JP2010528662A - Ｔ細胞サイトカイン誘導表面分子およびその使用 - Google Patents

Abstract

炎症に関与する機構のうちの１つは、活性化している単球系統由来マクロファージ（Ｍφ）によるサイトカインのアップレギュレーションであると考えられている。本発明は、サイトカインモジュレーター、および単球系統由来細胞におけるサイトカイン生成を変化させるためにサイトカインモジュレーターを使用するための方法を提供する。特に、本発明のサイトカインモジュレーターは、Ｔリンパ球のＴ細胞サイトカイン誘導表面分子（ＴＣＩＳＭ）−リガンドもしくは単球系統由来細胞の対応するＴＣＩＳＭ−レセプターに選択的に結合して、それによって、単球系統由来細胞におけるサイトカイン生成を変化させる。

Description

（発明の分野）
本発明は、サイトカインモジュレーター、および単球系統由来細胞におけるサイトカイン生成を変化させるために上記サイトカインモジュレーターを使用するための方法を提供する。

（発明の背景）
広範囲の種々の臨床状態は、急性および／もしくは慢性の炎症（関節リウマチ、多発性硬化症、クローン病、乾癬、乾癬性関節炎、グレーブス病、多腺性自己免疫症候群、遺伝性タンパク尿症候群、Ｉ型糖尿病、全身性エリテマトーデス、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫甲状腺炎、肝炎、後天性免疫不全疾患（ＨＩＶ）、対宿主性移植片病、同異種移植片疾患、喘息、皮膚浸潤性Ｔ細胞リンパ腫、ＨＴＬＶ−Ｉ関連皮膚浸潤性Ｔ細胞リンパ腫、ＨＴＬＶ−ＩＩ関連リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、突発性ＣＤ４＋Ｔリンパ球減少症、もしくは黒色腫が挙げられるが、これらに限定されない）によって媒介されている。上記炎症に関与する機構のうちの１つは、活性化している単球系統由来マクロファージ（Ｍφ）によるサイトカインのアップレギュレーションであると考えられている。例えば、病変部において生成される炎症促進性サイトカイン（例えば、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦa）およびインターロイキン−１β（ＩＬ−１β））は、慢性の病変部炎症を誘導しかつ維持することが示されてきた。関連する動物モデルにおける近年の研究では、Ｔ細胞（Ｔ_ｃ）がＭφ活性化において重要な役割を果たすことが示唆されている；しかし、Ｔ細胞サイトカイン（例えば、インターロイキン−４、インターロイキン−１０、およびインターロイキン−１３（ＩＬ−４、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３）は、抗炎症性の役割を果たすか、もしくはＴＮＦα／ＩＬ−１βアップレギュレーションを弱く誘導するにすぎないかのいずれかを示してきた。

従って、炎症を変化させて、急性および／もしくは慢性の炎症と関連する種々の臨床状態を処置することが必要である。

本発明のいくつかの局面は、サイトカインモジュレーターおよび単球系統由来細胞におけるサイトカイン生成を変化させるために上記サイトカインモジュレーターを使用するための方法に関する。いくつかの特定の実施形態において、本発明は、炎症促進性サイトカインモジュレーターおよび単球系統由来細胞（代表的には、ヒト単球系統由来細胞）における炎症促進性サイトカイン生成を変化させるために上記炎症促進性サイトカインモジュレーターを使用するための方法を提供する。いかなる理論にも束縛されることなく、単球系統由来細胞は、一旦異なるエフェクターＴ細胞集団と直接細胞間接触した状態になると、活性化されると考えられている。ＴＣＩＳＭ リガンドおよび／もしくはＴＣＩＳＭ レセプターにレベルでの適応性（すなわち、獲得）免疫を制御することによって、微生物感染（例えば、最近の皮膚感染）の間に先天性免疫をさらに考慮に入れる治療的介入が提供される。

本発明の一局面は、被験体の単球系統由来細胞におけるサイトカイン生成を変化させるための方法を提供し、上記方法は、サイトカインモジュレーターを上記被験体に投与する工程を包含し、ここで上記サイトカインモジュレーターは、Ｔリンパ球のＴ細胞サイトカイン誘導表面分子（ＴＣＩＳＭ）−リガンドもしくは単球系統由来細胞の対応するＴＣＩＳＭ−レセプターに選択的に結合し、上記ＴＣＩＳＭ−リガンドもしくは上記ＴＣＩＳＭ−レセプターへの上記サイトカインモジュレーターの選択的結合によって、単球系統由来細胞におけるサイトカイン生成が変化する。

いくつかの実施形態において、ＴＣＩＳＭ−リガンドは、表１（図１９）に列挙されるＴＣＩＳＭ−リガンドのうちの少なくとも１つを含む。これら実施形態において、いくつかの場合、上記ＴＣＩＳＭ−リガンドは、ＣＤ８１、ＣＤ２１、ＣＤ３１６、α−エノラーゼ、ＦＫＢＰ４、上記ＦＫＢＰマルチ遺伝子ファミリーの他のメンバー、もしくはこれらの組み合わせを含む。上記ＦＫＢＰマルチ遺伝子ファミリーのメンバーとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＦＫＢＰ１２（ＦＫＢＰ１Ａ）、ＦＫＢＰ１２．６（ＦＫＢＰ１Ｂ）、ＦＫＢＰ１３（ＦＫＢＰ２）、ＦＫＢＰ９（ＦＫＢＰ１１）、ＦＫＢＰ２２（ＦＫＢＰ１４）、ＦＫＢＰ２３（ＦＫＢＰ７）、ＦＫＢＰ２５（ＦＫＢＰ３）、ＦＫＢＰ３６（ＦＫＢＰ６）、ＦＫＢＰ３７（ＡＩＰ）、ＦＫＢＰ３８（ＦＫＢＰ８）、ＦＫＢＰ５１（ＦＫＢＰ５）、ＦＫＢＰ５２（ＦＫＢＰ４）、ＦＫＢＰ６０（ＦＫＢＰ９）、およびＦＫＢＰ６５（ＦＫＢＰ１０）。

他の実施形態において、単球系統由来細胞は、単球系統由来マクロファージ、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、もしくはこれらの組み合わせを含む。

さらに他の実施形態において、Ｔリンパ球は、ＣＤ３^＋Ｔリンパ球である。
なお他の実施形態において、上記変化させられるサイトカインは、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）、インターロイキン−３２（ＩＬ−３２）、もしくはこれらの組み合わせを含む。

他の実施形態において、ＴＣＩＳＭ−リガンドは、ＣＤ３^＋リンパ球上に存在するＴＣＩＳＭ−リガンドである。これら実施形態において、いくつかの場合、ＴＣＩＳＭ−リガンドは、ＣＤ８１、ＣＤ２１、ＣＤ３１５、ＣＤ３１６、α−エノラーゼ、ＦＫＢＰ、もしくはこれらの組み合わせを含む。例示的ＦＫＢＰとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＦＫＢＰ４、ＦＫＢＰ１２（ＦＫＢＰ１Ａ）、ＦＫＢＰ１２．６（ＦＫＢＰ１Ｂ）、ＦＫＢＰ１３（ＦＫＢＰ２）、ＦＫＢＰ９（ＦＫＢＰ１１）、ＦＫＢＰ２２（ＦＫＢＰ１４）、ＦＫＢＰ２３（ＦＫＢＰ７）、ＦＫＢＰ２５（ＦＫＢＰ３）、ＦＫＢＰ３６（ＦＫＢＰ６）、ＦＫＢＰ３７（ＡＩＰ）、ＦＫＢＰ３８（ＦＫＢＰ８）、ＦＫＢＰ５１（ＦＫＢＰ５）、ＦＫＢＰ５２（ＦＫＢＰ４）、ＦＫＢＰ６０（ＦＫＢＰ９）、およびＦＫＢＰ６５（ＦＫＢＰ１０）。

さらに他の実施形態において、上記ＴＣＩＳＭ−レセプターは、ＣＤ６８^＋抗原提示細胞上に存在するＴＣＩＳＭ−レセプターを含む。これら実施形態において、いくつかの場合、上記ＴＣＩＳＭ−レセプターは、ＣＤ８１のレセプター、ＣＤ２１のレセプター、ＣＤ３１５のレセプター、ＣＤ３１６のレセプター、α−エノラーゼのレセプター、ＦＫ結合タンパク質のレセプター、もしくはこれらの組み合わせを含む。いくつかの場合、上記ＴＣＩＳＭ−レセプターは、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２２５、ＣＤ３１５、ＣＤ３１６、Ｃ３ｄＲ、ＣＤ１９、ＣＤ８１、ＢＣＲ、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＫＡＩ１／ＣＤ８２、ＦＫ５０６、ラパマイシン（シロリムス）、エベロリムス（Ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、シクロスポリン、タクロリムス、他の合成低分子免疫抑制剤、もしくはこれらの組み合わせの上に存在するＴＣＩＳＭ−リガンドのレセプターを含む。一般に、上記ＴＣＩＳＭ−レセプターとは、リガンドに結合したときに、単球系統由来細胞におけるサイトカイン生成を刺激する、単球系統由来細胞上に存在するレセプターをいう。

本発明の別の局面は、被験体における急性もしくは慢性の炎症によって媒介される臨床状態を処置するための方法を提供し、上記方法は、サイトカインモジュレーターを上記被験体に投与する工程を包含し、ここで上記サイトカインモジュレーターは、Ｔリンパ球のＴ細胞サイトカイン誘導表面分子（ＴＣＩＳＭ）−リガンドもしくは単球系統由来細胞の対応するＴＣＩＳＭ−レセプターに選択的に結合し、それによって、上記サイトカインモジュレーターによるサイトカイン生成の変化は、急性もしくは慢性の炎症によって媒介される上記臨床状態を処置するために使用される。

いくつかの実施形態において、上記サイトカインモジュレーターは、ＣＤ３^＋リンパ球上のＴＣＩＳＭ−リガンドに選択的に結合する。

他の実施形態において、上記サイトカインモジュレーターは、ＣＤ６８^＋単球細胞上のＴＣＩＳＭ−レセプターに選択的に結合する。

なお他の実施形態において、上記臨床状態は、自己免疫疾患を含む。これら実施形態において、いくつかの場合、上記自己免疫疾患は、関節リウマチ、多発性硬化症、クローン病、乾癬、乾癬性関節炎、グレーブス病、多腺性自己免疫症候群、遺伝性タンパク尿症候群、Ｉ型糖尿病、全身性エリテマトーデス、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫甲状腺炎、肝炎、後天性免疫不全疾患（ＨＩＶ）、対宿主性移植片病、同異種移植片疾患、喘息、皮膚浸潤性Ｔ細胞リンパ腫、ＨＴＬＶ−Ｉ関連皮膚浸潤性Ｔ細胞リンパ腫、ＨＴＬＶ−ＩＩ関連リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、突発性ＣＤ４＋Ｔリンパ球減少症、もしくは黒色腫、もしくはこれらの組み合わせを含む。

本発明のさらに別の局面は、被験体における自己免疫疾患を処置するための方法を提供し、上記方法は、治療上有効な量の、ＴＣＩＳＭ−リガンドに対するアンタゴニストもしくはその対応するＴＣＩＳＭ−レセプターに対するアンタゴニストを、上記処置が必要な被験体に投与する工程を包含する。

本発明のなお別の局面は、ＴＣＩＳＭ−リガンドおよび／もしくはＴＣＩＳＭ−レセプターに選択的に結合することによって、サイトカイン生成を変化させるために使用され得るサイトカインモジュレーターを提供する。

