JP2010535842A - 速効型インスリンアナログ - Google Patents
速効型インスリンアナログ Download PDFInfo
- Publication number
- JP2010535842A JP2010535842A JP2010520563A JP2010520563A JP2010535842A JP 2010535842 A JP2010535842 A JP 2010535842A JP 2010520563 A JP2010520563 A JP 2010520563A JP 2010520563 A JP2010520563 A JP 2010520563A JP 2010535842 A JP2010535842 A JP 2010535842A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- insulin
- amino acid
- human insulin
- human
- chain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical class N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 286
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 title claims abstract description 123
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 claims abstract description 198
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 186
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 100
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims abstract description 87
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 87
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims abstract description 77
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 47
- 108010092217 Long-Acting Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 102000016261 Long-Acting Insulin Human genes 0.000 claims abstract description 24
- 229940100066 Long-acting insulin Drugs 0.000 claims abstract description 24
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims abstract description 13
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 9
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 33
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 21
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 12
- 108010057186 Insulin Glargine Proteins 0.000 claims description 9
- COCFEDIXXNGUNL-RFKWWTKHSA-N Insulin glargine Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(=O)NCC(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 COCFEDIXXNGUNL-RFKWWTKHSA-N 0.000 claims description 9
- 229960002869 insulin glargine Drugs 0.000 claims description 8
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 5
- 108010089308 Insulin Detemir Proteins 0.000 claims description 4
- UGOZVNFCFYTPAZ-IOXYNQHNSA-N levemir Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=2N=CNC=2)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=2N=CNC=2)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=2C=CC=CC=2)C(C)C)CSSC[C@@H]2NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(C)C)CSSC[C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H](CSSC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 UGOZVNFCFYTPAZ-IOXYNQHNSA-N 0.000 claims description 4
- 229960003948 insulin detemir Drugs 0.000 claims description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 abstract description 5
- 230000037430 deletion Effects 0.000 abstract description 5
- 230000002794 monomerizing effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000004572 zinc-binding Effects 0.000 abstract description 2
- 102220092852 rs754853086 Human genes 0.000 description 79
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 49
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 23
- VEVRNHHLCPGNDU-MUGJNUQGSA-O desmosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCC[N+]1=CC(CC[C@H](N)C(O)=O)=C(CCC[C@H](N)C(O)=O)C(CC[C@H](N)C(O)=O)=C1 VEVRNHHLCPGNDU-MUGJNUQGSA-O 0.000 description 16
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 15
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 230000009471 action Effects 0.000 description 13
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 12
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 11
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 8
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 8
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 238000002821 scintillation proximity assay Methods 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 101001034652 Homo sapiens Insulin-like growth factor 1 receptor Proteins 0.000 description 5
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 5
- QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 2-methylphenol;3-methylphenol;4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1.CC1=CC=CC(O)=C1.CC1=CC=CC=C1O QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 description 4
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 4
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000004665 fatty acids Chemical group 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 4
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 4
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 4
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 4
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 238000005570 heteronuclear single quantum coherence Methods 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 3
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 101000852815 Homo sapiens Insulin receptor Proteins 0.000 description 2
- 108010073961 Insulin Aspart Proteins 0.000 description 2
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 2
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 2
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 2
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 description 2
- 229940123452 Rapid-acting insulin Drugs 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 241000235343 Saccharomycetales Species 0.000 description 2
- 108010026951 Short-Acting Insulin Proteins 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 2
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KEMQGTRYUADPNZ-UHFFFAOYSA-N heptadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O KEMQGTRYUADPNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000047882 human INSR Human genes 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VOMXSOIBEJBQNF-UTTRGDHVSA-N novorapid Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1.C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 VOMXSOIBEJBQNF-UTTRGDHVSA-N 0.000 description 2
- -1 parabens Chemical compound 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 2
- TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N tetradecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(O)=O TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SZHOJFHSIKHZHA-UHFFFAOYSA-N tridecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC(O)=O SZHOJFHSIKHZHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 210000002237 B-cell of pancreatic islet Anatomy 0.000 description 1
- 108010023063 Bacto-peptone Proteins 0.000 description 1
- 101001011741 Bos taurus Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 description 1
- 239000005632 Capric acid (CAS 334-48-5) Substances 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 1
- 101150069554 HIS4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101500025353 Homo sapiens Insulin A chain Proteins 0.000 description 1
- 101500025354 Homo sapiens Insulin B chain Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 1
- SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N Lithocholsaeure Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)=O FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 102000015731 Peptide Hormones Human genes 0.000 description 1
- 108010038988 Peptide Hormones Proteins 0.000 description 1
