JP2010536885A - Ｖ３ループに改変を有するｈｉｖｅｎｖタンパク質 - Google Patents

Abstract

本発明は、そのＴａｔ結合特性を変化させるためのＨＩＶエンベロープ糖タンパク質のＶ３ループの修飾に関する。本発明により、（ｉ）ＨＩＶ Ｔａｔポリペプチドと（ｉｉ）ＨＩＶ Ｅｎｖポリペプチドの混合物が提供される。ここでは、ＥＮＶポリペプチドはそのＶ３ループの中に１つ以上の突然変異を有する。また、１つの方法には、ＨＩＶ ＥｎｖポリペプチドをＨＩＶ Ｔａｔポリペプチドと組み合わせる工程が含まれる。ここでは、Ｅｎｖポリペプチドは、そのＶ３ループの中に１つ以上の突然変異を有する。また、（ｉ）ＨＩＶ Ｔａｔポリペプチドと（ｉｉ）ＨＩＶ ＥｎｖポリペプチドのＶ３ループの断片を含むポリペプチドの混合物も提供される。

Description

本明細書中で引用される全ての文献はそれらの全体が援用により本明細書中に組み入れられる。

政府による支援
この出願は、助成金番号第５Ｐ０１ ＡＩ４８２２５−０３の下、米国ＮＩＡＩＤ−ＮＩＨ ＨＩＶＲＡＤからの支援によってなされた。したがって、米国政府は、本発明に一定の権利を有する。

本発明は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、特に、ウイルスエンベロープ糖タンパク質とそれらの操作の分野にある。

ＨＩＶゲノムの中にコードされる様々なタンパク質には、エンベロープ糖タンパク質（Ｅｎｖ）およびトランス活性化転写因子（Ｔａｔ）が含まれる。

ＨＩＶ−１とＨＩＶ−２のいずれにおいても、Ｅｎｖタンパク質は、長い前駆体タンパク質として最初に発現され、続いてこれが切断されて、膜外糖タンパク質（ｅｘｔｅｒｉｏｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）と膜貫通糖タンパク質が生じる。便宜上、これらのタンパク質は、以後、標準的なＨＩＶ−１の命名によって呼ばれ、すなわち、前駆体は「ｇｐ１６０」であり、膜糖タンパク質は「ｇｐ１２０」であり、そして膜貫通糖タンパク質は「ｇｐ４１」である。これらの名称は、ＨＩＶ−１糖タンパク質のおおよその分子量に基づく。

ＨＩＶビリオンの表面上に配置されるｇｐ１２０は、宿主細胞の宿主細胞ＣＤ４受容体と相互作用できる。この相互作用は、ｇｐ１２０において構造遷移を誘導し、その「Ｖ３」ループの露出を導く。欠失実験は、Ｖ３領域の接近性が「Ｖ１」ループと「Ｖ２」ループにより影響を受けることを示唆していた。非特許文献１を参照のこと。例えば、非特許文献２では、Ｖ２ループの欠失がＶ１ループとＶ３ループの免疫原性を変化させる可能性があることが報告されている。

その表面露出が原因で、ｇｐ１２０は、過去２０年にわたりＨＩＶワクチン研究の主な注目を集め続けている。自然感染の間に生じる抗Ｅｎｖ抗体は主要なＨＩＶ単離物を中和することが明らかにされている。しかし、このことは、Ｅｎｖをベースとするサブユニットワクチンによって誘発される抗体についてはあてはまらない。したがって、Ｅｎｖをベースとするワクチンの改良が必要である。

Ｔａｔタンパク質はＨＩＶ遺伝子の発現の調節に重要である。これは転写因子であるが、感染した細胞によって放出されることも明らかにされており、ワクチン抗原として提案されている。

特許文献１には、Ｅｎｖタンパク質とＴａｔタンパク質が相互作用して複合体を形成できることが開示されている。この相互作用には、Ｅｎｖタンパク質中のＶ３ループの存在が必要であるといわれている。ＥｎｖポリペプチドとＴａｔポリペプチドの組み合わせに基づくワクチンはまた、例えば、非特許文献３にも開示されている。

国際公開第２００５／０９０３９１号パンフレット

Ｓｏｕｒｉａｌら、Ｃｕｒｒ ＨＩＶ Ｒｅｓ．（２００６）４（２）：２２９−３７ Ｓｒｉｖａｓｔａｖａら、Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７７（２００３）（４）：２３１０−２０ Ｅｎｓｏｌｉら、Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ（２００５）７：１３９２−９

Ｔａｔ結合特性が変化したＥｎｖ由来ポリペプチドを提供することが１つの目的である。

本発明は、（ｉ）ＨＩＶ Ｔａｔポリペプチドと（ｉｉ）ＨＩＶ Ｅｎｖポリペプチドの混合物に関する。ここでは、ＥｎｖポリペプチドはそのＶ３ループの中に１つ以上の突然変異を有する。１つの実施形態では、ＨＩＶ ＴａｔポリペプチドとＨＩＶ Ｅｎｖポリペプチドは１つの複合体を形成する。特定の実施形態においては、ＨＩＶ ＴａｔポリペプチドとＨＩＶ Ｅｎｖポリペプチドは、互いに共有結合される。

本発明はまた、（ｉ）ＨＩＶ Ｔａｔポリペプチドと（ｉｉ）ＨＩＶ Ｅｎｖポリペプチドの混合物を調製するためのプロセスに関する。ここでは、Ｅｎｖポリペプチドは、そのＶ３ループの中に１つ以上の突然変異を有する。１つの実施形態では、上記プロセスには、（ｉ）ＨＩＶ Ｔａｔポリペプチドを（ｉｉ）ＨＩＶ Ｅｎｖポリペプチドと混合する工程が含まれる。ここでは、Ｅｎｖポリペプチドは、そのＶ３ループの中に１つ以上の突然変異を有する。他の実施形態では、上記プロセスには、ＨＩＶ ＥｎｖポリペプチドをＨＩＶ Ｔａｔポリペプチドと組み合わせる工程が含まれる。ここでは、Ｅｎｖポリペプチドは、そのＶ３ループの中に１つ以上の突然変異を有する。特定の実施形態では、上記プロセスには、ＥｎｖポリペプチドとＴａｔポリペプチドが複合体を形成したかどうかを決定するさらなる工程が含まれる。

本発明はまた、突然変異体Ｖ３ループ配列を有しているＨＩＶ Ｅｎｖポリペプチドにも関する。ここでは、突然変異体の配列は、配列番号１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、および２４からなる群より選択される。

特定の実施形態では、本発明の混合物、プロセス、またはポリペプチドのＥｎｖポリペプチドには、Ｖ３ループの外側に１つ以上の突然変異（単数または複数）が含まれる。他の実施形態では、Ｅｎｖポリペプチドは、野生型の膜貫通ドメインと細胞質尾部を欠く。なお他の実施形態では、Ｅｎｖポリペプチドには、Ｖ２ループの中に１つ以上の欠失（単数または複数）が含まれる。特定の実施形態では、Ｅｎｖポリペプチドは、配列番号１５〜２４からなる群より選択されるアミノ酸配列を持つＶ３ループを有する。他の実施形態では、Ｅｎｖポリペプチドは、アミノ酸配列である配列番号２９を持つＶ３ループを有する。

本発明はまた、（ｉ）ＨＩＶ Ｔａｔポリペプチドと（ｉｉ）ＨＩＶ ＥｎｖポリペプチドのＶ３ループの断片を含むポリペプチドの混合物にも関する。ここでは、（ｉｉ）のポリペプチドは１００アミノ酸以下の長さであり、これにはＨＩＶ ＥｎｖポリペプチドのＶ３ループに由来する少なくとも５個の連続するアミノ酸が含まれる。特定の実施形態では、（ｉｉ）のポリペプチドは≦３０アミノ酸の長さである。他の実施形態では、（ｉｉ）のポリペプチドは環状である。さらなる実施形態では、（ｉｉ）の断片は、配列番号３０〜３７からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する。

特定の実施形態では、本発明の混合物、プロセス、またはポリペプチドのＴａｔポリペプチドはアミノ酸配列である配列番号１２を有する。

本発明はまた、本発明の混合物を含む薬学的組成物にも関する。特定の実施形態では、本発明の薬学的組成物にはワクチンアジュバントが含まれる。

本発明はまた、患者において免疫応答を惹起させる方法にも関し、上記方法には、患者に本発明の組成物を投与する工程が含まれる。

図１は、Ｆａｒ−Ｗｅｓｔｅｒｎアッセイの結果を示す。レーンは以下のとおりである：（１）３５、５０、７５、１０５、１６０、および２５０ｋＤａのマーカー；（２）ｇｐ１４０ΔＶ２；（３）ｇｐ１４０ΔＶ２＋ＣＤ４；（４）ｇｐ１４０ｄＶ３−２２；（５）ｇｐ１４０ｄＶ３−２２＋ＣＤ４；（６）ｇｐ１２０；（７）ｇｐ１２０＋ＣＤ４；ならびに（８）ＣＤ４。

一般論として、本発明は、そのＴａｔ結合特性を変化させるための、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質のＶ３ループの改変に関する。

本発明により、（ｉ）ＨＩＶ Ｔａｔポリペプチドと（ｉｉ）ＨＩＶ Ｅｎｖポリペプチドの混合物が提供される。ここでは、Ｅｎｖポリペプチドは、そのＶ３ループの中に１つ以上の突然変異を有する。ＴａｔポリペプチドとＥｎｖポリペプチドは複合体を形成し得、以下にさらに詳細に記載されるように、共有結合され得る。

本発明によってはまた、ポリペプチド混合物を調製するためのプロセスも提供される。上記方法には、（ｉ）ＨＩＶ Ｔａｔポリペプチドを（ｉｉ）ＨＩＶ Ｅｎｖポリペプチドと混合する工程が含まれ、ここでは、Ｅｎｖポリペプチドは、そのＶ３ループの中に１つ以上の突然変異を有する。

本発明によってはまた、ＨＩＶ ＥｎｖポリペプチドをＨＩＶ Ｔａｔポリペプチドと組み合わせる工程を含む方法も提供される。ここでは、Ｅｎｖポリペプチドは、そのＶ３ループの中に１つ以上の突然変異を有する。上記方法には、ＥｎｖポリペプチドとＴａｔポリペプチドが複合体を形成したかどうかを決定するさらなる工程が含まれ得る。このさらなる工程により、Ｔａｔ結合活性に対する様々なＶ３突然変異の影響を決定することができる。Ｖ３突然変異によって形成された任意の複合体は、野生型Ｅｎｖによって形成された複合体に対して比較することができる。突然変異体は、野生型Ｅｎｖ（例えば、より強い結合定数）よりも弱い複合体または強い複合体を形成する場合があり、また、より迅速に、またはよりゆっくりと複合体を形成する場合などもある。本発明によってはまた、野生型ＥｎｖよりもＴａｔに対して高い親和性を有しているとしてそのような方法によって同定された、そのＶ３ループの中に１つ以上の突然変異を持つＥｎｖポリペプチドも提供される。

本発明によってはまた、配列番号１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、および２９からなる群より選択されるＶ３ループ配列を有しているＨＩＶ Ｅｎｖポリペプチドも提供される。

本発明によってはまた、（ｉ）ＨＩＶ Ｔａｔポリペプチドと（ｉｉ）ＨＩＶ ＥｎｖポリペプチドのＶ３ループの断片を含むポリペプチドの混合物も提供される。（ｉｉ）のポリペプチドは、通常は、１００以下のアミノ酸の長さであるが、上記断片は、通常は、Ｖ３ループに由来する少なくとも５個のアミノ酸（通常は、Ｖ３ループ由来の５個の連続するアミノ酸）を有する。２つのポリペプチドは複合体を形成し得、そして共有結合され得る。

Ｅｎｖポリペプチド
いくつかの実施形態では、本発明の混合物には、そのＶ３ループの中に１つ以上の突然変異を有するＨＩＶ Ｅｎｖポリペプチドが含まれる。

ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２に由来する様々な形態のＥｎｖポリペプチドが使用され得る。例えば、上記混合物には以下が含まれる：Ｖ３突然変異（単数または複数）を持つ全長のｇｐ１６０ Ｅｎｖポリペプチド、Ｖ３突然変異（単数または複数）を持つｇｐ１２０ Ｅｎｖポリペプチド、Ｖ３突然変異（単数または複数）を持つ短縮型ｇｐ１２０もしくはｇｐ１６０ Ｅｎｖポリペプチド、Ｖ３突然変異（単数または複数）とＶ３の外側に１つ以上の欠失を持つｇｐ１６０もしくはｇｐ１２０ポリペプチド、Ｖ３突然変異（単数または複数）を持つｇｐ１２０もしくはｇｐ１６０ポリペプチドを含む融合タンパク質など。しかし、本発明では、通常は、Ｖ３突然変異（単数または複数）を持つ全長のＥｎｖ前駆体ではなく、短縮型のタンパク質が使用される。

ＲＥＦＳＥＱデータベース由来の全長のＨＩＶ−１ Ｅｎｖ前駆体のアミノ酸配列（ＧＩ：９６２９３６３）は、以下に示される８５６マーである（本明細書中では配列番号１；Ｖ３ループに下線が付けられている）：

この野生型ＨＩＶ−１前駆体タンパク質は切断されて、表面糖タンパク質ｇｐ１２０（例えば、配列番号１のアミノ酸２９〜５１１；本明細書中では配列番号２）と膜貫通ドメインｇｐ４１（例えば、配列番号１のアミノ酸５１２〜８５６；本明細書中では配列番号３）が生じる：

ｇｐ１２０領域内の超可変領域は以下のように配置され、配列番号１にしたがってナンバリングされる：Ｖ１＝１３１〜１５７；Ｖ２＝１５７〜１９６；Ｖ３＝２９６〜３３１；Ｖ４＝３８５〜４１８；およびＶ５＝４６１〜４７１。したがってｇｐ１２０の全体のＣ１−Ｖ１−Ｖ２−Ｃ２−Ｖ３−Ｃ３−Ｖ４−Ｃ４−Ｖ５−Ｃ５の構成の中では、サブドメインは以下のとおりである（配列番号２にしたがってナンバリングされる）：１〜１０２；１０３〜１２９；１２９〜１６８；１６９〜２６７；２６８〜３０３；３０４〜３５６；３５７〜３９０；３９１〜４３２；４３３〜４４３；および４４４〜４８３。これらのサブドメインの座標（ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓ）は、適切な配列アラインメントを行うことによって他のＨＩＶ−１ Ｅｎｖ配列の中で同定される。これらの特徴について注釈が付けられた、多数の株に由来する予めアラインメントされた配列は、Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ ＨＩＶ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐｅｎｄｉａ ｈｔｔｐ：／／ｈｉｖ−ｗｅｂ．ｌａｎｌ．ｇｏｖの中でも見ることができる。

例えば、リーダーを取り除いた後のＥｎｖ配列（配列番号３８）が、ＳＦ１６２株について以下に示される（配列番号７；Ｖ３ループに下線が付けられている）。これは、Ａｒｇ−４７５の後ろで切断されて成熟タンパク質を生じ、これには、ｇｐ１２０（本明細書中では配列番号５０、すなわち、配列番号７のアミノ酸１〜４７５）が含まれる：

配列番号７にしたがってナンバリングされたＳＦ１６２株の中の超可変領域は以下のとおりである：Ｖ１＝９８〜１２８；Ｖ２＝１２８〜１６７；Ｖ３＝２６７〜３０１；Ｖ４＝３５４〜３８１；およびＶ５＝４２３〜４３５。

