JP2010529186A - 共役物の製造の改良または共役物の製造 - Google Patents
共役物の製造の改良または共役物の製造 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2010529186A JP2010529186A JP2010511730A JP2010511730A JP2010529186A JP 2010529186 A JP2010529186 A JP 2010529186A JP 2010511730 A JP2010511730 A JP 2010511730A JP 2010511730 A JP2010511730 A JP 2010511730A JP 2010529186 A JP2010529186 A JP 2010529186A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- molecule
- backbone
- labeled
- ligand
- thiol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 75
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 59
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims abstract description 51
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 18
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 17
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 claims abstract description 14
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 53
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 45
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 38
- -1 acyl azides Chemical class 0.000 claims description 36
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 31
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 claims description 29
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 claims description 28
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 claims description 25
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 25
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 19
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 19
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 19
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical class ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- ATGUDZODTABURZ-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-ylideneazanium;chloride Chemical compound Cl.N=C1CCCS1 ATGUDZODTABURZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 16
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 claims description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 13
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 12
- JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate Chemical group C1CC(CN2C(C=CC2=O)=O)CCC1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 9
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 7
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 5
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- PVGATNRYUYNBHO-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)butanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCN1C(=O)C=CC1=O PVGATNRYUYNBHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- BQWBEDSJTMWJAE-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[(2-iodoacetyl)amino]benzoate Chemical compound C1=CC(NC(=O)CI)=CC=C1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O BQWBEDSJTMWJAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 claims description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 3
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 150000003918 triazines Chemical class 0.000 claims description 3
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 claims description 2
- 229920002807 Thiomer Polymers 0.000 claims description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 2
- 229940064734 aminobenzoate Drugs 0.000 claims description 2
- 150000001502 aryl halides Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 2
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 claims description 2
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 2
- 239000003504 photosensitizing agent Substances 0.000 claims description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 2
- YBBRCQOCSYXUOC-UHFFFAOYSA-N sulfuryl dichloride Chemical class ClS(Cl)(=O)=O YBBRCQOCSYXUOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 101000945318 Homo sapiens Calponin-1 Proteins 0.000 claims 1
- 101000652736 Homo sapiens Transgelin Proteins 0.000 claims 1
- 102100031013 Transgelin Human genes 0.000 claims 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims 1
- ZQWPRMPSCMSAJU-UHFFFAOYSA-N methyl cyclohexanecarboxylate Chemical compound COC(=O)C1CCCCC1 ZQWPRMPSCMSAJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 57
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical group O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 55
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 55
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 33
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 25
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 20
- FPKVOQKZMBDBKP-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)C1CCC(CN2C(C=CC2=O)=O)CC1 FPKVOQKZMBDBKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 19
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 19
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 19
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 19
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 16
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 13
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 13
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 11