- 108010005991 Pork Regular Insulin Proteins 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000235347 Schizosaccharomyces pombe Species 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNHRVXYZKWSJTF-HJGDQZAQSA-N Thr-Asp-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O GNHRVXYZKWSJTF-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 229940127095 analogue insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007998 bicine buffer Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N bovine insulin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- MIOPJNTWMNEORI-UHFFFAOYSA-N camphorsulfonic acid Chemical compound C1CC2(CS(O)(=O)=O)C(=O)CC1C2(C)C MIOPJNTWMNEORI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 201000010063 epididymitis Diseases 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000011087 fumaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 1
- 238000000990 heteronuclear single quantum coherence spectrum Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 229940030980 inova Drugs 0.000 description 1
- 229960004717 insulin aspart Drugs 0.000 description 1
- 230000002608 insulinlike Effects 0.000 description 1
- YAQXGBBDJYBXKL-UHFFFAOYSA-N iron(2+);1,10-phenanthroline;dicyanide Chemical compound [Fe+2].N#[C-].N#[C-].C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1.C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1 YAQXGBBDJYBXKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229940060975 lantus Drugs 0.000 description 1
- 229940102988 levemir Drugs 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N lithocholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000002204 nitrogen-15 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229940057838 polyethylene glycol 4000 Drugs 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 108010066381 preproinsulin Proteins 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007261 sc medium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- ZTUXEFFFLOVXQE-UHFFFAOYSA-N tetradecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(O)=O.CCCCCCCCCCCCCC(O)=O ZTUXEFFFLOVXQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本発明は、持効型インスリンアナログとの可溶性の混合物(予め混合してあるもの又は自身で混合するもの)を形成しうる速効型インスリンアナログに関する。速効性はヒトインスリンのＢ鎖のＣ末端における置換／欠失を単量体化することにより達成され、持効型インスリンアナログとの混合性はヒトインスリンの位置Ｂ１０におけるＺｎ結合ＨｉｓのＩｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ又はＰｈｅとの置換により達成される。一実施態様では、本発明は、ヒトＢ鎖の位置Ｂ２２−Ｂ３０における少なくとも一の天然アミノ酸残基が、インスリンの単量体形態の形成を促す作用を有する他のアミノ酸残基と置換されている、速効型インスリンアナログであって、Ｂ鎖の位置１０におけるＨｉｓアミノ酸残基がＩｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ又はＰｈｅと置換しており、さらに場合によって位置Ｂ２２−Ｂ３０の一又は複数のアミノ酸残基が欠失している速効型インスリンアナログに関する。
Description
本発明は、速効型インスリンアナログ及び速効型インスリンアナログを含有してなる製薬的組成物及び持効型インスリンアナログとの混合物で速効型インスリンアナログを含有してなる製薬的組成物に関する。
インスリンは膵臓のβ細胞によって分泌されるポリペプチドホルモンであって、２つのポリペプチド鎖、Ａ及びＢから成り、このＡ鎖とＢ鎖は２つの鎖間ジスルフィド架橋によって連結される。さらに、Ａ鎖は１つの鎖内ジスルフィド架橋を特徴とする。
ホルモンは、立体配置：プレペプチドＢ−Ａｒｇ Ａｒｇ−Ｃ−Ｌｙｓ Ａｒｇ−Ａ(Ｃは３１アミノ酸の連結ペプチドである)で、２４アミノ酸のプレペプチドの後に８６アミノ酸を含有するプロインスリンからなるプロインスリンの単鎖前駆物質(プレプロインスリン)として合成される。Ａｒｇ−Ａｒｇ及びＬｙｓ−Ａｒｇは、２鎖のインスリン分子を形成するためのＡ鎖及びＢ鎖の連結ペプチドの切断のための切断部位である。インスリンは正常な代謝調節を維持するために必須である。
ホルモンは、まず二量体に希釈し、次に単量体に希釈することによって分離する一定の六量体として、分泌される。活性なホルモンはインスリン単量体である。インスリン六量体及び／又はインスリン二量体の不安定化によって、欧州特許第２１４８２６号に開示される、速効型インスリン様Ｂ２８Ａｓｐヒトインスリンが生じる。
ホルモンは、立体配置：プレペプチドＢ−Ａｒｇ Ａｒｇ−Ｃ−Ｌｙｓ Ａｒｇ−Ａ(Ｃは３１アミノ酸の連結ペプチドである)で、２４アミノ酸のプレペプチドの後に８６アミノ酸を含有するプロインスリンからなるプロインスリンの単鎖前駆物質(プレプロインスリン)として合成される。Ａｒｇ−Ａｒｇ及びＬｙｓ−Ａｒｇは、２鎖のインスリン分子を形成するためのＡ鎖及びＢ鎖の連結ペプチドの切断のための切断部位である。インスリンは正常な代謝調節を維持するために必須である。
ホルモンは、まず二量体に希釈し、次に単量体に希釈することによって分離する一定の六量体として、分泌される。活性なホルモンはインスリン単量体である。インスリン六量体及び／又はインスリン二量体の不安定化によって、欧州特許第２１４８２６号に開示される、速効型インスリン様Ｂ２８Ａｓｐヒトインスリンが生じる。
現在、１型糖尿病及び２型糖尿病両方の糖尿病の治療は、いわゆる強化インスリン療法の程度を上げることに関する。この投薬計画によると、患者は、基礎的インスリン需要を賄うために持効型インスリンを１日に１又は２回注射し、食事に関連したインスリン需要を賄うために速効型インスリンの急速注射により補うことを含む毎日複数回のインスリン注射により治療される。
糖尿病患者は、速効型インスリンの複数回注射を伴う遅延型インスリンを含む毎日複数回の注射により治療されるので、速効型及び持効型のインスリンを１回の注射と組み合わせることは複数の注射を省くことになるであろう。国際公開２００３／０９４９５１は、速効型インスリンアナログインスリンアスパルト(Ｂ２８Ａｓｐヒトインスリン)およびインスリンデテミル(ＬｙｓＢ２９(Ｎε-テトラデカノイル) ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン)の混合物を開示する。しかしながら、速効型インスリンアナログと持効型インスリンアナログとの混合物は混合能が限られており、速効型インスリンの速効性が低下し、持効型インスリンの持効性が低下するかもしれない。
本発明の目的は、可溶性の持効型インスリンアナログとの混合能に関して公知の速効型インスリンよりも優れた特性を有する改良速効型インスリンを提供することである。
糖尿病患者は、速効型インスリンの複数回注射を伴う遅延型インスリンを含む毎日複数回の注射により治療されるので、速効型及び持効型のインスリンを１回の注射と組み合わせることは複数の注射を省くことになるであろう。国際公開２００３／０９４９５１は、速効型インスリンアナログインスリンアスパルト(Ｂ２８Ａｓｐヒトインスリン)およびインスリンデテミル(ＬｙｓＢ２９(Ｎε-テトラデカノイル) ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン)の混合物を開示する。しかしながら、速効型インスリンアナログと持効型インスリンアナログとの混合物は混合能が限られており、速効型インスリンの速効性が低下し、持効型インスリンの持効性が低下するかもしれない。
本発明の目的は、可溶性の持効型インスリンアナログとの混合能に関して公知の速効型インスリンよりも優れた特性を有する改良速効型インスリンを提供することである。
第一の態様では、本発明は、持効型インスリンアナログとの可溶性の混合物(予め混合してあるもの又は自身で混合するもの)を形成しうる速効型インスリンアナログに関する。速効性はヒトインスリンのＢ鎖のＣ末端における置換／欠失を単量体化することにより達成され、持効型インスリンアナログとの混合性はヒトインスリンの位置Ｂ１０におけるＺｎ結合ＨｉｓのＩｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｐｈｅ又はＳｅｒとの置換により達成される。
一実施態様では、本発明は、ヒトＢ鎖の位置Ｂ２２−Ｂ３０における少なくとも一の天然アミノ酸残基が、インスリンの単量体形態の形成を促す作用を有する他のアミノ酸残基と置換されている、速効型インスリンアナログであって、Ｂ鎖の位置１０におけるＨｉｓアミノ酸残基がＩｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｐｈｅ又はＳｅｒと置換しており、さらに場合によって位置Ｂ２２−Ｂ３０の一又は複数のアミノ酸残基が欠失している速効型インスリンアナログに関する。
一実施態様では、本発明は、ヒトＢ鎖の位置Ｂ２２−Ｂ３０における少なくとも一の天然アミノ酸残基が、インスリンの単量体形態の形成を促す作用を有する他のアミノ酸残基と置換されている、速効型インスリンアナログであって、Ｂ鎖の位置１０におけるＨｉｓアミノ酸残基がＩｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｐｈｅ又はＳｅｒと置換しており、さらに場合によって位置Ｂ２２−Ｂ３０の一又は複数のアミノ酸残基が欠失している速効型インスリンアナログに関する。
更なる実施態様では、本発明は、ヒトＢ鎖の位置Ｂ２２−Ｂ３０における少なくとも一のアミノ酸残基が、インスリンの単量体形態の形成を促す他のアミノ酸残基と置換されている、インスリンアナログであって、さらにＢ鎖の位置１０における天然のＨｉｓアミノ酸残基がＩｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ又はＰｈｅと置換しており、場合によってヒトＢ鎖の位置Ｂ２２−Ｂ３０の一又は複数のアミノ酸残基が欠失しているインスリンアナログに関する。
一実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＩｌｅに置換される。
一実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＶａｌに置換される。
一実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＡｌａに置換される。
一実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＰｈｅに置換される。
一実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＳｅｒに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＩｌｅ又はＶａｌのいずれかに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＩｌｅ又はＡｌａのいずれかに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＩｌｅ又はＰｈｅのいずれかに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＶａｌ又はＰｈｅのいずれかに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＶａｌ又はＡｌａのいずれかに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＡｌａ又はＰｈｅのいずれかに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＩｌｅ又はＳｅｒのいずれかに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＶａｌ又はＳｅｒのいずれかに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＡｌａ又はＳｅｒのいずれかに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＰｈｅ又はＳｅｒのいずれかに置換される。
一実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＩｌｅに置換される。
一実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＶａｌに置換される。
一実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＡｌａに置換される。
一実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＰｈｅに置換される。
一実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＳｅｒに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＩｌｅ又はＶａｌのいずれかに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＩｌｅ又はＡｌａのいずれかに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＩｌｅ又はＰｈｅのいずれかに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＶａｌ又はＰｈｅのいずれかに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＶａｌ又はＡｌａのいずれかに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＡｌａ又はＰｈｅのいずれかに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＩｌｅ又はＳｅｒのいずれかに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＶａｌ又はＳｅｒのいずれかに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＡｌａ又はＳｅｒのいずれかに置換される。
他の実施態様では、位置Ｂ１０のＨｉｓはＰｈｅ又はＳｅｒのいずれかに置換される。
一実施態様では、位置Ｂ２２−Ｂ３０又はＢ２５−Ｂ３０における３以下のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基と置換されている。置換は同じでも異なっていてもよい。
更なる実施態様では、位置Ｂ２２−Ｂ３０における１−２のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基と置換されており、更なる実施態様では、位置Ｂ２２−Ｂ３０又はＢ２５−Ｂ３０における唯一つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基と置換されている。