図１は、マイトジェン刺激したヒトＴ細胞が単球性ＴＨＰ−１ Ｍfを誘導して、細胞間接触を介して炎症促進性サイトカインを分泌し得ることを示すグラフである。 図２は、異なる活性化刺激が、異なるＴ細胞「ＴＣＩＳＭ リガンド」活性を誘導することを示すグラフである。 図３は、ヒト「サイトカインカクテル」が、ＰＢＭＣ由来ヒトＴ細胞におけるヒトＴＣＩＳＭ−リガンド発現を誘導することを示すグラフである。 図４は、サイトカインカクテルで活性化したヒトＰＢＭＣ由来Ｐａｎ ＣＤ３^＋ Ｔ細胞が、ＴＮＦ−aを生成するためにヒトＴＨＰ−１細胞を活性化しないことを示すグラフである。 図５は、上昇したレベルのＩＬ−１２（ｐ７０）が、ＴＣＩＳＭ リガンド陽性ヒトＣＤ３^＋ Ｔ細胞との細胞間接触の後に、新たに得られたヒト血液単球によって生成されることを示すグラフである。 図６は、高度に精製した刺激ヒトＨｕｔ−７８ Ｔ細胞膜が、ヒトＴＨＰ−１ Ｍ細胞を活性化して、ＴＮＦ−aを分泌することにおいてより有効であることを示すグラフであり、次いで、Ｈｕｔ−７８全細胞を１％ パラホルムアルデヒドで固定した。 図７は、ＰＨＡ／ＰＭＡ刺激したＣＤ３^＋ Ｔ細胞、Ｈｕｔ−７８細胞、Ｈ９細胞、Ｍｏｌｔ４細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞およびＲａｊｉ細胞において膜タンパク質もしくは膜結合タンパク質をコードする遺伝子のマイクロアレイ２Ｄクラスターのグラフである。 図８は、潜在的なヒトＴ細胞ＴＣＩＳＭ−リガンド遺伝子候補物の発現レベルを示すともに対数軸の（ｌｏｇ−ｌｏｇ）「シグネチャー（Ｓｉｇｎａｔｕｒｅ）」遺伝子グラフである。 図９は、種々の既知のヒトＴ細胞膜同時刺激タンパク質を測定する、ＰＭＡ／ＰＨＡ刺激Ｈｕｔ−７８ Ｔ細胞もしくは非刺激Ｈｕｔ−７８ Ｔ細胞のＦＡＣＳ分析のグラフである。 図１０は、６時間にわたるＰＭＡ／ＰＨＡ刺激Ｈｕｔ−７８ヒトＴ細胞から得られた総ＲＮＡの定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）測定である。 図１１は、ＩＦＮ−g、ＣＤ４０Ｌ、ＩＦＮ−g＋ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−１５、もしくはＩＬ−１５レセプター（ＩＬ−１５Ｒ）に対する中和抗ヒトモノクローナル抗体が、ＴＮＦ−aもしくはＩＬ−１bの活性化Ｈｕｔ−７８ Ｔ細胞精製膜由来ＴＨＰ−１ Ｍφ細胞生成を阻害しないことを示すグラフである。 図１２は、ハイグロマイシン耐性Ｆｌｐ−Ｉｎ ２９３細胞のＦＡＣＳ分析のグラフである。 図１３は、上記ｆｌｐ−ｉｎ分子分析手順を使用して、ＣＤ４０Ｌ＋ＩＦＮ−gはＴＮＦ−α生成を刺激するが、ＩＬ−１β生成を刺激しないことを示すグラフである。 図１４は、いくつかの場合において、ＬＰＳ刺激ＴＮＦαおよびＩＬ−１β生成（すなわち、先天性免疫）に対していかなる効果も有さずに、ヒトＭφ（すなわち、適応免疫）Ｔ細胞媒介性ＴＮＦα生成の阻害を示すグラフである。 図１５は、ｐという１つの考えられる機構の模式図である。 図１６は、マウスにおけるマウスコラーゲン誘導性関節炎の異なる低分子ＴＮＦαインヒビターの評価を示すグラフである。 図１７は、抗ＴＮＦa処置マウスおよびＩＬ−１ｒａ処置マウスの効力を示すグラフである。 図１８は、代表的マウスの関節組織病理学のスライドである。 図１９は、ＴＣＩＳＭ−リガンドのリストを示す表１である。 図１９は、ＴＣＩＳＭ−リガンドのリストを示す表１である。 図１９は、ＴＣＩＳＭ−リガンドのリストを示す表１である。 図１９は、ＴＣＩＳＭ−リガンドのリストを示す表１である。 図１９は、ＴＣＩＳＭ−リガンドのリストを示す表１である。 図１９は、ＴＣＩＳＭ−リガンドのリストを示す表１である。

（発明の詳細な説明）
Ｔ_ｃ誘導性Ｍφ活性化のための活性化機構のうちの１つは、免疫シナプス機構を通じた直接細胞間接触を介していると考えられる。活性化Ｔ細胞は、多くの公知の膜結合タンパク質および未知の膜結合タンパク質を発現する。本発明者らは、これら分子（Ｔ_ｃサイトカイン誘導表面分子（すなわち、ＴＣＩＳＭもしくはＴＣＩＳＭ−リガンド）として本明細書で言及される）のうちのいくつかが、細胞間接触シグナル伝達カスケードに関与し、このことは、Ｍφに存在する対応するＴＣＩＳＭ−レセプターに選択的に結合することによって、炎症促進性サイトカイン誘導をもたらすことを発見した。

広範囲の種々の臨床状態は、急性もしくは慢性の炎症（関節リウマチ、多発性硬化症、クローン病、乾癬、乾癬性関節炎、グレーブス病、多腺性自己免疫症候群、遺伝性タンパク尿症候群、Ｉ型糖尿病、全身性エリテマトーデス、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫甲状腺炎、肝炎、後天性免疫不全疾患（ＨＩＶ）、対宿主性移植片病、同異種移植片疾患、喘息、皮膚浸潤性Ｔ細胞リンパ腫、ＨＴＬＶ−Ｉ関連皮膚浸潤性Ｔ細胞リンパ腫、ＨＴＬＶ−ＩＩ関連リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、突発性ＣＤ４＋Ｔリンパ球減少症、および／もしくは黒色腫が挙げられるが、これらに限定されない）によって媒介される。本発明者らは、Ｔリンパ球のＴＣＩＳＭ−リガンドおよび／もしくは単球系統由来細胞の対応するＴＣＩＳＭ−レセプターに選択的に結合し得るサイトカインモジュレーターを投与するか、またはＴＣＩＳＭ−リガンドの転写を阻害することによって（例えば、ｉＲＮＡもしくはｓｉＲＮＡによって）、これら臨床状態が、単球系統由来マクロファージにおけるサイトカイン生成を調節することによって処置され得ることを見いだした。

本発明のいくつかの局面は、ＴＣＩＳＭ−リガンド、およびＴリンパ球のＴ細胞サイトカイン誘導表面分子（ＴＣＩＳＭ）−リガンドもしくは単球系統由来細胞の対応するＴＣＩＳＭ−レセプターに選択的に結合するサイトカインモジュレーターを投与するか、またはＴＣＩＳＭ−リガンドの転写を阻害することによって、被験体の単球系統由来細胞におけるサイトカイン生成を変化させるための方法を提供する。

いくつかの実施形態において、ＴＣＩＳＭ−リガンドは、表１（図１９）に列挙される上記ＴＣＩＳＭ−リガンドのうちの少なくとも１つを含む。これらＴＣＩＳＭ−リガンドの対応するＴＣＩＳＭ−レセプターは、当業者によって容易に決定され得る。例えば、細胞間接触バイオアッセイを使用して、中和モノクローナル抗体もしくは中和ポリクローナル抗体を使用して、ＴＣＩＳＭ−リガンド 対 ＴＣＩＳＭレセプターの相互作用を阻害することによって。別の方法は、細胞間接触をブロックするモノクローナル抗体を同定するための、刺激および非刺激のＨｕｔ−７８およびＨ９サブクローンＴ細胞膜を使用する差し引き免疫（Ｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）である。いかなる理論にも束縛されることなく、単球−マクロファージの接触媒介性活性化が、サイトカイン生成を誘導する主要な経路であると考えられている。従って、この機構の変化（例えば、ＴＣＩＳＭ−リガンドもしくはＴＣＩＳＭ−レセプターの発現のレベルの誘発もしくはその発現の阻害（例えば、ｓｉＲＮＡを介する）におけるＩＬ−１生成およびＴＮＦ−a生成のブロック）は、サイトカイン生成によって媒介される臨床状態を処置するために使用され得る。

本発明のいくつかの組成物および方法は、単球系統由来細胞に存在するＴＣＩＳＭ−レセプターを選択的に結合し（またはこのようなレセプターの発現もしくは転写を阻害することによって）、それによって、これら単球系統由来細胞におけるサイトカイン生成を変化させることにおいて有用である。単球系統由来細胞は、Ｔリンパ球によって活性化される場合に、サイトカインを生成する任意の細胞を含む。いくつかの実施形態において、本発明の組成物および方法は、炎症促進性サイトカイン生成を変化させる。

サイトカインを生成する例示的単球系統由来細胞としては、単球系統由来マクロファージ、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、およびクッパー細胞が挙げられるが、これらに限定されない。

本発明の組成物および方法は、ＴＣＩＳＭ−リガンドもしくはＴＣＩＳＭ−レセプターに選択的に結合し得る分子を含む。さらに、本発明の組成物および方法はまた、ＴＣＩＳＭ−リガンドもしくはＴＣＩＳＭ−レセプターの翻訳、転写、および／もしくは発現を変化させ得る分子を含む。例えば、ｓｉＲＮＡは、ＴＣＩＳＭ−リガンドの発現を変化させるために、Ｔリンパ球に投与され得る。適切なＴＣＩＳＭ−リガンドを知ることによって、当業者は、ＴＣＩＳＭ−リガンドの発現を変化させ得る適切なｓｉＲＮＡを容易に同定し得る。例えば、全長タンパク質をコードするメッセンジャーＲＮＡに対するｓｉＲＮＡは、転写の間の不安定性に最も影響を受けやすいｍＲＮＡの一部を決定することを可能にする市販のコンピューターソフトウェアで設計され得る。

ＴＣＩＳＭの上記レベルにおける適応（獲得）免疫の制御は有利である。なぜなら、治療的介入は、細菌の皮膚感染の間に先天性（自然）免疫を可能にするからである。従って、本発明のいくつかの局面は、先天性免疫を実質的に維持しながら、適応免疫もしくは獲得免疫を変化させるための組成物および方法を提供する。

本発明の例示的ＴＣＩＳＭ−リガンド、ＴＣＩＳＭ−レセプターおよび／もしくはサイトカインモジュレーター化合物としては、以下の式を有する化合物、そのアナログおよび誘導体が挙げられるが、これらに限定されない：

再現性の高いかつ確認された細胞間接触バイオアッセイを、初代ヒトＴ細胞および自己の新たに得られたヒト血液単球、またはヒトＴ細胞および単球細胞株のいずれかを使用して、確立した。図１は、マイトジェン刺激ヒトＴ細胞が、単球性ＴＨＰ−１ Ｍfを誘導して、細胞間接触を介して炎症促進性サイトカインを分泌し得ることを示すグラフである。図１は、２４時間および４８時間の細胞間接触における、サイトカインの経時的測定である。ＴＨＰ−１ ＭfにおけるＴＮＦ−a生成（左パネル）およびＩＬ−１b生成（右パネル）を、異なるＰＭＡ／ＰＨＡ刺激ヒトＴ細胞株とともにインキュベートした。単球性株ＴＨＰ−１に由来する細胞を、刺激（「ｓ」）Ｔ細胞もしくは非刺激（ｎｓ）休止Ｔ細胞から高度に精製した膜調製物とともにインキュベートし；サイトカイン生成を、インキュベーションの２４時間後もしくは４８時間後に測定した。ＴＮＦ−a生成およびＩＬ−１b生成の顕著な増加を、両方の期間において、ｓＨｕｔ−７８およびｓＨ９ Ｔ細胞とインキュベートしたＴＨＰ−１ Ｍfから検出した。３連の測定での平均±標準偏差を提供する。図１に示されるように、ごくわずかなＴＮＦ−a生成およびＩＬ−１b生成の誘導を、ＰＨＡ／ＰＭＡ刺激Ｍｏｌｔ４細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞およびＲａｊｉ細胞において観察した一方で、休止初代ヒトＴ細胞においても、非刺激Ｈｕｔ−７８細胞、Ｈ９細胞、Ｍｏｌｔ４細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞においても、Ｒａｊｉ細胞においても、検出可能な生成は認められなかった。上記ＰＭＡ／ＰＨＡ刺激Ｈ９細胞、より少ない程度には、上記Ｈｕｔ−７８細胞は、ＴＮＦ−aおよびＩＬ−１bの両方の最高のＴＨＰ−１ Ｍf分泌を誘導することが観察された。このことは、これら細胞がＴＣＩＳＭＬ陽性であることを示す。

ＰＭＡ／ＰＨＡ刺激は、上記ヒトＴ細胞に対して顕著なＴＣＩＳＭＬの誘導を提供した。なぜなら、上昇したレベルのＴＮＦ−aは、２４時間の培養期間にわたって、上記培養物中で生成されたからである。図２を参照のこと。図２において、Ｐａｎ ＣＤ３＋ Ｔ細胞を健康なヒトドナー血液から単離し、３７℃で６時間刺激し、洗浄し、１％ パラホルムアルデヒド（６時間室温）で固定した。次いで、細胞をＰＢＳですすぎ、ＲＴで一晩保持した。次いで、ＰＢＭＣ由来ＣＤ１４＋ Ｍfを添加し、３７℃で２４時間にわたってインキュベートした。細胞培養上清を遠心分離し、濾過滅菌し、ＥＬＩＳＡによってサイトカインを測定した。平均±ＳＥＭを示す（Ｎ＝６個体のドナー、三連の測定；非刺激Ｔ細胞と比較して、Ｐ＜０．０５）。匹敵するデータを、αＣＤ３／αＣＤ２８を用いてインビトロで刺激したＴ細胞において観察した。全Ｔ細胞コントロール培養物単独と比較して、Ｔ細胞およびＭf同時培養系において、ＴＮＦ−aのほぼ２倍程度を生成した。