全長のＨＩＶ−２ Ｅｎｖ前駆体のアミノ酸配列（ＧＩ：２１４４９９６）は以下に示される８５２マーである（本明細書中では配列番号４；Ｖ３ループに下線が付けられている）：

ＨＩＶ−２ Ｅｎｖ前駆体タンパク質は切断されて、表面糖タンパク質（例えば、配列番号４のアミノ酸２０〜５０２；本明細書中では配列番号５）と膜貫通ドメイン（例えば、配列番号４のアミノ酸５０３〜８５２；本明細書中では配列番号６）が生じる：

超可変領域などは、配列アラインメントによって、そしてＬｏｓ Ａｌａｍｏｓ ＨＩＶ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐｅｎｄｉａのアラインメントを参照することによって再び同定され得る。

使用され得る他の特異的なＥｎｖ配列としては、ＷＯ００／３９３０２、ＷＯ０３／０２０８７６、ＷＯ２００５／００７８０８、ＷＯ０３／００４６２０、ＷＯ００／３９３０４に開示されている配列が挙げられる。

本発明とともに使用されるＥｎｖポリペプチドは、野生型配列と比較して、１つ以上の突然変異を有しているＶ３ループを有するであろう。そのようなＶ３突然変異は、以下にさらに詳細に記載される。

本発明とともに使用されるＥｎｖポリペプチドには、さらに、Ｖ３ループの外側に突然変異が含まれ得る。例えば、本発明では、典型的には、短縮型のＥｎｖポリペプチドが使用されるであろう。短縮には、全長配列からのさらなるアミノ酸のうちの１つの除去、例えば、Ｃ末端および／またはＮ末端での短縮、内部残基の欠失、Ｖ３以外のサブドメインの除去、米国特許第５，７９２，４５９号、ならびにこれらのアプローチの組み合わせが含まれるであろう。

例えば、その膜貫通ドメインと細胞質尾部を除去することによってＥｎｖ前駆体の可溶性形態が作製されることは公知である。ｇｐ１２０配列とｇｐ４１のエクトドメインを含むこのポリペプチドは、「ｇｐ１４０」として公知であり（Ｚｈａｎｇら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：３９５７７−８５）、ｇｐ１２０よりも良好な免疫原であると報告されている（Ｅａｒｌら（２００１）Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７５：６４５−５３）。したがって前駆体は、そのＣ末端で（例えば、配列番号１のＩｌｅ−６８２の後ろで短縮されるか（配列番号１のアミノ酸Ｓｅｒ−２９からＩｌｅ−６８２を有しているｇｐ１４０配列を生じる；本明細書中では配列番号４９）、または配列番号３８のＩｌｅ−６７３の後ろで短縮される（配列番号３８のアミノ酸Ｓｅｒ−２８からＩｌｅ−６７３を有しているｇｐ１４０配列を生じる；本明細書中では配列番号３９）。このように、本発明とともに使用されるＥｎｖポリペプチドにはｇｐ４１の一部が含まれるが、その膜貫通ドメインは含まれない場合がある。

Ｅｎｖ前駆体のＶ２ループの中に欠失を作製して「ΔＶ２」突然変異体を生じさせることもまた公知である。例えば、４０マーのＶ２ループの中の１つ以上のアミノ酸（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８個、またはそれ以上のアミノ酸）が欠失させられ得る。Ｖ２ループの中での欠失は、Ｅｎｖポリペプチドの免疫原性を改善することが報告されている（Ｂａｒｎｅｔｔら（２００１）Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７５：５５２６−４０；Ｓｒｉｖａｓｔａｖａら（２００３）Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７７：２３１０−２０）。Ｖ２ループの中に欠失および／または置換を持つＥｎｖポリペプチドは、Ｅｎｖ／Ｔａｔ複合体を形成させることにおいて有用であることが明らかにされている。特に、Ｅｎｖ／Ｔａｔ複合体は、そのＶ２ループが突然変異していない限りは、単量体ｇｐ１２０とともには見られない可能性がある。Ｖ２ループから欠失させられたアミノ酸は、他のアミノ酸で置換され得、例えば、Ｖ２ループの中心部分がＧｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙトリペプチドで置き換えられることが公知である。例えば、ΔＶ２突然変異体は以下の配列を有し得る（配列番号８）：

式中：（ｉ）１３０位の「Ｘ」は突然変異体Ｖ２ループを示し、例えば、４個から１５個のアミノ酸を有する；そして、（ｉｉ）２３１位の「Ｘ」は突然変異体Ｖ３ループを示す。

ＳＦ１６２をベースとする別の有用なΔＶ２突然変異体は以下の配列を有し得る（配列番号４５）：

式中：（ｉ）１２９位の「Ｘ」は突然変異体Ｖ２ループを示し、例えば、４個から１５個のアミノ酸を有する；そして（ｉｉ）２３１位の「Ｘ」は突然変異体Ｖ３ループを示す。

本発明とともに使用される特に好ましいＥｎｖポリペプチドは、ＨＩＶ−１株ＳＦ１６２由来のΔＶ２突然変異体を持つｇｐ１４０タンパク質である。その成熟形態においては、シグナル配列の切断と分泌の後に（例えば、ＷＯ００／３９３０２の図２４を参照のこと）、このポリペプチドは以下のアミノ酸配列（配列番号９）を有する：

本発明においては、野生型ＳＦ１６２ Ｖ３ループ（下線が付けられている；配列番号４４）は、本明細書中の別の場所に記載されるように、突然変異体Ｖ３ループによって置き換えられるであろう。

本発明とともに使用されるＥｎｖポリペプチドは、ＣＤ４に結合する天然のＥｎｖの能力を保ち得る。ＣＤ４結合に重要であると同定されている残基としては、（配列番号１にしたがってナンバリングされた）Ａｓｐ−３６８、Ｇｌｕ−３７０、Ｔｒｐ−４２７、Ｖａｌ−４３０、およびＰｒｏ−４３８が挙げられる。

ＨＩＶゲノムが絶えず流れている状態（ｉｎ ａ ｓｔａｔｅ ｏｆ ｃｏｎｓｔａｎｔ ｆｌｕｘ）にあり、そしてＨＩＶゲノムに複数の単離物間で比較的高度なばらつきを示すいくつかのドメインが含まれるので、本発明は、公知のＨＩＶポリペプチドの正確な配列を有しているＥｎｖポリペプチドの使用に限定されない。このように、本発明のにしたがって使用されるＥｎｖポリペプチドは、それに突然変異体Ｖ３ループが含まれる限りは、以下のうちの１つから選択され得る：
（ｉ）配列番号１、２、４、５、７、８、９、３８、３９、４３、４５、４９、および５０から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号１、２、４、５、７、８、９、３８、３９、４３、４５、４９、および５０から選択されるアミノ酸配列に対して配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉｉ）配列番号１、２、４、５、７、８、９、３８、３９、４３、４５、４９、および５０から選択されるアミノ酸配列と比較して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個など）の置換および／または欠失および／または挿入（Ｖ３ループの内部および場合によっては、Ｖ３ループの外側）を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｖ）配列番号１、２、４、５、７、８、９、３８、３９、４３、４５、４９、および５０から選択されるアミノ酸に由来する少なくともｎ個の連続するアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含むポリペプチド（ここでは、ｎは７以上である）；あるいは、
（ｖ）ペアワイズ・アラインメント・アルゴリズム（ｐａｉｒｗｉｓｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ａｌｇｏｒｉｔｈｍ）を使用して、配列番号１、２、４、５、７、８、９、３８、３９、４３、４５、４９、および５０から選択されるアミノ酸配列とアラインメントした場合に、Ｎ末端からＣ末端まで移動するｘ個のアミノ酸のそれぞれのウィンドウの中に少なくともｘ・ｙの同一であるアラインメントされた単量体を有し、ここでは：ｐ＞ｘ；ｐ−ｘ＋１；のウィンドウが存在し；ｘは、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、または８５０から選択され；ｙは、０．５０、０．６０、０．７０、０．７５、０．８０、０．８５、０．９０、０．９１、０．９２、０．９３、０．９４、０．９５、０．９６、０．９７、０．９８、または０．９９から選択され；そしてｘ・ｙが整数ではない場合は、これは最も近い整数に丸められる、ｐ個のアミノ酸の配列を含むポリペプチド。

これらのポリペプチドには、配列番号１、２、４、５、７、８、９、３８、３９、４３、４５、４９、および５０のホモログ、オルトログ、対立遺伝子変異体、ならびに突然変異体が含まれる。例えば、プロテアーゼに対する耐性を改善するために天然のＥｎｖ配列を突然変異させることが公知である。これらのポリペプチドには、Ｅｎｖ配列が非Ｅｎｖ配列に対して融合させられた融合ポリペプチドも含まれる。例えば、天然のリーダーペプチドを持たないＥｎｖ配列を、非Ｅｎｖタンパク質由来の（例えば、組織プラスミノーゲン活性化因子由来の）リーダーペプチドに融合させることが公知である。

カテゴリー（ｉｉ）においては、配列同一性の程度は５０％を上回り得る（例えば、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上）。複数のポリペプチド間での同一性は、ＭＰＳＲＣＨプログラム（Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）で実行されるＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって、パラメーターギャップ開放ペナルティー＝１２とギャップ伸張ペナルティー＝１とともにアフィンギャップ（ａｆｆｉｎｅ ｇａｐ）検索を使用して決定されることが好ましい。

カテゴリー（ｉｉｉ）においては、個々の置換には１つのアミノ酸が含まれ、個々の欠失には１つのアミノ酸が含まれることが好ましく、そして個々の挿入には１つのアミノ酸が含まれることが好ましい。これらの変化は意図的に生じさせられる場合があり（例えば、部位特異的突然変異誘発によって）、また、自然に生じる場合もある（例えば、ウイルス進化によるか、または自然突然変異による）。カテゴリー（ｉｉｉ）のポリペプチドは、配列番号１、２、４、５、７、８、９、３８、３９、４３、４５、４９、または５０と比較して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個など）の１アミノ酸置換を有し得る。これらのポリペプチドは、配列番号１、２、４、５、７、８、９、３８、３９、４３、４５、４９、または５０と比較して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個など）の１アミノ酸欠失を有し得る。これらのポリペプチドは、配列番号１、２、４、５、７、８、９、３８、３９、４３、４５、４９、または５０と比較して、１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個など）の１アミノ酸挿入を有し得る。置換、挿入、および／または欠失は離れた位置である場合も、また連続している場合もある。置換は保存的、すなわち、関連する側鎖を有している別のアミノ酸での１つのアミノ酸の置き換えであり得る。遺伝子にコードされるアミノ酸は、一般的には４つのファミリーに分類される：（１）酸性（すなわち、アスパラギン酸、グルタミン酸）；（２）塩基性（すなわち、リジン、アルギニン、ヒスチジン）；（３）非極性（すなわち、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）；および（４）電荷を持たない極性（すなわち、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン）。フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンは、しばしば一緒に芳香族アミノ酸として分類される。一般的には、これらのファミリーの中での１アミノ酸の置換は生物学的活性に対して重要な影響を及ぼさない。様々な置換が、Ｅｎｖポリペプチドでの使用について記載されている。例えば、全長の形態を留めるポリペプチドを提供するために、またはＶ３ループ中の「クリッピング（ｃｌｉｐｐｉｎｇ）」部位を除去するために（ＷＯ９１／１５２３８）、またはグリコシル化部位（特に、Ｎ−グリコシル化部位（すなわち、アスパラギン残基））を欠失させるかもしくは置換するために、ｇｐ１２０とｇｐ４１との間の切断部位を不活化させる（例えば、Ｌｙｓ→Ｓｅｒ置換による）ことが公知である。

カテゴリー（ｉｖ）においては、ｎの値は７より大きく、例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、またはそれ以上であり得る。上記断片には、配列の少なくとも１つのＴ細胞エピトープおよび／またはＢ細胞エピトープが含まれ得る。Ｔ細胞エピトープとＢ細胞エピトープは経験的に同定することができるか（例えば、ＰＥＰＳＣＡＮ Ｇｅｙｓｅｎら（１９８４）ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８１：３９９８−４００２；Ｃａｒｔｅｒ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３６：２０７−２２３）、または類似する方法を使用して）、あるいは、これらは予測することができる（例えば、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ抗原性指数（Ｊａｍｅｓｏｎ，ＢＡら、１９８８，ＣＡＢＩＯＳ ４（１）：１８１−１８６）、マトリックスをベースとするアプローチ（Ｒａｄｄｒｉｚｚａｎｉ ＆ Ｈａｍｍｅｒ（２０００）Ｂｒｉｅｆ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍ １（２）：１７９−１８９）、ＴＥＰＩＴＯＰＥ（Ｄｅ Ｌａｌｌａら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：１７２５−１７２９）、ニューラル・ネットワーク（ｎｅｕｒａｌ ｎｅｔｗｏｒｋｓ）（Ｂｒｕｓｉｃら（１９９８）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １４（２）：１２１−１３０）、ＯｐｔｉＭｅｒ ＆ ＥｐｉＭｅｒ（Ｍｅｉｓｔｅｒら（１９９５）Ｖａｃｃｉｎｅ １３（６）：５８１−５９１；Ｒｏｂｅｒｔｓら（１９９６）ＡＩＤＳ Ｒｅｓ Ｈｕｍ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ １２（７）：５９３−６１０）、ＡＤＥＰＴ（Ｍａｋｓｙｕｔｏｖ ＆ Ｚａｇｒｅｂｅｌｎａｙａ（１９９３）Ｃｏｍｐｕｔ Ａｐｐｌ Ｂｉｏｓｃｉ ９（３）：２９１−２９７）、Ｔｓｉｔｅｓ（Ｆｅｌｌｅｒ ＆ ｄｅ ｌａ Ｃｒｕｚ（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３４９（６３１１）：７２０−１）、親水性（Ｈｏｐｐ（１９９３）Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６：１８３−１９０）、抗原性指数（Ｗｅｌｌｉｎｇら（１９８５）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．１８８：２１５−２１８）、またはＤａｖｅｎｐｏｒｔら（１９９５）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ４２：３９２−２９７に開示されている方法を使用して）。

カテゴリー（ｖ）においては、好ましいペアワイズ・アラインメント・アルゴリズムは、デフォルトパラメーター（例えば、ギャップ開放ペナルティー＝１０．０とギャップ伸張ペナルティー＝０．５を用い、ＥＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックスを使用する）を使用する、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈグローバル・アラインメント・アルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３）である。このアルゴリズムは、ＥＭＢＯＳＳパッケージのニードルツール（ｎｅｅｄｌｅ ｔｏｏｌ）（Ｒｉｃｅら（２０００）Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ １６：２７６−２７７）において簡単に実行される。

Ｅｎｖポリペプチドは、ＨＩＶビリオン上にオリゴマーの形態で見られ、本発明とともに使用される好ましいＥｎｖポリペプチドもまたオリゴマー（特に、三量体）を形成し得る。例えば、ｇｐ１４０のΔＶ２突然変異体は、三量体を形成することが示されている（Ｂａｒｎｅｔｔら（２００１）Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７５：５５２６−４０）。Ｅｎｖ／Ｔａｔ複合体は、一般的には、単量体ｇｐ１２０が使用される場合には、そのＶ２ループが突然変異させられていない限りは形成されないが、三量体ｇｐ１４０から形成され、これにはいずれのＶ２突然変異も必要ない。