一実施態様では、位置Ｂ２２のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２３のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２４のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２５のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２６のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２７のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２８のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２９のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ３０のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２２−Ｂ３０における１−２のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基と置換されており、更なる実施態様では、位置Ｂ２２−Ｂ３０又はＢ２５−Ｂ３０における唯一つのアミノ酸残基が他のアミノ酸残基と置換されている。
一実施態様では、位置Ｂ２２のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２３のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２４のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２５のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２６のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２７のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２８のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２９のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ３０のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２２および位置Ｂ２８のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２２および位置Ｂ２７のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２５および位置Ｂ２７のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２５および位置Ｂ２８のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２６および位置Ｂ２７のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２６および位置Ｂ２８のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２２および位置Ｂ２７のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２５および位置Ｂ２７のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２５および位置Ｂ２８のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２６および位置Ｂ２７のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
更なる実施態様では、位置Ｂ２６および位置Ｂ２８のアミノ酸は他のアミノ酸残基と置換される。
位置Ｂ２２−Ｂ３０又はＢ２５−Ｂ３０における一又は複数のアミノ酸残基を置換することに加えて、これら一又は複数のアミノ酸残基は欠失されていてもよい。したがって、Ｂ２２−Ｂ３０又はＢ２５−Ｂ３０のＢ鎖の領域における変更は、一又は複数の置換と一又は複数の欠失の組合せであってもよい。
一実施態様では、１のアミノ酸残基は欠失される。他の実施態様では、２のアミノ酸残基は欠失される。
本発明の一実施態様では、位置Ｂ２２−Ｂ３０又はＢ２５−Ｂ３０における１のアミノ酸残基は欠失されており、２のアミノ酸残基は同じでも異なっていてもよい他のアミノ酸残基と置換されている。
本発明の他の実施態様では、位置Ｂ２２−Ｂ３０又はＢ２５−Ｂ３０における１のアミノ酸残基は欠失されており、１のアミノ酸残基は他のアミノ酸残基と置換されている。
本発明の更なる実施態様では、位置Ｂ２２−Ｂ３０又はＢ２５−Ｂ３０における２のアミノ酸残基は欠失されており、１のアミノ酸残基は他のアミノ酸残基と置換されている。
本発明の更なる実施態様では、位置Ｂ２２−Ｂ３０又はＢ２５−Ｂ３０における２のアミノ酸残基は欠失されており、２のアミノ酸残基は他のアミノ酸残基と置換されている。
一実施態様では、１のアミノ酸残基は欠失される。他の実施態様では、２のアミノ酸残基は欠失される。
本発明の一実施態様では、位置Ｂ２２−Ｂ３０又はＢ２５−Ｂ３０における１のアミノ酸残基は欠失されており、２のアミノ酸残基は同じでも異なっていてもよい他のアミノ酸残基と置換されている。
本発明の他の実施態様では、位置Ｂ２２−Ｂ３０又はＢ２５−Ｂ３０における１のアミノ酸残基は欠失されており、１のアミノ酸残基は他のアミノ酸残基と置換されている。
本発明の更なる実施態様では、位置Ｂ２２−Ｂ３０又はＢ２５−Ｂ３０における２のアミノ酸残基は欠失されており、１のアミノ酸残基は他のアミノ酸残基と置換されている。
本発明の更なる実施態様では、位置Ｂ２２−Ｂ３０又はＢ２５−Ｂ３０における２のアミノ酸残基は欠失されており、２のアミノ酸残基は他のアミノ酸残基と置換されている。
一実施態様では、位置Ｂ３０のアミノ酸は欠失される。
他の実施態様では、位置Ｂ２９のアミノ酸残基は欠失される。
他の実施態様では、位置Ｂ２８のアミノ酸残基は欠失される。
他の実施態様では、位置Ｂ２７のアミノ酸残基は欠失される。
他の実施態様では、位置Ｂ２６のアミノ酸残基は欠失される。
他の実施態様では、位置Ｂ２５のアミノ酸残基は欠失される。
他の実施態様では、位置Ｂ２６およびＢ３０のアミノ酸残基は欠失されている。
他の実施態様では、位置Ｂ２５およびＢ３０のアミノ酸残基は欠失されている。
他の実施態様では、位置Ｂ２７およびＢ３０のアミノ酸残基は欠失されている。
他の実施態様では、位置Ｂ２９のアミノ酸残基は欠失される。
他の実施態様では、位置Ｂ２８のアミノ酸残基は欠失される。
他の実施態様では、位置Ｂ２７のアミノ酸残基は欠失される。
他の実施態様では、位置Ｂ２６のアミノ酸残基は欠失される。
他の実施態様では、位置Ｂ２５のアミノ酸残基は欠失される。
他の実施態様では、位置Ｂ２６およびＢ３０のアミノ酸残基は欠失されている。
他の実施態様では、位置Ｂ２５およびＢ３０のアミノ酸残基は欠失されている。
他の実施態様では、位置Ｂ２７およびＢ３０のアミノ酸残基は欠失されている。
一実施態様では、位置Ｂ２２−Ｂ３０又はＢ２５−Ｂ３０のアミノ酸置換は、Ｇｌｕおよび／またはＡｓｐから選択される。置換は同じでも異なっていてもよい。
更なる実施態様では、位置Ｂ２２のアミノ酸はＧｌｕである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２３のアミノ酸はＧｌｕである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２４のアミノ酸はＧｌｕである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２５のアミノ酸はＧｌｕである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２６のアミノ酸はＧｌｕである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２７のアミノ酸はＧｌｕである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２８のアミノ酸はＧｌｕである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２９のアミノ酸はＧｌｕである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２２のアミノ酸はＡｓｐである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２３のアミノ酸はＡｓｐである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２４のアミノ酸はＡｓｐである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２５のアミノ酸はＡｓｐである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２６のアミノ酸はＡｓｐである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２７のアミノ酸はＡｓｐである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２８のアミノ酸はＡｓｐである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２９のアミノ酸はＡｓｐである。
位置Ｂ２２−Ｂ３０のアミノ酸残基の置換のための他の適切なアミノ酸残基は、ＨｉｓおよびＰｒｏである。また、Ｂ３０はＬｙｓでもよい。
更なる実施態様では、位置Ｂ２２のアミノ酸はＧｌｕである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２３のアミノ酸はＧｌｕである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２４のアミノ酸はＧｌｕである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２５のアミノ酸はＧｌｕである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２６のアミノ酸はＧｌｕである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２７のアミノ酸はＧｌｕである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２８のアミノ酸はＧｌｕである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２９のアミノ酸はＧｌｕである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２２のアミノ酸はＡｓｐである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２３のアミノ酸はＡｓｐである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２４のアミノ酸はＡｓｐである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２５のアミノ酸はＡｓｐである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２６のアミノ酸はＡｓｐである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２７のアミノ酸はＡｓｐである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２８のアミノ酸はＡｓｐである。
更なる実施態様では、位置Ｂ２９のアミノ酸はＡｓｐである。
位置Ｂ２２−Ｂ３０のアミノ酸残基の置換のための他の適切なアミノ酸残基は、ＨｉｓおよびＰｒｏである。また、Ｂ３０はＬｙｓでもよい。
一実施態様では、位置Ｂ２６および位置３０のアミノ酸は欠失されており、位置Ｂ２８のアミノ酸残基は他のアミノ酸残基に置換されている。
一実施態様では、位置Ｂ２６および位置３０のアミノ酸は欠失されており、位置Ｂ２７のアミノ酸残基は他のアミノ酸残基に置換されている。
他の実施態様では、位置Ｂ２５および位置３０のアミノ酸は欠失されており、位置Ｂ２８のアミノ酸残基は他のアミノ酸残基に置換されている。
他の実施態様では、位置Ｂ２５および位置３０のアミノ酸は欠失されており、位置Ｂ２７のアミノ酸残基は他のアミノ酸残基に置換されている。
他の態様では、本発明は、糖尿病の治療のための本発明に係るインスリンアナログの使用に関連がある。
更なる態様では、本発明は、本発明の速効型インスリンアナログと、場合によって安定化、保存又は等張性に適する一又は複数の薬剤、例えば亜鉛イオン、フェノール、クレゾール、パラベン、塩化ナトリウム、グリセロール又はマンニトールを含有してなる製薬的組成物に関する。製剤の亜鉛含量は、インスリン六量体当たり０〜およそ４亜鉛原子であってよい。
一実施態様では、位置Ｂ２６および位置３０のアミノ酸は欠失されており、位置Ｂ２７のアミノ酸残基は他のアミノ酸残基に置換されている。
他の実施態様では、位置Ｂ２５および位置３０のアミノ酸は欠失されており、位置Ｂ２８のアミノ酸残基は他のアミノ酸残基に置換されている。
他の実施態様では、位置Ｂ２５および位置３０のアミノ酸は欠失されており、位置Ｂ２７のアミノ酸残基は他のアミノ酸残基に置換されている。
他の態様では、本発明は、糖尿病の治療のための本発明に係るインスリンアナログの使用に関連がある。
更なる態様では、本発明は、本発明の速効型インスリンアナログと、場合によって安定化、保存又は等張性に適する一又は複数の薬剤、例えば亜鉛イオン、フェノール、クレゾール、パラベン、塩化ナトリウム、グリセロール又はマンニトールを含有してなる製薬的組成物に関する。製剤の亜鉛含量は、インスリン六量体当たり０〜およそ４亜鉛原子であってよい。
ゆえに、一実施態様では、本発明は、ヒトＢ鎖の位置Ｂ２２−Ｂ３０における少なくとも一の天然アミノ酸残基がインスリンの単量体形態の形成を促す作用を有する他のアミノ酸残基と置換されており、Ｂ鎖の位置１０のＨｉｓアミノ酸残基がＩｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｐｈｅ又はＳｅｒに置換されており、さらに場合によって、位置Ｂ２２−Ｂ３０における一又は複数のアミノ酸残基が欠失されている速効型インスリンアナログを、安定化、保存又は等張性に好適な一又は複数の薬剤などの好適なアジュバント及び添加剤、例えば亜鉛イオン、フェノール、クレゾール、パラベン、塩化ナトリウム、グリセロール又はマンニトールと共に含有してなる薬学的製剤に関する。
また、本発明は、速効型インスリンアナログと持効型インスリンアナログないしは誘導体との混合物である可溶性組成物であって、注入部位からのこの速効型インスリンアナログと持効型インスリンアナログないしは誘導体のインビボ消失率が別々の組成物で注入された場合と同じか又は実質的に同じである可溶性組成物を提供する。
ゆえに、他の態様では、本発明は、本発明に係る速効型ヒトインスリンアナログを、持効型ヒトインスリンアナログないしは誘導体との混合物で、安定化、保存又は等張性に適する一又は複数の薬剤などの好適なアジュバント及び添加剤、例えば亜鉛イオン、フェノール、クレゾール、パラベン、塩化ナトリウム、グリセロール又はマンニトールと共に含有してなる可溶性の薬学的製剤に関する。
亜鉛含量が、インスリン六量体につき０からおよそ４の亜鉛原子であってもよい。薬学的調製物のｐＨは、およそ３からおよそ８．５、およそ３からおよそ５、またはおよそ６．５からおよそ７．５であってもよい。
また、本発明は、速効型インスリンアナログと持効型インスリンアナログないしは誘導体との混合物である可溶性組成物であって、注入部位からのこの速効型インスリンアナログと持効型インスリンアナログないしは誘導体のインビボ消失率が別々の組成物で注入された場合と同じか又は実質的に同じである可溶性組成物を提供する。
ゆえに、他の態様では、本発明は、本発明に係る速効型ヒトインスリンアナログを、持効型ヒトインスリンアナログないしは誘導体との混合物で、安定化、保存又は等張性に適する一又は複数の薬剤などの好適なアジュバント及び添加剤、例えば亜鉛イオン、フェノール、クレゾール、パラベン、塩化ナトリウム、グリセロール又はマンニトールと共に含有してなる可溶性の薬学的製剤に関する。
亜鉛含量が、インスリン六量体につき０からおよそ４の亜鉛原子であってもよい。薬学的調製物のｐＨは、およそ３からおよそ８．５、およそ３からおよそ５、またはおよそ６．５からおよそ７．５であってもよい。
一実施態様では、本発明は、ヒトＢ鎖の位置Ｂ２２−Ｂ３０における少なくとも一の天然アミノ酸残基がインスリンの単量体形態の形成を促す作用を有する他のアミノ酸残基と置換されており、Ｂ鎖の位置１０のＨｉｓアミノ酸残基がＩｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｐｈｅ又はＳｅｒに置換されており、さらに場合によって、位置Ｂ２２−Ｂ３０における一又は複数のアミノ酸残基が欠失されている速効型インスリンアナログを、持効型ヒトインスリンアナログないしは誘導体との混合物で、安定化、保存又は等張性に好適な一又は複数の薬剤などの好適なアジュバント及び添加剤、例えば亜鉛イオン、フェノール、クレゾール、パラベン、塩化ナトリウム、グリセロール又はマンニトールと共に含有してなる薬学的製剤に関する。