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 11
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 11
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 10
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 9
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 9
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 8
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 8
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 7
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 7
- 238000006177 thiolation reaction Methods 0.000 description 7
- 101001024703 Homo sapiens Nck-associated protein 5 Proteins 0.000 description 6
- 102100036946 Nck-associated protein 5 Human genes 0.000 description 6
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 6
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 5
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 5
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 5
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- LLXVXPPXELIDGQ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)benzoate Chemical compound C=1C=CC(N2C(C=CC2=O)=O)=CC=1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O LLXVXPPXELIDGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QYPPJABKJHAVHS-UHFFFAOYSA-N agmatine Chemical compound NCCCCNC(N)=N QYPPJABKJHAVHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 4
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 4
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UVGHPGOONBRLCX-NJSLBKSFSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-[5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]hexanoate Chemical compound C([C@H]1[C@H]2NC(=O)N[C@H]2CS1)CCCC(=O)NCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O UVGHPGOONBRLCX-NJSLBKSFSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012115 Alexa Fluor 660 Substances 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 3
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 3
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)C1CCC(CN2C(C=CC2=O)=O)CC1 VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- FLCQLSRLQIPNLM-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 2-acetylsulfanylacetate Chemical compound CC(=O)SCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O FLCQLSRLQIPNLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GERXSZLDSOPHJV-UHFFFAOYSA-N (4-nitrophenyl) 2-iodoacetate Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(OC(=O)CI)C=C1 GERXSZLDSOPHJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003923 2,5-pyrrolediones Chemical class 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IKYJCHYORFJFRR-UHFFFAOYSA-N Alexa Fluor 350 Chemical compound O=C1OC=2C=C(N)C(S(O)(=O)=O)=CC=2C(C)=C1CC(=O)ON1C(=O)CCC1=O IKYJCHYORFJFRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JLDSMZIBHYTPPR-UHFFFAOYSA-N Alexa Fluor 405 Chemical compound CC[NH+](CC)CC.CC[NH+](CC)CC.CC[NH+](CC)CC.C12=C3C=4C=CC2=C(S([O-])(=O)=O)C=C(S([O-])(=O)=O)C1=CC=C3C(S(=O)(=O)[O-])=CC=4OCC(=O)N(CC1)CCC1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O JLDSMZIBHYTPPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WEJVZSAYICGDCK-UHFFFAOYSA-N Alexa Fluor 430 Chemical compound CC[NH+](CC)CC.CC1(C)C=C(CS([O-])(=O)=O)C2=CC=3C(C(F)(F)F)=CC(=O)OC=3C=C2N1CCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O WEJVZSAYICGDCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZAINTDRBUHCDPZ-UHFFFAOYSA-M Alexa Fluor 546 Chemical compound [H+].[Na+].CC1CC(C)(C)NC(C(=C2OC3=C(C4=NC(C)(C)CC(C)C4=CC3=3)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=C1C=C2C=3C(C(=C(Cl)C=1Cl)C(O)=O)=C(Cl)C=1SCC(=O)NCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZAINTDRBUHCDPZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- IGAZHQIYONOHQN-UHFFFAOYSA-N Alexa Fluor 555 Chemical compound C=12C=CC(=N)C(S(O)(=O)=O)=C2OC2=C(S(O)(=O)=O)C(N)=CC=C2C=1C1=CC=C(C(O)=O)C=C1C(O)=O IGAZHQIYONOHQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N Caprylic acid Natural products CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- GONOPSZTUGRENK-UHFFFAOYSA-N benzyl(trichloro)silane Chemical compound Cl[Si](Cl)(Cl)CC1=CC=CC=C1 GONOPSZTUGRENK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N cyclohexanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCCC1 NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OOTFVKOQINZBBF-UHFFFAOYSA-N cystamine Chemical compound CCSSCCN OOTFVKOQINZBBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940099500 cystamine Drugs 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N glycinamide Chemical compound NCC(N)=O BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000005179 haloacetyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical class NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- BTWRPQHFJAFXJR-UHFFFAOYSA-N n-[2-(ethylaminooxy)ethoxy]ethanamine Chemical compound CCNOCCONCC BTWRPQHFJAFXJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N pyrene Chemical compound C1=CC=C2C=CC3=CC=CC4=CC=C1C2=C43 BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 125000000020 sulfo group Chemical group O=S(=O)([*])O[H] 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 2