図３に示されるように、その結果は、サイトカイン混合物＃１（ＩＬ２＋ＩＬ６＋ＴＮＦ−a）もしくはサイトカイン混合物＃２（ＩＬ１５＋ＩＬ６＋ＴＮＦ−a）が、１：８（血液単球：Ｔ細胞）の比率で混合されたときにヒトＴ細胞を活性化し、ヒト単球を活性化して、上昇したレベル（約１００〜２５０ｐｇ／ｍｌ）のＴＮＦ−aおよびＩＬ−１bを生成し得ることを示す。これらサイトカインレベルは、サイトカイン活性化された、固定Ｔ細胞単独によって放出される炎症促進性サイトカインのレベルより顕著に高かった。図３において、Ｐａｎ ＣＤ３^＋ Ｔ細胞を健康なヒトドナーから単離し、３７℃で８日間、異なるサイトカインカクテルとともにインキュベートし

、洗浄し、次いで、新鮮な１％ パラホルムアルデヒドで固定した（６時間 ＲＴ）。次いで、細胞をＰＢＳですすぎ、ＲＴで一晩維持した。新たに得たヒト血液単球を続いて添加し、上記Ｔ細胞とともにインキュベートした（３７℃ ２４時間）。細胞培養上清を回収し、ＥＬＩＳＡによってサイトカインについて測定した。平均±ＳＥＭを示す（Ｎ＝４ 個体のドナー、三連の測定）。同一のドナーから精製したＰａｎ ＣＤ３^＋ Ｔ細胞での２回の別個の実験を、これら知見を確認するために行った。

サイトカイン混合物＃１もしくはサイトカイン混合物＃２のいずれかで刺激したヒトＰＢＭＣ由来ＣＤ３＋ Ｔ細胞が、ヒトＴＨＰ−１細胞を活性化して、ＴＮＦ−aおよびＩＬ−１bを生成するに十分なＴＣＩＳＭの発現を誘導するか否かもまた、試験した。図４に示されるように、サイトカイン活性化Ｔ細胞と合わせたＴＨＰ−１細胞は、上昇したレベルのＴＮＦ−aの生成を生じたが、その誘導されたサイトカインレベルは、パラホルムアルデヒド固定した、サイトカイン刺激Ｔ細胞単独によって誘導されたものより顕著には高くなかった。図４において、Ｐａｎ ＣＤ３^＋ Ｔ細胞を健康なヒトドナーから単離し、３７℃で８日間、種々のサイトカインカクテル

とインキュベートし、洗浄し、次いで、新鮮な４％ パラホルムアルデヒドで固定した（６時間 ＲＴ）。細胞を続いてＰＢＳですすぎ、ＲＴで一晩維持し、次いで、ＴＨＰ−１細胞に添加した（３７℃ ２４時間）。細胞培養上清を上記のように回収し、ＥＬＩＳＡによってサイトカインについて測定した。平均±ＳＥＭを示す。

図５に示されるように、健康なヒトボランティアの末梢血から得たＰａｎ ＣＤ３＋ ヒトＴ細胞を、ＰＭＡ／ＰＨＡもしくはaＣＤ３／aＣＤ２８で、６時間にわたってインビトロで刺激し、次いで、新鮮な１％ パラホルムアルデヒドで一晩室温において固定した。次に、新たに得たヒト血液単球を組織培養プレートに添加し、３７℃において、上記固定したＴ細胞とともに培養の６時間もしくは２４時間にわたってインキュベートした。次いで、上清を上記のように回収し、ＥＬＩＳＡによって種々のＴｈ１およびＴｈ２のサイトカインについて測定した。上記ＰＭＡ／ＰＨＡ刺激したＴ細胞は、ヒト血液単球を活性化して、特に、細胞間接触の６時間後に、約１０００〜１２５０ｐｇ／ｍｌの間の範囲に及ぶレベルでＩＬ−１２（ｐ７０）を生成することにおいて強力であった（図４）。同様に、aＣＤ３／aＣＤ２８刺激Ｔ細胞はまた、より低い程度ではあるが、ヒト血液単球ＩＬ−１２（ｐ７０）放出を活性化するにおいて有効であった。最後に、刺激ヒトＴ細胞の両方のタイプは、ヒト血液単球を活性化して、これら２つの異なる期間において、ＩＬ−１bおよびＴＮＦ−aを生成し得た。

ＴＨＰ−１細胞を活性化して、ＴＮＦ−aを生成する能力を、ＰＭＡ／ＰＨＡおよびaＣＤ３／aＣＤ２８刺激Ｈｕｔ−７８ Ｔ細胞膜 対 ＰＭＡ／ＰＨＡおよびaＣＤ３／aＣＤ２８刺激Ｈｕｔ−７８ Ｔ細胞膜で比較した（図６を参照のこと）。上記ＰＭＡ／ＰＨＡ刺激Ｈｕｔ−７８ Ｔ細胞のデータは、例示目的で示す。これら研究を、上記バイオアッセイでの変動を減少させるために、同じＨｕｔ−７８細胞培養ロットで行った。結果は、刺激Ｈｕｔ−７８ Ｔ細胞精製膜が、ＴＨＰ−１細胞のＴＮＦ−a生成をインビトロで誘導することにおいて、１％ パラホルムアルデヒドで固定した刺激Ｈｕｔ−７８と比較してより有効であったことを示す。Ｍｉｘ ａｎｄ ｍａｔｃｈ “ａｄｄ ｂａｃｋ”実験をまた行って、ＴＣＩＳＭが上記精製膜画分に主に存在するが、低速遠心分離工程および高速遠心分離工程の間に、Ｐａｒｂｏｍｂ細胞上清（例えば、サイトゾル）画分には存在しないことを示した（図６を参照のこと）。図６において、上記のように膜を調製し、細胞間接触バイオアッセイにおいてＴＨＰ−１細胞と合わせた。２４時間培養の後に、上清を取り出し、遠心分離し、濾過滅菌し、ＥＬＩＳＡによってサイトカインについて測定した。平均±ＳＤを示す。

「ヒートマップ」を描く特徴的アレイを、図７に示す。これは、ＰＨＡ／ＰＭＡ刺激ＣＤ３^＋ Ｔ細胞、Ｈｕｔ−７８細胞、Ｈ９細胞、Ｍｏｌｔ４細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞およびＲａｊｉ細胞膜もしくは膜会合タンパク質をコードする遺伝子のマイクロアレイ二次元（２Ｄ）クラスターである。＞２倍より大きい変化およびＰ値＜０．０１を伴う少なくとも４回の実験を行った。図７において、赤色は、遺伝子発現レベル＞２．０（すなわち、上のアレイが描くバックグラウンドレベル）を表し、緑色は、遺伝子発現レベル＜２．０（すなわち、下のアレイが描くバックグラウンドレベル）を表す。データレビューのコンピューター評価段階の間に、ヒトＴ細胞膜会合であって、ＴＣＩＳＭ（＋）Ｔ細胞株においてアップレギュレートされかつＴＣＩＳＭ（−）Ｔ細胞株においてダウンレギュレートされた遺伝子のみを考慮した。マイクロアレイ実験から生じる５０，０００遺伝子のうちの約１０，０００を試験し、Ｈｕｔ−７８細胞およびＨ９細胞においてアップレギュレートされるが、ヒトＭｏｌｔ−４細胞およびＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞においてはアップレギュレートされないＴ細胞遺伝子に焦点を絞った。

約１００個の潜在的なヒトＴ細胞 ＴＣＩＳＭ候補物の玉石混合のこのリストから、ともに対数軸の強度プロットを生成し、これは、ＴＣＩＳＭ候補物を同定するために直線スケール上にグラフ化した。これらプロット（例えば、図８を参照のこと）は、「変化なし」、「シグネチャー」、「ダウンレギュレート」、および「アップレギュレート」したＴ細胞遺伝子産物、を記載し、上記遺伝子産物の相対発現レベルを、アレイプロファイリングの結果全体と比較した。５つの候補ヒトＴ細胞ＴＣＩＳＭ遺伝子を同定した：ジフテリア毒素レセプター、もしくはヘパリン結合ＥＧＦ（ＤＴＲ、ＥＧＦモジュール含有ムチン様ホルモンレセプター２（ＥＭＲ２）、Ａｄａｍｌｙｓｉｎ−１７（ＡＤＡＭもしくはＡ Ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎおよびメタロプロテアーゼ）ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ、ＴＮＦレセプタースーパーファミリー、メンバー９（ＴＮＦＲＳＦ９もしくはＬＩＧＨＴ）、および刊行された科学文献の総説によって操作された細胞間接触陽性コントロール目的では、ＴＮＦＲＳＦ５、もしくはＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）。

リアルタイムｑＲＴ−ＰＣＲを行って、ＰＭＡ／ＰＨＡ刺激Ｈｕｔ−７８サブクローンＴ細胞およびＨ９サブクローンＴ細胞においてＴＣＩＳＭ候補遺伝子発現を確認した（図９を参照のこと）。上記ＴＣＩＳＭ候補物ＤＴＲおよびＬＩＧＨＴは、両方の遺伝子が刺激Ｈｕｔ−７８ Ｔ細胞およびＨ９ Ｔ細胞において高発現されたが、Ｍｏｌｔ−４ Ｔ細胞およびＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞においても、Ｒａｊｉ Ｂ細胞においてもアップレギュレートされなかったという点で、予め設定した基準に従った。しかし、ＴＡＣＥおよびＥＭＲ２はともに、上記ＴＣＩＳＭ（−）ヒトＲａｊｉ Ｂ細胞株において高くアップレギュレートされた。ＦＡＣＳもまた使用して、活性化Ｈ９細胞上でのこれら分子の存在を確認した（図１０を参照のこと）。

公知のヒトＴ細胞表面タンパク質に対する約５０の種々の市販の中和モノクローナル抗体を、上記細胞間接触バイオアッセイにおいて試験した（ＡＬＣＡＭ、ＣＤ６、β_２−インテグリン、ＣＤ６９、ＣＤ２３、ＣＤ４０−ＣＤ４０ＬおよびＬＡＧ−３に対して指向されるｍＡｂを含む）。それらは、評価できるほど、この系において上記炎症促進性サイトカイン生成の約３０％を上回って阻害しないことが分かった。観察されたより効率的なポリクローナル抗体調製物のうちの１つは、抗ＡＤＡＭ−１７（ＴＡＣＥ）であった。これら実験を、市販のポリクローナル抗体を用いて行った。バイオアッセイにおいて非常に特異的な抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂを使用しても、ＴＮＦ−aサイトカイン生成もＩＬ−１βサイトカイン生成も顕著に阻害しなかった（図１１を参照のこと）。図１１において、Ｈｕｔ−７８細胞を、ＰＭＡ／ＰＨＡで６時間刺激し、その時点で、精製膜を、上記のように調製した。Ｈｕｔ−７８膜と示された濃度の抗ヒトｍＡｂを同時培養ウェルに添加し、３７℃で２時間インキュベートした。次いで、最近継代した固有のＴＨＰ−１細胞を同時培養ウェルに添加し、３７℃で２４時間維持した。ＴＮＦ−aおよびＩＬ−１bのＥＬＩＳＡのために、上清を回収した。図１１は、各ｍＡｂ濃度において三連のサイトカイン測定をした、２回の別個の実験を示す。

ＦＡＣＳ分析によって、トランスフェクトした２９３細胞（図１２）は、それらの細胞表面上に上昇したレベルの上記ＴＣＩＳＭＬ遺伝子生成物を一貫して発現することを示した。図１２において、ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／ＤＴＲ、ＥＭＲ２−０７（ＥＧＦ様ドメイン１、２および５を含むアイソフォーム）、もしくはＣＤ４０Ｌを、それぞれ、Ｆｌｐ−Ｉｎ ２９３細胞およびＪｕｒｋａｔ細胞へと、ｐ０Ｇ４４と同時トランスフェクトし、コロニーを、５００ｍｇ／ｍｌ ハイグロマイシン中で選択した。細胞を細胞解離緩衝液で剥離し、ＦＡＣＳによって分析した（抗ＣＤ９７をＥＭＲ２−０７に対して交叉反応させ、ＥＭＲ２−０７発現を検出するために使用した）。発現は、数回の細胞培養継代後も安定であった。このことは、上記細胞間接触アッセイにおける使用にそれらが適切であることを示す。最初の実験を、上記細胞間接触アッセイにおいて、上記トランスフェクトした２９３細胞を使用して行った（図１３を参照のこと）。上記ＤＴＲ構築物およびＣＤ４０Ｌ構築物は、ＴＮＦ−a／ＩＬ−１bのｓＨｕｔ−７８ｍ駆動ＴＨＰ−１誘導を増強することにおいて強力であった（図１３）。上記アッセイへの外因性ＩＦＮ−γの添加は、増強したレベルのＣＤ４０Ｌ誘導Ｍf活性化およびその後のＴＮＦ−a放出を生じた（図１３ 左パネル）が、ＩＬ−１b放出を生じなかった（図１３ 右パネル）。上記ＣＤ４０Ｌトランスフェクトした２９３細胞もしくはＪｕｒｋａｔ細胞でのこれら効果は、再現性が高かった。