本発明の一実施態様では、持効型ヒトインスリン誘導体は、ヒトインスリンのアシル化された誘導体である。アシル化されたインスリン誘導体は、親油性基が位置Ｂ２９のリジン残基に付着されていてもよい。商品は、ＬｙｓＢ２９(Ｎε-テトラデカノイル)ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン(インスリンデテミル)を活性成分として含有してなるＬｅｖｅｍｉｒ(登録商標)である。
持効型インスリンの他の例は、米国特許第５６５６７２２号にて開示されるような、Ｂ鎖のＣ末端に付着されるＡｒｇなどの陽性荷電アミノ酸を含むものである。商品は、Ａ２１Ｇｌｙ、Ｂ３１Ａｒｇ、Ｂ３２Ａｒｇヒトインスリン(インスリングラルギン)を含有してなるＬａｎｔｕｓ(登録商標)である。
一実施態様では、本発明は、本発明に係る速効型インスリンアナログを、ＬｙｓＢ２９(Ｎε-テトラデカノイル)ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン(インスリンデテミル)との混合物で含有してなる製薬的組成物に関する。
他の実施態様では、本発明は、本発明に係る速効型インスリンアナログを、ＬｙｓＢ２９(Ｎε-(Ｎ-リトコリル-γ-グルタミル)ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリンとの混合物で含有してなる製薬的組成物に関する。
更なる実施態様では、本発明は、本発明に係る速効型インスリンアナログを、ＮεＢ２９-(Ｎα-(ＨＯＯＣ(ＣＨ２)１４ＣＯ)-γ-Ｇｌｕ)ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリンとの混合物で含有してなる製薬的組成物に関する。
持効型インスリンの他の例は、米国特許第５６５６７２２号にて開示されるような、Ｂ鎖のＣ末端に付着されるＡｒｇなどの陽性荷電アミノ酸を含むものである。商品は、Ａ２１Ｇｌｙ、Ｂ３１Ａｒｇ、Ｂ３２Ａｒｇヒトインスリン(インスリングラルギン)を含有してなるＬａｎｔｕｓ(登録商標)である。
一実施態様では、本発明は、本発明に係る速効型インスリンアナログを、ＬｙｓＢ２９(Ｎε-テトラデカノイル)ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン(インスリンデテミル)との混合物で含有してなる製薬的組成物に関する。
他の実施態様では、本発明は、本発明に係る速効型インスリンアナログを、ＬｙｓＢ２９(Ｎε-(Ｎ-リトコリル-γ-グルタミル)ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリンとの混合物で含有してなる製薬的組成物に関する。
更なる実施態様では、本発明は、本発明に係る速効型インスリンアナログを、ＮεＢ２９-(Ｎα-(ＨＯＯＣ(ＣＨ２)１４ＣＯ)-γ-Ｇｌｕ)ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリンとの混合物で含有してなる製薬的組成物に関する。
更なる実施態様では、本発明は、本発明に係る速効型インスリンアナログを、Ａ２１Ｇｌｙ、Ｂ３１Ａｒｇ、Ｂ３２Ａｒｇヒトインスリン(インスリングラルギン)との混合物で含有してなる製薬的組成物に関する。
更なる態様では、本発明は、特に糖尿病の治療のための哺乳動物の血中グルコースレベルの低減のための薬学的調製物の調製のための、場合によって持効型ヒトインスリンアナログないしは誘導体との混合物での本発明に係る速効型インスリンアナログの使用に関する。
更なる実施態様では、本発明は、治療を必要とする患者に、場合によって持効型ヒトインスリンアナログないしは誘導体との混合物での本発明に係る速効型インスリンアナログの治療上活性な用量を投与することによる、哺乳動物の血中グルコースレベルの低減方法に関する。
更なる態様では、本発明は、特に糖尿病の治療のための哺乳動物の血中グルコースレベルの低減のための薬学的調製物の調製のための、場合によって持効型ヒトインスリンアナログないしは誘導体との混合物での本発明に係る速効型インスリンアナログの使用に関する。
更なる実施態様では、本発明は、治療を必要とする患者に、場合によって持効型ヒトインスリンアナログないしは誘導体との混合物での本発明に係る速効型インスリンアナログの治療上活性な用量を投与することによる、哺乳動物の血中グルコースレベルの低減方法に関する。
発明の記載
本発明に係るインスリンは、二量体および六量体の形成に影響を及ぼすインスリン分子内の特定の位置で修飾され、本発明に係るインスリンアナログは、持効型インスリンアナログとの可溶性混合製剤(予め混合したもの又は自身で混合するもの)を形成しうることに特徴を有する。速効性は、Ｂ鎖Ｃ末端内の置換／欠失を単量体化することにより達成され、持効型インスリンアナログとの混合性は、位置Ｂ１０のＺｎ-結合Ｈｉｓの疎水性アミノ酸残基による置換により達成される。
単量体を得るためにヒトインスリンのＢ鎖のＣ末端の一又は複数のアミノ酸残基を置換した、速効型インスリンアナログは、例えば欧州特許第２１４８２６号から周知である。
結果として生じるインスリン分子が所望の特性を有する限り、つまり、鈍化することなく、速効性があり、可溶性の混合物を形成するために持効型インスリンアナログないしは誘導体と混合可能であり、可溶性である限り、Ｂ鎖及びＡ鎖は共に本発明に係る変異にさらに更なる変異を含んでもよい。このような更なる変異は、物理的ないしは化学的な安定性又は変更インスリン分子の両方に対して安定化作用を有しうる。
本発明に係るインスリンは、二量体および六量体の形成に影響を及ぼすインスリン分子内の特定の位置で修飾され、本発明に係るインスリンアナログは、持効型インスリンアナログとの可溶性混合製剤(予め混合したもの又は自身で混合するもの)を形成しうることに特徴を有する。速効性は、Ｂ鎖Ｃ末端内の置換／欠失を単量体化することにより達成され、持効型インスリンアナログとの混合性は、位置Ｂ１０のＺｎ-結合Ｈｉｓの疎水性アミノ酸残基による置換により達成される。
単量体を得るためにヒトインスリンのＢ鎖のＣ末端の一又は複数のアミノ酸残基を置換した、速効型インスリンアナログは、例えば欧州特許第２１４８２６号から周知である。
結果として生じるインスリン分子が所望の特性を有する限り、つまり、鈍化することなく、速効性があり、可溶性の混合物を形成するために持効型インスリンアナログないしは誘導体と混合可能であり、可溶性である限り、Ｂ鎖及びＡ鎖は共に本発明に係る変異にさらに更なる変異を含んでもよい。このような更なる変異は、物理的ないしは化学的な安定性又は変更インスリン分子の両方に対して安定化作用を有しうる。
一実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｉｌｅ,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｉ,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｉ,Ｂ２６Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、及びＢ１０Ｉ,Ｂ２５Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される。
一実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２６Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、及びＢ１０Ｖ,Ｂ２５Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される。
一実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ａ,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,Ｂ２６Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、及びＢ１０Ａ,Ｂ２５Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される。
一実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２６Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、及びＢ１０Ｆ,Ｂ２５Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される。
一実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２６Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、及びＢ１０Ｓ,Ｂ２５Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される。
一実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２６Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、及びＢ１０Ｖ,Ｂ２５Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される。
一実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ａ,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,Ｂ２６Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、及びＢ１０Ａ,Ｂ２５Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される。
一実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２６Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、及びＢ１０Ｆ,Ｂ２５Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される。
一実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２６Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、及びＢ１０Ｓ,Ｂ２５Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｉ,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリ、Ｂ１０Ｉ,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｉ,Ｂ２６Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｉ,Ｂ２５Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２６Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｖ,Ｂ２５Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ａ,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,Ｂ２６Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ａ,Ｂ２５Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２６Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｆ,Ｂ２５Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２６Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｓ,Ｂ２５Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２６Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｖ,Ｂ２５Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ａ,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,Ｂ２６Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ａ,Ｂ２５Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２６Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｆ,Ｂ２５Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２６Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｓ,Ｂ２５Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｉ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｉ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、及びＢ１０Ｉ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、及びＢ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ａ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、及びＢ１０Ａ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、及びＢ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、及びＢ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、及びＢ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ａ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、及びＢ１０Ａ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、及びＢ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、及びＢ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｉ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｉ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｉ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ａ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ａ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ａ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ａ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｉ,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｉ,Ｂ２７Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｉ,Ｂ２６Ｅヒトインスリン、及びＢ１０Ｉ,Ｂ２５Ｅヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２７Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２６Ｅヒトインスリン、及びＢ１０Ｖ,Ｂ２５Ｅヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ａ,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,Ｂ２７Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,Ｂ２６Ｅヒトインスリン、及びＢ１０Ａ,Ｂ２５Ｅヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