- NJRXVEJTAYWCQJ-UHFFFAOYSA-N thiomalic acid Chemical compound OC(=O)CC(S)C(O)=O NJRXVEJTAYWCQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSWBNALIBMCQED-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 2-phenyl-2-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)C(C=1C=CC=CC=1)(C)SSC1=CC=CC=N1 XSWBNALIBMCQED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMJWDPGOWBRILU-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)phenyl]butanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCC(C=C1)=CC=C1N1C(=O)C=CC1=O PMJWDPGOWBRILU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YMXHPSHLTSZXKH-RVBZMBCESA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoate Chemical class C([C@H]1[C@H]2NC(=O)N[C@H]2CS1)CCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O YMXHPSHLTSZXKH-RVBZMBCESA-N 0.000 description 1
- QYEAAMBIUQLHFQ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-[3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoylamino]hexanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCNC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 QYEAAMBIUQLHFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AASYSXRGODIQGY-UHFFFAOYSA-N 1-[1-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)hexyl]pyrrole-2,5-dione Chemical compound O=C1C=CC(=O)N1C(CCCCC)N1C(=O)C=CC1=O AASYSXRGODIQGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DIYPCWKHSODVAP-UHFFFAOYSA-N 1-[3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)benzoyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)C1=CC=CC(N2C(C=CC2=O)=O)=C1 DIYPCWKHSODVAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CULQNACJHGHAER-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[(2-iodoacetyl)amino]benzoyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)C1=CC=C(NC(=O)CI)C=C1 CULQNACJHGHAER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASNTZYQMIUCEBV-UHFFFAOYSA-N 2,5-dioxo-1-[6-[3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoylamino]hexanoyloxy]pyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)CCCCCNC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 ASNTZYQMIUCEBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QEQDLKUMPUDNPG-UHFFFAOYSA-N 2-(7-amino-4-methyl-2-oxochromen-3-yl)acetic acid Chemical compound C1=C(N)C=CC2=C1OC(=O)C(CC(O)=O)=C2C QEQDLKUMPUDNPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 2-[6-(diethylamino)-3-(diethyliminiumyl)-3h-xanthen-9-yl]-5-sulfobenzene-1-sulfonate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1S([O-])(=O)=O IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NZKANSJXJCILHS-UHFFFAOYSA-N 2-[[1-[2-(4-fluorophenyl)-2-oxoethyl]piperidin-4-yl]methyl]-3h-isoindol-1-one;dihydrate;hydrochloride Chemical compound O.O.Cl.C1=CC(F)=CC=C1C(=O)CN1CCC(CN2C(C3=CC=CC=C3C2)=O)CC1 NZKANSJXJCILHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DKIDEFUBRARXTE-UHFFFAOYSA-N 3-mercaptopropanoic acid Chemical compound OC(=O)CCS DKIDEFUBRARXTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYKYXWQEBUNJCN-UHFFFAOYSA-N 3-methylfuran-2,5-dione Chemical compound CC1=CC(=O)OC1=O AYKYXWQEBUNJCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COCMHKNAGZHBDZ-UHFFFAOYSA-N 4-carboxy-3-[3-(dimethylamino)-6-dimethylazaniumylidenexanthen-9-yl]benzoate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](C)C)C=C2OC2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC(C([O-])=O)=CC=C1C(O)=O COCMHKNAGZHBDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DEQPBRIACBATHE-FXQIFTODSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-2-iminopentanoic acid Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCC(=N)C(=O)O)SC[C@@H]21 DEQPBRIACBATHE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- DNXDWMHPTVQBIP-ZQIUZPCESA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-[6-[(2-iodoacetyl)amino]hexyl]pentanamide Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCCCCNC(=O)CI)SC[C@@H]21 DNXDWMHPTVQBIP-ZQIUZPCESA-N 0.000 description 1
- UNGMOMJDNDFGJG-UHFFFAOYSA-N 5-carboxy-X-rhodamine Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC(C(=O)O)=CC=C1C1=C(C=C2C3=C4CCCN3CCC2)C4=[O+]C2=C1C=C1CCCN3CCCC2=C13 UNGMOMJDNDFGJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 5-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C21OC(=O)C1=CC(C(=O)O)=CC=C21 NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YMZMTOFQCVHHFB-UHFFFAOYSA-N 5-carboxytetramethylrhodamine Chemical compound C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=C(C(O)=O)C=C1C([O-])=O YMZMTOFQCVHHFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZIDRAQTRIQDX-UHFFFAOYSA-N 6-carboxy-x-rhodamine Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(C([O-])=O)C=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 WQZIDRAQTRIQDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VWOLRKMFAJUZGM-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyrhodamine 6G Chemical compound [Cl-].C=12C=C(C)C(NCC)=CC2=[O+]C=2C=C(NCC)C(C)=CC=2C=1C1=CC(C(O)=O)=CC=C1C(=O)OCC VWOLRKMFAJUZGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LKLWLDOUZJEHDY-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxy-2-oxochromene-3-carboxylic