本発明とともに使用される好ましいＥｎｖポリペプチドは、突然変異体Ｖ３ループに加えて、突然変異体Ｖ２ループを有する（例えば、配列番号９のような突然変異体Ｖ２）。

突然変異体Ｖ３ループ
Ｅｎｖの野生型Ｖ３ループは両方の末端にシステイン残基を有しており、これらは、ジスルフィド結合の中で共有結合され得る。上記のように、本発明の混合物中のＥｎｖポリペプチドは、野生型Ｅｎｖ配列と比較してＶ３ループの中に１つ以上の突然変異を有するであろう。

野生型ＨＩＶ−１ Ｅｎｖ配列である配列番号２においては、Ｖ３ループはアミノ酸Ｃｙｓ−２６８からＣｙｓ−３０３からなる（配列番号１３）：

ＳＦ１６２株由来の野生型ＨＩＶ−１ Ｅｎｖ配列（配列番号７）においては、Ｖ３ループは、アミノ酸Ｃｙｓ−２６７からＣｙｓ−３０１からなる（配列番号４６）：

野生型ＨＩＶ−２ Ｅｎｖ配列である配列番号４においては、Ｖ３ループは、アミノ酸Ｃｙｓ−２９６からＣｙｓ−３２９からなる（配列番号１４）：

他のＥｎｖ配列中でのＶ３ループの位置は、上記のような適切な配列アラインメントを行うことによって容易に同定され得、Ｖ３ループを示すための注釈が付けられ
た、多数の株に由来する予めアラインメントされた配列はまた、Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ ＨＩＶ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐｅｎｄｉａの中にも見ることができる。例えば、異なるサブタイプに由来する５種類の特異的な株の野生型Ｖ３ループが、コンセンサス配列とともに以下にアラインメントされる：

Ｖ３ループ中の突然変異は、無関係な、１アミノ酸の欠失、１アミノ酸の１アミノ酸での置換、または１つ以上のアミノ酸の挿入であり得る。本発明とともに使用されるＥｎｖポリペプチドは、１つ以上のそのような突然変異（例えば、１つ以上の欠失および／または１つ以上の置換および／または１つ以上の挿入）を有し得る。少なくとも１つの欠失を持つ突然変異体Ｖ３ループは、典型的には、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８個、またはそれ以上の欠失（単数または複数）を持つ。２つ以上の欠失が存在する場合は、これらを１つの場所に集める（ｇｒｏｕｐ）（すなわち、２つ以上の近くにある野生型アミノ酸がいずれも欠失させられ得る）ことが可能であり、そして／または、これらが離れている（すなわち、２つの欠失させられたアミノ酸は少なくとも１つの野生型アミノ酸によって隔てられる）ことが可能である。

ＥｎｖのＶ３ループ中の複数の突然変異がこれまでに報告されており、これらのうちの任意のものが本発明とともに使用され得る。例えば、Ｓｕら（２０００）ＡＩＤＳ Ｒｅｓ Ｈｕｍ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ．１６（１）：３７−４８では、Ｖ３ループの中心（ｃｅｎｔｒｅ）に由来する保存されているＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙモチーフが欠失しているウイルスが報告されている。Ｋｍｉｅｃｉａｋら（１９９８）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０（１１）：５６７６−８３は、Ｖ３ループの欠失の影響を分析し、そしてΔＶ３突然変異体は、ｅｎｖタンパク質の保存されているエピトープに対してインビトロでＣＴＬ活性の増大を示した。Ｊａｇｏｄｚｉｎｓｋｉら（１９９６）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２２６（２）：２１７−２７の著者らはＶ３ループを欠失させ、さらに様々なＨＩＶ株の間でＶ３ループを移植した。Ｈａｎｓｅｎら（１９９６）Ａｒｃｈ Ｖｉｒｏｌ １４１（２）：２９１−３００は、Ｏ−グリコシル化を防ぐためにＶ３ループの中のＴｈｒ残基とＳｅｒ残基を突然変異させて、その代わりにＡｌａ残基に置換した。同様に、Ｋａｎｇら（２００５）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３３１（１）：２０−３２はＶ３ループの中のグリコシル化部位を突然変異させた。Ｃｈｉｏｕら（１９９２）ＡＩＤＳ Ｒｅｓ Ｈｕｍ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ ８（９）：１６１１−８は、Ｖ３ループの中に複数の欠失の１つのシリーズを持つＥｎｖタンパク質を調製した。Ｐｏｌｌａｒｄら（１９９２）ＥＭＢＯ Ｊ．１１（２）：５８５−９１は、ｇｐ１２０のＶ１、Ｖ２、およびＶ３可変領域とともに６２個のＮ末端残基と２０個のＣ末端残基がＣＤ４結合には不要であることを示すために欠失を使用した。Ｓａｎｄｅｒｓら（２０００）Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７４（１１）：５０９１−１００は、Ｖ１、Ｖ２、および／またはＶ３ループ中に欠失を持つｇｐ１４０変異体を特性決定した。Ｙａｎｇら（２００４）Ｊ Ｖｉｒｏｌ．７８（８）：４０２９−３６は、選択的欠失によってＶ３ループのステムを短縮し、このステムの段階的な短縮により、ＨＩＶ Ｅｎｖの免疫原性と機能的活性を回避した。このことは、Ｖ３の中の高度に保存されているサブ領域が、抗体応答の中和を誘発するため、ＨＩＶ指向性（ＨＩＶ ｔｒｏｐｉｓｍ）に影響を与えるため、およびワクチンの免疫原性を高めるための、関連性のある標的である可能性があることを示唆している。参考文献１には、Ｖ１、Ｖ２、および／またはＶ３ループの中の部分的な欠失により、Ｅｎｖ糖タンパク質に対する交差反応性の細胞性応答および抗体応答を促進する（ｂｏｏｓｔｉｎｇ）ためのアプローチが可能となり得ることが報告されている。

それぞれにいくつかの連続するアミノ酸欠失が含まれている、本発明のＥｎｖポリペプチドにおいて使用される突然変異体Ｖ３ループ配列の例が、配列番号１５〜２２として以下に示される：

野生型のＳＦ１６２ Ｖ３配列と比較して３個の置換を持つ、本発明のＥｎｖポリペプチドにおいて使用されるＶ３ループのさらなる例が以下に示される（配列番号２４）：

コンセンサス配列（配列番号２９）もまた、野生型Ｖ３ループの代わりに使用され得る。

好ましい突然変異体Ｖ３ループは、Ｔａｔポリペプチドと相互作用する能力を保持する。上記相互作用は、野生型Ｖ３配列を用いて見られるよりも弱い／強い、速い／遅いなどであり得る。

Ｖ３断片
いくつかの実施形態では、本発明の混合物には、ＨＩＶ ＥｎｖポリペプチドのＶ３ループの断片を含むポリペプチドが含まれる。このポリペプチドは、通常は、１００アミノ酸を超えないであろう（例えば、≦９０、≦８０、≦７０、≦６０、≦５０、≦４０、≦３０、≦２０アミノ酸）。Ｖ３ループ断片には、野生型Ｖ３ループに由来する少なくとも５個のアミノ酸（例えば、Ｖ３ループに由来する６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０個、またはそれ以上のアミノ酸）が含まれるであろう。上記ポリペプチドには、Ｖ３ループ断片のＣ末端および／またはＮ末端に対するアミノ酸が含まれ得る。

上記ポリペプチドは直鎖および／または分岐鎖であり得る。環状ポリペプチドが使用され得る（例えば、ＤＴＩＣ ｒｅｐｏｒｔ ＡＤＡ３２２１８１（１９９４）ｈｔｔｐ：／／ｈａｎｄｌｅ．ｄｔｉｃ．ｍｉｌ／１００．２／ＡＤＡ３２２１８１には、Ｖ３ループから形成された環状の３５マーのペプチドが開示されている）。ポリペプチドに２つ以上のシステイン残基が含まれる場合は、これらは、ジスルフィド結合を形成するように連結させられ得る。

本発明とともに使用される８個の特異的なＶ３由来ポリペプチドが以下に示される：

Ｔａｔポリペプチド
本発明の混合物にはＨＩＶ Ｔａｔポリペプチドが含まれ、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２に由来するＴａｔポリペプチドの様々な形態が使用され得る。Ｔａｔポリペプチドの長さはウイルス株に応じて様々である。ＲＥＦＳＥＱデータベースによる全長のＨＩＶ−１ Ｔａｔポリペプチドのアミノ酸配列（ＧＩ：９６２９３５８）は、以下に示される８６マーである（本明細書中では配列番号１０）：

様々なＨＩＶ−１ Ｔａｔポリペプチド配列において、Ｃｙｓ−２２とＣｙｓ−３７は保存されており、分子内ジスルフィド結合を形成する。ＲＫＫＲＲＱＲＲＲの９マー（配列番号５１）は核局在化シグナルである。これらの特徴は、適切な配列アラインメントを行うことによって他のＨＩＶ−１ Ｅｎｖ配列の中で同定され得る。これらの特徴についての注釈が付けられた、予めアラインメントされた多数の株に由来する配列はまた、Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ ＨＩＶ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐｅｎｄｉａの中にも見られ得る。

全長のＨＩＶ−２ Ｔａｔポリペプチドのアミノ酸配列（ＧＩ：４１０５６７８１）は、以下に示される１３０マーである（本明細書中では配列番号１１）：

この配列と他のＨＩＶ−２ Ｔａｔ配列のアラインメントは、Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ ＨＩＶ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐｅｎｄｉａの中に見ることができる。

使用され得る他の特異的ｔａｔ配列としては、ＷＯ００／３９３０２、ＷＯ０３／０２０８７６、ＷＯ２００５／００７８０８、ＷＯ０３／００４６２０、およびＷＯ９９／２７９５８に開示されている配列が挙げられる。

本発明とともに使用される特に有用なＴａｔポリペプチドは、ＨＩＶ−１株ＢＨ１０に由来する。このポリペプチドは以下のアミノ酸配列を有する（配列番号１２；ＧＩ：６２２９１０２２）：

ＨＩＶゲノムが絶えず流れている状態にあり、そしてＨＩＶゲノムに複数の単離物間で比較的高度なばらつきを示すいくつかのドメインが含まれるので、本発明は、公知のＨＩＶポリペプチドの正確な配列を有しているＴａｔポリペプチドの使用に限定されない。このように、本発明にしたがって使用されるＴａｔポリペプチドは、以下から選択され得る：
（ｉ）配列番号１０、１１、および１２から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号１０、１１、および１２から選択されるアミノ酸配列に対して配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉｉ）配列番号１０、１１、および１２から選択されるアミノ酸配列と比較して、１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個など）置換および／または欠失および／または挿入を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｖ）配列番号１０、１１、および１２から選択されるアミノ酸配列に由来する少なくともｎ個の連続するアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含むポリペプチド（ここでは、ｎは７以上である）；あるいは、
（ｖ）ペアワイズ・アラインメント・アルゴリズム（ｐａｉｒｗｉｓｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ａｌｇｏｒｉｔｈｍ）を使用して、配列番号１０、１１、および１２から選択されるアミノ酸配列とアラインメントした場合に、Ｎ末端からＣ末端まで移動するｘ個のアミノ酸のそれぞれのウィンドウの中に少なくともｘ・ｙの同一であるアラインメントされた単量体を有し、ここでは：ｐ＞ｘ；ｐ−ｘ＋１；のウィンドウが存在し；ｘが２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、または８５から選択され；ｙが０．５０、０．６０、０．７０、０．７５、０．８０、０．８５、０．９０、０．９１、０．９２、０．９３、０．９４、０．９５、０．９６、０．９７、０．９８、または０．９９から選択され；そしてｘ・ｙが整数ではない場合は、これは最も近い整数に丸められる、ｐ個のアミノ酸の配列を含むポリペプチド。

これらのポリペプチドには、配列番号１０、１１、および１２のホモログ、オルトログ、対立遺伝子変異体、ならびに突然変異体が含まれる。これらにはまた、Ｔａｔ配列が非Ｔａｔ配列に対して融合させられた融合ポリペプチドも含まれる。

カテゴリー（ｉｉ）においては、配列同一性の程度は５０％を上回り得る（例えば、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上）。複数のポリペプチド間での同一性は、ＭＰＳＲＣＨプログラム（Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）で実行されるＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって、パラメーターギャップ開放ペナルティー＝１２とギャップ伸張ペナルティー＝１とともにアフィンギャップを使用して決定されることが好ましい。

カテゴリー（ｉｉｉ）においては、個々の置換には１つのアミノ酸が含まれ、個々の欠失には１つのアミノ酸が含まれることが好ましく、そして個々の挿入には１つのアミノ酸が含まれることが好ましい。これらの変化は意図的に生じさせられる場合があり（例えば、部位特異的突然変異誘発によって）、また、自然に生じる場合もある（例えば、ウイルス進化によるか、または自然突然変異による）。カテゴリー（ｉｉｉ）のポリペプチドは、配列番号１０、１１、または１２と比較して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個など）の１アミノ酸置換を有し得る。これらのポリペプチドは、配列番号１０、１１、または１２と比較して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個など）の１アミノ酸欠失を有し得る。これらのポリペプチドは、配列番号１０、１１、または１２と比較して、１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個など）の１アミノ酸挿入を有し得る。置換、挿入、および／または欠失は離れた位置である場合も、また連続している場合もある。上記のように、置換は保存的であり得る。

カテゴリー（ｉｖ）においては、ｎの値は７より大きく、例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、またはそれ以上であり得る。上記断片には、その配列の少なくとも１つのＴ細胞エピトープおよび／またはＢ細胞エピトープが含まれ得る。上記のように、そのようなエピトープは経験的に同定され得るか、またはこれらは予測され得る。

カテゴリー（ｖ）においては、好ましいペアワイズ・アラインメント・アルゴリズムは、上記のようなＮｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈグローバル・アラインメント・アルゴリズムである。

Ｅｎｖ／Ｔａｔ混合物
本発明の混合物にはＥｎｖポリペプチドとＴａｔポリペプチドが含まれる。この混合物中では、これらは複合体を形成し得、その中で、ＥｎｖポリペプチドとＴａｔポリペプチドは非共有結合によって結合され得るか、および／または共有結合され得る。特に有用な複合体は、原則的に、ＥｎｖとＴａｔの１：１のモル比を有する。したがって、Ｅｎｖが三量体の形態である場合は、好ましい複合体には３個のＴａｔ単量体が含まれる。

混合物中のＥｎｖポリペプチドとＴａｔポリペプチドは、ＨＩＶが、例えば、いずれもＨＩＶ−１由来であるか、またはいずれもＨＩＶ−２由来である場合には、同じタイプに由来し得る。同じＨＩＶタイプが使用される場合は、同じグループ由来の（例えば、ＨＩＶ−１においては、いずれもグループＭ、グループＮ、またはグループＯ由来である）ＥｎｖポリペプチドとＴａｔポリペプチドを混合することもまた有用である。グループＭにおいては、同じサブタイプ由来（またはクレード）（例えば、サブタイプＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｊ、またはＫ由来）のＥｎｖポリペプチドとＴａｔポリペプチドを混合することが有用である。ＣＲＦ（組み換え流行株（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｆｏｒｍ））サブタイプ（例えば、Ａ／Ｂ ＣＲＦまたはＡ／Ｅ ＣＲＦ）由来のＥｎｖあるいはＴａｔを使用することも可能である。サブタイプにサブ−サブタイプ（ｓｕｂ−ｓｕｂｔｙｐｅ）が含まれる場合は、ＥｎｖポリペプチドとＴａｔポリペプチドは同じサブ−サブタイプ由来であり得る。しかし、異なるグループ、サブタイプ、サブ−サブタイプ、および／またはクレード由来のＥｎｖとＴａｔを使用することも除外されない。ＨＩＶ−１命名法は、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８８：５５−６にさらに詳細に議論されている。