２７Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２６Ｅヒトインスリン、及びＢ１０Ｆ,Ｂ２５Ｅヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２７Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２６Ｅヒトインスリン、及びＢ１０Ｓ,Ｂ２５Ｅヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２７Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２６Ｅヒトインスリン、及びＢ１０Ｖ,Ｂ２５Ｅヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ａ,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,Ｂ２７Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,Ｂ２６Ｅヒトインスリン、及びＢ１０Ａ,Ｂ２５Ｅヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２７Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２６Ｅヒトインスリン、及びＢ１０Ｆ,Ｂ２５Ｅヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２７Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２６Ｅヒトインスリン、及びＢ１０Ｓ,Ｂ２５Ｅヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｉ,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、１０Ｉ,Ｂ２７Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｉ,Ｂ２６Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｉ,Ｂ２５Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、１０Ｖ,Ｂ２７Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２６Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｖ,Ｂ２５Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ａ,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、１０Ａ,Ｂ２７Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,Ｂ２６Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ａ,Ｂ２５Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、１０Ｆ,Ｂ２７Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２６Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｆ,Ｂ２５Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、１０Ｓ,Ｂ２７Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２６Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｓ,Ｂ２５Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、１０Ｖ,Ｂ２７Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,Ｂ２６Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｖ,Ｂ２５Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ａ,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、１０Ａ,Ｂ２７Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,Ｂ２６Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ａ,Ｂ２５Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、１０Ｆ,Ｂ２７Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,Ｂ２６Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｆ,Ｂ２５Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、１０Ｓ,Ｂ２７Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,Ｂ２６Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｓ,Ｂ２５Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは,Ｂ１０Ｉ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｉ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、及びＢ１０Ｉ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、及びＢ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ａ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、及びＢ１０Ａ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、及びＢ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、及びＢ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、及びＢ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ａ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、及びＢ１０Ａ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、及びＢ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅヒトインスリン、及びＢ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｉ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ、Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｉ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｉ,ｄｅｓＢ２５Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ａ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ａ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ３Ｑ,Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ３Ｑ,Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ３Ｑ,Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ３Ｑ,Ｂ１０ＳｄｅｓＢ２６,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｖ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ａ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ａ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ａ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｆ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２７,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
他の実施態様では、本発明に係るインスリンアナログは、Ｂ３Ｑ,Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ３Ｑ,Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、Ｂ３Ｑ,Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリン、及びＢ３Ｑ,Ｂ１０ＳｄｅｓＢ２６,Ｂ２７Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇヒトインスリンからなる群から選択される。
本発明に係る速効型インスリンアナログは、鈍化作用の影響を受けずに又は実質的に受けずに持効型インスリンアナログないしは誘導体と混合することができる。鈍化(blunting)とは、速効型及び持効型のインスリンそれぞれの活性特性が混合物中で変化し、速効型インスリンの速効性が低減し、持効型インスリンの持効性が早くなることを意味する。
ゆえに、本明細書中で用いる「鈍化がない」という用語は、一つの製剤に調製した場合に速効型インスリン及び持効型インスリンが、別々の製剤として投与した場合の作用の特徴と同一か又は実質的に同一である作用の特徴を有することを意味する。
ゆえに、本明細書中で用いる「鈍化がない」という用語は、一つの製剤に調製した場合に速効型インスリン及び持効型インスリンが、別々の製剤として投与した場合の作用の特徴と同一か又は実質的に同一である作用の特徴を有することを意味する。
「実質的に同一の」という表現は、作用の特徴が、別々の製剤として投与した場合の個々のインスリンの作用の特徴に対して少なくとも７０−９５％の同一性があることを意味するであろう。
一実施態様では、個々のインスリンの作用の特徴が、別々の製剤として投与した場合の作用の特徴に対して少なくとも７５％の同一性がある。
他の実施態様では、個々のインスリンの作用の特徴が、別々の製剤として投与した場合の作用の特徴に対して少なくとも８５％の同一性がある。
他の実施態様では、個々のインスリンの作用の特徴が、別々の製剤として投与した場合の作用の特徴に対して少なくとも９５％の同一性がある。
一実施態様では、個々のインスリンの作用の特徴が、別々の製剤として投与した場合の作用の特徴に対して少なくとも７５％の同一性がある。
他の実施態様では、個々のインスリンの作用の特徴が、別々の製剤として投与した場合の作用の特徴に対して少なくとも８５％の同一性がある。
他の実施態様では、個々のインスリンの作用の特徴が、別々の製剤として投与した場合の作用の特徴に対して少なくとも９５％の同一性がある。
「混合性」なる用語は、鈍化が起こらないか又は実質的に起こらない速効型と持効型のインスリンの混合物を特徴付けるために用いられる。
「速効型」インスリンとは、通常又は標準のヒトインスリンよりも作用の発現が早いインスリンを意味し、「持効型インスリン」とは、通常又は標準のヒトインスリンよりも作用の持続が長いインスリンを意味する。
ある種の持効型インスリンはアシル化したインスリン誘導体である。ヒトインスリンは、Ａ鎖及びＢ鎖のＮ末端基と、位置Ｂ２９のリジン残基のε-アミノ基という３つの主なアミノ基を有する。リジン残基位置Ｂ２９のε-アミノ基に連結した親油性置換基を含む可溶性インスリン誘導体は、例えば国際公開９５／０７９３１および国際公開２００５／１２３４において開示される。
「速効型」インスリンとは、通常又は標準のヒトインスリンよりも作用の発現が早いインスリンを意味し、「持効型インスリン」とは、通常又は標準のヒトインスリンよりも作用の持続が長いインスリンを意味する。
ある種の持効型インスリンはアシル化したインスリン誘導体である。ヒトインスリンは、Ａ鎖及びＢ鎖のＮ末端基と、位置Ｂ２９のリジン残基のε-アミノ基という３つの主なアミノ基を有する。リジン残基位置Ｂ２９のε-アミノ基に連結した親油性置換基を含む可溶性インスリン誘導体は、例えば国際公開９５／０７９３１および国際公開２００５／１２３４において開示される。
アシル基は親油性基であり、典型的にはおよそ６〜およそ３２、より典型的には６〜２４、８〜２０、１２〜２０、１２〜１６、１０〜１６、１０〜２０、１４〜１８又は１４〜１６の炭素原子を含む脂肪酸部分であってもよい。脂肪酸の例は、カプリン酸、ラウリン酸、テトラデカン酸(ミリスチン酸)、ペンタデカン酸、パルミチン酸、ヘプタデカン酸、ステアリン酸、ドデカン酸、トリデカン酸およびテトラデカン酸である。また、アシル基はジカルボキシル脂肪酸から得られてもよいし、リトコール酸であってもよい。
アシル基は、対象の遊離したアミノ基に直接付着されてもよい。しかしながらまた、アシル基は、インスリン分子内の遊離アミノ基と対象のアシル基を連結するリンカーによって、アミド結合を介して付着されてもよい。
アシル化されたインスリンは、ヒトインスリンと比較して１又は２の更なる陰性正味電荷を有してもよい。脂肪酸の遊離カルボン酸基によって、又は、少なくとも一の遊離カルボン酸又は中性ｐＨで負に荷電している基を含む一又は複数のアミノ酸残基を含みうるリンカー基によって、さらに負に荷電しうる。
アシル基は、対象の遊離したアミノ基に直接付着されてもよい。しかしながらまた、アシル基は、インスリン分子内の遊離アミノ基と対象のアシル基を連結するリンカーによって、アミド結合を介して付着されてもよい。
アシル化されたインスリンは、ヒトインスリンと比較して１又は２の更なる陰性正味電荷を有してもよい。脂肪酸の遊離カルボン酸基によって、又は、少なくとも一の遊離カルボン酸又は中性ｐＨで負に荷電している基を含む一又は複数のアミノ酸残基を含みうるリンカー基によって、さらに負に荷電しうる。
アシル化インスリンアナログの非限定的な例は、ＬｙｓＢ２９(Ｎε-テトラデカノイル)ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン、ＬｙｓＢ２９(Ｎε-ヘキサデカノイル)ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン、ＬｙｓＢ２９(Ｎε-テトラデカノイル)ヒトインスリン、ＬｙｓＢ２９(Ｎε-ヘキサデカノイル)ヒトインスリン、ＬｙｓＢ２９(Ｎε-(Ｎ-ヘキサデカノイル-γ-Ｇｌｕ)ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン、ＬｙｓＢ２９(Ｎε-(Ｎ-リトコールイル-γ-Ｇｌｕ))ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン、ＬｙｓＢ２９(Ｎε-(ω-カルボキシヘプタデカノイル))ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン、ＬｙｓＢ２９(Ｎε-(ω-カルボキシヘプタデカノイル))ヒトインスリン、ＮεＢ２９-(Ｎα-(ＨＯＯＣ(ＣＨ２)１３ＣＯ)-γ-Ｇｌｕ)ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン、ＮεＢ２９-(Ｎα-(ＨＯＯＣ(ＣＨ２)１４ＣＯ)-γ-Ｇｌｕ)ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン、ＮεＢ２９-(Ｎα-(ＨＯＯＣ(ＣＨ２)１５ＣＯ)-γ-Ｇｌｕ)ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン、ＮεＢ２９-(Ｎα-(ＨＯＯＣ(ＣＨ２)１６ＣＯ)-γ-Ｇｌｕ)ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン、ＮεＢ２９-(Ｎα-(ＨＯＯＣ(ＣＨ２)１７ＣＯ)-γ-Ｇｌｕ)ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン、ＮεＢ２９-(Ｎα-(ＨＯＯＣ(ＣＨ２)１８ＣＯ)-γ-Ｇｌｕ)ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン、ＮεＢ２９-(Ｎα-(ＨＯＯＣ(ＣＨ２)１３ＣＯ)-γ-Ａｓｐ)ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン、及びＮεＢ２９-(Ｎα-(ＨＯＯＣ(ＣＨ２)１４ＣＯ)-γ-Ａｓｐ)ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリンである。