acid Chemical compound C1=C(O)C=C2OC(=O)C(C(=O)O)=CC2=C1 LKLWLDOUZJEHDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNDDWSAHNYBXKY-UHFFFAOYSA-N ATTO 425-2 Chemical compound CC1CC(C)(C)N(CCCC(O)=O)C2=C1C=C1C=C(C(=O)OCC)C(=O)OC1=C2 WNDDWSAHNYBXKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YIXZUOWWYKISPQ-UHFFFAOYSA-N ATTO 565 para-isomer Chemical compound [O-]Cl(=O)(=O)=O.C=12C=C3CCC[N+](CC)=C3C=C2OC=2C=C3N(CC)CCCC3=CC=2C=1C1=CC(C(O)=O)=CC=C1C(O)=O YIXZUOWWYKISPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PWZJEXGKUHVUFP-UHFFFAOYSA-N ATTO 590 meta-isomer Chemical compound [O-]Cl(=O)(=O)=O.C1=2C=C3C(C)=CC(C)(C)N(CC)C3=CC=2OC2=CC3=[N+](CC)C(C)(C)C=C(C)C3=CC2=C1C1=CC=C(C(O)=O)C=C1C(O)=O PWZJEXGKUHVUFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SLQQGEVQWLDVDF-UHFFFAOYSA-N ATTO 610-2 Chemical compound [O-]Cl(=O)(=O)=O.C1=C2CCC[N+](CCCC(O)=O)=C2C=C2C1=CC1=CC=C(N(C)C)C=C1C2(C)C SLQQGEVQWLDVDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KIDFITUZQAFBTK-UHFFFAOYSA-N ATTO 635-2 Chemical compound [O-]Cl(=O)(=O)=O.C1=C2C(C)=CC(C)(C)[N+](CCCC(O)=O)=C2C=C2C1=CC1=CC=C(N(C)C)C=C1C2(C)C KIDFITUZQAFBTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 1
- 239000012105 Alexa Fluor 514 Substances 0.000 description 1
- 239000012109 Alexa Fluor 568 Substances 0.000 description 1
- 239000012110 Alexa Fluor 594 Substances 0.000 description 1
- 239000012112 Alexa Fluor 633 Substances 0.000 description 1
- 239000012114 Alexa Fluor 647 Substances 0.000 description 1
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LLQPHQFNMLZJMP-UHFFFAOYSA-N Fentrazamide Chemical compound N1=NN(C=2C(=CC=CC=2)Cl)C(=O)N1C(=O)N(CC)C1CCCCC1 LLQPHQFNMLZJMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Chemical group 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101000798731 Homo sapiens Transmembrane 9 superfamily member 3 Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 108700031620 S-acetylthiorphan Proteins 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 102100032504 Transmembrane 9 superfamily member 3 Human genes 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000003647 acryloyl group Chemical group O=C([*])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 238000007259 addition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N aldrithiol Chemical compound C=1C=CC=NC=1SSC1=CC=CC=N1 HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- FOYVTVSSAMSORJ-UHFFFAOYSA-N atto 655 Chemical compound OC(=O)CCCN1C(C)(C)CC(CS([O-])(=O)=O)C2=C1C=C1OC3=CC4=[N+](CC)CCCC4=CC3=NC1=C2 FOYVTVSSAMSORJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHHMNDJIDRZZNT-UHFFFAOYSA-N atto 680 Chemical compound OC(=O)CCCN1C(C)(C)C=C(CS([O-])(=O)=O)C2=C1C=C1OC3=CC4=[N+](CC)CCCC4=CC3=NC1=C2 MHHMNDJIDRZZNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N dihydromaleimide Natural products O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VYXSBFYARXAAKO-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-[3-(ethylamino)-6-ethylimino-2,7-dimethylxanthen-9-yl]benzoate;hydron;chloride Chemical compound [Cl-].C1=2C=C(C)C(NCC)=CC=2OC2=CC(=[NH+]CC)C(C)=CC2=C1C1=CC=CC=C1C(=O)OCC VYXSBFYARXAAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WBJINCZRORDGAQ-UHFFFAOYSA-N ethyl formate Chemical compound CCOC=O WBJINCZRORDGAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000695 excitation spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N fluoranthrene Natural products C1=CC(C2=CC=CC=C22)=C3C2=CC=CC3=C1 GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- VANNPISTIUFMLH-UHFFFAOYSA-N glutaric anhydride Chemical compound O=C1CCCC(=O)O1 VANNPISTIUFMLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002795 guanidino group Chemical group C(N)(=N)N* 0.000 description 1
- 229940042795 hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000013101 initial test Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- DLBFLQKQABVKGT-UHFFFAOYSA-L lucifer yellow dye Chemical compound [Li+].[Li+].[O-]S(=O)(=O)C1=CC(C(N(C(=O)NN)C2=O)=O)=C3C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC3=C1N DLBFLQKQABVKGT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- CRMPEIJSRPNMRH-UHFFFAOYSA-N n-(1-hydrazinyl-1-oxo-4-sulfanylbutan-2-yl)acetamide Chemical compound CC(=O)NC(CCS)C(=O)NN CRMPEIJSRPNMRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- BRJCLSQFZSHLRL-UHFFFAOYSA-N oregon green 488 Chemical compound OC(=O)C1=CC(C(=O)O)=CC=C1C1=C2C=C(F)C(=O)C=C2OC2=CC(O)=C(F)C=C21 BRJCLSQFZSHLRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- VYNDHICBIRRPFP-UHFFFAOYSA-N pacific blue Chemical compound FC1=C(O)C(F)=C2OC(=O)C(C(=O)O)=CC2=C1 VYNDHICBIRRPFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004707 phenolate Chemical class 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229940043267 rhodamine b Drugs 0.000 description 1
- 229940020575 risamine Drugs 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- PDEFQWNXOUGDJR-UHFFFAOYSA-M sodium;2,2-dichloropropanoate Chemical compound [Na+].CC(Cl)(Cl)C([O-])=O PDEFQWNXOUGDJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 1