ヒトＴ細胞ＴＣＩＳＭを、健康なヒトＴ細胞、ならびに活性なＰｓおよびＰｓＡを有する患者から得たＴ細胞の両方において同定した。認められ得るように、上記インビトロ細胞間接触バイオアッセイは、同時培養におけるヒトＴ細胞とヒトＭfとの間の免疫学的シナプス機構を同定するための、非常に再現性の高いヒトサイトカイン「読み取り系（ｒｅａｄｏｕｔ ｓｙｓｔｅｍ）」である。上記ＰＭＡ／ＰＨＡ刺激Ｈ９細胞および上記Ｈｕｔ−７８細胞は、ＴＮＦ−aおよびＩＬ−１bの両方のＴＨＰ−１分泌を誘導する（これら細胞がＴＣＩＳＭ陽性であることを示す）一方で、ＰＨＡ／ＰＭＡ刺激したＭｏｌｔ４細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｒａｊｉ細胞および休止初代ヒトＴ細胞、未刺激のＨｕｔ−７８細胞、Ｈ９細胞、Ｍｏｌｔ４細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞もしくはＲａｊｉ細胞は、ＴＣＩＳＭ陰性であることが観察された（図１）。
ＴＣＩＳＭ候補物を、以下の基準を用いて決定した：（Ａ）膜会合；（Ｂ）刺激Ｈｕｔ−７８細胞およびＨ９細胞において２倍より高くアップレギュレートされるが、Ｍｏｌｔ４細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞およびＲａｊｉ細胞においてはアップレギュレートされない；および（Ｃ）高発現レベルがｑＲＴ−ＰＣＲおよびＦＡＣＳによって確認されなければならない。

αＣＤ３／αＣＤ２８もしくはヒトサイトカインカクテルによりインビトロで刺激した初代Ｔ細胞はまた、上記アッセイにおいて炎症促進性サイトカイン（ＰＩＣ）活性を増強する。ＰＭＡ／ＰＨＡもしくはαＣＤ３／αＣＤ２８で刺激したＴ細胞は、Ｍf活性化を増強して、ＩＬ−１２を生成した。ＩＬ−１２は、乾癬病変において検出された。ＩＬ−１２は未感作Ｔｈ細胞におけるＩＦＮ−g生成を主に刺激し、Ｔｈ１応答の発現および安定化においてある役割を果たすと考えられている。

正常健康ドナー 対 乾癬患者で、ＰＢＭＣ由来Ｔ細胞からマイクロアレイ分析を行って、ヒトＭf ＴＣＩＳＭＲを介して上記ヒトＴ細胞ＴＣＩＳＭＬ分子および炎症および皮膚疾患をもたらすそのシグナル伝達経路を同定した。健康ドナー、ＰｓＡおよびＣＰＰｓ患者に由来するヒトＴ細胞を使用するマイクロアレイ分析によって、ＴＣＩＳＭ分子（ジフテリア毒素レセプター（ＤＴＲ；ＨＢ−ＥＧＦ）およびムチン様上皮増殖因子ファミリーメンバー（ＥＭＲ４；ＣＤ９７）を含む）が同定された。多くのＴＮＦファミリーメンバー（４−１ＢＢ（ＴＮＦＳＦ１４）、ＯＸ−４０、ＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ９）およびＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４；ＴＮＦＳＦ５）を含む）のアップレギュレーションもまた観察された。

約５０の異なる市販の中和モノクローナル抗体を使用して、上記ヒトＴＣＩＳＭ候補物を、細胞間接触アッセイによって確認した。多くの場合において、これら試薬は、この系において２４〜９６時間の期間にわたって上記炎症促進性サイトカイン生成のわずか３０％を阻害することがわかった（図１１を参照のこと）。「Ｆｌｉｐ−ｉｎ」トランスフェクションシステム方法を使用して、上記マイクロアレイ実験（ＥＭＲ２、ＤＴＲ、４−１ＢＢ、ＬＩＧＨＴ、およびＣＤ４０Ｌをふくむ）から５つの最初の候補ＴＣＩＳＭＬ遺伝子候補物を同定した。細胞間バイオアッセイにおいて特徴付けた、ＴＣＩＳＭ陰性２９３細胞およびＪｕｒｋａｔ細胞にトランスフェクトしたＴＣＩＳＭ候補遺伝子の全長ｃＤＮＡは、ＤＴＲおよびＣＤ４０Ｌが、Ｔ細胞駆動Ｍf ＴＮＦ−a／ＩＬ−１bを増強することにおいて強力であることを示した。上記アッセイへの外因性ＩＦＮ−gの添加は、増強したレベルのＣＤ４０Ｌ誘導Ｍf活性化、およびその後のＴＮＦ−a放出を生じたが、ＩＬ−１b放出は生じなかった（図１２ａ−ｂおよび図１３）。

炎症および皮膚疾患をもたらす上記同定したヒトＭf ＴＣＩＳＭＲ（ＴＣＩＳＭ−レセプター）のうちのいくつかは、ＤＴＲ、ＣＤ９７、４−１ＢＢ、ＯＸ−４０、ＬＩＧＨＴおよびＣＤ４０Ｌを含む。ＴＣＩＳＭ陰性２９３細胞およびＪｕｒｋａｔ細胞にトランスフェクトされ、上記細胞間バイオアッセイにおいて特徴付けられたＴＣＩＳＭ候補遺伝子の全長ｃＤＮＡは、ＤＴＲおよびＣＤ４０Ｌが、ＴＮＦa／ＩＬ−１bのＴ細胞駆動Ｍf生成を増強することにおいて協力であることを示した。

（乾癬）
本発明の１つの特定の局面は、乾癬を処置するための組成物および方法を提供する。乾癬（Ｐｓ）は、米国の人口の約２％が罹患している慢性的な皮膚障害である。いかなる理論にも束縛されることなく、そして図１５において模式的に例示されるように、Ｐｓの病態生理学は、表皮の増殖および分化、脈管形成およびケラチノサイトの過剰増殖、ならびに病変部皮膚への活性化Ｔ細胞（Ｔ_ｃ）、マクロファージ（Ｍφ）、樹状細胞（ＤＣ）、ランゲルハンス細胞（ＬＣ）および好中球（ＰＭＮ）の浸潤を伴うと考えられている。上記活性病変部において生成された炎症促進性サイトカイン（ＰＩＣ）（腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦα）、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）、およびインターロイキン−３２（ＩＬ−３２）を含む）は、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）およびＰｓのような疾患において慢性皮膚炎症を誘導かつ維持すると考えられている。Ｍφを活性化することによるサイトカインのアップレギュレーションは、これら障害の病理を担うと考えられている。Ｔ細胞は、Ｍφ活性化においてある重要な役割を果たすことが示唆された；しかし、Ｔ_ｃサイトカイン（例えば、インターロイキン−４、１０、および１３（ＩＬ−４、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３））は、抗炎症の役割を果たすか、またはごく弱くＴＮＦα／ＩＬ−１βアップレギュレーションを誘導するかのいずれかであることが示された。Ｔ_ｃ誘導性Ｍφ活性化の活性化機構が、皮膚における免疫シナプス機構を通じた著いく切截傍観接触を介していると考えられている。

免疫学的シナプス（ＩＳ）は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）とＴ細胞との間の境界で形成され、抗原認識およびＴ細胞活性化を担う構造であると考えられている。上記ＩＳは、最初に、Ｔ細胞とＢ細胞との間、またはＴ細胞とＭＨＣ含有二次元二重層との間で最初に見いだされた。これは、上記ＩＳ中心領域（中心的超分子活性化クラスター（ｃｅｎｔｒａｌ ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｃｌｕｓｔｅｒ）（ｃ−ＳＭＡＣ）といわれる）におけるＴ細胞レセプター−主要組織適合性遺伝子複合体（ＴＣＲ-ＭＨＣ）の蓄積、および白血球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）-外部ＩＳ領域における細胞内接着分子−１（ＩＣＡＭ−１）（末梢（ｐ−）ＳＭＡＣ（ｐＳＭＡＣ）といわれる）によって形成されると考えられている。上記成熟ＩＳは、ＬＦＡ−１、タリン（ｔａｌｉｎ）、ＶＬＡ−４、ＡＤＡＰおよび移行レセプターが富化されたｐＳＭＡＣを含むことが示された。上記ｐＳＭＡＣはｃＳＭＡＣを取り囲み、ｃＳＭＡＣは、ＴＣＲ、ＣＤ４もしくはＣＤ８共レセプター、ＣＤ２８共刺激分子、ＣＤ２、ＰＫＣqなどが富化されている。

Ｐｓの皮膚は、ケラチノサイトの過剰増殖によって特徴付けられ、隆起（ｒｉｄｇｅ）およびｐｅｇの肥大したパターンを生じる。皮膚中のケラチノサイト、ＤＣ、およびＭφは全て、ＴＮＦa、ＩＬ−１β、およびＩＬ−３２を生成することが示された。上記ＩＳは、乾癬性自己抗原特異的皮膚リンパ球抗原（ＣＬＡ）陽性Ｔ細胞活性化を制御する一方で、その重要な分子成分は、ＴＣＲ、およびそれを取り囲んで、接着分子（例えば、ＬＦＡ−１）の環（これは、隣接する細胞（例えば、ケラチノサイトもしくはＡＰＣ）によって発現されるＩＣＡＭ−１に結合し得る）を含む。従って、上記ＩＳは、治療的アプローチの理論的標的である。例えば、アレファセプト（Ａｌｅｆａｃｅｐｔ）は、記憶−エフェクターＴ細胞上のＣＤ２に結合する組換え融合タンパク質であり、記憶−エフェクターＴ細胞活性化を阻害し、これら細胞の数を低下させる。エファリズマブ（Ｅｆａｌｉｚｕｍａｂ）は、ＣＤ１１ａ分子に対するヒト化モノクローナル抗体（Ｍａｂ）である。ＣＤ１１ａおよびＣＤ１８は、ＬＦＡ−１のサブユニットを構成する。

本発明者らは、Ｍφ活性化を駆動して、炎症促進性サイトカインを生成することによって、皮膚の炎症を媒介するヒトＴ細胞の表面にＴＣＩＳＭが存在することを示した。ＴＣＩＳＭのレベルにおいて適応（獲得）免疫を制御することは有利である。なぜなら、治療的介入は、細菌性皮膚感染の間に先天性免疫を可能にするからである。

乾癬は、いくつかの臨床的発現を伴う皮膚の遺伝的障害である。もっともよくあるタイプは、尋常性乾癬（もしくは尋常性乾癬（Ｐｌａｑｕｅ Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）［Ｐｓ］）であり、これは、身体の特有の部位において慢性的な、再発性の鱗様丘疹として生じる。現在の乾癬治療は、満足いくものではない。Ｐｓは、活性化Ｔ細胞による皮膚の浸潤およびケラチノサイトの異常な増殖によって特徴付けられる。Ｔ細胞、ケラチノサイト、ＤＣ、およびＬＣによる過剰生成の結果として、関連しない皮膚よりもＰｓ病変部においてＴＮＦαの濃度が（Ｐｓを有する患者および正常ヒトの両方において）高いことが報告された。

（自己免疫疾患）
ヒトにおける自己免疫疾患（例えば、Ｐｓおよび乾癬性関節炎（ＰｓＡ））は、自己抗原発現組織に対して指向される適応性の体液性（自己抗体）応答もしくは細胞性（自己反応性Ｔ細胞）応答の診断結果と合わせて、代表的な、しばしば再発する臨床的症状によって特徴付けられる、慢性的な症候群である。重要なヒト自己免疫疾患は、しばしば、ウイルス感染もしくは細菌感染を伴う相互疾患性（ｃｏ−ｍｏｒｂｉｄ）であるか、またはウイルス感染もしくは細菌感染によって誘発され、特定のＭＨＣ対立遺伝子と関連している。上記先天性免疫系は、上皮の非特異的バリア機能から生殖細胞系列がコードするレセプターの使用を介する病原体の非常に選択的な認識に及ぶ宿主防御の集合を包含する。これら多様な要素の共通する特徴は、感染もしくは組織破壊に対する急速かつ鈍感な応答である。他方では、適応免疫系は、体細胞的に再配置された抗原レセプター遺伝子を使用して、実質的に任意の抗原のレセプターを作り出す。上記適応免疫応答は、速度はより遅いが、縦覧性はより高く、先天性応答を回避するように進化した感染と戦うことができる。