サブタイプＢまたはサブタイプＣ由来のＥｎｖとＴａｔの使用が好ましい。１つのサブタイプ（または、適用できる場合は、サブ−サブタイプ）中では、同じ株に由来するＥｎｖとＴａｔを使用することが可能であり、また、異なる株に由来するＥｎｖとＴａｔを使用することも可能である。例えば、ＥｎｖポリペプチドとＴａｔポリペプチドはいずれも、ＳＦ１６２株（サブタイプＢ）由来であり得るか、または、本発明では、１つの株（例えば、ＳＦ１６２）由来のＥｎｖと別の株（例えば、ＢＨ１０）由来のＴａｔが使用され得る。

本発明のＥｎｖ／Ｔａｔ複合体は、（ａ）ＣＤ４、および／または（ｂ）ＨＩＶ Ｔａｔポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体、および／または（ｃ）ＨＩＶ Ｅｎｖポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体に特異的に結合し得る。したがって、上記複合体は、複合体を形成していないＥｎｖポリペプチドのＣＤ４結合活性、および／または複合体を形成していないＴａｔポリペプチドもしくは複合体を形成していないＥｎｖポリペプチドのｍＡｂ結合活性を保持し得る。結合活性（ａ）と（ｂ）の両方を持つ複合体が特に有用である。２００６年３月２８日に提出された米国仮特許出願６０／７８６，９４７に記載されているように、共有結合複合体（ｃｏｖａｌｅｎｔ ｃｏｍｐｌｅｘ）においてこれらの２つの活性を保持するにはＥｎｖとＴａｔとの間で適切な程度の架橋が必要である。この架橋の程度は、極めて広い範囲で変化し得、それゆえ、絶対的な精度で制御されることは必要なく、架橋が少なすぎると不安定な複合体につながり、架橋が多すぎると結合活性の喪失につながる。

複合体がＣＤ４に特異的に結合する場合は、この結合活性は、例えば、ＷＯ９１／１３９０６に記載されているような公知のアッセイを使用して評価され得る。このアッセイは、天然のＣＤ４を使用するためには必要ない。しかし、これは、その外部ドメインに基づくＣＤ４の精製された可溶性形態を使用するためにはより一般的である（例えば、ＷＯ９１／１３９０６の実施例５を参照のこと）。ＣＤ４はまた、アッセイを容易にするために標識される場合もある。ＣＤ４は好ましくはヒトＣＤ４である。少なくとも２５０のＳＮＰがＣＤ４についてこれまでに記載されており、これらのポリペプチドのうちの任意のもの、例えば、ＲＥＦＳＥＱ ＣＤ４（ＧＩ：１０８３５１６７）が使用され得る。複合体を形成していないＥｎｖはＣＤ４に特異的に結合するであろう。そしてこの特異的結合活性は、Ｅｎｖ／Ｔａｔ複合体において保持され得る。しかし、結合活性が排除さなくても、実際の結合親和性は変化し得る。

上記複合体が抗Ｔａｔモノクローナル抗体に特異的に結合する場合は、好ましいモノクローナル抗体は８Ｄ１．８であり、これは、ＡＩＤＳ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍ，Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ ＡＩＤＳ，ＮＩＡＩＤ，ＮＩＨ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｉｄｓｒｅａｇｅｎｔ．ｏｒｇ／ＵｐｌｏａｄＤｏｃｓ／ｄｓ４６７２＿００３．ｐｄｆ）を通じて入手することができる。Ｔａｔ結合アッセイでのこの抗体の使用は、例えば、Ｒｏｈｒら（２００３）Ｊ Ｖｉｒｏｌ．７７：５４１５−２７，Ａｖｒａｈａｍら（２００４）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７３：６２２８−３３，Ｌｉｕら（２００２）Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７６：６６８９−７００の中で、以前に開示されている。

Ｅｎｖ／Ｔａｔ共有結合
Ｅｎｖタンパク質とＴａｔタンパク質は、本発明の複合体の中では互いに共有結合され得る。タンパク質を共有結合させるための様々な方法は当該分野で公知である。例えば、参考文献Ｗｏｎｇ（１９９１）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｉｎｇ．ＩＳＢＮ ０−８４９３−５８８６−８およびＨｅｒｍａｎｓｏｎ（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．ＩＳＢＮ ０−１２−３４２３３６−８を参照のこと。例えば、共有結合には、ホモ二官能性架橋剤、ヘテロ二官能性架橋剤、またはゼロ長架橋剤（ｚｅｒｏ−ｌｅｎｇｔｈ ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｅｒ）の使用が関係し得る。これには、タンパク質中のスルフヒドリル基に向けられた試薬、タンパク質中のアミノ基に向けられた試薬、タンパク質中のカルボキシル基に向けられた試薬、チロシン選択性試薬、アルギニン特異的試薬、ヒスチジン特異的試薬、メチオニンアルキル化試薬、トリプトファン特異的試薬、セリン修飾試薬などが関係し得る。

本発明とともに使用される架橋剤の好ましいグループとしては、アルデヒドが挙げられ、そして特に、ホルムアルデヒドおよびジアルデヒドが挙げられる。適切なジアルデヒドとしては、グリオキサール、マロンジアルデジド、スクシニアルデニド（ｓｕｃｃｉｎｉａｌｄｅｈｙｄｅ）、アジポアルデヒド、α−ヒドロキシアジポアルデヒド、グルタルアルデヒド、およびフタルアルデヒドが挙げられる。グルタルアルデヒドとその誘導体が特に好ましく、これには、２−メトキシ−２，４−ジメチルグルタルアルデヒド、３−メトキシ−２，４−ジメチルグルタルアルデヒド、および３−メチルグルタルアルデヒドが含まれる。ピリドキサルリン酸もまた使用され得る。他のアミノ基に向けられたか架橋剤としては、ビス−イミドエステル、ビス−スクシンイミジル誘導体（例えば、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート、または「ＢＳ^３」）、二官能性ハロゲン化アリール、二官能性アシル化剤（ジイソシアネート、ジイソチオシアネート、二官能性ハロゲン化スルホニル、ビス−ニトロフェニルエステル、および二官能性アシルアジドを含む）、ジケトン、ｐ−ベンゾキノン、２−イミドチオラン、エリスリトールビソカルボネート、ムコブロン酸、ムコクロル酸、クロロギ酸エチル、およびマルチジアゾニウム化合物（ｍｕｌｔｉｄｉａｚｏｎｉｕｍ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）が挙げられる。

これらの試薬を使用してタンパク質を架橋するための方法は当該分野で公知である。一般的には、本発明には、Ｅｎｖポリペプチド、Ｔａｔポリペプチドおよび架橋剤を、共有結合反応を進行させる条件下で混合する工程が含まれるであろう。しかし、ヘテロ二官能性試薬を使用する手順のようないくつかの２工程の手順では、２つのポリペプチドのうちの１つが、最初に架橋試薬と反応させられて活性化されたポリペプチドが形成されるであろう。その後、活性化されたポリペプチドは第２のポリペプチドと反応させられるであろう。

光反応基を持つヘテロ二官能性リンカーもまた有用である。リンカーが１つの熱反応基と１つの光反応基を有する場合は、第１の工程に熱反応基を介する結合が含まれ得、その後に、複合体を作製するための結合が、例えば、ＵＶ線の使用によって開始させられ得る。あるいは、光反応基を最初に使用することもできる。

上記のように、架橋反応は、Ｅｎｖタンパク質とＴａｔタンパク質の重要な結合活性を排除するほどには大きくない程度になるように行われ得る。このように、Ｅｎｖタンパク質とＴａｔタンパク質の濃度、架橋試薬（単数または複数）の濃度、ｐＨ、反応温度、および反応時間が、所望される架橋の程度が得られるように制御され得る。Ｅｎｖ、Ｔａｔ、および架橋試薬の特定の組み合わせが試験される場合は、反応の最初のシリーズは、適切な反応条件を評価するために行われ得る。

薬学的組成物
本発明の混合物は、免疫原性組成物において有効成分として使用することができる。これらの組成物は、免疫応答を誘発するために動物に投与され得る。免疫応答には、好ましくは、Ｅｎｖおよび／またはＴａｔに対する体液性応答（例えば、中和抗体応答のような抗体応答）ならびに／あるいは細胞性応答が含まれる。すでにＨＩＶに感染した患者においては、免疫応答により感染の重篤度が低下する（例えば、ウイルス量が減少する）場合があり、そして、さらにはＨＩＶ感染のクリアランス（ｃｌｅａｒａｎｃｅ）が生じる場合もある。ＨＩＶに感染していない患者においては、免疫応答により、将来のＨＩＶ感染のリスクが低下し得、そしてこれはさらには、将来のＨＩＶ感染からの防御となり得る。免疫原性組成物の投与により生じるこれらの効果は、他の抗ＨＩＶストラテジーの使用（例えば、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、侵入阻害剤、融合阻害剤などを含むがこれらに限定されない抗ウイルス剤の投与）によって増大させられる場合があり、また、免疫原性組成物の投与により生じるこれらの効果には他の抗ＨＩＶストラテジーの使用も必要である場合がある。

免疫原性組成物には、免疫学的有効量のポリペプチドが含まれるであろう。「免疫学的有効量」によっては、単回投与または一連の投与の一部のいずれかとしてのその量の個体への投与が、所望される処置または予防に有効であることが意味される。この量は、処置される個体の健常状態および生理的状態（ｐｈｙｓｉｃａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）、年齢、処置される個体の分類群（例えば、ヒト以外の霊長類、霊長類など）、抗体を合成する個体の免疫系の能力、所望される防御の程度、ワクチンの処方、医学的状況についての処置を行う医師の判断、ならびに他の関連する要因に応じて変化し得る。この量は、日常的に行われる試行を通じて決定され得る比較的広い範囲に入り得ると予想され、そして１回の投与あたりの複合体の典型的な量は、抗原あたり１μｇから１０ｍｇの間である。

本発明の免疫原性組成物は薬学的に許容される。これらには通常、上記複合体に加えて複数の成分が含まれる。例えば、これらには、典型的には、１種類以上の薬学的担体（単数または複数）および／または賦形剤（単数または複数）が含まれる。そのような成分についての徹底した議論は、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ．第２０版，ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２で入手することができる。

組成物は一般的には水性形態であろう。

緊張度（ｔｏｎｉｃｉｔｙ）を制御するためには、生理学的塩（例えば、ナトリウム塩）を含めることが好ましい。塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）が好ましく、これは、１ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌの間で存在し得る。存在し得る他の塩としては、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、無水リン酸二ナトリウム（ｄｉｓｏｄｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒａｔｅ）、塩化マグネシウム、塩化カルシウムなどが挙げられる。

組成物は、一般的には、２００ｍＯｓｍ／ｋｇから４００ｍＯｓｍ／ｋｇの間、好ましくは２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜３６０ｍＯｓｍ／ｋｇの間の浸透圧を有するであろう。より好ましくは、２９０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜３１０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲に入るであろう。

組成物には、１種類以上の緩衝液が含まれ得る。典型的な緩衝液としては：リン酸塩緩衝液；Ｔｒｉｓ緩衝液；ホウ酸塩緩衝液；コハク酸塩緩衝液；ヒスチジン緩衝液；またはクエン酸緩衝液が挙げられる。緩衝液は、典型的には、５ｍＭ〜２０ｍＭの範囲で含まれるであろう。

組成物のｐＨは、一般的には、５から８、より典型的には、６から７の間であろう。

組成物は、好ましくは、滅菌組成物である。上記組成物には、好ましくは、非発熱性であり、例えば、１用量あたり＜１ＥＵ（内毒素単位、測定標準）、好ましくは、１用量あたり＜０．１ＥＵが含まれる。上記組成物にはグルテンが含まれないことが好ましい。

本発明の組成物には、界面活性剤（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（「Ｔｗｅｅｎｓ」として知られている）、オクトキシノール（例えば、オクトキシノール−９（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）またはｔ−オクチルフェノキシポリエトキシ−エタノール）などが含まれ得る。

ワクチンは、約０．５ｍｌの投与量（ｄｏｓａｇｅ ｖｏｌｕｍｅ）で投与され得る。

ワクチンアジュバント
本発明の組成物には、アジュバントが含まれることが有利であり得、アジュバントは、上記組成物が投与された患者において誘発される免疫応答（体液性免疫および／または細胞性免疫）を増強するように機能し得る。本発明とともに使用され得るアジュバントとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
・カルシウム塩およびアルミニウム塩（またはそれらの混合物）を含むミネラル含有組成物、カルシウム塩としては、リン酸カルシウム（例えば、米国特許第６３５５２７１号に開示されている「ＣＡＰ」粒子）が挙げられる。アルミニウム塩としては、水酸化物、リン酸塩、硫酸塩などが挙げられ、これらの塩は任意の適切な形態（例えば、ゲル、結晶、不定形など）をとり得る。これらの塩の吸着が好ましい。ミネラル含有組成物はまた、金属塩の粒子としても処方され得る（ＷＯ００／２３１０５）。アルミニウム塩アジュバントは以下にさらに詳細に記載される。

・以下にさらに詳細に記載されるような水中油型エマルジョン。

・以下のような、免疫賦活オリゴヌクレオチド：ＣｐＧモチーフ（グアノシンに対してリン酸結合によって連結させられた非メチル化シトシンを含むジヌクレオチド配列）、ＴｐＧモチーフ（ＷＯ０１／２２９７２）、二本鎖ＲＮＡ、パリンドローム配列を含むオリゴヌクレオチド、またはポリ（ｄＧ）配列を含むオリゴヌクレオチド。免疫賦活オリゴヌクレオチドには、ホスホロチオエート修飾のようなヌクレオチドの修飾／アナログが含まれ得、そしてこれは二本鎖であっても、また（ＲＮＡを除く）一本鎖であってもよい。Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３１：２３９３−２４００、ＷＯ０２／２６７５７、およびＷＯ９９／６２９２３には、可能なアナログ置換（例えば、２’−デオキシ−７−デアザグアノシンでのグアノシンの置換）が開示されている。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、Ｋｒｉｅｇ（２００３）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ９：８３１−８３５，ＭｃＣｌｕｓｋｉｅら（２００２）ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ３２：１７９−１８５、ＷＯ９８／４０１００、米国特許第６，２０７，６４６号、同第６，２３９，１１６号、および同第６，４２９，１９９号でさらに議論されている。ＣｐＧ配列はＴＬＲ９に対して、例えば、モチーフＧＴＣＧＴＴまたはＴＴＣＧＴＴに対して向けられている（Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ３１（ｐａｒｔ ３）：６５４−６５８）。ＣｐＧ配列は、Ｔｈ１免疫応答（例えば、ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮ（オリゴデオキシヌクレオチド）の誘導に特異的であり得るか、またはこれは、Ｂ細胞応答（例えば、ＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮ）の誘導について、より特異的であり得る。ＣｐＧ−ＡとＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮは、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌら（２００３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７０：４０６１−４０６８、Ｋｒｉｅｇ（２００２）Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２３：６４−６５、ＷＯ０１／９５９３５の中で議論されている。好ましくは、ＣｐＧはＣｐＧ−Ａ ＯＤＮである。好ましくは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’末端が受容体認識に利用されるように構築される。状況に応じて、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列が、「イムノマー（ｉｍｍｕｎｏｍｅｒ）」が形成されるようにそれらの３’末端に結合させられ得る。例えば、Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ３１（ｐａｒｔ ３）：６５４−６５８、Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）ＢＢＲＣ ３０６：９４８−９５３、Ｂｈａｇａｔら（２００３）ＢＢＲＣ ３００：８５３−８６１、およびＷＯ０３／０３５８３６を参照のこと。有用なＣｐＧアジュバントはＣｐＧ７９０９であり、これはＰｒｏＭｕｎｅ（商標）（Ｃｏｌｅｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）としても知られている。免疫賦活オリゴヌクレオチドには、典型的には、少なくとも２０ヌクレオチドが含まれるであろう。これらには、１００未満のヌクレオチドが含まれ得る。