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 1
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- WGTODYJZXSJIAG-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine chloride Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O WGTODYJZXSJIAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000034005 thiol-disulfide exchange Effects 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
骨格分子であって、少なくとも一つの小分子リガンドが付着しているものを、標識化される分子に接触させるステップを含み、前記骨格分子と前記標識化される分子との間の結合を形成するために、前記骨格分子が前記標識化される分子上に存在するレシーバー部分、またはその場で形成されるレシーバー部分と反応性を有し、その結果、前記小分子リガンドが前記標識化される分子に間接的に結合する、方法を提供する。一つ(または複数の)小分子リガンド、骨格分子および標識化される分子の結合された組み合わせは、一般的に“共役物”と示される。
、lexa Fluor 532、Alexa Fluor 546、Alexa Fluor 555、Alexa Fluor 568、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 633、Alexa Fluor 647、Alexa Fluor 660、Alexa Fluor 680、Alexa Fluor 700、Alexa Fluor 750、Alexa Fluor 790、AMCA(7−アミノ−4−メチルクマリン−3−酢酸)、ATTO 390、ATTO 425、ATTO 465、ATTO 488、ATTO 495、ATTO 520、ATTO 532、ATTO 550、ATTO 565、ATTO 590、ATTO 594、ATTO 610、ATTO 611X、ATTO 620、ATTO 633、ATTO 635、ATTO 637、ATTO 647、ATTO 647N、ATTO 655、ATTO 680、ATTO 700、ATTO 725、ATTO 740、Bodipy色素、カスケードブルー、カスケードイエロー、Chromeo 488、Chromeo 494、Chromeo 546、Chromeo 642、Cy2 bis、Cy3 mono、Cy3.5 mono、Cy5 mono、Cy5.5 mono、Cy7 mono、DyLight 488、DyLight 549、DyLight 549、DyLight 649、DyLight 680、DyLight 800、フルオロセイン、HiLyte Fluor 488、HiLyte Fluor 555、HiLyte Fluor 647、HiLyte Fluor 680、HiLyte Fluor 750、IRDye 700DX、IRDye 800CW、IRDye 800RS、ルシファーイエロー、Marina Blue、オレゴングリーン488、Pacific Blue、Pacific Orange、PF−415、PF−488、PF−488−LSS、PF−500−LSS、PF−505、PF−510−LSS、PF−514−LSS、PF−520−LSS、PF−546、PF−555、PF−590、PF−610、PF−633、PF−647、PF−680、PF−700、PF−750、PF−780、PURETIME 14、PURETIME 20、PURETIME 22、PURETIME 325、ピレン(および関連アナログ)、ローダミンB、スルホローダミン101、スルホローダミンB(リサミンローダミン)、テトラメチルローダミン。他の有用なSMLsは、ビオチン、ビオチンの長鎖アナログ、イミノビオチンおよび、N1−(p−イソチオシアネートベンジル)−ジエチレントリアミン−N1,N2,N3,N3−四酢酸(DTTA)のようなキレート剤を含む。
実施例1.ポリ−マレイミド−フルオロセイン化−OVAの調製
pH7.2の100mMリン酸ナトリウム中の40mg/ml(約0.87mM;1ml)のオボアルブミン(OVA)(A5505;ロット 076K7045)を、限定量(オボアルブミンアミンに関して;1分子あたり20リジン、そのうち16は通常接近可能である;Batta PP,Int Biochem,23,1375−84,1991)である100μlのDMSOに溶解した22.5mM 5−(および6−)カルボキシフルオロセインスクシンイミジルエステル(分子プローブ C1311;ロット 25547W)と反応させた。25℃の暗所で30分経過後、さらに50μlのスルホ−スクシンイミジル−4−(N−マレイミドメチル)シクロヘキサン−1−カルボン酸塩(sSMCC)を、DMSO中の200mMストックから添加して、sSMCCおよびオボアルブミンのそれぞれの最終濃度である8.7mMおよび約0.76mMを得た。さらに暗所で30分間インキュベーションした後、ポリ−マレイミド−フルオロセイン化−OVAのサンプルをSephadex G−25(PD10カラム;GE Hearlthcare社製)で脱塩し、pH5.8のリン酸ナトリウム10mMの中に入れた。125μlの一定量を、775μlのpH5.8リン酸ナトリウム緩衝液および100μlの33%トレハロースストック(トレハロース1gと水2mlから調製)で希釈した。一定量(100μl;250μl)のトレハロース/ポリ−マレイミド−フルオロセイン化−OVA混合物は、液体窒素上でパキッと凍り、国際公開第2007/068906号パンフレットに記載の方法に従って、凍結乾燥された。
96ウェル Maxisorpプレート(Nunc社製)を50μl/ウェルの精製IgG(20μg/ml)またはストレプトアビジン(5μg/ml)で4℃で少なくとも16時間被覆した。使用前に被覆プレートをpH8.0の50mM Tris/150M NaCl(TBS)で5回洗浄して、TBS中で0.1%BSA(ブロッカー)を用いて30−60分間ブロックした。ブロックされたプレートを、必要であればブロッカー中に希釈された共役物とともにインキュベーションする前に、TBSを用いて5回洗浄した。
pH7.5の200mM Hepes/1mM EDTA中の、50μlのヤギ抗ウサギIgG(1ml/ml)を、5μlの10mg/ml ポリ−マレイミド−フルオロセイン化−OVAと混合した(実施例1からの物質を25μlの水で再懸濁した後)。4つの11μlの混合物を、1μlの2−イミノチオラン塩酸塩とインキュベートし(濃度変化:8mM、4mM、2mMおよび0mM)、最終濃度667μM、333μM、167μMおよび0μMを得た。25℃で一晩インキュベーションした後、サンプルを50mM トリス/150mM NaCl/0.1% BSA(ブロッカー)中で1/100に希釈され、ウサギIgGで被覆されたMazisorp マイクロタイタンプレート上で、25℃で1時間インキュベートした(実施例2)。TBSで5回洗浄した後、Wallac Vicotr上で励起/発光設定を485/535nm、およびCWランプエネルギーの設定を11720にして読み込む(ウェル当たり1秒)前に、100μlのTBSをそれぞれのウェルに添加した。
pH7.2の100mMリン酸ナトリウム中の40mg/ml(約0.87mM;125μl;5mg)のオボアルブミン(A5505;ロット 076K7045)を、6.25μlのDMSO中の60mM NHS−LC−ビオチンと反応させた。25℃で1時間経過後に、14μlのスルホ−スクシンイミジル−4−(N−マレイミドメチル)シクロヘキサン−1−カルボン酸塩(sSMCC)をDMSO中の200mMストックから添加して、sSMCCおよびオボアルブミンの最終濃度19.3mMおよび約0.75mMをそれぞれ得た。25℃で1時間経過後、ポリ−マレイミド−ビオチン化−オボアルブミンを、Sephadex G−25(NAP−5カラム;GE Hearlthcare社製)で脱塩して、pH5.8のリン酸ナトリウム300mMの中に入れた。サンプルを60μlのpH5.8のリン酸ナトリウム緩衝液および40μlの33%トレハロースストック(トレハロース1gと水2mlから調製)で希釈した。一定量(100μl;250μl)のトレハロース/ポリ−マレイミド−フルオロセイン化−OVA混合物は、液体窒素上でパキッと凍った。
一定量(10μl)のポリ−マレイミド−ビオチン−オボアルブミン骨格(実施例4)を、5μlのpH2.5の2M Hepes/10mM EDTA、5μlの1.1mg/ml 2−IT(8mMストック)および、変量(5μl、10μlまたは20μl;55μg、110μgまたは220μg)のヤギ抗ウサギIgG(11mg/ml)であって、モル比(骨格分子:抗体)(抗体のモル重量を150,000、骨格分子のモル重量を〜50,000と想定)を6.8:1(共役物6;C6)、2.43:1(C7)および1.7:1(C8)とするもの、とともに最終容量50μl(必要であれば水で埋め合わせる)で25℃で一晩インキュベートした。抗体のないコントロールの共役物も準備した(C5)。それぞれの共役物の一部をブロッカー中に1/10,000で希釈し(たとえば、一定の骨格細胞濃度を得るため)、他の一組の希釈物を0.1μl/mlに固定化された抗体濃度(共役物に依存して、1/10,000希釈またはそれ以上)を得るように調製した。サンプルを2つの分析で試験した。(i)ウサギIgGプレート使用のELISA。25℃で1時間インキュベートした後、プレートをTBSで洗浄して、ウェルを1/2,500ストレプトアビジン−HRP(Innova Biosciences #857−0005)で25℃で1時間インキュベートした。洗浄後、HRPをABTS試薬(pH5.0の50mM酢酸ナトリウム中の1mM ABTS、試薬1mlあたり1μlのH2O2を含む)を用いて検出した。(ii)ストレプトアビジンプレートを用いた捕捉分析。25℃で1時間インキュベートした後、プレートをTBSで洗浄し、ウェルをプロテインA HRPとともに25℃で1時間インキュベートした。洗浄後、捕捉化ヤギ抗体−骨格共役物に結合したプロテインA−HRPを、ABTS基板を用いて検出した。結果を図3に示す。
pH7.2の100mMリン酸ナトリウム中の40mg/ml(約0.87mM;125μl;5mg)のオボアルブミン(A5505;ロット 076K7045)の一定量を、1.25μlのDMSO中のNHS−LC−ビオチン(Pierce 21335)(10mM、30mMまたは60mM)の3つの溶液のうちの一つ、またはDMSO溶液のみ(コントロール骨格)と反応させた。25℃で1時間経過後に、13.5μlのスルホ−スクシンイミジル−4−(N−マレイミドメチル)シクロヘキサン−1−カルボン酸塩(sSMCC)をDMSO中の200mMストックから添加して、sSMCCおよびオボアルブミンの最終濃度17.9mMおよび約0.72mMをそれぞれ得た。25℃で1時間後、サンプル(151μl)を、Sephadex G−25(NAP−5カラム;GE Hearlthcare社製)で脱塩して、400μlのpH5.8の10mMリン酸ナトリウムの中に入れ、50μlのpH5.8のリン酸ナトリウム緩衝液および、50μlの33%トレハロースストック(トレハロース1gと水2mlから調製)を加えて、500μlとした。骨格分子のそれぞれの種類の5μlの一定量を、5μlのヤギ抗ウサギIgG(10mg/ml)、2μlのpH7.5の2M Hepes/10mM EDTA、6μlの水、および最後に2μlの2−IT(8mM)と混合した。25℃で一晩インキュベートした後、共役物をウサギIgGプレート上で、25℃で1時間インキュベートした(実施例2)。洗浄後、ウェルを1/10,000ストレプトアビジンHRPで25℃で1時間インキュベートして、実施例5に従ってABTS基板でHRP検出をする前に洗浄した。