上記先天性免疫系は、病原体における保存されたモチーフの認識および細胞ストレスもしくは細胞死の多くの他の指標によって応答する。上記先天性免疫系の細胞性成分としては、ＤＣ、単球、Ｍφ、顆粒球および天然のキラーＴ細胞（ＮＫＴ）、ならびに生物とその環境との間の境界を形成する皮膚、肺、および腸の上皮細胞が挙げられる。上記先天性の系の非細胞性要素は、非常に多様であり、角質層の単純なバリア機能から補体カスケードのような複雑な経路まで及ぶ。これら要素は、物理的妨害を介して病原体の進入を防止するか、または一旦細胞が進入しても、直接もしくは触細胞を介して病原体を破壊することを可能にする。上記先天性の免疫系はまた、病原体の多くのクラスに共通する分子パターンを認識するように進化した。これらは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）といわれる。ＰＡＭＰ認識は、生殖細胞系列がコードした進化的に保存されている病原体認識レセプター（ＰＲＲ）のグループを使用して終わる。上記Ｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）は、病原体レセプターの非常に重要なグループであり、それらは、先天性免疫細胞上で、そして種々の組織中の細胞（内皮細胞、上皮細胞および線維芽細胞を含む）上で発現される。種々の微生物の分子に特異的な１０個のＴＬＲファミリーメンバーは、ヒトにおいて同定された。それらの微生物のリガンドへのＴＬＲの結合は、食細胞の活性化、ならびに炎症促進性サイトカインの放出および抗微生物ペプチドをもたらす。これら分子は、同様に、ＤＣを活性化して、適応免疫応答を開始すると考えられている。

Ｔ細胞は、免疫応答において重要であり、それらの移動パターンおよび機能的能力に基づいて、多くの特徴的なサブセットに分けられ得る。未感作Ｔ細胞は、血液とリンパ節との間を主に再循環し、パターンは、ホーミングレセプターであるＬ−セレクチンおよびＣＣＲ７の発現によって補助される。未感作Ｔ細胞は、多能性状態に維持され、血液からリンパ系器官を通って再循環し、ＭＨＣ−ペプチド複合体を活性化するためにＤＣを精査するので、比較的無活動のエフェクタープログラムを有する。活性化ＤＣからおよびサイトカイン環境からのシグナルを統合する複雑な機構を介して、未感作Ｔ細胞は、別個の病原体の群に直面するために必要なエフェクターサイトカインを分泌する能力と密接に関連する急速な分裂ラウンドを介して駆動される。ＣＤ４^＋ Ｔヘルパー細胞は、Ｔｈ１（インターフェロン［ＩＦＮ］γ分泌）サブユニットおよびＴｈ２（インターロイキン［ＩＬ］−４分泌）サブユニット、ならびに近年同定されたさらなるＴｈサブユニット（Ｔｒ１（ＩＬ−１０分泌）細胞、Ｔｈ３（トランスホーミング増殖因子［ＴＧＦ］β生成）細胞、ＴｈＦＨ（濾胞性ヘルパー細胞）細胞、末梢で誘導されるＴ調節性（Ｔｒｅｇ；ＦｏｘＰ３陽性）細胞およびＴｈ１７（ＩＬ−１７Ａ生成）細胞を含む）へと機能的に分裂させられ得る。さらなるサブセットの発見は、エフェクター機能に関与するシグネチャーサイトカイン遺伝子を改変する機構に影響を及ぼす可能性が高い、根底にある調節性転写因子の同定において確実に興味をかき立てる。

免疫学的シナプス（ＩＳ）は、抗原提示細胞とＴ細胞との間の境界で形成され、そして抗原認識およびＴ細胞活性化を担う構造であると考えられている。上記ＩＳは、最初に、Ｔ細胞とＢ細胞との間、またはＴ細胞とＭＨＣ含有二次元二重層との間で見いだされた。これは、上記ＩＳ中心領域（中心的超分子活性化クラスター（ｃｅｎｔｒａｌ ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｃｌｕｓｔｅｒ）（ｃ−ＳＭＡＣ）といわれる）におけるＴ細胞レセプター−主要組織適合性遺伝子複合体（ＴＣＲ-ＭＨＣ）の蓄積、および白血球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）-外部ＩＳ領域における細胞内接着分子−１（ＩＣＡＭ−１）（末梢（ｐ−）ＳＭＡＣ（ｐＳＭＡＣ）といわれる）によって形成されると考えられている。上記成熟シナプスは、ＬＦＡ−１、タリン（ｔａｌｉｎ）、ＶＬＡ−４、ＡＤＡＰおよび移行レセプターが富化されたｐＳＭＡＣを含む。上記ｐＳＭＡＣはｃＳＭＡＣを取り囲み、ｃＳＭＡＣは、ＴＣＲ、ＣＤ４もしくはＣＤ８共レセプター、ＣＤ２８共刺激分子、ＣＤ２、ＰＫＣθなどが富化されている。

上記ＡＰＣの表面上で発現されるリガンドは、上記ＩＳ接触部位へ特異的レセプターを補充すると考えられる。上記シナプスへの共刺激分子ＣＤ２８および細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ４）の補充は、上記ＡＰＣ上でのそれらのリガンド（Ｂ７−１およびＢ７−２）の発現によって差次的に促進される。ＣＤ２８およびＣＴＬＡ４は、上記ＡＰＣ上で発現される場合にこれらリガンドのいずれを結合するが、Ｂ７−２はＣＤ２８を上記シナプスに補充し、そしてＢ７−１はＣＴＬＡ４を上記シナプスに補充した。上記ＡＰＣ上の接触部位におけるリガンドの安定性もまた重要である。なぜなら、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４およびプロテインキナーゼＣ−qの補充は、Ｂ７−１の細胞質ドメインの存在を要する。

乾癬性の皮膚は、ケラチノサイトの過剰増殖によって特徴付けられ、肥大したパターンを生じる。皮膚中のケラチノサイト、ＤＣ、およびＭφは全て、ＴＮＦaを生成し得る。上記ＩＳは、乾癬性自己抗原特異的皮膚リンパ球抗原（ＣＬＡ）陽性Ｔ細胞活性化を制御する一方で、その重要な分子成分のいくつかは、ＴＣＲ、およびそれを取り囲んで、接着分子（例えば、ＬＦＡ−１）の環（これは、隣接する細胞（例えば、ケラチノサイトもしくはＡＰＣ）によって発現されるＩＣＡＭ−１に結合し得る）を含む。上記シナプスのＬＦＡ−１成分は、この接着相互作用を妨害する乾癬において治療剤（抗ＬＦＡ−１抗体；エファリズマブ）として重要であると考えられており、感染の処置について米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって認可されている。さらに寄与する分子（他の接着分子および共刺激分子を含む）はまた、Ｔ細胞応答性に影響を及ぼす（例えば、細胞表面分子対ＣＤ２：ＬＦＡ−３およびＣＤ２８：ＣＤ８０／ＣＤ８６）。

（関節リウマチ）
関節リウマチ（ＲＡ）は、ＩＳシグナル伝達にも関連する炎症性疾患である。ＲＡの処置の潜在的アプローチのうちの１つは、Ｔ細胞と抗原提示細胞との間のＩＳにおいて存在する分子の阻害を含む。サイトカインアップレギュレーションの機構が、接触依存性であると考えられる。これら機能を媒介し得る細胞表面上には複数の候補タンパク質が存在する。

Ｔ細胞レセプター複合体を介して活性化されたＴ細胞が単球のＩＬ−１０合成を誘導することが示されてきた。このことは、内因性ＴＮＦαおよびＩＬ−１レベルに特に依存し、Ｔ細胞膜ＴＮＦαは、重要な接触媒介性シグナルであることが示された。しかし、ＩＬ−１０合成は、ＴＮＦαおよびＩＬ−１が中和される場合になお生じるので、このことは、ＩＬ−１０合成に必要とされるＴＮＦ／ＩＬ−１非依存性シグナルが存在することを示す。

ＴＮＦ／ＴＮＦ−Ｒファミリーのメンバー（ＣＤ４０、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＯＸ−４０、およびＬＴβを含む）は特に重要である。これらＴＮＦ−Ｒ分子のリガンドは、Ｔ細胞活性化の際にアップレギュレートされると考えられており、さらに、ＣＤ４０Ｌ、４−１ＢＢ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０は、活性化後に可溶性メディエーターとして放出されると考えられている。ＣＤ４０ＬとＣＤ４０との間の相互作用は、Ｔ細胞と単球との相互作用の後にＩＬ−１合成およびＩＬ−１２合成の両方を誘導するために重要であり、より近年になって、抗ＣＤ３刺激Ｔ細胞との相互作用の際にヒトミクログリア細胞によってＩＬ−１０生成を媒介することが観察された。

（Ｔ細胞免疫グロブリンムチンタンパク質）
上記Ｔ細胞免疫グロブリンムチン（ＴＩＭ）タンパク質は、共通する構造モチーフを含む、Ｔ細胞上で発現されるＩ型膜糖タンパク質である。上記ＴＩＭ遺伝子ファミリーは、マウスにおいて第１１染色体に、およびヒトにおいて５ｑ３３に位置する。ゲノム分析によって、マウスにおいて８つのファミリーメンバー（ＴＩＭ−１〜ＴＩＭ−８）が、およびヒトにおいて３つのファミリーメンバー（ＴＩＭ−１、ＴＩＭ−３およびＴＩＭ−４）が同定された。全てのメンバーは、ＩｇＶ、ムチン、膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む特徴的構造を共有する。この遺伝子ファミリーは、免疫応答の調節においてある役割を果たす。

ＴＩＭ−１（以前は、Ａ型肝炎ウイルスレセプターとして同定された）は、Ｔ細胞拡大およびサイトカイン生成を共刺激する。ＴＩＭ−１は、全ての活性化Ｔ細胞上で、およびＣＤ４^＋ Ｔ細胞偏り（ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）の際に、Ｔｈ１細胞上よりも高いレベルで、Ｔｈ２上で発現される。作動性モノクローナル抗ＴＩＭ−１抗体（３Ｂ３）は、ペプチドとＡＰＣもしくはＣＤ３およびＣＤ２８に対して交差連結する抗体のいずれかと培養したときに、Ｔ細胞をインビトロで共刺激することが示された。免疫応答の間にインビボで投与したときに、抗ＴＩＭ−１抗体は、抗原性再刺激の非存在下ですら、Ｔ細胞増殖をインビトロで増強した。これはまた、コントロール処置と比較して、Ｔｈ１およびＴｈ２両方の基本型サイトカインの生成を増大した。さらに、抗ＴＩＭ−１抗体は、高用量耐性の誘導を排除し、マウスを免疫しかつ抗原を鼻内チャレンジしたときに、ＡＨＲを回復させることができた。従って、ＴＩＭ−１は、全てのＴ細胞のための共刺激分子として作用すると推測され、おそらく、Ｔｈ１細胞よりＴｈ２細胞上でより強い効果を有する。

ＴＩＭ−３が、Ｔｈ２細胞と比較して、インビトロで偏ったヒトＣＤ４^＋ Ｔｈ１細胞上で優先的に発現されることを実証した。従って、ＴＩＭ−３発現は、ヒトＴｈ１細胞を同定するために使用され得る。さらに、ＴＩＭ−３は、インビボでＴｈ１細胞の調節に寄与すると考えられている。例えば、ＴＩＭ−３特異的抗体の実験的自己免疫脳炎（ＥＡＥ）モデルのマウスへの投与は、ＥＡＥのＴｈ１駆動性進行の加速を生じた。さらに、抗ＴＩＭ−３抗体は、ＭφとＴ細胞との間の同族の（ｃｏｇｎａｔｅ）相互作用が必要とされる、Ｍφ活性化およびクローン性Ｔ細胞拡大を誘導した。これらデータは、Ｔ細胞によってＭφの活性化を負に調節することにおいてＴＩＭ−３の役割を示すようである。ＴＩＭ−３／ＴＩＭ−３リガンド相互作用はまた、耐性においてある役割を果たす。全長ＴＩＭ−３ Ｉｇ融合タンパク質および可溶性ＴＩＭ−３ Ｉｇ融合タンパク質の両方でのマウスの処置は、高用量水溶性抗原を使用して誘導された耐性を排除する。同様に、ＴＩＭ−３欠損性マウスは、耐えることができない。実際に、Ｉｇ融合タンパク質処置マウスおよびＴＩＭ−３欠損性マウスの両方が、コントロールと比較して増大したＴ細胞増殖および高用量水溶性抗原の投与後のＩＬ−２の生成を示した。