他の種の持効型インスリンアナログは、インスリングラルギンのような、荷電基、例えばＣ末端基Ｂ３０に付着されたＡｒｇを有するインスリンアナログを開示する欧州特許第３６８１８７号において開示される。
速効型インスリンは、例えば欧州特許第１２４６８４５号に開示されるような周知の技術によって、対象の単鎖インスリンをコードするＤＮＡ配列を適切な宿主細胞内で発現させることによって製造される。インスリン前駆体は、欧州特許第１６３５２９号および欧州特許第２１４８２６号にて開示されるように、酵素的および化学的なインビトロ方法によって所望のインスリン分子に変換される前駆体分子として、形質移入された宿主細胞において発現される。前駆体分子は、欧州特許第１２４６８４５号に開示されるように、後に切断されるＮ末端伸展と共に発現されてもよい。本発明において適切な種類のＮ末端伸展の例は、米国特許第５３９５９２２号および欧州特許第７６５３９５号において開示される。
本発明に係る速効型インスリンと混合される持効型アシル化インスリンを調製するためのインスリン前駆体生産物は、上記の方法と類似の方法によって製造されうる。インスリン前駆体は、例えば欧州特許第２１４８２６号、欧州特許第３７５４３７号および欧州特許第３８３４７２号において記載されるように、所望の位置でアシル化されうる。
速効型インスリンは、例えば欧州特許第１２４６８４５号に開示されるような周知の技術によって、対象の単鎖インスリンをコードするＤＮＡ配列を適切な宿主細胞内で発現させることによって製造される。インスリン前駆体は、欧州特許第１６３５２９号および欧州特許第２１４８２６号にて開示されるように、酵素的および化学的なインビトロ方法によって所望のインスリン分子に変換される前駆体分子として、形質移入された宿主細胞において発現される。前駆体分子は、欧州特許第１２４６８４５号に開示されるように、後に切断されるＮ末端伸展と共に発現されてもよい。本発明において適切な種類のＮ末端伸展の例は、米国特許第５３９５９２２号および欧州特許第７６５３９５号において開示される。
本発明に係る速効型インスリンと混合される持効型アシル化インスリンを調製するためのインスリン前駆体生産物は、上記の方法と類似の方法によって製造されうる。インスリン前駆体は、例えば欧州特許第２１４８２６号、欧州特許第３７５４３７号および欧州特許第３８３４７２号において記載されるように、所望の位置でアシル化されうる。
本明細書中で用いる「インスリン」とは、ＣｙｓＡ７とＣｙｓＢ７との間、及びＣｙｓＡ２０とＣｙｓＢ１９との間にジスルフィド架橋を、そしてＣｙｓＡ６とＣｙｓＡ１１との間に内部ジスルフィド架橋を有するヒトインスリンの二本鎖構造を有するヒトインスリン、ブタインスリンおよびウシインスリンを意味する。
Ｂ鎖は、３０のアミノ酸残基を有するヒトインスリンＢ鎖を指し、Ａ鎖は、２１のアミノ酸残基を有するヒトインスリンＡ鎖を指す。本発明に係るインスリンアナログ内のＢ鎖及びＡ鎖の両方は、結果として生じるインスリン分子が所望の性質を有する限り、本発明に係る変異にさらに付加的な変異を含んでもよい。
更なる変異の数は、典型的に３より多くなく、より典型的に２又は１であろう。
ゆえに、Ｂ１のアミノ酸残基は、Ａｓｐ又はＧｌｙのような他のアミノ酸残基に置換されてもよく、又は欠失していてもよい。また、位置Ｂ３のＡｓｎは、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ又はＡｓｐに変異してもよい。また、Ｂ鎖はＮ末端伸展を含んでもよく、Ｂ１は欠失していてもよい。
Ａ鎖において、位置Ａ２１のＡｓｎは、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ又はＶａｌに、特に、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ又はＴｈｒに、そして好ましくはＧｌｙに変異してもよい。また、Ａ１８はＧｌｎに変異してもよい。最後に、Ａ鎖は、Ａ２２およびＡ２３などのＣ末端伸展を含んでもよい。位置Ａ２２およびＡ２２のアミノ酸残基は、酸性のｐＨ範囲で良好な溶解性を与えるリジン残基であってもよく、アミド分解に対してさらに分子を安定させる。
Ｂ鎖は、３０のアミノ酸残基を有するヒトインスリンＢ鎖を指し、Ａ鎖は、２１のアミノ酸残基を有するヒトインスリンＡ鎖を指す。本発明に係るインスリンアナログ内のＢ鎖及びＡ鎖の両方は、結果として生じるインスリン分子が所望の性質を有する限り、本発明に係る変異にさらに付加的な変異を含んでもよい。
更なる変異の数は、典型的に３より多くなく、より典型的に２又は１であろう。
ゆえに、Ｂ１のアミノ酸残基は、Ａｓｐ又はＧｌｙのような他のアミノ酸残基に置換されてもよく、又は欠失していてもよい。また、位置Ｂ３のＡｓｎは、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ又はＡｓｐに変異してもよい。また、Ｂ鎖はＮ末端伸展を含んでもよく、Ｂ１は欠失していてもよい。
Ａ鎖において、位置Ａ２１のＡｓｎは、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ又はＶａｌに、特に、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ又はＴｈｒに、そして好ましくはＧｌｙに変異してもよい。また、Ａ１８はＧｌｎに変異してもよい。最後に、Ａ鎖は、Ａ２２およびＡ２３などのＣ末端伸展を含んでもよい。位置Ａ２２およびＡ２２のアミノ酸残基は、酸性のｐＨ範囲で良好な溶解性を与えるリジン残基であってもよく、アミド分解に対してさらに分子を安定させる。
「ｄｅｓＢ３０又はＢ(１−２９)」とは、Ｂ３０アミノ酸残基を欠いている天然のインスリンＢ鎖又はそのアナログを意味し、「Ａ(１−２１)」は、天然のインスリンＡ鎖又はそのアナログないしは誘導体を意味する。
「アナログ」とは、一又は複数のアミノ酸の置換、付加又は欠失及びこれらの組合せによる天然の分子からの逸脱を有する分子を意味する。
「インスリン誘導体」とは、一又は複数の主鎖アミノ酸残基に付着される化学基を有するインスリン分子を意味する。
「アナログ」とは、一又は複数のアミノ酸の置換、付加又は欠失及びこれらの組合せによる天然の分子からの逸脱を有する分子を意味する。
「インスリン誘導体」とは、一又は複数の主鎖アミノ酸残基に付着される化学基を有するインスリン分子を意味する。
本発明に係るアナログの位置の番号付けは、ヒトのインスリン分子に基づく。ゆえに、「Ｂ２７」はヒトインスリンのＢ鎖の位置Ｂ２７のアミノ酸残基(Ｎ末端から計数した)を意味し、「Ａ１」はヒトインスリンのＡ鎖の位置１のアミノ酸残基(Ｎ末端端から計数した)をそれぞれ意味する。一又は複数の天然のアミノ酸残基が欠失された場合であっても、この番号付けシステムは維持される。ゆえに、「Ｂ１０Ｑ,ｄｅｓＢ２５,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン」と称されるインスリンアナログは、Ｂ鎖にＣ末端配列Ｔｈｒ-Ａｓｐ-Ｌｙｓを有する。
アミノ酸残基は、３文字アミノ酸コード又は１文字アミノコードで示される。明確に示されない限り、本明細書において言及するアミノ酸はＬ-アミノ酸である。さらに、特に明記しない限り、ペプチドのアミノ酸配列の左右の端はそれぞれＮ-およびＣ末端である。
本明細書において用いられる「単量体インスリン」なる用語は、ヒトインスリンよりも自己会合(二量体および六量体に)する傾向が低いヒトインスリンアナログを指す。
アミノ酸残基は、３文字アミノ酸コード又は１文字アミノコードで示される。明確に示されない限り、本明細書において言及するアミノ酸はＬ-アミノ酸である。さらに、特に明記しない限り、ペプチドのアミノ酸配列の左右の端はそれぞれＮ-およびＣ末端である。
本明細書において用いられる「単量体インスリン」なる用語は、ヒトインスリンよりも自己会合(二量体および六量体に)する傾向が低いヒトインスリンアナログを指す。
製薬的組成物
本発明の速効型インスリンを場合によって持効型インスリンアナログないしは誘導体と混合して含有する組成物は、インスリンに対して感受性がある状態の治療において使用され得る。したがって、それらは、１型糖尿病、２型糖尿病、ならびに例えば重篤なけがをした人及び主要な手術を経験した人においてしばしば見られる高血糖の治療において使用され得る。任意の患者に適する用量レベルは、用いる特定のインスリンアナログないしは誘導体の効力、患者の年齢、体重、身体活性、及び食事、他の薬剤との可能な組み合わせ、ならびに治療されるべき状態の重症度を含む種々の因子に依存するであろう。本発明のインスリンアナログないしは混合物の一日量は、既知のインスリン組成物に対してと同様に当業者により個々の患者に対して決定されることが推奨される。
通常、本発明の製薬的組成物は皮下に投与される。しかしながらまた、組成物は、インスリンポンプに用いられてもよいし、肺の(pulmunal)投与のために調製されてもよい。
本発明の速効型インスリンを場合によって持効型インスリンアナログないしは誘導体と混合して含有する組成物は、インスリンに対して感受性がある状態の治療において使用され得る。したがって、それらは、１型糖尿病、２型糖尿病、ならびに例えば重篤なけがをした人及び主要な手術を経験した人においてしばしば見られる高血糖の治療において使用され得る。任意の患者に適する用量レベルは、用いる特定のインスリンアナログないしは誘導体の効力、患者の年齢、体重、身体活性、及び食事、他の薬剤との可能な組み合わせ、ならびに治療されるべき状態の重症度を含む種々の因子に依存するであろう。本発明のインスリンアナログないしは混合物の一日量は、既知のインスリン組成物に対してと同様に当業者により個々の患者に対して決定されることが推奨される。
通常、本発明の製薬的組成物は皮下に投与される。しかしながらまた、組成物は、インスリンポンプに用いられてもよいし、肺の(pulmunal)投与のために調製されてもよい。
製薬的組成物は、通常のアジュバント及び添加剤を含有するであろうし、好ましくは水溶液として調製される。水溶媒質は、塩化ナトリウム、酢酸ナトリウム又はグリセロールによって等張性にされる。さらに、水溶媒質は、亜鉛イオン、バッファ及び防腐剤を含有してもよい。組成物のｐＨ値は所望の値に調整され、対象のインスリンの等電点(ｐＩ)に応じて、およそ３〜およそ８．５、好ましくはおよそ３〜およそ５又はおよそ６．５〜およそ７．５であってもよい。
速効型インスリンアナログと持効型インスリンは、およそ１０／９０％、およそ３０／７０％、又はおよそ５０／５０％の比率で混合されうる。一実施態様では、持効型インスリンと速効型インスリンとのモル比は２／１より大きい。
速効型インスリンアナログと持効型インスリンは、およそ１０／９０％、およそ３０／７０％、又はおよそ５０／５０％の比率で混合されうる。一実施態様では、持効型インスリンと速効型インスリンとのモル比は２／１より大きい。
本発明に係る製薬的調製物に用いられるバッファは、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸塩、グリシルグリシン、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウム及びトリス(ヒドロキシメチル)-アミノメタン、ビシン(bicine)、トリシン、リンゴ酸、スクシナート、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸又はこれらの混合物から選択されてもよい。
薬学的に許容可能な防腐剤は当分野で周知である。便宜上、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995を参照されたい。
等張剤は、塩(例えば塩化ナトリウム)、糖質又は糖アルコール、アミノ酸又はアルジトール(例えばグリセロール(グリセリン)からなる群から選択されてよい。製薬的組成物での等張剤の使用は当業者に周知である。便宜上、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995を参照されたい。等張剤は、一般的に１ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。更なる実施態様では、等張剤は、１ｍｇ／ｍｌから７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌから２４ｍｇ／ｍ、または２５ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。
薬学的に許容可能な防腐剤は当分野で周知である。便宜上、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995を参照されたい。
等張剤は、塩(例えば塩化ナトリウム)、糖質又は糖アルコール、アミノ酸又はアルジトール(例えばグリセロール(グリセリン)からなる群から選択されてよい。製薬的組成物での等張剤の使用は当業者に周知である。便宜上、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995を参照されたい。等張剤は、一般的に１ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。更なる実施態様では、等張剤は、１ｍｇ／ｍｌから７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌから２４ｍｇ／ｍ、または２５ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。
本発明は以下の実施例にさらに詳細に記載されており、これらの実施例は特許請求の範囲としてあげられる本発明の権利範囲を限定するものではない。添付の図は、明細書及び本発明の説明の不可欠な部分として認識されるものである。本明細書中に示した刊行物、特許出願、及び特許を含む全ての参考文献は、その全体ならびに各参考文献が個々にかつ具体的に出典明記によって援用されることが示され、その全体がここに示されているのと同じ範囲で、本明細書の一部として援用される(法律により許容される最大限の範囲)。
項目及び副項目は、便宜上のためのみに使用され、本発明を限定するように解釈されるべきでない。
本明細書中における例又は例示的な言葉（「例えば」及び「〜のような」）の使用は、単に本発明をよりよく説明することを意図しており、示さない限り本発明の範囲を限定するものではない。本明細書中の記載は、権利請求されていないあらゆる要素が本発明の実施に必須であることを示すと解釈されるべきではない。
特許書類の引用及び援用は、ここでは便宜的にのみなされ、そのような特許書類の妥当性、特許性、及び／又は実施可能性の見解を示すものではない。
項目及び副項目は、便宜上のためのみに使用され、本発明を限定するように解釈されるべきでない。
本明細書中における例又は例示的な言葉（「例えば」及び「〜のような」）の使用は、単に本発明をよりよく説明することを意図しており、示さない限り本発明の範囲を限定するものではない。本明細書中の記載は、権利請求されていないあらゆる要素が本発明の実施に必須であることを示すと解釈されるべきではない。
特許書類の引用及び援用は、ここでは便宜的にのみなされ、そのような特許書類の妥当性、特許性、及び／又は実施可能性の見解を示すものではない。
本発明に係るインスリンアナログの組み換え製造のための一般的な手順
すべての発現プラスミドは、Ｃ-ＰＯＴの種類のものであり、欧州特許第１７１１４２号に記載のものと類似しており、出芽酵母(S. cerevisiae)中での安定性及びプラスミド選別の目的で分裂酵母(Schizosaccharomyces pombe)トリオースリン酸イソメラーゼ遺伝子(ＰＯＴ)を含有することを特徴とする。また、プラスミドは、出芽酵母トリオースリン酸イソメラーゼプロモーター及びターミネーターを含有する。これらの配列は、リーダーとインスリン生成物の融合タンパク質をコードするＥｃｏＲＩ-ＸｂａＩ断片の配列を除くすべての配列が、プラスミドｐＫＦＮ１００３(国際公開第９０／１０００７５号に記載)の対応配列と類似している。異なる融合タンパク質を発現させるために、ｐＫＦＮ１００３のＥｃｏＲＩ-ＸｂａＩ断片は、単に対象のリーダー-インスリン融合をコードするＥｃｏＲＩ-ＸｂａＩ断片によって置換する。このようなＥｃｏＲＩ-ＸｂａＩ断片は、標準的な技術に従って合成オリゴヌクレオチドとＰＣＲと用いて合成してもよい。