pH7.2の100mMリン酸ナトリウム中の40mg/ml(約0.87mM;125μl;5mg)のオボアルブミン(A5505;ロット 076K7045)の4つの一定量を、それぞれ1.25μlのDMSO中の60mMのNHS−LC−ビオチン(Pierce 21335)と反応させた。25℃で1時間経過後に、サンプルを13.5μlのスルホ−スクシンイミジル−4−(N−マレイミドメチル)シクロヘキサン−1−カルボン酸塩(sSMCC)の3種類の濃度(200mM、100mMまたは50mM)のうちの一つ、またはDMSOのみと反応させて、sSMCCの最終濃度17.9mM、8.9mM、4.5mMおよび0mMをそれぞれ得た。25℃で1時間経過後、サンプル(151μl)を、Sephadex G−25(NAP−5カラム;GE Hearlthcare社製)で脱塩して、400μlのpH5.8の10mMリン酸ナトリウムの中に入れ、50μlのpH5.8のリン酸ナトリウム緩衝液および、50μlの33%トレハロースストック(トレハロース1gと水2mlから調製)を加えて、500μlとした。共役物が配置され、実施例6に記載されたとおりに、ELISAで分析された。
pH9.2のリン酸ナトリウム中の40mg/mlオボアルブミンを、2.5mM フルオロセインイソチオシアネート(25mM DMSOストックから)と、暗所で25℃で3時間反応させた。サンプルを脱塩してpH7.2の100mMリン酸ナトリウムに入れ緩衝液を交換し、20mg/mlに調製した。sSMCCを、DMSO中の200mMストックから、最終濃度が10mMとなるように添加した。さらに25℃で1時間インキュベートした後、サンプルを脱塩して、pH5.8のリン酸ナトリウムに入れた。
9A.アルデヒド誘導体を介して、デキストラン(水中80mg/ml;0.5ml)で分子量80,000(たとえば、1mM濃度)のものを、100μlの500mM 過ヨウ素酸ナトリウムと暗所で25℃で1時間反応させた。活性化デキストラン(0.6ml)を、Sephadex G−25(NAP−5カラム;GE Hearlthcare社製)で脱塩して、0.15M塩化ナトリウムに入れた(最終容量1.3ml)。pH9.2の150μlの重炭酸ナトリウム/10%(v/v)2,2−(エチレンジオキシ)ビス(エチルアミン)[EDTA]を添加して、25℃で30分経過後、得られたシッフ塩基を50mMのホウ素化水素ナトリウム(1M NaOHからの5Mストック)で減少させた。30分後、アミノ化デキストランをPD10カラムを用いて脱塩して、0.15M NaClに入れて、0.5ml分を採取した。アミン陽性の早期に溶出する高分子量物質(TNBSテストを使用;Bioconjugates techniques, GT Hermanson ISBN 0-12-342336-8,p112)を貯蔵した。貯蔵液中のアミン顔料は、1モルのデキストランあたり〜25モルであった。
pH6.0の50mM MES中の375μlのオボアルブミンを、pH6の50mM MES中の300μlの1M EDBAに添加した。75μlのEDCを、pH6の50mM MES緩衝液に添加した。オボアルブミンの架橋を防止するために過剰ジアミン(EDBA)を使用することで、カルボキシル(および、ひいてはアミンの導入)の転換度をEDC量を制限して調節する。100mM、20mMおよび4mM EDC(およびコントロール用の0mM)のストック濃度(最終濃度が、それぞれ10、2、0.4および0mM)を使用した。より大きなストック濃度は(500mMまたは1mM EDC)、より多くの数のアミンを導入したが、さらにsSMCCと反応したときに、沈殿したアミノ化骨格分子をもたらした。アミノ化骨格分子は、過剰ジアミン、EDCおよび反応副産物を除去するために、0.15M NaCl中で平衡化されたPD10上で脱塩された。脱塩化サンプルの最終量は1.25mlであった。TNBS試薬を用いたアミン含量の評価は、過剰ジアミン存在下の10、2および0.4mM EDCによる処理は、それぞれ、一つの骨格分子当たり、6、1および0個の新規アミン基を導入したことを示した。
ジアミンEDBAをシスタミンに代えた以外は、実施例10に記載されているとおりに反応を開始した。25℃で一晩インキュベーションした後、サンプルをSephadex G25で脱塩して、pH8の100mMのリン酸ナトリウム中に入れた。125μlの40mg/ml DTTを添加して、室温で30分間インキュベートした後に、サンプルを脱塩して、pH7.2の100mMのリン酸ナトリウムに入れた。チオール化サンプルを、迅速に2−3倍の過剰モル(チオールに対して)のヨードアセチル−LCビオチン(Pierce 21333、ロットDG56028)と、暗所で25℃で3時間反応させて、脱塩してpH7.2の100mMリン酸ナトリウムに入れ、その後、他の骨格−SML分子で記載されたように(たとえば、実施例7)、さらなる工程を行なった。
pH7.2の100mMのリン酸ナトリウム中の、アミノデキストランで分子量40,000(1モル当たり、9.3モルのアミン)(分子プローブ、D1861)(40mg/ml;1mM)を、DMSO中の100μlの5−(および6−)カルボキシフルオロセインスクシンイミジルエステル(分子プローブC1311;ロット25547W)と、暗所で25℃で16時間反応させた。200μlの骨格分子を、さらにDMSO中の20μlの200mMのヨード酢酸NHSエステルと、暗所で25℃で1時間反応させた。220μlのサンプルをNAP−5カラム上で脱塩して、450μlのpH5.8の10mMのリン酸ナトリウム中に入れ、33%トレハロースストック(トレハロース1gと水2mlから調製)を加えて、500μlとした。ヤギ抗ウサギIgG(5mg/ml)との共役を、以下の順で混合して、8μlの水、6μlの骨格/緩衝液混合物[4μlの骨格+2μlのpH7.5の2M Hepes/10mM EDTA]、4μlのIgGおよび2μlの8mMの2−イミノチオラン塩酸塩、暗所で25℃で一晩反応させて行われた。
ポリアミド−フルオロセイン化デキストラン骨格分子(実施例13)のサンプルが、40μlのpH7.0の200mM Hepes/1mM EDTAまたは水(コントロール、pH5.8)に取り込まれた。Hepes緩衝液中に取り込まれたサンプルは、4μlの様々な試薬で処理された:pH2.3の1.43mMメルカプトエタノール/50mMグリシン;pH2.3の1.43mMメルカプトエタノール/50mMグリシン;pH7.5の50mMグリシン、または水。サンプルを、蛍光発光プレートリーダーの直線範囲に入るシグナルを示すように希釈した。結果を図6に示す。蛍光発光はメルカプトエタノールによって優位に増加し、プロセスは30分以内に完了した(最終濃度1.43mM)。より高い濃度は、さらに蛍光発光を上昇させなかった(図示なし)。最終濃度0.143mMは最大蛍光発光を示すのに不十分であり、安定したシグナルに達するまでに、少なくとも120分間かかった。低分子量チオールを放出する2−イミノチオラン塩酸塩の分解を促進するグリシンの添加も、蛍光発光を促進した。この促進は30分以内に完了したが、高濃度のメルカプトエタノールに比べて優位に顕著でなかった。pH5.8での蛍光発光の経時的変化はなく、中和pH値で、グリシンまたはメルカプトエタノールの不存在下では、蛍光発光のわずかな増加が5時間後に示され、これはマレイミド官能基のゆっくりとした分解によって説明されるであろう。なぜSMCCがポリマレイミド−フルオロセイン化骨格を消光するのか明らかでないが、消光効果は、2−イミノチオラン塩酸塩を不活性化させるメルカプトエタノール/グリシンの混合物を使用すること、および迅速に過剰のマレイミド官能基の消光効果を緩和させるチオールを用いた付加反応を通じて、容易に逆になる。
Claims (52)
- 小分子リガンドを、前記リガンドで標識化される分子に間接的に結合させるための方法であって、
骨格分子であって、少なくとも一つの小分子リガンドが付着しているものを、標識化される分子に接触させるステップを含み、前記骨格分子と前記標識化される分子との間の結合を形成するために、前記骨格分子が前記標識化される分子上に存在するレシーバー部分、またはその場で形成されるレシーバー部分と反応性を有し、その結果、前記小分子リガンドを前記標識化される分子に間接的に結合させる、方法。 - 前記骨格分子と前記標識化される分子との反応前に、少なくとも一つの小分子リガンドを前記骨格分子に付着させるステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記小分子リガンドが前記骨格分子に共有結合的に付着している、請求項1または2に記載の方法。
- 前記小分子リガンドが化学量論的に過剰な骨格分子に接触している、請求項2または請求項2に従属する請求項3に記載の方法。
- 前記小分子リガンドが前記骨格分子と反応する能力に関して一価である、請求項2,3または4に記載の方法。
- 前記小分子リガンドが前記骨格分子上に存在するアミン基と反応する、請求項2〜5のいずれかに記載の方法。
- 前記小分子リガンドがN−ヒドロキシスクシンイミド誘導体、イソチオチアネート誘導体、トリアジン、スルホニルクロリド、アシルアジド、ハロゲン化アリール、およびアルデヒド、テトラフルオロフェニルエステルまたはイミドエステルを含む、請求項2〜6のいずれかに記載の方法。
- 前記小分子リガンドが蛍光色素分子、発色団、ビオチン、アビジン、金属イオンキレート剤、光反応性基、ヨウ素化可能部分、光増感剤、消光剤、ペプチドおよび低分子量薬剤よりなる群から選択される、請求項1〜7のいずれかに記載の方法。
- 前記低分子リガンドが、前記骨格への付着前に、1kD未満の分子量を有する、請求項1〜8のいずれかに記載の方法。
- 前記低分子リガンドが、前記骨格への付着前に、0.6kD未満の分子量を有する、請求項9に記載の方法。
- 前記骨格分子が、前記方法の実施前に、複数の求核基を含む、請求項1〜10のいずれかに記載の方法。
- 前記骨格分子が、前記方法の実施前に、複数の遊離アミン基を含む、請求項1〜11のいずれかに記載の方法。
- 前記骨格分子がポリペプチド、アミノ化デキストラン、チオール化ポリマー、活性化ポリエチレングリコール、デンドリマー、および活性化ビーズまたはナノ粒子よりなる群から選択されるポリマーを含む、請求項1〜12のいずれかに記載の方法。
- 前記骨格分子が、前記小分子リガンドの付着前に、少なくとも5kDの分子量を有する、請求項1〜13のいずれかに記載の方法。
- 前記骨格分子が、前記小分子リガンドの付着前に、少なくとも10kDの分子量を有する、請求項1〜14のいずれかに記載の方法。
- 前記骨格分子が、前記小分子リガンドの付着前に、少なくとも20kDの分子量を有する、請求項1〜15のいずれかに記載の方法。
- 前記骨格分子がオボアルブミン、デキストランまたは誘導化デキストランを含む、請求項1〜16のいずれかに記載の方法。
- 前記小分子リガンドの接着後、前記骨格分子が、前記標識化される分子上に存在するチオール基、またはその場で形成されるチオール基と反応する1つ以上のチオール反応性基を含む、請求項1〜17のいずれかに記載の方法。