ＴＩＭ−４は、ＴＩＭ−１の天然のリガンドであると考えられている。他のＴＩＭ分子とは異なり、ＴＩＭ−４は、Ｔ細胞において発現されないようであるが、代わりに、ＡＰＣ（特に、成熟リンパ系ＤＳ）において発現されるようである。Ｔｈ１ Ｔ細胞駆動Ｍφ活性化を媒介する、正に調節するＴＩＭ様ファミリー分子は、今日までのところ発見されていなかった。本発明者らは、ＴＩＭ−１もＴＩＭ−３も、ＰＭＡ／イオノマイシン活性化Ｈ９もしくは初代ヒトＣＤ３^＋ Ｔ細胞においてアップレギュレートされないことを示した。

（免疫学的シナプスに関与する細胞質タンパク質、膜タンパク質、および核タンパク質を同定するためのプロテオミクス的アプローチ）
プロテオミクス技術は、疾患のバイオマーカーおよびバイオシグネチャーを特徴付けかつ機能的な下位プロテオーム（ｓｕｂｐｒｏｔｅｏｍｅ）およびネットワークに関する情報を明らかにするために使用され得る。多くのプロテオミクス的適用は、疾患、傷害、もしくは薬物に応じて変化する下位システムについての一般的情報を提供するが、プロテオミクスはまた、生化学的応答（例えば、ＭＡＰＫシグナル伝達、化学走性、黒色腫の腫瘍形成および転移、ならびにＭＨＣクラスＩＩ誘導性細胞死など）に関与する以前に特徴付けられていなかったタンパク質を同定するために使用され得る。二次元ゲル電気泳動（２ＤＧＥ）と質量分析法の組み合わせは、プロテオミクス適用のために使用される分析技術のうちの１つである。直列式質量分析法（ｔａｎｄｅｍ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）および進んだデータベース検索アルゴリズムを介してタンパク質の直接的かつ偏りのない同定と組み合わせた２ＤＧＥの定量的能力は、細胞システム、原形質、皮膚などにおけるタンパク質発現変化のプロフィールに対処する優れた技術プラットフォームを提供する。補完的な探査プラットフォームは、多次元のクロマトグラフィーによるタンパク質およびペプチド分離、続いて、直列式質量分析法およびタンパク質同定のためのデータベース検索である。選択された反応モニタリングはその後、関連する分子を定量するために使用される。

（宿主防御および炎症疾患）
炎症促進性のｐｌｅｏｔｒｏｐｈｉｃサイトカインＴＮＦαおよびＩＬ−１βは、宿主防御および炎症性疾患プロセスにおいて重要な役割を果たしている。ＴＮＦαおよびＩＬ−１βの過剰発現は、Ｐｓ疾患標的組織および炎症性皮膚疾患を有する患者の循環において見いだされた。Ｔ細胞および単球−Ｍφの主要な機能のうちの１つは、種々のサイトカイン（ＩＬ−１bおよび／もしくはＴＮＦaを含む）を放出することである。これら分子は、続いて、下流部分（例えば、ＩＬ−３２（ケラチノサイトおよびＭφによって生成される））の誘導および放出に関与し、最終的には、ケラチノサイトの過剰増殖およびＰｓの発症がもたらされる。いかなる理論にも束縛されることなく、より遠位のレベルで（例えば、Ｔ細胞駆動単球−Ｍφ活性化のレベルで）これらサイトカインの生成をブロックすることは、おそらく、適応応答および／もしくはＩＳ形成の間の種々の期間に、これらサイトカインを特異的に阻害するように設計された新たな分子薬物探索標的をもたらし得、Ｐｓ患者にとってあまり有害でない事象でより安全な治療剤を生じると考えられる。

本発明のさらなる目的、利点および新規な特徴は、以下の実施例（限定であるとは意図されない）の試験に際して、当業者にとって明らかになる。

（細部株の培養）
ヒト細胞株は、ＲＰＭＩ １６４０（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）（１０％（ｖ／ｖ） ＦＣＳ血清、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、１００単位／ｍｌ ペニシリンおよび１００単位／ｍｌ ストレプトマイシンを補充）からなる標準培地中で培養した。Ｈｕｔ７８細胞株、Ｈ９細胞株、Ｍｏｌｔ４細胞株、Ｊｕｒｋａｔ細胞株、Ｒａｊｉ細胞株およびＴＨＰ−１細胞株を、ＡＴＣＣから入手した。

（細胞単離）
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）。ＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌ密度勾配遠心分離によって単離した。得られたＰＢＭＣの生存性は、トリパンブルー染色によって決定した場合、＞９５％であった。その生存細胞を、Ｎｅｕｂａｕｅｒチャンバ（Ｚｅｉｓｓ，Ｏｂｅｒｋｏｃｈｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中で定量し、液体窒素中で保存した。

（ＣＤ３＋ Ｔ細胞）
融解したＰＢＭＣを、１，５００ｒｐｍで５分間、再度遠心分離した。上清を廃棄し、ペレットを、ＭＡＣＳ緩衝液中に再懸濁した。その細胞を、１０^８個の細胞あたり０．８ｍｌの緩衝液の濃度で、単一の細胞懸濁物へと破壊した。１０^８個の細胞あたり約０．２ｍｌのハプテン−抗体カクテルを添加した。その得られた混合物を十分に混合し、２０分間氷上でインキュベートした。２０×表示容積（ｌａｂｅｌｌｉｎｇ ｖｏｌｕｍｅ）を添加し、遠心分離し、上清除去によって細胞を洗浄した。細胞ペレットを、１０^８個の細胞あたり０．８ｍｌの緩衝液中に再懸濁した。１０^８個の細胞あた約０．２ｍｌのＭＡＣＳ抗ハプテンマイクロビーズを、細胞を磁性的に標識刷るために添加した。上記混合物を氷上で１５分間インキュベートし、その容積の２０倍で洗浄し（Ｌｅｕｋｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｐａｃｋからの凍結細胞を、４５μｍメッシュフィルタに通して、塊になった死細胞を除去した）、遠心分離し、上清を廃棄した。細胞を、１０^８個の細胞あたり１ｍｌのＭＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、ＬＳ＋カラムを、適切なＭＡＣＳ分離器の磁場中に配置した。上記カラムを、３ｍｌの緩衝液で洗浄することによって調製した。上記細胞懸濁物を、上記カラムに載せ、その非標識細胞を通過させた。その溶離液を陰性画分として回収した。これは、富化Ｔ細胞画分を表した。上記カラムを４×３ｍｌの緩衝液ですすぎ、溶離液を回収した。細胞を洗浄した後、その細胞ペレットを、１０^６個細胞／ｍｌの濃度で５０ｍｌの組織培養培地中に懸濁した。ＣＤ３−ＦＩＴＣ標識およびＦＡＣＳ分析によって、Ｔ細胞純度（＞９５％）を決定した。

（単球）
方法は、ＣＤ３＋ Ｔ細胞分離と同じであった。

（細胞の免疫表現系分類）
回収した細胞を、ＦＡＣＳ培地［１％ ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）］中で洗浄し、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）もしくはフィコエリトリン（ＰＥ）と直接結合体化させた抗体によって、４℃で２０分間染色した。その後、細胞をＰＢＳで３回洗浄し、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用するＦＡＣＳｃａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）によって分析した。抗体は以下のとおりであった：ＰＥ標識抗マウスＩｇＧ、抗ヒトＣＤ４０ＬおよびＣＤ１３７。

（細胞間接触アッセイ）
初代Ｔ細胞もしくはＨ９細胞を、冷ＰＢＳで洗浄し、細胞ペレットを、５×１０^６個細胞／ｍｌにおいて新たに作製した１％ パラホルムアルデヒド中で再懸濁した。細胞を氷上で２時間固定し、次いで、２０×容積の冷ＰＢＳで３回洗浄した。３回目の洗浄の後、上記細胞をＰＢＳ中、４℃で一晩維持して、パラホルムアルデヒドを拡散させた。細胞を遠心分離し、さらにもう１回洗浄した。上記固定したＴ細胞を、１×１０^７個細胞／ｍｌにおいて、培地中で再懸濁し、約１×１０^６／ｍｌ ＴＨＰ−１細胞において、１００μｌ／ウェルで９６ウェルＵ底プレートへと分与した。初代Ｔ細胞もしくはＨ９細胞（１００μｌ／ウェル）を、８×１０^６個細胞／ｍｌ、４×１０^６個細胞／ｍｌ、および２×１０^６個細胞／ｍｌで添加した。上記プレートを、加湿５％ ＣＯ_２中で４８時間にわたって、３７℃でインキュベートした。プレートを、１，５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清（１２０μｌ）を新たなプレートに移した。上記上清を、使用するまで−２０℃で保存した。

（Ｈｕｔ−７８形質膜調製）
約５×１０^８個の刺激もしくは非刺激Ｈｕｔ−７８細胞を、１０ｍｌの低張性緩衝液（プロテアーゼインヒビター（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ｃｌ（ｐＨ７．４）、２５ｍＭ ＫＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣｌ_２、２００μＭ ＰＭＳＦ、１×完全プロテアーゼインヒビターを含む））中に懸濁し、氷上で２０往復することによって、ダウンスホモジナイザーを使用してホモジナイズした。上記核および壊れなかった細胞画分を、４０００×ｇ、４℃、１５分間の遠心分離によって廃棄し、その上清を、４℃で４５分間、ＳＷ４０ローターを用いて２８Ｋ（１００，０００×ｇ）で超遠心分離した。その膜ペレットを、２２Ｇシリンジ針を使用して９ｍｌのＰＢＳ中に再懸濁し、次いで、１ｍｌの２００ｍＭ ＣＨＡＰＳに添加した。そのホモジネートを、氷上で１時間インキュベートした。５×１０^７個細胞当量／ｍｌの懸濁した形質膜の約１ｍｌのアリコートを、−８０℃で保存した。

（ＲＮＡサンプル調製およびハイブリダイゼーション）
ＲＮＡを抽出し、ＲＮｅａｓｙ ＭｉｎＥｌｕｔｅキット（Ｑｉａｇｅｎ）およびＱｉａｇｅｎ Ｍｉｎｉ ＲＮｅａｓｙキットを使用して、製造業者のプロトコルに従って精製した。ｃＤＮＡ合成を、発現分析技術マニュアル（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ，２サイクルプロトコル）中に記載されるように、各サンプルにつき１００ｎｇの総ＲＮＡを使用して行った。そのｃＲＮＡ反応を、ＢｉｏＡｒｒａｙ Ｈｉｇｈ−Ｙｉｅｌｄ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ Ｌａｂｅｌｉｎｇキット（Ｅｎｚｏ）を使用して行った。１５μｇの標識ｃＲＮＡをフラグメント化し、製造業者の指示に従って、連続してＧＡＰＳスライド（Ｃｏｒｎｉｎｇ）にハイブリダイズさせた。

（Ｆｌｐ−Ｉｎトランスフェクション）
安定なＴＣＩＳＭ リガンド（ＴＣＩＳＭＬ）陰性Ｔ細胞株を樹立し、マイクロアレイ実験から同定されたＴＣＩＳＭＬ候補遺伝子（ＥＭＲ２、ＤＴＲ、４−１ＢＢ、ＬＩＧＨＴ、およびＣＤ４０Ｌを含む）のｃＤＮＡでトランスフェクトした。Ｆｌｐ−Ｉｎリコンビナーゼを利用する「Ｆｌｐ−Ｉｎ」法として公知のトランスフェクションシステムを、製造業者のプロトコルに従って利用した。８つの異なる構築物（ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／ＥＧＦドメイン２および５を含むＥＭＲ−２−０４；ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／ＥＧＦドメイン１、２および５を含むＥＭＲ−２−０５；ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／ＥＧＦドメイン１、２および５を含むＥＭＲ−０２−０７；ｐｃＤＮＡ／ＦＲＴ／ＤＴＲ；ｐｃＤＮＡ３／４−１ＢＢ；ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／ＬＩＧＨＴ；ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／ＣＤ４０Ｌ；およびｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴコントロール）を、接着性２９３細胞（接着性細胞コントロール）もしくはＴＣＩＳＭ陰性Ｊｕｒｋａｔ細胞を使用して調製した。