３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピッドＡ（「３ｄＭＰＬ」、「ＭＰＬ（商標）」としても知られている）（Ｍｙｅｒｓら（１９９０）、Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ，Ｖａｃｃｉｎｅ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓの１４５頁〜１５６頁（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ＭｅｄｉｃｉｎｅシリーズのＭｅｔｈｏｄｓの第４２巻）。ＩＳＢＮ：１−５９２５９−０８３−７． Ｏ’Ｈａｇａｎ編，２７３頁〜２８２頁，Ｊｏｈｎｓｏｎら（１９９９）Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ４２：４６４０−９、およびＢａｌｄｒｉｃｋら（２００２）Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔｏｘｉｃｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ３５：３９８−４１３）。３ｄＭＰＬは、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｍｉｎｎｅｓｏｔａのヘプトースのない（ｈｅｐｔｏｓｅｌｅｓｓ）突然変異体から調製されており、そしてリピッドＡに化学的に類似しているが、酸に不安定なホスホリル基と塩基に不安定なアシル基を欠いている。３ｄＭＰＬの調製は、最初に、英国特許出願ＧＢ−Ａ−２２２０２１１（参考文献２）に記載された。３ｄＭＰＬは、それらのアシル化により異なる（例えば、異なる長さであり得る３個、４個、５個、または６個のアシル鎖を有している）関連する分子の混合物の形態をとり得る．２つのグルコサミン（２−デオキシ−２−アミノ−グルコースとしても知られている）単糖は、それらの２位の炭素で（すなわち、２位と２’位で）Ｎ−アシル化されており、３’位でのＯ−アシル化もまた存在する。

・イミダゾキノリン化合物（例えば、イミキモド（Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ（「Ｒ−８３７」））（米国特許第４，６８０，３３８号；同第４，９８８，８１５号）、レシキモド（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ（「Ｒ−８４８」））（ＷＯ９２／１５５８２））、およびそれらのアナログ；ならびにそれらの塩（例えば、塩酸塩）。免疫賦活イミダゾキノリンについてのさらなる詳細は、Ｓｔａｎｌｅｙ（２００２）Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ２７：５７１−５７７，Ｗｕら（２００４）Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．６４（２）：７９−８３，Ｖａｓｉｌａｋｏｓら（２０００）Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０４（１）：６４−７４、米国特許第４６８９３３８号、同第４９２９６２４号、同第５２３８９４４号、同第５２６６５７５号、同第５２６８３７６号、同第５３４６９０５号、同第５３５２７８４号、同第５３８９６４０号、同第５３９５９３７号、同第５４８２９３６号、同第５４９４９１６号、同第５５２５６１２号、同第６０８３５０５号、同第６４４０９９２号、同第６６２７６４０号、同第６６５６９３８号、同第６６６０７３５号、同第６６６０７４７号、同第６６６４２６０号、同第６６６４２６４号、同第６６６４２６５号、同第６６６７３１２号、同第６６７０３７２号、同第６６７７３４７号、同第６６７７３４８号、同第６６７７３４９号、同第６６８３０８８号、同第６７０３４０２号、同第６７４３９２０号、同第６８００６２４号、同第６８０９２０３号、同第６８８８０００号、および同第６９２４２９３号、ならびに、Ｊｏｎｅｓ（２００３）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ ４：２１４−２１８の中に見ることができる。

・ＷＯ２００４／０６０３０８に開示されている化合物のようなチオセミカルバゾン化合物。活性のある化合物を処方する、製造する、およびスクリーニングする方法もまた、ＷＯ２００４／０６０３０８に記載されている。チオセミカルバゾンは、ＴＮＦ−αのようなサイトカインの産生のためのヒト抹消血単核細胞の刺激に特に有効である。

・ＷＯ２００４／０６４７５９に開示されている化合物のようなトリプタンスリン化合物。活性のある化合物を処方する、製造する、およびスクリーニングする方法もまた、参考文献ＷＯ２００４／０６４７５９に記載されている。チオセミカルバゾン化合物は、ＴＮＦ−αのようなサイトカインの産生のためのヒト抹消血単核細胞の刺激に特に有効である。

・以下のようなヌクレオシドアナログ：（ａ）イサトラビン（ＡＮＡ−２４５；７−チア−８−オキソグアニン）：

およびそのプロドラッグ；（ｂ）ＡＮＡ９７５；（ｃ）ＡＮＡ−０２５−１；（ｄ）ＡＮＡ３８０；（ｅ）米国特許第６，９２４，２７１号、同第５，６５８，７３１号、およびＵＳ２００５／００７０５５６に開示されている化合物；（ｆ）以下の式を有している化合物：

式中：
Ｒ_１およびＲ_２はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロ、−ＮＲ_ａＲ_ｂ、−ＯＨ、Ｃ_１−６アルコキシ、置換されたＣ_１−６アルコキシ、複素環、置換された複素環、Ｃ_６−１０アリール、置換されたＣ_６−１０アリール、Ｃ_１−６アルキル、または置換されたＣ_１−６アルキルであり；
Ｒ_３は存在しないか、Ｈ、Ｃ_１−６アルキル、置換されたＣ_１−６アルキル、Ｃ_６−１０アリール、置換されたＣ_６−１０アリール、複素環または置換された複素環であり；
Ｒ_４およびＲ_５はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロ、複素環、置換された複素環、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ_ｄ、Ｃ_１−６アルキル、置換されたＣ_１−６アルキルであるか、または一緒に結合してＲ_４−５中のような５員環を形成し：

結合は、

によって示される結合で得られる
Ｘ_１およびＸ_２はそれぞれ独立して、Ｎ、Ｃ、ＯまたはＳであり；
Ｒ_８はＨ、ハロ、−ＯＨ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、−ＯＨ、ＮＲ_ａＲ_ｂ、−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｏ−Ｒ_ｃ、−Ｏ−（Ｃ_１−６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）_ｐＲ_ｅまたは−Ｃ（Ｏ）−Ｒ_ｄであり；
Ｒ_９はＨ、Ｃ_１−６アルキル、置換されたＣ_１−６アルキル、複素環、置換された複素環、またはＲ_９ａであり、ここでは、Ｒ_９ａは：

結合は、

によって示される結合で得られる
Ｒ_１０およびＲ_１１はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ_１−６アルコキシ、置換されたＣ_１−６アルコキシ、−ＮＲ_ａＲ_ｂ、または−ＯＨであり；
Ｒ_ａおよびＲ_ｂはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ_１−６アルキル、置換されたＣ_１−６アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒ_ｄ、Ｃ_６−１０アリールであり；
Ｒ_ｃはそれぞれ独立して、Ｈ、ホスフェート、ジホスフェート、トリホスフェート、Ｃ_１−６アルキル、または置換Ｃ_１−６アルキルであり；
Ｒ_ｄはそれぞれ独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ_１−６アルキル、置換されたＣ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、置換されたＣ_１−６アルコキシ、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｃ_１−６アルキル）、−ＮＨ（置換されたＣ_１−６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−６アルキル）_２、−Ｎ（置換されたＣ_１−６アルキル）_２、Ｃ_６−１０アリール、または複素環であり；
Ｒ_ｅはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ_１−６アルキル、置換されたＣ_１−６アルキル、Ｃ_６−１０アリール、置換されたＣ_６−１０アリール、複素環、または置換された複素環であり；
Ｒ_ｆはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ_１−６アルキル、置換されたＣ_１−６アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒ_ｄ、ホスフェート、ジホスフェート、またはトリホスフェートであり；
ｎはそれぞれ独立して、０、１、２または３であり；
ｐはそれぞれ独立して、０、１または２であるか；あるいは
あるいは、（ｇ）（ａ）〜（ｆ）のいずれかの薬学的に許容される塩、（ａ）〜（ｆ）のいずれかの互変異性体、または互変異性体の薬学的に許容される塩。

・ロキソリビン（７−アリル−８−オキソグアノシン）（米国特許第５，０１１，８２８号）。

・以下を含むＷＯ２００４／８７１５３（参考文献３）に開示されている化合物：・アシルピペラジン化合物、インドレジオン化合物、テトラヒドライソキノリン（ＴＨＩＱ）化合物、ベンゾシクロジオン化合物、アミノアザビニル化合物、アミノベンズイミダゾールキノリン（ＡＢＩＱ）化合物（ＵＳ６，６０５，６１７，ＷＯ０２／１８３８３）、ヒドラフタルアミド化合物、ベンゾフェノン化合物、イソキサゾール化合物、ステロール化合物、キナジリノン化合物、ピロール化合物（ＷＯ２００４／０１８４５５）、アントラキノン化合物、キノキサリン化合物、トリアジン化合物、ピラザロピリミジン化合物およびベンザゾール化合物（ＷＯ０３／０８２２７２）。

・以下を含むＷＯ２００６／００２４２に開示されている化合物：３，４−ジ（１Ｈ−インドール−３−イル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、スタウロスポリンアナログ、誘導体化されたピリダジン、クロメン−４−オン、インドリノン、キナゾリン、およびヌクレオシドアナログ。

・以下のようなアミノアルキルグルコサミニドホスフェート誘導体：ＲＣ−５２９（Ｊｏｈｎｓｏｎら（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ ９：２２７３−２２７、Ｅｖａｎｓら（２００３）Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ２：２１９−２２）。

・以下のようなホスファゼン：例えば、Ａｎｄｒｉａｎｏｖら（１９９８）Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ １９：１０９−１１５およびＰａｙｎｅら（１９９８）Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗ ３１：１８５−１９６に記載されているポリ［ジ（カルボキシラトフェノキシ）ホスファゼン］（「ＰＣＰＰ」）。

・以下のような低分子免疫増強物質（Ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｉｍｍｕｎｏｐｏｔｅｎｔｉａｔｏｒ）（ＳＭＩＰ）：
Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン
Ｎ２、Ｎ２−ジメチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン
Ｎ２−エチル−Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン
Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ２−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン
１−（２−メチルプロピル）−Ｎ２−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン
Ｎ２−ブチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン
Ｎ２−ブチル−Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン
Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ２−ペンチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン
Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ２−プロペ−２−ニル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン
１−（２−メチルプロピル）−２−［（フェニルメチル）チオ］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン
１−（２−メチルプロピル）−２−（プロピルチオ）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン
２−［［４−アミノ−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−イル］（メチル）アミノ］エタノール
２−［［４−アミノ−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−イル］（メチル）アミノ］エチル酢酸
４−アミノ−１−（２−メチルプロピル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン
Ｎ２−ブチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ４，Ｎ４−ビス（フェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン
Ｎ２−ブチル−Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ４，Ｎ４−ビス（フェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン
Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ４，Ｎ４−ビス（フェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン
Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ４，Ｎ４−ビス（フェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン
１−｛４−アミノ−２−［メチル（プロピル）アミノ］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル｝−２−メチルプロパン−２−オール
１−［４−アミノ−２−（プロピルアミノ）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−２−メチルプロパン−２−オール
Ｎ４，Ｎ４−ジベンジル−１−（２−メトキシ−２−メチルプロピル）−Ｎ２−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン。

・サポニン［Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ ＆ Ｎｅｗｍａｎ編）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ １９９５ ＩＳＢＮ ０−３０６−４４８６７−Ｘの第２２章］。サポニンは、広範囲の植物種の樹皮、葉、幹、根、およびさらには花にも見られるステロールグリコシドとトリテルペノイドグリコシドの異種グループである。キラヤサポニン（Ｑｕｉｌｌａｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａ）の木の皮から単離されたサポニンがアジュバントとして広く研究されている。また、Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔａ（サルサパリラ）、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（ブライズベール）、およびＳａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉａｎａｌｉｓ（ソープルート）由来のサポニンもまた市販によって入手することができる。サポニンアジュバント処方物には、ＱＳ２１のような精製された処方物、ならびに、ＩＳＣＯＭのような脂質処方物が含まれる。ＱＳ２１はＳｔｉｍｕｌｏｎ（商標）として販売されている。サポニン組成物は、ＨＰＬＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣを使用して精製されている。これらの技術を使用した、特異的な精製された画分が同定されており、これには、ＱＳ７、ＱＳ１７，ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−ＢおよびＱＨ−Ｃが含まれる。サポニンがＱＳ２１であることが好ましい。ＱＳ２１の製造法は参考文献４に開示されている。また、サポニン処方物には、コレステロールのようなステロールも含まれる場合がある（ＷＯ９６／３３７３９）。サポニンとコレステロールとの組み合わせを使用して、免疫賦活複合体（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる特有の粒子を形成させることができる［Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ ＆ Ｎｅｗｍａｎ編）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ １９９５（ＩＳＢＮ ０−３０６−４４８６７−Ｘ）の第２３章］。ＩＳＣＯＭには、通常は、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンのようなリン脂質も含まれる。ＩＳＣＯＭには任意の既知のサポニンを使用することができる。ＩＳＣＯＭに、ＱｕｉｌＡ、ＱＨＡ、およびＱＨＣのうちの１つ以上が含まれることが好ましい。ＩＳＣＯＭは、ＷＯ９６／３３７３９、ＥＰ−Ａ−０１０９９４２、およびＷＯ９６／１１７１１の中でさらに記載されている。状況に応じて、ＩＳＣＯＭはさらなる界面活性剤は持たない場合がある（ＷＯ００／０７６２１）。サポニンをベースとするアジュバントの開発の概要は、Ｂａｒｒら（１９９８）Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ３２：２４７−２７１、およびＳｊｏｌａｎｄｅｒｅｔら（１９９８）Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ３２：３２１−３３８の中に見ることができる。

・細菌性ＡＤＰリボシル化毒素（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ熱不安定性エンテロ毒素「ＬＴ」、コレラ毒素「ＣＴ」、または百日咳毒素「ＰＴ」）、ならびに、ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２として知られている突然変異体毒素のようなそれらの解毒された誘導体（Ｓｊｏｌａｎｄｅｒｅｔら（１９９８）Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ３２：３２１−３３８）。解毒されたＡＤＰリボシル化毒素の粘膜アジュバント（ｍｕｃｏｓａｌ ａｄｊｕｖａｎｔ）としての使用はＷＯ９５／１７２１に記載されており、そして非経口アジュバントとしての使用はＷＯ９８／４２３７５に記載されている。

・エステル化ヒアルロン酸マイクロスフェア（Ｓｉｎｇｈら（２００１）Ｊ Ｃｏｎｔ Ｒｅｌｅａｓｅ ７０：２６７−２７６）またはキトサンおよびその誘導体（ＷＯ９９／２７９６）のような生物接着剤およびムコ接着剤。

・生分解性であり、非毒性である材料（例えばポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカプロラクトンなど）から、好ましくは、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）を用いて形成させられ、状況に応じて、負荷電表面（例えば、ＳＤＳで）または正荷電表面（例えば、ＣＴＡＢのような陽イオン性界面活性剤で）を有するように処理された、マイクロ粒子（すなわち、直径約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、より好ましくは直径約２００ｎｍ〜約３０μｍ、または直径約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）。

