の式（Ｉａ）の化合物を以下の式（ＩＩａ）の化合物と反応させるか、或いは以下の式（ＩＩＩａ）の化合物を以下の式（ＩＶａ）の化合物と反応させてそれぞれ以下の式（Ｖａ）又は（ＶＩａ）のコンジュゲートを得ることを含んでなる放射性フッ素化方法。
   （式中、Ｒ１及びＲ４はそれぞれ式（Ｉ）又は（ＩＶ）の化合物に関して上記に定義した通りであり、式（ＩＩａ）及び式（ＩＶａ）の化合物中のリンカー基は各々Ｃ_1-60ヒドロカルビル基、好適にはＣ_1-30ヒドロカルビル基であり、任意には１〜３０のヘテロ原子、１〜１０のヘテロ原子（例えば、酸素又は窒素）を含む。）
   （式中、リンカー基は式（ＩＩａ）又は（ＩＶａ）の化合物に関して定義した通りである。）
8. リンカー基が、アルキル鎖、アルケニル鎖、アルキニル鎖、芳香環、ポリ芳香環、ヘテロ芳香環、及びエチレングリコールサブユニット又はアミノ酸サブユニット又は炭水化物サブユニットを含むポリマーから選択される、請求項７記載の方法。
9. 以下の式（ＶＩＩａ）の化合物を以下の式（ＶＩＩｂ）の化合物と反応させて以下の式（ＶＩＩｃ）の化合物を得ることを含んでなる放射性フッ素化方法。
   ¹⁸Ｆ−リンカー−Ｖ （ＶＩＩｂ）
   ¹⁸Ｆ−リンカー−ＮＨ(Ｙ)−Ｏ−ベクター （ＶＩＩｃ）
   （式中、Ｙはアルキル又はアリール置換基である。）
10. 化合物（ＶＩＩｂ）を以下の式（ＶＩＩＩ）、式（ＩＸ）及び式（Ｘ）のものから選択することでそれぞれ式（ＸＩＩ）ないし式（ＸＶ）の化合物が得られる、請求項９記載の方法。
    ¹⁸Ｆ−(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_nＣＨ₂ＣＨ₂−ＮＨＣＯＣＨ₂−Ｂｒ （ＶＩＩＩ）
    ¹⁸Ｆ−(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_nＣＨ₂ＣＨ₂−ＮＨＣＯＣＨ₂−Ｎ(Ｙ)−Ｏ−ベクター （ＸＩＩ）
    ¹⁸Ｆ−(ＣＨ₂)_n−Ｎ(Ｙ)−Ｏ−ベクター （ＸＩＩＩ）
    ¹⁸Ｆ−(Ｃ₆Ｈ₄)−ＣＯ−ＣＨ₂−Ｎ(Ｙ)−Ｏ−ベクター （ＸＩＶ）
    （式中、
    ｎは０〜２０の整数であり、
    Ｙはアルキル又はアリール置換基である。）
11. 以下の式（ＸＶａ）の化合物を下記一般式（ＸＶｂ）の化合物と反応させることを含んでなる放射性フッ素化方法。
    （式中、Ｖはハロゲンである。）
    ¹⁸Ｆ−リンカー−Ｏ−ＮＨ(Ｙ) （ＸＶｂ）
    （式中、Ｙは前出の化合物に関して定義した通りである。）
12. 式（ＸＶｂ）の化合物が以下の式（ＸＶＩ）、式（ＸＶＩＩ）及び式（ＸＶＩＩＩ）の化合物から選択される、請求項１１記載の方法。
    （式中、Ｙ、ｍ及びｎは前出の化合物に関して定義した通りである。）
13. ベクターがＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド又はその類似体である、請求項１記載の方法。
14. ベクターが次式のフラグメントを含む、請求項１３記載の方法。
    
15. ベクターが以下の式（Ａ）のものである、請求項１３記載の方法。
    （式中、Ｘ⁷は−ＮＨ₂又は次式の基であり、
    （式中、ａは１〜１０の整数である。）
    Ｒ５はペプチドの反応後にリシン残基のε−アミノとアミド結合又は第二アミン結合を形成し、好ましくは下記のリストｉ〜ｖｉｉｉから選択される。
    （式中、Ｒ６はＮ−ヒドロキシスクシンイミド又は酸塩化物のような活性エステル活性化基であり、Ｌ及びＶは前記に記載した通りである。））
16. 請求項１に定義された式（Ｉ）又は（ＩＩＩ）の化合物。
17. ベクターがＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド又はその類似体である、請求項１６記載の方法。
18. ベクターが次式のフラグメントを含む、請求項１６記載の化合物。
    
19. ベクターが以下の式（Ａ）のものである、請求項１６記載の化合物。
    （式中、Ｘ⁷は−ＮＨ₂又は次式の基であり、
    （式中、ａは１〜１０の整数である。）
    Ｒ５はペプチドの反応後にリシン残基のε−アミノとアミド結合又は第二アミン結合を形成し、好ましくは下記のリストｉ〜ｖｉｉｉから選択される。
    （式中、Ｒ６はＮ−ヒドロキシスクシンイミド又は酸塩化物のような活性エステル活性化基であり、Ｌ及びＶは前記に記載した通りである。））
20. 請求項１に定義された式（Ｖ）又は（ＶＩ）の化合物。
21. ベクターがＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド又はその類似体である、請求項２０記載の方法。
22. ベクターが次式のフラグメントを含む、請求項２０記載の化合物。
    
23. ベクターが以下の式（Ａ）のものである、請求項２０記載の化合物。
    （式中、Ｘ⁷は−ＮＨ₂又は次式の基であり、
    （式中、ａは１〜１０の整数である。）
    Ｒ５はペプチドの反応後にリシン残基のε−アミノとアミド結合又は第二アミン結合を形成し、好ましくは下記のリストｉ〜ｖｉｉｉから選択される。
    （式中、Ｒ６はＮ−ヒドロキシスクシンイミド又は酸塩化物のような活性エステル活性化基であり、Ｌ及びＶは前記に記載した通りである。））
24. 請求項２０記載の化合物の有効量を１種以上の薬学的に許容される補助剤、賦形剤又は希釈剤と共に含んでなる放射性医薬品組成物。
25. 医療用の、請求項２０記載の化合物。
26. インビボイメージング方法で使用するための放射性医薬品の製造における、請求項２０記載の化合物の使用。
27. ヒト又は動物の身体の画像を生成する方法であって、請求項２０記載の化合物を前記身体に投与する段階、及びＰＥＴを用いて前記化合物が分布した前記身体の少なくとも一部の画像を生成する段階を含んでなる方法。
28. 癌に関連した病態（好ましくは血管新生）に対処するための薬物によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニターする方法であって、請求項２１記載の化合物を前記身体に投与する段階及び細胞レセプターによる前記化合物の取込みを検出する段階を含んでなり、前記投与及び検出は任意ではあるが好ましくは前記薬物による治療前、治療中及び治療後に実施される、方法。