（低分子アッセイ）
Ｔ細胞膜−Ｍφ細胞接触バイオアッセイを使用して、末梢血に存在するＣＤ１４^＋ Ｍφからの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８活性化Ｔ細胞媒介性であるが、ＬＰＳ刺激性でないＴＮＦαおよびＩＬ−１β生成を差次的にブロックする低分子アンタゴニストを同定した。いくつかのキナーゼインヒビターを選択し、確認されたＴ細胞膜−Ｍφ接触バイオアッセイを使用して、これら化合物が、ＴＮＦαおよび／もしくはＩＬ−１β生成をブロックすることにおける効果を確認した。化合物Ｃ（ｐ３８ ＭＡＰキナーゼインヒビター）が、ヒトＭφからのＴ細胞媒介性ＴＮＦα生成を、ＬＰＳ刺激性ＴＮＦαおよびＩＬ−１β生成に対して何ら顕著な効果を有さずに阻害するよいうであることが実証された（図１４を参照のこと）。他の化合物Ｃアナログは、活性化Ｔ細胞膜刺激性およびＬＰＳ刺激性のＭφの両方からのＴＮＦαおよびＩＬ−１β生成をほぼ同程度にまで（約５０〜１００％ 阻害）阻害したか、またはＬＰＳ刺激性Ｍφ活性化によるサイトカイン生成の低い阻害（Ｔ細胞媒介性サイトカイン生成の約１００％阻害に対して、ＬＰＳ活性化の約３０〜５０％阻害）を示したかのいずれかであった。従って、ヒトＴ細胞およびＭφを使用する上記活性化Ｔ細胞膜−Ｍφ接触バイオアッセイは、（一旦同定されかつクローニングされたら）組換えＴＣＩＳＭを用いてハイスループットスクリーニングを確立して、適合性であるが、ＬＰＳ媒介性ではない先天性免疫を特異的に標的化する、経口的に活性な低分子アンタゴニストを同定するために使用され得る。Ｔ細胞媒介性Ｍφ活性化を特異的に妨害して、増強されたサイトカイン生成をもたらすが、ＬＰＳ媒介性Ｍφサイトカイン放出をもたらさないいくつかの経口的に活性な低分子ＴＮＦαおよび／もしくはＩＬ−１βインヒビターは、Ｔ細胞媒介性皮膚疾患（例えば、Ｐｓ）において都合のよい治療効果／副作用プロフィールを有する。

（データ分析）
統計学的評価を、統計ソフトウェア「ＳＩＧＭＡＳＴＡＴ」（ＳＩＧＭＡＰＬＯＴ Ｖ．９（Ｓｙｓｔａｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）のツール）で行った。ｓｉＲＮＡおよび／もしくは低分子化合物を使用してノックアウトした活性化Ｈ９細胞のグループ、ならびに活性化Ｈ９細胞のグループにおけるサイトカインの濃度を、スチューデンドＴ検定を用いて比較した。全ての比較の有意レベルを、０．０５の共通標準に設定した。

（統計学的考慮事項）
コントロール細胞と、刺激細胞と、潜在的ＴＣＩＳＭ候補物の発現がｓｉＲＮＡおよび／もしくは低分子化合物を使用してノックアウトされた刺激細胞との間で本発明者らのバイオアッセイの読み取り値を比較することによって、上記候補タンパク質を容易に確認し得る。

低分子化合物を使用することの利点の１つは、ＴＣＩＳＭのｐ３８シグナル伝達経路活性を解明することができる能力およびＴＣＩＳＭを阻害するための経口的に活性な薬剤であることである。

（ＴＣＩＳＭリガンド候補物の同定）
上記細胞間接触バイオアッセイは、ＴＣＩＳＭＬが、ＰＭＡ／ＰＨＡ刺激した初代Ｔ細胞、Ｈｕｔ−７８細胞およびＨ９細胞から得られた精製膜上で高く発現されているが、Ｍｏｌｔ４細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、ＲＡＪＩ Ｂ細胞では発現されていないことを示した。１８個の別個のＴＣＩＳＭＬ（＋） 対 ＴＣＩＳＭＬ（−）比較条件を用いる活性化細胞 対 非活性化細胞からの発現プロファイリングデータは、これら種々の細胞株間での遺伝子発現の有意な差異を示した。コンピューター評価は、ＴＣＩＳＭ分子がＴＣＩＳＭＬ（＋）Ｔ細胞株においてアップレギュレートされ、ＴＣＩＳＭＬ（−）Ｔ細胞株においてダウンレギュレートされることを示した。マイクロアレイ実験から生じた５０，０００遺伝子のうちの約１０，０００を、全体的に試験した。ＴＣＩＳＭＬ候補物を、以下の３つの基準を用いて決定した：（１）それらが膜会合である；（２）それらが、刺激Ｈｕｔ−７８細胞およびＨ９細胞において２倍より高くアップレギュレートされるが、Ｍｏｌｔ４細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞およびＲａｊｉ細胞においてアップレギュレートされない；および（３）それらの発現レベルがｑＲＴ−ＰＣＲによって確認される。その後のデータ分析は、１０，０００個の遺伝子の全体的な列挙を、１００個あたりの膜会合タンパク質の列挙に減らした。ともに対数軸の強度プロットは、以下の５つの候補ヒトＴ細胞ＴＣＩＳＭＬ遺伝子を同定した：ジフテリア毒素レセプター、もしくはヘパリン結合ＥＧＦ（ＤＴＲもしくはＨＢ−ＥＧＦ）、ＥＧＦモジュール含有ムチン様ホルモンレセプター２（ＥＭＲ２；ＣＤ９７）、４−１ＢＢ（ＴＮＦＲＳＦ１４）、ＯＸ−４０（ＣＤ１３４）、ＴＮＦレセプタースーパーファミリーメンバー９（ＴＮＦＲＳＦ９もしくはＬＩＧＨＴ；ＣＤ２４８）、およびＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ；ＴＮＦＲＳＦ５）。ＦＡＣｓを使用して、活性化Ｈ９細胞上でのこれら分子の存在を確認した。ｑＲＴ−ＰＣＲも利用して、これら遺伝子がＴＣＩＳＭ候補物であるか否かを決定した。

刺激および非刺激のＨ９細胞の膜調製物に由来するタンパク質を、一次元において、１１ｃｍのＩＰＧストリップ（ｐＨ４〜６）を使用して、および二次元において、１０．５〜１４％ 勾配ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを使用して分離した。その標識されたスポット（少なくとも１．５倍の発現の変化を表す（ＩｍａｇｅＭａｓｔｅｒでの分析によって））を切り出し、トリプシンを用いて消化し、次いで、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｕｌｔｒａ高性能イオントラップ上のでナノＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって分析した。

（ゲル分析）
脱色および水ですすいだ後に、２００ピクセル解像度のＴｙｐｈｏｏｎ ９４００ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｓｃａｎｎｅｒ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で画像化を行った。上記刺激調製物および非刺激調製物におけるタンパク質スポットを、ＩＭＡＧＥ−Ｍａｓｔｅｒ ｐｌａｔｉｎｕｍ ＩＩソフトウェアバージョン５．０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて以下のようにマッチさせた。

各タンパク質スポットの強度（三次元容積）を、ゲル上で検出された全てのスポットの合計の強度に対して正規化した。平均１５００個のタンパク質スポット／ゲルを生じた検出閾値を、上記ゲルを比較する前に個々に調節した。上記条件間での見かけ上のスポット強度の変化は、スポットの切り出しのために使用される基準であり、質量分析法によってその後の同定を行った。目的のスポットを、１．５ｍｍの小片で、ＯｎｅＴｏｕｃｈ Ｐｌｕｓ Ｓｐｏｔ Ｐｉｃｋｅｒ（Ｔｈｅ Ｇｅｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）を用いて切り出した。

（ゲル中消化）
タンパク質を、上記ゲル中でトリプシンを用いて消化した。簡潔には、少なくとも２回の繰り返しからのスポットを組み合わせ、そして１／１ アセトニトリルおよび１００ｍＭ 重炭酸アンモニウムで１回脱色し、次いで、１００％ アセトニトリルで濃縮し、真空乾燥した。スポットを２５ｎｇ／μｌ トリプシンで再水和し、３７℃で一晩インキュベートした。その上清を回収し、１％ 蟻酸（水溶液）と３０％ アセトニトリルを用いる２つのさらなる抽出物とプールした。プールした抽出物を、真空濃縮して、約１０μＬにし、使用するまで−８０℃で保存した。

（トリプシン消化物のＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析）
ゲル消化サンプルのうちの約３０％を、逆相ナノスプレーＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣ，７５μｍ ＩＤ×１５ｃｍ カラム，Ｚｏｒｂａｘ Ｃ１８）によって分析した。緩衝液Ａは、０．１％ 蟻酸であった。ペプチドを、漸増する緩衝液Ｂ（９０％ ＡＣＮ、０．１％ 蟻酸）の勾配および流速３００ｎｌ／分を使用して、上記分離カラムから質量分析計へと溶出した。スペクトルを、３５０〜１８００Ｄａのｍ／ｚ範囲に対して集めた（Ａｇｉｌｅｎｔ ＬＣ／ＭＳＤ Ｔｒａｐ ＸＣＴ Ｕｌｔｒａ）。３つのＭＳ／ＭＳスペクトルを６つに最も豊富なｍ／ｚ値について集め、次いで、それらの質量を１分間にわたって分析から排除し、次の６つの最も豊富なｍ／ｚ値をフラグメント化のために選択した。

（データベース検索を使用するタンパク質同定）
タンパク質を、タンパク質を、Ｍａｓｃｏｔ（Ｍａｔｒｉｘ Ｓｃｉｅｎｃｅ）プログラムおよびＳｐｅｃｔｒｕｍ Ｍｉｌｌ（Ａｇｉｌｅｎｔ）プログラムの両方を使用して、ＮＣＢＩｎｒ、およびＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベースを検索することによって同定した。Ｍａｓｃｏｔについては、その得られたスペクトルの化合物リストは、５回のスキャン内でグループ分けして、強度閾値１０，０００および最大０．２％相対量を使用して生成した。上記化合物リストは、．ｍｇｆファイルとしてエクスポートし、ヒトの分類フィルタを使用してデータベースに対して検索した。データベース検索において使用されるパラメーターは、以下のとおりであった：モノアイソトピック（ｍｏｎｏｉｓｏｔｏｐｉｃ）質量、ペプチド質量許容差２．０Ｄａ、フラグメントイオン質量許容差０．７Ｄａ、２つの損なった（ｍｉｓｓｅｄ）切断のみを許容するトリプシン処理ペプチド、固定化改変としてＣｙｓのカルバミドメチル化、ならびに変動性改変として脱アミド化（Ｎ，Ｑ）およびアセチル化（Ｋ）。同様のパラメーターを、ＳｐｅｃｔｒｕｍＭｉｌｌ検索のために使用した。１０を上回るペプチドスコアを有し、７０％を上回る％強度（ＳＰＩ）のスコアを有する、１３を上回るＳｐｅｃｔｒｕｍＭｉｌｌタンパク質スコアは、初期ヒット確認のためのカットオフであった。確実なタンパク質同定は、少なくとも２つのペプチドマッチを要した。分子量およびｐＩ値は、ゲルから相関させて、同定の実証を助けた。

（皮膚炎症に関連したＴＣＩＳＭの同定）
ヒトＴ細胞リンパ腫Ｈ９細胞を、ＰＭＡ／イオノマイシンで刺激した。細胞をカオトロピック溶解緩衝液（７Ｍ 尿素、２Ｍ チオ尿素、４％ ＣＨＡＰＳ）を使用して溶解し、膜タンパク質を、市販の膜タンパク質抽出キットを使用して単離した。サンプル（２００μｇ）を、１１ｃｍのｐＨ４−７ ＩＰＧストリップ上に載せ、ＳＤＳ ｐａｇｅによる分離の前に、３０，０００ Ｖｈｒで焦点を合わせた。スポットをマッチさせ、相対量を、ＩｍａｇｅＭａｓｔｅｒソフトウェアを使用して測定した。刺激サンプルと非刺激サンプルとの間で２倍より大きい変化を示すタンパク質を切り出し、トリプシンでゲル中消化し、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｕｌｔｒａイオントラップを使用してナノＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって分析した。ＳｐｅｃｔｒｕｍＭｉｌｌアルゴリズムおよびＭＡＳＣＯＴアルゴリズムを使用してタンパク質を同定した。ウェスタンブロット、ｓｉＲＮＡノックダウン、および細胞間接触バイオアッセイを使用して、タンパク質同定、量および機能を確認した。