- チオール基がチオール生成剤の作用によって前記標識化される分子上にその場で形成される、請求項1〜18のいずれかに記載の方法。
- 前記方法が、1つまたは複数の小分子リガンドが付着した前記骨格分子、前記標識化される分子、およびチオール生成剤の単一混合物中で接触させるステップを含む、請求項19に記載の方法。
- 前記チオール生成剤が2−イミノチオラン塩酸塩を含む、請求項19または20に記載の方法。
- 前記標識化される物質がポリペプチドを含む、請求項1〜21のいずれかに記載の方法。
- 前記標識化される物質が酵素、抗体または抗原結合断片または抗体の変異体を含む、請求項1〜22のいずれかに記載の方法。
- 少なくとも一つの小分子リガンドの付着の前または後に、前記骨格分子を1つ以上の活性化試薬に接触させるステップを含み、前記活性化試薬は前記骨格分子と反応して、前記標識化される分子上のレシーバー部分に対して反応性を有する1つ以上の基を形成する、請求項1〜23のいずれかに記載の方法。
- 前記活性化試薬がヘテロ二官能性である、請求項24に記載の方法。
- 前記活性化試薬と前記骨格分子との反応がチオール反応性基を前記骨格分子に導入し、チオール反応性基が続いて前記標識化される分子上に存在するチオール基、またはその場で形成されるチオール基と反応可能である、請求項24または25に記載の方法。
- 前記活性化試薬が前記骨格分子上に存在するアミン基と反応する、請求項24,25または26に記載の方法。
- 前記活性化試薬がN−ヒドロキシスクシンイミド誘導体を含む、請求項24〜27のいずれかに記載の方法。
- 前記活性化試薬が、スクシンイミジル−4−(N−マレイミドメチル)シクロヘキサン−1−カルボン酸塩(“SMCC”)、m−マレイミドベンゾイル−ヒドロキシスクシンイミドエステル(“MBS”)、スクシンイミジル(4−ヨードアセチル)アミノ安息香酸塩(“SIAB”)、N−(γ−マレイミドブチリルオキシ)スクシンイミドエステル(GMBS)、スクシンイミジル6−((ヨードアセチル)アミノ)ヘキサン酸塩(“SIAX”)、スクシンイミジル4−(((ヨードアセチル)アミノ)メチルシクロヘキサン−1−カルボン酸塩(“SIAC”)、およびこれらのスルホン酸化誘導体を含む群から選択される、請求項24〜28のいずれかに記載の方法。
- 前記小分子リガンドが、前記リガンドを前記骨格分子に付着させるために、前記骨格分子上に存在する部分と反応する求核基を含む、請求項1〜5のいずれかに記載の方法。
- 前記小分子リガンドがアミン基を含む、請求項30に記載の方法。
- 前記骨格分子が前記小分子リガンドと反応する1つ以上のアルデヒド基を含む、請求項30または31に記載の方法。
- 前記間接的結合反応を終止させるために、グリシンとチオールを前記反応混合物に加えるステップをさらに含む、請求項1〜32のいずれかに記載の方法。
- 前記グリシンと前記チオールが、25から100mMでpHが2.0〜2.6のグリシンと、5から25mMのチオールとを含む混合物として加えられる、請求項33に記載の方法。
- 請求項1〜34のいずれかに記載の方法における使用に適合した骨格分子であって、前記骨格分子は1つ以上の付着された小分子リガンド、および標識化される分子上に存在するレシーバー部分、またはその場で形成されるレシーバー部分に対して反応性を有する1つ以上の基を有する、骨格分子。
- 前記1つまたは複数の小分子リガンドが前記骨格分子に共有結合的に付着している、請求項35に記載の骨格分子。
- 付着された2つ以上の異なる小分子リガンドを有する、請求項35または36に記載の骨格分子。
- 前記標識化される分子上に存在するチオール基、またはその場で形成されるチオール基との反応に適した1つ以上のチオール反応性基を含む、請求項35,36または37のいずれかに記載の骨格分子。
- オボアルブミン、デキストランまたは誘導化デキストランを含む、請求項35〜38のいずれかに記載の骨格分子。
- 好ましくは部分的に、または高度に精製された、請求項35〜39のいずれかに記載の骨格分子の溶液を、少なくとも10mgs/mlの濃度で含む組成物。
- 請求項35〜39のいずれかに記載の骨格分子を含む組成物であって、好ましくは部分的に、または高度に精製された、凍結乾燥形態の組成物。
- 請求項1〜34のいずれかに記載の方法の実施において使用するためのキットであって、前記キットは請求項35〜39のいずれかに記載の骨格分子と、本発明に係る方法を実施するための説明書とを含む、キット。
- チオール生成剤をさらに含む、請求項42に記載のキット。
- 前記チオール生成剤が2−イミノチオラン塩酸塩を含む、請求項43に記載のキット。
- 緩衝剤、1つ以上の小分子リガンド、1つ以上の活性化試薬および1つ以上の標識化される分子のうち、1つ以上をさらに含む、請求項42,43または44のいずれかに記載のキット。
- 前記キットの少なくとも一つの試薬成分が、凍結乾燥形態および/または複数の一定分量として存在する、請求項42〜46のいずれかに記載のキット。
- 骨格分子組成物を含み、前記組成物が前記組成物中のそれぞれの骨格分子に付着した公知の平均数の小分子リガンドを有する、請求項39〜43のいずれかに記載のキット。
- 間接的に標識化される分子と、前記間接的に標識化される分子に付着された少なくとも一つの骨格分子と、前記骨格分子に付着された少なくとも一つの小分子リガンドラベルとを含む共役物。
- 請求項1〜32のいずれかに記載の方法で調製された、請求項48に記載の共役物。
- 前記小分子リガンドが前記骨格分子に共有結合的に付着し、かつ前記骨格分子が前記間接的に標識化される分子に共有結合的に付着している、請求項48または49に記載の共役物。
- 前記骨格分子がポリペプチド、デキストランまたは誘導化デキストランを含む、請求項48〜50のいずれかに記載の共役物。
- 前記骨格分子がオボアルブミンを含む、請求項48〜51のいずれかに記載の共役物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB0711560.3 | 2007-06-14 | ||
GBGB0711560.3A GB0711560D0 (en) | 2007-06-14 | 2007-06-14 | Improvements in or relating to production of conjugates |
PCT/GB2008/050438 WO2008152424A2 (en) | 2007-06-14 | 2008-06-12 | Improvements in or relating to production of conjugates |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010529186A true JP2010529186A (ja) | 2010-08-26 |
JP5444554B2 JP5444554B2 (ja) | 2014-03-19 |
Family
ID=38332139
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010511730A Active JP5444554B2 (ja) | 2007-06-14 | 2008-06-12 | 共役物の製造の改良または共役物の製造 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9176125B2 (ja) |
EP (1) | EP2171457B1 (ja) |
JP (1) | JP5444554B2 (ja) |
CN (1) | CN101790684B (ja) |
AU (1) | AU2008263586B2 (ja) |
CA (1) | CA2688646C (ja) |
DK (1) | DK2171457T3 (ja) |
GB (2) | GB0711560D0 (ja) |
NZ (1) | NZ581699A (ja) |
WO (1) | WO2008152424A2 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPWO2011129357A1 (ja) * | 2010-04-14 | 2013-07-18 | 栄研化学株式会社 | 標識化プローブ−水溶性担体複合体 |
JP2019531474A (ja) * | 2016-09-01 | 2019-10-31 | ライフ テクノロジーズ コーポレーション | 増強された蛍光のための組成物および方法 |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8524239B2 (en) | 2010-07-09 | 2013-09-03 | The United States of America as represented by the Secrectary, Department of Health and Human Services | Photosensitizing antibody-fluorophore conjugates |
JP6234817B2 (ja) * | 2010-09-23 | 2017-11-22 | バイオセプト, インコーポレイテッド | シグナル増幅のための方法と試薬 |
AU2015300915B2 (en) | 2014-08-08 | 2020-09-24 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Photo-controlled removal of targets in vitro and in vivo |
CA2994822C (en) | 2015-08-07 | 2023-01-03 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Near infrared photoimmunotherapy (nir-pit) of suppressor cells to treat cancer |
CA2994871A1 (en) | 2015-08-18 | 2017-02-23 | Aspyrian Therapeutics, Inc. | Phthalocyanine dye conjugates and their storage |
CA2994849A1 (en) | 2015-08-18 | 2017-02-23 | Aspyrian Therapeutics, Inc. | Compositions, combinations and related methods for photoimmunotherapy |
CN113698469B (zh) * | 2021-06-21 | 2023-04-21 | 深圳大学 | Svcv的宿主细胞膜结合蛋白的捕获方法和捕获试剂 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2003035830A2 (en) * | 2001-10-24 | 2003-05-01 | Beckman-Coulter, Inc. | Efficient synthesis of protein-oligonucleotide conjugates |
JP2004532028A (ja) * | 2001-04-10 | 2004-10-21 | エコル・ポリテクニック・フェデラル・ドゥ・ローザンヌ | O6−アルキルグアニン−dnaアルキルトランスフェラーゼ(agt)の使用方法 |