すべての発現プラスミドは、Ｃ-ＰＯＴの種類のものであり、欧州特許第１７１１４２号に記載のものと類似しており、出芽酵母(S. cerevisiae)中での安定性及びプラスミド選別の目的で分裂酵母(Schizosaccharomyces pombe)トリオースリン酸イソメラーゼ遺伝子(ＰＯＴ)を含有することを特徴とする。また、プラスミドは、出芽酵母トリオースリン酸イソメラーゼプロモーター及びターミネーターを含有する。これらの配列は、リーダーとインスリン生成物の融合タンパク質をコードするＥｃｏＲＩ-ＸｂａＩ断片の配列を除くすべての配列が、プラスミドｐＫＦＮ１００３(国際公開第９０／１０００７５号に記載)の対応配列と類似している。異なる融合タンパク質を発現させるために、ｐＫＦＮ１００３のＥｃｏＲＩ-ＸｂａＩ断片は、単に対象のリーダー-インスリン融合をコードするＥｃｏＲＩ-ＸｂａＩ断片によって置換する。このようなＥｃｏＲＩ-ＸｂａＩ断片は、標準的な技術に従って合成オリゴヌクレオチドとＰＣＲと用いて合成してもよい。
酵母形質転換体は、宿主株として出芽酵母株ＭＴ６６３ (ＭＡＴａ／ＭＡＴα ｐｅｐ４-３／ｐｅｐ４-３ ＨＩＳ４/ｈｉｓ４ ｔｐｉ：：ＬＥＵ２／ｔｐｉ：ＬＥＵ２ Ｃｉｒ＋)を形質転換して調製する。酵母株ＭＴ６６３は、国際公開第９２／１１３７８号の出願に関連して、寄託番号ＤＳＭ６２７８としてDeutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturenに寄託された。
ＭＴ６６３はＹＰＧａＬ(１%バクト酵母抽出物、２%バクトペプトン、２%ガラクトース、１%ラクトース)にて０．６のＯＤ６００ｎｍまで生育する。１００ｍｌの培養物は、遠心分離にて回収し、１０ｍｌの水にて洗浄し、再び遠心分離して、１．２Ｍ ソルビトール、２５ｍＭ Ｎａ２ＥＤＴＡ、ｐＨ＝８．０及び６．７ｍｇ／ｍｌ ジチオトレイトールを含有する１０ｍｌの溶液に再懸濁する。懸濁液を３０℃で１５分インキュベートして、遠心分離し、細胞を１．２Ｍ ソルビトール、１０ｍＭ Ｎａ２ＥＤＴＡ、０．１Ｍ クエン酸ナトリウム、ｐＨ ５．８、及び２ｍｇ Ｎｏｖｏｚｙｍ(登録商標)２３４を含有する１０ｍｌの溶液に再懸濁する。懸濁液を３０℃で３０分間インキュベートし、細胞を遠心分離にて回収し、１０ｍｌの１．２Ｍ ソルビトール及び１０ｍｌのＣＡＳ(１．２Ｍ ソルビトール、１０ｍＭ ＣａＣｌ２、１０ｍＭ トリスＨＣｌ(トリス＝トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン) ｐＨ＝７．５)にて洗浄し、２ｍｌのＣＡＳに再懸濁する。形質転換のために、１ｍｌのＣＡＳ-懸濁細胞を、およそ０．１ｍｇのプラスミドＤＮＡと混合し、室温に１５分間放置する。１ｍｌの(２０％ ポリエチレングリコール４０００、１０ｍＭ ＣａＣｌ２、１０ｍＭ トリスＨＣｌ、ｐＨ＝７．５)を加えて、混合物を室温にさらに３０分間放置する。混合物を遠心分離し、ペレットを０．１ｍｌのＳＯＳ(１.２ Ｍ ソルビトール、３３% ｖ/ｖ ＹＰＤ、６.７ｍＭ ＣａＣｌ２)に再懸濁し、３０℃で２時間インキュベートするた。その後、懸濁物を遠心分離して、ペレットを０．５ｍｌの１．２Ｍ ソルビトールに再懸濁する。その後、６ｍｌのトップアガー(１．２Ｍ ソルビトールと２．５％アガーを含有する、Sherman等 (1982) Methods in Yeast Genetics, Cold Spring Harbor LaboratoryのＳＣ培地)を５２℃で加え、同じ寒天凝固のソルビトール含有培地を含むプレートの上に懸濁物を注ぐ。
発現プラスミドにて形質転換された出芽酵母(S. cerevisiae)株ＭＴ６６３はＹＰＤ中、３０℃で７２時間生育される。発現され分泌されたインスリン前駆体は従来の方法によって単離され、上記のように従来のインビトロ酵素変換により本発明に係る所望のインスリンアナログに変換される。
発現プラスミドにて形質転換された出芽酵母(S. cerevisiae)株ＭＴ６６３はＹＰＤ中、３０℃で７２時間生育される。発現され分泌されたインスリン前駆体は従来の方法によって単離され、上記のように従来のインビトロ酵素変換により本発明に係る所望のインスリンアナログに変換される。
実施例１
インスリン製剤の平衡溶解度
Ｚｎ２＋、フェノール及びグリセロールを市販の製品に近い濃度で含むか又は１２０ｍＭ ＮａＣｌを含む、本発明に係る速効型インスリンアナログの保存溶液又は速効型インスリンアナログと持効型インスリン(インスリングラルギン)との混合物の保存溶液を調製し、ｐＨ溶解性質のアルカリエンドポイントに相当する所望の値にｐＨを調整する。これらの貯蔵溶液から試料を取り出し、ｐＨ３−８の範囲の所望の値にｐＨを調整し、０．３ｍｌの試料を２３℃で少なくとも４日間インキュベートする。各試料の遠心分離(２３℃で２０分間、２００００ｇ)の後、ｐＨを測定し、ＸＴｅｒｒａ ＲＰ８ Ｇｕａｒｄカラム(Waters)、５０×２０ｍｍ、５ミクロン粒径にて、３５℃で２ｍｌ／分で溶出させる、又はＧｅｍｉｎｉ３ｕ Ｃ１８ １１０Ａカラム(Phenomenex)、５０×２．０ｍｍ、３ミクロン粒径にて、３５℃で０．８ｍｌ／分で溶出させる、逆相ＨＰＬＣ分析によって上清中のインスリン含量の定量により溶解性を決定する。インスリンは、リン酸緩衝液ｐＨ＝７．２にて、およそ７％(ｗ／ｗ)アセトニトリルから始め、その後およそ６５％(ｗ／ｗ)の濃度にアセトニトリルを段階的に増加させて、溶出する。
インスリン製剤の平衡溶解度
Ｚｎ２＋、フェノール及びグリセロールを市販の製品に近い濃度で含むか又は１２０ｍＭ ＮａＣｌを含む、本発明に係る速効型インスリンアナログの保存溶液又は速効型インスリンアナログと持効型インスリン(インスリングラルギン)との混合物の保存溶液を調製し、ｐＨ溶解性質のアルカリエンドポイントに相当する所望の値にｐＨを調整する。これらの貯蔵溶液から試料を取り出し、ｐＨ３−８の範囲の所望の値にｐＨを調整し、０．３ｍｌの試料を２３℃で少なくとも４日間インキュベートする。各試料の遠心分離(２３℃で２０分間、２００００ｇ)の後、ｐＨを測定し、ＸＴｅｒｒａ ＲＰ８ Ｇｕａｒｄカラム(Waters)、５０×２０ｍｍ、５ミクロン粒径にて、３５℃で２ｍｌ／分で溶出させる、又はＧｅｍｉｎｉ３ｕ Ｃ１８ １１０Ａカラム(Phenomenex)、５０×２．０ｍｍ、３ミクロン粒径にて、３５℃で０．８ｍｌ／分で溶出させる、逆相ＨＰＬＣ分析によって上清中のインスリン含量の定量により溶解性を決定する。インスリンは、リン酸緩衝液ｐＨ＝７．２にて、およそ７％(ｗ／ｗ)アセトニトリルから始め、その後およそ６５％(ｗ／ｗ)の濃度にアセトニトリルを段階的に増加させて、溶出する。
純水中又は持効型インスリンとの混合製剤中の、本発明のインスリンアナログ(インスリンアスパルトを対照に用いてよい)のｐＨに対する平衡溶解度を測定し、各インスリンアナログのｐＨに対する水中の非混合製剤中の溶解度を持効型インスリンと比較する。
Ｂ３Ｑ,Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇ(灰色の印で表す)とインスリングラルギン(黒色の印で表す)のｐＨに対する水中の溶解度を図１に示す。個々の測定点を繋ぐ線は見やすくするためのものである。
Ｂ３Ｑ,Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇ(灰色の印で表す)とインスリングラルギン(黒色の印で表す)のｐＨに対する水中の溶解度を図１に示す。個々の測定点を繋ぐ線は見やすくするためのものである。
実施例２
インスリンアナログＢ３Ｑ,Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,-ｄｅｓＢ３０,Ａ２１ＧについてＮＵＶ−ＣＤを測定した。アナログは１ｍＭ以下の濃度で単量体であることが明らかとなった。
結果を図２に示す。
インスリンアナログＢ３Ｑ,Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,-ｄｅｓＢ３０,Ａ２１ＧについてＮＵＶ−ＣＤを測定した。アナログは１ｍＭ以下の濃度で単量体であることが明らかとなった。
結果を図２に示す。
薬理学的方法
アッセイ(I)
サイズ排除クロマトグラフィ(ＳＥＣ)は基本的にHavelund等 2004 Pharmaceutical research, 21, 1498-1504に記載のように行う。クロマトグラフィシステムは、３７℃のトリス緩衝等張生理食塩水(ＮａＣｌ １４０ｍＭ、トリス／ＨＣｌ １０ｍＭ、ＮａＮ３ ０．０１%、ｐＨ７．５)、１％のカラム容量を注入し、カラム容量当たり９０分の流速を用いて溶出したＳｕｐｅｒｏｓｅ ６ ＨＲ ＰＣ ６／３０カラム(GE healthcare)と２７６ｎｍのＵＶ検出である。参照物質は、安定インスリン単量体インスリンＸ２(ＡｓｐＢ９、ＧｌｕＢ２７ヒトインスリン、亜鉛フリー)、安定六量体インスリン：Ｃｏ(III)インスリン、アルブミン(ＨＳＡ)及び共有結合性アルブミン(溶液中で形成)である。
アッセイ(I)
サイズ排除クロマトグラフィ(ＳＥＣ)は基本的にHavelund等 2004 Pharmaceutical research, 21, 1498-1504に記載のように行う。クロマトグラフィシステムは、３７℃のトリス緩衝等張生理食塩水(ＮａＣｌ １４０ｍＭ、トリス／ＨＣｌ １０ｍＭ、ＮａＮ３ ０．０１%、ｐＨ７．５)、１％のカラム容量を注入し、カラム容量当たり９０分の流速を用いて溶出したＳｕｐｅｒｏｓｅ ６ ＨＲ ＰＣ ６／３０カラム(GE healthcare)と２７６ｎｍのＵＶ検出である。参照物質は、安定インスリン単量体インスリンＸ２(ＡｓｐＢ９、ＧｌｕＢ２７ヒトインスリン、亜鉛フリー)、安定六量体インスリン：Ｃｏ(III)インスリン、アルブミン(ＨＳＡ)及び共有結合性アルブミン(溶液中で形成)である。
アッセイ(II)
インスリンレセプター結合
ヒトインスリンレセプターのインスリンアナログの親和性は、ＳＰＡアッセイ(シンチレーション近接アッセイ)マイクロタイタープレート抗体捕獲アッセイにて測定することができる。ＳＰＡ−ＰＶＴ抗体-結合ビーズ、抗マウス試薬(Amersham Biosciences、カタログ番号ＰＲＮＱ００１７)を２５ｍｌの結合バッファ(１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ ７.８；１００ｍＭ 塩化ナトリウム、１０ｍＭ ＭｇＳＯ４、０.０２５% Ｔｗｅｅｎ-２０)と混合する。単一Ｐａｃｋａｒｄ Ｏｐｔｉｐｌａｔｅ(Packard番号６００５１９０)用の試薬混合物は、２．４μｌの１：５０００に希釈した精製した組み換えヒトインスリンレセプター-エクソン１１、１００μｌの試薬混合物当たり５０００ｃｐｍに相当するＡ１４ Ｔｙｒ[１２５Ｉ]-ヒトインスリンのある量の貯蔵溶液、１２μｌの１：１０００に希釈したＦ１２抗体、３ｍｌのＳＰＡ-ビーズ及び総量を１２ｍｌにする結合バッファからなる。次いで、総量１００μｌを加え、希釈物を適当な試料から作製する。１００μｌの試薬混合物を希釈物に加え、試料をゆっくりと撹拌しながら１６時間インキュベートする。次いで、この相を１分間遠心分離して分離し、プレートをＴｏｐｃｏｕｎｔｅｒにて計数する。結合データは、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ２.０１(GraphPad Software, San Diego, CA)に非線形回帰アルゴリズムを用いてフィッティングする。
Ｂ３Ｑ,Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,-ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇのインスリンレセプター親和性は９．１％に測定された。
インスリンレセプター結合
ヒトインスリンレセプターのインスリンアナログの親和性は、ＳＰＡアッセイ(シンチレーション近接アッセイ)マイクロタイタープレート抗体捕獲アッセイにて測定することができる。ＳＰＡ−ＰＶＴ抗体-結合ビーズ、抗マウス試薬(Amersham Biosciences、カタログ番号ＰＲＮＱ００１７)を２５ｍｌの結合バッファ(１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ ７.８；１００ｍＭ 塩化ナトリウム、１０ｍＭ ＭｇＳＯ４、０.０２５% Ｔｗｅｅｎ-２０)と混合する。単一Ｐａｃｋａｒｄ Ｏｐｔｉｐｌａｔｅ(Packard番号６００５１９０)用の試薬混合物は、２．４μｌの１：５０００に希釈した精製した組み換えヒトインスリンレセプター-エクソン１１、１００μｌの試薬混合物当たり５０００ｃｐｍに相当するＡ１４ Ｔｙｒ[１２５Ｉ]-ヒトインスリンのある量の貯蔵溶液、１２μｌの１：１０００に希釈したＦ１２抗体、３ｍｌのＳＰＡ-ビーズ及び総量を１２ｍｌにする結合バッファからなる。次いで、総量１００μｌを加え、希釈物を適当な試料から作製する。１００μｌの試薬混合物を希釈物に加え、試料をゆっくりと撹拌しながら１６時間インキュベートする。次いで、この相を１分間遠心分離して分離し、プレートをＴｏｐｃｏｕｎｔｅｒにて計数する。結合データは、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ２.０１(GraphPad Software, San Diego, CA)に非線形回帰アルゴリズムを用いてフィッティングする。
Ｂ３Ｑ,Ｂ１０Ｓ,ｄｅｓＢ２６,Ｂ２８Ｅ,-ｄｅｓＢ３０,Ａ２１Ｇのインスリンレセプター親和性は９．１％に測定された。
アッセイ(III)
インスリンアナログの生物学的能力、ラットフリー脂肪細胞アッセイ
ラットを屠殺し、精巣上体脂肪パットを取り出し、分解バッファにおく。勢いよく振とうしながら３７℃で１時間分解を行う。組織細片を取り除くために細胞懸濁液を濾過し、脂肪細胞を２回洗浄し、インキュベーションバッファに再懸濁する。０．１ｍｌの細胞懸濁液は、１０μｌのグルコース溶液および１０μｌのインスリン又は他の化合物と共に、ゆっくりと振とうしながら３７℃で２時間インキュベートする。１５０μｌのシンチレーターを加えてインキュベートを止め、計数する。
内部標準および未知試料のＥＣ５０を比較することによって能力の算出を行う。曲線のフィッティングは、一定の最低及び最大の応答を予想する４パラメータロジスティックモデルである。
インスリンアナログの生物学的能力、ラットフリー脂肪細胞アッセイ
ラットを屠殺し、精巣上体脂肪パットを取り出し、分解バッファにおく。勢いよく振とうしながら３７℃で１時間分解を行う。組織細片を取り除くために細胞懸濁液を濾過し、脂肪細胞を２回洗浄し、インキュベーションバッファに再懸濁する。０．１ｍｌの細胞懸濁液は、１０μｌのグルコース溶液および１０μｌのインスリン又は他の化合物と共に、ゆっくりと振とうしながら３７℃で２時間インキュベートする。１５０μｌのシンチレーターを加えてインキュベートを止め、計数する。
内部標準および未知試料のＥＣ５０を比較することによって能力の算出を行う。曲線のフィッティングは、一定の最低及び最大の応答を予想する４パラメータロジスティックモデルである。
アッセイ(IV)
ヒトインスリン様増殖因子-１レセプター(ｈＩＧＦ-１Ｒ)に対するインスリンアナログの結合
ヒトインスリン様増殖因子-１レセプター(ｈＩＧＦ-１Ｒ)に対するインスリンアナログの親和性は、ＳＰＡ(シンチレーション近接アッセイ)マイクロタイタープレート抗体キャプチャアッセイにて測定することができる。抗マウスＰＶＴ ＳＰＡビーズ(５００ｍｇ、GE Life Sciences # RPNQ0017)は、２５ｍｌの結合用バッファ(１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＭｇＳＯ４、０．０２５％ツイーン-２０、ｐＨ＝７．８)と混合する。単一９６ウェルマイクロタイタープレート(Optiplate-96 Perkin-Elmer # 6005190)のための混合試薬は、４０μｌの精製された組み換えｈＩＧＦ-１Ｒ(Novo Nordisk A/S)、１２μｌの抗ｈＩＧＦ-１Ｒモノクローナル抗体(クローン２４−３１)の１：１６希釈物、３ｍｌのＳＰＡビーズ懸濁物及び全量１２ｍｌになるまでの結合バッファからなる。次いで、２５μｌのＩＧＦ-１の一連の希釈物に、インスリン又はインスリンアナログ、１００μｌの混合試薬および１００００ｃｐｍに相当する[１２５Ｉ]Ａ１４Ｔｙｒ-ヒトＩＧＦ-１の２５μｌの希釈物を加える。試料は、穏やかに撹拌しながら室温で１６時間インキュベートする。次いで、プレートを１０００ｒｐｍにて１分間遠心し、Ｐａｃｋａｒｄ ＴｏｐＣｏｕｎｔ ＮＸＴにて計数する。結合データは、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ４．０３(GraphPad Software, San Diego, CA)の４-パラメータ非線形回帰アルゴリズム(Ｓ字形用量-反応)を用いてフィットさせる。
ヒトインスリン様増殖因子-１レセプター(ｈＩＧＦ-１Ｒ)に対するインスリンアナログの結合