全細胞溶解物もしくは膜分画サンプルからの約３０個のタンパク質スポットは、本発明者らの予備実験における発現で少なくとも２倍変化することが観察され、ｎＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって同定した。これらのうち、５つの潜在的候補物を、ヒトＴ細胞−アネキシンＶＩ、エノラーゼ、ＦＫＢＰ４、ＣＤ８１、ＣＤ３１６およびエズリンにおけるそれらの潜在的機能にさらに基づいて、調査した。これらタンパク質のウェスタンブロットによって、ＦＫＢＰ４およびエズリンの発現が、Ｔ細胞の活性化後に顕著に増大したのに対して、エノラーゼの発現は、減少したようであることが示された。アネキシンＶＩ、ＣＤ８１およびＣＤ３１６の発現は、ＰＭＡ／イオノマイシン処置後に変化しなかった。ＦＫＢＰ４およびエズリンは特に重要であった。ＦＫＢＰ（もしくはＦＫ５０６結合タンパク質）は、プロリン残基を含むタンパク質についてのタンパク質折りたたみシャペロンとして機能するプロリルイソメラーゼ活性を有するイムノフィリン（ｉｍｍｕｎｏｐｈｉｌｉｎ）であると考えられている。これはまた、免疫抑制分子タクロリムス（もともとは、ＦＫ５０６と称されていた）を結合し、タクロリムスは、自己免疫障害に罹患している患者を処置するために使用される。上記ＦＢＫＰ−タクロリムス複合体は、カルシニューリンを阻害し、Ｔリンパ球形質導入経路におけるシグナル伝達を、おそらく、インターフェロン調節因子−４（ＩＲＦ−４）へのＦＫＢＰ４の結合を妨害することによって、ブロックする。エズリンは、プロリンリッチ領域を有するアクチン結合タンパク質であると考えられる。エズリンは、ホスホイノシチド脂質によって調節されると考えられ、そしてＬｃｋチロシンキナーゼのついての基質であると考えられる。近年になって、リン酸化エズリンは、ＳＬＥを有する患者におけるＴ細胞偏りの増大、接着および移動を担うことが分かった。エズリンはまた、皮膚へのＴ細胞浸潤を媒介し、乾癬をもたらす皮膚炎症を生じる重要なタンパク質のうちの１つであると考えられている。

本発明者らはまた、Ａｌｅｆａｃｅｐｔ（Ａｍｅｖｉｖｅ；Ｂｉｏｇｅｎ−Ｉｄｅｃ）およびエファリズマブ（Ｒａｐｔｉｖａ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）（２つの現在市販されている乾癬処置）が上記モデル系においてＴ細胞駆動Ｍφサイトカイン生成を阻害しないことを示した。これら薬剤の機構は、機能不全の免疫シナプス（ＩＳ）形成を媒介することによって、ヒトＴ細胞の亜集団を選択的に不活性化すると報告された。いかなる理論にも束縛されることなく、いくつかの場合において、イムノフィリン（ＦＫＢＰ４が挙げられるが、これらに限定されない）は、シナプス相互作用を維持し、上記ＩＳを介する有効なシグナル伝達を媒介するための足場タンパク質として機能し得ると考えられている。これらＴ細胞標的の機能的役割は、ｓｉＲＮＡノックダウンおよびＥＣＬを使用するサイトカイン読み取りのための細胞間接触バイオアッセイを使用することによって、容易に評価され得る。

（インビボでの関節炎研究）
マウスに、ＣＩＩ＋ＣＦＡを０日目に免疫し、２１日目にＣＩＩ＋ＩＦＡを追加免疫した。１群あたり合計１０匹のＤＢＡ雌性マウスを使用した。示されるように薬物を投与し、足の腫脹／関節炎の最初の徴候の１日目に開始した。各群に、以下の表に示されるように種々のＴＣＩＳＭモジュレーターを投与した。平均関節炎スコア（以下のデータを参照のこと）を、Ｂｅｎｄｅｌｅら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，２０００，４３（１２），ｐｐ ２６４８−２６５９の手順に従って評価した。図１６は、種々のＴＣＩＳＭ−リガンドモジュレーターの時間の関数として平均関節炎スコアのグラフを示す。図１７は、コントロール（Ｒａｔ ＩｇＧ，ＨＡ）、抗ＴＮＦa処置マウス、およびＩＬ−１ｒａ処置マウスを示すグラフを示す。図１７において、ラット抗マウスＴＮＦαモノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）をポジティブコントロールとして使用して、ＴＮＦαもしくはＩＬ−１ｒａ（インターロイキン−１レセプターアンタゴニスト；Ａｍｇｅｎ）として公知のＩＬ−１インヒビターを阻害するという治療効果を実証した。マウスを、コラーゲン誘導性関節炎の徴候を示した後に８日間処置した。

図１８は、代表的なマウスの関節組織病理である。図１８において、パネルＡは、アイソタイプコントロールラット抗マウスＭＡｂ（陰性コントロール）で処置したコラーゲン誘導性関節炎を有するＤＢＡマウスから得た膝関節を示し、このコントロール処置の過程にわたって炎症が生じなかったことを示す。パネルＢは、最小の炎症が、上記陰性コントロールマウスから得られた膝関節において発生したことを示す。パネルＣは、重篤な炎症、ならびに１３日目に（すなわち、コラーゲン誘導性関節炎を誘導して１３日後）化合物Ｈ（５０ｍｇ／ｋｇ Ｐ．Ｏ． １日目に始めて１日１回）で処置したマウスから得た膝関節への単球細胞および滑膜細胞の浸潤を実証する。パネルＤは、重篤な炎症、ならびに１３日目に（すなわち、コラーゲン誘導性関節炎を誘導して１３日後）化合物Ｈ（５０ｍｇ／ｋｇ Ｐ．Ｏ． １日目に始めて１日１回）で処置したマウスから得た膝関節への単球細胞および滑膜細胞の浸潤を実証する。パネルＥは、低下した炎症、ならびに１３日目に（すなわち、コラーゲン誘導性関節炎を誘導して１３日後）化合物Ｃ（５０ｍｇ／ｋｇ Ｐ．Ｏ． １日目に始めて１日１回）で処置したマウスから得た膝関節への単球細胞および滑膜細胞の浸潤が実質的にないことを実証する。パネルＦは、低下した炎症、単球細胞および滑膜細胞の浸潤が実質的にないこと、ならびに１３日目に（すなわち、コラーゲン誘導性関節炎を誘導して１３日後）、化合物Ｈ（５０ｍｇ／ｋｇ Ｐ．Ｏ． １日目に始めて１日１回）で処置したマウスから得た軟骨および骨の保存を実証する。

本発明の前述の議論は、例示および説明の目的で示されてきた。前述は、本発明を本明細書で開示される形態に限定するとは意図しない。発明の詳細な説明は、１つ以上の実施形態ならびに特定のバリエーションおよび改変の説明を含んでいたが、他のバリエーションおよび改変が、本発明の範囲内にあり、例えば、同様に、本開示を理解した後であれば、当該分野の技術および理解の範囲内であり得る。特許請求されるものの代替の、交換可能な、および／もしくは等価な構造、機能、範囲もしくは工程が本明細書で開示されていようとそうでなかろうと、かついかなる特許可能な事項を公に捧げることを意図することなく、このような代替の、交換可能な、および／もしくは等価な構造、機能、範囲もしくは工程を含め、代替の実施形態を、許容される程度まで含める権利を得ると意図される。

Claims (20)

1. 被験体の単球系統由来細胞におけるサイトカイン生成を変化させるための方法であって、該方法は、サイトカインモジュレーターを該被験体に投与する工程を包含し、ここで該サイトカインモジュレーターは、Ｔリンパ球のＴ細胞サイトカイン誘導表面分子（ＴＣＩＳＭ）−リガンドもしくは単球系統由来細胞の対応するＴＣＩＳＭ−レセプターに選択的に結合し、それによって、該ＴＣＩＳＭ−リガンドもしくは該ＴＣＩＳＭ−レセプターへの該サイトカインモジュレーターの結合は、単球系統由来細胞におけるサイトカイン生成を変化させる、方法。
2. 前記ＴＣＩＳＭ−リガンドは、表１に列挙されるＴＣＩＳＭ−リガンドのうちの少なくとも１つを含む、請求項１に記載の方法。
3. ＴＣＩＳＭ−リガンドは、ＣＤ８１、ＣＤ２１、ＣＤ３１６、α−エノラーゼ、ＦＫＢＰ４、ＦＫＢＰマルチ遺伝子ファミリーの他のメンバー、もしくはこれらの組み合わせを含む、請求項２に記載の方法。
4. 単球系統由来細胞は、単球系統由来マクロファージ、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、もしくはこれらの組み合わせを含む、請求項１に記載の方法。
5. 前記Ｔリンパ球は、ＣＤ３＋ Ｔリンパ球である、請求項１に記載の方法。
6. 前記変化させられるサイトカインは、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）、インターロイキン−３２（ＩＬ−３２）、もしくはこれらの組み合わせを含む、請求項１に記載の方法。
7. ＴＣＩＳＭ−リガンドは、ＣＤ３＋リンパ球上に存在するＴＣＩＳＭ−リガンドである、請求項１に記載の方法。
8. ＴＣＩＳＭ−リガンドは、ＣＤ８１、ＣＤ２１、ＣＤ３１５、ＣＤ３１６、α−エノラーゼ、ＦＫＢＰ、もしくはこれらの組み合わせを含む、請求項７に記載の方法。
9. 前記ＴＣＩＳＭ−レセプターは、ＣＤ６８＋抗原提示細胞上に存在するＴＣＩＳＭ−レセプターを含む、請求項１に記載の方法。
10. 前記ＴＣＩＳＭ−レセプターは、ＣＤ８１のレセプター、ＣＤ２１のレセプター、ＣＤ３１５のレセプター、ＣＤ３１６のレセプター、α−エノラーゼのレセプター、ＦＫ結合タンパク質のレセプター、もしくはこれらの組み合わせを含む、請求項９に記載の方法。
11. 前記ＴＣＩＳＭ−レセプターは、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２２５、ＣＤ３１５、ＣＤ３１６、Ｃ３ｄＲ、ＣＤ１９、ＣＤ８１、ＢＣＲ、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＫＡＩ１／ＣＤ８２、もしくはこれらの組み合わせの上に存在するＴＣＩＳＭ−リガンドのレセプターを含む、請求項１０に記載の方法。
12. 被験体における急性炎症もしくは慢性炎症によって媒介される臨床状態を処置するための方法であって、該方法は、該被験体にサイトカインモジュレーターを投与する工程を包含し、ここで該サイトカインモジュレーターは、Ｔリンパ球のＴ細胞サイトカイン誘導表面分子（ＴＣＩＳＭ）−リガンドもしくは単球系統由来細胞の対応するＴＣＩＳＭ−レセプターに選択的に結合し、それによって、該サイトカインモジュレーターによるサイトカイン生成の変化は、急性炎症もしくは慢性炎症によって媒介される該臨床状態を処置するために使用される、方法。
13. 前記サイトカインモジュレーターは、ＣＤ３＋リンパ球の表面上に存在するＴＣＩＳＭ−リガンドに選択的に結合する、請求項１２に記載の方法。
14. 前記サイトカインモジュレーターは、ＣＤ６８＋単球細胞の表面上に存在するＴＣＩＳＭ−レセプターに選択的に結合する、請求項１２に記載の方法。
15. 前記臨床状態は、自己免疫疾患を含む、請求項１２に記載の方法。
16. 前記Ｔ−リンパ球媒介性自己免疫疾患は、関節リウマチ、多発性硬化症、クローン病、乾癬、乾癬性関節炎、グレーブス病、多腺性自己免疫症候群、遺伝性タンパク尿症候群、Ｉ型糖尿病、全身性エリテマトーデス、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫甲状腺炎、肝炎、後天性免疫不全疾患（ＨＩＶ）、対宿主性移植片病、同種移植片疾患、喘息、もしくはこれらの組み合わせを含む、請求項１５に記載の方法。
17. 前記臨床状態は、癌を含む、請求項１２に記載の方法。
18. 前記臨床状態は、皮膚浸潤性Ｔ細胞リンパ腫、ＨＴＬＶ−Ｉ関連皮膚浸潤性Ｔ細胞リンパ腫、ＨＴＬＶ−ＩＩ関連リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、突発性ＣＤ４＋Ｔリンパ球減少症、黒色腫、もしくはこれらの組み合わせを含む、請求項１２に記載の方法。
19. 被験体における自己免疫疾患を処置するための方法であって、該方法は、治療上有効量の、ＴＣＩＳＭ−リガンドに対するアンタゴニストもしくはその対応するＴＣＩＳＭ−レセプターに対するアンタゴニストを、該処置を必要とする該被験体に投与する工程を包含する、方法。
20. 被験体の単球系統由来細胞におけるサイトカイン生成を変化させるための方法であって、該方法は、ｓｉＲＮＡを該被験体に投与する工程を包含し、ここで該ｓｉＲＮＡは、Ｔリンパ球のＴ細胞サイトカイン誘導表面分子（ＴＣＩＳＭ）−リガンドの遺伝子の転写を阻害し、該ＴＣＩＳＭ−リガンドの転写の阻害によって、該被験体におけるサイトカイン生成が減少する、方法。