・リポソーム（Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ ＆ Ｎｅｗｍａｎ編）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ １９９５（ＩＳＢＮ ０−３０６−４４８６７−Ｘ）の第１３章と第１４章）。アジュバントとしての使用に適しているリポソーム処方物の例は、ＵＳ５，９１６，５８８、同６，０９０，４０６、およびＥＰ−Ａ−０６２６１６９に記載されている。

・ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル（ＷＯ９９／５２５４９）。そのような処方物には、さらに、オクトキシノールと組み合わせられたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（ＷＯ０１／２１２０７）、ならびに、オクトキシノールのような少なくとも１つのさらなる非イオン性界面活性剤と組み合わせられたポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステル界面活性剤（ＷＯ０１／２１１５）が含まれる。好ましいポリオキシエチレンエーテルは以下の群より選択される：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ラウレス９（ｌａｕｒｅｔｈ９））、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテル、およびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル。

・以下のようなムラミルペプチド：Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（「ｔｈｒ−ＭＤＰ」）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌ−Ｄ−イソグル−Ｌ−Ａｌａ−ジパルミトキシプロピルアミド（「ＤＴＰ−ＤＰＰ」または「Ｔｈｅｒａｍｉｄｅ（商標）」）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（「ＭＴＰ−ＰＥ」）。

・第２のグラム陰性細菌由来のリポ糖（ＬＰＳ）調製物と組み合わせられた第１のグラム陰性細菌から調製された外膜タンパク質プロテオソーム調製物。ここでは、外膜タンパク質プロテオソームとＬＰＳ調製物は、安定な非共有結合アジュバント複合体を形成する。そのような複合体としては、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの外膜とＬＰＳからなる複合体「ＩＶＸ−９０８」が挙げられる。

・メチルイノシン５’−モノホスフェート（「ＭＩＭＰ」）（Ｓｉｇｎｏｒｅｌｌｉ ＆ Ｈａｄｄｅｎ（２００３）Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ ３（８）：１１７７−８６）。

・以下の式を有している化合物のような、ポリヒドロキシル化ピロリジジン化合物（ＷＯ２００４／０６４７１５）：

式中、Ｒは水素、直鎖または分枝鎖、未置換または置換、飽和または不飽和の、アシル、アルキル（例えばシクロアルキル）、アルケニル、アルキニル、およびアリール基、またはそれらの薬学的に許容される塩もしくは誘導体からなる群より選択される。例として、カスアリン、カスアリン−６−α−Ｄ−グルコピラソース、３−エピ−カスアリン、７−エピ−カスアリン、３，７−ジエピ−カスアリンなどが挙げられるが、これらに限定されない。

・γイヌリン（Ｃｏｏｐｅｒ（１９９５）Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ６：５５９−８０）、またはアルガムリンのようなその誘導体
・式Ｉ、ＩＩ、もしくはＩＩＩの化合物、またはそれらの塩：

（参考文献５の中で定義されている、例えば、以下のもの：「ＥＲ ８０３０５８」、「ＥＲ ８０３７３２」、「ＥＲ ８０４０５３」、ＥＲ ８０４０５８」、「ＥＲ ８０４０５９」、「ＥＲ ８０４４４２」、「ＥＲ ８０４６８０」、「ＥＲ ８０４７６４」、ＥＲ ８０３０２２、または「ＥＲ ８０４０５７」、例えば、以下のもの：

・ＯＭ−１７４（Ｍｅｒａｌｄｉら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅ ２１：２４８５−２４９１，Ｐａｊａｋら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅ ２１：８３６−８４に記載されている）のようなＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ由来のリピッドＡの誘導体。

・以下のような、陽イオン性脂質と（通常は中性の）コリピッド（ｃｏ−ｌｉｐｉｄ）の処方物：例えば、アミノプロピル−ジメチル−ミリストレイルオキシ−プロパナミニウムブロマイド−ジフィタノイルホスファチジル−エタノールアミン（「Ｖａｘｆｅｃｔｉｎ（商標）」）、またはアミノプロピル−ジメチル−ビス−ドデシルオキシ−プロパナミニウムブロマイド−ジオレオイルホスファチジル−エタノールアミン（「ＧＡＰ−ＤＬＲＩＥ：ＤＯＰＥ」）。（±）−Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ビス（シン−９−テトラデセネイルオキシ）−１−プロパナミニウム塩を含む処方物が好ましい（米国特許第６５８６４０９）。

・ホスフェートを含む非環式骨格に結合させられた脂質を含む化合物、例えばＴＬＲ４アンタゴニストＥ５５６４（Ｗｏｎｇら（２００３）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ４３（７）：７３５−４２，ＵＳ２００５／０２１５５１７）：

これらのアジュバントと、他のアジュバント活性がある物質は、参考文献Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ ＆ Ｎｅｗｍａｎ編）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ １９９５（ＩＳＢＮ ０−３０６−４４８６７−Ｘ）、およびＶａｃｃｉｎｅ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ＭｅｄｉｃｉｎｅシリーズのＭｅｔｈｏｄｓの第４２巻）．ＩＳＢＮ：１−５９２５９−０８３−７．Ｏ’Ｈａｇａｎ編の中でさらに詳細に議論されている。

組成物には、上記アジュバントのうちの２つ以上が含まれる場合がある。

組成物の中では、抗原とアジュバントは、通常は混合された状態であろう。

水中油型エマルジョンアジュバント
水中油型エマルジョンはアジュバントとして特に有用である。様々なそのようなエマルジョンが公知であり、これらには通常、少なくとも１種類の油と少なくとも１種類の界面活性剤が含まれ、上記油（単数または複数）と上記界面活性剤（単数または複数）は生体分解性（代謝可能）であり、かつ生体適合性である。エマルジョン中の油滴は、一般的には、５μｍ未満の直径であり、さらには、１サブミクロン未満の直径を有する場合もあり、これらの小さい大きさは、安定なエマルジョンを提供するためのマイクロフルイダイザーを用いて得られる。２２０ｎｍ未満の大きさの液滴が好ましい。なぜなら、これらは濾過滅菌できるからである。

本発明は、油（例えば、動物性（例えば、魚類）または植物性の供給源に由来する油）とともに使用され得る。植物性油の供給源としては、木の実（ｎｕｔｓ）、種子、および穀類が挙げられる。最も一般的に利用されているピーナッツ油、大豆油、ココナッツ油、およびオリーブ油はナッツ油の例を示す。例えば、ホホバ豆（ｊｏｊｏｂａ ｂｅａｎ）から得られたホホバ油を使用することができる。種子油としては、サフラワー油、菜種油、ヒマワリ油、ゴマ油などが挙げられる。穀物のグループの中では、トウモロコシ油が最も容易に入手できるが、他の穀物（例えば、コムギ、オーツムギ、ライムギ、コメ、テフ、ライ小麦など）の油もまた使用され得る。グリセロールの６〜１０炭素の脂肪酸エステル、および１，２−プロパンジオールは、種子油の中には自然界では存在しないが、木の実および種子の油から出発して適切な材料の加水分解、分離、およびエステル化によって調製され得る。哺乳動物の乳汁由来の脂肪および油は代謝可能であり、したがって、本発明の実施において使用され得る。動物供給源から純粋な油を得るために必要な分離、精製、鹸化、および他の手段のための手順は当該分野で周知である。ほとんどの魚類には、容易に回収することができる代謝可能な油が含まれている。例えば、肝油、サメ肝油、およびクジラの油（例えば、鯨ろう）は、本明細書において使用され得る魚類の油のいくつかの例を示す。多数の分岐鎖の油は、５−炭素イソプレン単位で生化学的に合成され、一般的には、テルペノイドと呼ばれる。サメ肝油には、スクワレン、２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサエンとして知られている分岐した不飽和テルペノイドが含まれており、これは本明細書中では特に好ましい。スクワレン、スクワレンの飽和アナログもまた好ましい油である。スクワレンを含む魚類の油とスクワレンは商業的に容易に入手することができ、また、当該分野で公知の方法によって得ることもできる。他の好ましい油はトコフェロール（以下を参照のこと）である。油の混合物を使用することができる。

界面活性剤は、それらのＨＬＢ（親水／親油バランス（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｅ／ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ ｂａｌａｎｃｅ））によって分類することができる。本発明の好ましい界面活性剤は、少なくとも１０、好ましくは少なくとも１５、より好ましくは少なくとも１６のＨＬＢを有する。本発明は界面活性剤とともに使用され得る。界面活性剤には以下が含まれるが、これらに限定されない：ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（一般的にはＴｗｅｅｎｓと呼ばれる）、特に、ポリソルベート２０およびポリソルベート８０；ＤＯＷＦＡＸ（商標）の商標名で販売されている、エチレンオキサイド（ＥＯ）、プロピレンオキサイド（ＰＯ）、および／またはブチレンオキサイド（ＢＯ）のコポリマー、例えば、直鎖のＥＯ／ＰＯブロックコポリマー；特定の目的であるオクトキシノール−９（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、またはｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール）を持つオクトキシノール（これは、エトキシ（オキシ−１，２−エタンジイル）基の繰り返しの数が異なり得る）；（オクチルフェノキシ）ポリエトキシエタノール（ＩＧＥＰＡＬ ＣＡ−６３０／ＮＰ−４０）；リン脂質（例えば、ホスファチジルコリン（レシチン））；ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、およびオレイルアルコール由来のポリオキシエチレン脂肪エーテル（Ｂｒｉｊ界面活性剤として知られている）（例えば、トリエチレングリコールモノラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ ３０））；ならびに、ソルビタンエステル（ＳＰＡＮとして一般的に知られている）（例えば、トリオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ ８５）およびモノラウリン酸ソルビタン）。エマルジョンの中に含められる好ましい界面活性剤はＴｗｅｅｎ ８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）、Ｓｐａｎ ８５（トリオレイン酸ソルビタン）、レシチン、およびＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００である。

界面活性剤の混合物（例えば、Ｔｗｅｅｎ ８０／Ｓｐａｎ ８５混合物、またはＴｗｅｅｎ８０／Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００混合物）が使用され得る。ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ ８０）のようなポリオキシエチレンソルビタンエステルとｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）のようなオクトキシノールの組み合わせもまた適している。別の有用な組み合わせには、ラウレス９とポリオキシエチレンソルビタンエステルおよび／またはオクトキシノールが含まれる。

界面活性剤の好ましい量（重量％）は以下である：ポリオキシエチレンソルビタンエステル（例えば、Ｔｗｅｅｎ ８０）０．０１％〜１％、特に、約０．１％；オクチル−もしくはノニルフェノキシポリオキシエタノール（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、またはＴｒｉｔｏｎシリーズの他の界面活性剤）０．００１％〜０．１％、特に、０．００５％〜０．０２％；ポリオキシエチレンエーテル（例えば、ラウレス９）０．１％〜２０％、好ましくは、０．１％〜１０％、および特に、０．１％〜１％、または約０．５％。

本発明で有用な特異的な水中油型エマルジョンアジュバントとしては以下が挙げられるが、これらに限定されない：
・スクワレン、Ｔｗｅｅｎ ８０、およびＳｐａｎ ８５の１サブミクロン未満の水中油エマルジョン。上記エマルジョンの容積組成は、約５％のスクワレン、約０．５％のポリソルベート８０、および約０．５％のＳｐａｎ ８５であり得る。重量では、これらの割合は、４．３％のスクワレン、０．５％のポリソルベート８０、および０．４８％のＳｐａｎ ８５となる。このアジュバントは、Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ ＆ Ｎｅｗｍａｎ編）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ １９９５ ｏｆ Ｖａｃｃｉｎｅ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ＭｅｄｉｃｉｎｅシリーズのＭｅｔｈｏｄｓの第４２巻）の第１０章にさらに詳細に記載されているように、「ＭＦ５９」として知られている（ＷＯ９０／１４８３７、Ｐｏｄｄａ ＆ Ｄｅｌ Ｇｉｕｄｉｃｅ（２００３）Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ２：１９７−２０３、およびＰｏｄｄａ（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ １９：２６７３−２６８０）。ＭＦ５９エマルジョンには、クエン酸塩イオン（例えば、１０ｍＭのクエン酸ナトリウム緩衝液）が含まれることが有利である。

・スクワレン、トコフェロール、およびＴｗｅｅｎ ８０のエマルジョン。このエマルジョンには、リン酸緩衝化生理食塩水が含まれ得る。これには、Ｓｐａｎ ８５（例えば、１％）および／またはレシチンも含まれる場合がある。これらのエマルジョンには、２から１０％のスクワレン、２から１０％のトコフェロールと、０．３から３％のＴｗｅｅｎ ８０が含まれ、スクワレン：トコフェロールの重量比は、好ましくは、≦１である。なぜなら、これによってより安定なエマルジョンが提供されるからである。１つのこのようなエマルジョンは、Ｔｗｅｅｎ ８０をＰＢＳ中に溶解させて２％の溶液とし、その後、９０ｍｌのこの溶液を（５ｇのＤＬ−α−トコフェロールと５ｍｌのスクワレン）の混合物と混合し、その後、上記混合物をマイクロフルイダイズすることによって作製することができる。得られるエマルジョンは、１ミクロン未満の油滴を呈し得、例えば、１００から２５０ｎｍの間、好ましくは、約１８０ｎｍの平均直径を持つ。

・スクワレン、トコフェロール、およびＴｒｉｔｏｎ界面活性剤（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）のエマルジョン。このエマルジョンにはまた、３ｄ−ＭＰＬが含まれる場合がある（下記を参照のこと）。このエマルジョンにはリン酸緩衝液が含まれる場合がある。

・ポリソルベート（例えば、ポリソルベート８０）、Ｔｒｉｔｏｎ界面活性剤（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）、およびトコフェロール（例えば、コハク酸α−トコフェロール）を含むエマルジョン。このエマルジョンには、３つの成分が約７５：１１：１０（例えば、７５０μｇ／ｍｌのポリソルベート８０、１１０μｇ／ｍｌのＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、および１００μｇ／ｍｌのコハク酸α−トコフェロール）の質量比で含まれ得、これらの濃度には、複数の抗原に由来するこれらの成分が何らかの分配量で（ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）含まれるはずである。このエマルジョンにはまた、スクワレンが含まれる場合がある。このエマルジョンにはまた、３ｄ−ＭＰＬが含まれる場合がある（下記を参照のこと）。水相にはリン酸緩衝液が含まれ得る。

・スクワレン、ポリソルベート８０、およびポロキサマー４０１（「Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）Ｌ１２１」）のエマルジョン。このエマルジョンは、リン酸緩衝化生理食塩水（ｐＨ７．４）の中に処方することができる。このエマルジョンは、ムラミルジペプチドについての有用な送達媒体であり、「ＳＡＦ−１」アジュバント中でスレオニル−ＭＤＰと共に使用されている（Ａｌｌｉｓｏｎ ＆ Ｂｙａｒｓ（１９９２）Ｒｅｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４３：５１９−２５）（０．０５％〜１％のＴｈｒ−ＭＤＰ、５％のスクワレン、２．５％のＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ１２１、および０．２％のポリソルベート８０）。これはまた、Ｔｈｒ−ＭＤＰを伴わずに、「ＡＦ」アジュバントとして使用することもできる（Ｈａｒｉｈａｒａｎら（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５５：３４８６−９）（５％のスクワレン、１．２５％のＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ１２１、および０．２％のポリソルベート８０）。マイクロフルイダイズが好ましい。

・０．５％〜５０％の油、０．１％〜１０％のリン脂質、および０．０５％〜５％の非イオン性界面活性剤を有しているエマルジョン。ＷＯ９５／１１７００に記載されているように、好ましいリン脂質成分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリン、およびカルジオリピンである。１サブミクロン未満の液滴の大きさが有利である。

・非代謝性の油（例えば、軽油（ｌｉｇｈｔ ｍｉｎｅｒａｌ ｏｉｌ））と少なくとも１つの界面活性剤（例えば、レシチン、Ｔｗｅｅｎ ８０、またはＳｐａｎ ８０）の１サブミクロン未満の水中油型エマルジョン。以下のような添加剤が含まれる場合がある：ＱｕｉｌＡサポニン、コレステロール、サポニン−親油性結合体（ｓａｐｏｎｉｎ−ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）（例えば、参考文献６に記載されている、グルクロン酸のカルボキシル基を介するデサシルサポニン（ｄｅｓａｃｙｌｓａｐｏｎｉｎ）への脂肪族アミンの付加によって生産された、ＧＰＩ−０１００）、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ｄｉｍｅｔｈｙｉｄｉｏｃｔａｄｅｃｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ）、および／またはＮ，Ｎ−ジオクタデシル−Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）プロパンジアミン。

・サポニン（例えば、ＱｕｉｌＡまたはＱＳ２１）とステロール（例えば、コレステロール）がヘリックスミセル（ｈｅｌｉｃａｌ ｍｉｃｅｌｌｅｓ）として会合しているエマルジョン（ＷＯ２００５／０９７１８）。

・鉱油、非イオン性親油性エトキシル化脂肪アルコール、および非イオン性親水性界面活性剤を含むエマルジョン（例えば、エトキシル化脂肪アルコールおよび／またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー）（ＷＯ２００６／１１３３７３）。

・鉱油、非イオン性親水性エトキシル化脂肪アルコール、および非イオン性親油性界面活性剤を含むエマルジョン（例えば、エトキシル化脂肪アルコールおよび／またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー）（ＷＯ２００６／１１３３７）。

エマルジョンは、送達時に、その場で抗原と混合され得る。したがって、アジュバントと抗原は、使用時に最終的な処方物とするために用意された、パッケージされたワクチンまたは分けられたワクチンの中で別々に維持され得る。抗原は、一般的には、水性の形態であろう。その結果、ワクチンは、最終的に２つの液体の混合によって調製される。混合される２つの液体の容積比は様々であり得る（例えば、５：１から１：５）が、一般的には約１：１である。

アルミニウム塩アジュバント
水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムとして知られているアジュバントを使用することができる。これらの名称は習慣的であり、存在する実際の化合物の正確な記述でもないが、便宜のためにのみ使用される。（例えば、Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ ＆ Ｎｅｗｍａｎ編）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ １９９５の第９章を参照のこと）。本発明では、アジュバントとして一般的に使用されている、「水酸化物」または「リン酸塩」アジュバントのうちのいずれかうを使用することができる。

「水酸化アルミニウム」として知られているアジュバントは、典型的なアルミニウムのオキシ水酸化物塩であり、これは通常は、少なくとも一部が結晶である。式ＡｌＯ（ＯＨ）によって表すことができるアルミニウムのオキシ水酸化物は、特に、１０７０ｃｍ^-１の吸収帯と、３０９０−３１００ｃｍ^-１の強い肩（ｓｔｒｏｎｇ ｓｈｏｕｌｄｅｒ）の存在によって、赤外（ＩＲ）分光法によって水酸化アルミニウムＡｌ（ＯＨ）_３のような他のアルミニウム化合物と区別することができる［Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ ＆ Ｎｅｗｍａｎ編）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ １９９５の第９章］。水酸化アルミニウムアジュバントの結晶化の程度は、高さが半分である回折バンドの幅（ｗｉｄｔｈ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ ｂａｎｄ ａｔ ｈａｌｆ ｈｅｉｇｈｔ）（ＷＨＨ）によって反映され、結晶粒子が少なければ少ないほど、結晶の大きさがより小さいことが原因で、より広いスペクトル線の広がりを示す。表面積は、ＷＨＨが大きくなるに伴って増大し、より高いＷＨＨ値を有するアジュバントが、より大きな抗原吸着能力を有することが明らかにされている。（例えば、透過型電子顕微鏡で見られるような）繊維状形態（ｆｉｂｒｏｕｓ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ）は、水酸化アルミニウムアジュバントの典型である。水酸化アルミニウムアジュバントのｐＩは、通常は、約１１であり、すなわち、アジュバント自体は、生理学的ｐＨで正の表面電荷を有する。ｐＨ７．４では、Ａｌ^＋＋＋１ｍｇあたり１．８〜２．６ｍｇのタンパク質の吸着能力が、水酸化アルミニウムアジュバントについて報告されている。

「リン酸アルミニウム」として知られているアジュバントは、通常は、アルミニウムのヒドロキシリン酸塩であり、これには、多くの場合、少量の硫酸塩（すなわち、アルミニウムヒドロキシホスフェートスルフェート（ａｌｕｍｉｎｉｕｍ ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｕｌｆａｔｅ））も含まれる。これらは沈殿によって得ることができ、沈殿の際の反応条件と濃度が、塩の中でのリン酸塩のヒドロキシルでの置換の程度に影響を与える。ヒドロキシリン酸塩は、一般的には、０．３から１．２のＰＯ_４／Ａｌ分子比を有する。ヒドロキシリン酸塩は、ヒドロキシル基の存在によって正確なＡｌＰＯ_４と区別することができる。例えば、３１６４ｃｍ^−１のＩＲスペクトルのバンド（例えば、２００℃に加熱した場合）は、構造上のヒドロキシルの存在を示す［Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ ＆ Ｎｅｗｍａｎ編）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ １９９５の第９章］。

リン酸アルミニウムアジュバントのＰＯ_４／Ａｌ^３＋モル比は、一般的には、０．３から１．２であり、好ましくは、０．８から１．２であり、より好ましくは、０．９５＋０．１である。リン酸アルミニウムは、特にヒドロキシリン酸塩については、一般的には不定形であろう。典型的なアジュバントは、０．８４から０．９２のＰＯ_４／Ａｌ分子比を持つ不定形のアルミニウムのヒドロキシリン酸塩であり、これには、０．６ｍｇのＡｌ^３＋／ｍｌが含まれる。リン酸アルミニウムは、一般的には粒子状であろう（例えば、透過型電子顕微鏡で見られるようなプレート様の形態）。任意の抗原の吸着後の粒子の典型的な直径は、０．５μｍ〜２０μｍの範囲（例えば、約５μｍ〜１０μｍ）である。ｐＨ７．４で、Ａｌ^＋＋＋１ｍｇあたり０．７ｍｇ〜１．５ｍｇタンパク質の吸着能力が、リン酸アルミニウムアジュバントについて報告されている。

リン酸アルミニウムの荷電ゼロ点（ＰＺＣ）は、リン酸塩のヒドロキシルでの置換の程度に反比例し、この置換の程度は、沈殿により塩を調製するために使用される反応条件と反応物の濃度に応じて様々であり得る。ＰＺＣはまた、溶液中の遊離のリン酸塩イオンの濃度を変化させることによって（リン酸塩が多い＝より酸性のＰＺＣ）、またはヒスチジン緩衝液のような緩衝液を添加することによって（ＰＺＣをさらに塩基性にする）変化させられる。本発明にしたがって使用されるリン酸アルミニウムは、一般的には、４．０から７．０、より好ましくは、５．０から６．５、例えば、約５．７のＰＺＣを有するであろう。

本発明の組成物を調製するために使用されるアルミニウム塩の懸濁液には、緩衝液（例えば、リン酸塩またはヒスチジンまたはＴｒｉｓ緩衝液）が含まれる場合があるが、これは必ずしも必要ではない。懸濁液は滅菌であり、かつ非発熱性であることが好ましい。懸濁液には、遊離の水性のリン酸塩イオンが含まれ得、例えば、１．０ｍＭから２０ｍＭの間、好ましくは５ｍＭから１５ｍＭ、より好ましくは約１０ｍＭの濃度で存在し得る。懸濁液にはまた、塩化ナトリウムも含まれる場合がある。

本発明では、水酸化アルミニウムとリン酸アルミニウムの両方の混合物が使用され得る。この場合は、水酸化物よりもリン酸アルミニウムが多く存在し得、例えば、少なくとも２：１、例えば、＞５：１、＞６：１、＞７：１、＞８：１、＞９：１などの重量比で存在し得る。

患者に投与される組成物中のＡｌ^＋＋＋の濃度は、１０ｍｇ／ｍｌ未満、例えば、≦５ｍｇ／ｍｌ、≦４ｍｇ／ｍｌ、≦３ｍｇ／ｍｌ、≦２ｍｇ／ｍｌ、≦１ｍｇ／ｍｌなどが好ましい。好ましい範囲は、０．３ｍｇ／ｍｌから１ｍｇ／ｍｌである。

本発明のキット
組成物に患者に送達される２つの成分（例えば、Ｅｎｖ／Ｔａｔ混合物とアジュバント）が含まれる場合は、これらは、製造の際に混合される場合があり、また、これらは、送達時にその場で混合される場合もある。したがって、本発明により、混合のために用意された様々な成分が含まれているキットが提供される。このキットにより、アジュバントと複合体を、使用するときまで別々に保つことができる。この構成は、水中油型エマルジョンアジュバントが使用される場合には特に有用である。

複数の成分はキットの中では互いに物理的に分離されており、この分離は様々な方法で行われ得る。例えば、２つの成分は２つの別々の容器（例えば、バイアル）の中に入れられえる。その後、２つのバイアルの内容物が、例えば、１つのバイアルの内容物を取り出して、これを他方のバイアルに添加することによって、あるいは、両方のバイアルの内容物を別々に取り出して、それらを第３の容器の中で混合することによって、混合され得る。

好ましい構成においては、キットの成分のうちの１つは注射器の中に存在し、そして他方の成分はバイアルのような容器の中に存在する。注射器は、混合のために第２の容器の中にその内容物を挿入するために（例えば、針とともに）使用され得、そして混合物は注射器を介して吸引され得る。混合された注射器の内容物は、その後、通常は新しい滅菌針を通じて患者に投与され得る。１つの成分を注射器の中にパッケージすることにより、患者への投与のために別の注射器を使用する必要がなくなる。

別の好ましい構成においては、キットの２つの成分は、一緒に、しかし、同じ注射器（例えば、ＷＯ２００５／０８９８３７、ＷＯ００／０７６４７、ＷＯ９９／１７８２０、ＥＰ−Ａ−０５２０６１８、ＷＯ９８／０１１７４、米国特許第６，６９２，４６８号、同第５，９７１，９５３号、同第４，０６０，０８２号に開示されている注射器のような二重チャンバー型注射器（ｄｕａｌ−ｃｈａｍｂｅｒ ｓｙｒｉｎｇｅ））の中で分けられて保持される。注射器が（例えば、患者への投与の際に）作動させられると、２つのチャンバーの内容物が混合される。この構成では、使用時の別の混合工程は必要がなくなる。

キットの成分は、一般的には水性の形態であろう。いくつかの構成では、１つの成分（通常は、アジュバント成分ではなく抗原成分）は乾燥形態（例えば、凍結乾燥形態）であり、他の成分は水性形態である。２つの成分は、乾燥成分を再度活性化させ、患者への投与のための水性組成物を得るために混合され得る。凍結乾燥された成分は、通常は、注射器ではなくバイアルの中に配置されるであろう。乾燥された成分には、ラクトース、スクロース、またはマンニトールのような安定化剤、ならびにそれらの混合物（例えば、ラクトース／スクロース混合物、スクロース／マンニトール混合物など）が含まれる場合がある。１つの可能な構成では、予め注射器に充填された水性アジュバント成分と、バイアル中の凍結乾燥させられた抗原成分が使用される。

処置方法とワクチンの投与
本発明により、患者において免疫応答を惹起させる方法が提供される。この方法には、本発明の組成物を患者に投与する工程が含まれる。本発明の組成物は、ヒト患者への投与に特に適しているが、抗血清を惹起させるなどの研究目的のために他の哺乳動物に投与することもできる。

本発明によってはまた、医薬品として使用される本発明のキットあるいは組成物も提供される。

本発明によってはまた、患者において免疫応答を惹起させるための医薬品の製造における本発明のＥｎｖ／Ｔａｔ混合物の使用も提供される。

本発明の組成物は様々な方法で投与され得る。最も好ましい免疫化経路は、注射（例えば、筋肉内、皮下、静脈内）によるが、他の利用可能な経路としては、鼻腔内、経口、皮内、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、肺などが挙げられるが、これらに限定されない。

処置は、単回投与スケジュールまたは複数回の投与スケジュールによって行われ得る。複数回の投与は、一次免疫スケジールおよび／または追加免疫スケジュールにおいて使用され得る。複数回の投与スケジュールでは、様々な用量が、同じ経路または異なる経路によって、例えば、非経口的感作（ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｐｒｉｍｅ）と粘膜からの追加（ｍｕｃｏｓａｌ ｂｏｏｓｔ）、粘膜からの感作と非経口的追加などによって投与され得る。２用量以上（通常は、２用量）の投与が一般的である。複数回の投与は、通常は、少なくとも１週間（例えば、約２週間、約３週間、約４週間、約６週間、約８週間など）の間隔を明けて投与されるであろう。

一般的記述
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」には、「〜を含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、さらには「〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」が含まれる。例えば「Ｘを含む」は、Ｘのみからなるか、またはさらに別のものが含まれ得る（例えば、Ｘ＋Ｙ）。

用語「実質的に」は「完全に」を除外しない。例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物にはＹは全く含まれない場合がある。必要な場合には、用語「実質的に」は本発明の定義から除外され得る。

数値ｘに関する用語「約」は、ｘ±１０％を意味する。

他の場所に具体的に示されない限りは、２つ以上の成分を混合する工程を含むプロセスには、任意の特別な混合順序は必要ない。したがって、複数の成分は任意の順序で混合することができる。３つの成分が存在する場合は、２つの成分が一緒に組み合わせられ得、その後、この混合物が第３の成分と組み合わせられ得るなどである。

動物性の（特に、ウシの）材料が細胞の培養に使用される場合は、これらは、伝達性海綿状脳症（ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ ｓｐｏｎｇｉｆｏｒｍ ｅｎｃａｐｈａｌｏｐａｔｈｉｅｓ、ＴＳＥ）が含まれていない、特に、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）が含まれていない供給源から得られるべきである。全般的に、動物由来の材料が全体の中に含まれていない中で細胞を培養することが好ましい。

タンパク質または複合体が特定の標的に（例えば、ＣＤ４に、またはモノクローナル抗体に）「特異的に結合する」場合は、これは、通常は、対照タンパク質に対するよりも（例えば、ＣＤ３に対するよりも、または抗Ｒｅｖ抗体に対するよりも）少なくとも１０倍大きい親和性でその標的に結合するであろう。特異的結合と非特異的結合は、標準的な技術によって、例えば、その相互作用に対する対照タンパク質の作用を調べることによって、用量応答性を調べることによってなどで区別することができる。

用語「ポリペプチド」は、任意の長さのアミノ酸ポリマーをいう。ポリマーは直鎖である場合も、また分岐鎖である場合もあり、これには、修飾されたアミノ酸が含まれる場合があり、そしてこれは、非アミノ酸成分によって断続的である場合もある。この用語にはまた、自然に、または介入（例えば、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分との結合のような任意の他の操作もしくは修飾）によって修飾されたアミノ酸ポリマーも含まれる。この定義にはまた、例えば、１つ以上のアミノ酸のアナログを含む（例えば、非天然のアミノ酸などを含む）ポリペプチド、ならびに、当該分野で公知の他の修飾を含むポリペプチドも含まれる。ポリペプチドは、単鎖として存在することができ、また、会合した鎖として存在することもできる。本発明のポリペプチドは、自然にグリコシル化させることができ、また、自然には起こらないように（ｎｏｎ−ｎａｔｕｒａｌｌｙ）グリコシル化させることもできる（すなわち、ポリペプチドは、対応する自然界に存在しているポリペプチドにおいて見られるグリコシル化パターンとは異なるグリコシル化パターンを有する）。

本発明とともに使用されるＥｎｖポリペプチドとＴａｔポリペプチドは、多くの方法で、例えば、（完全にまたは一部が）化学合成によって、プロテアーゼを使用するより長いポリペプチドの消化によって、ＲＮＡからの翻訳によって、細胞培養物からの精製によって（例えば、組み換え発現によって）、生物自体から（例えば、細菌培養後、または患者から直接）などで調製することができる。＜４０アミノ酸の長さのペプチドの生産に好ましい方法としては、インビトロでの化学合成（Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ（１９９３）Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（ＩＳＢＮ：０３８７５６４３１４）、Ｆｉｅｌｄｓら（１９９７）Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２８９：Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．ＩＳＢＮ：０１２１８２１９００）が挙げられる。ｔＢｏｃまたはＦｍｏｃ（Ｃｈａｎ ＆ Ｗｈｉｔｅ（２０００）Ｆｍｏｃ Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．ＩＳＢＮ：０１９９６３７２４５）化学に基づく方法のような固相ペプチド合成が特に好ましい。酵素合成（Ｋｕｌｌｍａｎｎ（１９８７）Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．ＩＳＢＮ：０８４９３６８４１３）もまた、一部で、または全体で使用され得る。化学合成の代替えとしては、生化学的合成が使用され得、例えば、ポリペプチドが翻訳によって生産され得る。これは、インビトロで行われる場合があり、またインビボで行われる場合もある。生物学的方法は、一般的には、Ｌ−アミノ酸をベースとするポリペプチドの生産に限定されるが、（例えば、アミノアシルｔＲＮＡ分子の）翻訳機構の操作を使用して、Ｄ−アミノ酸（または、ヨードチロシン、またはメチルフェニルアラニン、アジドホモアラニンなどのような他の非天然のアミノ酸）を導入することができる（Ｉｂｂａ（１９９６）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｅｎｇ Ｒｅｖ １３：１９７−２１６）。しかし、Ｄ−アミノ酸が含まれる場合は、化学合成が使用されることが好ましい。本発明のポリペプチドは、Ｃ末端および／またはＮ末端に共有結合による修飾を有する場合がある。

ＥｎｖポリペプチドとＴａｔポリペプチドは様々な形態（例えば、天然の形態、融合体、グリコシル化形態、非グリコシル化形態、脂質化形態、非脂質化形態、リン酸化形態、非リン酸化形態、ミリストイル化形態、非ミリストイル化形態、単量体、多量体、粒子状、変性形態など）をとることができる。Ｅｎｖについては、オリゴマーであるグリコシル化ポリペプチドが好ましい。

ＥｎｖポリペプチドとＴａｔポリペプチドは、精製された形態または実質的に精製された形態（すなわち、他のポリペプチドを実質的に含まない（例えば、自然界に存在しているポリペプチドを含まない））、特に、他のＨＩＶまたは宿主細胞ポリペプチドを実質的に含まない実質的に精製された形態で提供されることが好ましい。一般的には、少なくとも約５０％の純度（重量％）であり、通常は、少なくとも約９０％の純度、すなわち、組成物のうちの約５０％未満、より好ましくは約１０％未満（例えば、５％以下）が他の発現されたポリペプチドに占められる。

全長のＳＦ１６２株のＥｎｖ配列は以下のアミノ酸配列（配列番号３８）を有する：

発現の目的のためには、リーダー（アミノ酸１〜２７；配列番号４７）は、ｔｐａ由来のリーダー配列（配列番号４８、ＭＤＡＭＫＲＧＬＣＣＶＬＬＬＣＧＡＶＦＶＳＰ）で置き換えることができる。

ｇｐ１６０配列はｇｐ１４０形態に改変することができる（配列番号３９）：

これは、切断部位に５個のアミノ酸突然変異を含むようにさらに改変して、オリゴマーｇｐ１４０を生じさせることができる。この配列（配列番号４３）は「ｇｐ１４０ｍｕｔ７」として知られている：

配列番号３９のＶ３ループは、中央の２２マーが欠失させられており、可撓性の配列が挿入されている配列番号２３で置き換えることができる（配列番号４０；６２７マー）：

配列番号４０（「ｇｐ１４０ｄＶ３−２２」）をコードする構築物を２９３Ｔ細胞の中で発現させ、精製することができる。タンパク質は、最初に、ＧＮＡレクチンを使用して精製され、その後、セラミックヒドロキシアパタイトカラム（ＣＨＡＰ）を使用して再度精製される。小規模精製と大規模精製が行われる。

Ｖ２ループが配列番号４２（ＣＳＦＫＶＧＡＧＫＬＩＮＣ）によって置き換えられている配列番号４０の改変型（「ｇｐ１４０ΔＶ２ｄｖ３−２２」）は、同じ方法で調製される。その配列は配列番号４１である：

このタンパク質は、上記と同じ様式で精製される。

等価なＥｎｖ誘導体はまた、株ＴＶ１についても作製される。

（実施例１）
ＨＰＬＣを使用したｇｐ１４０ｄＶ３−２２タンパク質とｇｐ１４０ΔＶ２ｄｖ３−２２タンパク質の両方についての純度、オリゴマー化、およびＣＤ４結合活性の確認の後に、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システムを使用してＣＤ４結合活性とｔａｔ結合活性の両方をアッセイした。固定化されたＣＤ４、固定化されたｔａｔ、または固定化されたｔａｔ−ｃｙｓ（なおもｅｎｖに結合するｔａｔの突然変異体）（Ｅｎｓｏｌｉら（２００５）Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ ７：１３９２−９）を使用した結果を以下にまとめる：

このように、Ｅｎｖの三量体変異体は全て、ＣＤ４とｔａｔポリペプチドの両方に結合した。単量体ｇｐ１２０は予想したとおりＣＤ４に結合するが、ｔａｔに対する結合は観察されなかった。

ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）もまた、（ｉ）ＣＤ４、（ｉｉ）中和抗体ｂ１２（これはｇｐ１２０のＣＤ４結合部位に結合する）（Ｚｗｉｃｋら（２００３）Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７７：５８６３−７６）、および（ｉｉｉ）非中和抗体４．８ｄ（これはｇｐ１２０上の立体構造エピトープに結合する）に対するＳＦ１６２由来タンパク質の結合を試験するために使用することができる。解離定数（Ｍ^−１×１０^−１０）およびＲｍａｘ値（４．８ｄ ＆ ＣＤ４を使用した）は以下のとおりである：

４．８ｄはＣＤ４誘導性エピトープ抗体である。これは、一度ｅｎｖがＣＤ４結合に起因するその立体構造の変化を受けると、低いレベルでｅｎｖだけを認識する。「ｘ ４．８ｄ ｕｐ−ｒｅｇ」図は、４．８ｄ抗体についての、ＣＤ４を伴わないｅｎｖについて観察されたシグナルの関数としての、ＣＤ４と混合されたｅｎｖについて観察されたＢＩＡｃｏｒｅシグナルを示す。

このように、Ｅｎｖに導入される修飾は、そのＣＤ４結合特性を実質的に変化させることはない。さらに、モノクローナル抗体の結合は全ての変異体について適度なレベルで保たれた。

（実施例２）
ＳＦ１６２由来タンパク質（ＣＤ４を伴うもの、またはＣＤ４を伴わないもの）についてのＴａｔの結合もまた、Ｆａｒ−Ｗｅｓｔｅｒｎアッセイによって試験される。結果を図１に示す。したがって、速度論の実験環境（ｋｉｎｅｔｉｃ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ）（すなわち、ＢＩＡｃｏｒｅ）において、および平衡の条件（すなわち、Ｆａｒ Ｗｅｓｔｅｒｎ分析）下のいずれでも、三量体エンベロープとその変異体はｔａｔに結合できる。単量体ｇｐ１２０は、一般的には、Ｖ２ループがｇｐ１２０ΔＶ２の中と同様に欠失させられていない限りは、いずれの実験においてもｔａｔポリタンパク質に結合する証拠は全く示されていない。

全体として、データは、ＥｎｖのΔＶ２形態とｄＶ３−２２形態に対するＴａｔの結合の大きさに有意な差異がないことを示している。しかし、ΔＶ２三量体タンパク質と比較した場合には、ｄＶ３−２２三量体Ｅｎｖについての解離速度のほうがより速い（すなわち、半減期がより短い）。

（実施例３）
別のＶ３ループ置換を設計することができる。配列番号４４の配列番号２５〜２９とのアラインメントは、Ｖ３ループの中央部分は外側の隣接している領域よりも可変性が高いことを示唆している。突然変異体ループである配列番号１５の中では、中央部分が欠失させられており、隣接領域は完全なまま保たれている。配列番号１６および配列番号１７の中では、Ｎ末端またはＣ末端隣接領域が欠失させられている。配列番号１８〜２１の中では、モノクローナル抗体４４７Ｄについての接触部位が除去されている。配列番号２２の中では、ループが可撓性のＧｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ配列で置き換えられている。配列番号２３の中では、この可撓性の配列が、配列番号２１ループの中にさらに挿入されている。配列番号２４の中では、様々なＶ３ループがＳＦ１６２の中に代わりに挿入されている。

欠失させられたペプチド配列（配列番号３０〜３７）を合成し、Ｔａｔに結合するそれらの能力を評価した。

（実施例４）
Ｍｏｎｉｎｉ，Ｐａｕｌら（参考文献）においては、生物学的活性のあるＴａｔは、Ｖ３ループとの高親和性相互作用によってＨＩＶ Ｅｎｖに結合する。これには、Ｅｎｖオリゴマー化またはＶ２ループの欠失の際に誘導されるＶ３ループの露出および／または構造遷移が必要である。Ｖ１−Ｖ２ループの短縮は、初期感染の間に新たに発生するウイルス単離物の重要な特徴である。しかし、これは、中和に対してはるかに感度が高い（参考文献）。これらのデータは、これらの単離物が体液性免疫応答を高めることを遮断することにおけるＴａｔの重要な役割を指摘している。さらに、ＥｎｖのＶ３ループのＴａｔに対する結合は、Ｖ１−Ｖ２欠失または短縮によって増強される可能性もあるプロセスである、ＥｎｖのＣＣＲ５共受容体との相互作用と似ている。これは、Ｔａｔ−Ｅｎｖ複合体が、Ｔ細胞へのウイルスの侵入と感染（ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ）に、特に、粘膜組織中での感染の初期標的と見られる、ＣＣＲ５を低く発現しているＣＤ４＋Ｔ細胞に影響を与え得ることを示している（Ｈａａｓｅのレビュー（Ｈａａｓｅ ｒｅｖｉｅｗ）、Ｒｏｅｄｅｒｅｒの論文を参照のこと）。

本発明が単に例示のために記載されており、改変が、本発明の範囲および精神に留まりつつも行われ得ることが理解されるであろう。本出願の中で開示される参考文献については、それらの内容はそれらの全体が引用により本明細書中に組み入れられる。

Claims (20)

1. （ｉ）ＨＩＶ Ｔａｔポリペプチドと（ｉｉ）ＨＩＶ Ｅｎｖポリペプチドの混合物であって、ここでは、該Ｅｎｖポリペプチドは、そのＶ３ループの中に１つ以上の突然変異を有している、混合物。
2. ポリペプチド（ｉ）と（ｉｉ）が複合体を形成する、請求項１に記載の混合物。
3. ポリペプチド（ｉ）と（ｉｉ）が互いに共有結合される、請求項２に記載の混合物。
4. （ｉ）ＨＩＶ Ｔａｔポリペプチドを（ｉｉ）ＨＩＶ Ｅｎｖポリペプチドと混合する工程を含む、請求項１に記載の混合物を調製するためのプロセスであって、該Ｅｎｖポリペプチドは、そのＶ３ループの中に１つ以上の突然変異を有している、プロセス。
5. ＨＩＶ ＥｎｖポリペプチドをＨＩＶ Ｔａｔポリペプチドと組み合わせる工程を含み、該Ｅｎｖポリペプチドは、そのＶ３ループの中に１つ以上の突然変異を有している、プロセス。
6. 前記ＥｎｖポリペプチドとＴａｔポリペプチドが複合体を形成したかどうかを決定するさらなる工程を含む、請求項５に記載のプロセス。
7. 突然変異体Ｖ３ループ配列を有しているＨＩＶ Ｅｎｖポリペプチドであって、該突然変異体の配列が、配列番号１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、および２４からなる群より選択される、ＨＩＶ Ｅｎｖポリペプチド。
8. 前記Ｅｎｖポリペプチドに、Ｖ３ループの外側の１つ以上の突然変異（単数または複数）が含まれている、請求項１〜７のいずれかに記載の混合物、プロセス、またはポリペプチド。
9. 前記Ｅｎｖポリペプチドが、野生型膜貫通ドメインと細胞質尾部を欠いている、請求項１〜８のいずれかに記載の混合物、プロセス、またはポリペプチド。
10. 前記Ｅｎｖポリペプチドに、Ｖ２ループの中の１つ以上の欠失（単数または複数）が含まれている、請求項１〜９のいずれかに記載の混合物、プロセス、またはポリペプチド。
11. 前記Ｅｎｖポリペプチドが、配列番号１５〜２４からなる群より選択されるアミノ酸配列を持つＶ３ループを有している、請求項１〜１０のいずれかに記載の混合物、プロセス、またはポリペプチド。
12. 前記Ｅｎｖポリペプチドが、アミノ酸配列である配列番号２９を持つＶ３ループを有している、請求項１〜１１のいずれかに記載の混合物、プロセス、またはポリペプチド。
13. （ｉ）ＨＩＶ Ｔａｔポリペプチドと（ｉｉ）ＨＩＶ ＥｎｖポリペプチドのＶ３ループの断片を含むポリペプチドとの混合物であって、該（ｉｉ）のポリペプチドは１００アミノ酸以下であり、ＨＩＶ ＥｎｖポリペプチドのＶ３ループに由来する少なくとも５個の連続するアミノ酸を含む、混合物。
14. 前記（ｉｉ）のポリペプチドが≦３０アミノ酸の長さである、請求項１３に記載の混合物。
15. 前記（ｉｉ）のポリペプチドが環状である、請求項１３または１４に記載の混合物。
16. 前記（ｉｉ）の断片が配列番号３０〜３７からなる群より選択されるアミノ酸配列を有している、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の混合物。
17. 前記Ｔａｔポリペプチドがアミノ酸配列である配列番号１２を有している、請求項１〜１６のいずれかに記載の混合物、プロセス、またはポリペプチド。
18. 請求項１〜３または８〜１７のいずれか１項に記載の混合物を含む薬学的組成物。
19. ワクチンアジュバントが含まれている、請求項１８に記載の薬学的組成物。
20. 請求項１８または請求項１９に記載の組成物を患者に投与する工程が含まれる、患者において免疫応答を惹起させる方法。