ヒトインスリン様増殖因子-１レセプター(ｈＩＧＦ-１Ｒ)に対するインスリンアナログの親和性は、ＳＰＡ(シンチレーション近接アッセイ)マイクロタイタープレート抗体キャプチャアッセイにて測定することができる。抗マウスＰＶＴ ＳＰＡビーズ(５００ｍｇ、GE Life Sciences # RPNQ0017)は、２５ｍｌの結合用バッファ(１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＭｇＳＯ４、０．０２５％ツイーン-２０、ｐＨ＝７．８)と混合する。単一９６ウェルマイクロタイタープレート(Optiplate-96 Perkin-Elmer # 6005190)のための混合試薬は、４０μｌの精製された組み換えｈＩＧＦ-１Ｒ(Novo Nordisk A/S)、１２μｌの抗ｈＩＧＦ-１Ｒモノクローナル抗体(クローン２４−３１)の１：１６希釈物、３ｍｌのＳＰＡビーズ懸濁物及び全量１２ｍｌになるまでの結合バッファからなる。次いで、２５μｌのＩＧＦ-１の一連の希釈物に、インスリン又はインスリンアナログ、１００μｌの混合試薬および１００００ｃｐｍに相当する[１２５Ｉ]Ａ１４Ｔｙｒ-ヒトＩＧＦ-１の２５μｌの希釈物を加える。試料は、穏やかに撹拌しながら室温で１６時間インキュベートする。次いで、プレートを１０００ｒｐｍにて１分間遠心し、Ｐａｃｋａｒｄ ＴｏｐＣｏｕｎｔ ＮＸＴにて計数する。結合データは、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ４．０３(GraphPad Software, San Diego, CA)の４-パラメータ非線形回帰アルゴリズム(Ｓ字形用量-反応)を用いてフィットさせる。
アッセイ(V)
インスリンアナログの持効型アナログとの混合能、ＮＭＲベースの方法
ＮＭＲスペクトルのタンパク質及びペプチドからのシグナルは、局所の化学環境に非常に影響される。その結果、我々は、インスリンの混合能のためのプローブにＮＭＲシグナルを用いることができる。１５Ｎ標識されたｄｅｓＢ３０インスリンについて、１Ｈ−１５Ｎ ＨＳＱＣ ＮＭＲスペクトルのＮＨ基からのシグナルの位置は公知である。１５Ｎ標識ｄｅｓＢ３０インスリンを非標識のアナログと混合した場合の１Ｈ−１５Ｎ ＮＭＲスペクトルの変化をモニターすることができる。ｄｅｓＢ３０インスリンの１Ｈ−１５Ｎ ＨＳＱＣ ＮＭＲスペクトルおよびあるアナログと混合したｄｅｓＢ３０のスペクトルを比較する。アナログが混合物中に存在する場合に１５Ｎ ｄｅｓＢ３０の１Ｈ−１５Ｎ ＨＳＱＣスペクトルに新規なピークが現れた場合、１５Ｎ ｄｅｓＢ３０インスリンのＮＨ基の局所の環境における変化を示す。また、これは、二量体／六量体の混合が形成されたことが、２つの成分が混合可能でないことを意味することを示す。
１Ｈ−１５Ｎ ＨＳＱＣ ＮＭＲスペクトルは、コールドプローブを備えたＶａｒｉａｎ Ｉｎｏｖａ６００ＮＭＲ分光光度計にて記録する。すべてのデータは３７℃の温度で再記録する。インスリン(１５Ｎ ｄｅｓＢ３０および選択されたアナログ)は別々に水に溶解し、混合し、最終溶媒系は、３０ｍＭ フェノール-ｄ、１０ｍＭ ＮａＣｌ、１４ｍｇ／ｍｌ プロピレングリコール-ｄ及び８ｍＭ リン酸緩衝液ｐＨ７．４、０．１ｍＭ Ｚｎ、９０％Ｈ２Ｏ／１０％Ｄ２Ｏである。
インスリン濃度は、０．２ｍＭ １５Ｎ ｄｅｓＢ３０及び０．０５ｍＭの選択されたインスリンアナログである。比較のために、１５Ｎ ｄｅｓＢ３０のＮＭＲスペクトルを同一の溶媒条件下で記録する。
このアッセイにおいて試験される本発明に係るインスリンアナログがｄｅｓＢ３０インスリンと混合可能である場合、これは、本発明に係るインスリンアナログがＢ２９内の付加したアシル基を除いて分子のこの領域内にｄｅｓＢ３０インスリンと同じアミノ酸組成を有するインスリンデテミルとも混合可能であろうことを示す。
インスリンアナログの持効型アナログとの混合能、ＮＭＲベースの方法
ＮＭＲスペクトルのタンパク質及びペプチドからのシグナルは、局所の化学環境に非常に影響される。その結果、我々は、インスリンの混合能のためのプローブにＮＭＲシグナルを用いることができる。１５Ｎ標識されたｄｅｓＢ３０インスリンについて、１Ｈ−１５Ｎ ＨＳＱＣ ＮＭＲスペクトルのＮＨ基からのシグナルの位置は公知である。１５Ｎ標識ｄｅｓＢ３０インスリンを非標識のアナログと混合した場合の１Ｈ−１５Ｎ ＮＭＲスペクトルの変化をモニターすることができる。ｄｅｓＢ３０インスリンの１Ｈ−１５Ｎ ＨＳＱＣ ＮＭＲスペクトルおよびあるアナログと混合したｄｅｓＢ３０のスペクトルを比較する。アナログが混合物中に存在する場合に１５Ｎ ｄｅｓＢ３０の１Ｈ−１５Ｎ ＨＳＱＣスペクトルに新規なピークが現れた場合、１５Ｎ ｄｅｓＢ３０インスリンのＮＨ基の局所の環境における変化を示す。また、これは、二量体／六量体の混合が形成されたことが、２つの成分が混合可能でないことを意味することを示す。
１Ｈ−１５Ｎ ＨＳＱＣ ＮＭＲスペクトルは、コールドプローブを備えたＶａｒｉａｎ Ｉｎｏｖａ６００ＮＭＲ分光光度計にて記録する。すべてのデータは３７℃の温度で再記録する。インスリン(１５Ｎ ｄｅｓＢ３０および選択されたアナログ)は別々に水に溶解し、混合し、最終溶媒系は、３０ｍＭ フェノール-ｄ、１０ｍＭ ＮａＣｌ、１４ｍｇ／ｍｌ プロピレングリコール-ｄ及び８ｍＭ リン酸緩衝液ｐＨ７．４、０．１ｍＭ Ｚｎ、９０％Ｈ２Ｏ／１０％Ｄ２Ｏである。
インスリン濃度は、０．２ｍＭ １５Ｎ ｄｅｓＢ３０及び０．０５ｍＭの選択されたインスリンアナログである。比較のために、１５Ｎ ｄｅｓＢ３０のＮＭＲスペクトルを同一の溶媒条件下で記録する。
このアッセイにおいて試験される本発明に係るインスリンアナログがｄｅｓＢ３０インスリンと混合可能である場合、これは、本発明に係るインスリンアナログがＢ２９内の付加したアシル基を除いて分子のこの領域内にｄｅｓＢ３０インスリンと同じアミノ酸組成を有するインスリンデテミルとも混合可能であろうことを示す。
アッセイ(VI)
単量体／二量体平衡の評価、ＮＵＶ−ＣＤベースの方法
インスリンアナログの単量体化、ＮＵＶ−ＣＤ
３５０−２５０ｎｍのＮＵＶ−ＣＤ(近ＵＶ円二色性)スペクトルはチロシン発色団の環境を反映し、凝集に非常に敏感であり、(＋)-１０-カンフルスルホン酸にて較正する。ＣＤは、近ＵＶ範囲(２５０−３５０ｎｍ)のタンパク質のモル濃度に正規化したΔε(Ｍ−１ｃｍ−１)として表され、濃度に対する２７６ｎｍのシグナルは単量体化のレポーターとして用いる。この試験は、インスリンアナログが主に単量体形態であるか否かを示す。
単量体／二量体平衡の評価、ＮＵＶ−ＣＤベースの方法
インスリンアナログの単量体化、ＮＵＶ−ＣＤ
３５０−２５０ｎｍのＮＵＶ−ＣＤ(近ＵＶ円二色性)スペクトルはチロシン発色団の環境を反映し、凝集に非常に敏感であり、(＋)-１０-カンフルスルホン酸にて較正する。ＣＤは、近ＵＶ範囲(２５０−３５０ｎｍ)のタンパク質のモル濃度に正規化したΔε(Ｍ−１ｃｍ−１)として表され、濃度に対する２７６ｎｍのシグナルは単量体化のレポーターとして用いる。この試験は、インスリンアナログが主に単量体形態であるか否かを示す。
Claims (15)
- ヒトＢ鎖の位置Ｂ２２−Ｂ３０における少なくとも一のアミノ酸残基が、インスリンの単量体形態の形成を促す他のアミノ酸残基と置換されており、さらにＢ鎖の位置１０における天然のＨｉｓアミノ酸残基がＩｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｐｈｅ又はＳｅｒと置換しており、場合によってヒトＢ鎖の位置Ｂ２２−Ｂ３０の一又は複数のアミノ酸残基が欠失している、速効型インスリンアナログ。
- ヒトＢ鎖の位置Ｂ２２−Ｂ３０における少なくとも一のアミノ酸残基が、インスリンの単量体形態の形成を促す他のアミノ酸残基と置換されており、さらにＢ鎖の位置１０における天然のＨｉｓアミノ酸残基がＩｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ又はＰｈｅと置換しており、場合によってヒトＢ鎖の位置Ｂ２２−Ｂ３０の一又は複数のアミノ酸残基が欠失している、速効型インスリンアナログ。
- Ｂ鎖の位置１０における天然のＨｉｓアミノ酸残基がＩｌｅ又はＶａｌに置換されている、請求項１に記載のインスリンアナログ。
- Ｂ鎖の位置１０における天然のＨｉｓアミノ酸残基がＶａｌ又はＰｈｅに置換されている、請求項１に記載のインスリンアナログ。
- Ｂ鎖の位置１０における天然のＨｉｓアミノ酸残基がＡｌａ又はＰｈｅに置換されている、請求項１に記載のインスリンアナログ。
- Ｂ鎖の位置１０における天然のＨｉｓアミノ酸残基がＰｈｅ又はＳｅｒに置換されている、請求項１に記載のインスリンアナログ。
- ヒトＢ鎖の位置Ｂ２２−Ｂ３０の１−２のアミノ酸残基が他のアミノ酸に置換されている、請求項１から６のいずれか一に記載のインスリンアナログ。
- ヒトＢ鎖の位置Ｂ２２−Ｂ３０の１のアミノ酸残基が他のアミノ酸に置換されている、請求項１から６のいずれか一に記載のインスリンアナログ。
- 位置Ｂ２２−Ｂ３０内のアミノ酸置換がＧｌｕ又はＡｓｐ残基である、請求項１から８のいずれか一に記載のインスリンアナログ。
- 位置Ｂ２７のアミノ酸がＧｌｕである、請求項１から８のいずれか一に記載のインスリンアナログ。
- 位置Ｂ２８のアミノ酸がＧｌｕである、請求項１から８のいずれか一に記載のインスリンアナログ。
- 位置Ｂ３０のアミノ酸が欠失している、請求項１から１１のいずれか一に記載のインスリンアナログ。
- 位置Ｂ２５、Ｂ２６又はＢ２７のアミノ酸が欠失している、請求項１から１１のいずれか一に記載のインスリンアナログ。
- 請求項１から１３のいずれか一に記載のインスリンアナログを持効型インスリンアナログないしは誘導体との混合物で含有する薬学的製剤。
- 持効型インスリンがＬｙｓＢ２９(Ｎε-テトラデカノイル)ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン(インスリンデテミル)、又はＡ２１Ｇｌｙ,Ｂ３１Ａｒｇ,Ｂ３２Ａｒｇヒトインスリン(インスリングラルギン)である、請求項１４に記載の製薬的組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP07114216 | 2007-08-13 | ||
| PCT/EP2008/060597 WO2009021956A2 (en) | 2007-08-13 | 2008-08-12 | Rapid acting insulin analogues |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2010535842A true JP2010535842A (ja) | 2010-11-25 |
Family
ID=39877162
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2010520563A Pending JP2010535842A (ja) | 2007-08-13 | 2008-08-12 | 速効型インスリンアナログ |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP2178911A2 (ja) |
| JP (1) | JP2010535842A (ja) |
| CN (1) | CN101796071A (ja) |
| WO (1) | WO2009021956A2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2019535733A (ja) * | 2016-11-21 | 2019-12-12 | ケース ウェスタン リザーブ ユニバーシティＣａｓｅ Ｗｅｓｔｅｒｎｒｅｓｅｒｖｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ | 安定性が増強された速効性インスリン類似体 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SG11201601477VA (en) | 2013-09-30 | 2016-04-28 | Wockhardt Ltd | Pharmaceutical composition |
| FR3083700B1 (fr) * | 2018-07-13 | 2021-03-12 | Adocia | Formulation thermostable d'insuline humaine a21g |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PH25772A (en) * | 1985-08-30 | 1991-10-18 | Novo Industri As | Insulin analogues, process for their preparation |
| CN101060856B (zh) * | 2004-11-22 | 2011-01-19 | 诺和诺德公司 | 可溶、稳定的含胰岛素制剂 |
| US20070086952A1 (en) * | 2005-09-29 | 2007-04-19 | Biodel, Inc. | Rapid Acting and Prolonged Acting Inhalable Insulin Preparations |
| JP2009527526A (ja) * | 2006-02-21 | 2009-07-30 | ノボ・ノルデイスク・エー／エス | 単鎖インスリンのアナログとその製薬的製剤 |
-
2008
- 2008-08-12 EP EP08803019A patent/EP2178911A2/en not_active Withdrawn
- 2008-08-12 CN CN200880103343A patent/CN101796071A/zh not_active Withdrawn
- 2008-08-12 JP JP2010520563A patent/JP2010535842A/ja active Pending
- 2008-08-12 WO PCT/EP2008/060597 patent/WO2009021956A2/en active Application Filing
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2019535733A (ja) * | 2016-11-21 | 2019-12-12 | ケース ウェスタン リザーブ ユニバーシティＣａｓｅ Ｗｅｓｔｅｒｎｒｅｓｅｒｖｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ | 安定性が増強された速効性インスリン類似体 |
| JP7286160B2 (ja) | 2016-11-21 | 2023-06-05 | ケース ウェスタン リザーブ ユニバーシティ | 安定性が増強された速効性インスリン類似体 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2009021956A3 (en) | 2009-04-30 |
| CN101796071A (zh) | 2010-08-04 |
| WO2009021956A2 (en) | 2009-02-19 |
| EP2178911A2 (en) | 2010-04-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5710253B2 (ja) | 速効型インスリンアナログ | |
| JP6657230B2 (ja) | インクレチン−インスリンコンジュゲート | |
| US20090069216A1 (en) | Single-Chain Insulin Analogues and Pharmaceutical Formulations Thereof | |
| US8343914B2 (en) | Fibrillation resistant proteins | |
| US8815798B2 (en) | Insulin analogues containing additional disulfide bonds | |
| US20040235710A1 (en) | Pre-mixes of glp-1 and basal insulin | |
| US20110152185A1 (en) | Pharmaceutical Compositions Comprising GLP-1 Peptides or Extendin-4 and a Basal Insulin Peptide | |
| JP2008533100A (ja) | Ｐｅｇ化された単鎖インスリン | |
| KR20210102347A (ko) | 인슐린 수용체 결합 친화성이 감소된 인슐린 유사체 | |
| KR20130036290A (ko) | 추가 이황화 결합을 함유하는 인슐린 유도체 | |
| US20230192801A1 (en) | Novel insulin analogues and uses thereof | |
| US20180244743A1 (en) | Novel Insulin Derivatives and the Medical Uses Hereof | |
| JP6013330B2 (ja) | 追加のジスルフィド結合を含有するヒトインスリン | |
| JP2010535842A (ja) | 速効型インスリンアナログ | |
| US12122818B2 (en) | Insulin analogues and uses thereof | |
| WO2013176560A1 (en) | An insulin analogue or its pharmaceutically acceptable salt, pharmaceutical composition with prolonged therapeutic effect, use of the insulin analogue, dosage method and method of treatment of diabetes |