US20050106649A1 (en) * | 2003-11-13 | 2005-05-19 | Industrial Technology Research Institute | Polyallylamine conjugates and applications thereof for biological signal amplification |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20020168667A1 (en) * | 2001-03-23 | 2002-11-14 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Antigen detecting agent and antigen detecting kit, antigen detecting apparatus and antigen detecting method using the same |
-
2007
- 2007-06-14 GB GBGB0711560.3A patent/GB0711560D0/en not_active Ceased
-
2008
- 2008-06-12 EP EP08762548.9A patent/EP2171457B1/en active Active
- 2008-06-12 GB GB1000496.8A patent/GB2467041B/en active Active
- 2008-06-12 US US12/664,147 patent/US9176125B2/en active Active
- 2008-06-12 NZ NZ581699A patent/NZ581699A/xx not_active IP Right Cessation
- 2008-06-12 CA CA2688646A patent/CA2688646C/en active Active
- 2008-06-12 AU AU2008263586A patent/AU2008263586B2/en active Active
- 2008-06-12 DK DK08762548.9T patent/DK2171457T3/da active
- 2008-06-12 CN CN200880103454.4A patent/CN101790684B/zh active Active
- 2008-06-12 WO PCT/GB2008/050438 patent/WO2008152424A2/en active Application Filing
- 2008-06-12 JP JP2010511730A patent/JP5444554B2/ja active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004532028A (ja) * | 2001-04-10 | 2004-10-21 | エコル・ポリテクニック・フェデラル・ドゥ・ローザンヌ | O6−アルキルグアニン−dnaアルキルトランスフェラーゼ(agt)の使用方法 |
WO2003035830A2 (en) * | 2001-10-24 | 2003-05-01 | Beckman-Coulter, Inc. | Efficient synthesis of protein-oligonucleotide conjugates |
US20050106649A1 (en) * | 2003-11-13 | 2005-05-19 | Industrial Technology Research Institute | Polyallylamine conjugates and applications thereof for biological signal amplification |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
JPN5010009892; MCCALL M J: BIOCONJUGATE CHEMISTRY V1 N3, 19900101, P222-226, ACS * |
JPN5010009893; PECHAR M: JOURNAL OF BIOACTIVE AND COMPATIBLE POLYMERS V20 N4, 200507, P319-341, SAGE PUBLICATIONS LTD * |
JPN5010009894; CHAN HONG-LIN: PROTEOMICS V5 N11, 200507, P2908-2926 * |
JPN5010009895; VAIDYANATHAN GANESAN: BIOCONJUGATE CHEMISTRY V17 N4, 200607, P1085-1092 * |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPWO2011129357A1 (ja) * | 2010-04-14 | 2013-07-18 | 栄研化学株式会社 | 標識化プローブ−水溶性担体複合体 |
JP5675782B2 (ja) * | 2010-04-14 | 2015-02-25 | 栄研化学株式会社 | 標識化プローブ−水溶性担体複合体 |
JP2019531474A (ja) * | 2016-09-01 | 2019-10-31 | ライフ テクノロジーズ コーポレーション | 増強された蛍光のための組成物および方法 |
JP7216638B2 (ja) | 2016-09-01 | 2023-02-01 | ライフ テクノロジーズ コーポレーション | 増強された蛍光のための組成物および方法 |
JP2023025018A (ja) * | 2016-09-01 | 2023-02-21 | ライフ テクノロジーズ コーポレーション | 増強された蛍光のための組成物および方法 |
US11857643B2 (en) | 2016-09-01 | 2024-01-02 | Life Technologies Corporation | Compositions and methods for enhanced fluorescence |
US11865191B2 (en) | 2016-09-01 | 2024-01-09 | Life Technologies Corporation | Compositions and methods for enhanced fluorescence |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2688646C (en) | 2016-04-05 |
WO2008152424A3 (en) | 2009-02-05 |
GB2467041B (en) | 2013-01-23 |
NZ581699A (en) | 2012-08-31 |
CN101790684B (zh) | 2016-08-10 |
JP5444554B2 (ja) | 2014-03-19 |
GB0711560D0 (en) | 2007-07-25 |
EP2171457A2 (en) | 2010-04-07 |
AU2008263586B2 (en) | 2014-04-17 |
US20100184184A1 (en) | 2010-07-22 |
CN101790684A (zh) | 2010-07-28 |
DK2171457T3 (da) | 2013-10-21 |
GB2467041A (en) | 2010-07-21 |
US9176125B2 (en) | 2015-11-03 |
EP2171457B1 (en) | 2013-07-10 |
GB201000496D0 (en) | 2010-03-03 |
AU2008263586A1 (en) | 2008-12-18 |
CA2688646A1 (en) | 2008-12-18 |
WO2008152424A2 (en) | 2008-12-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5444554B2 (ja) | 共役物の製造の改良または共役物の製造 | |
Zhang et al. | Recent progress in enzymatic protein labelling techniques and their applications | |
US6083708A (en) | Polypeptide: dendrimer complexes | |
US10302632B2 (en) | Macromolecular conjugates for visualization and separation of proteins and cells | |
US4959306A (en) | Labeling design for a binding assay reagent | |
JP7398366B2 (ja) | 対称性ジメチルアルギニンの検出 | |
JP3524401B2 (ja) | 酵素抗体複合体およびその製造方法 | |
AU2011222742B2 (en) | Conjugation reactions | |
EP1780545B1 (en) | Probe complex | |
US4975532A (en) | Method to derivatize dextran | |
Poller et al. | Influence of different surface chemistries on the ultrasensitive on-chip detection of enrofloxacin in milk | |
US8877892B2 (en) | Conjugation reactions | |
Dhar et al. | A filtration method for rapid preparation of conjugates for immunoassay | |
CA2970845A1 (en) | Macromolecular conjugates for isolation, immobilization and visualization of proteins | |
JP2002323498A (ja) | バイオセンサー用測定チップ |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110608 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130423 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130719 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130726 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130920 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20131126 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20131203 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5444554 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R3D02 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |